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Gentica Molecular
GENTICA MOLECULAR
As descobertas genticas ou a aplicao dos conceitos genticos na nossa vida cotidiana
esto diariamente na mdia e algumas das descobertas mais marcantes tm ocorrido no campo da
gentica mdica. Atualmente os geneticistas compreendem a base metablica de centenas de
distrbios hereditrios, conhecem os genes defeituosos que resultam em vrias doenas
herdadas, estudam aspectos de nosso comportamento e de nossa personalidade que so
controlados por nossa constituio gentica, pesquisam o papel que os genes possam ter em
comportamentos tais como alcoolismo e sexualidade e j sabem h algum tempo que genes
defeituosos esto na origem de alguns distrbios mentais. Hoje em dia, de posse de poderosos
instrumentos de anlise gentica molecular os pesquisadores esto voltados para identificar os
genes que, quando defeituosos, tornam os indivduos mais suscetveis a estas doenas.
A gentica molecular tambm est fornecendo novos meios de tratar doenas. Durante
dcadas, diabticos receberam insulina obtida de animais, geralmente porcos. Hoje, a insulina
produzida em bactrias que possuem o gene da insulina humana. O hormnio do crescimento
humano, antes isolado de cadveres, tambm produzido em bactrias e utilizado para tratar
crianas que no produzem quantidades suficientes do hormnio. Muitas outras protenas de
importncia mdica, hoje, so rotineiramente produzidas em bactrias que foram transformadas
com o gene humano apropriado
As pesquisas genticas tambm so realizadas no campo da nutrio e tcnicas
moleculares so utilizadas para acentuar a qualidade e a produo de alimentos (alimentos
geneticamente modificados).
As descobertas das pesquisas genticas iniciaram inmeros aspectos comerciais na
indstria de biotecnologia. As empresas que fabricam produtos farmacuticos e testes
diagnsticos, ou que fornecem servios tais, como perfis de DNA, tm contribudo para o
crescimento econmico mundial.
Algumas formas de cncer so familiais ou hereditrias e outras ocorrem esporadicamente
entre todos os membros de uma populao. Entretanto, todos os cnceres so doenas genticas
no sentido de que so causadas por mudanas na informao gentica que transmitida para as
clulas filhas. A evidncia disponvel indica que todos os cnceres resultam do acmulo de danos
aos genes que controlam ou influenciam a multiplicao celular, a diferenciao celular e os
processos correlatos. Embora existam centenas de tipos diferentes de cncer, todos tm uma
coisa em comum: a perda do controle normal da multiplicao celular. Os genes mutantes que
causam um risco aumentado de cncer, esto sendo identificados e estudados intensamente.
medida que aprendemos mais sobre o funcionamento destes genes em situaes normais e
anormais, chegamos mais perto de tratamentos teraputicos eficazes.
A cincia forense tem utilizado as tcnicas de gentica molecular em assuntos legais. O
DNA isolado de uma pequena amostra de tecido, s vezes de um s espermatozoide, leuccito ou
folculo piloso, recuperada da cena de um crime, pode ser submetida a uma detalhada anlise
molecular e os resultados podem ser utilizados para identificar ou excluir o suspeito.
A terapia gnica (introduo de genes normais nas clulas de pacientes com genes
defeituosos) oferece grandes promessas para o tratamento eficaz de doenas herdadas. A terapia
gnica tem sido utilizada em conjunto com outros tratamentos, porm os genes introduzidos foram
expressos por apenas um curto perodo de tempo. Embora existam motivos para se esperar que a
terapia gnica seja finalmente bem-sucedida no tratamento de distrbios genticos, os resultados
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atuais indicam que so necessrias mais pesquisas para se determinar como e porque os genes
so desligados logo aps entrarem em novas clulas hospedeiras.
O Projeto Genoma Humano tem como objetivos mapear e sequenciar toda o material
gentico de humanos e de alguns outros organismos geneticamente importantes. O conhecimento
da estrutura de toda a informao gentica dos humanos e de outros organismos ter profundos
efeitos na sociedade. Esta informao ter efeitos acentuadas na capacidade dos cientistas de
diagnosticar e criar tratamentos eficazes para as doenas humanas. Assim, esta informao
dever ter impacto positivo na sade humana. Entretanto, tambm criar complexos problemas
morais, ticos e legais que devero ser enfrentados pelas pessoas.
