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PRCTICA 1
DIRECTOR DE CURSO
JAIRO GRANADOS MORENO
RESUMEN
La ureasa es una exoenzima que cataliza la reaccin de hidrlisis de la urea, el
principal producto celular nitrogenado de la degradacin de las protenas y los
cidos nucleicos, el cual es ms fcil de eliminar que otras formas de nitrgeno
(como el amoniaco) porque es soluble en agua y menos txico (Science in School,
2008). En dicha reaccin, la urea se rompe para formar dixido de tcnicas para el
anlisis de actividad enzimtica en suelos carbono y amonio.
Para medir La Actividad Uresica, inicialmente debemos saber que la ureasa es
una enzima, la cual es una molcula de naturaleza protenica producidas por los
seres vivos y que se encargan de acelerar reacciones qumicas o hacer posibles
aquellas reacciones que de otra manera no se produciran. Es decir son
catalizadores biolgicos que al reducir la energa de activacin necesaria para las
reacciones transforman las sustancias involucradas en el metabolismo celular.
Teniendo en cuenta lo anterior expuesto se har la descripcin de la
Determinacin de Actividad Uresica (AU) y se realizara un anlisis de conceptos
o trminos relacionados con el tema.
INTRODUCCIN
La ureasa es una enzima amidohidrolosa, cataliza la hidrlisis de la urea
produciendo gas carbnico, hidrxido de amonio, los principales inhibidores son
los metales pesados como la plata (Ag+1) el mercurio (Hg+2) tambin el cido
hidroxmico y la tiourea
La enzima ureasa, hidroliza la urea produciendo amonio que contiene NNP y CO2.
A travs de esta se puede tomar una muestra de la actividad uresica (AU), a
travs de este mtodo se puede analizar el Nitrgeno No Proteico tanto en suelo,
pastos, sangre, orina y otros elementos de origen biolgico.
Desde el punto de vista prctico, los conceptos bioqumicos son claves para un
correcto anlisis, interpretacin y mejor comprensin de las trasformaciones
sufridas por los nutrientes como resultado de agentes fsicos, qumicos y
biolgicos. Estos puntos justifican de por si la necesidad de disponer de un bagaje
bioqumico mnimo.
A travs del presente aporte al trabajo colaborativo se hace descripcin de la
Determinacin de actividad Uresica (AU) y se hizo un anlisis de conceptos o
trminos relacionados con el tema. Partiendo de la actividad de laboratorio.
1. FUNDAMENTACIN TERICA
1.1 MAPA CONCEPTUAL (Con base en los conceptos mostrados en el
cuadro, en este espacio, elaboren un mapa conceptual)
CONCEPTO
CONCEPTO
Ureasa
Enzima amidohidrolasa
Lizosomas
Sustrato
Urea
RBE hidrlisis
H2N-CO-NH2 + H2O
Cintica Michaeliana
Rumiantes
Coenzima
Apoenzima
NNP
Amonio
Parmetros Cinticos
Km y Vmx
NH4OH + CO2
1.2 Con base en la revisin detallada de los videos relacionados con actividad
enzimtica y mostrados en los siguientes link:
http://www.youtube.com/watch?v=CpYWD7AQEjc
http://www.youtube.com/watch?v=GTTgS-xf7XI
http://www.youtube.com/watch?v=UZI15VqFAq8
Deben elaborar un diagrama de flujo que integre los temas relacionados all.
1.3 En este espacio, deben elaborar un Diagrama UVE Heurstico relacionado con
el artculo cientfico anexo, denominado: Actividades Enzimticas en Consorcios
Bacterianos de Suelos Bajo Cultivo de Papa con Manejo Convencional y Bajo
Pastizal.
DIMENSIN CONCEPTUAL
5 TEORIAS
4. PRINCIPIOS
Michaellis-Menten
Establece relacin entre V de reaccin
y la Concentracin del sustrato.
