Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
TÂRGU-MUREŞ
BACTERIOLOGIE GENERALĂ
- CURS –
- 2005 -
Capitolul I
2
Cele mai multe microorganisme sunt utile, doar o parte fiind implicate în
patologie.
În medicină microorganismele sunt deosebit de importante având atât efecte
benefice asupra organismului uman cât şi efecte patogene, cauzând boli ale omului
şi animalelor.
Disciplinele microbiologiei sunt la fel de variate ca şi microorganismele.
După domeniul de activitate în care se aplică noŃiunile de microbiologie se
disting diferite ramuri aplicative ale acesteia: microbiologia solului, microbiologia
marină, microbiologia industrială, microbiologia agricolă, microbiologia medicală,
microbiologia veterinară etc.
Microbiologia medicală se ocupă cu studiul microorganismelor care au acŃiune
benefică sau dimpotrivă, dăunătoare asupra organismului uman (micro = mic, bios =
viaŃă).
Unele discipline ale microbiologiei sunt fundamentale: protozoologia,
micologia, bacteriologia, virologia, genetica şi taxonomia bacteriană şi mai nou
ingineria genetică.
În formarea medicului este indispensabilă dobândirea cunoştinŃelor de
microbiologie pentru că, indiferent de ramura medicinii pe care o va alege, se va lovi
de infecŃii care reprezintă aproximativ ¾ din patologia umană. CunoştinŃele de
microbiologie vor ajuta la:
1.stabilirea diagnosticului etiologic al bolilor infecŃioase ;
2. alegerea tratamentului antiinfecŃios profilactic sau curativ, cel mai adecvat;
3. cunoaşterea metodelor de profilaxie a bolilor infecŃioase.
Este foarte important ca medicul să raŃioneze “microbiologic”:
să cunoască microorganismele care populează elementele ambientului ca
şi biotopurile organismului uman;
să cunoască modul de transmitere al microorganismelor;
să cunoască urmările contaminării cu microorganisme în practica medicală
şi chirurgicală;
să cunoască rolul microorganismelor pentru sănătate şi boală;
să cunoască etiopatogenia bolilor infecŃioase;
să acŃioneze în aşa fel încât să prevină contaminarea microbiană a
pacientului, a personalului din spital sau a sa;
Să ştie recolta corect un produs patologic destinat examenului
bacteriologic;
Să aibă cunoştinŃe temeinice referitoare la terapia antimicrobiană.
3
Capitolul II
ISTORICUL MICROBIOLOGIEI
Microbiologia reprezintă studiul unor organisme vii dintre care o parte sunt
într-atât de mici încât sunt vizibile doar la microscop. Unele microorganisme necesită o
mai bună mărire pentru a fi văzute, mărire care poate fi obŃinută doar cu ajutorul
microscopului electronic. Microorganismele studiate cuprind alge, fungi, bacterii, virusuri
şi paraziŃi.
Microorganismele sunt cele mai vechi, numeroase şi diversificate forme de
viaŃă pe pământ. Se află în mediul înconjurător, au rol în descompunerea materiei
organice şi menŃin fertilitatea solulului. Majoritatea microorganismelor sunt utile şi
numai o parte sunt implicate, în diferite grade, în patologie.
Microbiologia a avansat continuu, de la nivelul unei ştiinŃe relativ simple la un
nivel care a determinat însemnate progrese în prevenirea, diagnosticul şi tratamentul
bolilor. Numai în acest secol, datorită în mare parte aplicaŃiilor microbiologiei, speranŃa
de viaŃă a crescut semnificativ.
La începutul secolului oamenii decedau datorită unor cauze infecŃioase
(rujeolă, varicelă, rubeolă, variolă, oreion, ciumă, tifos exantematic, tuberculoză,
sifilis, difterie etc) care astăzi au o evoluŃie letală numai în anumite situaŃii (forme clinice
avansate, atipice, neglijate). Datorită microbiologiei, conservarea hranei, condiŃiile
sanitare etc. s-au îmbunătăŃit.
Pe de altă parte, microbiologia trebuie să facă faŃă provocărilor viitorului, dar
este sigur că anumite progrese în acest sens sunt deja realizate sau în curs de
realizare. Dezvoltarea "tehnologiei ADN" a început în 1973 şi este bazată pe
cunoştinŃele acumulate în cursul ultimilor 30 de ani de genetică microbiană. Există
azi posibilitatea inserării de material genetic provenit de la oricare organism viu în
bacterii selecŃionate şi adaptate astfel încât să poată realiza sarcini speciale, normale
la celula donatoare, ajungându-se până la posibilitatea ca tulpini de E.coli modificate
genetic să sintetizeze structuri de tipul anticorpilor.
ŞtiinŃa microbiologiei este esenŃială pentru sănătate, pentru menŃinerea
sănătăŃii şi prevenirea îmbolnăvirilor. Cunoaşterea modului de transmitere a
microorganismelor reduce numărul cazurilor de "gripă", cunoaşterea sterilizării,
dezinfecŃiei şi antisepsiei permite evitarea infecŃiilor de spital, cunoaşterea imunologiei
şi imunopatologiei permite înŃelegerea interrelaŃiilor microorganism-gazdă precum
importanŃa procedurilor de imunizare.
4
Este evident că oricine lucrează în domeniul sanitar ar putea înŃelege
principiile de bază ale microbiologiei, menŃinerea sănătăŃii şi prevenirea bolii pentru a
înŃelege procedurile profilactice, adaptarea lor inteligentă şi antrenarea personalului
auxiliar (tehnicieni, surori, îngrijitori etc) în utilizarea unor proceduri corecte.
Studiul microbiologiei nu este dificil, în sensul că microbiologia este o ştiinŃă
foarte logică şi în mod sigur una dintre cele mai fascinante.
