8.

Qu caractersticas debe tener los buffers de pre hibridacin e hibridacin y cul es su

principal diferencia? http://www.sidalc.net/repdoc/A4119e/A4119e.pdf
R/:
Buffers de pre-hibridacin: Se utilizan para realizar el bloqueo de la superficie donde
an no hay DNA depositado. Su pH debe ser ajustado a 7,4 con 4M de NaOH; despues
de aadir todos los componentes se almacena a -20C.
Buffers de hibridacin: En el se disuelve la sonda; 50 microlitros por cada cm2 de
membrana. Se disuelven los componentes solidos excepto el ADN. Se agregan 2 mL de
10mg/ml de esperma de salmon desnaturalizado.
Principal diferencia: Es que el buffer de prehibridacin no contiene la sonda marcada
que permita la realizacin del proceso y su posterior lectura.

https://books.google.com.co/books?
id=XWcJAQAAQBAJ&pg=PA68&lpg=PA68&dq=prehibridacion&source=bl&ots=V7yq
ETgeBF&sig=sEuFEEDBTRV5uzHzX0XB3zFrpg&hl=es&sa=X&ei=xgCSVPqbJomXNrqFgrAJ&ved=0CCcQ6AEwAjgK#v=one
page&q=prehibridacion&f=false

9. Qu tcnicas modernas de biologa molecular pueden reemplazar las herramientas de

hibridacin molecular de Southern, Northern y Western Blot? Explique brevemente sus
fundamentos.
R/:

Hibridacin fluorescente in situ: En este tipo de hibridacin se utilizan sondas

especificas para determinados cromosomas o secuencias de ellos. Pone de manifiesto
alteraciones genticas a la vez que permite la visualizacin de las clulas en el
contexto histolgico. http://www.conganat.org/seap/revista/v30-n3/13.pdf

Principio de Hibridacin Reversa o LiPA

Los ensayos de identificacin de tipo de INNO-LiPA de INNOGENETICS (Blgica) se
basan en el principio de hibridacin inversa. El material de ADN biotinilado amplificado
se desnaturaliza qumicamente, y las hebras separadas se hibridan con sondas de
oligonucletidos especficos inmovilizadas en bandas paralelas sobre tiras basadas en
membranas. Esto va seguido de una fase de lavado astringente a fin de eliminar
cualquier material amplificado incorrectamente emparejado. Tras el lavado astringente,
se aade estreptavidina conjugada con fosfatasa alcalina, que queda ligada a cualquier
hbrido biotinilado que se haya formado con anterioridad. La incubacin con una
solucin de sustrato que contiene un cromgeno produce un precipitado de color
prpura/marrn. La reaccin se interrumpe mediante una fase de lavado, tras la que
se registra el patrn de reactividad de las sondas.