FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA

SALUD
ESCUELA DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

Tema:

Determinacin de protenas plasmticas

Docente: Minaya Galarreta Anglica

Alumnos:
Jara Valero, Jhon Estiven
Condor Quispe, Banessa
Izquierdo Vasquez, Daniel

Ciclo: VI
Curso: Bioqumica II

LIMA PERU
2014
DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS

DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS

I.

Marco terico:

El plasma contiene una mezcla compleja de protenas a una concentracin que oscila
entre 6,0 y 8,0 g/dl. Estas protenas plasmticas son un conjunto de protenas en solucin
coloidal en el plasma sanguneo. Su tamao es del orden de 0,1 a 0,001 micras, y pueden
ser simples o conjugadas, incorporando en su molcula carbohidratos y lpidos.

PROTEINAS TOTALES

El plasma contiene un gran nmero de protenas qumicamente diferentes, a cuyo

conjunto se le denomina protenas totales. La determinacin analtica de estas protenas
tiene sus limitaciones, ya que las variaciones de una fraccin proteica pueden estar
enmascaradas por cambios opuestos en otra. Las perturbaciones clnicas de las protenas
totales pueden clasificarse en dos grupos:
Disminucin de las protenas plasmticas
Las anormalidades que se presentan en las clnicas en cuanto al contenido de protenas
totales son en la mayora de los casos en sentido descendente (hipoproteinemia) con
niveles inferiores a 6,0g/dl.
La hipoproteinemia puede encontrarse en mltiples estados patolgicos. En el sndrome
nefrtico, en los casos de hemorragias severas o quemaduras extensas. En los estados de
hambre o de carencia por deficiente absorcin intestinal. Esta misma situacin se alcanza
en aquellos estados patolgicos en los cuales una gran parte del parnquima heptico se
encuentra afectado1.
Elevacin de las protenas plasmticas
Puede darse una hiperproteinemia por deficiencia relativa de agua. Son debidas a
deshidratacin, como ocurre en los casos de diarrea severa, vmitos de repeticin, o a
causas artificiales, como la estasis venosa durante la extraccin sangunea.

DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES

En la prctica clnica son dos mtodos utilizados, con diferentes fundamentos

fisicoqumicos.
Tcnica colorimtrica de Biuret
Se basa en la propiedad que presentan los compuestos que poseen enlaces peptdicos de
reaccionar en medio alcalino con sales de cobre para formar un complejo, de estructura
DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS

desconocida, entre el ion Cu++ y los grupos carbonilicos e iminicos del enlace peptdico. La
intensidad de color es proporcional al nmero de enlaces peptdicos que existan en la
muestra, y por tanto a la concentracin de protenas.
Este mtodo no es muy sensible; sin embargo, actualmente es el mtodo ms usado por
una simplicidad junto a una adecuada precisin. Los sueros hemolticos interfieren en la
determinacin.
Reaccin:

Tcnica refracometrica
La estimacin de la concentracin proteica a partir de la medida del ndice de refraccin
es el mtodo ms rpido y directo, y de suficiente valor clnico cuando se utilizan sueros
transparentes y no pigmentados. El mtodo se basa en que el ndice de refraccin del
agua se incrementa de una manera casi directamente proporcional con el aumento de la
concentracin de soluto.

DETERMINACION DE ALBUMINA

Es el mayor componente proteico del suero. Su concentracin es de 4,0-5,0g/dl. Acta

como transportadora de una gran variedad de molculas endgenas y exgenas tales
como la bilirrubina, enzimas, hormonas, lpidos, iones y frmacos. El aumento de la
albumina es nicamente caracterstico de la deshidratacin.
La hipoalbuminemia indica una falta de produccin por parte del hgado o una prdida a
travs de superficies daadas. Esto ltimo ocurre en la enfermedad renal, enteropata con
prdida de protenas y en las quemaduras1.

DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS

II.

Objetivos:

III.

Determinar los niveles de protenas totales y protenas de reserva (albuminas) en el suero

sanguneo por el mtodo de Biuret.
Manipular correctamente los equipos y materiales requeridos en la prctica.
Pronosticar posibles enfermedades.
Comprender las tcnicas colorimtricas para de determinacin proteica de ambos puntos
a realizar.

