CITOHISTOPATOLOGA

PROCEDIMIENTOS BSICOS

CITOHISTOPATOLOGA
PROCEDIMIENTOS BSICOS
KWWSERRNVPHGLFRVRUJ
Herminia Casandra Rodiles Martnez
Lic. Tecnologa de la salud en citohistopatologa
Profesora auxiliar
Lic. Juana Elena Campann Logaz
Lic. Tecnologa de la salud en citohistopatologa
Profesora instructora
Lic. Celinda Laza Caballero
Lic. Tecnologa de la salud en citohistopatologa
Profesora instructora

La Habana, 2008
3

Rodiles Martnez, Herminia Casandra et al.

Citohistopatologa. Procedimientos bsicos. /
Herminia Casandra Rodiles Martnez, Juana Elena
Campann Logaz, Celinda Laza Caballero.
La Habana: Editorial Ciencias Mdicas, 2008.
[vi], 62 p. : il.
Bibliografa al final de la obra.
ISBN 978-959-212-281-9

Edicin: Dra. Giselda Peraza Rodrguez

Diseo: Tec. Yisleidy Real llufro
Emplane: Dunia Maritza Herrera Arozarena

Herminia Casandra Rodiles Martnez;

Juana Elena Campann Logaz y
Celinda Laza Caballero, 2008
Sobre la presente edicin
Editorial Ciencias Mdicas, 2008

Editorial Ciencias Mdicas

Centro Nacional de Informacin de Ciencias Mdicas
Calle I No. 202, esquina Lnea, Vedado,
Ciudad de La Habana, 10400, Cuba
Correo Electrnico: ecimed@infomed.sld.cu
Telfonos: 838 3375, 832 5338

Contenido
Parte I
Introduccin/ 1
CAPTULO 1.

Introduccin al Programa de Procedimientos Bsicos/ 2

Resea histrica en la formacin de tcnicos/ 2

Conceptos importantes en el Programa de Procedimientos Bsicos/ 3
Nuevas ramas especiales de la tcnica/ 4
Trabajo asistencial, docente y cientfico del Servicio
de Citohistopatologa/ 4
CAPTULO 2.

Programas de prevencin del cncer/ 6

Generalidades de los programas de deteccin del cncer/ 6

CAPTULO 3.

Laboratorio de citodiagnstico/ 8

Citopatologa / 8
Procedencia del material citolgico/ 8
Tipos de muestras en citopatologa exfoliativa/ 8
Clasificacin de las muestras citolgicas/ 9
Funciones del laboratorio. Su organizacin/ 10
CAPTULO 4.

Laboratorio de histopatologa/ 11

Introduccin al laboratorio/ 11
Procedencia del material biolgico y citolgico/ 12
Recepcin del material biolgico y citolgico/ 12
Procesamiento del material citolgico/ 13
Mtodos de la anatoma patolgica / 14
CAPTULO 5.

Procedimientos de la tcnica histopatolgica/ 17

Generalidades/ 17
Fijacin de los tejidos/ 17
CAPTULO 6.

Procesamiento del material biolgico y citolgico/ 24

Sustancias deshidratadoras/ 24
Aclaracin o desalcoholizacin/ 25
Infiltracin de tejidos/ 26
Procesador automtico de tejido/ 27
5

CAPTULO 7.

Medios de inclusin/ 28

Preparacin de los medios de inclusin/ 28

Inclusin con moldes de Leuckart/ 28
Equipo que se utiliza en la inclusin/ 29
CAPTULO 8.

Corte de los tejidos/ 30

Micrtomos de tejidos/ 30
Equipos necesarios durante del corte de los tejidos/ 34

Parte II
Introduccin/ 37
CAPTULO 9.

Bioseguridad en los laboratorios de citohistopatologa/ 38

Introduccin a la bioseguridad/ 38
Conceptos ms utilizados en bioseguridad/ 38
Principios de bioseguridad en los laboratorios/ 41
CAPTULO 10.

Tcnica de la toma de muestras citolgicas/ 42

Generalidades/ 42
Interrogatorio/ 42
Recoleccin de la muestra cervicovaginal/ 44
Extensin y fijacin del material citolgico/ 48
CAPTULO 11.

Cristalera del laboratorio/ 51

Generalidades de la cristalera/ 51
Clasificacin de la cristalera/ 51
Limpieza de la cristalera/ 52
CAPTULO 12.

Coloraciones en las tcnicas histolgicas y citolgicas/ 53

Coloracin/ 53
Coloracin de rutina o de informacin general/ 55
Coloracin en citologa/ 58
Medios de montaje/ 60

Bibliografa/ 61

PARTE I
Introduccin
El texto aborda, en esta primera parte, el estudio de los fundamentos
tcnicos y manipulaciones necesarias para llevar a cabo el estudio mediante el anlisis de muestras de clulas y tejidos, de seres vivos y fallecidos.
Estas muestras proceden de individuos o animales sanos y enfermos,
y permiten el diagnstico o investigacin causal de la enfermedad o de la
muerte.
Los lmites tecnolgicos de esta ciencia (citohistopatologa) se ampliaron para dar cabida a diferentes mtodos de estudios biolgicos que emplean tcnicas cada vez ms sofisticadas, como son: los cultivos celulares, la
inmunohistoqumica, la biologa molecular, la inmunofluorescencia, la
microscopia electrnica, etc.; las cuales se tratan en otros manuales, ya que
el presente libro responde a la necesidad de aprendizaje de los estudiantes
que cursan el primer ciclo, de primer ao, del perfil de citohistopatologa.

Introduccin al Programa de
Procedimientos Bsicos
Resea histrica en la formacin
de tcnicos
Antes del triunfo de la Revolucin no exista disciplina que aplicara
en sus contenidos las tcnicas de citohistopatologa. En todo el pas existan 13 laboratorios de anatoma patolgica construidos entre 1929 y
1950. El personal tcnico estaba integrado por 22 trabajadores de origen
emprico.
Por primera vez en Cuba, en 1951, se form la Escuela de Tcnicos
Generales en el Instituto Dr. Carlos J. Finlay en Ciudad de La Habana,
con cursos de 1 ao de duracin.
Posterior al triunfo de la Revolucin, en 1966, se inicia la formacin
de cursos de Anatoma Patolgica y Citologa con 1 ao de duracin en
Ciudad de La Habana y provincias capitales. Despus se extiende a 2
aos con nivel de ingreso de 9no. grado. En l971 se comienzan a formar
citotcnicos en cursos de 3 aos, convalidndose a los tcnicos auxiliares
de ambas especiales en 1972 por Resolucin Ministerial.
Tras un perodo de 5 aos recesan los cursos en La Habana, no as en
otras provincias. Se reanuda en 1980 con un perfil ms amplio: Citohistopatologa.
Se modifica el nivel de ingreso con 12mo. grado en 1984.
La Licenciatura en Tecnologa de la Salud, perfil de Citohistopatologa
surge en 1989, con 5 aos de duracin y cursos por encuentros.
Este nuevo modelo que se establece permite formar un perfil profesional con tres ciclos de formacin de egresados. Se propone una reestructuracin de los conocimientos de los laboratorios de citohis-topatologa,
pues responden a una particular necesidad de contar con un personal
capacitado, lo suficiente, para resolver con mxima calidad problemas tcnicos y profesionales, permitiendo la formacin del licenciado en tres
ciclos: un primer ciclo, con un ao de duracin egresando como tcnico
bsico, un segundo ciclo por dos aos, egresando como tcnico medio y
un tercer ciclo con dos aos de duracin, egresando como licenciado.
En el primer ciclo, con la asignatura de Procedimientos Bsicos, el propsito es brindar los elementos esenciales que le permitan estar preparados
2

para asumir su labor como tcnico bsico con el mximo de calidad; con
la capacidad de:
1. Realizar los procedimientos bsicos de inclusin de tejido, corte de
bloque y coloraciones habituales.
2. Realizar la toma de muestra en citologa cervicovaginal.
3. Realizar la recepcin y clasificar las muestras citolgicas de las
diferentes reas de salud.
4. Aplicar las normas ticas y de bioseguridad en los laboratorios.

Conceptos importantes
en el Programa de Procedimientos
Bsicos
Salud-enfermedad. El concepto de enfermedad se debe entender vinculado de forma estrecha al concepto de salud, que consiste en el equilibrio estable.
El concepto de enfermedad surge de la situacin que se conoce como:
estado de salud que, segn la definicin de la Organizacin Mundial de la
Salud (OMS), consiste en el perfecto equilibrio psquico, fsico y biosocial
del individuo con respecto al medio. La ruptura del equilibrio en cualquiera de estas esferas de la vida, si no es restituido de manera adecuada,
origina la enfermedad.
Segn la procedencia de los tejidos y la finalidad de sus estudios es
posible distinguir entre material histolgico y material anatomopatolgico.
Material histolgico. Toda muestra de tejido obtenida de un individuo o
animal sano, con la finalidad de investigar su estructura y composicin
normales, y se obtienen por lo habitual a partir de cada ser.
Material anatomopatolgico. Toda muestra procedente de individuos o
animales enfermos utilizados para el diagnstico o investigacin causal
de la enfermedad.
Para la mejor compresin sobre las diferentes funciones que se realizan en los laboratorios de citohistopatologa es necesario el dominio de
ciertas terminologas como:
1. Anatoma. Es la ciencia que estudia la forma y estructura del cuerpo,
sus partes, sus rganos y, de estos, su forma, color, tamao, peso,
posicin y su relacin con otros rganos. Esta anatoma segn el
estudio que se va realizar de divide en:
a) Anatoma macroscpica. Es la encargada de estudiar las estructuras
distinguibles a simple vista (forma, color, tamao, etc.).
b) Anatoma microscpica. Se encarga del estudio de las estructuras
internas no visibles a simple vista (cortes de tejidos por medio del
microscopio).
3

2. Patologa. Proviene del griego Pathos, enfermedad o dolencia y logos

tratado, es tambin una rama de las ciencias naturales que estudia las
causas, los mecanismos y efectos de la enfermedad en cualquier ser
vivo.
3. Anatoma patolgica. Estudia las alteraciones morfolgicas y
estructurales de los rganos, tejidos y clulas en el transcurso de la
enfermedad.
4. Citologa. Es la rama de la biologa que se dedica al estudio de las
clulas, como una entidad morfolgica y fisiolgica, en la estructura
de los seres vivos. Estudia las clulas que normalmente se desprendan
de cavidades o conductos del cuerpo humano y, que se pueden
encontrar, formando parte en lquidos corporales (orina, jugo gstrico,
lquido asctico, pleural, secreciones mamarias, esputos, secreciones
cervicovaginal, etc.).

Nuevas ramas especiales

de la tcnica
Con el desarrollo de la ciencia y la tcnica, y el trabajo multidisciplinario en hospitales y centros de investigacin, nuevas ramas de las
ciencias naturales se incorporan a la anatoma patolgica, y aportan mtodos de estudios, experiencias y resultados para abordar la investigacin de la enfermedad como son: la bioqumica, la inmunologa, la microbiologa y la radiologa, con lo cual se profundizan y completan los
conocimientos sobre los diferentes procesos patolgicos.
De igual manera, se aplican ramas especiales de la tcnica, como son:
la histoqumica, la microscopia electrnica, la microscopia de fluorescencia, el cultivo de tejidos y la historradiografa, con los cuales se ampla de forma constante el campo de observacin y demostracin de
muchas enfermedades.

Trabajo asistencial, docente

y cientfico del Servicio
de Citohistopatologa
Por todo lo anterior expuesto ya se est en condiciones de valorar la
importancia de la especialidad tanto en el trabajo asistencial como en el
docente y cientfico.
4

El trabajo asistencial permite estudiar, con todo rigor, las alteraciones estructurales que ocasionan las enfermedades para llegar a un diagnstico preciso, con lo cual se puede establecer un tratamiento efectivo a
los pacientes y determinar el pronstico de las enfermedades.
El aspecto docente permite formar al personal tcnico y licenciado
de la salud, con una idea objetiva y cierta de la base estructural de las
enfermedades, facilitando su compresin y dominio.
Desde el punto de vista cientfico, es un elemento de ayuda y de control
para aspirar a la mxima calidad del trabajo y posibilitar la labor cientfica
investigativa por medios ms rigurosos, en el que las relaciones causaefecto y estructura-funcin, estn presentes de manera permanente en el
estudio de cada enfermedad.
La citohistopatologa es una especialidad mdica bsica y pertenece
al grupo de las que reciben la denominacin de medios de diagnstico o
patologa clnica. Consta de las secciones de trabajo siguientes:
1. Secretara y archivo.
2. Laboratorio de histopatologa o anatoma patolgica.
3. Laboratorio de citodiagnstico o citologa.
4. Morgue.
5. Diagnstico.

Programas de prevencin
del cncer
Generalidades
El cncer es un problema de primer orden en la salud pblica mundial, representa la segunda causa de muerte en la mayora de los pases
desarrollados, solo precedida por las enfermedades vasculares.
Durante los prximos 25 aos, el ritmo de incremento del cncer,
tanto en su incidencia como en la mortalidad indica que se deben producir 300 millones de casos nuevos y 200 millones de muertes por esta
causa. Las dos terceras partes de estos casos, se pronostica que ocurran
en pases en desarrollo, de igual forma se estima que para el ao 2020 se
deben producir 20 millones de casos nuevos cada ao (los valores absolutos
de incidencia mundial han pasado de 6 millones en 1975 a 7,5 millones
en l995 y ms de 10 millones en el 2000). Quienes lo padecen, 70 % viven
en pases que cuentan con menos de 5 % de los recursos para el control
del cncer. En la actualidad se diagnostican poco ms de 6 millones de
casos nuevos al ao.
Los tumores de mama, pulmn, crvix, prstata y colon estn entre
los cnceres ms frecuentes y agrupan ms de 50 % de los casos nuevos
diagnosticados cada ao en pases de la regin. La deteccin temprana
incluye dos aspectos fundamentales: la educacin para la alerta o sospecha (tanto a la poblacin general como a los profesionales de la salud) y
el pesquizaje activo, para lo cual existen diferentes polticas, como por
ejemplo: deteccin como parte de la prctica mdica especfica y programas organizados de pesquisa.

Programa de la cavidad bucal

las
1.
2.
3.

El Programa de prevencin del cncer de la cavidad bucal consiste en

acciones siguientes:
Realizar examen una vez al ao, a la poblacin de 35 aos y ms.
Educar a la poblacin en el autoexamen bucal.
Remitir al estomatlogo, los pacientes con lesiones premalignas
diagnosticadas por medio del examen clnico.

Programa de deteccin de cncer de mama

1.
2.
3.
4.

Este Programa consiste en las acciones siguientes:

Autoexamen de las mamas.
Examen fsico de las mamas por un personal bien entrenado.
Mamografa a las mujeres de 50 aos o ms, cada 2 o 3 aos.
Combinacin.

