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Desinfeccin de plantas
Esterilizacin de material
Sala de lavado de material (potes, pinzas, botellones, etc.)
Sala de ingreso general
En la pre-cmara de ingreso al laboratorio (sala de ingreso general): los operarios dejan prendas
portadoras de caros como por ejemplo bufandas, ropa de lana en general y se procede a la colocacin
de cubre calzado.
Una vez dentro del laboratorio se coloca mascarilla, botas, y guantes de ltex (estas prendas son
indispensables para movilizarse dentro de las instalaciones).
Pre-cmara de ingreso a la cmara de cultivo: en dicho sector los operarios trabajan con mascarilla,
botas, guantes de ltex, en esta zona se tienen que evitar los movimientos bruscos para no generar flujo
turbulento de aire y eliminar la menor cantidad de partculas por parte del operador.
Sala de desinfeccin y lavado: en estas reas es indispensable la utilizacin de material (vestimenta y
equipamiento) que no se utilice en la sala de micropropagacin con el fin de evitar contaminaciones
cruzadas.
El laboratorio de Biotecnologa Vegetal cuenta con las siguientes areas:
rea de cubculos
rea de Laboratorio
rea de Siembra
rea de incubacin de cultivos
2. rea de incubacin
No deben verterse residuos slidos en los fregaderos, deben emplearse los recipientes para
residuos que se encuentran en el laboratorio.
Los cidos y bases concentrados se encuentran en la vitrina del laboratorio. En ningn caso
deben sacarse de la vitrina, cuando se requiera un volumen de estos reactivos se llevar el
recipiente adecuado a la vitrina para tomar all mismo la cantidad necesaria.
Cuando se tengan dudas sobre las precauciones de manipuacin de algn producto debe
consultarse al profesor antes de proceder a su uso.
Los recipientes utilizados para almacenar disoluciones deben limpiarse previamente, eliminando
cualquier etiqueta anterior y rotulando de nuevo inmediatamente.
No calentar nunca enrgicamente una disolucin. La ebullicin debe ser siempre suave.
El mechero debe cerrarse, una vez utilizado, tanto de la llave del propio mechero como la toma
del gas de la mesa o si es manual tapndolo.
Las disoluciones y recipientes calientes deben manipularse con cuidado. Para la introduccin y
extraccin de recipientes de hornos y estufas deben utilizarse las pinzas y guantes adecuados
(asbesto).
Las heridas y quemaduras deben ser tratadas inmediatamente. En el caso de salpicaduras de
cidos sobre la piel lavar inmediatamente con agua abundante, teniendo en cuenta que en el
caso de cidos concentrados la reaccin con el agua puede producir calor. Es conveniente retirar
la ropa para evitar que el corrosivo quede atrapado entre la ropa y la piel.
Deben conocerse la situacin especfica de los elementos de seguridad (lavaojos, ducha,
extintor, salidas de emergencia) en el laboratorio as como todas las indicaciones sobre
seguridad expuestas en el laboratorio.
No debe llevarse a la boca ningn material de laboratorio; si algn reactivo es accidentalmente
ingerido, avise de inmediato al Profesor o a la persona encargada.
Relativas al material de vidrio
Examinar el estado de las piezas antes de utilizarlas y desechar las que estn defectuosas.
Desechar el material que haya sufrido golpes contundentes, aunque no se observen fisuras.
Efectuar el montaje de cada operacin con especial cuidado, evitando que los distintos
elementos que intervienen queden tensionados, empleando los soportes y abrazaderas
adecuadas y fijando todas las piezas segn la funcin a realizar.
No calentar directamente el vidrio con la llama. Para ello, se recomienda interponer un material
capaz de difundir el calor, como una rejilla metlica y utilizar preferentemente piezas de vidrio
PYREX.
Evitar que las piezas queden atascadas colocando una fina capa de grasa de silicona entre las
superficies de vidrio en contacto.
SEALIZACIN
En los laboratorios de biotecnologa la sealizacin contribuye a indicar aquellos riesgos que por su
naturaleza y caractersticas no han podido ser eliminados. Considerando los riesgos ms frecuentes en
estos lugares de trabajo, las seales a tener en cuenta son:
Otras seales
Salidas de emergencia y elementos de primeros auxilios (botiqun, duchas de emergencia, lavaojos, etc.).