Microorganismele au fost descoperite relativ tardiv, în 1680. Datorită
dimensiunilor mici, cunoaşterea existenŃei lor a trebuit să aştepte descoperirea
microscopului. Deşi Zacharias Janssen este creditat a fi realizat primul microscop în
1590, prima persoană care a văzut şi a descris microorganisme a fost Antony van
Leeuwenhoek (1632-1723), un vânzător irlandez de mărunŃişuri care a vrut să
observe Ńesătura hainelor fine. Microscopul lui, pe care l-a construit singur, a constat
dintr-o lentilă biconvexă într-un cadru metalic, cu o mărire de până la 270 de ori. Cu
aceste instrumente a examinat apa din bălŃi, tartrul dentar, materiile fecale provenite
de la un pacient cu dizenterie etc. A fost mirat să observe în toate aceste substanŃe,
mici organisme sferice în formă de Ńigară, spirale, unele aflate în mişcare rapidă, pe
care le-a numit "animalicule". Desenele pe care le-a făcut probează că ceea ce a văzut
au fost bacterii, protozoare şi alte microorganisme. Pe parcursul a 40 de ani, van
Leeuwenhoek a scris 125 de scrisori traduse în engleză şi predate SocietăŃii Regale
din Londra, în plus, 27 lucrări au fost publicate în Memoriile Academiei Franceze de
ŞtiinŃe. Universitatea din Utrecht pretinde că deŃine în muzeu unele dintre
microscoapele originale ale lui Leeuwenhoek.
Cu mult înainte de a se fi cunoscut faptul că microorganismele sunt cauza
bolilor transmisibile, se practicau metode de prevenire a bolii. De exemplu, în 1796
Edward Jenner a arătat că variola ar putea fi prevenită prin vaccinare. Semmelweis a
avut contribuŃii importante în vederea răspândirii bolilor în maternităŃi şi spitale
utilizând substanŃe chimice "dezinfectante".
Totuşi, trebuie menŃionat că regulile şi metodele noii ştiinŃe precum şi
medicina preventivă sunt bazate pe activitatea de o viaŃă a doi oameni, Louis
Pasteur (1822-1895) şi Robert Koch(1843-1910).
Chimistul francez Pasteur, faimos pentru descoperirea polarimetriei, a
demonstrat că fermentaŃia şi putrefacŃia au fost cauzate de organisme vii şi a notat
o asemănare între aceste procese şi bolile infecŃioase, a luat în discuŃie stricarea
vinurilor şi berii ca şi "boli" ale acestor produse .
Pasteur a fost cel care a realizat un experiment prin care a arătat că, atât cât
era cunoscut pe baza datelor disponibile, organismele vii au luat naştere numai din
organisme vii, şi nu din materie moartă. Deşi problema "generării spontane" a fost
aparent rezolvată în secolul al XIX-lea, ea a fost redeschisă în secolul al XX-lea
într-un mod cu mult mai sofisticat sub numele "evoluŃiei chimice". Astăzi, utilizând
substanŃe simple, de origine naturală şi gaze, vapori şi arcuri electrice sub
temperatură şi presiune crescută, microbiologii şi chimiştii pot sintetiza mulŃi compuşi
complecşi organici care au fost descoperiŃi iniŃial doar în celulele vii.
După studiul fermentării vinului, Pasteur a investigat o boală transmisibilă la
viermii de mătase şi ca rezultat a formulat teoria legată de implicarea germenilor în
producerea unor boli. Referitor la bolile oamenilor, a insistat ca bandajele să fie
curăŃate şi instrumentele din spital să fie fierte.
Joseph Lister (1827-1912), un chirurg englez, a aplicat descoperirile lui
Pasteur în chirurgie chiar înainte ca bacteriile care determină infecŃiile chirurgicale să
fi fost descoperite. Lucrările lui Lister reprezintă baza tehnicii chirurgicale aseptice din
ziua de azi.
5
În experimente ingenioase, Pasteur a protejat de antrax diferite ierbivore
prin vaccinarea cu un preparat extras din Bacillus anthracis.
"Tratamentul profilactic" al rabiei a fost dezvoltat prin injectarea de material
uscat din măduva spinării de la animalele care au murit de rabie. Joseph Meister, un
băieŃel muşcat de un câine turbat, a fost primul om a cărui viaŃă a fost salvată prin
această metodă şi care nu s-a îmbolnăvit de hidrofobie (rabie) pentru că a fost protejat
de injecŃiile făcute de Pasteur. O jumătate de secol mai târziu, Joseph Meister, portar
la Institutul Pasteur, s-a sinucis atunci când i s-a ordonat de către soldaŃii germani să
deschidă cripta lui Pasteur.
Ferdinand Cohn (1828-1898) a fost unul dintre cei mai renumiŃi microbiologi
germani. El a extins cercetările lui Pasteur în propriul laborator, unde a lucrat cu alge
şi fungi. Cohn a devenit foarte interesat de bacteriologie şi a scris una dintre primele
cărŃi referitoare la bacterii. A clasificat bacteriile în genuri şi specii. Cohn a
reprezentat un mare ajutor pentru Robert Koch, pe care 1-a încurajat să publice
lucrările sale asupra antraxului.
Cu 200 de ani înaintea apariŃiei bacteriologiei, Robert Boyle a sugerat că
anumite boli sunt cauzate de acŃiunea organismelor vii.
Anatomistul Henle a sugerat că bolile infecŃioase ar putea fi determinate direct
de către microorganisme. Unul dintre studenŃii lui Henle a fost chiar Robert Koch,
care a devenit un medic faimos şi a asigurat toate datele necesare pentru a
demonstra "teoria microbiană a bolii".
Dezvoltarea metodelor pentru izolarea bacteriilor în cultura pură a fost printre
cele mai importante descoperiri ale tehnicilor microbiologice şi a fost în mare parte
opera lui Robert Koch.