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UNIDADE 1
COMPOSIO QUMICA E ESTRUTURA DO MATERIAL GENTICO
Em 1968, Johann Friedrich Miescher isolou uma substncia cida tratando, clulas do pus
de bandagens usadas para cobrir feridas humanas, com pepsina, que uma enzima proteoltica
que pode ser isolada do estmago de porcos. Essa substncia foi denominada de nuclena;
apresentava grandes quantidades de nitrognio e fsforo e, na poca, a sua importncia no pode
ser avaliada. A existncia de cadeias polinucleotdicas, os principais componentes do material
cido, s foi documentada na dcada de 1940. O papel dos cidos nucleicos na estocagem e
transmisso de informaes genticas s foi estabelecido em 1944 e a estrutura da dupla hlice
s foi descoberta em 1953 e muitos geneticistas estavam relutantes em aceitar a ideia de que os
cidos nucleicos, e no as protenas, tinham a informao gentica, pois os cidos nucleicos
exibiam menos variabilidade estrutural que as protenas.
O DNA formado de monmeros denominados de nucleotdeos. Cada nucleotdeo
formado por uma base nitrogenada, um acar e um resduo de cido fosfrico ligados de forma
covalente. As bases nitrogenadas podem ser de dois tipos: pirimidinas e purinas (Figura 1). As
pirimidinas: citosina (C), timina (T) e uracila (U), apresentam um anel aromtico e as purinas:
adenina (A) e guanina (G), so compostas de dois anis aromticos. O acar uma pentose, a
2-desoxirribose que estabelece uma ligao glicosdica entre o seu carbono C-1 e o nitrognio
N-1 das pirimidinas ou o nitrognio N-9 das purinas, portanto uma ligao N-glicosdica. O cido
fosfrico se liga ao carbono C-5 da pentose atravs de uma ligao ster. O composto formado
apenas por uma das bases nitrogenadas e a pentose, ligados de forma covalente, denominado
de nucleosdeo (Figura 2).
Figura 1 (A) Bases nitrogenadas, (B) acar e (C) grupamento fosfato.
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Figura 2 Estrutura de nucleotdeo e nucleosdeo. B = Base nitrogenada
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Figura 3 Filamento polinucleotdico.
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As molculas de DNA, sob condies fisiolgicas (soluo aquosa com baixa concentrao
de sais), existem na conformao B (DNA B) apresentando 0,20 nm de dimetro. Entretanto como
elas exibem uma considervel flexibilidade conformacional, a sua estrutura pode se modificar em
funo da natureza das molculas com as quais elas interagem. O DNA A existe em altas
concentraes de sais ou em estado parcialmente desidratado, se apresenta como uma hlice
dextrgira com 11 pares de nucleotdeos por volta e uma dupla hlice mais curta e grossa com
0,23 nm de dimetro. O DNA Z ocorre em duplas hlices levgiras, onde os pares de bases C:G e
G:C se alternam, apresentam 12 pares de bases por volta e um dimetro de 0,18 nm. A
ocorrncia do DNA Z em clulas vivas ainda incerta (Figura 6).
Figura 6 - Molculas de DNA nas conformaes A, B e Z.
Fonte: www.cbs.dtu.dk/staff/dave/roanoke/a_b_z_dna.gif
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UNIDADE 2
REPLICAO DO DNA
Todos os organismos devem duplicar o seu DNA com extrema preciso e em altas taxas
(at mil nucleotdeos por segundo), antes de cada diviso celular.
O DNA que existe na natureza pode se apresentar de diversas formas, tais como: fitas
simples e duplas, e os dois podem existir tanto na forma linear como na circular. Como muitos
DNAs se apresentam como dupla hlice, pode-se apresentar algumas das caractersticas gerais
da replicao que se aplicam para DNAs lineares e circulares. Descreveremos o processo de
replicao em procariontes e, mais especificamente, em Escherichia coli, organismo no qual ele
foi mais bem estudado.
Todas as vezes que uma clula se divide para produzir clulas filhas, o DNA precisa se
duplicar ou replicar dando origem a uma nova molcula de DNA com a mesma sequncia de
bases existente na original, assegurando, assim, que as funes que executam sero
perpetuadas na sua descendncia.
A replicao do DNA envolve a separao das duas fitas parentais e a produo de duas
novas fitas, tendo as parentais como molde. Cada nova molcula de DNA contm uma fita
parental e uma fita recm-sintetizada, caracterizando a replicao semiconservativa (Figura 7).