Programa Nacional de Diagnstico Precoz del Cncer Cervicouterino

Las acciones generales del Programa de Diagnstico Precoz del Cncer Cervicouterino se abordan en la segunda parte de este libro. Para
profundizar en el tema ver el folleto: Programa nacional de diagnstico
precoz del cncer cervicouterino, Colectivo de Autores, ao 2001.

Laboratorio de citodiagnstico
Citopatologa
La citopatologa es la parte de la anatoma patolgica que, mediante
diversos procedimientos, estudia las alteraciones morfolgicas de las clulas desprendidas libremente en los epitelios de revestimientos o extrados de distintas zonas del cuerpo.

Procedencia del material

citolgico
El material citolgico para estudio tiene varios lugares de procedencia, estos son:
1. Consultorio del mdico de la familia.
2. Policlnico sin mdico de la familia.
3. Hospitales rurales que realizan acciones de atencin primaria de salud.
4. Consulta de toma de muestra a pacientes en estudio y seguimiento de
la consulta de patologa de cuello.
5. Saln de operaciones.
6. Consulta de biopsia por aspiracin con aguja fina (BAAF), puncin
por aspiracin por aguja fina (PAAF) o citologa por aspiracin con
aguja fina (CAAF), segn pases.
7. Otros estudios (orina, esputo, lquidos de la cavidad oral, cefaloraqudeo, plural, asctico, etc.)

Tipos de muestras en
citopatologa exfoliativa
Existen varios tipos de muestras en citopatologa exfoliativa, dependen
de la tcnica que se utilice para obtenerlas y la regin u rgano que se
explore, como se relacionan a continuacin:
1. Por exfoliacin forzada, mediante frotamiento o raspado con diversos
instrumentos en la epidermis y los epitelios que son continuacin
de esta.
8

2. Aprovechamiento de lquidos que transportan los elementos

descamados de forma espontnea (esputo, orina, secreciones, etc.).
3. Mediante instrumentos de exploracin o puncin, como es la puncin
por aguja fina que extraen el componente lquido con clulas en
suspensin procedente de zonas orgnicas internas (tracto
respiratorio, tubo gastrointestinal, cavidades serosas), de esta manera,
los territorios orgnicos que con mayor frecuencia se estudian
mediante citologa exfoliativa son:
a) Aparato genital femenino.
b) rbol respiratorio.
c) Aparato digestivo.
d) Vas urinarias.
e) Piel.
f) Cavidades orgnicas: peritoneal, pleural, pericrdica, raqudea y
articular.
En la actualidad, el desarrollo de esta ciencia se ha beneficiado de la
utilizacin, a gran escala, de la puncin con aguja fina, la continua ampliacin de esta modalidad a diferentes territorios orgnicos, y su empleo dirigido a travs de la visin por ecografa o mediante tomografa
computarizada que ha posibilitado el acceso a zonas ms profundas del
organismo.

Clasificacin de las muestras

citolgicas
Esta clasificacin como establece el Programa Nacional de Diagnstico Precoz del Cncer Cervicouterino se aplica, segn el caso, en las
reas de salud y a cargo de la jefa del Programa a esa instancia, que tiene
la responsabilidad del control y seguimiento en cuanto a la asistencia a
consulta de patologa de cuello, y a la repeticin de la prueba en caso de
pacientes con citologa anormal o no til para diagnstico. La clasificacin es la siguiente:
1. Caso nuevo: aquella mujer objeto del Programa, que se realiza por
primera vez en su vida la prueba citolgica, sea cual sea el resultado
de esta.
2. Reexamen: se le realiza reexamen a las mujeres que:
a) Sean objeto del programa, cuyo resultado anterior fue negativo y
desde la fecha de este hacia la actualidad han pasado 36 meses o
ms.
b) Mujeres, cuya prueba anterior fue no til y ha transcurrido ms
de 1 ao de dicho resultado.
9

3. Repeticin de no til: examen citolgico que se realiza a la mujer cuya

muestra anterior fue no til para diagnstico, antes de los 12 meses
posteriores de dicho resultado.
4. Fuera de Programa, consiste en:
a) Examen citolgico que se realiza fuera de la unidad de deteccin,
a la cual corresponde la paciente.
b) Examen que se realiza a una mujer que tenga menos de 25 aos
de edad.

Funciones del laboratorio. Su

organizacin
Est dirigido por un citopatlogo el cual mediante actividades tcnicas controla el cumplimiento de las normas establecidas, para obtener el
mximo de calidad en el trabajo de laboratorio, que incluye: la recepcin, procesamiento y diagnstico de los diferentes estudios citolgicos.
Las funciones son:
1. Recepcin de las muestras.
2. Inscripcin en el libro de registro.
3. Rotulacin.
4. Coloracin de las muestras.
5. Informe de resultados.
6. Preparacin de los lotes para su envo a los lugares de procedencia.
7. Preparacin de reactivos y colorantes (si fuese necesario).
8. Relacin con los policlnicos y los jefes de programas.
9. Mantener:
a) El archivo de lminas patolgicas.
b) El archivo de lminas revisadas en el control de la calidad.

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Laboratorio de histopatologa
Introduccin al laboratorio
El departamento de citohistopatologa es el lugar donde los patlogos
realizan sus actividades de diagnstico de forma conjunta con un colectivo de trabajadores que incluye: licenciados, tcnicos, tcnicos
evisceradores (morgue) o tanatlogos, personal secretarial y de servicio.
Por lo tanto consta de las secciones de trabajo siguientes:
1. Secretara y archivo.
2. Laboratorio de histopatologa.
3. Laboratorio de citodiagnstico.
4. Seccin morgue.
5. Seccin de diagnstico.
En el laboratorio es donde se realiza la tcnica histopatolgica y
citolgica que consiste en mtodos y procedimientos que tienen por objeto la preparacin de los tejidos y las clulas para su observacin al
microscopio, que permita realizar un diagnstico.
Las diferentes secciones del laboratorio tienen las tareas siguientes:
1. Procesamiento de los tejidos.
2. Procesamiento de lquidos corporales.
3. Inclusin de los tejidos.
4. Corte de los tejidos.
5. Tcnicas de coloracin general o de rutina.
6. Tcnicas de coloracin para evidenciar las estructuras de los
diferentes tejidos.
7. Tcnicas para demostrar sustancias qumicas conocidas (histoqumica).
8. Tcnicas por congelacin.
9. Tcnicas especiales (inmunohistoqumica, inmunofluorescencia,
microscopia electrnica, etc.).

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Procedencia del material

biolgico y citolgico
El trabajo de rutina en el laboratorio comienza desde que llega el
material biolgico y citolgico, objeto de estudio, puede tener diferentes
procedencias como son:
1. Quirrgicos (saln de operaciones).
2. Consultas externas.
3. De consultas especficas (patologa de cuello, consultas de piel, etc.).
4. De la morgue (en el caso de los fallecidos).
5. De las salas de los distintos servicios (medicina interna, nefrologa,
dermatologa, proctologa, etc.).
6. Ciruga menor.
7. De otras unidades asistenciales donde no se brinde el servicio de
anatoma patolgica.

Recepcin del material biolgico

y citolgico
La recepcin consiste en darle entrada en los libros de registros que
se encuentran habilitados para estos, como son los libros para: las
biopsias, necropsias y lquidos o material citolgico.

Seccin de secretaria y archivo

La secretaria es la encargada de inscribir en los libros correspondientes todos los estudios realizados en el servicio, digitalizar o mecanografiar todos los resultados y enviarlos a las distintas dependencias del
hospital. Adems, debe archivar copias de todos los informes, de modo
que todo el material manejado en el departamento est en funcin de la
asistencia, la docencia y la investigacin.
Una vez que estn identificadas las muestras de tejido o de rganos,
de forma correcta, se les realiza la descripcin macroscpica, o examen
macroscpico, que no es ms que describir de manera exacta el tipo de
material remitido para estudio, incluidas sus dimensiones, lesiones que
contiene, as como, especificar su morfologa, aspecto, coloracin y en el
caso de las piezas quirrgicas, sus relaciones con estructuras vecinas.
Tambin tiene como objetivo, seleccionar de manera detallada las
reas sobre las que se va a realizar el estudio microscpico, esto es de
12

gran importancia, ya que una seleccin errnea puede traer consecuencias muy graves.
Esta descripcin macroscpica se realiza por el personal facultativo
de este servicio (mdicos residentes y patlogos) y posteriormente se le
entrega al personal tcnico para el procesamiento del material biolgico.

Procesamiento del material

citolgico
Los lquidos citolgicos para su preservacin se deben, inmediatamente colocar en la centrfuga; equipo elctrico que se utiliza para apresurar la sedimentacin de sustancias suspendidas en los lquidos. El material suspendido se precipita por orden segn su peso.
Procedimiento para centrifugar. Consiste en varios pasos, los cuales
son los siguientes:
1. Extraer los portatubos del cabezal.
2. Colocar el lquido en los tubos de ensayo cnico, con igual proporcin
en cada uno. Si no tienen la misma medida se aade agua, a uno de
estos, hasta equilibrarlos.
3. Situar los portatubos, que contienen los tubos en posicin diametralmente opuestas, en la centrfuga y tapar esta ltima.
4. Conectar el motor, aumentando de forma gradual y progresiva la
velocidad hasta que alcance el nmero de revoluciones por minuto
deseado.
5. Cuando se ha centrifugado el tiempo requerido, desconectar el motor
y dejar que la centrfuga se detenga sola. Nunca apresurar con la
mano la detencin de la centrfuga. Recordar siempre que: se deben
balancear los portatubos; no aumentar la velocidad en forma brusca
y no apresurar la detencin manualmente.
El sedimento es el que se extiende por medio de un pincel en la lmina portaobjeto, y se fija en alcohol absoluto o 95 %.
El tiempo que se debe centrifugar depende del lquido, como se explica a continuacin:
1. Orina: 30 min.
2. Pleural: 15 min.
3. Cefalorraqudeo: 5 min.
4. Asctico: 5 min.

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Mtodos de la anatoma patolgica

En anatoma patolgica existen procedimientos o mtodos de estudios generales de investigacin, estos son:
1. Biopsias.
2. Exmenes citolgicos.
3. Necropsias.
4. Mtodos experimentales.

Mtodo de la biopsia
La biopsia (del griego bios, vida, y opsia, observar) es un procedimiento por medio del cual se obtiene un fragmento de tejido de un ser
vivo, con el objetivo de someterlo a un estudio microscpico y establecer
un diagnstico.
El trmino de biopsia se aplica a todo un proceso que comprende:
1. Obtencin o toma de la muestra.
2. Procesamiento mediante tcnicas histolgicas.
3. Observacin microscpica y su diagnstico.
El objetivo fundamental o ms frecuente de la biopsia es llegar al
diagnstico cierto del proceso o enfermedad que se estudia, o confirmarlo si se sospecha; pero tambin se puede hacer para determinar la respuesta o evolucin de una enfermedad.
El estudio bipsico tiene gran importancia, ya que es un mtodo de
investigacin y diagnstico riguroso y confiable, con el cual se obtiene la
informacin para poder definir una teraputica ya sea medicamentosa,
por radiaciones o quirrgica y establecer un pronstico para el enfermo.
Los tipos de biopsia son los siguientes:
1. Por incisin: consiste en la extirpacin de un fragmento de la lesin.
2. Por aspiracin: es la obtencin de un cilindro de tejido por medio de
un trocar que se introduce en el rgano que se necesita estudiar. Este
tipo de biopsia es til en rganos profundos, o no accesibles, como el
rin, el hgado, el pulmn, la prstata, etc.
3. Por excisin: es la extirpacin de toda la lesin, junto con un margen
adecuado de tejidos perifricos sanos.
4. Transoperatoria o por congelacin: es la biopsia que se realiza durante
el acto quirrgico, congelando el tejido, de modo que es posible llegar
a un diagnstico rpido, para la toma de una decisin sobre el
tratamiento a seguir.
5. Posoperatorio: es otro tipo de estudio mediante biopsia que se le hace
a las piezas u rganos que se extirpan, con el objeto de confirmar el
diagnstico.
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Muestras o exmenes citolgicos

La obtencin de muestras para realizar diagnsticos se realizan mediante las vas o mtodos siguientes:
1. Recoleccin de secreciones y excreciones.
2. Aspiracin, biopsia por aspiracin con aguja fina: citopuncin.
3. Impronta (secrecin mamaria).
4. Lquidos corporales, ejemplos: bronquial, cavidades serosas (asctico,
pleural cefalorraqudeo), esfago, estmago, orina, etc.
5. Cavidad oral (raspado): se dice que estos exmenes son variedades
de biopsia, pues se estudian las clulas de un ser vivo.

Mtodos de la necropsia o autopsia

La necropsia (del griego nekros, cadver, y opsis, visin u observacin) significa, etimolgicamente, investigar por uno mismo, y consiste
en el estudio de un cadver mediante su observacin cuidadosa, debe
incluir la apertura de sus cavidades y el examen de todos sus rganos y
tejidos, con el propsito de investigar en sus rganos la causa de la muerte o la enfermedad fundamental que tuvo que ver con este proceso.
Los tipos de necropsias son los siguientes:
1. Necropsia clnica: se realiza en los casos de muerte natural, cuando
el paciente llega a la etapa final de una enfermedad. La autopsia clnica,
pone el mximo inters en analizar los hallazgos observados con la
finalidad de conocer la historia natural de la enfermedad que provoc
la muerte.
2. Necropsia mdico legal: se realiza en los casos de muerte violenta
(homicidios, suicidios, accidentes) o sospechoso de tal. Trata de
investigar el origen de un fallecimiento cuando existen implicaciones
penales o civiles en la causa o en las circunstancias de este; la realiza
el mdico forense. Lo que se espera de esta necropsia es que ayude a
determinar el momento y las circunstancias de la muerte; informacin
que se puede emplear como prueba en el proceso de la accin judicial.

Mtodo de la citologa exfoliativa

Es un mtodo de investigacin que se emplea con frecuencia en la
prctica mdica, y consiste en la obtencin de muestras de exudados,
secreciones o lquidos de cualquier parte del organismo, para su examen
microscpico, con el objetivo de llegar a un diagnstico mediante el estudio
celular.
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Igual que la biopsia, se utiliza en cualquier alteracin o enfermedad

de diversos aparatos, tejidos u rganos, como son: las cavidades serosas,
la mucosa cervicovaginal, la cavidad oral, la orina, la secrecin mamaria, etc.
La indicacin fundamental de los exmenes citolgicos es el diagnstico del cncer y, sobre todo, de sus formas precoces o preclnicas en
cualquier tejido.

