Universidad de Guanajuato

Prctica de laboratorio No. 5

"Cintica Enzimtica"

Campus Len
Divisin de ciencias de la salud
Departamento de Medicina y Nutricin
Mdulo II: Biologa Celular, Molecular y Tisular
Fecha: Lunes 29 de Octubre del 2014
Profesor: Dra. Gonzlez Yebra Beatriz
Grupo: A
Equipo: 1-A
Arturo Josu Mora Martnez NUA: 156727
Juan Francisco Moreno Lemus NUA: 156703
Elton Alexis Montoya Cifuentes NUA: 156689
Luis Daniel Snchez Hernndez NUA: 156738
Cecilia Natalia Garca Torres NUA: 254185

INDICE
INTRODUCCIN

OBJETIVOS

INVESTIGACIN TCNICA

10

PROCEDIMIENTO

11

FLUJOGRAMAS

12

RESULTADOS

13

DISCUSIN

14

CONCLUSIONES

15

CUESTIONARIO

16

BIBLIOGRAFA

23

Introduccin
La principal ventaja de las enzimas frente a los catalizadores inorgnicos es que actan
en condiciones suaves de pH y temperatura, con una gran eficiencia y, adems, de forma
muy especifica.
Existen numerosas enfermedades relacionadas con la alteracin de la actividad de
ciertas enzimas. Por ese motivo, las enzimas tienen un gran inters para las ciencias
biomdicas ya que son las principales dianas de un gran numero de frmacos. Por
ejemplo, la aspirina, tiene efecto antipirtico y antiinflamatorio porque inhibe a la
prostaglandina H2 sintasa, una de las enzimas implicadas en la sntesis de
prostaglandinas. Tambin las enzimas que son vitales para la supervivencia de bacterias
y virus constituyen el blanco de algunos frmacos contra estos organismos infecciosos,
como es el caso de la transcriptasa inversa del virus del SIDA.
Funci n de las enzimas. Principios energ ticos
Las enzimas (E) tienen un papel fundamental: acelerar las reacciones biolgicas
actuando sobre sustratos (S) especficos que se van a transformar en el producto (P) de
la reaccin (E + S E + P). Esta funcin, esencial para los seres vi vos, la consiguen
gracias a que poseen una estructura tridimensional caracterstica, el centro activo, con un
entorno qumico adecuado que permite la interaccin entre la enzima y el sustrato
mediante la formacin de un complejo binario denominado complejo enzima-sustrato
(ES). En las protenas, las caractersticas del centro activo van a estar determinadas por
la naturaleza de los aminocidos que lo forman y su distribucin espacial concreta. En
general este proceso de formacin del complejo ES se puede considerar un caso
especifico de una interaccin molecular entre macromolculas (en este caso, protenas) y
molculas de menor peso molecular, denominadas ligandos, y se realiza mediante la
creacin de interacciones no covalentes entre ambas molculas.
La reaccin enzimtica general de transformacin de un sustrato especifico en un

producto se puede representar con la siguiente ecuacin:

Pero hay que tener en cuenta que la transformacin del sustrato a producto no es
inmediata. Una vez que el sustrato adecuado interacciona con el centro activo se van a
producir modificaciones que lo convierten en un estado de transicin que se transformara
en el producto final de la reaccin.
En las reacciones catalizadas por enzimas, este estado de transicin, muy inestable,
resulta estabilizado por los residuos del centro activo con lo que se consigue acelerar la

