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4. GRFICOS
5. CONCLUSIONES:
- ELISA se basa en la reaccin inmunolgica (antgeno Ag o anticuerpo Ac) a un soporte
slido, poniendo luego ese sistema en contacto con una fase fluida que contiene el
reactivo complementario.
- El complejo inmunolgico, una vez formado, es reconocido por molculas capaces de
reconocer a su componente ms superficial, marcadas con una enzima que
posteriormente se agrega posteriormente un sustrato cromgeno.
- Posteriormente este sustrato cromgeno es medido por espectrofotometra la
cantidad de producto enzimtico resultante, cuantificando as la cantidad producto
enzimtico marcado, y por tanto resultante de la reaccin inmunolgica, unin
antgeno-anticuerpo de inicio.
- La fase de lavado es muy importante debido a que as se puede eliminar cualquier
exceso que pueda reaccionar con el resto de componentes a agregar originando un
falso positivo o un falso negativo.
- Se puede usar esta tcnica para un parasitismo intestinal ya que en el caso en que
exista invasin de parsitos o una parasitosis extraintestinal se va a originar una
respuesta inmunitaria que se la puede comprobar por medio de ELISA. En el caso de
una infeccin aguda se detecta anticuerpos de tipo IgM o de tipo crnico donde se
detecta anticuerpos de tipo IgG.
6. DISCUSIONES:
- El uso de la tcnica de ELISA puede ser aplicado a la identificacin de protozoarios
intestinales y an ms extra intestinales ya que la respuesta inmunolgica va ligada
directamente a la estructura compleja de protenas del protozoario que va a actuar
como antgenos.
- La prueba directa de ELISA es menos sensible que la forma indirecta de la prueba ya
que en el caso de ELISA indirecto, el anticuerpo primario no se etiqueta y, por tanto,
conserva su inmunorreactividad. Adems, cada anticuerpo primario tiene muchos
eptopos que pueden unirse con el anticuerpo secundario, lo que permite la
amplificacin de la seal y por lo tanto la mejora de la sensibilidad del mtodo. Sin
embargo, hay una posibilidad de reactividad cruzada entre el antgeno y el anticuerpo
secundario, dando lugar a un error en los resultados.
- La adicin de un sustrato cromgeno se explica para la posible produccin de color.
Esto se debe a que se produce una larga cadena de insaturaciones que ampla la
longitud de absorcin trasladndose al espectro visible para el caso de ELISA directo e
indirecto o a dems puede agregarse sustratos que se puedan oxidar a causa del
oxgeno liberado originando cambio de color.
- Se agrega un complejo que posee una enzima debido a su habilidad de producir una
reaccin en catlisis para obtener un producto de fcil deteccin.
7. CUESTIONARIO:
1. Composicin de Agares
Agar SS (salmonellashigella). Este medio selectivo ejerce una buena inhibicin sobre
agentes coliformes, sin limitar el desarrollo de los patgenos gramnegativos.
Contiene:
Sales biliares
Lactosa,
Citrato y tiosulfato sdico
Citrato frrico,
Verde brillante
Rojo neutro como indicador.
Trypticase 2.0 g
Extracto de levaduras 1.0 g
Cloruro de sodio 200.0 mg
Fosfato de potasio dibsico 100.0 mg
Fosfato de potasio monobsico 60.0 mg
Cloruro de l-cistena 100.0 mg
l-cido ascrbico 20.0 mg
Citrato de hierro y amonio 2.28 mg
Bilis bovina 100.0 mg
Agua desionizada (aforar) 100.0 ml
Cryptosporidium parvum
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RPMI-1640 100 ml
Glutamina 30 mg
Bicarbonato de sodio 300 mg
Bilis bovina 20 mg
Glucosa 100 mg
cido flico 25 microgramos
cido 4-aminobenzoico 100 microgramos
Pentotenato de calcio 50 microgramos
cido ascrbico 875 microgramos
Suero fetal de ternera 1%
HEPES 360 mg
Penicilina 10 000 U
Estreptomicina 10 mg
La solucin se ajusta a pH 7.40
(Navarro)
8. BIBLIOGRAFA:
Libros:
(2006). Protenas: Estructira Primaria. En D. Voet, Fundamentos de Bioqumica (pgs. 94-118).
Madrid: MDICA PANAMERICANA.
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