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Procedimientos de la tcnica
histopatolgica
Generalidades
El trabajo diario de rutina en un laboratorio de histopatologa se puede resumir en pasos fundamentales, como son:
1. Fijacin.
2. Procesamiento de los tejidos (deshidratacin, desalcoholizacin,
imbibicin o infiltracin en parafina lquida).
3. Inclusin.
4. Corte, coloracin y montaje.

Fijacin de los tejidos

La muerte es el nivel metablico a partir del cual las clulas que componen esos organismos no son capaces de recuperar las funciones vitales
que les son propias.
Los tejidos frescos sufren grandes alteraciones al poco tiempo de
haber sido tomados, siendo una de las principales tareas, la de impedir el
desarrollo post mrtem de estos procesos o cambios que pueden ser
putrefactivos debido a la invasin bacteriana de los tejidos muertos y
autolticos, provocados por la accin de enzimas de las propias clulas.
La autlisis es el proceso por el cual, despus de la muerte, se produce
la autodigestin enzimtica celular, tras la salida del contenido lisosmico
al citoplasma por rotura de la membrana delimitante de estos organelos.
La putrefaccin es el efecto ejercido por determinadas toxinas y
enzimas bacterianas sobre los tejidos. Los microorganismos que originan esta accin son de carcter saprofito y complementan el efecto ltico
de la autlisis hasta conseguir la total destruccin celular. A mayor temperatura ambiente, mayor velocidad de autlisis y putrefaccin, ya que la
temperatura ptima para la actividad enzimtica y bacteriana oscila entre 37 y 42 C. Los tejidos ricos en enzimas digestivas, como el pncreas,
o que fisiolgicamente contienen gran cantidad de grmenes, como el
intestino, sufren con mayor intensidad estos fenmenos.
17

Este primer paso, de gran importancia para la mayora de los estudios, se denomina fijacin, y consiste en someter al tejido a la accin de
sustancias llamadas fijadores, que interrumpen los procesos de degradacin que aparecen tras la muerte celular, para de esta forma conservar la
arquitectura y composicin tisular lo ms prxima posible a como se
encontraba en el organismo vivo. Produce una estabilizacin del tejido,
con detencin de la degradacin y coagulacin de las protenas celulares,
lo que permite su estudio posterior en condiciones muy parecidas a la
estructura viva.

Principios generales de la fijacin

La fijacin de los tejidos debe cumplir determinados principios para
que se obtengan resultados satisfactorios, estos son los siguientes:
1. No existe un mtodo universal de fijacin, o lo que es igual, un agente
fijador adecuado para un tejido puede no serlo para otro.
2. No todos los fijadores conservan de manera indefinida el tejido, por
lo que fijacin no equivale a conservacin tisular.
3. Un defecto de fijacin jams puede ser corregido.
4. Es intil realizar un estudio histolgico sobre un material con graves
defectos de fijacin.

Eleccin, accin y efecto del fijador

Es importante que el fijador seleccionado rena las condiciones necesarias, sobre todo, en dependencia de la tcnica que despus se va a
emplear sobre el tejido. Para las tcnicas de rutina este debe tener una
rpida accin, se debe poder utilizar con eficacia para un gran nmero
de tejidos y, adems, que se puedan utilizar distintas tcnicas de coloracin. El uso del fijador original determina lo que se puede o no hacer con
el tejido ms tarde.
De gran importancia es la capacidad de difusin del lquido fijador, la
cual puede variar segn sea uno u otro el rgano que se fije. Si el lquido
fijador penetra poco a poco en la materia, este se debe dividir en fragmentos de poco espesor, pues, en el caso contrario, pueden sufrir mayores o menores alteraciones los elementos que se encuentran en el interior de las piezas antes de que llegue a estos la accin fijadora.
El volumen del lquido fijador, como orientacin general debe ser de
10 a 20 veces el volumen de la pieza que se ha de fijar.
La duracin de la fijacin vara segn sea la composicin del lquido
y la naturaleza del objeto. Con frecuencia penetra el fijador en el material
18

con relativa lentitud, por lo cual no se deben sacar las piezas del lquido
demasiado pronto, pero tampoco conviene prolongar de manera indefinida la accin del fijador, pues muchos lquidos hacen el tejido quebradizo, dificultan su coloracin, lo maceran, lo contraen o lo hinchan a medida que pasa el tiempo.
Es preciso casi siempre lavar la pieza que se fija despus de eliminar
el exceso de lquido. El lavado se realiza mediante agua.

Efectos de la fijacin
El efecto ms marcado de la fijacin es la desnaturalizacin de las
protenas, esto trae como consecuencia que los tejidos se hagan ms resistentes a los efectos del procedimiento subsiguiente. Tambin los tejidos se hacen ms permeables que en su estado fresco natural. Algunos
fijadores tienen la desventaja de inhibir e interferir con las reacciones de
los colorantes, mientras que otros fijadores actan como mordientes que
aseguran cierto resultado de coloracin.

Fijadores fsicos y qumicos

Los fijadores se clasifican segn su mecanismo de accin, en dos grupos, fsicos y qumicos:
Fijacin por mtodos fsicos. Es el mtodo de eleccin para realizar
estudios morfolgicos o funcionales en las que se requiera conservar intacta la estructura antignica del tejido o su contenido enzimtico, se
emplea el enfriamiento por congelacin del tejido como mtodo para
detener la autlisis y putrefaccin tisular. La clave de una correcta fijacin del tejido por congelacin radica en que su realizacin sea instantnea, ya que un enfriamiento lento provoca la formacin de microcristales
intratisulares de hielo, susceptibles de agregarse con el paso del tiempo y
de producir rotura y dilaceracin tisular que pueden dificultar el diagnstico.
El procedimiento idneo para fijar tejidos por congelacin consiste
en utilizar isopentano a menos 50 C como agente de congelacin.
Otros mtodos fsicos son:
1. La desecacin: se emplea en los extendidos o frotis de sangre, lquidos
de puncin, etc. Si se realiza de forma rpida, detiene las alteraciones
debidas a los procesos enzimticos post mrtem y permite el empleo
ulterior de los fijadores qumicos.
2. El calor seco que se utiliza a menudo en bacteriologa sobre frotis
desecados es poco empleado en histologa.
19

Fijadores qumicos. Por lo general son lquidos que actan desnaturalizando e insolubilizando las protenas tisulares, lo cual bloquea la
autlisis por inactivacin enzimtica; adems, algunos de estos lquidos
fijadores impiden el crecimiento bacteriano. Pueden ser fijadores: simples y compuestos.
Las caractersticas fundamentales, que debe poseer el lquido fijador
ideal, son las siguientes:
1. Capacidad para bloquear de inmediato la autlisis: cuanto mayor sea
esta capacidad mejor es el agente fijador. El efecto del fijador depende
en especfico de su poder para producir la desnaturalizacin o
floculacin proteica, de forma que la actividad enzimtica del tejido
quede paralizada.
2. Efecto microbicida: que impida la accin bacteriana que es la
responsable de la putrefaccin.
3. No provocar sobre el tejido retracciones o distorsiones que
determinen anomalas en su arquitectura.
4. Induccin de cambios en la textura y composicin tisular que favorezca
la inclusin, corte y coloracin del material histolgico.
La primera cualidad se relaciona, fundamentalmente, con la velocidad de penetracin, que no es ms que la rapidez con que se difunde el
lquido fijador en el interior de un tejido. El tamao de la pieza que se ha
de fijar debe estar en proporcin directa a la velocidad de penetracin.
La velocidad de penetracin no es lo mismo que velocidad de fijacin. Un fijador puede penetrar muy rpido en el tejido y sin embargo
fijarlo de forma lenta, esto es debido a que el proceso de fijacin es un
fenmeno qumico determinado por el tiempo que cada fijador tarda en
precipitar y estabilizar los componentes qumicos de los tejidos.
La capacidad de un fijador para provocar fenmenos de retraccin o
distorsin tisular depende, con frecuencia, de los cambios inducidos sobre
la presin osmtica de los tejidos. En condiciones normales, la presin
osmtica de los tejidos es de 300 mOsm y se relaciona de forma directa
con su contenido en sales y protenas. Por este motivo cuando se somete
un tejido a la accin de un fijador y la presin osmtica de ambos no es
coincidente, se establece un flujo de agua entre el fijador y el tejido, en
funcin de un fenmeno de smosis, hasta que las dos presiones se equilibran. Si la presin del tejido es superior a la del fijador, el agua es arrastrada hacia el interior del tejido, producindose tumefaccin. En el caso
contrario, el agua fluye hacia el fijador y ocurre una retraccin tisular.
Las reglas generales que se deben considerar en el empleo de lquidos fijadores son las siguientes:
1. Para evitar la autlisis, el tejido se debe colocar lo ms rpido posible
en el lquido fijador.
20

2. El tejido debe estar seccionado en lmina de 0,5 de espesor mximo.

3. El volumen necesario de fijador est determinado por el tejido que se
va a fijar. La relacin entre el volumen del fijador y el de la pieza
debe ser de 20 a 1.
4. La presin osmtica del fijador y la del tejido deben ser equivalentes,
si es necesario, se debe compensar la del primero utilizando
disoluciones salinas como agente de disolucin.
5. El pH del fijador se debe aproximar al pH fisiolgico, salvo que en su
composicin deba contener cido.
6. El tiempo de fijacin es especfico para cada fijador, pero existe un
tiempo mximo de fijacin y no se debe sobrepasar.
7. El lavado despus de la fijacin tiene como objetivo eliminar los residuos
del agente fijador para impedir que interfiera en los dems pasos de
la tcnica de histologa.

Lquidos fijadores simples

Formol. El que ms se usa es el formol a 10 %, es el fijador por
excelencia en anatoma patolgica, ya que permite una buena conservacin de todos los detalles histolgicos del tejido, y realizar diversas tcnicas especiales.
En estado puro se trata de un gas txico y muy irritante para la mucosa,
que se disuelve con facilidad en el agua. En este estado en concentraciones entre 35 y 40 % y estabilizado con metanol, se denomina formalina
pura o formol.
Las ventajas de este fijador son las siguientes:
1. Es el fijador ms barato, y es el elegido para trabajos de rutina.
2. Conserva la estructura tisular.
3. Por ser buen desinfectante y no endurecer de manera excesiva los
tejidos, es un medio ptimo para conservar y almacenar biopsias y
piezas quirrgicas.
4. Provoca escasa retraccin tisular.
5. Posee una velocidad de penetracin intermedia.
6. Es un excelente fijador para el tejido adiposo y para lpidos en general,
as como para el tejido nervioso.
7. El proceso de fijacin puede ser acelerado o retardado, sin graves
inconvenientes, modificando la temperatura. En temperatura ambiente
se consigue una fijacin completa a partir de las 36 h, a 35 C entre
12 y 24 h, y a 55 C en solo 3 h.
8. Es compatible con la mayor parte de las tinciones que se utilizan en
el laboratorio.
21

Las desventajas son las siguientes:

1. Produce abundantes vapores irritantes sobre la conjuntiva y mucosa
nasal.
2. Por accin de la luz y del O2 atmosfrico se transforma de manera
progresiva en cido frmico. Esta sustancia tiene la propiedad de
disolver la cromatina nuclear muy rpido, por eso con el tiempo los
ncleos celulares adoptan un aspecto fantasma. Para evitar esto, el
formol se debe guardar en frascos opacos.
Alcohol etlico. Es un lquido transparente, inflamable, muy voltil, y
de olor agradable, se encuentra puro, llamado absoluto (100 %). Como
fijador se utiliza a 70; 90 y 95 %.
Las ventajas son las siguientes:
1. Preserva el glucgeno.
2. Se emplea en las extensiones citolgicas.
3. Fija y deshidrata el tejido a un tiempo.
4. Gran velocidad de penetracin.
5. Es un agente bactericida y, por tanto, buen conservante.

1.
2.
3.
4.

Las desventajas que tiene este fijador son las siguientes:

Es un fuerte reductor, por consiguiente, incompatible con fijadores
oxidantes como el dicromato potsico y el perxido de osmio.
Endurece y contrae de manera excesiva los tejidos.
Disuelve las grasas.
A medida que realiza la fijacin se diluye, al incorporar el agua que
extrae de los tejidos, por lo que pierde actividad poco a poco.

Acetona. Lquido transparente, inflamable, muy voltil y de olor dulzn. Su empleo como fijador simple est, en la prctica, limitada a los
mtodos histoqumicos e inmunohistoqumicos que preserva la estructura antignica y la actividad enzimtica de estos. Se emplea, por lo general, sin diluir a 4 C.
Tiene las ventajas siguientes:
1. Se utiliza en las tcnicas enzimticas.
2. Se emplea en la inmunohistoqumica.
Las desventajas que presenta son las siguientes:
1. Provoca contraccin tisular y, por tanto, graves artefactos que suelen
hacer intil su empleo en microscopia ptica convencional.
2. A temperatura superior de 40 C, disuelve las grasas.
22

Alcohol metlico. Se emplea con frecuencia para fijar frotis desecados

(sangre, mdula sea, ganglios, bazo, lquidos extrados por puncin, etc.).
cido smico. Tetraxido de osmio en disolucin a 1 o 2 %, conserva
muy bien las estructuras. Tie de negro las grasas y es poco penetrante.
El bicloruro de mercurio en disolucin saturada y el bicromato de
potasio a 3 %, son fijadores que actan como oxidantes, rara vez son
utilizados solos.

Fijadores compuestos
Son los que en su composicin utilizan ms de una sustancia qumica.
Es la combinacin de diversos fijadores simples en disoluciones complejas que pretende sumar las ventajas de cada uno, amortiguando sus inconvenientes, estos son los siguientes:
Zenker. Se utiliza para la fijacin del hgado y del tejido linfoide. Est
formado por:
Agua destilada: 1000 mL.
Cloruro de mercurio: 50 g.
Bicromato de potasio: 2,5 g.
Sulfato de sodio: 10 g.
Bouin. Formado por:
Disolucin saturada de cido pcrico (1 o 2 %) en agua destilada: 75 mL.
Formol (37 o 40 %): 25 mL.
cido actico glacial: 5 mL.
Se debe preparar antes de usar
Otros. El lquido de Carnoy, el Duboscq-Brasil, etc.
Bouin alcohlico (fijador de Duboscq-Brasil). Es una alternativa vlida a la mezcla clsica de Bouin, cuando la pieza que se debe fijar es algo
voluminosa (posee una velocidad de penetracin mucho ms elevada) y
cuando se precisa una fijacin especfica de sustancias hidrosolubles, como
el glucgeno que evita su disolucin. Est formada por:
Alcohol (80 %): 150 mL.
Formol (10 %): 60 mL.
cido actico: 15 mL.
cido pcrico: 1 g.
Se utiliza en la fijacin de biopsias renales y para el glucgeno.
Todos los fijadores tienen ventajas y desventajas que se deben tener
en cuenta en el momento de su utilizacin.
Tras la fijacin, lavar con abundancia en alcohol a 70 % hasta la decoloracin de la muestra para asegurar la total eliminacin del cido
pcrico. Una vez que se fija se puede almacenar el tejido en etanol a 80 %.
Tiempo de fijacin: de 4 a 24 h, en funcin del tamao.
23

Procedimientos de la tcnica
histopatolgica
Generalidades
El trabajo diario de rutina en un laboratorio de histopatologa se puede resumir en pasos fundamentales, como son:
1. Fijacin.
2. Procesamiento de los tejidos (deshidratacin, desalcoholizacin,
imbibicin o infiltracin en parafina lquida).
3. Inclusin.
4. Corte, coloracin y montaje.