reaccin. Dentro del centro activo hay ciertos aminocidos que intervienen en la unin del
sustrato a la enzima y se denominan residuos de unin, mientras que los que participan
de forma activa en la transformacin qumica del sustrato se conocen como residuos
catalticos.
La cin tica qu mica estudia las velocidades de reacci n
Realizar ensayos en el laboratorio en diferentes condiciones experimentales para estudiar
la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas aporta informacin sobre
aspectos como la afinidad de la enzima por el sustrato o la eficiencia con la que se
transforma ese sustrato en el producto de la reaccin. Tambin pueden proporcionar
informacin sobre ciertos detalles del mecanismo quimico por el que transcurre la
reaccin catalizada. Estos datos ayudan a predecir su comportamiento en el ambiente
celular o su respuesta ante cualquier variacin de las condiciones habituales (Recuadro
8-5).
Cintica de las reacciones de un solo sustrato
Los estudios de la velocidad de las reacciones enzimticas de un solo sustrato se
realizan mezclando una concentracin conocida de enzima con una concentracin
concreta de sustrato, y midiendo la desaparicin de sustrato o la aparicin de producto a
lo largo del tiempo . El mtodo analtico de medida de sustrato o de producto depender
de sus caractersticas qumicas, pero son habituales los mtodos espectroscpicos, de
fluorescencia o radiomtricos.
Si se realiza una representacin grafica de este tipo de ensayo se obtiene una curva

como la siguiente:
Como puede apreciarse, en la primera etapa la reaccin sigue una cintica de primer
orden hasta que la desaparicin de sustrato es suficientemente elevada

(aproximadamente a partir de un 10 %) para que esta relacin deje de ser lineal. Por este
motivo las medidas de velocidad se miden en la primera etapa lineal, se denominan
velocidades iniciales (V0) y se determinan como la pendiente de la curva de progreso al
principio de la reaccin. De la siguiente manera podremos entender la grfica:
Una primera etapa lineal, a bajas concentraciones de sustrato, en la que la reaccin se
comporta como si fuera de primer orden.
Una segunda etapa curvilnea, a concentraciones de sustrato intermedias, en la que hay
un descenso en la respuesta al aumento de la concentracin de sustrato.
Una ultima etapa, a elevadas concentraciones de sustrato en la que la velocidad no
varia al aumentar la concentracin de sustrato. La reaccin sigue una cintica de orden
cero.
A bajas concentraciones de sustrato, la velocidad ser proporcional a la concentracin de
sustrato [S]; pero a concentraciones elevadas de sustrato, toda la enzima estar saturada
formando el complejo ES, por lo que la velocidad depender de su concentracin y se
podr expresar como v - k2 [ES]. Es decir, depender de la velocidad de transformacin
qumica de ES a EP y de la liberacin de producto y enzima libre. En estas condiciones,
la adicin de ms sustrato no afecta a la velocidad, por lo que la reaccin muestra un
comportamiento de orden cero y se dice que hay un efecto de saturacin de la enzima
por el sustrato.
Para expresar este comportamiento mediante una expresin matemtica Leonor
Michaelis y Maud Menten en 1913:
La velocidad inicial en este punto de saturacin terico se conoce como velocidad
mxima (Vmax).

La medida ms simple de la actividad cataltica de una enzima se obtiene de su numero