O cultură pură de microorganisme este una în care numai un singur tip de
organism creşte în eprubetele test sau pe plăci cu mediu de cultură.
În condiŃii naturale multe microorganisme din diferite specii există în mod
obişnuit în acelaşi mediu. Spre exemplu, în materiile fecale ale unui pacient cu febră
tifoidă, bacilii tifici sunt "amestecaŃi" cu bilioane de celule din alte specii de bacterii şi
alte forme de microorganisme. În cadrul diagnosticului medical microbiologic este
importantă izolarea în cultură pură a germenilor patogeni.
În 1876 Koch a izolat în "cultură pură" bacteria care determină antraxul pornind
de la splina vitelor infectate şi a fost capabil să infecteze şoareci cu această cultură.
Implicat în cercetarea etiologiei exacte a bolilor infecŃioase, Koch a rezumat ceea ce
a considerat că reprezintă datele esenŃiale pentru a demonstra că un microorganism
este cauza infecŃiei. Aceste date sunt cuprinse în patru postulate, denumite Postulatele
lui Koch, şi anume:
1. Microorganismele care determină boala trebuie să poată fi identificate în
toate cazurile de boală în relaŃie patologică cu simptomele şi leziunile pe care le
determină.
2. Microorganismul trebuie să poată fi izolat de la victimele bolii în cultură
pură: pentru studiul în laborator.
3. Când cultura este inoculată la un animal susceptibil, trebuie să reproducă
boala (sau, cum s-a notificat mai târziu, să inducă apariŃia anticorpilor specifici la
noua gazdă).
4. Microorganismul trebuie să poată fi izolat din nou în cultura pură din infecŃia
produsă experimental.
Utilizând aceste reguli precum şi tehnici microbiologice, Koch a descoperit
bacilul tuberculos (bacilul Koch), bacilul holeric etc, precum şi modul de transmitere a
numeroase alte boli.
6
Descoperirile menŃionate au reprezentat debutul bacteriologiei, micologiei,
virusologiei, parazitologiei şi imunologiei ca ştiinŃe. În doar aproximativ 15 ani (după
1880) au fost descoperite şi izolate în cultură pură microorganisme implicate în multe
dintre bolile infecŃioase importante. Aceste descoperiri au făcut posibilă stabilirea ca
entităŃi bine definite a medicinei preventive şi respectiv a terapiei specifice (etiologice).
Ilia Mecinikov a evidenŃiat modul natural de apărare a organismului faŃă de
agenŃii infecŃioşi prin anumite celule care au proprietăŃi fagocitare şi a scris în 1901
primul tratat de imunologie.
La şcoala formată de profesorul Victor Babeş (1854-1926) şi de profesorul Ion
Cantacuzino (1863-1934) s-au pregătit multe generaŃii de microbiologi, care au
contribuit activ la dezvoltarea microbiologici româneşti.
Victor Babeş a fost în acelaşi timp anatomopatolog şi microbiolog. A fost atât
elevul lui R.Koch cât şi al lui L. Pasteur. A fost numit profesor la Budapesta la o
vârstă foarte tânără. În anul 1885 publică împreună cu Cornil primul tratat de
bacteriologie din lume. A demonstrat importanŃa introducerii tehnicilor microbiologice în
anatomopatologie.
EvidenŃiază proprietăŃile neutralizante ale serurilor imune, descoperă
corpusculii metacromatici ai bacilului difteric (Babes-Ernst), descoperă o nouă
metodă de preparare a serului antidifteric etc. În 1888 este numit profesor de
anatomie patologică şi bacteriologie la Facultatea de Medicină din Bucureşti. Este
fondatorul Institutului "Victor Babeş", unde prepară în 1889 vaccin antirabic, Ńara
noastră fiind a treia Ńară din lume care reuşeşte să prepare acest vaccin.
Ion Cantacuzino a avut o personalitate cu totul deosebită, imposibil de cuprins
într-o trecere atât de sumară prin istoricul microbiologiei. A studiat la Paris Filozofia şi
Literele, ŞtiinŃele Naturale şi Medicina. Pregătirea în microbiologie a făcut-o în
laboratorul lui Ilia Mecinikov, la Paris. Este numit profesor la Facultatea de Medicină din
Bucureşti în anul 1901 şi reuneşte în jurul dânsului un mare număr de tineri medici,
care devin la rândul lor şi creatori de şcoală (Al. Slătineanu, C. lonescu-Mihăieşti, M.
Ciucă, AL Ciucă, D. Danielopolu, D. Combiescu, N. Gh. Lupu, I. Bălteanu, I. Nicolau,
Lidia şi I. Mesrobeanu şi mulŃi alŃii).
Şcoala astfel întemeiată a avut o activitate cu rezultate excepŃionale pentru
ştiinŃa românească, pentru microbiologie şi pentru sănătatea publică.
Una dintre cele mai mari realizări ale domniei sale a fost Institutul "Ion
Cantacuzino", fondat în anul 1921, centru de cercetare ştiinŃifică fundamentală şi
aplicativă, centru de învăŃământ de specialitate, instituŃie care a preparat şi prepară
seruri, vaccinuri şi alte produse biologice utile în diagnosticul bolilor transmisibile.
După 1989, conducerea actuală a reuşit să reincludă Institutul în ReŃeaua
InternaŃională a Institutelor Pasteur şi Institutelor Asociate.
În ciuda inerentelor probleme legate de tranziŃia societăŃii româneşti de astăzi,
Institutul "Ion Cantacuzino” continuă tradiŃia înaintaşilor şi îşi menŃine poziŃia
importantă în cadrul instituŃiilor care se ocupă de sănătatea publică la nivel naŃional şi
internaŃional.