Identificar las tuberas por el color con que estn pintadas, en funcin del fluido por ellas transportado
FLUIDO TRANSPORTADO COLOR DE IDENTIFICACIN
Agua
Verde
Aire
Azul
Gas
Amarillo
Vaco
Gris
REA DE PREPARACIN:
Utiliza principalmente para preparar los medios de cultivo, pero debe proveer tambin uno espacio para
almacenar los materiales de vidrio y de plstico, y los reactivos qumico. Este ambiente debe contar con
mesas de trabajo para la preparacin de los medios y para colocar las balanzas, el medidor de pH, los
platos caliente con agitacin, y otros elementos; tambin debe incluir vitrinas, estanteras y espacio para
el equipo de refrigeracin, y para la incubadora o la cmara de crecimiento.
Materiales:
Equipos
Estufa
Autoclave
Camara de Flujo laminar
Malla trmica
Agitador magnetico
Medidor de Ph
Reactivos
Agar
Sacarosa
Agua
Alcohol 90%
Legia
Carbon Activado
Levadura
NH4NO3
KNO3
Mg SO4. 7H2O
Mn SO4. H2O
Zn SO4. 7H2O
Cu SO4. 5H2O
Ca Cl2. 2H2O
KI
Co Cl2. 6H20
K H2 PO4
H3 BO3
Na2MoO4. 2H2O
Fe SO4. 7H2O
Na2 EDTA
Acido Nicotinico
Piridoxina
Tiamina
Glicina
Mioinositol
Legia
Hipoclorito de Sodio 5%
Alcohol 95%
Agua esteril
REA DE TRASFERENCIA
En esta rea del laboratorio se realiza el trabajo de escisin, inoculacin y trasferencia de los espantes a
los medios de cultivo. Dado que este trabajo demanda los mas alto nivel de limpieza ambiental, se
recomida la estalacin de gabinetes de flujo horizontal o vertical de aire filtrado bajo presin, o la
construccin de cuartos de trasferencia.
Sin embargo ciertas operaciones de inoculacin como la excision y el cultivo de pices y meristemas en
tubo de ensayo de boca angosta, se pueden realizar sobre una mesa limpia, ubicada en un lugar del
laboratorio libre de corrientes de aire y polvo. Los gabinetes de flujo laminar deben ubicarse, en lo
posible, en un lugar alejado de las puertas y con un mnimo de corriente de aire, con el fin de prolongar
la vida til de los filtros.
Materiales:
Placas petry
Probetas
Erlemmeyer
Pipetas
Servilletas
Guantes
Fundas de basura
Pipetas
Pinzas
Asas
Frascos esteriles
Equipos
Camara de flujo laminar
Mecheros
Campana
Autoclave
Camaras de filtros EPA con presin positiva
Reactivos
Hipoclorito de Sodio 5%
Alcohol 95%
Agua esteril
REA DE INCUBACIN
Los cultivos se incuban en un cuarto apropiado o en gabinetes o cmaras de crecimiento; estas pueden
ser ms eficientes en cuanto al control ambiental, pero son ms costosas.
El rea de incubacin o crecimiento in vitro debe proporcionar un buen control de la temperatura (20-28
oC), de la iluminacin (variables segn las necesidades: 1000 a 5000 lux) y de la humedad relativa (7080%).
En el cuarto de incubacin se instalan estanteras metlica o de madera para colocar los cultivos. Estas
estanteras puede tener dimensiones variables: el ancho entre 0.30m y 1.00 m, el largo de acuerdo con
el tamao del cuarto, y la altura total de 1.80 a 2.20 m; la distancia entre entrpanos es de 0.20 a .50 m.
Esta rea debe incluir, adems uno espacio para cultivos en agitacin y para cultivos esttico en
oscuridad.
Es necesario propiciar una buena distribucin del aire en este cuarto para evitar zonas de
recalientamento por efecto de las luces. Cuando se utilizan tubos fluorescentes, es conveniente sacar los
balastros fuera de este cuarto. Las regulacin de la temperatura se puede lograr por medios de aparato
de aire acondicionado de pared o de sistema central. En cualquier caso, es necesario tomas
precauciones para evitar el calentamiento excesivo, instalando alarmas y controles para cortar la
iluminacin cuando falle el aire acondicionado.
Equipos:
Cmara de incubacin con tiempos de luz controlados
Aspersor
Instalaciones de luz y agua
Reactivos:
Alcohol 95%
REA DE CRECIMIENTO
Durante el perodo de incubacin, los cultivos son expuestos a condiciones ambientales dismiles al
ambiente externo.