O processo de replicao complexo e envolve a participao de vrias protenas e enzimas que
atuam de forma coordenada para garantir uma fidelidade considervel.
Figura 7 Replicao semiconservativa da molcula de DNA.
A separao dos dois filamentos de DNA realizada pela enzima DNA helicase. Esta
enzima desenrola as duas fitas que compem a dupla-hlice, quebrando as pontes de hidrognio
estabelecidas entre as bases complementares de cada uma das fitas.
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Figura 8 A replicao semiconservativa do DNA
Fonte: www.enq.ufsc.br/.../genetica/DNA.html
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Figura 9 Replicao em procariontes (A) e eucariontes (B).
Fonte: Champe, P.C.; Harvey, R.A.; Ferrier, D.R. modificado por Pessa, H.L.F.
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UNIDADE 3
TRANSCRIO DA INFORMAO GENTICA
Embora a maioria dos genes codifique protenas, os produtos finais de alguns genes so
molculas de RNA. Vrias destas molculas de RNA tm papis essenciais na sntese de
protenas. Uma vez que os genes controlam as estruturas dos RNAs e das protenas, nos
questionamos como as sequncias de pares de nucleotdeos nas molculas de DNA especificam
as sequncias de nucleotdeos no RNA e aminocidos em molculas proteicas.
A transcrio a sntese de uma molcula de cido ribonucleico (RNA) complementar a
um filamento molde de cido desoxirribonucleico (DNA). Os RNAs produzidos nas clulas
procariticas e eucariticas so molculas de uma nica fita composta de nucleotdeos de
adenina, guanina, citosina e uracila unidos por ligaes fosfodister que apresentam estruturas
secundrias, incluindo regies de dupla fita intramoleculares que so importantes para suas
funes.
As enzimas responsveis pela sntese dos RNAs so denominadas de RNA polimerases.
Todos os RNAs so sintetizados na direo 5 para 3 e todas as RNA polimerases so capazes
de iniciar a sntese de RNA. Nas clulas procariticas existe apenas um tipo de RNA polimerase e
a mais estudada a de E. coli que composta de duas subunidades , uma subunidade e outra
, que interagem entre si para formar um complexo. Quando o fator (sigma) se junta ao
complexo, a polimerase ganha especificidade e capaz de se ligar aos stios corretos de iniciao
no DNA e comear a transcrio. As clulas eucariticas possuem trs RNA polimerases: I
(sintetiza os RNAr), II (sintetizam os RNAm) e a III (sintetizam pequenos RNAs incluindo os RNAt).
As trs classes de molculas de RNA so encontradas em clulas procariticas e
eucariticas: RNA ribossmico (RNAr), RNA de transferncia (RNAt) e RNA mensageiro
(RNAm).
Os RNAm representam a classe mais heterognea de RNAs encontrada nas clulas,
variando em tamanho de 500 a mais de 6000 nucleotdeos, eles carregam a informao gentica,
definindo a sequncia de todas as protenas da clula. Aps a sua sntese, as extremidades dos
RNAm eucariticos so modificadas de maneira especfica. Todos os RNAm eucariticos
possuem um cap de nucleotdeo guanina metilada na sua extremidade 5, unido por uma ligao
trifosfato 5- 5. Na extremidade 3 ocorre a adio de vrios (30-100) resduos de timina formando
uma cauda de poli A (Figura 10).
Figura 10 Estrutura do RNA mensageiro (RNAm).
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Figura 11 Estrutura do RNA de transferncia (RNAt) (A) plana (B) tridimensional.
As molculas de RNAr dos procariontes so de trs tamanhos diferentes (16S, 23S e 5S) e
a dos eucariontes so de quatro tipos (18S, 28S, 5,8S e 5S) que realiza a sntese de protenas.
Os RNAr eucariticos so sintetizados como um nico transcrito com tamanho de 45 S que
processado em RNAr 28S, 18S, 5,8S e 5S. Os RNAs 28S, 5,8S e 5S se associam a protenas
ribossmicas para formar a subunidade maior do ribossomo e o RNAr 18S se associa com outras
protenas especficas para formar a subunidade menor do ribossomo e estas subunidades
interagem para formar um ribossomo funcional (Figura 12).
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Figura 12 Composio macromolecular dos ribossomos (A) procariticos e (B) eucariticos.