de rotacin, que puede calcularse a partir de la Vmax. El numero de rotacin (o constante
cataltica, kcat, como tambin se llama) es el numero mximo de molculas de sustrato
que puede convertirse en producto por una sola molcula de enzima por unidad de
tiempo. Un numero de rotacin (por segundo) de 1 a 103 es tpico para las enzimas,
aunque se conocen valores hasta de 106 (para la anhidrasa carbnica). A partir de estos
valores resulta aparente que relativamente pocas molculas de enzima pueden convertir
con rapidez un numero grande de molculas de sus- trato en producto.
El valor de Vmax es solo un termino til que se obtiene de una grafica como la de la
figura 3-17; otra es la constante de Michaelis (KM), que es igual a la concentracin del
sustrato cuando la velocidad de reaccin es la mitad de la Vmax. Como su nombre indica,
la KM es la constante para una enzima determinada y por tanto independiente de la
concentracin de sustrato o enzima. La relacin entre Vmax y KM se advierte mejor si se
considera la ecuacin de Michaelis-Menten.
Factores externos que afectan la actividad enzimtica
Una vez descrito el mecanismo de actuacin de las enzimas se analizara por que la
variacin de algunos factores del medio puede afectar a la actividad enzimtica.
Concentracin de enzima
Las enzimas proteicas se aslan de sus principales fuentes biolgicas (bacterias, hongos,
tejidos animales y vegetales) mediante procesos habituales de aislamiento y purificacin
de protenas, por lo que la pureza del preparado no es absoluta. Esto hace necesario
definir dos conceptos: la unidad de actividad enzimtica y la actividad especifica.
Unidad de actividad enzimtica (U): es la cantidad de enzima capaz de transformar 1,0
Umol, de sustrato por minuto a 25 C en condiciones optimas.
Actividad especifica: es el numero de unidades enzimticas por mg de protena
purificada.
Temperatura
El aumento de la temperatura conduce a un aumento en la velocidad de la reaccin, que
tiene un limite cuando se sobrepasa la temperatura de desnaturalizacin de la enzima, lo
que conlleva una perdida de su funcin . Debido a este fenmeno, la mutacin de una
enzima que produce una forma termolbil puede tener consecuencias muy graves.
pH
Tal y como se ha visto con detalle en el capitulo de protenas, los cambios en el pH del
medio pueden alterar al estado de ionizacin de las cadenas laterales de los aminocidos
cidos y bsicos. Estos cambios pueden afectar a la afinidad de la enzima por el sustrato,
si se ven alteradas las cargas de los aminocidos que participan en la formacin de
interacciones no covalentes entre la enzima y el sustrato para formar el complejo ES.
Tambin se puede alterar la etapa de transformacin del sustrato en producto, si se
modifican los residuos catalticos. El pH al que se producen estas variaciones puede
aportar datos sobre que tipo de residuo es el que se ve modificado. Por ejemplo, un
cambio en la actividad enzimtica en un pH prximo a 7 indica que se afecta un residuo
de His (con un pKa prximo a 6). Siempre hay que tener en cuenta que el pKz de un

mismo residuo puede variar ligeramente dependiendo del entorno molecular en el que se
localiza.
Las enzimas se pueden inhibir de forma reversible e irreversible
Existen cierto tipo de molculas, denominadas inhibidores, que ralentizan o detienen las
reacciones enzimticas. En algunas ocasiones han resultado tiles para conocer ms
datos sobre el mecanismo de reaccin enzimtica pero, sobre todo, resultan muy
eficaces en la bsqueda y elaboracin de frmacos . Por ejemplo, un inhibidor puede
actuar sobre una enzima que esta presen te en un organismo patgeno pero no en el
organismo husped. En otras ocasiones actan sobre enzimas con una actividad alterada
y que son la causa de la patologa tratada. En ambos casos, los frmacos ms
adecuados sern los que operen sobre una enzima muy especifica para evitar efectos
secundarios.
A continuacin se presenta una grfica con los tipos de inhibidores:

Objetivos
Con sta prctica, el alumno:
1. Comprende el comportamiento de una enzima y las condiciones que afectan su
actividad (concentracin de sustrato, Temperatura, etc.).
2. Elabora las grficas de velocidad correspondientes para analizar el comportamiento de
una enzima en condiciones ptimas y a distintas concentraciones de sustrato y de
temperatura.

Investigacin Tcnica
MATERIALES Y EQUIPO
Tubos de ensayo
Gradillas
Micropipetas
Vasos de precipitado
Termobao
Termmetro
Espectrofotmetro
Celdas para espectrofotmetro
REACTIVOS
Reactivo 1: Tris pH 7.8 80mmol/L, Lactato deshidrogenasa (LDH) 800 U/L, Malato
deshidrogenasa (MDH) 600 U/L, L-Aspartato (200 mmol/L).
Reactivo 2: NADH (0.18 mmol/L,) - Cetoglutarato (12 mmol/L).
! Nota el reactivo1 y 2 ya se encuentran mezclados, esta rotulado y
nombrados como reactivo de trabajo (RT) y fueron previamente preparados
por Erika
Suero de paciente.