La atmsfera interna se caracteriza por presentar una considerable variacin diurna en la concentracin
de CO2, humedad relativa elevada, temperatura constante e intensidad lumnica baja. A su vez, el medio
de cultivo compuesto por concentraciones elevadas de azcares (en aquellos sistemas hetertrofos y
semiauttrofos de micropropagacin), sales y reguladores del crecimiento, sumado a la ausencia de
microorganismos, generan anormalidades morfolgicas, anatmicas y fisiolgicas que las plantas
debern corregir cuando son transferidas al ambiente externo. Este perodo de adaptacin al nuevo
hbitat es llamado fase o etapa de aclimatacin.
La estrategia a implementarse durante el mencionado ciclo deber contemplar el control minucioso de
los parmetros ambientales (humedad, temperatura y luz) de tal manera que permita disminuir la
deshidratacin y, al mismo tiempo, estimular la fotosntesis con el objeto de generar un rpido
crecimiento de los plantines.
El retraso en el desarrollo de la cutcula y la escasa funcionalidad del aparato estomtico que presentan
las hojas de la mayora de las especies cultivadas in vitro, determinan una alta tasa de transpiracin que
puede ocasionar la muerte por deshidratacin.
Instalaciones:
Invernadero
Suministro de agua y electricidad
Luz natural
Materiales:
Macetas, bandejas
Camas de crecimiento
Sustratos
Fundas plsticas
Tamiz para sustratos
Pala, rastrillo
Basurero
Equipos:
Nebulizadores
Cmaras de alta humedad
Mobiliario:
Mesa; para realizar observaciones
REA DE CUARENTENA
Toda actividad destinada a prevenir la introduccin y/o propagacin de plagas de cuarentena o para
asegurar su control oficial
La produccin de materiales elites de sanidad certificada, se hace necesario contar con un rea para la
recepcin de las muestras o plantas destinadas a la limpieza clonal, generalmente protegida contra
insectos. Esta rea de cuarentena debe estar separada del resto del laboratorio pero cercana al rea de
control fitosanitario; donde se hacen pruebas necesarias para comprobar la sanidad del material
vegetal, especialmente enfermedades causadas por virus, bacterias y hongos.
Instalaciones:
Suministro de agua y electricidad
Materiales:
Bandejas
Frascos
Basurero
Equipos:
Congelador - refrigerador
Mobiliario:
Mesa; para realizar observaciones
Estanteras para almacenar el material vegetal
REA DE OBSERVACIN Y EXAMEN
El objetivo de rea de observacin y examen es realizar observaciones peridicas de los cultivos, tanto
en medios semislidos como en lquidos. Generalmente los microscopios (estreo, compuesto, invertido
y otros) se encuentran en el rea de incubacin como en el de transferencia, pero opcionalmente
pueden estar en un rea separada.
Instalaciones:
Suministro electricidad.
Materiales:
Equipos:
Microscopio binocular
Estereoscopio
lupas estereoscpicas
Mobiliario:
Mesa; para realizar observaciones
Taburetes
Vitrina para almacenamiento de equipos
BODEGA
La bodega es un rea disponible y adecuada para el almacenamiento de: reactivos, materiales, etc. La
operacin de bodegas es la organizacin que se le da a estas para que el material que se va a resguardar
se haga de una forma ordenada, con facilidad de movibilidad y un estricto control.
Reactivos
NH4NO3
KNO3
Mg SO4. 7H2O
Mn SO4. H2O
Zn SO4. 7H2O
Cu SO4. 5H2O
Ca Cl2. 2H2O
KI
Co Cl2. 6H20
K H2 PO4
H3 BO3
Na2MoO4. 2H2O
Fe SO4. 7H2O
Materiales
Pipetas: 10 ml, 0,5ml
Na2 EDTA
cido nicotnico
Piridoxina
Tiamina
Glicina
Mioinositol
Sacarosa
Agar
Hidrxido de sodio
cido clorhdrico
Hipo clorito de sodio
Alcohol etlico
Detergente
Pipeteador
Frascos de 150 ml
Papel aluminio
Servilletas estriles
Bandejas
Pinzas
Esptulas
Bistur
Fsforos
Rociador de alcohol
Estropajo
Macetas de 1litro
Aspersor de agua
PRESUPUESTO
Terreno
Descripcin
Valor
Unidad Cantidad Unitario
Valor Anual
Terreno
m2
600
21,600.00
Subtotal
21,600.00
Imprevistos
432
Total
22,032.00
36
Maquinaria y Equipo
Descripcin
Valor Anual
Agitador magntico
Un.
2950
8,850.00
Balanza de precisin
Un.
3000
12,000.00
Microondas
Un.
600
600.00
Autoclave
Un.
980
980.00
Dispensador automtico
Un.
300
300.00
Microscopios
Un.
4829
24,145.00
PH-metro
Un.
800
800.00
Refrigerador
Un.