Fijacin de los tejidos

La muerte es el nivel metablico a partir del cual las clulas que componen esos organismos no son capaces de recuperar las funciones vitales
que les son propias.
Los tejidos frescos sufren grandes alteraciones al poco tiempo de
haber sido tomados, siendo una de las principales tareas, la de impedir el
desarrollo post mrtem de estos procesos o cambios que pueden ser
putrefactivos debido a la invasin bacteriana de los tejidos muertos y
autolticos, provocados por la accin de enzimas de las propias clulas.
La autlisis es el proceso por el cual, despus de la muerte, se produce
la autodigestin enzimtica celular, tras la salida del contenido lisosmico
al citoplasma por rotura de la membrana delimitante de estos organelos.
La putrefaccin es el efecto ejercido por determinadas toxinas y
enzimas bacterianas sobre los tejidos. Los microorganismos que originan esta accin son de carcter saprofito y complementan el efecto ltico
de la autlisis hasta conseguir la total destruccin celular. A mayor temperatura ambiente, mayor velocidad de autlisis y putrefaccin, ya que la
temperatura ptima para la actividad enzimtica y bacteriana oscila entre 37 y 42 C. Los tejidos ricos en enzimas digestivas, como el pncreas,
o que fisiolgicamente contienen gran cantidad de grmenes, como el
intestino, sufren con mayor intensidad estos fenmenos.
17

Este primer paso, de gran importancia para la mayora de los estudios, se denomina fijacin, y consiste en someter al tejido a la accin de
sustancias llamadas fijadores, que interrumpen los procesos de degradacin que aparecen tras la muerte celular, para de esta forma conservar la
arquitectura y composicin tisular lo ms prxima posible a como se
encontraba en el organismo vivo. Produce una estabilizacin del tejido,
con detencin de la degradacin y coagulacin de las protenas celulares,
lo que permite su estudio posterior en condiciones muy parecidas a la
estructura viva.

Principios generales de la fijacin

La fijacin de los tejidos debe cumplir determinados principios para
que se obtengan resultados satisfactorios, estos son los siguientes:
1. No existe un mtodo universal de fijacin, o lo que es igual, un agente
fijador adecuado para un tejido puede no serlo para otro.
2. No todos los fijadores conservan de manera indefinida el tejido, por
lo que fijacin no equivale a conservacin tisular.
3. Un defecto de fijacin jams puede ser corregido.
4. Es intil realizar un estudio histolgico sobre un material con graves
defectos de fijacin.

Eleccin, accin y efecto del fijador

Es importante que el fijador seleccionado rena las condiciones necesarias, sobre todo, en dependencia de la tcnica que despus se va a
emplear sobre el tejido. Para las tcnicas de rutina este debe tener una
rpida accin, se debe poder utilizar con eficacia para un gran nmero
de tejidos y, adems, que se puedan utilizar distintas tcnicas de coloracin. El uso del fijador original determina lo que se puede o no hacer con
el tejido ms tarde.
De gran importancia es la capacidad de difusin del lquido fijador, la
cual puede variar segn sea uno u otro el rgano que se fije. Si el lquido
fijador penetra poco a poco en la materia, este se debe dividir en fragmentos de poco espesor, pues, en el caso contrario, pueden sufrir mayores o menores alteraciones los elementos que se encuentran en el interior de las piezas antes de que llegue a estos la accin fijadora.
El volumen del lquido fijador, como orientacin general debe ser de
10 a 20 veces el volumen de la pieza que se ha de fijar.
La duracin de la fijacin vara segn sea la composicin del lquido
y la naturaleza del objeto. Con frecuencia penetra el fijador en el material
18

con relativa lentitud, por lo cual no se deben sacar las piezas del lquido
demasiado pronto, pero tampoco conviene prolongar de manera indefinida la accin del fijador, pues muchos lquidos hacen el tejido quebradizo, dificultan su coloracin, lo maceran, lo contraen o lo hinchan a medida que pasa el tiempo.
Es preciso casi siempre lavar la pieza que se fija despus de eliminar
el exceso de lquido. El lavado se realiza mediante agua.

Efectos de la fijacin
El efecto ms marcado de la fijacin es la desnaturalizacin de las
protenas, esto trae como consecuencia que los tejidos se hagan ms resistentes a los efectos del procedimiento subsiguiente. Tambin los tejidos se hacen ms permeables que en su estado fresco natural. Algunos
fijadores tienen la desventaja de inhibir e interferir con las reacciones de
los colorantes, mientras que otros fijadores actan como mordientes que
aseguran cierto resultado de coloracin.

Fijadores fsicos y qumicos

Los fijadores se clasifican segn su mecanismo de accin, en dos grupos, fsicos y qumicos:
Fijacin por mtodos fsicos. Es el mtodo de eleccin para realizar
estudios morfolgicos o funcionales en las que se requiera conservar intacta la estructura antignica del tejido o su contenido enzimtico, se
emplea el enfriamiento por congelacin del tejido como mtodo para
detener la autlisis y putrefaccin tisular. La clave de una correcta fijacin del tejido por congelacin radica en que su realizacin sea instantnea, ya que un enfriamiento lento provoca la formacin de microcristales
intratisulares de hielo, susceptibles de agregarse con el paso del tiempo y
de producir rotura y dilaceracin tisular que pueden dificultar el diagnstico.
El procedimiento idneo para fijar tejidos por congelacin consiste
en utilizar isopentano a menos 50 C como agente de congelacin.
Otros mtodos fsicos son:
1. La desecacin: se emplea en los extendidos o frotis de sangre, lquidos
de puncin, etc. Si se realiza de forma rpida, detiene las alteraciones
debidas a los procesos enzimticos post mrtem y permite el empleo
ulterior de los fijadores qumicos.
2. El calor seco que se utiliza a menudo en bacteriologa sobre frotis
desecados es poco empleado en histologa.
19

Fijadores qumicos. Por lo general son lquidos que actan desnaturalizando e insolubilizando las protenas tisulares, lo cual bloquea la
autlisis por inactivacin enzimtica; adems, algunos de estos lquidos
fijadores impiden el crecimiento bacteriano. Pueden ser fijadores: simples y compuestos.
Las caractersticas fundamentales, que debe poseer el lquido fijador
ideal, son las siguientes:
1. Capacidad para bloquear de inmediato la autlisis: cuanto mayor sea
esta capacidad mejor es el agente fijador. El efecto del fijador depende
en especfico de su poder para producir la desnaturalizacin o
floculacin proteica, de forma que la actividad enzimtica del tejido
quede paralizada.
2. Efecto microbicida: que impida la accin bacteriana que es la
responsable de la putrefaccin.
3. No provocar sobre el tejido retracciones o distorsiones que
determinen anomalas en su arquitectura.
4. Induccin de cambios en la textura y composicin tisular que favorezca
la inclusin, corte y coloracin del material histolgico.
La primera cualidad se relaciona, fundamentalmente, con la velocidad de penetracin, que no es ms que la rapidez con que se difunde el
lquido fijador en el interior de un tejido. El tamao de la pieza que se ha
de fijar debe estar en proporcin directa a la velocidad de penetracin.
La velocidad de penetracin no es lo mismo que velocidad de fijacin. Un fijador puede penetrar muy rpido en el tejido y sin embargo
fijarlo de forma lenta, esto es debido a que el proceso de fijacin es un
fenmeno qumico determinado por el tiempo que cada fijador tarda en
precipitar y estabilizar los componentes qumicos de los tejidos.
La capacidad de un fijador para provocar fenmenos de retraccin o
distorsin tisular depende, con frecuencia, de los cambios inducidos sobre
la presin osmtica de los tejidos. En condiciones normales, la presin
osmtica de los tejidos es de 300 mOsm y se relaciona de forma directa
con su contenido en sales y protenas. Por este motivo cuando se somete
un tejido a la accin de un fijador y la presin osmtica de ambos no es
coincidente, se establece un flujo de agua entre el fijador y el tejido, en
funcin de un fenmeno de smosis, hasta que las dos presiones se equilibran. Si la presin del tejido es superior a la del fijador, el agua es arrastrada hacia el interior del tejido, producindose tumefaccin. En el caso
contrario, el agua fluye hacia el fijador y ocurre una retraccin tisular.
Las reglas generales que se deben considerar en el empleo de lquidos fijadores son las siguientes:
1. Para evitar la autlisis, el tejido se debe colocar lo ms rpido posible
en el lquido fijador.
20

2. El tejido debe estar seccionado en lmina de 0,5 de espesor mximo.

3. El volumen necesario de fijador est determinado por el tejido que se
va a fijar. La relacin entre el volumen del fijador y el de la pieza
debe ser de 20 a 1.
4. La presin osmtica del fijador y la del tejido deben ser equivalentes,
si es necesario, se debe compensar la del primero utilizando
disoluciones salinas como agente de disolucin.
5. El pH del fijador se debe aproximar al pH fisiolgico, salvo que en su
composicin deba contener cido.
6. El tiempo de fijacin es especfico para cada fijador, pero existe un
tiempo mximo de fijacin y no se debe sobrepasar.
7. El lavado despus de la fijacin tiene como objetivo eliminar los residuos
del agente fijador para impedir que interfiera en los dems pasos de
la tcnica de histologa.

Lquidos fijadores simples

Formol. El que ms se usa es el formol a 10 %, es el fijador por
excelencia en anatoma patolgica, ya que permite una buena conservacin de todos los detalles histolgicos del tejido, y realizar diversas tcnicas especiales.
En estado puro se trata de un gas txico y muy irritante para la mucosa,
que se disuelve con facilidad en el agua. En este estado en concentraciones entre 35 y 40 % y estabilizado con metanol, se denomina formalina
pura o formol.
Las ventajas de este fijador son las siguientes:
1. Es el fijador ms barato, y es el elegido para trabajos de rutina.
2. Conserva la estructura tisular.
3. Por ser buen desinfectante y no endurecer de manera excesiva los
tejidos, es un medio ptimo para conservar y almacenar biopsias y
piezas quirrgicas.
4. Provoca escasa retraccin tisular.
5. Posee una velocidad de penetracin intermedia.
6. Es un excelente fijador para el tejido adiposo y para lpidos en general,
as como para el tejido nervioso.
7. El proceso de fijacin puede ser acelerado o retardado, sin graves
inconvenientes, modificando la temperatura. En temperatura ambiente
se consigue una fijacin completa a partir de las 36 h, a 35 C entre
12 y 24 h, y a 55 C en solo 3 h.
8. Es compatible con la mayor parte de las tinciones que se utilizan en
el laboratorio.
21

Las desventajas son las siguientes:

1. Produce abundantes vapores irritantes sobre la conjuntiva y mucosa
nasal.
2. Por accin de la luz y del O2 atmosfrico se transforma de manera
progresiva en cido frmico. Esta sustancia tiene la propiedad de
disolver la cromatina nuclear muy rpido, por eso con el tiempo los
ncleos celulares adoptan un aspecto fantasma. Para evitar esto, el
formol se debe guardar en frascos opacos.
Alcohol etlico. Es un lquido transparente, inflamable, muy voltil, y
de olor agradable, se encuentra puro, llamado absoluto (100 %). Como
fijador se utiliza a 70; 90 y 95 %.
Las ventajas son las siguientes:
1. Preserva el glucgeno.
2. Se emplea en las extensiones citolgicas.
3. Fija y deshidrata el tejido a un tiempo.
4. Gran velocidad de penetracin.
5. Es un agente bactericida y, por tanto, buen conservante.

1.
2.
3.
4.

Las desventajas que tiene este fijador son las siguientes:

Es un fuerte reductor, por consiguiente, incompatible con fijadores
oxidantes como el dicromato potsico y el perxido de osmio.
Endurece y contrae de manera excesiva los tejidos.
Disuelve las grasas.
A medida que realiza la fijacin se diluye, al incorporar el agua que
extrae de los tejidos, por lo que pierde actividad poco a poco.

Acetona. Lquido transparente, inflamable, muy voltil y de olor dulzn. Su empleo como fijador simple est, en la prctica, limitada a los
mtodos histoqumicos e inmunohistoqumicos que preserva la estructura antignica y la actividad enzimtica de estos. Se emplea, por lo general, sin diluir a 4 C.
Tiene las ventajas siguientes:
1. Se utiliza en las tcnicas enzimticas.
2. Se emplea en la inmunohistoqumica.
Las desventajas que presenta son las siguientes:
1. Provoca contraccin tisular y, por tanto, graves artefactos que suelen
hacer intil su empleo en microscopia ptica convencional.
2. A temperatura superior de 40 C, disuelve las grasas.
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Alcohol metlico. Se emplea con frecuencia para fijar frotis desecados

(sangre, mdula sea, ganglios, bazo, lquidos extrados por puncin, etc.).
cido smico. Tetraxido de osmio en disolucin a 1 o 2 %, conserva
muy bien las estructuras. Tie de negro las grasas y es poco penetrante.
El bicloruro de mercurio en disolucin saturada y el bicromato de
potasio a 3 %, son fijadores que actan como oxidantes, rara vez son
utilizados solos.

