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9 de junio, 2009
Mecanismos de resistencia
1. Enzimas inactivantes
2. Mecanismos de Eflujo
3. Impermeabilidad
4. Alteracin de las PBPs
Combinacin de todos
los mecanismos
Impermeabilidad
Exclusivo de Gram negativos
Dficit de porinas
Algunos ejemplos
OmpK 36 en Kpn
OprD en Pae
Car O A. baumanii
CIM de carbapenemes
frente a cepas isognicas de P. aeruginosa
Cepa
AmpC
OprD
Imipenem
Meropenem
Desreprimida
0,25
Deficiente
0,25
0,125
Desreprimida
16
Deficiente
0,5
Bombas de Eflujo
Sistema multicomponente
FC: mantener bajas cc. de sust. txicas
Especficas inespecficas
Plsmido cromosoma
Constitutiva - inducible
Resistencia a mltiples antibiticos:
Bombas de Eflujo
Familias:
ABC (ATP binding cassette)
MF (major facilitator),
MATE (multidrug and toxic efflux)
SMR (small multidrug resistance)
MT (drug/metabolite transporter
Resistencia no enzimtica a
carbapenemes en P. aeruginosa
Resistencia a
meropenem (radical lipofilico)
*Hiperproduccin de
MexAB-OprM
extruye todos los betalactmicos (excepto
imipenem) y quinolonas
Resistencia a
imipenem
*dficit de OprD
*dficit OprD +
alteracin de PBP4
* MexEF-OprN extruye:
quinolonas, tetraciclina,
cloranfenicol, imipenem
CARBAPENEMASAS
Metalo-enzimas
Clase Molecular B
Serino-enzimas
Clase Molecular A
NMCA (1990) (Ecl)
Sme-1, -2, -3 (1990, 2000)
(Smar)
IMI-1 (1996) (Ecl)
Clase Molecular D
60%
OXA 24: 24 - 25 - 26 40
OXA 58
56%
47%
48%
63%
59%
Metalo-enzimas
Carbapenemasas de clase B
metaloenzimas clase molecular B de Ambler,
grupo 3f de K. Bush.
Hidrolizan: amino- carboxi y ureidopenicilinas,
cefalosporinas y carbapenemes
No hidrolizan: aztreonam
No inhibibles por inhibidores clsicos
Inhibibles por EDTA
IMP, VIM, SPM, GIM, SIM, AIM, NDM
Metalo-- lactamasas
IMP-1/16
IMP
fines de los 80 en Japn
24 enzimas tipo IMP
Asia, Europa y Amrica
BGNNF y enterobacterias
VIM-1/11
SPM-1
GIM-1
VIM
fines de los 90 en Italia
22 enzimas tipo VIM
Europa y Asia
BGNNF y enterobacterias
Integrn de clase 1
IMP, VIM, GIM-1, SIM-1
59 pb
5-CS
3-CS
Pc
intI1
qacE1
sul1
attI
Integrasa 1
R: sales de
amnio
sulfonamidas
Metalo--lactamasas
VIM-2 y VIM-11 en Pseudomonas aeruginosa Pagniez, G., M. Radice, A.
Cuirolo, O. Rodriguez, H. Rodriguez, C. Vay, A. Famiglietti, and G. Gutkind. 2006. Rev Argent
Microbiol 38:33-7.
VIM-11 en Pseudomonas aeruginosa Pastern F., Faccone D., Petroni A., Rapport
M., Galas M., VazquezM., Procopio A. 2005. AAC 49:474-5
Resistencia a carbapenemes
Algunos ejemplos
Klebsiella pneumoniae
Resistentes: AMP, AMS, CTN, CTX, CAZ,
FEP, MERO, AKN, Genta.