2300
2,300.00
Destilador
Un.
38000
38,000.00
Timer
Un.
120
720.00
Un.
40000
80,000.00
Sistema de filtracin
Un.
2500
2,500.00
Esterilizador
Un.
2390
7,170.00
Subtotal
178,365.00
Imprevistos
3,567.30
Total
181,932.30
Material de Vidrio
Descripcin
Valor
Unidad Cantidad Unitario
Valor
Anual
probeta grad.b/vidrio 10 ml
Un.
10
1.75
17.50
probeta grad.b/vidrio 50 ml
Un.
10
2.67
26.70
Un.
10
3.32
33.20
Un.
10
7.00
70.00
Un.
10
17.42
174.20
Un.
15
3.31
49.65
Un.
43.01
258.06
Un.
20
1.67
33.40
Un.
20
1.97
39.40
Un.
10
7.92
79.20
Un.
10
14.42
144.20
matraz t.plastica 25 ml
Un.
10
2.73
27.30
Un.
200
1.35
270.00
Un.
200
4.27
854.00
Subtotal
2076.81
Imprevistos
41.5362
Total
2118.35
Descripcin
Reactivos
Cantida
Unidad d
lt.
Alcohol 96%
Valor Unitario
Valor Anual
0.74
0.74
lt.
3.29
3.29
gr.
4.76
4.76
gr.
41.75
41.75
gr.
29.75
29.75
Niacinamida 100g
gr.
12.75
12.75
gr.
30.75
30.75
Biotina 1g
gr.
50
2137.5
gr.
agar-agar 500 gr
gr.
10
gr.
10
M&S 10 lt
lt.
Acido absicico 1g
gr.
42.75
7.19
124.83
129.93
6.75
228.75
Subtotal
Imprevistos
Total
35.95
1248.3
1299.3
6.75
457.5
5309.09
106.1818
5415.2718
Equipo de Oficina
Descripcin
Valor
Unidad Cantidad Unitario
Telefonos convenionales
Un.
35.00
35.00
Fax
Un.
109.00
109.00
Sumadora
Un.
50.00
50.00
Subtotal
Imprevistos
Total
Valor Anual
194.00
3.88
197.88
Equipo de Computacin
Descripcin
Valor
Unidad Cantidad Unitario
Computadoras
Un.
595.00
1,785.00
Impresora multifuncional
Un.
109.00
109.00
Implementos de red
Un.
150.00
150.00
Subtotal
Imprevistos
Total
Valor Anual
2,044.00
40.88
2,084.88
Herramientas
Descripcin
Unidad Cantidad
Mesa de trabajo
Un.
Taburetes
Un.
Lavadero
Un.
Vitrina de almacenamiento
Un.
Valor Unitario
Valor Anual
62
496.00
60
480.00
100
300.00
250
750.00
Subtotal
2,026.00
Imprevistos
40.52
Total
2,066.52
Muebles y enseres
Descripcin
Valor Anual
Escritorio gerencia
Un.
110
110.00
Escritorio secretaria
Un.
145
145.00
Archivadores
Un.
87
87.00
Un.
174
174.00
Un.
87
609.00
Un.
870
870.00
Casilleros
Un.
174
348.00
Alfombras
Un.
40
40.00
Equipo de sonido
Un.
203
203.00
Subtotal
2,586.00
Imprevistos
51.72
Total
2,637.72
Materiales Indirectos
Descripcin
Unidad
Cantidad
Valor Unitario
Papeles
Un.
12
4.00
48.00
Jabon
Un.
15
0.60
9.00
Papel Higinico
Rollos
3.00
15.00
Trapeador
Un.
1.50
9.00
Escoba
Un.
1.50
9.00
Desinfectante
Un.
3.20
12.80
Manguera
Un.
4.00
8.00
Guantes
Doc.
4.00
4.00
Subtotal
Imprevistos
Total
Valor Anual
114.80
2.30
117.10
Insumos
Descripcin
Unidad
Cantidad
Valor Unitario
Material de limpieza
Un.
10.50
31.50
Agua potable
m3
150
0.15
22.50
Energa Elctrica
Kwh.
950
0.08
76.00
Subtotal
Valor Anual
130.00
Imprevistos
Total
2.60
132.60
sueldo
341.44
Subtotal
1,365.76
1,365.76
Imprevistos
27.32
Total
1,393.08
Unidad
Cantidad
Valor Unitario
Guardia
Sueldo
316.16
316.16
Jefe de Laboratorio
Sueldo
1,009.04
1,009.04
Subtotal
Imprevistos
Total
Valor Anual
1,325.20
26.50
1,351.70
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