ENZIMA FOSFATASA
Km
V mx
r
Acta
sobre el
cumple
GLICERO
FOSFATO
relaciona
[s|
GLICEROL
Puede
ser
0.01
[S|
H3PO4
1/[S|
10
Se calcula KM y V max; as
20
K M = m / b = 0.0102/0.9873 = 0.0103
50
V max = 1 / b = 1 / 0.9873
= 1.012 umol/min100
200
es
[S|
1/V
1.09
1.20
1.49
2.00
3.03
6. REGISTRO DE DATOS
Donde
aparece
es
es
1/b
3.03
0.5
Interaccin
produce
V max
0.0103 M
1.012 umol/min
0.999
200 1/[S|
CINETICA MICHAELLIANA
as
9. INTERPRETACION y DISCUSION:
La Km equivale a una concent. De 0.0103 mol de
glicerofosfato por cada litro de solucin.
La grfica de la doble recproca present una
correlacin lineal altamente significativa (p<0.01).
3 Cual es la ecuacin
de Michaellis de este 8.TABLA de RESULTADOS 7. GRAFICAS
V
experimento?
VARIABLE
VALOR
1/V
3 CONCEPTOS
10. CONCLUSIN
La cintica de la fosfatasa cumpli la Ley
de M-M, debido a la alta correlacin lineal
entre los recprocos de [s | y la V.
V max [S|
V = -------------K M + [S|
DIMENSIN METODOLOGICA
2. PREGUNTA CENTRAL
TCA y colisiones
m/b
Caracterizacin enzimtica
de una fosfatasa, que acta
sobre el glicero-fosfato.
1. ACONTECIMIENTO
[S| (mol/lt)
0.100
0.050
0.020
0.010
0.005
(umol/min)
0.910
0.830
0.670
0.500
0.330
pH = 7.0
T = 37
2. MATERIALES Y MTODOS
2.1 LISTA DE MATERIALES Y EQUIPOS UTILIZADOS(completar el cuadro)
Cuadro 1. Lista de materiales y equipos utilizados en la prctica
Material o Equipo
Fotografa, obtenida en la
(Descripcin, marca,
capacidad, precisin)
Probeta graduada de
100mL; 0,1mL
Aplicacin
Volumetra
prctica
Balanza analtica
OHAUS; 210; 0,0001g
Pesada(Gravimetra)
Montaje de titulacin
Volumen de HCl
gastados cambio de
color
Erlenmeyer
Anlisis cuantitativo
en titulaciones
Beakers 400ml
calentar sustancias,
traspasar lquidos
Bureta 25 ml
Volumetra
Reactivos
Reacciones qumicas
Vaso de Precipitado
calentar sustancias
transportar lquidos
Centrifuga
Matraz aforado de
100mL
Soporte universal
para preparar
soluciones, cajas de 2
o 6 unidades
Pipetas de 10mL5mL
10
REACTIVO(NOMBRE)
FRMULA MOLECULAR
CONCENTRACIN
Urea
H2N-CO-NH2
0,25M
Ureasa
480.KD pH=7.0
0,1%
Cloruro de sodio
NaCl
10mL al 1%
cido clorhdrico
HCl
0,1N
Cloruro de mercurio
HgCl2
1%
-------------
(20C) pH 7
Buffer fosfato
Indicador de Tashiro
C15H14N3O2Na +
C16H18N3SCl 3H2O
+C2H
---------------
2.3 PROCEDIMIENTOS
2.3.1 Protocolos de muestras analizadas
Concentrado: comercial para ganado
Suelo: recolectado en la hacienda san juanito en el corregimiento de Sonso en el
Valle, Temperatura promedio 24C y altura de 1000 msnm.