Deşi asistenŃa medicală într-o anumită formă a existat încă de la debutul vieŃii
umane pe pământ, începuturile nursingului profesional au fost realizate de către
Florence Nightingale (1820-1910), care a început munca sa cu mai bine de 140 de ani
în urmă în cursul războiului din Crimeea (1854-1856).
Descoperirile ulterioare privind relaŃia dintre microorganisme şi boală au
necesitat dezvoltarea unor proceduri de nursing mai complexe şi mai rafinate decât
cele utilizate pentru "îngerii din Crimeea". Dezvoltarea chirurgiei aseptice (după
7
descoperirile lui Lister) au deschis un câmp întreg de tehnici operatorii aseptice şi de
nursing profesional.
Descoperirea măsurilor profilactice precum administrarea de vaccin variolic
(1796), de toxoizi şi antitoxine (în difterie şi tetanos), a serurilor imune (von Behring,
Fränkel şi Kitasato, 1890), a vaccinurilor polio şi rujeolos (Enders, Weller şi
Robins,1949; Salk, 1954; Sabin şi alŃii, 1954-1967), precum şi utilizarea de gama
globuline pentru prevenirea pojarului rabiei, tusei convulsive etc. au făcut necesară
dezvoltarea de noi concepte şi educaŃie în prepararea şi administrarea acestor
substanŃe.
Descoperirea unor teste de diagnostic în domeniul microbiologiei a necesitat o
pregătire microbiologică mai avansată a tehnologiei medicale, a medicilor,
asistentelor şi a altor profesionişti ai sănătăŃii în metode pentru colectarea
specimenelor şi raportarea descoperirilor de laborator specifice, astfel încât terapia
să demareze cât mai precoce.
Descoperirea de substanŃe chimice specifice (de exemplu sulfonamide) şi
substanŃe antibiotice (de exemplu penicilina, streptomicina, tetraciclina,
cloramfenicolul) a contribuit la îmbunătăŃirea modului de abordare medicală a
problematicii bolilor infecŃioase.
Descoperirea mijloacelor de transmitere a infecŃiilor a condus şi la dezvoltarea
de metode eficace de prevenire a răspândirii bolilor, în 1895, sir Ronald Ross (1857-
1932), medic militar în India, a demonstrat transmiterea agentului etiologic al malariei
prin intermediul ŃânŃarilor. Parazitul a fost vizualizat în eritrocitele umane în 1881 de
către Laveran, un chirurg al armatei franceze în Algeria. În 1900 a fost demonstrată
transmiterea virusului febrei galbene de către o specie particulară de ŃânŃari (Aedes
aegypti), în Cuba.
Procedurile chirurgicale moderne ar fi imposibile fără dezinfecŃie şi sterilizare.
Industria laptelui, a conservelor, a hranei ambalate şi congelate sunt dependente de
microbiologie. SanitaŃia sistemelor de apă şi tratarea apelor poluate sunt posibile
numai datorită cunoştinŃelor acumulate prin microbiologie în cursul ultimului secol. In
multe moduri profesiunea medicală şi fiecare latură a ei este dependentă de
cunoaşterea, înŃelegerea şi utilizarea informaŃiilor din microbiologie.
MulŃumită eforturilor oamenilor de ştiinŃă, incidenŃa anumitor boli microbiene a
scăzut. Numai vigilenŃa constantă a tuturor membrilor comunităŃii medicale va putea
face ca această tendinŃă a bolilor prevenibile să continue.
Microbiologul, medicul practician şi asistenta medicală trebuie să aplice
cunoştinŃele de microbiologie în practica de zi cu zi. Deşi pot fi învăŃate din rutină,
persoana cu adevărat profesionistă înŃelege faptele ştinŃifice şi principiile de la baza
acestor tehnici.
Profesionistul ştie de asemenea în ce mod ar trebui modificate aceste tehnici
pentru anumite tipuri de pacienŃi (de exemplu cei care sunt supuşi chirurgiei
cardiace), ce tehnici trebuie utilizate în sălile de operaŃie, de aşteptare şi creşe şi
cum pot fi modificate în condiŃii de urgenŃă (de exemplu război sau alte calamităŃi) şi
de ce pacienŃii, familiile şi publicul trebuie informaŃi de exemplu referitor la imunizări.
Un membru antrenat al echipei medicale, atunci când are noŃiunile necesare de
microbiologie, poate diferenŃia adevărul de interpretarea greşită şi dezinformarea
literaturii "medicale" scrise pentru publicul larg şi poate recunoaşte erorile apărute în
mass media.
Orice persoană care lucrează în domeniul sanitar va putea descoperi că foarte
rar poate fi identificat un act realizat în viaŃa cotidiană în care nu se aplică cunoştinŃele
microbiologice.
8
Capitolul III
III.1. COCII
Sunt bacterii cu formă sferică
cu diametre egale - Staphylococcus aureus;
cu diametre inegale
reniforme - Neisseria gonorrhoeae,
lanceolată - Streptococcus pneumoniae,
ovalară - Enterococcus faecalis.
În urma diviziunii cocii pot apărea în diferite configuraŃii spaŃiale caracteristice,
după cum se divid pe unul, două sau trei planuri.
micrococi - coci izolaŃi - celulele rezultate din diviziune rămân
independente, neregulat răspândite;
diplococi - coci grupaŃi câte doi - Streptococcus pneumoniae;
stafilococi – coci aşezaŃi asemănător ciorchinilor de strugure când
diviziunea are loc în trei planuri neregulate;
streptococi – coci în lanŃuri de lungimi variabile;
tetracoci - coci dispuşi simetric câte patru, datorită diviziunii în două
planuri perpendiculare - Micrococcus tetragenus;
sarcina - coci aşezaŃi câte opt, grupaŃi în cuburi sau pachete, datorită
diviziunii în cele trei planuri perpendiculare - Sarcina flava.
