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INTRODUCCION
Se define como microscopio cualquiera de los distintos tipos de instrumentos que se utilizan para obtener una imagen aumentada
de objetos minsculos o detalles muy pequeos de los mismos. (J. Navarro, 2011)
TIPOS DE MICROSCOPIOS
Microscopio compuesto
Microscopio ptico
Microscopio digital
Microscopio fluorescente
Microscopio electrnico
Microscopio de diseccin
material con que estn tallados las lentes (de fluorita o semiapocromticos) o la calidad que tendrn las imgenes, al anularse en
la construccin de los objetivos, algunas aberraciones de las lentes (acromticos, apocromticos, aplanticos etc.)
Acromticos. Estos objetivos corrigen los rayos luminosos azules y rojos hacindolos coincidir en un solo plano focal. En
tanto que los otros rayos coloreados se forman en otro plano focal generando una imagen cuyos bordes se observan
levemente difusos (espectro luminoso secundario). Los objetivos de los microscopios de estudiante son acromticos.
Semiapocromticos. Se les conoce tambin como objetivos de fluorita, corrigen el espectro secundario dando como
resultado imgenes de bordes ms ntidos.
Por la alta capacidad que tienen para transmitir las radiaciones luminosas de onda corta, se les considera como los objetivos
ideales para microscopa de fluorescencia.
Apocromticos. En estos objetivos se hacen coincidir en un solo plano los rayos luminosos azules, rojos y verdes,
obteniendo as una imagen de bordes sumamente ntidos, pero la correccin de esta aberracin trae consigo la acentuacin
de otra, que es la de curvatura de campo, pues la superficie focal de la imagen es ligeramente curva, dando como resultado
que, al observar la imagen y tratar de enfocarla en la zona central del campo microscpico se desenfoca la zona perifrica y
viceversa.
Planapocromticos. Son los objetivos en los cuales se han corregido la mayor cantidad de aberraciones como la
cromtica, curvatura de campo, de esfericidad y de astigmatismo; por lo tanto se obtienen imgenes sumamente ntidas y el
campo microscpico aparece totalmente plano, enfocado en toda su extensin. Son los objetivos que generan imgenes con
mejor resolucin, es preferible usarlos cuando se desea obtener imgenes fotogrficas ( fotomicrografa).
La primera lente se denomina de campo o frontal, est situada en la parte anterior del ocular (fig. micros.8) y, es la encargada de
recoger y ampliar la imagen generada por el sistema de lentes del objetivo. La lente posterior, en contacto estrecho con el ojo del
observador, se denomina lente ocular y es la responsable de aumentar nuevamente la imagen y orientarla hacia el ojo del
observador
Los oculares se clasifican, dependiendo de la disposicin de las lentes y del diafragma, dentro de la camiseta metlica que los
contienen, en:
Oculares negativos de Hygens. Estn constituidos por dos lentes plano
convexos, con la superficie convexa dirigida hacia abajo. Entre ambos se sita
un diafragma anular, localizado en el plano focal de las lentes. En este
diafragma se puede adherir un puntero o sealador que suele ser elaborado por
una pequea porcin de una pestaa o pelo.
Oculares positivos o de Ramsden. Las lentes plano convexas estn dispuestas
con las superficies curvas dirigidas hacia adentro. El diafragma est situado por
debajo de la lente de campo o frontal; en el plano donde se forma la imagen
formada por el objetivo. Adems de estos oculares, existen otros tipos como los
de campo de visin amplia; aquellos acondicionados para poder observar con los anteojos puestos y otros oculares que
generalmente que se usan en los microscopios binoculares, denominados oculares de compensacin. stos consisten en que uno
de ellos posee un sistema de lentes mviles que permite enfocar correctamente la imagen del objeto, despus que el enfoque total
del microscopio se ha realizado y se nota an una imagen levemente desenfocada en uno de ellos, generalmente el izquierdo,
porque al observar la imagen a travs de cada ocular derecho e izquierdo se nota que una de ellas no est enfocada
correctamente.
PRISMAS. En los microscopios modernos monoculares o binoculares, se requiere el empleo de prismas, estructuras transparentes
que, en el caso de los microscopios monoculares,
sirven para desviar los rayos luminosos de la trayectoria rectilnea del eje ptico del objetivo y dirigirlos hacia el tubo ptico
ligeramente inclinado y luego hacia el ocular.
En los microscopios binoculares, los prismas separan los rayos luminosos provenientes del objetivo, en dos haces de luz y los
dirigen a cada ocular. En ambos casos existe siempre una superficie reflectante para evitar la descomposicin de la luz.
