Laboratorio de Bioqumica.

Facultad experimental de ciencias. Dpto. de Biologa. Universidad del Zulia.

Practica N#2 Preparacin de buffer. Titulacin de Aminocidos.

Baez Anaverl, Carrasquero Alcibeth, Pernia Adrianny y Tapia Adriana.

Resumen.
El objetivo de este trabajo prctico fue introducir al estudiante en la
metodologa y procedimientos para la preparacin y titulacin de aminocidos
evaluando la capacidad tamponante de diferentes aminocidos de acuerdo a la
valoracin pH-mtrica, adquiriendo conocimientos acerca de la importancia de
dichas soluciones tampones tambin llamados buffer, los cuales son sistemas
cuyo pH permanece notablemente estable cuando se le aaden otras sustancias.
Un aminocido es una molcula que contiene grupos carboxilos y grupos aminos,
actuando como acido o como base soportando grandes o pequeas adiciones de
dichas sustancias que pueden verse reflejadas en las curvas de titulacin.
Palabras claves: cido, base, pH, titulacin, buffer.

Introduccin.
En organismos vivos se producen continuamente cidos orgnicos que son
productos finales de reacciones metablicas, catabolismo de protenas y otras
molculas en estado activo.
El pH es una medida de la acidez o alcalinidad de una solucin. El pH indica la
concentracin de iones hidronio (H3O) presentes en determinadas sustancias. La
medicin del pH es uno de los procedimientos ms utilizados hoy en da en
bioqumica, ya que determina caractersticas de la estructura y la actividad de las
macromolculas biolgicas, as como la conducta de las clulas y del organismo.

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Muchas de las reacciones qumicas que llegan a producirse en solucin acuosa
necesitan que el pH del sistema se mantenga constante, para evitar que ocurran
otras reacciones no deseadas.
Las soluciones reguladoras o buffer son capaces de poder mantener la acidez
o basicidad de un sistema dentro de un intervalo de pH, por lo cual tienen
mltiples aplicaciones, tanto en la industria como en los laboratorios. Estas
soluciones contienen especies predominantes un acido dbil y una sal de su base
conjugada, o una base dbil y una sal de su acido conjugado. Tambin podemos
obtener

una

solucin

reguladora

haciendo

reaccionar

parcialmente

por

neutralizacin un acido dbil con una base fuerte o una base dbil con un acido
fuerte.
Una vez formada la solucin reguladora, el pH varia poco por el agregado de
pequeas cantidades de un acido fuerte o una base fuerte y pierdes capacidad
reguladora por el agregado de agua (dilucin).
Los objetivos planteados en esta experiencia prctica fueron el evaluar la gran
importancia de las soluciones tampones as como adquirir destrezas en la
preparacin de disoluciones, evaluando a su vez la capacidad tamponante que
presentan diferentes aminocidos de acuerdo a la valoracin pH-mtrica.

Resultados y Discusin.
Iniciamos la actividad preparando 20ml de un buffer de cido ctrico y citrato de
sodio de pH 5 que de manera errnea lo llevamos a pH 6, luego se separo en dos
beaker donde cada uno de ellos contena 10ml de dicho buffer denominndolos A
y B; siendo A titulado con base NaOH y B con HCl. Al titular el buffer citrato de pH
6 con HCl y con intervalos de 0,7ml, denotamos que el pH descendi desde 5,35 a
1,45 presentando una pequea meseta debido a la liberacin de iones hidronio
haciendo que la solucin sea ms acida.

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Mientras que al titular el buffer B, citrato con NaOH, observamos un cambio
brusco de pH de 6,06 a 12,39 ocurriendo esto por la obtencin de iones hidrxido,
puesto que la solucin tampn llega en un punto en el cual pierde su capacidad
amortiguadora.
Tambin se realizo la titulacin de un aminocido descocido tomando 10ml de
la muestra a pH 2.02, se le agreg de forma consecutiva gotas de NaOH midiendo
la variacin del pH hasta lograr llevarlo a pH 12 y as obtener mediante una curva
de titulacin la identificacin. Mostrando en la grafica 2 mesetas siendo este un
aminocido bsico es decir, con carga negativa.
Dado los resultados de los dems grupos inferimos que la titulacin del buffer
fosfato con la base, NaOH, presento un aumento de pH cuando se le adiciono
0,5ml de dicha base; el aumento se llevo acabo de forma normal sin presentar
desviacin brusca en el buffer TRIS, siendo este un buffer capaz de mantener un
pH estable a pesar de las influencias que puedan afectar, el buffer CITRATO y
ACETATO presentaron caractersticas similares al momento de la adicin de 0,5ml
de NaOH dando as como resultados curvas de titulacin que aumentaron
bruscamente hasta un pH 12.
Segn las soluciones buffer de ACETATO y FOSFATO mas HCl se conoci
que el pH de ambos descendi de forma normal luego de la adiccin de 0,5ml
debido a que dichos sistemas son ms concentrados y la capacidad
amortiguadora ser mayor.El buffer TRIS descendi bruscamente despus de ser
aadido el HCl.

Valor de pKa del buffer.

pKa buffer + log10

pKa= pH + log10

pKa = log10 - pH = 5.

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Tabla #1 Soluciones buffer + HCl
Volumen (ml)

pH

B.Tris

B.Fosfato B.Citrato B.Acetato B.Tris

B.fosfato B.Citrato B.Acetato

O,5

0.5

0,7

0,5

6,9

6,85

5,35

4,67

0,14

1,8

6,56

5,05

4,25

1,5

0,21

1,5

6,25

4.85

3,76

0,28

5,96

4,58

2,77

2,5

0,35

2,5

5,57

4,35

1,77

0,42

4,29

4,02

0,49

3,5

2,84

3,73

0,56

3,44

0,63

3,09

0,70

2,81

0,77

2,53

0,84

2,03

0,91

1,74

0,98

1,45

Tabla #2 Soluciones buffer + NaOH

Volumen (ml)

pH

B.Tris

B.Fosfato B.Citrato B.Acetato B.Tris

B.fosfato B.Citrato B.Acetato

O,5

0.5

0,5

0,5

8,47

7,23

6,06

6,62

10,13

7,56

12,39

12,45

1,5

1,5

12,33

8,44

12,6

10,36

2,5

2,5

12,75

10,96

12,8

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3,5

12,89

12,99

4,5

13,04

Tabla #3 Aminocido

AMINOACIDO.
1 gota

2,05

2 gota

2,13

3 gota

2,43

4 gota

3,29

5 gota

4,64

6 gota

8,61

7 gota

9,32

8 gota

9,72

9 gota

9,96

10 gota

11,29

11 gota

11,69

12 gota

11,89

13 gota

11,99

14 gota

12.05

Conclusiones.
Las soluciones bffer deben de prepararse de manera que las concentraciones
inciales

de

las

especies

conjugadas

estn

relacionados

entre

sus

concentraciones, el sistema bffer ms adecuado es aquel cuyo valor de pKa esta

lo ms cerca posible del pH que deseamos regular. Se logro la preparacin de
disoluciones tampones, se evalu la capacidad tamponante de diferentes

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aminocidos de acuerdo a la valoracin pH-mtrica y se adquiri destreza en la
preparacin de dichas soluciones.

Referencias Bibliogrficas.
Butler J.N. Solubility ans pH calculations. Addison Wesley
publishing company, Inc. 1994.
Plummer, D. Introduccin a la Bioqumica Prctica. Bogota.
McGraw Hill Latinoamerica. 1981
Angelini M. y otrsos. Guia de problemas, Quimica. Ciclo Basico
comn. Universidad de Buenos Aires, ao 2000.