III.2. BACILII
9
Sunt bacterii cilindrice, a căror lungime este mai mare decât lăŃimea, în funcŃie
de raportul dintre cele două axe existând bacili scurŃi şi subŃiri, scurŃi şi groşi, etc.
Forma bacililor este variată:
bastonaşe drepte, rectilinii - Bacillus anthracis,
uşor încurbate cu capete umflate - Corynebacterium diphtheriae,
ramificate - Mycobacterium tuberculosis.
Corpul bacteriilor poate fi deformat de prezenŃa sporului, dacă diametrul
transversal al acestuia este mai mare decât cel al corpului bacterian (genul
Clostridium).
Capetele bacililor pot fi
retezate - Bacillus anthracis
rotunjite – Enterobacterii
ascuŃite - Fusobacterii.
În urma diviziunii bacilii se pot dispune ca
dispoziŃii neregulate – Enterobacterii,
diplobacili - Klebsiella pneumoniae,
streptobacili - Bacillus anthracis,
aşezări cu aspectul literelor T, Y, V, sau beŃe de chibrit împrăştiate -
Corynebacterium diphtheriae.
după formă
o coci – bacterii sferice sau ovalare:
10
sferice – stafilococ, streptococ
ovalare – enterococ
lanceolate – pneumococ
reniforme – gonococ, meningococ
o bacili – bacterii în formă de bastonaş:
drept cu capete rotunjite – enterobacterii
drept cu capete retezate – bacilul cărbunos
drept cu capete efilate – fusobacterii
drept cu capete umflate – bacilul difteric
o cocobacili – bacterii cu corpul scurt, gros – Klebsiella spp.
o forme spiralate
cu corpul încurbat într-un singur plan – vibrionul holeric
cu corpul încurbat în mai multe planuri: spirili, spirochete
Capitolul IV
11
Celula bacteriană are în componenŃa ei două tipuri de elemente structurale:
elemente obligatorii, prezente la toate speciile bacteriene, fără de
care celula bacteriană nu poate supravieŃui:
o peretele bacterian
o membrana citoplasmatică
o citoplasma
o nucleul
elemente facultative care apar doar la unele specii şi în anumite
condiŃii de mediu:
o cili
o fimbrii
o capsulă
o spor
Bacterii Gram-pozitive al căror perete este mai gros (15 – 30 nm), mai rigid
dar mai simplu ca structură (fig.5).
Peptidoglicanul, reprezentând între 50 – 90% din grosimea peretelui celular,
are o structură tridimensională.
Structurile speciale (10 – 50% din grosimea peretelui bacterian) sunt
reprezentate de:
12
- acizi teichoici care stabilizează şi întăresc peretele bacterian, creează
mediul ionic necesar enzimelor din membrana celulară şi sunt antigene majore. Acizii
teichoici sunt:
acizi teichoici de perete – legaŃi covalent de reŃeaua de peptidoglican
acizi teichoici de membrană (lipoteichoici) – legaŃi prin forŃe ionice de
peptidoglican şi covalent de glicolipidele membranei citoplasmatice.
- acizi teichuronici – formaŃi din acid uric şi polizaharide neutre, sunt
antigene.
- lipoglicani (glicolipide) – în cantitate mare la bacteriile Gram pozitive.
Bacterii acido-alcoolo-rezistente:
Peptidoglicanul este dispus într-un singur strat subŃire de care sunt legate
glicolipide complexe.
Structurile speciale sunt reprezentate de:
- arabinogalactanul – un polizaharid care acoperă peptidoglicanul
având şi caracteristici de endotoxină;
- acizii micolici – sunt acizi graşi cu catenă lungă ramificată, caracterul
de alcoolo-acido-rezistenŃă fiind direct proporŃional cu lungimea acestei catene;
- micozidele – sunt peptidoglicolipide şi glicolipide.
13
asigură protecŃia celulei bacteriene
intervine în procesele de osmoză şi difuziune
este sediul unor antigene somatice
este sediul receptorilor specifici pentru bacteriofagi
participă la diviziunea bacteriei
imprimă caracterele de tinctorialitate ale celulei bacteriene
14
lipide: polimeri de acizi graşi cu lanŃ scurt la genul Bacillus, Clostridium,
Pseudomonas.
Vacuolele sunt formaŃiuni sferice care conŃin diferite substanŃe în soluŃie
apoasă, delimitate de o membrană lipoproteică denumită tonoplast.
15
Sunt formaŃiuni foarte subŃiri, fine, alungite, neramificate, flexibile şi sinuoase,
cu lungime variabilă (5-15-75 µm) (fig.7). Proteina flagelilor, flagelina
(asemănătoare miozinei) este antigen, antigenul H, cu specificitate de tip.
La microscopia electronică s-a evidenŃiat structura fină a cilului (fig.8):
Corpusculul bazal situat în citoplasmă imediat sub membrana
citoplasmatică
alcătuit dintr-un ax rigid şi un set de inele:
- 2 inele la bacterii Gram-pozitive:
discul M flotant în membrana citoplasmică
discul P în stratul de peptidoglican
- 4 inele la bacterii Gram-negative:
M, în membrana citoplasmatică;
S, în spaŃiul periplasmatic;
P, în stratul de peptidoglican;
L, flotant în membrana externă.
16
caracterele genotipice ale formei vegetative din care provine. Structurile componente
ale sporului bacterian sunt codificate de gene represate în forma vegetativă a
bacteriei şi derepresate în condiŃii defavorabile de mediu, când devin represate
genele vegetative. PrezenŃa sporilor este un caracter constant la germenii din genul
Clostridium şi un caracter facultativ la germenii din genul Bacillus.