O processo de transcrio dos RNAs pode ser dividido em trs fases: iniciao,
alongamento e terminao (Figura 13). Durante a iniciao ocorre a ligao de uma RNA
polimerase a regio no DNA que determina que aquele gene especificamente ser transcrito, a
regio do promotor. As sequncias do promotor reconhecidas pela RNA polimerase so: na
posio -10 a Caixa de Pribnow e a sequncia -35 (procariontes) e na posio -25 a Caixa de
Hogness e a Caixa CAAT (eucariontes) (Figura 14). Durante o alongamento, a RNA polimerase
comea a sintetizar um RNA complementar ao molde de DNA e o fator sigma liberado. Quando
um sinal de terminao atingido ocorre a liberao do RNA e da enzima que poder catalizar
outros processos de transcrio. Alternativamente uma protena adicional, o fator r pode ser
necessrio para a liberao do RNA transcrito.
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Figura 13 Transcrio da informao gentica.
Fonte: Champe, P.C.; Harvey, R.A.; Ferrier, D.R. modificado por Pessa, H.L.F.
Figura 14 Regies promotoras de (A) procariontes e (B) eucariontes.
Fonte: Champe, P.C.; Harvey, R.A.; Ferrier, D.R. modificado por Pessa, H.L.F.
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UNIDADE 4
TRADUO DA INFORMAO GENTICA
A sntese de protenas ou traduo corresponde etapa final da transferncia de
informao gentica, armazenada no DNA, para as molculas de protenas, que so os principais
componentes estruturais e funcionais das clulas vivas. Durante a traduo essa informao,
expressa em um RNA, utilizada para comandar a sntese de uma protena. O processo de
traduo envolve trs componentes principais: o RNA mensageiro (RNAm) que contm a
informao necessria para direcionar a sntese de protenas, o RNA de transferncia (RNAt) que
carregam os aminocidos que sero incorporados protena e os ribossomos que renem o
RNAm e o RNAt, de modo a permitir que o aminocido correto seja incorporado protena. A
traduo comea prximo extremidade 5, que corresponde ao terminal amino da protena e
prossegue em direo extremidade 3 do RNA, que corresponde ao terminal carboxila da
protena.
A mensagem gentica est contida em um cdigo triplo, no sobreposto, sem vrgulas,
degenerado e universal (Figura 15). Somente uma combinao das quatro bases existentes no
RNA (A, T, C e U) trs a trs pode gerar o nmero de combinaes ou cdons (64) necessrios
para codificar cada um dos 20 aminocidos que podem ocorrer nas protenas. Nenhuma base
compartilhada entre cdons consecutivos. O ribossomo move-se ao longo de trs bases por vez e
como no existe qualquer base interveniente entre os cdons, o cdigo denominado sem
vrgulas. O cdigo degenerado, porque mais de um cdon podem codificar o mesmo aminocido
e universal, porque o mesmo seja em bactrias ou no homem. Trs cdons (UAA, UAG e UGA)
no especificam aminocido e so utilizados como sinais para interromper a sntese de uma
protena. O cdon AUG, que especifica somente a metionina, tem um duplo papel: ele codifica a
metionina em qualquer lugar em que ele se encontre no RNA e tambm marca o incio da sntese
proteica.
Figura 15 O cdigo gentico
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movido um cdon abaixo no RNAm e a cadeia peptidca nascente no stio A se move para o stio
P. Todo o processo recomea para a adio do prximo aminocido. Esta fase idntica tanto em
clulas procariticas e eucariticas mas os fatores de alongamento so diferentes (Figura 17).
Figura 17 - Esquema demonstrando a etapa de alongamento da sntese de protenas.
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UNIDADE 5
REGULAO DA EXPRESSO GNICA EM PROCARIONTES
Alguns produtos gnicos que participam das funes de manuteno celular, tais como:
transcrio, traduo e produo de energia, so componentes essenciais de quase todas as
clulas vivas. Os genes que codificam esses produtos esto continuamente sendo expressos na
maioria das clulas e so denominados de genes constitutivos. Outros produtos gnicos so
necessrios para o crescimento celular somente sob certas condies ambientais. A existncia de
mecanismos regulatrios que possibilitam a sntese de tais produtos gnicos, apenas quando e
onde so necessrios, faz com que esses organismos apresentem uma vantagem seletiva em
relao aos organismos que no os possuem.
A expresso gnica em procariontes regulada em vrios nveis diferentes: transcrio,
processamento do RNAm, renovao do RNAm, traduo e ps-traduo. Entretanto, os
mecanismos regulatrios com os maiores efeitos no fentipo atuam no nvel da transcrio.