Fijadores compuestos
Son los que en su composicin utilizan ms de una sustancia qumica.
Es la combinacin de diversos fijadores simples en disoluciones complejas que pretende sumar las ventajas de cada uno, amortiguando sus inconvenientes, estos son los siguientes:
Zenker. Se utiliza para la fijacin del hgado y del tejido linfoide. Est
formado por:
Agua destilada: 1000 mL.
Cloruro de mercurio: 50 g.
Bicromato de potasio: 2,5 g.
Sulfato de sodio: 10 g.
Bouin. Formado por:
Disolucin saturada de cido pcrico (1 o 2 %) en agua destilada: 75 mL.
Formol (37 o 40 %): 25 mL.
cido actico glacial: 5 mL.
Se debe preparar antes de usar
Otros. El lquido de Carnoy, el Duboscq-Brasil, etc.
Bouin alcohlico (fijador de Duboscq-Brasil). Es una alternativa vlida a la mezcla clsica de Bouin, cuando la pieza que se debe fijar es algo
voluminosa (posee una velocidad de penetracin mucho ms elevada) y
cuando se precisa una fijacin especfica de sustancias hidrosolubles, como
el glucgeno que evita su disolucin. Est formada por:
Alcohol (80 %): 150 mL.
Formol (10 %): 60 mL.
cido actico: 15 mL.
cido pcrico: 1 g.
Se utiliza en la fijacin de biopsias renales y para el glucgeno.
Todos los fijadores tienen ventajas y desventajas que se deben tener
en cuenta en el momento de su utilizacin.
Tras la fijacin, lavar con abundancia en alcohol a 70 % hasta la decoloracin de la muestra para asegurar la total eliminacin del cido
pcrico. Una vez que se fija se puede almacenar el tejido en etanol a 80 %.
Tiempo de fijacin: de 4 a 24 h, en funcin del tamao.
23

Procesamiento del material

biolgico y citolgico
Sustancias deshidratadoras
La deshidratacin es el proceso que tiene por finalidad la eliminacin
completa del agua del tejido o muestra tisular para que se pueda embeber de forma adecuada el tejido en los medios de inclusin que no sean
hidrosolubles, como por ejemplo la esponja que tiene la capacidad de
absorber el lquido.
La deshidratacin se puede realizar utilizando cualquier reactivo capaz de absorber el agua de los tejidos. El ms utilizado es el alcohol
etlico, en tantos por cientos de menor a mayor, ejemplos: 70; 80 y 90 %,
hasta alcoholes absolutos.
La deshidratacin debe ser gradual, ya que los tejidos llevados de
manera directa del agua o de una disolucin acuosa al alcohol concentrado o viceversa, sufren la distorsin de los elementos tisulares debido a
las corrientes producidas por la mezcla de alcohol y del agua.
Las desventajas son las siguientes:
1. Un tiempo prolongado en el deshidratador produce endurecimiento
del tejido.
2. El tratamiento muy largo en concentraciones ms altas de alcohol
(por encima de 80 %) hace el tejido quebradizo y difcil de cortar.
3. El tratamiento muy largo en concentraciones ms bajas de alcohol
(por debajo de 70 %), macera los tejidos.

Para diluir un alcohol

Se hace, por lo general, diluyendo un alcohol de alta graduacin con
agua corriente o destilada. De manera que para obtener un alcohol de un
porcentaje determinado, se sustrae el porcentaje requerido del porcentaje del alcohol que se va a diluir y la diferencia es la cantidad de agua
que se debe utilizar por ejemplo: si el alcohol requerido es de 50 % y el
que se tiene es de 95 %, se toman 50 mL del alcohol que se dispone (es
decir de 95 %) y se aade agua corriente o destilada hasta completar 95
mL. El alcohol obtenido de esta manera es de 50 % de graduacin.
24

Los deshidratadores utilizados en el laboratorio son los siguientes:

Alcohol etlico. Es el que con mayor frecuencia se usa para la deshidratacin de los tejidos. Acta rpido, no es txico y es confiable. Puede
haber alguna distorsin del tejido debido al encogimiento producido por
el alcohol. La inmersin prolongada en concentraciones altas de alcohol
etlico se debe evitar. El alcohol absoluto, en especfico, causa
sobreendurecimiento de los tejidos.
Alcohol metlico. Es txico, como es un deshidratante, se emplea para
las preparaciones de frotis e improntas de sangre o tejidos.
Alcohol isoproplico. Sustituto excelente del alcohol etlico. Es miscible
con agua, xilol, cloroformo, alcohol, ter y aceite de cedro.
Dioxan. Es un reactivo incoloro, algo txico, que se puede usar tambin en el proceso de infiltracin. Es capaz de deshidratar y aclarar de
forma directa desde el agua, es miscible con la parafina.
Cuando se usa el alcohol absoluto como el deshidratador final, el
tejido se debe desalcoholizar (por lo general en xilol) antes de la infiltracin con parafina, debido a que el alcohol absoluto no es fcilmente
miscible con esta.

Aclaracin o desalcoholizacin
La desalcoholizacin, se refiere a la extraccin del alcohol, mientras
que el trmino aclaracin se refiere de manera especial a la de hacer
transparentes los elementos titulares. Muy a menudo el mismo reactivo
se puede utilizar para ambos propsitos y en consecuencia el trmino
aclaracin actualmente se emplea en ambos sentidos. Los lquidos que se
emplean para estos propsitos no son siempre intercambiables, ya que
no todos los agentes desalcoholizadotes se pueden utilizar como
aclaradores y no todos los agentes aclaradores son solventes en las resinas usadas como medio de montaje.

Sustancias aclaradoras
Despus que los tejidos han sido deshidratados con el alcohol, se
emplean sustancias aclaradoras, cuya funcin es desalcoholizar de forma consecuente. Estas se deben mezclar sin dificultad con el alcohol.
Tambin debe ser un disolvente de la parafina, de manera que facilite la
penetracin de este medio de infiltracin. En otras palabras, se sustituye
el deshidratador por un lquido que despus se mezcla con la parafina.
25

Las sustancias aclaradoras ms utilizadas en el laboratorio son las

siguientes:
Xilol. Es un lquido incoloro, y es el agente aclarador que con mayor
frecuencia se emplea en la actualidad. Se utiliza para aclarar, tanto en el
proceso de infiltracin, como en el proceso de montaje, sin embargo, el
tratamiento prolongado con xilol en el proceso de infiltracin se debe
evitar, dado que endurece demasiado los tejidos. Estos son aclarados
mejor a partir del alcohol absoluto. El xilol es algo rpido en el desplazamiento del alcohol y es fcilmente miscible con la parafina.
El cerebro se endurece demasiado, si se utiliza el xilol en el proceso
de infiltracin. Es preferible el toluol para procesar los cortes del cerebro.
Benzol. Tiene el inconveniente de que se evapora muy rpido en el
bao de parafina. Produce un mnimo de encogimiento. Por lo que se
debe evitar su empleo, de ser posible. Algunos autores lo prefieren como
un aclarador en el proceso de infiltracin porque penetra y aclara los
tejidos muy rpido.
Cloroformo. No es inocuo del todo, por lo que su empleo se debe
evitar en lo posible. Se utiliza para aclarar los tejidos en el proceso de
infiltracin, su penetracin es ms lenta que el xilol, no hace el tejido tan
quebradizo como este, pero produce algn endurecimiento.
Toluol. Sus propiedades son similares a las del xilol. Aclara menos
rpido que este o que el cloroformo, pero no endurece los tejidos. Por
tanto, es un buen agente aclarador, en el cual se pueden dejar los tejidos
durante la noche en caso de necesidad. Es un lquido incoloro y fcilmente
miscible con la parafina. Aclara mejor a partir del alcohol absoluto. Se
utiliza para aclarar, tanto durante la infiltracin, como durante el montaje.

Infiltracin de tejidos
Despus que los tejidos se aclararon por completo con un agente
aclarador (xilol, cloroformo, dioxan, etc.), es necesario infiltrarlos con
un medio de soporte o sostn para poder tomar los cortes histolgicos.

Medios de imbibicin e inclusin

Los tejidos fijados no son lo suficientemente firmes, o adherentes
como para permitir su corte sin algn medio de soporte para que se mantengan las clulas y estructuras intercelulares en su propia relacin unas
con otras. Para este fin, se cuenta con medios de imbibicin e inclusin,
siendo el que ms se utiliza la parafina. Tambin la celoidina aunque no
se usa con frecuencia, y el carbowax (cera soluble en agua).
26

La parafina es un hidrocarburo saturado, blanco y homogneo, producto de la destilacin del petrleo. Existen dos tipos de parafinas, la
blanda (de 45 a 50 C) y la dura. La parafina que se utiliza en el trabajo
diario es la dura con un punto de fusin entre 56 y 62 C, ya que permite
obtener cortes ms finos, suministra un mejor apoyo o sostn a los objetos duros y es adecuada para temperaturas del laboratorio.
Tambin existen otras sustancias que se pueden utilizar para infiltrar
e incluir que son la celoidina y la gelatina, pero son muy costosas.

Procesador automtico de tejido

El procesador automtico de tejido es un equipo elctrico automtico que consta de 12 vasos, de una plataforma circular que sostiene los
vasos de cristal para los distintos lquidos utilizados, un brazo vertical
central que sostiene las tapas de los vasos, un rotor que hace girar un
cesto en el cual van colocados los fragmentos de tejidos y un mecanismo
de reloj el cual hace que el brazo central se eleve a intervalos prefijados
y gire para hacer pasar el cesto de un vaso a otro.
Los primeros 6 vasos de alcoholes ascendentes, 3 de estos con graduaciones de: 70; 80 y 90 %) y 3 vasos de alcohol absoluto, que deshidratan
completamente el tejido. A continuacin le siguen 4 vasos de xilol, cuya
funcin es extraer el alcohol de los tejidos, ya que este no es miscible con
la parafina. Esta funcin recibe el nombre de desalcoholizacin y las
sustancias que se emplean para esta finalidad reciben el nombre de
aclaradores, y entre estos se tiene el xilol, que es el ms utilizado.
Este equipo posee 2 vasos de parafina lquida, cuya funcin es infiltrar
el tejido para darle consistencia interna. Su temperatura se regula mediante el termostato, la cual debe estar por encima de 2 o 3 C del punto
de fusin de la parafina que se utiliza, y se prepara el tejido para el siguiente paso de la tcnica histolgica que es la inclusin.

27

Medios de inclusin
Preparacin de los medios
de inclusin
La inclusin consiste en sustituir el agua tisular por un medio lquido
capaz de solidificarse en las condiciones adecuadas de temperatura, en
este caso parafina, a fin de proporcionar a la muestra la consistencia y
homogeneidad adecuadas para obtener secciones translcidas muy delgadas, mediante un instrumento denominado micrtomo.
Este trmino de medios de inclusin se designa a todos los materiales
utilizados por los tcnicos para sostener y rodear los tejidos que despus
han de ser seccionados en cortes finos, siendo esta su funcin.
Por necesidad, los medios de inclusin deben ser sustancias capaces
de ser convertidas, con facilidad, del estado lquido al slido. La parafina es slida a la temperatura ambiente normal, el calor la hace lquida o
fluida, de manera tal, que puede penetrar (infiltrar) los tejidos.
Existen dos tipos de parafina, la blanda y la dura. La blanda se utiliza
en histoqumica, ya que las enzimas se destruyen a los 55 oC y esta tiene
un punto de fusin que oscila entre los 45 y 55 oC.

Inclusin con moldes

de Leuckart
El procedimiento consta de cinco pasos o etapas, que se explican a
continuacin:
1. Primero se colocan los moldes de Leuckart sobre una superficie lisa
y plana, de manera que forme un rectngulo o un cuadrado, para lo
que hay que tener en cuenta el tamao del fragmento.
2. Se llena el espacio con parafina lquida y se coloca el nmero de
identificacin en uno de los lados del bloque en la parte superior de
este (utilizar pinzas calientes).
3. Se introduce en el fondo y centro del molde el fragmento de tejido,
colocndolo por la superficie ms lisa hacia el fondo, se hace una
ligera presin sobre la superficie del tejido con el objetivo de que en
el momento de obtener el corte, este se obtenga completo.
28

4. Se deja enfriar hasta que la parafina se endurezca, o lo que es lo

mismo, est solidificada por completo y se retiran los moldes de
Leuckart para liberar el bloque con el tejido incluido.
5. Una vez formados los bloques, se le retira el exceso de parafina de
los lados para evitar dao a la cuchilla al pasar al corte de tejidos.
as
1.
2.
3.
4.

La piel y rganos tubulares se incluyen de forma vertical, para que

se puedan observar todas las capas que constituyen a estos tejidos.
Las ventajas de la parafina son las siguientes:
Se pueden obtener cortes histolgicos muy finos.
El procesamiento es muy rpido.
Es fcil conseguir cortes histolgicos seriados.
Los bloques se pueden almacenar por tiempo indefinido.

Las desventajas de la parafina son las siguientes:

1. La parafina muy caliente lleva al tejido a ponerse vidrioso o
quebradizo, lo que dificulta su corte.
2. El tratamiento prolongado en parafina causa arrugas y el
endurecimiento del tejido.
3. Los tejidos difciles de infiltrar (huesos, dientes, ojos, cerebro, etc.) necesitan un tiempo ms largo de inmersin, de otra forma se rompen al
cortarlos. Sin embargo, un tiempo largo en inmersin con parafina
trae como consecuencia una distorsin tisular producida por el calor.
4. El procedimiento de infiltracin con la parafina elimina la grasa,
debido a que los deshidratantes y aclaradores utilizados son disolventes
de las grasas.

Equipo que se utiliza en la inclusin

En la inclusin se utiliza el dispensador de parafina que es un equipo
elctrico en cuyo interior se deposita la parafina con la que se a de incluir
los tejidos. Este tiene la funcin de mantener la parafina lquida y a la
temperatura ideal.
La temperatura se debe verificar de forma regular por medio de un
termmetro.

29

Corte de los tejidos

Micrtomos de tejidos
Los cortes de los tejidos se realizan con instrumentos mecnicos de
precisin, que permiten obtener cortes finos con un espesor de 2 a 3 .
Los instrumentos destinados para los cortes de tejidos reciben el
nombre de micrtomos de parafina. Estos pueden ser de dos tipos:
1. Micrtomo horizontal o de desplazamiento: est formado por: el
cuerpo del micrtomo, portacuchilla con sus prisioneros, portabloques
con sus prisioneros, y por el tornillo macromtrico y micromtrico.
2. Micrtomo vertical o rotatorio (Fig. 8.1): posee las mismas partes
que el micrtomo horizontal con la diferencia que en el micrtomo
horizontal el bloque est fijo y se mueve la cuchilla, y en el rotatorio
la cuchilla se mantiene fija y el que se mueve es el bloque. En este
micrtomo cada corte se adhiere al siguiente y salen en forma de
cintas (Fig. 8.2).
Estos micrtomos utilizan en los cortes cuchillas de acero inoxidable, para su cuidado deben ser afiladas y acentuadas una vez acabado el
corte, cada una de estas deben tener un lomo, un mango y una caja que lo
proteja.

Fig. 8.1. Se observa un micrtomo.

30

Fig. 8.2. En este micrtomo cada corte se adhiere al siguiente

y salen en forma de cintas.

Cuchillas del micrtomo

Las cuchillas se elaboran con acero de gran dureza y calidad (Fig. 8.3).
Se clasifican de la forma siguiente:
1. Plano-cncava: una cara es plana y la otra cncava.
2. Semicncava-plana: una cara es algo cncava y la otra plana.
3. Plano-plano: ambas caras son planas.
4. Bicncava: ambas caras son cncavas.
Las cuchillas vienen provistas con un lomo que garantiza el ngulo
correcto, y de un mango que se atornilla en la base de la cuchilla. Este
lomo debe ser exclusivo de una cuchilla y no se utiliza nunca para otra
cosa.

