Los microbios que te rodean

UNIDAD 1: Un mundo invisible

UNIDAD 1: UN MUNDO INVISIBLE

1.3. Microbios en el laboratorio

Hay dos tcnicas bsicas para trabajar con microorganismos en el laboratorio: el

cultivo para crecerlos y la microscopa para verlos.
Para poder trabajar con microorganismos lo primero que tenemos que hacer es
crecerlos, cultivarlos en medios de cultivo, para poder as obtener una gran cantidad
de microbios y poder aislarlos y tenerlos en cultivo puro, para su posterior estudio. Los
medios de cultivo donde van a crecer los microorganismos son como un caldo o sopa
nutritiva que contiene todos los nutrientes que necesitar para su crecimiento: una
fuente de carbono, que pueden ser azcares, algn extracto de protenas, que
proporcione los aminocidos necesarios, y un aporte de vitaminas y sales minerales.
Todo eso disuelto en una solucin amortiguadora que controle el pH del medio.
Dependiendo del tipo de microorganismo que queramos cultivar, emplearemos un
tipo de medio de cultivo u otro. Es decir, cada microorganismo tendr unos
requerimientos nutritivos especficos y necesitar un medio de cultivo concreto.
Adems, los medios de cultivo pueden ser lquidos o slidos si les aadimos agar
bacteriolgico1. Los medios slidos suelen prepararse en placas de Petri.
Cuando trabajamos con microorganismos tenemos que mantener unas reglas bsicas
de higiene, asepsia y esterilidad. Aunque las bacterias que vamos a manejar en un
laboratorio de prcticas con alumnos no son patgenas, son bacterias ambientales
que no suponen un riesgo para la salud, trabajamos siempre al lado de la llama de un
mechero Bunsen, porque alrededor de la llama tenemos un ambiente estril. Evitamos
as adems de contaminarnos nosotros, no contaminar las muestras con las bacterias
que hay en el ambiente o que nosotros mismos llevamos encima. Todo el material
tiene que estar previamente esterilizado. (Ver ANEXO 1: Buenas prcticas en un
laboratorio de microbiologa).
Para cultivar las bacterias podemos sembrar o inocular, al lado de la llama, un matraz
con medio de cultivo estril, con una muestra de bacterias. Tambin podemos realizar
la tcnica que se denomina agotamiento por estras para obtener bacterias aisladas y
poder tener as cultivos puros de un determinado microorganismo. Y una forma muy
sencilla de comprobar que las bacterias estn en todas partes es sembrar las placas de
medio de cultivo con alguna muestras ambiental, como un poco de tierra por ejemplo,

El agar bacteriolgico es un polisacrido que se obtiene de las algas y que se emplea para solidificar los
medios de cultivo. Normalmente se aaden 15 g de agar en caliente por cada litro de medio de cultivo.
Al enfriarse a temperatura ambiente el agar se solidifica.

Universidad de Navarra

Prof. Ignacio Lpez-Goi

Los microbios que te rodean

UNIDAD 1: Un mundo invisible

o dejarlas abiertas para que se inoculen y contaminen con las bacterias que hay en el
aire, o simplemente colocando parte de nuestros dedos sobre la placa de agar.
Una vez sembrados o inoculados los medios de cultivo, los incubaremos o
mantendremos a una temperatura adecuada. Cada microorganismo tiene su
temperatura ptima de crecimiento, unos pueden crecer mejor a 10C, otros a
temperatura ambiente, otros en estufas a 37C, incluso los hay que crecen a muy altas
temperaturas, depende del tipo de microorganismo. Las bacterias con las que
trabajamos habitualmente en el laboratorio de prcticas se incuban a temperatura
ambiente o en una estufa a 37C durante uno o dos das.
Despus de 24-48 horas, podemos ver el efecto del crecimiento de los
microorganismos sobre los medios de cultivo. Podemos comparar un medio lquido
estril antes de inocularlo, sin bacterias, que es totalmente transparente, con el medio
donde han crecido las bacterias y est turbio y repleto de cientos de millones de
microorganismos. Podramos incluso medir el crecimiento de las bacterias midiendo el
grado de turbidez: a mayor crecimiento bacteriano, mayor turbidez del lquido (al
menos durante un rango).
En las placas con medio slido, podemos ver que dnde pusimos una pequea
muestra de tierra o las que dejamos abiertas o incluso en las que pusimos nuestras
huellas, ahora estn repletas de microorganismos: son microbios que estaban en el
suelo, en el aire o sobre nuestra piel. Y de forma similar, en el agotamiento por estras
podemos observar cmo los microorganismos han crecido formando pequeos
montculos, que se denominan colonias bacterianas. Las colonias bacterianas se
forman porque ah donde qued una bacteria aislada, sta se ha ido multiplicando y ha
dado lugar a un montoncito de bacterias que provienen todas ellas de la que cay en
ese sitio. Por eso, podramos decir que una colonia bacteriana es un cultivo puro 2.
La otra tcnica bsica es un laboratorio de microbiologa es la microscopa. Para poder
ver los microorganismos al microscopio, primero prepararemos lo que se denomina un
frotis bacteriano, que consiste en fijar o pegar al calor los microorganismos sobre un
porta de vidrio. Como la mayora de los microorganismos son incoloros, necesitamos
colorantes para teirlos, para aumentar el contraste y poder verlos al microscopio.
Empleamos, por ejemplo, una tincin simple con cristal violeta durante unos minutos,
lavamos, secamos al calor y ya se pueden ver al microscopio ptico (Ver ANEXO 2:
Preparacin de frotis bacteriano y tincin simple).
Las bacterias son muy pequeas, miden unas pocas micras, y para poder visualizarlas
necesitaremos el objetivo de mximo aumento (100 x) que emplea aceite de
inmersin. As, obtendremos entre 1.000 y 2.000 aumentos (Ver ANEXO 3: manejo y
uso del microscopio ptico).

En realidad las colonias bacterias no siempre son cultivos puros. Puede ocurrir que una colonia
provenga de dos o ms bacterias individuales que al azar hayan quedado muy prximas y al crecer
formen una sola colonia.

Universidad de Navarra

Prof. Ignacio Lpez-Goi

Los microbios que te rodean

UNIDAD 1: Un mundo invisible

Mediante la tincin simple podremos ver la forma de las bacterias (cocos,

redondeados y esfricos; bacilos, alargados y cilndricos; vibrios, con forma de coma;
espirilos, con forma espiral, ), los tipos de agrupaciones (diplococos, de dos en dos;
estreptococos, en fila; estafilococos, en racimos; ) y el tamao comparativo (las
bacterias ms pequeas, las levaduras de tamao intermedio y ms grandes las clulas
eucariotas, como las clulas epiteliales, por ejemplo).

Universidad de Navarra

Prof. Ignacio Lpez-Goi