Sensible/ Intermedio: IMI
No extrapolar datos de IMI y MERO
Klebsiella pneumoniae
n=6, recuperadas de pacientes internados en el Hospital de Clnicas
Caracterizacin de -lactamasas
PCR +
CTX-M-grupo 2
SHV d
PER-2
8,2
8,2
7,6
7,6
5,4
5,4
Klebsiella pneumoniae
Estudio de protenas de membrana externa
kDa
kDa
45
45
31
31
Mer
MerRR
Mer
MerSS
mut
mutMer
MerRR
R MER, Sd IMI
Pseudomonas aeruginosa
Hospital de Clnicas Jos de San Martn (Bs.As) (n=91)
Perodo: 2003-2004
Susceptibilidad por difusin en medio slido
(CLSI): PIP, PTZ, CAZ, FEP, AZT, IMI, MER, AKN, GEN, CIP
Ensayo de inhibicin con EDTA 1 mol/disco
Deteccin de los genes codificantes
bla
IMP
bla
VIM
bla
SPM-1
bla
GIM-1
Bsqueda de carbapenemasas
deBsqueda
clase A de carbapenemasas
de clase A
PTZ
20
mm
EDTA
15
mm
EDTA
IMI
15 mm
15 mm
Bsqueda de
Enzimas tipo GES
EDTA
ED
TA
15
mm
CAZ
15
mm
Detecci
n molecular de MBLS
Deteccin
PCR simple: primers especficos de cada familia
Multiplex PCR: primers vim, imp, spm, gim y sim.
Resultados
(n=91)
R IMI : 5
R MER: 6
R IMI + MER: 80
S AZT: 14
bla VIM +: 10
VIM-2 like
Pc blaVIMcassette
intI1
5959-be
aac(6)-II
cassette
3-CS
5959-be
qacE1
sul1
attI
7
7
7
0.9
3 0.4 4
0.8
8 5
9
3
3
11
11
1.8
1.6
4
13 0.3 14 15 0.4 16
0.8
16
6
13
1.8
10
1.7
14
2.3
16
1.2
14
1.8
16
12
EMBL:AJ628983
6
7
8
5
3
1
2
9
10
4
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
Conclusiones
Pseudomonas aeruginosa
Hospital de Eva Pern, (Bs.As) (n=20)
Perodo: diciembre 2004 diciembre 2005
Resistencia a CAZ
Susceptibilidad por difusin en medio slido (CLSI): PIP, PTZ,
CAZ, FEP, AZT, IMI, MER, AKN, GEN, CIP
Deteccin de MBLs: EDTA 1 mol/disco
Deteccin de los genes codificantes
bla IMP
bla VIM
bla SPMSPM-1
bla GIMGIM-1
Localizacin de los genes
Tipificacin clonal: PFGE
Pseudomonas aeruginosa
(n=20), resistentes a CAZ
15/20
Antibiograma
5/20
Sensibles a
imipenem
Resistentes a
imipenem
(16mm<
(halo<13mm)
halo<21mm)
Screening de metalo carbapenemasas
EDTA (1mol)
20/20 Positivo
Sensibles a IMI
Resistentes a IMI
Deteccin de MBLs
EDTA
EDTA
isolate number
date of
hospital
clinical
(identification)
isolation
ward
specimen
PTZ
CAZ
FEP
AZT
IMI
MER
CIP
GEN
AKN
1. (M2179)
14/12/04
ICU
Af
23 S
22 S
6R
10 R
18 I
20 S/4 S
18 S/ 4 S
6R
6R
18 S
2. (H2515)
30/12/04
ICU
blood/cat
22 S
23 S
7R
9R
14 R
21 S/ 2 S
17 S/ 4S
6R
6R
17 S
3. (H86)
11/1/05
ICU
blood
23 S
22 S
6R
8R
17 I
20 S/ 2 S
16 S/ 4 S
6R
6R
15 I
4. (F742)
7/4/05
ICU
BAL
22 S
23 S
6R
9R
13 R
21 S/ 2 S
21 S/ 4 S
6R
6R
16 I
5. (F1135)
18/5/05
ICU
BAL
21 S
23 S
6R
8R
15 R
20 S/ 2 S