A regulao da expresso gnica, induo ou represso, pode ser feita por mecanismos
de controle tanto positivos como negativos. Ambos os mecanismos envolvem a participao de
genes reguladores, que codificam produtos que regulam a expresso de outros genes. Os
produtos do gene regulador so chamados de ativadores, pois ativam a expresso gnica e
repressores, uma vez que reprimem a expresso gnica. O produto do gene regulador atua
ligando-se a um stio de ligao da protena reguladora (RBS) ou operador adjacente ao
promotor do(s) gene(s) estrutural(ais) que codificam enzimas ou protenas estruturais. A ligao
da protena reguladora ao RBS depende da presena ou ausncia de molculas efetoras na
clula que so em geral molculas pequenas, tais como: aminocidos, acares e metablitos
semelhantes. As molculas efetoras envolvidas na induo da expresso gnica, so chamadas
de indutores e as envolvidas na represso de co-repressores.
As molculas efetoras ligam-se a produtos do gene regulador e causam mudanas na
estrutura tridimensional destas protenas, denominadas de transies alostricas, resultando
frequentemente em alteraes na sua atividade. No caso de ativadores e repressores, as
transies alostricas alteram a sua habilidade de se ligar aos RBS adjacentes aos promotores
dos genes estruturais que eles controlam.
O modelo do peron foi desenvolvido para explicar a regulao dos genes que codificam
as enzimas necessrias para o uso de lactose em E. coli, onde a transcrio de um conjunto de
genes estruturais contguos regulados por dois elementos controladores. Um destes elementos, o
gene regulador, codifica um repressor, que, sob condies apropriadas, se liga ao segundo
elemento, o operador. O operador sempre contguo ao(s) gene(s) estrutural(ais) cuja expresso
ele regula. Quando o repressor est ligado ao operador, ele impede estericamente que a RNA
polimerase transcreva os genes estruturais do peron. A transcrio iniciada em promotores que
precedem os genes estruturais na extremidade 5 e so contguos regies operadoras. Sendo
assim, as regies operadoras esto geralmente situadas entre os promotores e os genes
estruturais que eles regulam (Figura 19).
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Figura 19 Componentes do operon. SG1 = lac Z, SG2 = lac Y e SG3 = lac A.
O peron lac um peron indutvel composto por um promotor (P), um operador (O) e trs
genes estruturais, lacZ, lacY e lacA que codificam as enzimas -galactosidase, -galactosdeo
permease e -galactosdeo transacetilase, respectivamente. Os genes estruturais s se
expressam na presena de lactose. O gene regulador I codifica um repressor de 360 aminocidos,
entretanto a sua forma ativa um tetrmero contendo quatro formas ativas do produto gnico I.
Na ausncia do indutor, o repressor liga-se sequncia do operador, impedindo que a RNA
polimerase catalise a transcrio dos genes estruturais. Algumas poucas molculas dos produtos
gnicos so sintetizadas sem que tenha havido a induo do peron, o que essencial, uma vez
que, quem induz o peron a alolactose que produzida pela -galactosidase a partir da lactose.
A alolactose se liga ao repressor liberando o operador e induzindo a transcrio dos genes lacZ,
lacY e lacA (Figuras 20 e 21).
Nos procariontes e eucariontes a transcrio o evento primrio do processo de
transcrio gnica assim como o nvel mais fundamental para a regulao gnica. A transcrio
de genes eucariticos iniciada no promotor e necessita de vrias protenas acessrias ou
fatores de transcrio basal. Cada uma destas protenas liga-se a uma sequncia no promotor
para facilitar o alinhamento da RNA polimerase com o filamento molde de DNA.
A transcrio dos genes eucariticos tambm controlada por uma variedade de fatores
especiais de transcrio, tais como os envolvidos na regulao do calor, luz e genes indutveis
por hormnios. Estes fatores ligam-se a elementos de resposta, ou mais geralmente, a
sequncias chamadas de acentuadores situados na vizinhana do gene. Os fatores especiais de
transcrio que se ligam aos acentuadores podem interagir com os fatores de transcrio basal e
com a RNA polimerase regulando a atividade transcricional de um gene.
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Figura 20 Regulao do operon por induo. Polipeptdeo 1 = - galactosidase, polipeptdeo 2 =
galactosdeo permease e polipeptdeo 3 = galactosdeo transacetilase.