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Procedimiento
A)

DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DEL ASPARTATO

AMINOTRANFERASA (AST) EN SUERO.
1. Se mezcla el reactivo 1 con el reactivo 2 para obtener el reactivo de trabajo.
2. Se centrifuga la sangre del paciente y se separa el suero del paquete globular
cuidadosamente, depositndolo en un tubo eppendorf de 1.5 uL
3. Se ajusta a cero el espectrofotmetro con agua a 340 nm.
4. Se coloca en un tubo de ensayo 1 ml de reactivo de trabajo con 100 ul suero se
mezclan los componentes,
5. Se toma la 1er lectura de la mezcla de la reaccin
6. Se incuba durante 3 minutos adicionales, tomando la lectura de absorbancia cada
minuto.
7. Se calcula la absorbancia como lo muestra la siguiente manera
Abs1 Abs 2 =
Abs2 Abs 3 =
Abs3 Abs 4 =
8. Al final se realiza la suma e de las 3 absorbancias obtenidas y se multiplica por el
factor 1750 U/L de AST.
9. Reportar la actividad de la enzima en U/L

B) DETERMINACION DEL EFECTO DE LA CONCENTRACIN DEL SUSTRATO

SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA
1. Se prepara la misma reaccin en 4 tubos de la misma manera que en la seccin A,
pero esta vez los tubos tendrn distintos pH (2, 4, 7 y 12 y 14).
2. Se determina la actividad de la enzima en suero de la misma forma como en la
seccin A.
3. Elabore la tabla de actividad enzimtica, velocidad y pH
4. Elabore una grfica donde se observe el efecto de la temperatura sobre la
velocidad de la reaccin (eje X: Temperatura, eje Y; Velocidad.
C) DETERMINACIN DEL EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD
DE LA ENZIMA AST.
1. Se prepara la misma reaccin en 4 tubos de la misma manera que en la seccin A,
pero esta vez se incubaran los tubos a distintas temperaturas (0, TA, 37 y 65
grados centgrados).
2. Determine la actividad de la enzima de la misma manera que en la seccin A.
3. Elabore la tabla de actividad enzimtica, velocidad y Temperatura.
Elabore una grfica donde se observe el efecto de la temperatura sobre

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Flujograma

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Resultados
El propsito de esta prctica fue determinar la actividad enzimtica
Nosotros determinamos la absorbancia a un PH de 4 obteniendo los siguientes resultados
0 min = 0. 374
1 min= 0.370
2min= 0.370
3min = 0.363
1=

0.374 0.370 = 0.004

2=

0.370 0. 370 = 0

3=

0.370 0.363 = 0.007

/ 3 x 1750 U/L= 6.4166 U/L a PH 4

Los otros equipos obtuvieron los siguientes resultados

A pH 7: 4.66 U/L
A pH 10: 5.82 U/L
Mientras que cuando se trataba de temperatura obtuvieron
A temperatura ambiente: 9.33 U/L
A 65C: 31.5 U/L
A 0 C : 22.166 U/L