E) COMPONENTES DE ILUMINACIN: Se consideran dentro de este grupo a los instrumentos que proporcionan energa
luminosa al microscopio. Las fuentes de energa luminosa son de dos tipos natural y artificial.
La luz natural, emitida por el sol, se obtiene de manera indirecta mediante un espejo que posee una superficie plana y otra
cncava. El espejo est situado en la superficie superior de la base o pie. Un
mecanismo especial permite
orientarlo hacia un lugar iluminado indirectamente por el sol (una ventana, por
ejemplo) y luego dirigir el haz luminoso hacia la lente del condensador.
La luz artificial se genera a travs de una lmpara de bajo voltaje (generalmente de
6 voltios) que, mediante un reostato regula la emisin y la intensidad de luz. Al
igual que el espejo, este sistema de iluminacin se inserta en la base o pie del
microscopio.7
En los microscopios que poseen un espejo, por carecer de una fuente de luz
incorporada, tambin se puede emplear la luz artificial emitida por una lmpara que
proyecta el haz luminoso de la misma manera como se orienta la superficie
reflectante del espejo cuando se ilumina el microscopio con luz natural.
FILTROS. En diversas partes del recorrido de haz luminoso, aunque en la mayora
de los casos se sitan entre la fuente luminosa y el condensador. Tienen por
finalidad modificar la longitud de onda de la luz que ilumina el objeto
a observar. Por ejemplo, cuando se utiliza Son estructuras transparentes (de vidrio, plstico o gelatina) coloreadas que se localizan
luz artificial es necesario emplear filtros azules pues modifican el color ligeramente amarillento que poseen los rayos luminosos
que emite las lmparas elctricas, transformndolos en rayos de luz blanca. Este color de luz es ms aceptada por la retina y en
las preparaciones histolgicas coloreadas mejora facilita la rendicin de color de las estructuras celulares o tisulares examinadas.
Para ciertos casos de microscopa fotnica especial se requiere el auxilio de filtros especiales como en el caso de los microscopios
de fluorescencia, contraste de fases y de polarizacin.Dependiendo del fabricante y de los modelos de microscopios, los filtros se
colocan en anillos o dispositivos especiales denominados portafiltros que, en el caso de los microscopios fotnicos de campo
claro (de uso ms frecuente), estn situados inmediatamente encima de la fuente luminosa o debajo de la lente frontal del
condensador.
Aumento total del microscopio fotnico compuesto. El aumento total de la imagen del microscopio compuesto se obtiene
multiplicando el aumento propio del objetivo por el aumento propio del ocular:
PODER DE PENETRACIN O DE PROFUNDIDAD
DE CAMPO. La imagen que se forma a travs del microscopio proviene de un objeto sumamente delgado (5 m a 10 m de
grosor), que genera varios planos de imgenes: profundos, intermedios y superficiales.
Cuando se examina un tejido con objetivos de bajos aumentos 4x 10x la imagen que se observa puede enfocarse con facilidad
con el tornillo macromtrico, sin que se diferencien los planos de enfoque antes mencionados, pero cuando la imagen se forma al
emplear objetivos de 40x y 100x, es necesario utilizar el enfoque fino a travs del tornillo micromtrico, pues es mucho ms
evidente que si enfocamos el plano superficial, es probable que al ascender levemente la platina por accin del micromtrico
logremos enfocar y visualizar con nitidez el plano focal medio o el profundo.
Distancia libre de trabajo. Se denomina as a la distancia que existe entre la superficie de la laminilla cubreobjetos y la lente frontal
del objetivo. Esta distancia ser mayor cuanto menor sea el aumento propio del objetivo y viceversa.
escala menor que la agudeza visual del ojo humano. La escala ltima de observacin estar limitada por la resolucin del sistema
de imagen del microscopio.
Criterios en las tcnicas de preparacin
Asegurar que la muestra a observar es
representativa del material, objeto u organismo de procedencia que se desea estudiar.
Hacer que las caractersticas de inters sean accesibles al sistema de imagen del microscopio.
Cuando sea necesario, aumentar el contraste entre los elementos estructurales de los materiales y el fondo.
Proporcionar las condiciones suficientes para la estabilidad de las muestras, y suficiente significa proteger las muestras de
decaimiento, degradacin, corrosin o contaminacin dentro de
la escala de tiempo de la observacin.