FORRAJE: pasto estrella (Cynodon plectostachyus) hacienda san Juanito potrero
5 en el corregimiento de Sonso en el Valle, Utilizado para alimentacin bovina
11
PROCESO DE TITULACION
12
Fotos
13
14
3. RESULTADOS Y DISCUSIN
3.1 TABLAS DE DATOS
Tubos
B
St
1
2
3
4
Tipo de Muestras
Urea+ Bfer Fosfato+Hgcl2
Urea + Bfer Fosfato Ureasa al 0
5%
Urea + Bfer Fosfato EHAU (mL)
Urea + Bfer Fosfato ESAU (mL)
Urea + Bufer Fosfato + EFAU (mL)
Urea + Bufer Fosfato + ESAU (mL)
3.2. Clculos
a) 3.2.1 Actividad Uresica en el tubo estndar
AU=10ml 6.5ml *0.1*1000umol
40min
Au= 17.5 umol/min
*2
AU=6ml-6.5ml *0.1*1000umol * fd
40 min
Fd= 10ml/5ml*10ml/7ml*100gr/1gr=
Fd= 284
6ml-6.5ml *0.1*1000umol * 284
40 min
Au= 355 umol/min
15
mL Hcl
0.1N
6.5
10
Tiempo
(s)
20
20
6
6
6,5
5,5
20
20
20
20
AU=6ml-6.5ml *0.1*1000umol * fd
40 min
Fd= 10ml/5ml*10ml/5ml*100gr/1gr
Fd=400
AU=6ml-6.5ml *0.1*1000umol * 400
40 min
Au= 500 umol/min
AU=6ml-6.5ml *0.1*1000umol * fd
40 min
Fd= 10ml/5ml*10ml/3ml*100gr/1gr
Fd= 666
AU=6ml-6.5ml *0.1*1000umol * 666
40 min
Au=1665umol/min
AU=6ml-6.5ml *0.1*1000umol * fd
40 min
Fd= 10ml/5ml*10ml/5ml*100gr/1gr
Fd=400
AU=6ml-6.5ml *0.1*1000umol * 400
16
40 min
Au=1000umol/min
3.3TABLA DE RESULTADOS
Tabla 2. Actividad Uresica de las muestras biolgicas
TUBO
TIPO DE MUESTRA
Estndar
17,5
Suelo
500
Forraje
1665
AU(
3.3.1 GRFICAS
AU
2000
1500
1000
AU
500
0
AU
estandar
suelo
forraje
17
18
4. CONCLUSIONES
La ureasa es una importante enzima microbiana relacionada con la
descomposicin de los compuestos orgnicos. La ureasa es considerada
constitutiva debido a que es sintetizada por ciertas bacterias sin tomar en
consideracin la presencia ausencia de su sustrato, la urea.
Los resultados encontrados indican la actividad enzimtica en las muestras
utilizadas donde variada La actividad ureasica de acuerdo a la cantidad de materia
orgnica y al PH.
Es conveniente realizar la determinacin de la actividad ureasica en muestras
fresca sin dejar secar e inmediatamente despus de su muestreo ya que la
muestra fresca es ms representativa por la actividad biolgica presente en ella.
19
5. BIBLIOGRAFA
20
PRCTICA 2
RESUMEN
Los sistemas amortiguadores nos equilibran la presencia de sustancias acidas y
bsicas para mantener el pH dentro de los limites fisiolgicos.
Con la prctica de laboratorio se busca conocer cual sistema tiene mayor
capacidad amortiguadora y detectar su funcionamiento.
Tambin se le denomina soluciones Buffer o tampn y son aquellas que se
oponen a los cambios de pH, cuando se les adicionan cidos o lcalis (hidrxidos).
Su accin se basa principalmente en la absorcin de hidrgenos (H+) o iones
hidroxilo (OH).
Una solucin amortiguadora est conformada por una mezcla binaria de un cido
dbil y una sal del mismo acido proveniente de base fuerte o tambin una base y
una sal, de esa base proveniente de un cido fuerte.
21
INTRODUCCIN
Soluciones amortiguadoras tambin se le denomina soluciones Buffer o
tampn y son aquellas que se oponen a los cambios de pH, cuando se les
adicionan cidos o lcalis (hidrxidos). Su accin se basa principalmente en la
absorcin de hidrgenos (H+) o iones hidroxilo (OH).
Una solucin amortiguadora est conformada por una mezcla binaria de un cido
dbil y una sal del mismo acido proveniente de base fuerte o tambin una base y
una sal, de esa base proveniente de un cido fuerte.
La aplicacin ms importante de estas soluciones reside en el estudio de
regulacin del equilibrio acido=base en los sistemas biolgicos, por eso a nivel de
experimentos bioqumicos se utilizan para controlar el pH de reacciones in vitro.