Fig. 8.3. Muestra la cuchilla, confeccionada con acero.

31

Afilador automtico
Este equipo ahorra mucho tiempo y esfuerzo en el afilado de las cuchillas, y entre otras ventajas que presentan se puede plantear que con
estos el filo de la cuchilla permanece recto, en contraste con la cuchilla
afilada a mano, que se desgasta ms en el centro que en los extremos,
hasta que se hace curvo.
El afilador automtico consiste, en esencia, en un sujetador de la
cuchilla y en un disco afilador, con un mecanismo para mover uno con
relacin al otro, y otro mecanismo para virar la cuchilla por la otra cara
a intervalos regulares.
El asentado de la cuchilla tiene como objeto agudizar el filo de esta.
Si la cuchilla solo ha perdido el filo sin mellarse, basta con asentarla,
por lo que un asentador de cuero fijo sobre una base de madera, es
preferible.

Montaje de los cortes histolgicos con albmina de Mayer

Las lminas portaobjetos deben estar limpias, las cuales son cubiertas
con una gota de albmina de huevo de manera fina y uniforme. Las lminas se deben marcar en este momento con la identificacin correcta.
Las dificultades que se pueden encontrar en los cortes de tejidos son
las siguientes:
1. Fallo en la formacin de cintas de un bloque, causado por:
a) El bloque no se encuentra paralelo al borde de la cuchilla.
b) Cuchilla no afilada.
c) Parafina muy dura.
d) Cuchilla demasiado inclinada.
e) Los cortes histolgicos son muy gruesos.
2. Cintas desiguales o fragmentadas causadas por:
a) Bloques en forma de cua o rebajados de manera irregular.
b) El borde del bloque no se encuentra situado de forma paralela
con el borde de la cuchilla.
c) Irregularidad en el borde de la cuchilla.
d) La parafina no es homognea.
3. Cortes histolgicos comprimidos, arrugados o apelotonados, causados
por:
a) La cuchilla no est afilada.
b) El bloque de parafina est demasiado caliente.
c) Hay parafina en el borde de la cuchilla.
32

d) Los cortes histolgicos son muy finos.

e) Los tornillos del micrtomo estn flojos.
f) Inclinacin de la cuchilla muy vertical.
4. Rasgaduras o araazos a lo largo de la cinta, causados por:
a) Borde de la cuchilla sucio.
b) Demasiado ngulo de la cuchilla.
c) Arenillas, polvos, cristales de cloruro de mercurio, calcio, suturas
o cuerpos extraos en la parafina o en el tejido.
d) Mellas en el borde de la cuchilla.
5. Desgarraduras y desmoronamiento de los cortes histolgicos, causados
por:
a) Fijacin incompleta de los tejidos.
b) Deshidratacin o aclaracin incompleta de los tejidos.
c) Infiltracin incompleta del tejido por la parafina.
d) La parafina estaba demasiado caliente durante la infiltracin, la
inclusin o durante ambos.
6. Resalto de la cuchilla sobre el bloque, causado por:
a) ngulo de la cuchilla demasiado vertical.
b) Cuchilla embotada o de filo romo.
c) Parafina muy suave o habitacin muy calurosa.
7. Cortes adherentes a la cuchilla, causados por:
a) Electricidad esttica.
b) Borde de la cuchilla sucio.
c) ngulo de la cuchilla demasiado vertical.
8. Cortes de grosores variables, causados por:
a) Tornillos de fijacin del bloque o de la cuchilla flojos.
b) ngulo insuficiente de la cuchilla.
c) Bloques muy grandes.
d) Bloques muy duros.
e) Micrtomo no ajustado de manera correcta.

Tejido quebradizo o duro de cortar

Un tejido se hace quebradizo o duro de cortar (Fig. 8.4) por cualquiera de las causas siguientes:
1. Tratamiento prolongado en ciertos fijadores.
2. Inmersin prolongada en concentraciones altas de alcohol etlico.
3. Tratamiento prolongado en ciertos agentes aclaradores.
33

4. Tratamiento prolongado en parafina derretida o infiltracin en

parafina sobrecalentada.
5. Desecacin de los tejidos antes de ser colocados en el fijador, por
ejemplo: biopsias dejadas en el saln de operaciones.
6. Fallo en darle un procesamiento especial a algunos tejidos, los cuales,
cuando son tratados con mtodos rutinarios, se tornan duros y
quebradizos.

Fig. 8.4. Muestra un ejemplo de tejido quebradizo y duro de

cortar.

Equipos necesarios durante

el corte de los tejidos
Bao histolgico. Es un equipo elctrico, que puede ser de forma
redonda, cuadrada o rectangular, que se utiliza para hacer flotar los cortes de parafina, de manera que se extiendan y puedan ser tomados con
una lmina portaobjetos. Est constituido especficamente por un recipiente que contenga agua. Este recipiente descansa sobre una base que
posee resistencias elctricas que permiten calentar el agua. La temperatura se controla con un termostato, el cual mantiene el calor deseado y
estable, entre los 40 y 45 oC.
Los cortes se recogen con lminas portaobjeto y se llevan a la estufa,
para esto, los medios que se utilizan para adherir el corte a la lmina son:
1. Albumina de Mayer:
a) Clara de huevo: 50 mL.
b) Glicerina: 50 mL.
34

Se unen ambas disoluciones, se filtra y se le agrega timol para evitar

el hongo.
2. Gelatina: este producto se le agrega al agua y se disuelve mediante el
calor, removiendo el agua antes de comenzar a cortar, se sirve como
pegamento al corte una vez que se coloca en la estufa.
Estufa u horno de parafina. Es la encargada de adherir los cortes a las
lminas mediante el calor, es un equipo elctrico que mantiene una temperatura uniforme que debe ser regulada algo por encima (de 2 a 3 C)
del punto de fusin de la parafina que se utiliza. Este tipo de horno no
necesita exceder la temperatura de 80 C, ya que el punto de fusin de
las distintas parafinas nunca excede esta temperatura, por lo que se hace
innecesario un horno de ms calor.
La temperatura debe ser chequeada de forma peridica y el horno se
mantiene limpio de parafina.
La parafina licuada se guarda en el horno en cantidades suficientes
para la inclusin y adems para la infiltracin, cuando los vasos de parafinas del procesador estn rotos. El horno posee entrepaos ajustables a
distinta altura, para guardar la parafina y, adems, para colocar las lminas portaobjetos con los tejidos recin cortados para utilizar.

35

PARTE II
Introduccin
En esta parte, se le brinda al estudiante los conocimientos con relacin a los fundamentos tcnicos y a las manipulaciones en la tcnica de la
toma de muestra, teniendo en cuenta las modificaciones del cuello uterino que pueden cambiar las particularidades de dichas tcnicas.
Se estudia la cristalera del laboratorio, que no es ms que un conjunto de elementos de diferentes formas, tamao y funcin, fabricados de
manera exclusiva con vidrio, y tienen determinadas caractersticas, como
son: la resistencia a las acciones mecnicas, qumicas y trmicas. Se aborda
tambin su clasificacin.
Las estructuras contenidas en las preparaciones histolgicas y
citolgicas poseen poco o ningn contraste, por lo que no se pueden
distinguir; este inconveniente queda resuelto por la propiedad que tienen
los distintos componentes de las clulas y tejidos de incorporar y fijar,
con intensidad variable, determinadas materias colorantes, y que se conoce como afinidad para el tinte. Por lo tanto, tambin se le brinda al estudiante los conocimientos sobre la coloracin, proceso que se logra por
medio de tcnicas y procedimientos, para lo que se utilizan sustancias
colorantes o tintes que hacen que las estructuras adquieran color y sean
visibles al microscopio.

37

Bioseguridad en los laboratorios

de citohistopatologa
Introduccin a la bioseguridad
Se define como bioseguridad al conjunto de medidas tcnico-ingenieras y cientficas, encargadas de proteger de los riesgos al hombre, la comunidad y al ambiente.
En el desarrollo de la ciencia actual, fue necesario instaurar la bioseguridad como una rama de esta, para que asuma las funciones de preservar la salud de los trabajadores y para establecer las normas generales y
especficas de bioseguridad, con la finalidad de prevenir accidentes, enfermedades y patologas generadas por la exposicin a factores de riesgo
biolgico, as como, encargarse de la preservacin y cuidado del medio
ambiente, tan importante en los das actuales.
Su objetivo de accin son los medios donde se puedan establecer
riesgos fsicos, qumicos, ambientales y biolgicos que incluyen al humano. Para de esta forma proteger a los trabajadores, a los usuarios y a la
comunidad.
Su sujeto es el personal expuesto de forma directa o indirecta a estos
riesgos.

Conceptos ms utilizados
en bioseguridad
Accidente de trabajo. Hecho repentino, relacionado casualmente con
la actividad laboral, que produce lesiones al trabajador o incluso su muerte.
Incidentes de trabajo. Hecho que ocurre con frecuencia durante el
trabajo y que tiene una connotacin imperceptible en cuanto al riesgo
aparente.
Riesgo. Se entiende por riesgo: la posibilidad de sufrir un dao, estar
expuesto a un peligro, tener un accidente, etc.; que pueden ser por diversas causas y en cualquier medio donde se encuentre una persona. Los
tipos de riesgo son: fsico, biolgico, qumico, y condicionados por factores humanos y ambientales.
38

Riesgo fsico
Son los agentes fsicos que pueden provocar dao considerable o mortal al ser humano, entre estos se pueden considerar: mecnicos, trmicos, elctricos, radiaciones y fuego:
1. Mecnicos: objetos que interfieren el movimiento, mal ubicados en el
laboratorio; objetos en movimiento (motores, centrfugas, compresores, etc.), con energa potencial (balones de gases) y los sometidos
a diferentes presiones.
2. Trmicos: altas temperaturas (mecheros en mal estado que puedan
provocar quemaduras) y bajas temperaturas (cmaras fras, ambiente
muy fro que provocan hipotermia).
3. Riego de fuego: incendios que ocurren ocasionados por accidentes
qumicos y elctricos debido a: mala ubicacin de sustancias
inflamables y explosivas, manipulacin incorrecta de sustancias
qumicas, mal estado de cables elctricos o falsos contactos, toma
elctrica defectuosa y equipos elctricos deficientes.

Riesgo biolgico
Se presentan en los trabajadores de centros asistenciales y de investigaciones, ya sean: biolgicas, mdicas o afines. El riesgo principal es el
biolgico y esto puede traer como consecuencia el sufrir una enfermedad infecciosa, la cual se adquiere mediante el contagio con un agente
patgeno.
Estas enfermedades constituyen en la actualidad un amplio sector de
la medicina, no obstante, an conservan un valor fundamental en las patologas del individuo, independientemente del rpido progreso alcanzado en sus estudios.
Dentro de las causas de riesgo biolgico se encuentran: accidentes
por puncin, derrames de sustancias contaminadas, produccin de
aerosoles, cristalera rota contaminada, aspiracin por pipeteo bucal, trabajo con centrfugas de forma incorrecta, etc.
La Organizacin Mundial de la Salud (OMS), en correspondencia
con lo anterior, clasific los laboratorios en distintos niveles de seguridad, estos son los siguientes:
1. Laboratorios bsicos (nivel de bioseguridad I): se utilizan en
actividades de enseanza bsica. Se trabaja con agentes del grupo de
riesgo I (escaso riesgo individual y comunitario).
2. Laboratorios bsicos (nivel de bioseguridad II): se utilizan en los
servicios primarios de salud y en la enseanza universitaria. Se trabaja
con agentes del grupo de riesgo II (riesgo individual moderado y
limitado para la comunidad).
39

3. Laboratorio de contencin (nivel de bioseguridad III): se utilizan

para el diagnstico especializado e investigaciones. Se trabaja con
agentes del grupo de riesgo III (riesgo individual elevado y bajo para
la comunidad en general).
4. Laboratorio de mxima contencin (nivel de bioseguridad IV): se
utilizan para actividades especializadas. Se trabaja con agentes del
grupo de riesgo IV (riesgo individual y comunitario elevado).
los
1.
2.
3.

40

Las medidas de proteccin ante la posibilidad de riesgo qumico en

laboratorios de citohistopatologa son las siguientes:
Control del personal que debe permanecer en el laboratorio.
Control estricto y almacenamiento adecuado de los productos.
Organizar el trabajo que se ha de realizar durante la manipulacin de
sustancias qumicas en el laboratorio, teniendo en cuenta:
a) Cuando se mezclan disoluciones y se utilizan cidos concentrados,
siempre hay que agregar el cido al agua con mucho cuidado y en
cantidades pequeas.
b) Las disoluciones que despidan olores o vapores fuertes y
desagradables, mezclar dentro de extractores de vapores o en
lugares ventilados a favor de la corriente del aire.
c) No dejar caer gotas o derramar lquidos en superficies slidas.
d) No soplar la ltima gota de la pipeta.
e) No dejar caer el contenido de la pipeta directamente en un lquido,
sino dejarlo rodar por las paredes del recipiente.
f) No homogenizar con la pipeta soplando e inhalando despus.
g) Evitar la formacin de aerosoles peligrosos. Reducirlos y
contenerlos.
h) Abrir con cuidado los frascos de las sustancias qumicas y no
acercarlos a la cara.
i) Al pesar reactivo en polvo evitar las corrientes de aire y protegerse
para evitar contaminacin e inhalacin de las partculas de los
reactivos.
j) Lavarse las manos con frecuencia.
k) En el caso de contacto con la piel, los ojos o mucosas lavar con
abundante agua y buscar asistencia mdica si fuera necesario.
l) No comer ni maquillarse en ningn laboratorio.
m)Utilizar guantes para trabajar con reactivos que por sus
caractersticas lo requieran.

4. Tener al alcance y conocer el uso adecuado de los medios de proteccin

contra incendio.

Riesgo condicionado a factores humanos y ambientales

Adicionalmente existe un grupo de riesgo fundamental constituido
por factores humanos y ambientales, los cuales pueden incrementar considerablemente el riesgo de los otros factores y que pueden estar relacionados con: las aptitudes y habilidades para el trabajo, el estado fsico y
psicolgico del trabajador, su capacidad intelectual y su entrenamiento
laboral, as como, la organizacin general del laboratorio y las condiciones ambientales de este.