Ajustar la muestra a los requisitos pticos del sistema de imagen del microscopio para proveer de las condiciones ptimas de
contraste y resolucin, y evitar artefactos pticos que pudieran aparecer y que oscureceran la imagen o incorporaran falsos
detalles.
HIPTESIS
Si conocemos el mtodo del uso correcto del microscopio ptico fotonico, elaboramos preparaciones y agregamos
diversos colorantes, entonces, podremos observar preparaciones celulares de distintos tipos con los cuales podremos
observar las diferentes compuestos de las clula.
MATERIALES Y MTODO
Materiales
Palillos
Portaobjetos y cubreobjetos
Microscopio fotonico compuesto
Pipetas Pasteur
Especialmente biolgicos
Corcho
Cultivo de levaduras
Cultivo de algas
Cultivo de protozoarios
Procedimiento
1)
Elaboramos con cter de un filo un corte lo ms delgado posible al corcho. Observamos las paredes
celulares, tal como lo hizo R.Hooke. esquematizamos y elaboramos al menos 2 esquemas, anotando los
aumentos reales con los que se observo y nombres en las partes de la muestra observada.
2)
Elaboramos una preparacin fresca de cultivo de protozoarios. Observamos primero sin teir y despus
teimos de azul de metileno. Elaboramos 4 esquemas; 2 sin teir con aumentos reales y con nombres; 2 con
tincin donde utilizamos (colorante) y anotamos finalmente los aumentos reales y nombres.
3)
Elaboramos una preparacin fresca del cultivo de algas. Observamos primero sin teir y despus teimos
con azul de metileno, elaboramos 4 esquemas; 2 sin teor con aumentos reales y con nombres; y 2 con tincin
donde utilizamos (colorante) y anotamos finalmente los aumentos reales y nombres
4)
Elaboramos una preparacin fresca de epitelio o mucosa del interir de la mejilla. Para esto raspamos
suavemente con un palillo el interior de la mejilla de una de nuestras compaeras y vaciamos el producto del
raspado en una gota colocndola sobre un portaobjetos, colocamos el cubreobjetos y observamos las
5)
6)
7)
8)
9)
10)
11)
12)
Membranas celulares, el ncleo y el citoplasma, anotamos nuestras observaciones con esquemas a colores.
Observamos primero sin teir y despus tiendo con azul de metileno, elaboramos 4 esquemas; 2 sin teir con
2 aumentos reales y con nombres, y 2 con tincin de azul de metileno con 2 aumentos reales y con nombres.
Elaboramos una preparacin fresca de epitelio o mucosa del interior de la mejilla de una compaera
Observamos la primera preparacin fija que se nos indicio durante la primera sesin y elaboramos 2
esquemas con aumentos reales diferentes.
Observamos la segunda preparacin fija que se nos indicio durante la primera sesin y elaboramos 2
esquemas con aumentos reales diferentes.
Ahora elaboramos una preparacin fresca de epitelio de Elodea sp, y anotamos nuestras observacin con
esquemas a colores y dos aumentos reales.
Elaboramos una preparacin fresca que obtuvimos con el micrtomo para vegetales un corte de lo ms
delgado de la raz de zanahoria y anotamos nuestras observaciones con esquemas a color y dos aumentos
reales.
Observamos el fenmeno de osmosis
Elaboramos un preparacin fresca de epitelio de cebolla utilizando NaCl 0.9%, observamos las paredes
celulares de la membrana, el ncleo y anotamos nuestras observaciones con esquemas a colores.
Ahora elaboramos una preparacin fresca de epitelio de cebolla utilizando solucin salina concentrada (sol,
hipertnica). Observamos lo que pasa con las paredes celulares en la membrana y el nucleo, anotamos
nuestras observacin con esquemas a colores
Ahora elaboramos una preparacin fresca de epitelio de cebolla utilizando agua deionizada (sol, hipertnica)
observamos lo que pasa con las paredes celulares la mebranas y el nucleo, y anotamos nuestras observacin
con esquemas a colores
RESULTADOS
DISCUSIN
Elaboramos con cter de un filo un corte lo ms delgado posible al corcho. Observamos las paredes celulares, tal
como lo hizo R.Hooke, Donde primero se enfoco el microscopio a un aumento real a 50 y despus de tenerlo bien
ubicado se aumento a 400, se observaron los micro espacios que hay en el corcho y como si tiene un gran parecido
con lo que hoy realmente conocemos como clula.