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14

Discusin
Los resultado que obtuvimos en la prctica fueron las diferencias en la absorbancia de
una enzima catalizando reacciones a diferentes pH y a diferentes temperaturas, los pH y
temperaturas usados fueron 3, tomando como referencia el valor medio que es el valor
que manejamos en el cuerpo humano. Como podemos observar, los valores laterales
mantienen una cierta paralelidad, mantenindose a la misma altura del eje Y cuando se
realiza la grfica, pero en el momento de unir los puntos, el valor medio hace que la curva
vaya en direccin contraria a la supuesta, formando un descenso en lugar de un asenso
en la absorbancia como se esperara en un pH 7, que sera el pH ptimo al que las
enzimas trabajan, ya que es el pH que manejamos los seres humanos.
Lo esperado es que el nivel de absorbancia a pH 7 aumentara en lugar de disminuir, cosa
contraria que vemos en la prctica. Estos errores se le pueden atribuir a varas cosas, la
primera y la ms esperada es que al tomar las muestras con las pipetas hayamos
obtenido muestra de ms o de menos, la segunda es que tuvimos errores al cronometrar
el tiempo al que era necesario medir la absorbancia de la enzima, y la tercera es que los
reactivos o la preparacin de la prctica as como el calculo de diferencias haya estado
mal, cual sea que haya sido el caso, los valores dados y la grfica contradicen a lo que
dice la lectura cientfica de lo que deba de haber sucedido.

Conclusiones
A manera de conclusin es relevante denotar que para el correcto desarrollo y
comparacin con el conocimiento terico adquirido se necesita hacer un mejor control de
variables que podran afectar el desarrollo de la prctica misma, siendo el factor humano
el principal motivo de falla y errores en el transcurso de esta.
Los resultados obtenidos mediante los diferentes procesos sirvieron de contraste para
comprender lo que era un incorrecto manejo del procedimiento y la sensibilidad que
tienen las pruebas para poder procesar datos veraces que reafirmen la teora.
El lado positivo de la prctica fue conocer el procedimiento, el instrumental y material, y la
metodologa necesaria para calcular la funcin de las enzimas en las diferentes
reacciones y como estas se ven afectadas a l modificar diversas variables o factores
siendo las mas destacadas la concentracin del sustrato, la concentracin de la enzima y
el pH de la solucin.
Adicionalmente el equipo consternado por la falla del procedimiento relacionado al pH 7 ,
siendo este el que caus un resultado errneo, realiz tambin el procedimiento en la
bsqueda de cerciorarse si los resultados se vieron afectados por la gran cantidad de
compaeros presentes simultneamente en el laboratorio o si existi algn otro factor
implicado de los previamente mencionados.
A pesar de la cautela con la que se realiz de nuevo este experimento, el resultado
errneo se mantuvo dejando de esa manera una inconclusa respuesta a la variable que
afect el resultado.
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Cuestionario
1.

Qu son las enzimas y en que se basa la especifidad de una enzima?

Cuando un compuesto se transforma en otro, de diferente naturaleza, se ha producido

una reaccin qumica. El proceso de transformacin ocurre a una determinada velocidad, que
depende de varios factores. As, cuanto mayor sea la cantidad del compuesto inicial ms rpido
ser el proceso. Tambin influye la temperatura, cuya elevacin acelera las reacciones
qumicas. En este sentido es sobradamente conocido el hecho de que una baja temperatura
preserva los alimentos frente a una reaccin de descomposicin. As mismo, la presencia de
un catalizador modifica la velocidad de una transformacin qumica. Estas sustancias no pueden
lograr el que se produzca una reaccin imposible, pero s que una casi imperceptible suceda a
una velocidad muy apreciable. Por ello los catalizadores son muy tiles en la industria qumica.
Su efecto lo promueven de diferentes maneras. En cierto modo actuaran como una polea que
facilitase el que se pudiera mover un pesado objeto. Los seres vivos tienen catalizadores para
las reacciones que ocurren en sus clulas. Se trata de las enzimas, que son protenas que
tienen una actividad cataltica. Todas las transformaciones que ocurren en las clulas hacen uso
de enzimas concretas, habiendo un nmero incontable de stas. Una de las principales
caractersticas de las enzimas es su alta especificidad.