Principios de bioseguridad
en los laboratorios
Los principios de bioseguridad son: chequear y organizar el trabajo
que se ha de realizar y precauciones con el personal expuesto, de forma
directa o indirecta a los riesgos, como se explica a continuacin:
1. Chequear y organizar el trabajo que se ha de realizar:
a) Chequear diariamente los equipos de trabajo.
b) Control del personal que debe permanecer en el laboratorio.
c) Mantener el laboratorio limpio y organizado, entre otros.
2. Precauciones con el personal expuesto de forma directa o indirecta a
los riesgos:
a) No se debe poner las manos en la cara, ojos y boca durante el
trabajo.
b) Prohibido el pipeteo bucal, uso de guantes para manipular muestras
o material infeccioso.
c) Cambio de guantes segn lo requiera el trabajo.
d) Para evitar accidentes, no ingerir o guardar alimentos en el local
del laboratorio.

41

Tcnica de la toma de muestras

citolgicas
Generalidades
El mdico patlogo doctor George N. Papanicolaou (1917), con la
colaboracin del doctor Herbert Trau, ide la valoracin del material
celular de la vagina y del cuello uterino para el diagnstico del cncer
cervicouterino. La tcnica de recoleccin se mejora con la creacin de la
esptula de madera por el doctor Ernest Ayre (1947), con la que se puede raspar la superficie del cuello y obtener clulas de ambos epitelios, as
como, de la pared vaginal para el estudio de la funcin ovrica.
Es decir, que de acuerdo con la descamacin de clulas en el extendido, se consideran dos tipos de estudios: la citologa orgnica y la citologa
funcional:
1. La citologa orgnica: comprende el estudio de las condiciones
inflamatorias, premalignas y malignas del epitelio del rgano en
cuestin.
2. La citologa funcional: permite el estudio, con gran margen de
seguridad, de la funcin ovrica por medio de la exfoliacin celular
de las paredes vaginales.

Interrogatorio
Al llegar la paciente a la consulta se le debe interrogar sobre:
1. Si ha sido sometida a exploracin bimanual, si ha mantenido relaciones
sexuales, o ha utilizado duchado vaginal las 24 h antes, lo que es una
contraindicacin para tomar la muestra.
2. Si ha utilizado medicamentos por va vaginal durante la semana
anterior, tampoco se debe recoger la muestra.
3. Si ha sido sometida a manipulacin sobre el cuello uterino: legrado,
colocacin o retiro de dispositivo intrauterino (DIU), etc., se debe
esperar al menos 2 semanas.
4. Si se han utilizado tratamientos destructivos, esperar no menos de
4 meses (antes de este tiempo constituye una contraindicacin para
la valoracin del estudio citolgico).
42

Datos generales y clnicos

Se adquieren mediante el interrogatorio en concordancia con el estudio que se ha de evaluar, teniendo en cuenta:
1. Nombre y apellidos.
2. Edad.
3. Direccin.
4. Frmula menstrual.
5. ltima menstruacin.
6. Partos, abortos.
7. Tratamiento hormonal, tipo y tiempo.
8. Enfermedades de transmisin sexual.
Dentro de los sntomas y trastornos menstruales ms frecuentes que
se deben explorar estn los siguientes:
1. Leucorrea o flujo vaginal: es el producto de la exudacin anormal de
los genitales, es la exageracin de un fenmeno normal producido
por agentes biolgicos, u otros procesos.
Es importante sealar que en la vagina existe un exudado normal
producto de la secrecin de glndulas mucosas cervicales, secrecin
de glndulas vestibulares, etc.; cuyo volumen no excede 1 mL en 24 h.
2.Prurito: picazn, comezn, molestia, irritacin, escozor, que puede
llegar a ser intenso, lo que produce enrojecimiento en la vulva y en la
vagina.
3. Dolor: impresin penosa que se produce en un rgano o parte de
este, transmitida al cerebro por los nervios sensitivos.
4. Metrorragia: hemorragia permanente, irregular, no peridica, casi
nunca expresin de una menstruacin normal, sino de una verdadera
hemorragia, consecuencia de algn trastorno.
5. Hipomenorrea: cuando la disminucin de la menstruacin afecta, tanto
el nmero de das, como la cantidad de prdida por das.
6. Oligomenorrea: menstruacin que sucede de forma regular, cada
4 semanas, de intensidad normal, pero de duracin, en lugar de 3 a 5
das, es de 1 a 2 das.
7. Opsomenorrea: menstruacin, que sin llegar a faltar, se espacia,
transcurriendo, de una a otra, ms de 4 semanas.
8. Hiperpolimenorrea: cuando la hemorragia es mayor de lo normal en
intensidad y dura ms de 5 das.
9. Amenorrea: ausencia de la menstruacin permanente o temporal.
10. Menopausia: perodo que se inicia con el cese de la actividad cclica
del ovario y se manifiesta en la clnica por la ausencia de la
menstruacin, por lo general posterior a los 45 aos de edad.
43

Recoleccin de la muestra
cervicovaginal
El material e instrumental necesario en la tcnica de la toma de la
muestra se debe esterilizar de forma correcta; estos se relacionan a continuacin:
1. Espculo (Fig. 10.1).
2. Citospray o alcohol absoluto o 95 %.
3. Lminas portaobjetos con extremo esmerilado o sin este.
4. Aplicador montado (Fig. 10.2).
5. Aplicador sin montar o citobruch (Fig. 10.3).
6. Esptulas (Fig. 10.4).
7. Guantes.
8. Lpiz grafito o lpiz diamante.

Fig. 10.1. Diferentes tipos de espculos.

Fig. 10.2. Aplicadores montados.

Fig. 10.3. Cepillo o citobruch.

44

Fig. 10.4. Distintos tipos de esptulas.

Despus del interrogatorio y estar la paciente en condiciones para

realizarle la muestra, esta se realiza con la secuencia siguiente:
1. Colocar la paciente en posicin ginecolgica.
2. Colocar el espculo sin el uso de lubricantes y exponer el cuello uterino
(Fig. 10.5).

Fig. 10.5. Se observa el espculo desprovisto de lubricante y

en la posicin que debe quedar si estuviera en la vagina.
Tambin se puede ver la utilizacin de guantes por el tcnico.

3. Retirar el exceso de secrecin o mucus, si fuese necesario, sin tocar la

superficie del cuello.
4. El raspado se debe realizar en la lnea de unin escamocolumnar (EC),
donde se unen los dos epitelios, y se realiza de la forma siguiente:
a) Cuando esta lnea coincide con el orificio externo del cuello (OE),
se introduce el remo saliente de la esptula de Ayre en el orificio
y se gira 360 en el sentido de las manecillas del reloj, esto se
realiza con cierta presin.
45

b) Cuando no se ve la unin escamocolumnar, por encontrarse dentro

del canal endocervical, la toma de la muestra se hace con la esptula
de Ayre de igual forma a la descrita, si fuera necesario se puede
utilizar un aplicador sin montar o citobrush, se introduce este en
el canal y se hace un giro de 360.

Cepillado de canal
La utilizacin de cepillo o citobruch es una forma prctica y fcil de
rastrear la zona de transformacin del endocrvix, siempre y cuando el
orificio cervical sea permeable. Es posible tambin el uso de aplicadores
sin montar en casos donde el orificio es muy estrecho, proporcionando,
de igual forma, la observacin de los elementos de las zonas antes mencionadas.
Para la recoleccin de la muestra se debe realizar el procedimiento
siguiente:
1. Colocar a la paciente en posicin ginecolgica.
2. Colocar el espculo sin el uso de lubricantes y exponer el cuello uterino.
3. Retirar el exceso de secrecin o mucus cervical.
4. Introducir el extremo o escobilla en el orificio y hacer un giro rpido
de 180 en sentido de las manecillas del reloj.
Nota: contraindicado en pacientes embarazadas.

Extensin del material del canal cervical

Se realiza la extensin sobre el portaobjeto, desenrollando (Fig. 10.6),
en contra de las manecillas del reloj, ya que facilita la extensin del material dado el carcter mucoide de este en esa zona, despus se procede a la
fijacin inmediata.

Fig. 10.6. Extensin del material citolgico con el cepillo o

citrobuch, desenrollando en contra de las manecillas del
reloj.

46

Condiciones del cuello que modifican la tcnica de toma de la muestra

Con respecto a la tcnica de la toma de muestra, existen condiciones del
cuello que la modifica, ejemplarizados en los casos siguientes:
1. La ectopia: que es la presencia del epitelio cilndrico hacia el exocrvix,
el desplazamiento de este se produce ms all del orificio externo, en
la observacin macroscpica impresiona como un enrojecimiento
alrededor del orificio cervical que, en ocasiones, cuando es extensa o
est inflamada, puede sangrar.
En este caso donde la unin escamocolumnar se encuentra fuera del
orificio externo la tcnica de la toma de la muestra se hace en este
sitio con la parte redondeada de la esptula.
2. Cuello puntiforme: se observa con frecuencia en pacientes sin partos
o partos por cesrea.
En este caso se debe auxiliar de un aplicador sin montar o citobruch
para obtener material de la zona de transformacin, ya que la
estrechez del orificio no permite el paso de la esptula de Ayre.
3. Prolapso uterino: es el descenso o cada de la matriz (tero)
relacionado con los ligamentos del rgano, proyectndose por la vagina
hasta salir fuera de la vulva.
En este caso se debe humedecer el cuello y la esptula con suero
fisiolgico, y proceder con la tcnica habitual de la toma de la muestra,
antes explicada.
4. Plipo endocervical: formacin blanda, por lo general pediculada,
que se desarrolla en una membrana mucosa, a expensas de algunos
de los elementos de esta.
La tcnica de la toma en este caso es raspar alrededor del orificio y
tomar muestra de todo del plipo, incluso de la base.
En ocasiones, ante lesiones sangrantes de cuello, con zona de erosin
y prdida de tejido, es difcil visualizar la zona escamocolumnar; en
estos casos la tcnica de la toma de la muestra se debe realizar en la
zona de menos necrosis.
5. Sangramiento (relacionado con neoplasias de cuello): el raspado del
cuello o de la lesin exoftica, no se extiende en la lmina portaobjeto
de la forma habitual, sino que con la esptula, se dan golpecitos en
toda la lnea de extensin de esta, para as desprender las clulas y
dems materiales slidos que quedan adheridos a la esptula.
6. Histerectoma abdominal: operacin de extirpar de forma parcial o
total por va vaginal o abdominal el tero o matriz. En caso de

47

histerectoma subtotal o parcial, se extirpa el cuerpo del tero, y queda

el cuello uterino. La toma de muestra se realiza de la forma siguiente:
a) Histerectoma total por enfermedad maligna: se obtiene la muestra
de los pliegues de la cpula, con la esptula en su parte redondeada,
se procede de la forma habitual para la extensin y fijacin de la
muestra.
b) Histerectoma subtotal: se realiza la toma de muestra de la forma
habitual, extensin y fijacin.

Extensin y fijacin del material

citolgico
La extensin se realiza sobre la lmina portaobjeto, rpido y en un
solo sentido, para evitar que las clulas se sequen o daen, debe ser un
extendido amplio, ni muy fino ni muy grueso, y se trata de ocupar 80 %
de la superficie de la lmina (Fig. 10.7).

Fig. 10.7. Extensin del material citolgico, en un solo sentido,

con la utilizacin de una esptula sobre la lmina portaobjeto.

La fijacin es un mtodo que tiene como funcin preservar la morfologa y composicin qumica de la clula y conservar, de manera exquisita, la arquitectura ntima celular (Fig. 10.8). Esto es posible cuando el
fijador logra:
1. Penetrar la membrana celular.
2. Precipitar las protenas en la forma ms fina, para que el aspecto
celular no se modifique.
48

Fig. 10.8. Se observa el mtodo de fijacin de la muestra

citolgica, con la utilizacin del citospray.

Lo anterior, por tanto, es requisito indispensable en los exmenes

citolgicos, y los errores cometidos hacen inadecuada la preparacin.
Las sustancias fijadoras que se utilizan son las siguientes:
1. Aerosol (citospray).
2. Alcohol etlico por encima de 90 %.
3. Alcohol-ter a partes iguales.
El tiempo mnimo de fijacin debe ser 15 min y el tiempo mximo de
fijacin 10 das.
Se extiende sobre el preparado pulverizando el fijador que es de plstico hidrosoluble. Se seca inmediatamente de forma que las extensiones
fijadas pueden permanecer as durante largo tiempo, incluso, varios aos,
pudiendo ser transferidas por correo de un centro a otro sin problemas.

Defectos de fijacin
La fijacin se puede afectar por las razones siguientes:
1. La fijacin prolongada: deteriora la capacidad celular para la posterior
captacin de los colorantes.
2. Situar el nebulizador a menos de 15 cm del portaobjeto: provoca que
el gas impacte las clulas y adquiera un aspecto reticular con reas
sin clulas y con zonas donde los elementos celulares se sitan en
grupos muy gruesos.
3. Tanto si se utilizan nebulizadores o lquidos fijadores, fijar de inmediato
es imprescindible, ya que su retraso produce cambios celulares por
desecacin, estos cambios son: degeneracin celular, aumento del tamao
49

1.
2.
3.
4.

50

y aspecto borroso de los ncleos que impide su correcta evaluacin.

Los defectos de extensin del material (canal, crvix) son los siguientes:
Extensiones muy finas o estiradas.
Extensiones muy gruesas.
Extensiones en forma circular, remolino o zig zag.
Extensiones donde se ha pasado ms de una vez por el mismo sitio.

Cristalera del laboratorio

Generalidades de la cristalera
La cristalera del laboratorio no es ms que un conjunto de elementos de diferentes formas, tamaos y funcin, fabricadas de forma exclusiva con vidrio.
Estos elementos o unidades se fabrican con boroscilicato, que es un
material que tiene determinadas caractersticas muy importantes, como
son: la resistencia a las acciones mecnicas, qumicas y trmicas.

Clasificacin de la cristalera
La cristalera se clasifica en dos grandes grupos:
1. Cristalera general:
a) Cristalera de trabajo.
b) Cristalera de almacenamiento.
2. Cristalera de medicin:
a) Cristalera volumtrica.
b) Cristalera no volumtrica.
Ejemplos:
1. Cristalera general de trabajo: mortero, embudo, Koplin, tubos de
ensayo, lminas portaobjetos, placas de Petri.
2. Cristalera general de almacenamiento: estn todos los frascos que
sirven para almacenar reactivos, colorantes y diferentes disoluciones;
estos pueden ser de color mbar o transparente.
3. Cristalera de medicin volumtrica: los recipientes de medicin
volumtrica son vasijas de formas y tamaos muy diversos que se
utilizan para medir diferentes volmenes de lquido, ejemplos: probetas
graduadas, pipetas, copas graduadas.
4. Cristalera de medicin no volumtrica: reciben el nombre de
recipientes aforados, solo permiten medir la capacidad de volumen,
ejemplo: matraz y erlenmeyer.
51

Limpieza de la cristalera
Se simplifica realizando, de manera inmediata, enjuague con agua
corriente despus de utilizarla.
Despus se debe lavar con detergente y abundante agua corriente, y
por ltimo con agua destilada.