Elaboramos una preparacin fresca de cultivo de protozoarios. Observamos primero sin teir y despus teimos de
azul de metileno. De los cuales elaboramos 4 esquemas; 2 sin teir con aumentos reales, primero lo observamos con
un aumento real de 50 y ya tenindolo bien enfocado se aumento a 400, todo eso sin tincin, donde se observo que
los protozoarios se movan libremente por la muestra preparada y finalmente a esas mismas muestras se elaboraron
2 con tincin donde utilizamos azul de metileno, donde observamos que con el azul de metileno, fueron exterminados
los protozoarios porque este es el efecto que produce este colorante como desinfectante..
Elaboramos una preparacin fresca del cultivo de algas. Observamos primero sin teir los cloroplastos de estas,
donde primero se enfoco con un aumento real de 100 y finalmente para observar con mas detalle a 400 y despus
teimos con azul de metileno donde elaboramos 4 esquemas; 2 sin teir con aumentos reales y con nombres; y 2 con
tincin donde utilizamos (colorante) y anotamos finalmente los aumentos reales y nombres
Elaboramos una preparacin fresca de epitelio o mucosa del interior de la mejilla. Para esto raspamos suavemente
con un palillo el interior de la mejilla de una de nuestras compaeras y vaciamos el producto del raspado en una gota
colocndola sobre un portaobjetos, colocamos el cubreobjetos y observamos las membranas celulares, el ncleo y el
citoplasma, anotamos nuestras observaciones con esquemas a colores. Observamos primero sin teir y despus
tiendo con azul de metileno, elaboramos 4 esquemas; 2 sin teir con 2 aumentos reales y con nombres, y 2 con
tincin de azul de metileno con 2 aumentos reales y con nombres.
Elaboramos una preparacin fresca de epitelio o mucosa del interior de la mejilla de una compaera, en el cual se
observo con el microscopio ptico fotonico, primero con un aumento real de 100 posteriormente se observo a 400, al
ser de una compaera pudimos observar el corpsculo de Barh, el cual solo poseen las mujeres de igual manera se
le agregaron 2 gotas de azul de metileno el cual nos permiti ver con mayor calidad esta muestra.
Observamos la primera preparacin fija de bacterias por el microscopio ptico fotonico gram negativas primero con un
aumento real de 100 y posteriormente a 400 que las distinguimos como gram negativas al teirse de color morado por
medio de la tincin de Gram.
Ahora elaboramos una preparacin fresca de epitelio de Elodea sp, la cual se observo con el microscopio ptico
fotonico primero a un aumento real de 100 y despus a 400, en el primero se observaron una serie de estructuras
bien organizadas, la cual eran divididas por la raz, las series que se observaron, eran la pared del epitelio de la
ceboa.
Elaboramos una preparacin fresca que obtuvimos con el micrtomo para vegetales un corte de lo ms delgado de la
raz de zanahoria obteniendo pequeos fragmentos de la pared celular de la zanahoria, en la cual se observo a travs
del microscopio ptico fotonico .
Observamos el fenmeno de osmosis, elaborando preparaciones frescas del epitelio de la ceboa agregando
diferentes reactivos como NaCl 0.9%, solucin salina, y finalmente agua desionizada. Que alteraban la forma en la
que se observaban estas diferentes muestras, que como caracterstica principal observamos que tenan una pared
muy organiza en forma de redes que se observan como escamas, en las cuales de igual manera se observaban
gracias estos las membranas y el ncleo de un color ms fuerte, el cual nos indicaba que la aglomeracin de color.
CONCLUSIONES.
Las limitaciones para el estudio de las clulas y tejidos han sido superadas a lo largo del tiempo gracias al desarrollo
tecnolgico que ha permitido la construccin de instrumentos de laboratorio, tales como el microscopio, el cual
permite la observacin y obtencin de imgenes aumentadas de esos especmenes diminutos, que a simple vista
resultan invisibles.
El microscopio ha sido y ser el instrumento de mayor utilidad en el estudio de las clulas y tejidos.
Para resaltar los detalles de los especmenes, adems de las coloraciones se han creado microscopios especiales
para tal fin, permitiendo adems la observacin de clulas vivas, con las ventajas que esto trae consigo. El poder de
aumento de los microscopios se ha perfeccionado al conocer los mecanismos involucrados en la formacin de las
imgenes, modificando en los instrumentos algunos elementos tales como el tipo de iluminacin, el sistema ptico o
el mtodo para obtener las imgenes, logrando incrementar la resolucin de los instrumentos. Actualmente pueden
verse desde elementos ultraestructurales cuyas dimensiones estn en el orden de las micras, hasta elementos
atmicos de dimensiones nanomtricas.