Con el uso de estas soluciones podemos subir o bajar el pH de otras soluciones, o
lo que se conoce como acido o bsico, esto lo medimos con una escala de 0 a 14
lo que nos da que 7 es neutro, por debajo de 7 cido y ms de 7 bsico o alcalino
a distintas temperaturas el valor del pH neutro puede variar debido a la constante
del equilibrio del agua.
1. FUNDAMENTACIN TERICA
1.1 MAPA CONCEPTUAL
CONCEPTOS
CONCEPTOS
Suelo
Actividad Microbiana
Aminocidos
Carbono orgnico
Grupos Funcionales
Fases
22
Fertilidad
Mezcla heterognea
cidos Orgnicos
Enzimas
Componentes Bioqumicos
Humus
Materia inorgnica
Materia orgnica
Sales Minerales
pH
Nitrgeno total
Equilibrio cido-base
Carbohidratos
23
Fertilidad
pH
Microorganismos
Bases
intercambiables
Potenciometra
Tcnicas
analticas
Titulacin
REDOX
Gravimetra
Composicin
Bioqumica
Volumetra
Materia orgnica
Conductividad
Elctrica
Espectrofotometra
CIC
Sales Minerales
Carbono orgnico
Caractersticas
Fisicoqumicas
Amonio
(NH4+)
FBN
Suelo
1.3 Con base en la revisin detallada de los videos relacionados con anlisis
de suelo y mostrado en los siguientes link:
http://www.youtube.com/watch?v=Gm4Be6qHCRM
http://www.youtube.com/watch?v=5eo-Fiuf1rY
http://www.youtube.com/watch?v=lXOAwkG_D2I
Deben elaborar un diagrama de flujo que integre los temas relacionados all.
1.4 En este espacio, deben elaborar un Diagrama UVE heurstico, relacionado
con el artculo cientfico anexo, denominado: Evaluacin de parmetros de calidad
para la determinacin de carbono orgnico en suelos., J,Garca Galvis y
Ballesteros, M (2005), Revista Colombiana de Qumica
24
2. MATERIALES Y MTODOS
MATERIAL EQUIPO
(Marca)
APLICACIN
Capacidad y
Precisin
Pesada
(Gravimetra)
210g;
0,0001g
25
Fotografa
REACTIVO(NOMBRE)
FRMULA
MOLECULAR
CONCENTRACIN
Sulfato ferroso
1N
Dicromato de potasio
1N
VARIABLE(INDICADOR)
EVALUADA(O)
TCNICA ANALTICA
UTILIZADA
26
pH
Mtodo potenciomtrico
Carbono Orgnico(CO) %
Capacidad Amortiguadora
Nitrgeno total (NT) %
Materia Orgnica(MO) %
2.3.1 Protocolos de muestras analizadas (Elaborar una ficha formato que
muestre la informacin fundamental sobre el origen de cada una. Por ej:
especie, nombre cientfico, lugar de muestreo, datos agroclimatolgicos)
2.3.2 Flujograma general de los procedimientos desarrollados que puede
inclur : Video fotografas que sustentan los procesos desarrollados ( en
Word : hacer click en insertar, formas y diagrama de flujo)
3. RESULTADOS Y DISCUSIN
3.1 TABLAS DE DATOS
*Inclur aqu las enviadas al profesor.*
3.2 ECUACIONES DE CLCULO
%CO =
Dnde:
%CO= porcentaje de carbono orgnico
VFeSO4= Volumen(mL) de sulfato ferroso
B = Volumen del sulfato ferroso gastado en el blanco
N = normalidad del sulfato ferroso
0.003= peso miliequivalente del carbono en gramos
27
%MO= %CO
1,724
Dnde:
%MO = Materia orgnica
%CO= porcentaje de carbono orgnico
1,724= constante de Van Bemmelen
%NT= %MO/20
Donde:
%NT= Nitrgeno total
%MO = Materia orgnica
Carbono
Orgnico
espectrofotomtrico
por
mtodo
]
Donde:
28
colorimtrico-
Sacarosa: C12H22O11
Capacidad amortiguadora ( ), Mtodo Potenciomtrico