Las enzimas son especficas para:

a) El substrato
b) La reaccin

Ello significa que las enzimas pueden catalizar la transformacin de apenas un substrato o una
familia de substratos relacionados estructuralmente, catalizando solo una de las posibles
reacciones que ese substrato puede experimentar.
Esta caracterstica de algunas enzimas puede ser aprovechada en algunos escenarios clnicos.
Por ejemplo, en pacientes intoxicados con metanol, se utiliza etanol en el tratamiento. La
enzima puede unirse a cualquiera de los dos alcoholes (especificidad relativa), pero tiene de 10
a 20 veces ms afinidad por el etanol, lo cual favorece la oxidacin del etanol por sobre la
oxidacin del metanol. Evitar la oxidacin del metanol para favorecer su eliminacin sin ser
transformado, es muy importante, ya que la oxidacin metablica del metanol produce
metabolitos muy peligrosos para el organismo, como formaldehido y cido frmico. (Para una
interesante revisin sobre la intoxicacin por metanol, siga este enlace: Korabathina, K:
Methanol) La especificidad de accin consiste en que la enzima solo cataliza una de las
posibles reacciones que puede seguir un substrato.

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2.
Elabore una tabla donde cite algunos ejemplos de las enzimas que se encuentran
en el humano y las patologas a las que se asocia su actividad.

Enzima

Enfermedad

Dficit de Lactasa

Galactosemia

Dficit de Fenilalanina
hidroxilasa

Fenilcetonuria

PRPP Sintetasa

Gota

alfa-L-iduronidasa

Mucopolisacaridosis

Porfirinas

Porfiria

HGPRT

Hiperuricemia, sndrome de lesch

nyhan y de Kelley-Seegmille

Defecto en enzimas de
la sntesis de melanina

Albinismo

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3.

Que es la actividad de una enzima?

Las cantidades de enzima pueden ser expresadas en moles, como las de cualquier
otro compuesto qumico, o pueden ser cuantificadas en trminos de actividad enzimtica.
La actividad enzimtica es una medida de la cantidad de enzima activa presente y del
nivel de actividad de la misma, por lo que la medida de la actividad es dependiente de las
condiciones, que deben ser especificadas cuando se dan valores de actividad. La
actividad expresa la cantidad de sustrato convertido por unidad de tiempo, teniendo en
cuenta el volumen de reaccin.
En el Sistema Internacional de Unidades la unidad para la actividad cataltica es
el katal (kat), pero es una unidad demasiado grande y suele usarse la unidad de actividad
enzimtica (UI).

1 kat = 1 mol sustrato convertido x s-1 = 6 x 107 UI

1 UI = 1 mol sustrato convertido x min-1 = 16,67 nkat

Otra unidad comnmente usada es la actividad especfica. sta se refiere a la actividad

de una enzima por miligramo (mg) de protena, y se suele expresar en: mol x min-1 x mg1
). La actividad especfica da una idea de la pureza de la enzima.

4.

Qu es la velocidad de una reaccin catalizada por enzimas? B) Grafica

Las reacciones llevadas a cabo en el cuerpo humano necesitan de la accin de enzimas

que aceleran su velocidad de reaccin, ya que, sin las enzimas, stas reacciones
tardaran demasiado para poder darse y aprovecharlas. Para que una reaccin tenga
efecto tiene que alcanzar una energa suficiente para llevar a cabo la reaccin, a lo que
llamamos "energa de activacin". Las enzimas disminuyen demasiado la cantidad de
energa necesaria para llevar a cabo una reaccin, para que as puedan darse de manera
rpida y responder a las necesidades que se tenga de tal producto de la reaccin

18

5.
Cmo afecta la concentracin de una enzima en la velocidad de reaccin? B)
Grafica
La velocidad de la reaccin es directamente proporcional a la concentracin de la enzima
a cualquier concentracin de substrato. Por ejemplo, si la concentracin de enzima es
disminuida a la mitad, la velocidad inicial de la reaccin (v0) es reducida tambin a la
mitad de la original
La velocidad de transformacin de los sustratos de una reaccin en los correspondientes
productos, mediante una enzima y bajo condiciones de estado estacionario, es
dependiente tanto de las concentraciones de la enzima como de los sustratos.
Normalmente, esa dependencia puede ser expresada matemticamente por la ecuacin
de Michaelis-Menten:

v= Vmax [S] / (Km + [S] )

6.

