Prctica 13 Pruebas Bioqumicas (Exoenzimas)

Resumen: En esta prctica se observ el resultado de distintos microorganismos en

pruebas bioqumicas, cuyo resultado est asociado a una exoenzima, la cual se
encarga de hidrolizar polmeros en monmeros, los cuales el microorganismo puede
transportar a travs de la clula y usarlos como fuente de energa.

Resultados:
a) Amilasas:
Microorganismo
P. aeruginosa
Rhodotorula sp.
B. cereus
B. subtilis
E. coli
S. marcescens
S. cremoris

e) Lipasas:
Resultado
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Negativo
Negativo

b) Hemolisinas:
Microorganism
o
P. aeruginosa
Rhodotorula sp.
S. agalactiae
S. oralis
S. aureus
B. cereus
P. vulgaris

Resultado

f) Esculinasas:

Beta
Gamma
Beta
Gamma
Alfa
Alfa
Gamma

Microorganism
o
P. aeruginosa
E. coli
Rhodotorula sp.
S. oralis
S. aureus
P. vulgaris
B. subtilis

Resultado

g) DNAsas

Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo

Microorganism
o
P. aeruginosa
E. coli
Rhodotorula sp.
S. marcescens
S. aureus
S. agalactiae
P. vulgaris

c) Caseinasas:
Microorganism
o
P. aeruginosa
E. coli
Rhodotorula sp.
S. marcescens
B. subtilis
S. cremoris
S. aureus

d)Gelatinasas
Microorganism
o
P. aeruginosa
Rhodotorula sp.

Microorganism
o
P. aeruginosa
E. coli
Rhodotorula sp.
S. marcescens
B. cereus
S. aureus
M. luteus
S. cremoris

Resultado
Positivo
Negativo

Laboratorio de Microbiologa Experimental.

Resultado
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Negativo

Resultado
Negativo
Positivo
Negativo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo

Resultado
Positiva
Negativo
Negativo
Positiva
Positiva
Negativo
Negativo

Anlisis de resultados:
a) Amilasas:

Esta prueba se realiz en el agar

almidn, en esta prueba bioqumica se
determina la presencia de la exoenzima
amilasa, la cual al ser secretada al
medio, hidroliza la molcula de almidn
oligosacridos como maltotriosa, la cual
posteriormente es degradada a maltosa
y finalmente a Glucosa. En esta prueba
se utiliza Lugol como revelador el cual
contiene I2, el yodo molecular en
presencia de
almidn forma un
complejo color morado, en caso de que
se presente esta coloracin al momento
de agregar lugol significa una prueba
negativa debido a que el almidn no ha
sido degradado por la enzima amilasa.
Por lo contrario cuando al agregar lugol,
no hay un cambio en la coloracin, esto
significa una prueba positiva, debido a
que no hay presencia de almidn
alrededor
del
crecimiento
del
microorganismo
porque
ha
sido
degradado por la amilasa. Finalmente
cabe mencionar que existe un 3er
resultado posible que es la formacin
de un complejo color rojo, este
complejo se forma cuando al agregar
lugol, el yodo molecular forma un
complejo con oligosacridos (producto
de degradacin de la amilasa) y forma
el complejo rojizo.

b) Hemolisinas:
En esta prueba se utiliza el agar sangre,
el
cual
contiene
sangre
ovina
desfibrinada estril as como infusin de
msculo corazn, que le proporciona un
alto valor nutritivo al meido y se
detecta la presencia de la exoenzima
hemolisina, la cual se encarga de lisar a
los eritrocitos al daar su membrana
celular y obtener sus nutrientes. De
acuerdo a cada microorganismo se
presentan 3 tipos de hemlisis:
- Hemlisis alfa: Es la hemlisis parcial
de los eritrocitos en donde la
hemoglobina
se
oxida
a
meta
hemoglobina, compuesto que genera
un
halo
color
verdoso,
un
microorganismo que present esta
hemlisis
fue:
Bacillus
cereus.

Laboratorio de Microbiologa Experimental.

- Hemlisis beta: Es la lisis total de los

glbulos rojos, y se distingue por un
caracterstico
halo
claro
brillante
alrededor de la colonia, esta hemlisis
la
present:
S.
agalactiae.
- Hemlisis gamma: Es la no hemlisis
de los glbulos rojos y no se oberva un
halo
alrededor
del
desarrollo
microbiano, esta hemlisis la present:
P. vulgaris.

c) Caseinasas:
Para esta prueba se utiliza el medio
agar nutritivo con leche descremada, en
donde el sustrato es la casena que es
una protena y la enzima caseinasa es
la encargada de hidrolizar a la casena,
la casena es la protena que le confiere
el color blanco a la leche, y cuando la
casena es hidrolizada, desaparece el
color blanco alrededor del crecimiento,
uno de los microorganismos que da
positivo en esta prueba es; Bacillus
subtilis.

d)Gelatinasas
e) Lipasas:
f) Esculinasas:
g) DNAsas
Conclusiones:
-El I2 forma un complejo color morado
con el almidn, el cual indica una
prueba negativa para amilasas.
-La hemlisis alfa es una hemlisis
incompleta, en la que se observa un
halo verde.
-La hemlisis beta es la hemlisis total
y se observa un halo claro brillante
alrededor de la colonia
-La casena es una protena de la leche
que le proporciona el color blanco y su
hidrlisis hace que la leche pierda su
color.

Bibliografa:

Anexos:

Figura 1 Resultados para prueba de

DNAsas en agar DNA

Figura 5 Resultados para prueba de

proteasas en agar leche
descremada

Figura 2 Resultados en prueba de

DNAsas en agar DNA

Figura 6 Resultados para prueba de

proteasas en agar leche
descremada

Figura 3 Resultados Prueba de

hemolisinas en agar sangre

Figura 7 Resultados Prueba de

lipasas en agar yema de huevo

Figura 4 Resultados Prueba de

hemolisinas en agar sangre
Laboratorio de Microbiologa Experimental.

Figura 8 Resultados Prueba de

lipasas en agar yema de huevo

Figura 11 Resultados Prueba de

Esculinasas en agar bilis esculina
Figura 9 Resultados Prueba de
amilasas en agar almidn

Figura 12 Resultados Prueba de

Esculinasas en agar bilis esculina
Figura 10 Resultados Prueba de
amilasas en agar almidn

Laboratorio de Microbiologa Experimental.