Sporogeneza are loc în general în condiŃii nefavorabile formei vegetative, şi
presupune apariŃia, în etape succesive, de modificări profunde în materialul nuclear,
citoplasmă, compoziŃie chimică, structură, procesul esenŃial în cursul sporogenezei
fiind deshidratarea.
Materialul genetic este concentrat şi împreună cu apa legată, lipide, ioni de
magneziu, dipicolinat de calciu, este înconjurat de un strat protector: membrana
sporală, cortex sporal şi învelişurile sporale.
In condiŃii favorabile are loc germinarea sporului: rehidratare, ruperea
membranelor şi apariŃia unei singure forme vegetative, identică cu cea din care s-a
format anterior sporul.
Endosporul are forma ovalară sau sferică, poate fi aşezat central, subterminal
şi terminal în funcŃie de specia microbiană iar dacă diametrul sporului este mai mare
decât grosimea bacteriei, corpul bacterian se deformează. Pe baza acestor
caractere, bacilii sporulaŃi, apar în general sub trei forme (fig.10):
a) - bacili cu sporul sferic, dispus central sau subterminal, mai mic decât celula
(Bacillus anthracis);
b) - bacili cu spor ovalar, mai mare decât diametrul transversal al celulei
bacteriene, aşezat central (forme de fus, de bărcuŃă) sau subterminal (formă de
rachetă de tenis) (genul Clostridium);
c) - bacili cu spori terminali, sferici, cu dimensiuni mai mari decât celula,
asemănători cu un băŃ de chibrit sau ac de gămălie (Clostridium tetani).
Sporul poate fi evidenŃiat prin coloraŃii speciale. La coloraŃia Gram rămâne
necolorat.
Sporul prezintă o rezistenŃă marcată faŃă de:
- uscăciune
- căldură:
o umedă - sporii speciei Bacillus anthracis sunt distruşi în zece
minute la temperatura de fierbere a apei; unii spori de Clostridium botulinum suportă
această temperatură timp de câteva ore: rezistă 6 ore la 100º C, 2 ore la 105º C, 10'
la 120º C;
o uscată - este mai bine tolerată de sporii bacterieni, aceştia fiind
distruşi în 2-3 ore la 140º C în Poupinel;
- substanŃe chimice: rezistă la acŃiunea fenolului 5% timp de o
săptămână, la acŃiunea alcoolului mai multe săptămâni.
17
Capitolul V
FIZIOLOGIA BACTERIANĂ
V.1.1. Apa, reprezintă 75 - 85% din greutatea umedă a bacteriei. Există apă
liberă (mediu de dispersie), fie apă legată fizico-chimic cu diferite structuri. Sporii au
puŃină apă şi aceea sub formă de apă legată. Rol:
- mediu de dispersie;
- reactiv în reacŃiile metabolice;
- etapă finală a unor reacŃii oxidative.
18
evidenŃiază utilizarea sau imposibilitatea utilizătii unui anumit zahar de către o
bacterie permit identificarea bacteriei respective.
Roluri:
- protecŃie faŃă de radiaŃiile UV (pigmenŃi carotenoizi);
- enzimatic
- antibiotic (piocianina produsă de P.aeruginosa faŃă de B.anthracis).
19
- enzime ectocelulare situate în membrana citoplasmatică, reglând
permeabilitatea selectivă (permeaze, translocaze);
- enzime extracelulare sau exoenzime, care sunt eliberate în mediu
(hidrolaze).
În raport cu reacŃia catalizată enzimele pot fi:
- hidrolaze (fosfataza, proteaza);
- transferaze (aminotransferaza);
- oxido-reductaze (catalaza, oxidaza, peroxidaza);
- izomeraze etc.
După modul de apariŃie distingem enzime:
- constitutive, care există întotdeauna în celulă indiferent de natura
mediului;
- adaptative (inductibile), sintetizate de către bacterie numai ca
răspuns la anumiŃi compuşi apăruŃi în mediu (penicilinaza).
Pe lângă importanŃa inestimabilă pe care o are în natură, agricultură, industrie,
medicină, etc. activitatea enzimatică a bacteriilor este foarte utilă şi în taxonomia
bacteriană.
20
NutrienŃii sunt substanŃele nutritive care sub formă de soluŃie pot traversa
membrana citoplasmatică pentru a participa la reacŃiile metabolice specifice celulei
bacteriene.
Pentru nutriŃie bacteriile folosesc compuşii din mediile naturale pe care îi
transformă în nutrienŃi prin:
- solvire – minerale, CO2, O2;
- digestie extracelulară prealabilă, cu ajutorul unor hidrolaze – se
formează aminoacizi din proteine, monozaharide din polizaharide, acizi graşi şi
glicerol din lipide etc.
NutrienŃii pătrund în citoplasma celulei bacteriene traversând membrana
citoplasmatică prin:
- difuziune simplă, pe baza diferenŃelor de concentraŃie;
- difuziune facilitată (prin proteine carrier), tot pe baza gradientului;
- transport activ, contragradient, cu consum de energie .
21
c) Bacterii paratrofe - bacterii citoparazite, trăiesc numai în interiorul unei
celule vii; nu se cultivă pe medii artificiale (Rickettsia, Chlamydia, Mycobacterium
leprae).
22
- medii îmbogăŃite – permit creşterea bacteriilor pretenŃioase, conŃin
un plus de nutrienŃi asigurat prin adaos de sânge, ser, plasmă, ou, extract de levuri
etc.