Materiales y reactivos:

MATERIALES:
1: equipos y materiales.
espectrofotmetro

centrifuga

Bao maria regulado Jeringas descartables

a 37
*15ml ligadura y
algodn

Tubos de prueba de Micropipetas de 0 a Gradillas, bagueta

13x100mm
50ul pipetas de 1.5 y
10ml

Reactivos.
a. Reactivo 1: agua destilada.

DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS

b. Suero sanguneo

c. Reactivo : EDTA/Cu (mL) y BFC (mL)

d. Standard de de protenas 5 g/dL y suero estndar 2,7 g/dL.

DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS

IV.

Procedimiento:

Antes de empezar cada una de las tcnicas necesitamos muestra (sangre):

Esta tcnica se realiza en tres tubos de prueba de 13 x 100 ml por cada determinacin,
estndar y reactivo:
Problema (P)= suero
Blanco (B)
Estndar (s)

1. Determinacin de protenas plasmticas totales (Mtodo de Biuret)

Se realiza utilizando iones cpricos que en medio alcalino reacciona con las protenas formando
compuestos de coordinacin de color violeta, cuyo pico de mxima absorcin es de 540 nm y su
intensidad es proporcional a la concentracin de protenas.

St

Agua destilada

50 L

----

----

Suero

----

50 L

----

Estndar de protenas [5 g/dL]

----

----

50 L

Reactivo EDTA/Cu (mL)

3,5

3,5

3,5

Incubar durante 15 minutos a 37 C y leer en el espectrofotmetro a 530 nm.

Calcular la concentracin de protenas totales y albumina en g/dL aplicando la siguiente
frmula:

DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS

g/dL =

2. Determinacin de albumina
La albumina reacciona con el bromo cresolsulfonftaleina a pH 3,8 formando un compuesto
coloreado que absorbe a 625 nm. Preparar el siguiente sistema:

St

Suero estndar [2,7 g/dL]

----

10 L

----

Suero

----

----

10 L

Reactivo BCF (mL)

3,5

3,5

3,5

Colocar los tubos en una gradilla a temperatura ambien durante 10 minutos y leer en el
espectrofotmetro a 625 nm.
Calcular la concentracin de protenas totales y albumina en g/dL aplicando la siguiente
misma frmula.
V.

Resultados:
Para determinacin de protenas totales
Lectura de las absorbancias:
Estndar: 0,190 nm
Problema: 0,271 nm
g/dL

g/dL = 7,13 g/dL

Coloracin de cada tubo despus del proceso.

Blanco: color verde turquesa.

Problema: color azul violeta.
Estndar: color azul.

DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS

 Para determinacin de Albumina

Lectura de las absorbancias:
Estndar: 0,193 nm
Problema: 0,419 nm
g/dL

g/dL = 5,86 g/dL

Coloracin de cada tubo despus del proceso.

VI.

Blanco: amarillo.
Problema: verde.
Estndar: verde caa.

DISCUSIONES:

En la prctica realizada no se pudo llegar a la conclusin si nuestro paciente estaba en

los valores normales, altos o bajos. Porque no tenamos los valores referenciales
normales de protenas plasmticas totales ni de los valores referenciales normales de
la albumina, esto produjo una discusin en el grupo ya que se quiso pronosticar
posibles enfermedades.

Durante la prctica nos preguntamos sobre la diferencia de medios de temperatura (

t=37 y t amiente) que se somete a los tubos de protenas plasmticas totales y a los
tubos de albumina.

DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS

VII.

CONCLUSIONES:

Se desarrollo correctamente el mtodo enzimtico colorimtrico el cual consisti en el

adecuado uso del equipo espectofometro, se mejor la manipulacin de las micropipetas
al contacto con el reactivo. Cada vez se obtiene mejores resultados en la tcnica de
extraccin de sangre.

Se determin que la concentracin de protenas plasmticas totales es 7,13 g/dL.

Comparado con los valores normales se concluye que el paciente esta dentro de los
valores normales que oscila entre 6,0 y 8,0 g/dl. Estas protenas plasmticas son un

conjunto de protenas en solucin coloidal en el plasma sanguneo.

Se determin que la concentracin de albumina es 5,86g/dl, comparando con los valores

normales (Su concentracin es de 4,0-5,0g/dl) se concluye que el paciente sufre un
aumento de albumina indica una deshidratacin, o una dieta rica en protena.

DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS

VIII.