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2. Gentica Molecular
UNIDADE 6
MUTAO GNICA
A mutao a fonte bsica de toda variabilidade gentica; e sobre ela que a evoluo
atua. A recombinao apenas rearranja essa variabilidade gentica em combinaes novas e a
seleo natural ou artificial simplesmente preserva as combinaes mais bem adaptadas s
condies ambientais existentes. Sem a mutao, todos os genes existiriam apenas numa forma.
Os alelos no existiriam e, portanto, a anlise gentica no seria possvel. O mais importante, os
organismos no seriam capazes de evoluir e se adaptar s mudanas ambientais. A mutao,
portanto, um fenmeno importante. Algum nvel de mutao essencial para promover uma
variabilidade gentica, permitindo que os organismos se adaptem aos novos ambientes. Ao
mesmo tempo, se as mutaes ocorressem muito frequentemente, elas desestabilizariam
totalmente a transmisso da informao gentica de uma gerao para a outra.
Muitas mutaes envolvem mudanas num nico par de bases, a substituio de um par
de bases por outro ou a duplicao ou deleo de um nico par de bases. Tais mutaes so
referidas como mutaes de ponto.
As mutaes podem ser espontneas quando ocorrem sem uma causa conhecida e so
resultantes de erros metablicos herdados como os que ocorrem durante a replicao do DNA. As
mutaes induzidas so aquelas que resultam da exposio de organismos a agentes
mutagnicos, tais como: a radiao ionizante, a luz ultravioleta ou os vrios agentes qumicos que
reagem com o material gentico.
As mutaes espontneas ocorrem raramente, embora as frequncias observadas variem
de gene para gene e de organismo para organismo. Em procariontes, a frequncia de mutao
espontnea est entre 10-8 e 10-9 mutaes detectveis por par de nucleotdeos por gerao,
enquanto que, em eucariontes, esta estimativa de 10-7 a 10-9. O tratamento com agentes
mutagnicos pode aumentar a frequncia de mutao em vrias ordens de magnitude. As
mutaes devem causar alguma modificao fenotpica detectvel para que a sua presena seja
reconhecida. Os efeitos das mutaes no fentipo variam desde alteraes to pequenas que s
podem ser detectadas por tcnicas genticas ou bioqumicas especiais, passando por
modificaes grosseiras na morfologia at as letais.
As mutaes podem ser recessivas ou dominantes e podem ocorrer em qualquer clula
e em qualquer estgio do ciclo celular. O efeito imediato da mutao a sua capacidade de
produzir uma mudana fenotpica e so determinadas por sua dominncia, pelo tipo de clula em
que ocorre e pela poca em que ocorre em relao ao ciclo de vida do organismo. Na mutao
somtica s ser perpetuada nas clulas somticas que descendem da clula original na qual a
mutao ocorreu. Se as mutaes dominantes ocorrem nas clulas germinativas, os seus efeitos
podem ser expressos na prognie imediatamente. Se as mutaes so recessivas, seus efeitos
so frequentemente obscurecidos no diploide. As mutaes germinativas, assim como as
mutaes somticas, podem ocorrer em qualquer estgio no ciclo reprodutivo do organismo,
mas so mais comuns em alguns estgios do que em outros.
2. Gentica Molecular
denominadas de modificaes tautomricas (Figura 22). As formas mais estveis das bases
nitrogenadas so mais comuns e a timina sempre se pareia com a adenina e a citosina com a
guanina. As formas ceto mais estveis da timina e da guanina e as formas amino da adenina e da
citosina podem raramente sofrer modificaes tautomricas para as formas enol e imino menos
estveis, respectivamente. Espera-se que as bases em suas formas tautomricas menos estveis
existam apenas por curtos perodos de tempo. Entretanto, se a base estiver na sua forma rara no
momento da incorporao em uma cadeia de DNA nascente, o pareamento pode ser modificado e
gerar pares adenina-citosina e timina-guanina. Essas mutaes resultantes de modificaes nas
bases do DNA envolvem a substituio de uma purina em um filamento de DNA por outra purina e
a substituio de uma pirimidina no filamento complementar por outra pirimidina. Essas
substituies de pares de bases so chamadas de transies. As substituies de um purina por
uma pirimidina e vice-versa so chamadas de transverses (Figura 23). Muitos compostos
qumicos tais como: bases anlogas, agentes desaminantes, agentes alquilantes e agentes
hidroxilantes so capazes de aumentar a frequncia de pareamento errado gerando transies e
transverses.
Figura 22 Formas tautomricas das quatro bases comuns no DNA.