După consistenŃă:
- lichide – permit cultivarea unui produs monobacterian; sunt utile
pentru studiul caracterelor biochimice
- medii semisolide – conŃin o cantitate mică de agar, sunt utile pentru
menŃinerea în viaŃă a tulpinilor bacteriene, pentru studiul mobilităŃii bacteriilor sau
pentru studiul unor caractere biochimice;
- medii solide – care permit fixarea bacteriilor în punctul de inoculare,
multiplicarea lor în acel punct determinând apariŃia unui conglomerat vizibil cu ochiul
liber numit colonie. Mediile solide se obŃin prin:
• coagularea termică a proteinelor din ser sau ou;
• gelificare prin includerea în mediu a unui fitocoloid obŃinut
din alge marine numit agar. Acesta are următoarele proprietăŃi:
o se lichefiază la temperatura de fierbere a apei;
o se solidifică la aprox. 42ºC;
o meŃine starea de soliditate a mediului la
temperaturi cuprinse între 0 - 80ºC;
o nu are aport nutritiv şi nu este degradat în cursul
metabolismului bacterian.
A. Anabolismul
23
A2. Biosinteza lipidelor – din glicerol (provine dintr-un compus intermediar
rezultat în cursul glicolizei) şi acizi graşi. Grăsimile sintetizate de bacterie sunt
utilizate la sinteza fosfolipidelor membranare, a peretelui celular specific bacteriilor
Gram negative.
A3. Biosinteza aminoacizilor şi a proteinelor este diferită în funcŃie de
specia bacteriană. Unele bacterii au echipament enzimatic ce le permite sinteza
tuturor aminoacizilor din intermediari ai catabolismului glucozei (E.coli). Alte bacterii
necesită prezenŃa în mediu a unor aminoacizi preformaŃi. Proteinele bacteriene
sintetizate sunt proteine structurale, enzime, toxine).
A4. Biosinteza purinelor şi pirimidinelor – din produşi intermediari rezultaŃi
din glicoliză şi ciclul Krebs. Purinele şi pirimidinele rezultate servesc la sinteza
acizilor nucleici.
B. Catabolismul
RespiraŃia celulară
Este procesul cel mai eficient de utilizare al carbohidraŃilor în care o serie de
molecule sunt oxidate, acceptorul final de electroni fiind o moleculă anorganică
(fig.12):
- O2 – în respiraŃia aerobă;
- altă moleculă anorganică, nu O2, (ionul nitrat, ionul sulfat) –
respiraŃie anaerobă.
În procesul de respiraŃie celulară este generat ATP, etapele catabolismului
glucozei fiind: glicoliza (calea Embden-Meyerhof-Parnas sau căi alternative: calea
pentoză-fosfat, calea Entner-Doudoroff), ciclul Krebs şi lanŃul transportului de
electroni.
În cursul respiraŃiei aerobe a procariotelor rezultă 38 molecule de ATP: 34 din
lanŃul transportului de electroni şi 4 din glicoliză şi ciclul Krebs.
În respiraŃia anaerobă cantitatea de ATP formată este variabilă, întotdeauna
mai mică decât în respiraŃia aerobă.
24
FermentaŃia
Este procesul de obŃinere a energiei în care atât donorul cât şi acceptorul de
electroni este de natură organică, în absenŃa oxigenului acidul piruvic fiind convertit
la unul sau mai mulŃi produşi în funcŃie de specie. Cantitatea de ATP care se
formează este mică (2 molecule) (fig.13).
După modul de obŃinere a energiei bacteriile se pot clasifica în:
- strict aerobe – folosesc exclusiv respiraŃia, nu se dezvoltă în
absenŃa oxigenului molecular (B. subtilis, B. anthracis, P. aeruginosa, M.
tuberculosis, etc.)
- strict anaerobe – folosesc exclusiv fermentaŃia, oxigenul este toxic
pentru ele. Neavând enzimele respiratorii (catalază, peroxidază etc.) se formează
peroxid de hidrogen care este toxic (genul Clostridium)
- aerobe - facultativ anaerobe – pot obŃine energia atât pe cale
oxidativă cât şi fermentativă (E. coli, Staphylococcus, etc.);
- aerotolerante – au metabolism fermentativ dar rămân viabile în
prezenŃa oxigenului;
- microaerofile – cresc numai în prezenŃa unor cantităŃi reduse de
oxigen (spirochetele);
25
bacteriilor. Înmugurirea sau ramificarea este caracteristică unui număr foarte mic de
specii bacteriene.
Pentru că bacteriile sunt prea mici creşterea este studiată la nivel de populaŃie
bacteriană şi nu la nivel de celulă. Prin urmare când vorbim de creşterea bacteriană
facem referire la creşterea numărului de celule într-o populaŃie bacteriană şi nu la
mărimea celulei bacteriene.
Pentru a vorbi despre creşterea şi multiplicarea bacteriană folosim
următoarele noŃiuni:
- timp de generaŃie: timpul necesar dublării populaŃiei bacteriene,
acesta fiind în medie 20 – 30 minute;
- rata de creştere: numărul de generaŃii în unitatea de timp;
- colonia bacteriană: totalitatea bacteriilor rezultate din multiplicarea
unei singure celule bacteriene;
- cultura bacteriană: totalitatea coloniilor de pe suprafaŃa mediului
solid;
o cultura mixtă: formată din mai multe tipuri de colonii (mai multe specii
bacteriene);
o cultura pură: formată dintr-un singur tip de colonie (un singur germen).
- inocularea: depunerea unui produs biologic în cultura de celule, în
oul de găină embrionat, animale de laborator
- însămânŃare: depunerea unui produs biologic pe / în mediu de
cultură.