16 S/ 2 S
6R
6R
17 S
6. (M838)
16/5/05
GW
bone
22 S
23 S
6R
8R
17 I
21 S/ 2S
17 S/ 4 S
6R
6R
18 S
7. (M908)
26/5/05
ICU
cat
24 S
23 S
6R
8R
15 R
21 S/ 2 S
17 S/ 4 S
6R
6R
15 I
8. (F1280)
3/6/05
ICU
BAL
24 S
25 S
6R
10 R
15 R
21 S/ 2 S
21 S/ 4 S
6R
6R
18 S
9. (F1622)
11/7/05
ICU
BAL
23 S
24 S
6R
9R
16 I
21 S/ 2 S
20 S/ 4 S
6R
6R
15 I
10. (F1624)
11/7/05
ICU
BAL
22 S
19 S
6R
9R
16 I
18 S/ 2 S
19 S/ 2 S
6R
6R
17 S
11. (F1681)
15/7/05
ICU
BAL
23 S
23 S
6R
9R
18 I
21 S/ 2 S
19 S/ 4 S
6R
6R
17 S
12. (F1759)
23/7/05
ICU
BAL
22 S
18 S
6R
9R
15 R
18 S/ 4 S
17 S/ 8 I
6R
6R
17 S
13. (M1632)
9/9/05
ICU
Asf
24 S
25 S
6R
9R
17 I
6 R/ 64 R
6 R/ 128 R
6R
6R
16 I
14. (M2256)
11/12/05
ICU
Af
21 S
20 S
6R
8R
14 R
6 R/ 32 R
6 R/ 128 R
6R
6R
16 I
15. (M2257)
11/12/05
GW/S
St
21 S
21 S
6R
10 R
15 R
6 R/ 32 R
6 R/ 128R
6R
8R
18 S
16. (F3077)
11/12/05
GW
BAL
22 S
22 S
6R
10 R
13 R
7 R/ 32 R
6 R/ 128 R
6R
8R
17 S
17. (H2939)
30/12/05
GW
blood/cat
24 S
23 S
6R
9R
13 R
6 R/ 32 R
6 R/ 128 R
6R
6R
17 S
18. (M7)
2/1/06
GW/S
St
23 S
20 S
6R
8R
16 I
20 S/ 2 S
20 S/ 2 S
6R
6R
16 I
19. (M45)
6/1/06
ICU
Af
23 S
24 S
6R
9R
18 I
21 S/ 2 S
21 S/ 2 S
6R
6R
17 S
20. (Asp)
28/12/05
asp
21 S
21 S
6R
9R
15 R
16 S/ 2 S
19 S/ 2 S
6R
6R
18 S
Resultados:
n=20, 19 materiales clnicos, 1 aspirador
Resistentes: CAZ, FEP, CIP
Intermedio: AZT
Sensibles: PIP, PTZ
IMI, MER
Sensibilidad disminuida: (halo < 21mm): 15
Resistentes: 5
5-CS
intI1
3-CS
qacE1 sul1
Pc
attI
blaIMPIMP-13
aac(6)-II
ms de un 95% de identidad
F1135
M838
H86
F742
Asp
M2179
H2515
F3077
H2939
M7
M45
F1622
F1624
M908
F1280
F1681
F1759
M2256
M2257
M1632
Resultados
Deteccin de MBLs: + 20/20
IMP-13
Integron de clase 1 (+ AAC)
relacionadas clonalmente: 95% de similitud
19 aislamientos clnicos; 1 aislamiento ambiental
Niveles de expresin no
diferenciables
Promedios
AE IMI
AE CTN
AE IMI/AE CTN
Promedio R
2,70E-07
1,74E-07
1,54E+00
SD R
6,4E-08
3,1E-08
0,15
Promedio S
4,19E-07
2,20E-07
1,82E+00
SD S
2,0E-07
6,9E-08
0,38
46 kDa
Mutaciones en mexT
Mex EF-OprN
MexT +
OprD
Acinetobacter baumanii
Hospital de Clnicas Jos de San Martn (Bs.As)
Mtodo de Hodge
Inhibicin con EDTA 1 mol/disco
E-test IMI / IMI-EDTA
Multiplex MBLs
Multiplex OXA- carbapenemasas
RESULTADOS
n= 54 (32 (56%)de materiales respiratorios)
Porcentaje de R: PIP: 96%, PTZ: 84%, CAZ: 92%, CFP: 84%, IMI: 60%,
GEN: 92%, AKN: 84%, TMS: 92%, CIP: 96%.
Bibliografa consultada
Nordmann P, Poirel L (2002) Clin Microbiol Infect. 8:321-331.
Pagniez G, Radice M, Amoroso A, Famiglietti A, Gutkind G (2004)