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2. Gentica Molecular
Figura 23 - Transies e transverses. T = timina, C = citosina, G = guanina e A = adenina.
2. Gentica Molecular
O reparo de dmeros de timina por fotorreativao realizado por uma enzima ativada
por luz chamada de fotoliase. A DNA fotoliase liga-se a dmeros de timina no DNA e usa energia
da luz azul para clivar as ligaes covalentes reparando a regio lesada do DNA (Figura 25).
No reparo de dmeros de timina por exciso, uma endonuclease de reparo ou um
complexo multienzimtico reconhece, se liga e retira a(s) base(s) danificadas do DNA. Uma DNA
polimerase preenche o espao usando o filamento de DNA complementar no danificado como
molde. A enzima DNA liga-se a ela nas quebras deixadas pela DNA polimerase para completar o
processo de reparo (Figura 26).
Figura 25 Reparo de dmeros de timina por
fotorreativao.
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2. Gentica Molecular
UNIDADE 7
ESTRUTURA DA CROMATINA E DOS CROMOSSOMOS
Os genomas eucariticos apresentam nveis de complexidade que no so encontrados
em procariontes. O genoma da bactria E. coli com cerca de 1100 m, em seu estado funcional,
est altamente condensado e denominado de genoma condensado. A molcula de DNA
circular organizada em 50 a 100 domnios ou alas, cada um deles negativamente
superelicoidizado de forma independente (Figura 28). Tanto o RNA quanto a protena so
componentes do genoma dobrado e a retirada do RNA, atravs do tratamento do cromossomo
com RNase (enzima que degrada RNA), ir desdobrar o genoma eliminando parcialmente a
organizao da molcula em alas. A maioria dos eucariontes diploide e, embora tenham
apenas cerca de 2 a 25 vezes mais genes do que a E. coli, que possui 2500 a 3500 genes, eles
tm muito mais DNA. A maior parte deste DNA no contm genes, pelo menos no genes
codificantes de protenas ou molculas de DNA.
Figura 28 Estrutura do cromossomo de E. coli.
2. Gentica Molecular
Quando a cromatina isolada examinada pela microscopia eletrnica, observa-se que ela
consiste em uma srie de contas elipsoidais unidas por finos filamentos. Esta estrutura epipsoidal
ou subunidade cromossmica chamada de nucleossomo ( = 100 ) e os finos filamentos ( =
20 ) so de DNA ligador (Figura 29). Sua estrutura, invariante em todos os eucariontes, consiste
em 146 pares de nucleotdeos de DNA e duas molculas de cada das histonas H2a, H2b, H3 e
H4. O octmero de histonas forma uma partcula central ao redor do qual o DNA, 146 pb d uma
quase duas voltas ao seu redor. A subunidade completa de cromatina consiste de; nucleossomo,
DNA ligador, uma mdia de uma molcula de histona H1 e negativamente protenas
cromossmicas no-histona associadas. O tamanho do DNA ligador varia entre os tipos celulares
e entre as espcies. In vivo, os nucleossomos provavelmente esto justapostos uns sobre os
outros, sem regies ligadoras detectveis, formando a fibra nucleossmica. Se esta fibra
enrolada em uma super-hlice h o aparecimento de uma estrutura tipo solenoide ( = 300 )
denominada de fibra de cromatina (Figura 30). As eletromicrografias de cromossomos
metafsicos isolados dos quais as histonas foram removidas, revelam um arcabouo ou
esqueleto, composto de protenas cromossmicas no-histonas, que rodeado por um enorme
halo de DNA. Entretanto, necessrio pelo menos um nvel maior de compactao para converter
os solenoides na estrutura tridimensional que chamamos de cromossomo ( = 700 ). Muitos
estudos citogenticos mostram que os cromossomos parecem estar helicoidizados e para tanto a
melhor evidncia sugere que os solenoides se dispem em alas ligadas ao arcabouo central
que tambm tm uma forma de espiral formando uma grande super-hlice (Figura 31). Essas
alas parecem se ligar em regies especiais ao longo do DNA chamadas regies de ligao ao
arcabouo (SARs).
Figura 29 estrutura do nucleossomo.
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Figura 30 Estrutura do solenide.
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UNIDADE 8
O CICLO CELULAR
Para que um organismo cresa, seja ele unicelular ou multicelular, a sua massa celular
deve aumentar, deve haver uma duplicao do material gentico e deve ocorrer um processo de
multiplicao o que assegura que cada clula filha receba da clula me um complemento igual
de material gentico para garantir a sua perpetuao. Esta sucesso de eventos que ocorre
durante a vida da clula denominada de ciclo celular.