52

Coloraciones en las tcnicas

histolgicas y citolgicas
Coloracin
Las estructuras contenidas en las preparaciones histolgicas y
citolgicas poseen poco contraste o carecen de este por completo, lo que
hace que no se puedan distinguir. Este inconveniente queda resuelto por
la propiedad que tienen los distintos componentes de las clulas y tejidos
de incorporar y fijar con intensidad variable determinadas materias colorantes y que se conoce como afinidad para el tinte.
La coloracin es un proceso en el cual, por medio de las tcnicas y
procedimientos, se utilizan sustancias colorantes o tintes, lo que hace
que las estructuras adquieran el color y sean visibles al microscopio.
Los colorantes se clasifican por su origen de la forma siguiente:
1. Colorantes naturales (animal y vegetal):
a) La hematoxilina se extrae del palo de campeche, planta leguminosa
arborescente que procede de Amrica Central. Se presenta en
forma de cristales, es incolora o algo amarillenta, poco soluble en
agua y ms en alcohol. La hematoxilina por s sola no es una
sustancia colorante, pero cuando se oxida da lugar a la hematena,
que s ofrece propiedades para los tintes, y que constituye el
proceso de maduracin. Se acelera cuando se agregan medios
qumicos o sustancias oxidantes como el xido de mercurio rojo,
o por la exposicin al aire. La maduracin espontnea comienza
unas 2 semanas despus de preparado el colorante y se prolonga
de 2 a 3 meses, transcurridos los cuales pierde de manera paulatina
su afinidad para el tinte.
b) La hematena tampoco colorea el tejido, si no se une con una
base, como: el alumbre de aluminio o potasio o con el amonio,
con la que forma una sal denominada laca, por lo que es necesario
filtrarla todos los das.
c) El carmn es un colorante natural animal de color escarlata hecho
de los cuerpos triturados de escarabajos o cochinillas. Tambin
se utiliza en combinacin con el aluminio que es una base.
53

2. Colorantes artificiales (tambin llamados colorantes sintticos o de

anilina (colorantes cidos, bsicos y neutros).
Son numerosos, se fabrican en grandes industrias, pero tienen el inconveniente de que son inestables, brindan un cambio amplio, tanto en
color como en accin.
La anilina es un derivado incoloro del alquitrn de hulla, es la base
con la cual son hechos muchos colorantes sintticos.

Funcin de las sustancias colorantes

Las sustancias colorantes tienen la propiedad de transmitir su color a
otros elementos y permiten el contraste entre estructuras vecinas, por su
afinidad para el tinte.

Composicin qumica de los colorantes o las combinaciones

colorantes
Los colorantes tienen un grupo inico portador o responsable del
color en la sustancia colorante que recibe el nombre de grupo cromgeno.
Atendiendo a este grupo cromgeno, los colorantes artificiales se clasifican en:
1. Colorantes cidos: son sales cuya propiedad colorante o ion cromgeno
est unido al componente cido (anin) de su molcula, y el
componente bsico es incoloro, ejemplo: la eosina (citoplasma de las
clulas rico en protenas).
2. Colorantes bsicos: son sales cuya propiedad colorante o ion
cromgeno est unido al componente bsico (catin) de su molcula
y el componente cido es incoloro, ejemplo: la hematoxilina (ncleo
rico en cidos nucleicos).
3. Colorantes neutros o indiferentes: son sales cuyas propiedades
colorantes van unidas a dos componentes: a una base colorante y a
un cido colorante. Por lo tanto, cualquiera de sus iones cromgenos
es responsable de la coloracin.
Las sales son sustancias inicas, unas positivas (cationes) y otras negativas (aniones).

54

Coloracin de rutina
o de informacin general
Esta coloracin da una visin, en conjunto, de la estructura de un
tejido o de la arquitectura de una lesin. La tcnica que se emplea es fcil
y rpida, los colorantes de rutina que, prcticamente en la mayora de los
casos, establecen un diagnstico histopatolgico correcto, son la
hematoxilina y la eosina.

Coloracin de hematoxilina y eosina

Hematoxilina de Harris: esta coloracin est compuesta por:
Hematoxilina: 5 g.
Alcohol absoluto: 50 mL.
Alumbre de potasio o amonio: 100 g.
Agua destilada: 1000 mL.
Oxido rojo de mercurio: 2,5 g.
Se disuelve la hematoxilina en el alcohol absoluto, y el alumbre de
potasio en el agua destilada con ayuda del calor. Una vez disuelto se
retira del fuego y se le agrega la hematoxilina que est disuelta en el
alcohol; se coloca nuevamente al fuego y cuando comience a hervir se
retira de este y se le agrega poco a poco el xido rojo de mercurio, cuando este est disuelto, se coloca nuevamente al fuego hasta que hierva y
tome un color prpura; se retira del fuego y se enfra en cubeta con hielo.
La hematoxilina se debe filtrar diariamente para eliminar el precipitado que produce la hematoxilina, debido al xido de mercurio que se
agrega en su preparacin.
Eosina acuosa: est compuesta por:
Eosina: 1 g.
Agua destilada: 80 mL.
Alcohol (95 %): 20 mL.
Eosina alcohlica: est compuesta por:
Eosina: 1 g.
Agua destilada: 20 mL.
Alcohol (95 %): 80 mL.
La diferencia entre la eosina acuosa y la alcohlica es que la eosina
acuosa tiene la propiedad de teir el tejido de diversas tonalidades, desde

55

el rojo hasta el rosado, o sea, permite una diferenciacin entre un tejido

y otro, mientras que la eosina alcohlica tie al tejido de una sola tonalidad, ya sea rojo o rosado.
El colorante hematoxilina se debe filtrar diariamente antes de comenzar a realizar el procedimiento, para eliminar el precipitado que se
forma en la superficie, debido al xido de mercurio.
El procedimiento es el siguiente:
1. Desparafinar en tres cambios de xilol, en este paso la funcin que
realiza el xilol es eliminar toda la parafina existente en el porta objeto
y en el tejido.
2. Hidratacin, no es ms que suministrarle agua, poco a poco, al tejido
mediante alcoholes descendentes, alcohol absoluto, alcohol a 90 %,
alcohol a 80 %, alcohol a 70 % y agua corriente, que es donde
verdicamente se completa la hidratacin. Hay que recordar que
despus del xilol se coloca un alcohol absoluto, al no contener agua
ambos lquidos son miscibles y as el alcohol arrastra el xilol del tejido,
lo cual permite que pase el alcohol de 90 % sin que las lminas ni
tejidos sufran dao ya que el xilol no es miscible con ninguna sustancia
que contenga agua y el alcohol a 90 % contiene 10 % de agua.
3. Del agua corriente pasa a la hematoxilina que es un colorante nuclear,
en este paso el ncleo se sobrecolorea y para darle el tono que se
desea obtener, este se diferencia en alcohol clorhdrico 1 %,
sumergiendo rpidamente las lminas en el agua para parar la
diferenciacin producida por la sustancia cida, los ncleos se azulean
en el agua grasa a las sales minerales que contiene el agua, si el agua
no es potable se introduce en una solucin de carbonato de litio para
que azulee al ncleo, esto es posible porque esta solucin es una base.
4. Se pasa a la eosina que colorea el citoplasma de color rojo a rosado
en un tiempo de 15 a 30 s.
5. Se pasa a los alcoholes ascendentes o alcoholes deshidratadores, en
este paso los alcoholes tienen la funcin de ir arrastrando el agua,
poco a poco, del tejido por alcoholes de 70; 80 y 90 % y tres absoluto,
lo que evita cambios bruscos en el tejido en el momento de la
deshidratacin.
Hay que recordar que para que exista una buena aclaracin los alcoholes absolutos deben estar en buen estado, o sea, que no contengan
agua, para que ambos lquidos sean miscibles. Tambin el xilol brinda
cierta transparencia al tejido y sirve como medio de montaje, esto es
debido a que el medio de montaje es sinttico.
Los resultados que se deben obtener son los siguientes (Fig. 12.1):
1. Ncleos: azules.
2. Citoplasma: de rojo a rosado.
56

Fig. 12.1. Resultado de la coloracin de hematoxilina-eosina.

Colorantes metacromticos
El trmino metacromasia indica un cambio de color. Los colorantes
metacromticos son casi todos de carcter bsico, ejemplos: azul de
toluidina, azul de metilo, la tionina, el azura, etc.
Para explicar de manera adecuada el fenmeno de la metacromasia,
conviene destacar algunas de las peculiares propiedades que muestran
estos colorantes en disolucin. Cuando el disolvente no es agua, sino
alcohol, acetona, etc., todos estos poseen un tinte constante y se comportan como ortocromticos, pero en solucin acuosa, la coloracin de
la solucin se torna variable en funcin de la temperatura y la concentracin. En soluciones muy diluidas o a temperatura elevada, los colorantes
se comportan como ortocromticos; en soluciones concentradas como
metacromticos. Estos hechos demuestran que en el paso de la forma
ortocromtica de un colorante a la metacromasia (variacin en la absorcin de determinadas longitudes de onda de la luz blanca) se puede provocar
por pequeos factores, entre los cuales figura la unin de determinadas
sustancias a travs de mecanismos de atraccin electrosttica.
Son sustancias colorantes que tienen la valiosa propiedad de colorear
diversas estructuras en el tejido en tonos o colores diferentes, al propio
de la sustancia colorante.

Colorantes policromticos
Son sustancias colorantes compuestas, o una mezcla de colorantes
que contiene los componentes de diferentes colores.
57

Tipos de coloracin
Coloracin regresiva. El tejido o las clulas son primero sobreteidas
y despus decoloradas de forma parcial, utilizndose una disolucin
diferenciadora que es la encargada de remover el colorante, arrastrando
el exceso de este, lo que permite dejar el tono deseado. Este proceso se
frena pasndolo rpido por el agua. La diferenciacin se obtiene por lo
general con alcohol cido, alcohol etlico u otras diluciones. Este proceso se debe controlar de forma visual por el examen microscpico.
Coloracin progresiva. Una vez que el colorante se toma por el tejido
no se remueve, es decir, la coloracin se detiene en el momento en que se
obtiene el color deseado. No necesita disolucin diferenciadora.

Coloracin en citologa
El procedimiento es el siguiente (Fig. 12.2):
1. Hidratar las lminas en agua corriente.
2. Colorear introduciendo en el colorante nuclear la hematoxilina de
Harris.
3. Eliminar el exceso de colorante en agua corriente.
4. Diferenciar en solucin acuosa de cido clorhdrico a 0,5 %.
5. Detener el proceso de diferenciacin mediante el agua corriente.
6. Deshidratar en tres vasos de alcohol absoluto.
7. Colorear introduciendo en colorante citoplasmtico OG6.
8. Utilizar dos vasos de alcohol que eliminan el exceso de colorante y
deshidratan al a la vez.
9. El EA50 que es el colorante policromoplasmtico.
10. Eliminar el exceso de colorante y deshidratar con cuatro vasos de
alcohol absoluto.
11. Utilizar el xilol que le da claridad y brillantez a la clula.
12. Montaje en blsamo o resina Danmar para la preservacin de los
elementos celulares.

Coloracin de Papanicolaou (PAP)

Es un mtodo de tincin policromtico que consta de una sustancia
colorante nuclear (hematoxilina de Harris) y dos sustancias colorantes
citoplasmticos, el naranja G y la llamada mezcla policroma (EA) de
Papanicolaou, compuesta por verde luz, pardo Bismark y eosina (EA36
o EA50) (Fig. 12.3 y 12.4).
58

Fig. 12.2. Se muestran los recipientes que contienen los pasos

para utilizar en la coloracin de Papanicolaou.

Fig. 12.3. Resultado de la coloracin de Papanicolaou donde

se observan las clulas intermedias.

Fig. 12. 4. Resultado de la coloracin de Papanicolaou donde

se observan clulas superficiales eosinfilas.

59

1.
2.
3.
4.

Los objetivos de la coloracin son los siguientes:

Definir bien los detalles nucleares.
La transparencia del citoplasma.
Buen contraste entre el ncleo y el citoplasma.
Diferenciacin de las clulas.

El tipo de coloracin es regresiva, se sobretie el ncleo de la clula

con una hematoxilina no acidificada y luego se remueve el exceso de
tincin con disolucin de cido clorhdrico a 0,5 % (diferenciador). Tiempo excesivo en los alcoholes (decoloracin).

Sustancias colorantes citoplasmticas

Orange G: es una tincin monocromtica, que colorea naranja brillante la queratina en el citoplasma, penetrando rpido en este. La
queratina no se encuentra en condiciones normales en el epitelio, por lo
que su presencia se puede atribuir a algn tipo de trastorno o anormalidad.
Los factores que dificultan la tincin son:
1. Antes de la toma de muestra, la paciente se ha puesto productos
vaginales, que por su composicin qumica dificultan la coloracin.
2. Fijacin inadecuada.
3. Extendidos gruesos.
4. Alto contenido de cloro en el agua, sobre todo cuando el colorante
nuclear es plido.
5. No filtracin de las sustancias colorantes.

Medios de montaje
Los medios de montaje son los encargados de mantener transparentes las preparaciones, sin daar la estructura y coloracin de estas, por lo
menos durante el tiempo de su observacin.
Las sustancias permiten un ndice de refraccin necesario para que
se observen todos los detalles histolgicos y citolgicos.
Los medios de montaje se dividen en dos grupos: acuosos y sintticos.

Acuosos
El uso de estos es menos corriente, porque su empleo es ms delicado, debido a sus propiedades conservadoras limitadas y su rendimiento
ptico dbil, por lo que prcticamente solo sirven para montar cortes
por congelacin, estos son:
1. Glicerina.
2. Gelatina.
60

3. Glicerina y gelatina.
4. Bon Apaty.

Sintticos
Estas resinas sintticas son qumicamente neutras, secan rpido y
son de uso fcil. Garantizan la buena conservacin de la mayora de las
coloraciones y tienen la caracterstica de ser permanentes, estas son:
1. Blsamo del Canad.
2. Resina Danmar.

Bibliografa
Colectivo de Autores (1981): Temas de ginecologa. Editorial Ciencias Mdicas, La Habana, pp. 11-12, 27.
Colectivo de Autores (1982): Texto para la formacin de tcnicos de citohistopatologa. Texto
provisional. Editorial Ciencias Mdicas, La Habana, tomo I, pp. 153, 176, 251, 264.
Colectivo de autores (2001): Programa Nacional de Diagnstico Precoz del Cncer
Cervicouterino. Editorial Ciencias Mdicas, La Habana, pp. 30-33.
Takahashi, M. (1982): Atlas a color. Citologa del cncer, 2da. Ed., pp. 78-80.

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