CUESTIONARIO:

1) Cules son las manifestaciones patolgicas cuando los niveles de protenas totales y
albumina estn por sobre o debajo de los niveles referenciales normales?
PROTEINAS PLASMATICAS TOTALES
Valores normales de protenas
plasmticas totales:
El rango normal de protenas
totales es de 6.0 a 8.3 g/dl
(gramos por decilitro).

El descenso de los niveles de

de la enfermedad renal.
pueden producir niveles
altos de protenas totales.

Enfermedades relacionadas con las protenas totales

Hiperproteinemia causada por deshidr

proteica, catabolismo proteico excesivo o perdidas excesivas (hemorragias).

ALBUMINA
El rango normal es de
3.4 a 5.4 gramos por
decilitro (g/dL).

El aumento en el nivel de
albmina en la sangre puede
deberse a:

Deshidratacin
Dieta rica en protena
Tener un torniquete
puesto por mucho
tiempo al sacar una
muestra de sangre

Otras afecciones bajo las cuales

se puede realizar este examen
son:

Los niveles de albmina en suero por

debajo de lo normal pueden ser un
signo de:

La disminucin en los niveles de

albmina en la sangre pueden ocurrir
cuando el cuerpo no obtiene ni
absorbe suficientes nutrientes, como:

Quemaduras (extensas)
Enfermedad de Wilson

Enfermedades renales.
Enfermedad heptica (por
ejemplo, hepatitis o cirrosis qu
e puede causar ascitis).

Despus de una ciruga para

bajar de peso
Enfermedad de Crohn
Dietas bajas en protenas.

DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS

1
0

2) Se requiere de ayuno para realizar la determinacin de albumina y protenas totales

en sangre?
Para realizar este anlisis no se precisa estar en ayunas, pero para lograr una mayor exactitud en
resultados y evitar interferencias, muchos laboratorios clnicos solicitan al paciente, venir con un
ayuno aproximado de 8 horas.
Existen situaciones que pueden alterar los niveles de protenas totales:

Las protenas totales pueden estar aumentadas en el embarazo.

Los medicamentos que pueden elevar la concentracin de protenas son los esteroides
anabolizantes, los corticoides, los andrgenos, la hormona de crecimiento, la insulina y la
progesterona.
Hay otros medicamentos que pueden disminuir la concentracin de protenas totales,
como los estrgenos, los anticonceptivos y otros medicamentos hepatotxicos.

3) Por qu el reactivo de BCF est a pH 3.8 si el pH de la sangre es de 7.4?

La Albumina reacciona especficamente sin separacin previa con la forma anionica de la Bromo
Cresolsulfon Ftaleina (BCF), en presencia de un exceso de colorante, en medio tamponado a pH
3.9, el aumento de la absorbancia a 625 nm respecto del Blanco de reactivo, es proporcional a la
cantidad de Albumina presente en la muestra.
Entonces podemos deducir que el BCF alcaliniza a la Albumina cuyo pH es 8.0, para que esta
pueda interactuar libremente en el suero sanguneo.

4.- Por qu se usa EDTA para determinar?

El EDTA se une a los iones Na+ Y K+ formando as sales y junto al ion Cu+. La reaccin se basa en la
formacin de un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo de
coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que
forma parte de los enlaces peptdicos presentando un mximo de absorcin a 540 nm.
Da positiva esta reaccin en todos los compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos
consecutivos en sus
molculas.

DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS

1
1

IX.

BIBLIOGRAFIA:

FUENTE:
(1) http://books.google.es/books?id=Y1Qm0nRmAtsC&pg=PA47&dq=determinacion+de+
proteinas+plasmaticas&hl=es&sa=X&ei=ZXQfVOWNLebksATFp4GACg&ved=0CCwQ6A
EwAg#v=onepage&q=determinacion%20de%20proteinas%20plasmaticas&f=false
Jacobo Daz Portillo,Mara Teresa Fernndez del Barrio,Fernando Paredes Salido, Aspectos
clnica, Espaa 1997.

bsicos de bioqumica

(2) http://books.google.es/books?id=Av4IIsyHqcC&pg=PA660&dq=determinacion+de+proteinas+plasmaticas&hl=es&sa=X&ei=0ncfVLuo
BIW1sQTsmIKwDw&ved=0CDkQ6AEwBA#v=onepage&q=determinacion%20de%20protein
as%20plasmaticas&f=false
Alfonso R. (DRT) Gennaro, Remington Farmacia, Volumen 1, Madrid 2003.

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