An cuando se ha logrado un progreso considerable en la microscopa, no todo est dicho. En el futuro, tal cual como
se ha demostrado en el pasado, a medida que avance la tecnologa se implementarn instrumentos y tcnicas cada
vez ms eficientes y con aplicaciones novedosas que permitirn incrementar los conocimientos en el mbito de la
biologa celular y la histologa. Cada vez son ms frecuentes los nuevos aportes que sorprenden a los interesados en
el tema y debido al gran y constante incremento en la informacin es casi imposible estar al tanto de todo, a pesar del
fcil acceso a internet, que en los ltimos aos se ha convertido en la base de datos ms grande que existe. La
microscopa seguir evolucionando.
PERSPECTIVA
La Microscopa ha estado en constante evolucin desde finales del siglo XX, con la introduccin de nuevos recursos
que han mejorado su prctica. Por ejemplo, el uso del microscopio virtual ha alcanzado un alto nivel de madurez; se
trata de una sinergia entre disciplinas como la patologa, histologa, la informtica mdica y anlisis de imgenes.
Esta tecnologa ha avanzado muchos paradigmas en la investigacin, el diagnstico, la educacin y la formacin
mdica. Los sistemas de microscopa virtuales requieren la digitalizacin de una diapositiva fsica, utilizando
microscopios motorizados, procesamiento de imgenes pre y post, compresin, transmisin y visualizacin. La
microscopa virtual ha comenzado a utilizarse ampliamente en educacin y formacin mdica, segundas opiniones,
procesamiento y anlisis de imgenes, actividades diagnsticas e investigacin biomdica, y se han convertido en
una herramienta potencial en telepatologa.
REFLEXIONES CRTICAS ACERCA DE LA PRCTICA
Esta prctica nos ha permitido conocer el uso correcto del microscopio el cual a futuro si nos dedicamos a cualquier
rea relacionada con la salud, es fundamental el uso de este, de igual manera es indispensable conocer la tcnica de
preparacin de muestras para la observacin de estos, y por tanto nos ha dejado satisfechos esta prctica, adems
de tratar de mejorar cada vez y buscar en fuentes cada vez ms complejas, variadas y fiables , lo cual no permitir en
algn futuro en cualquier rea realizar un investigacin de cualquier ndole de manera ms que correcta, esta prctica
nos deja repetimos con un buen sabor de boca.
CUESTIONARIO
1. DESCRIBA CULES SON LOS PASOS PARA EL ENFOQUE CON EL MICROSCOPIO FOTNICO COMPUESTO
DE CAMPO CLARO.
Coloque el objetivo de menor aumento (10x) en su posicin de enfoque (se siente un click)
Regular la intensidad de la luz moviendo la palanca del diafragma para obtener la cantidad correcta de luz.
Coloque la preparacin sobre la platina, procurando que la muestra quede al mismo nivel del orificio de la
platina, sujeta el portaobjetos con las pinzas.
Viendo el microscopio lateralmente usa el tornillo micromtrico para subir poco a poco la platina hasta que el
objetivo llegue el tope o hasta que se encuentre aprox. A 2 ml de la preparacin.
Observando por el ocular, bajar de manera gradual la platina hasta que se logre ver la preparacin.
Al observar la muestra, si el enfoque no es claro, mover lentamente el tornillo micromtrico hasta obtener
una nitidez total.
2. DESCRIBA CULES SON LOS PASOS PARA EL ENFOQUE CON EL MICROSCOPIO DE DISECCION
Al observar la muestra, si el enfoque no es claro, mover lentamente el tornillo micromtrico hasta obtener
una nitidez total.
PROCARIONTAS
Organelos
Membrana plasmtica,
citoplasma, citoesqueleto,
ncleo, nuclolo, retculo
endoplasmico (liso, rugoso),
ribosomas, mitocondrias,
complejo de Golgi, lisosomas,
centriolos, vesculas, flagelos,
cilios.
Organelos
RMP H PA
EOR OLN
N O N
E T G
R I O
A S S
T Capsula, pared celular, membrana
Aplasmtica, citoplasma, nucleoide,
flagelos, pili o pelos, mesosoma,
ribosomas.
8.
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Carecen de
mureina
Estremofilas
ARQUEOBACTERIA
S
Membrana
plasmtica
formada por
lpidos
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Nucloide
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BIBLIOGRAFA
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http://www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/PDF/Portal%20de%20Recursos%20en%20Linea/Apuntes/2_microscopia.pdf
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Medical Microbiology, jawets, melnick, & adelbergs, edicin 26