Aps a multiplicao, as clulas crescem e aumentam a sua massa celular em uma fase
denominada de G1 (gap = intervalo) onde ocorrem atividades metablicas associadas ao
crescimento e preparao do DNA para replicao. A fase subsequente denominada de S
(sntese) onde o material gentico de cada cromossomo replicado ficando cada cromossomo
com duas cromtides irms ligadas pelo centrmero. Em seguida, a clula entra em outra fase de
crescimento, G2, onde ocorrem os preparativos para a multiplicao mittica, denominada de M,
que a parte final do ciclo celular. As fases G1, S e G2 fazem parte da interfase (Figura 34).
Figura 34 - O Ciclo celular eucartico.
2. Gentica Molecular
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para polos opostos da clula e uma rede de microtbulos interconecta estes plos, formando o
fuso mittico. O envoltrio nuclear e o nuclolo se fragmentam e se dispersam no citoplasma.
Cada uma das cromtides irms se associam a um polo diferente do fuso apesar dos centrmeros
ainda permanecerem juntos.
Na metfase, os cromossomos condensados, compostos por cromtides irms se
localizam no centro da clula ou placa equatorial, entre os dois plos. As cromtides metafsias
so altamente helicoidizadas e distintas o que facilita as contagens cromossmicas precisas
assim como anlises estruturais.
Na anfase, as cromtides que compem cada cromossomo se separam e se movem
para polos opostos da clula, devido ao encurtamento dos microtbulos. Cada cromtide mantem
o seu centrmero e passa a ser considerada como um cromossomo. As cromtides se alongam
devido a uma diminuio da helicoidizao e se movem para os polos do fuso.
Na telfase, o movimento cromossmico se completa e os microtbulos se desmontam. O
envoltrio nuclear reconstitudo ao redor de cada ncleo filho, o nuclolo comea a reaparecer,
os cromossomos ficam mais distendidos e a mitose termina. A mitose garante que cada clula
filha tenha a mesma informao gentica que a clula me.
A citocinese divide o citoplasma para as duas clulas filhas. As clulas animais que
apresentam acamadas externas flexveis fazem isso atravs de uma constrio mediana que
depois separa as duas clulas. A superfcie ao redor da regio equatorial da clula migra para o
centro e fraciona a clula em duas partes. As clulas vegetais com suas rgidas paredes celulares
formam uma estrutura denominada placa celular entre as clulas filhas sobre a qual paredes de
celulose so depositadas de ambos os lados.
O processo de mitose geralmente requer algumas horas ou vrios dias, dependendo do
tipo de organismo e das condies ambientais. Podem ocorrer variaes no processo descrito em
fungos e eucariontes unicelulares.
A meiose um processo no qual o nmero cromossmico diploide (2n) reduzido
metade no estado haploide (n) durante a formao dos gametas. Nas clulas diploides, cada
cromossomo tem um homlogo e em cada par de homlogos um cromossomo contribuio do
espermatozoide (origem paterna) e o outro contribuio do ovcito (origem materna). Ao final da
meiose, cada clula tem um membro de um par de homlogos e , portanto, haploide. A meiose
garante um nmero cromossmico constante de gerao a gerao.
A meiose apresenta duas divises sucessivas. A primeira (meiose I), chamada de diviso
reducional reduz o nmero de cromossomos pela metade e a segunda (meiose II) denominada
de diviso equacional separa cromtides irms que iro para quatro ncleos diferentes. Sendo
assim, quatro ncleos haploides resultam da diviso meitica de um ncleo diploide. As principais
diferenas entre a meiose nos animais e nas plantas envolvem os processos de formao do fuso
e a citocinese.
O primeiro estgio da meiose uma longa e complexa prfase constituda de cinco
subestgios sequenciais: leptteno, zigteno, paquteno, diplteno e diacinese.
No leptteno, regies cromossmicas denominadas de crommeros, onde h maior
condensao, se tornam visveis ao microscpio ptico, esses se espessam e se unem para
formar estruturas filamentares. Os telmeros dos cromossomos esto ligados ao envoltrio
nuclear e esta ligao parece ter um papel importante no pareamento subsequente dos
cromossomos homlogos.
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Figura 36 Estgios da meiose emna planta Lilium regale.
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