Capacidad Amortiguadora (
Capacidad Amortiguadora (
solucin buffer
(
(
3.3 TABLAS DE RESULTADOS (Completar)
Tabla 1.Resultados obtenidos en el anlisis fisicoqumico
Valor obtenido por:
VARIABLE
DESCRIPCIN
EVALUADA
Titulacin
Espectrofotometria
MO
NT
CO
Materia orgnica
(%)
Nitrgeno total
(%)
Carbono
orgnico(%)
29
pH
Potencial de
Hidrgenos
Capacidad
Amortiguadora
Valores porcentuales
4.44
4.66
4.06
4
3
2.36
2.3
2
1
0.2
0
PH
CE(dS/m)
CO(%)
MO(%)
NT(%)
Ai
(%meq)
Indicadores Fisicoqumicos
30
5. BIBLIOGRAFA
(UTILIZADA Y CONSULTADA, MNIMO 6 REFERENCIAS EN NORMAS APA)
PRCTICA 4
RESUMEN
31
INTRODUCCIN
(se debe escribir en 17 lneas)
1. FUNDAMENTACIN TERICA
1.1 MENTEFACTO CONCEPTUAL (elaboren un mentefacto conceptual, en
este espacio, con base en los siguientes conceptos)
CONCEPTO
CONCEPTO
32
Actividad cataltica
El sustrato es el perxido
pH y T ptimos
xido-reductasa
Catalasa (CAT)
El sustrato es la rea
Peroxidasa
Peroxisoma
Produce H2O y O2
Cintica enzimtica de
Michaellis-Menten
Impide la acumulacin de
perxido
Parmetros cinticos(Km y
Vmx)
Participa en la foto-respiracin
Es amidohidrolasa
RBE REDOX
CONCEPTO
Catalasa(CAT)
Enzima xido-reductasa
Familia peroxidasas
Peroxisoma
Peroxidacin lipdica
RBE REDOX
H2O2
H2O + O2
Cintica Michaeliana
Permanganometra
Coenzima
Apoenzima
Grupo Hemo(Fe+3)
Protena cuaternaria
33
Homotetramrica
Grasas
Mitocondria
Oxidacin
1.3 Con base en la revisin detallada de los videos relacionados con actividad
enzimtica y mostrados en los siguientes link:
http://www.youtube.com/watch?v=WOAcp15VLJ0
http://www.youtube.com/watch?v=0Jr7gxy3bKI
Deben elaborar un diagrama de flujo que integre los temas relacionados all.
1.4 En este espacio, deben elaborar un Diagrama UVE Heurstico relacionado con
el artculo cientfico anexo, denominado: Catalasa, Peroxidasa y
Polifenoloxidasa en pitaya amarilla (acanthocereus pitajaya): maduracin y
senescencia
2. MATERIALES Y MTODOS
2.1 LISTA DE MATERIALES Y EQUIPOS UTILIZADOS(completar el cuadro)
Cuadro 1. Lista de materiales y equipos utilizados en la prctica
MATERIAL EQUIPO
(Marca)
APLICACIN
Capacidad y
Precisin
Pesada
(Gravimetra)
210g;
0,0001g
34
Fotografa
REACTIVO(NOMBRE)
FRMULA MOLECULAR
CONCENTRACIN
Perxido de hidrgeno
H2O2
0,05M
2.3 PROCEDIMIENTOS
2.3.1 Protocolos de muestras analizadas (Elaborar una ficha formato que
muestre la informacin fundamental sobre el origen de cada una. Por ej:
especie, nombre cientfico, lugar de muestreo, datos agroclimatolgicos,
animales, etapa productiva, alimentacin etc.)
2.3.2 Flujograma general de los procedimientos desarrollados que puede
inclur : Video fotografas que sustentan los procesos desarrollados ( en
Word : hacer click en insertar, formas y diagrama de flujo)
3. RESULTADOS Y DISCUSIN
3.1 TABLAS DE DATOS (Completar)
35
3.2 CLCULOS
Tubos
Muestras
Analizadas
36
ACAT (moles de
H2O2 / min)
2
3
4
3.3.1 GRFICAS
(Realizarlas en Excel y luego importarlas a Word en este documento)
4. CONCLUSIONES
(Escribir mnimo Cinco)
37
5. BIBLIOGRAFA
(UTILIZADA Y CONSULTADA, MNIMO 6 REFERENCIAS EN NORMAS APA)
38