Curva tipo de azucares reductores

Alejandro Ruiz, Paola Zuiga

Instituto Politcnico Nacional, Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas, Departamento de Bioqumica,
Bioqumica General, 4QV1, Seccin 1

Introduccin
La invertasa (-D-fructofuranosidasa, -Dfructofuransido fructohidrolasa,), cataliza la
hidrlisis de restos terminales no reductores
- fructofuranosdicos de fructofuransidos.
Entre los sustratos sobre los que acta el
ms significado es, sin duda, la sacarosa, de
ah que el enzima se designe con el nombre
de sacarasa. La denominacin trivial de
invertasa, con la que tambin se conoce,
hace referencia al hecho de que los
productos de la reaccin son conocidos
desde antiguo como azcar invertido ya
que
mientras
la
sacarosa
es
dextrorrotatoria, la mezcla equimolecular de
glucosa y fructosa que resulta de su
hidrlisis es levorrotatoria, por lo que en el
proceso se origina un cambio de signo (de
positivo a negativo) del valor de rotacin
ptica.
Sacarosa ([]D= +66,5) + H2O
D-glucosa ([]D=
([]D= -92)

+52,5)

D-fructosa

La invertasa es un enzima ampliamente

distribuido, estando presente tanto en
microorganismos como en animales y
vegetales, jugando un papel importante en
el catabolismo de fructanos y ms
especficamente en el de la sacarosa, en
especial en aquellos organismos en los que
dichos azcares son utilizados como fuente
de carbono y energa. El estudio de la
actividad invertasa presenta un gran inters
tanto desde un punto de vista acadmico
como de investigacin aplicada, siendo uno
de los enzimas ms conocidos. A modo de
ejemplo podemos referir que la invertasa
fue el primer enzima cuya cintica se
estudi en profundidad (estudios clsicos de
Michaelis-Menten) y que fue utilizado
industrialmente.
Para la determinacin de la actividad
invertasa se utiliza el mtodo del cido 3,5dinitrosaliclico (DNS), el cual se basa en la
reduccin del DNS (de color amarillo) por la
glucosa u otro azcar reductor al cido 3amino-5-nitrosaliclico
(de
color
rojo
ladrillo) , cuya presencia puede detectarse
por lectura de la Absorbancia en la zona de
540-570 nm. cido 3,5-dinitrosaliclico DGlucosa cido 3-amino-5-nitro cido Dglucnico (amarillo) saliclico (rojo) En la

Prctica aplicaremos el mtodo DNS a una

gama desoluciones patrn de glucosa, al
objeto de obtener la correspondiente curva
de calibrado que, posteriormente, se
utilizar bien directamente, o mediante el
coeficiente de extincin deducido de la
misma, para determinar los equivalentes de
glucosa formados en el medio de reaccin
de la invertasa y, a partir de ellos, la
actividad enzimtica. Adems, para el
anlisis de protenas de
los extractos de invertasa, al objeto de
determinar la actividad especfica de stos,
se obtendr asimismo una curva tipo.
Objetivos
Determinar la curva tipo de azucares
reductores a distintas concentraciones de
glucosa y fructosa.
Resultados
No.eq
uipo
1

A(bla
nco)
0

A(problemas 1,2,3,4,5)
0.0
41
0.0
74
0.1
0

0.1
45
0.4
20
0.1
05

0.2
54
0.7
52
0.1
90

0.5
86
1.0
46
0.7
39

0.6
61
1.4
27
.
74
0

prome 0
dio
Tabla 1 se muestran resultados de los
equipos de la seccin 1 donde la
concentracin de azucares reductores en los
tubos 1-5 contienen 0.1 ,0.2, 0.4, 0.8 y 1
umol/2ml.
Discusin de resultados
Se obtuvo con el promedio de los datos de
los 3 equipos una curva tipo lineal con
R=0.99
lo
que
nos
indica
una
correspondencia
equivalente
entre
la
absorbancia y la concentracin de azucares
reductores en la muestra, se obtuvo la
frmula de la grafica y = 0.9548x + 0.0079
lo que nos confirma que se trata de una
lnea recta, por lo tanto esta grafica es
confiable para su uso en futuros anlisis
bajo las mismas condiciones donde se desee
conocer la concentracin de este analito.
Conclusiones

Se construy una curva tipo con los

resultados obtenidos al medir la absorbancia
de nuestros analitos a 540nm y est
reflejada una tendencia lineal entre la
absorbancia y la concentracin del analito
en 2ml de solucin.
Referencias bibliogrficas
1.

http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biolmol/pdfs/31%20INVERTASA
%20ENSAYO.pdf

2.

http://www.academia.edu/4403544/DETE
RMINACION_DE_AZUCARES_REDUCTORE
S_METODO_DNS

b de azucares reductores
curva tipo
s
o
f(x) = 0.95x + 0.01
r
Linear ()
R = 1
b
0
0.5
1
a
n
concentracin
de azucares reductores umol/2ml
c
i
a