PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA.

Es usada para detectar la sensibilizacin in vivo de los glbulos rojos. Es de gran valor en el
diagnstico de la:

Enfermedad hemoltica del recin nacido.

Anemia hemoltica autoinmune.

Anemia hemoltica y sensibilizacin inducida por drogas.

Investigacin de reacciones transnfuncionales.

Procedimiento.
1. En un tubo de ensayo de 10 o 12x75mm, colocar una gota de clulas rojas al 5%
suspendidas en solucin salina fisiolgica (SSF).
2. Agregar suficiente SSF al tubo, tratando de obtener una suspensin uniforme de
las clulas.
3. Centrifugar durante 2min a 3000 rpm para empaquetar los glbulos rojos en el
fondo del tubo. Decantar completamente la salina.
4. Agregar unas gotas de salina fresca al tubo, resuspender las clulas y luego
agregar ms salina para realizar el segundo lavado.
5. Centrifugar nuevamente y repetir el mismo procedimiento hasta completar 4
lavados.
6. Inmediatamente despus del cuarto lavado, agregar 2 gotas de reactiva de
antiglobulina humana y mezclar.
7. Centrifugar a: 3400rpm x 15segundos, o 1000rpm x 1 minuto.
8. Examinar el tubo para observar si hay aglutinacin, graduarla en cruces y anotar los
resultados tubo en mano. Para facilitar la lectura es recomendable la ayuda visual.

9. Las pruebas negativas deben confirmarse con las clulas de Coombs. Al tubo de la
prueba negativa se agregan unas gotas de clulas control de Coombs, mezclar,
recentrifugar, leer y anotar los resultados, tubo en mano.
Interpretacin.

Si la prueba de antiglobulina muestra aglutinacin, se interpreta positiva, significa

que hubo sensibilizacin in vivo de los eritrocitos y se informa: prueba de
antiglobulina o de Coombs directo positiva, sealando en cruces la intensidad de la
reaccin, por ejemplo, 4+.

Si no hubo aglutinacin, la prueba es negativa y significa que no existe

autosensibiilizacin eritrocitaria.

La prueba de antiglobulina negativa ser vlida, solamente, si la prueba control de

Coombs es positiva. En este caso, prueba de antiglobulina o de Coombs directo
negativa.

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA.

La deteccin de anticuerpos presentes en el suero se puede efectuar con:

1. Clulas rojas especialmente seleccionadas (clulas detectoras), en las cuales se
encuentras presentes los antgenos de grupos sanguneos correspondientes a los
anticuerpos de mayor frecuencia e importancia clnica.
2. Con clulas de gentica conocida (panel) que permiten hacer la identificacin del
anticuerpo presente. El panel se emplea una vez que se ha comprobado que en el
suero existe un anticuerpo irregular, demostrado mediante las clulas detectoras.
3. Con las clulas desconocidas, como en las pruebas de compatibilidad.
La prueba de antiglobulina indirecta se usa en:

Deteccin e identificacin de anticuerpos irregulares.

En la parte final de la prueba de compatibilidad.

Deteccin de antgenos no demostrables por otras tcnicas: Du, Kell, Duffy, Kidd,
etc.

Identificacin de anticuerpos presentes en eluatos.

Pruebas especiales como: consumo de antiglobulina, estudio de anticuerpos

antileucocitarios, antiplaquetarios, etc.

Procedimiento.

En un tubo de ensayo de 10 o 12x75mm colocar 2 gotas de suero fresco en

estudio.

Agregar 1 gota de una suspensin de clulas lavadas una vez y preparadas al 5% en

SSF.

Agregar 2 gotas de albumina bovina polimerizada o albumina al 22% o al 30%.

Mezclar, centrifugar, leer y anotar los resultados, tubo en mano.

Incubar a 37C por 15 a 30 minutos. Centrifugar, leer y anotar los resultados, tubo
en mano.

Lavar 4 veces con suficiente SSF como en la prueba directa, decantando cada vez
toda la salina.

Agregar 2 gotas del reactivo antiglobulina humana poliespecifico y mezclar.

Centrifugar, leer y anotar los resultados, tubo en mano.

Comprobar las pruebas negativas con las clulas control de Coombs.

Interpretacin.

Prueba de antiglobulina negativa + prueba de control de Coombs positiva.

Interpretacin: prueba de albumina negativa.

Prueba de albumina negativa + prueba de control de Coombs negativa.

Interpretacin: Prueba no valida.

Repetir todo el procedimiento. Averiguar la causa del error.