Cmo afecta la concentracin de sustrato en la velocidad de reaccin?B) Grafica

Al principio un aumento de la concentracin de sustrato produce un aumento rpido de la

velocidad de reaccin, pero si se sigue aumentando la concentracin de substrato, la
velocidad de reaccin comienza a disminuir; vemos que a muy altas concentraciones de
substrato se observa que no cambia la velocidad de reaccin, se dice que los centros
activos de la enzima se encuentran saturados. La velocidad de reaccin que se obtiene a
esa alta concentracin de substrato se define como la velocidad mxima (vm) de la
reaccin enzimtica bajo las condiciones especificadas.

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7.

Cmo afecta la temperatura en la velocidad de reaccin? B) Grafica

Incremento de la velocidad con la temperatura: En general, la velocidad de la

reaccin se incrementa con la temperatura hasta que un punto mximo es alcanzado.
Este incremento se debe a que aumenta el nmero de molculas ricas en energa que
pueden pasar la barrera energtica de estado de transicin, para formar a los productos.
Decremento de la velocidad con la temperatura: la elevacin excesiva de la
temperatura del medio que contiene a las enzimas, resulta en un decremento de la
velocidad como resultado de la desnaturalizacin, es decir, la prdida de la estructura
tridimensional de las enzimas.

8.

Cmo afecta el pH en la velocidad de reaccin? B) Grafica

Los enzimas tienen un pH ptimo o intervalo de pH en el que su actividad es mxima; a

valores superiores o inferiores de pH la actividad disminuye. Esto no es sorprendente
dado que algunas cadenas laterales de aminocidos pueden actuar como cidos o bases
dbiles que desarrollan funciones crticas en el sitio activo del enzima y que dependen del
mantenimiento de un cierto estado de ionizacin, mientras que en otras zonas de la
protena algunas cadenas laterales pueden jugar un papel esencial en las interacciones
que mantiene la estructura de la protena.

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9.

Qu representan las ecuaciones de Lineweaver Burk y Michaelis Menten?

El grfico de Lineweaver-Burke, tambin se denomina de dobles recprocas y se utiliza

para calcular la Km y la Vmax as como para determinar el mecanismo de accin de los
diversos tipos de inhibidores.
La ecuacin que describe a la grfca de Lineweaver-Burke es:

que describe una recta en donde el intercepto con el eje de las abscisas es igual a
1/Km y el intercepto con el eje de las ordenadas es igual a 1/Vmax.

La ecuacin de Michaelis y Menten describe como vara la velocidad de reaccin

con la concentracin de sustrato:

En donde:

v0 es la velocidad inicial de la reaccin

Vmax es la velocidad mxima
Km es la constante de Michaelis y Menten=
[S] es la concentracin de sustrato

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10. Qu es el Km? Elabore una tabla de distintos sustratos y sus valores de Km,
indicando la enzima para la cual son especficos.

Enzima

Sustrato

Km (mM)

Carbnico anhidrasa

HCO3-

Quimiotripsina

Glicltirosinilglicina, Benzoiltirosinamida

108, 2.5

Treonina deshidratasa

L-treonina

Hexocinasa

ATP,D-glucosa,D-fructosa

.4 ,.05 y 1.5

Catalasa

H2O2

25

B-galactosidasa

D-lactosa

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Bibliografa

David L. Nelson & Michael M Cox. (2009).Lehninger Principios de Bioqumica. Estados

Unidos: Omega, 2005. ISBN7167-4339-6.
Devlin T. M. , BIOQUIMICA Libro de texto con aplicaciones clnicas, EDITORIAL
REVERTE, ESPAA, 2004. ISBN. 84-291-7208-4
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/

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