Creşterea bacteriană este studiată pe medii de cultură optime pentru fiecare
specie în parte. În medii lichide celulele bacteriene sunt dispersate determinând
modificări ale aspectului mediului: tulburare uniformă, inel aderent de peretele
flaconului, peliculă la suprafaŃa mediului sau depozit. Pe medii de cultură solide
multiplicarea unei celule bacteriene formează colonia vizibilă cu ochiul liber după 18
– 24 de ore de la depunerea germenului pe mediu. O colonie bacteriană provine
dintr-o celulă bacteriană sau din bacterii ataşate (unităŃi formatoare de colonii =
UFC). În funcŃie de dimensiuni, contur, consistenŃă, transparenŃă, aspectul
suprafeŃei, pigment, aderenŃa la mediu etc. coloniile bacteriene pot fi:
- colonii tip S (smooth) – rotunde, bombate, suprafaŃă netedă, lucioase,
margini circulare, suspensionează omogen în ser fiziologic, produc tulburare în
mediul lichid, caracteristice bacteriilor patogene;
- colonii tip R (rough) – margini neregulate, plate, suprafaŃa rugoasă,
uscată, aderente de mediu, aglutinează spontan în ser fiziologic, în mediul lichid
produc depozit cu supernatant clar, sunt caracteristice pentru germeni degradaŃi, cu
modificări antigenice, de virulenŃă. Există trei specii bacteriene care fac excepŃie,
crescând sub forma de colonii R pentru tulpini patogene: Mycobacterium
tuberculosis; Corynebacterium diphtheriae; Bacillus anthracis;
- colonii M (mucoid) – foarte mari, lucioase, suprafaŃa netedă, aspect
uleios, caracteristice pentru bacterii cu capsulă;
- colonii untoase – rotunde, bombate, margini regulate, suprafaŃa
netedă, mate, consistenŃă păstoasă (cremoasă), uneori pigmentate, caracteristice
pentru levuri;
- colonii pufoase: reŃea de filamente (hife) aeriene, caracteristice
fungilor filamentoşi.
- fenomen de căŃărare (invazie, migrare, roire): creşterea se exprimă printr-un
strat continuu, sub forma unor valuri succesive; fenomen caracteristic pentru Proteus spp.
26
glucoză Fig. 11.
Catabolismul glucozei prin
procesul de respiraŃie
CO2
Ciclul
Krebs ATP
CO2
lanŃul transferului
de electroni ATP
H2O
glucoză
glicoliză
Acid piruvic
fermentaŃie
27
Fig. 13. Clasificarea bacteriilor pe baza caracterelor de metabolism
Bacterii
Sursa de energie
Chimiotrofe Fototrofe
O2 Non-O 2
RespiraŃie aerobă
- Compuşi Compuşi organici
anorganici
-
-
RespiraŃie anaerobă FermentaŃie
-
-
-
ÎnsămânŃate în mediu adecvat, incubate la 37° C, urm ărite din oră în oră
bacteriile vor urma 4 faze caracteristice ale multiplicării populaŃiei bacteriene:
a) Faza de latenŃă (faza de lag): reprezintă perioada de adaptare a
bacteriilor la condiŃiile de mediu, perioadă în care numărul germenilor rămâne
nemodificat sau scade. Bacteriile au un metabolism activ de sinteză al enzimelor
ceea ce face ca celula bacteriană să crească în dimensiuni. În această fază bacteria
este foarte sensibilă la agenŃi antibacterieni. Durata acestei faze este de aproximativ
2 ore, cuprinsă între momentul însămânŃării mediului şi momentul în care bacteria
începe să se multiplice.
b) Faza de creştere logaritmică (faza exponenŃială): celulele bacteriene
încep să se dividă permanent, ritmic. Timpul de generaŃie în această fază este
caracteristic pentru o anumită specie: 10 minute pentru V. cholerae, 20-30 minute
pentru majoritatea bacteriilor patogene, 18 – 14 ore pentru M. tuberculosis. Numărul
bacteriilor creşte în progresie geometrică. Bacteriile aflate în fază exponenŃială au
toate caracteristicile speciei: afinitate tinctorială, proprietăŃi biochimice şi de
28
metabolism, structura antigenică, virulenŃa şi toxigeneza sunt tipice speciei
respective. Sunt sensibile la acŃiunea agenŃilor antibacterieni. Este etapa optimă
pentru studierea bacteriilor sau pentru recoltarea lor în vederea preparării de
vaccinuri şi pentru testarea sensibilităŃii la antibiotice. Durata fazei este de 8-12 ore.
c) Faza staŃionară (faza de concentraŃie "M"): mediul de viaŃă devine mai
puŃin favorabil prin consumul substanŃelor nutritive, acumularea de metaboliŃi toxici.
Numărul bacteriilor vii rămâne constant prin:
- persistenŃa bacteriilor vii, absenŃa multiplicării datorită epuizării unui
nutrient din mediu (factor limitant al creşterii);
- echilibru între bacteriile care mor şi cele care iau naştere prin diviziune
datorită acumulării de cataboliŃi toxici şi a pH-ului mediului.
Bacteriile au morfologia caracteristică speciei dar sunt mai puŃin sensibile la
acŃiunea agenŃilor antibacterieni. În această fază realizăm identificarea germenilor.
La speciile sporogene începe formarea sporilor. Durata acestei faze variază în raport
cu specia şi condiŃiile de cultură, de la o oră la câteva zile, pentru unele bacterii
poate dura câteva săptămâni.
c) Faza de declin: substratul nutritiv sărăceşte, metaboliŃii toxici
sunt în cantitate mare ceea ce face ca bacteriile moarte să depăşească progresiv
numărul celor vii, până la autosterilizarea culturii. În această fază bacteriile prezintă
modificări morfo-tinctoriale, ale caracterelor biochimice şi de metabolism, de virulenŃă
şi toxigeneză. Apar forme de involuŃie. La bacteriile sporulate fenomenul de
sporogeneză devine foarte intens. Durata fazei depinde de specia microbiană (N.
gonorrhoeae 2-3 zile, la M. tuberculosis 2-3 săptămâni).
Cultivarea bacteriilor are ca scop:
- identificarea agentului etiologic al unei infecŃii – pentru identificarea
bacteriilor se folosesc culturi în faza staŃionară, în vârstă de 18 -24 de ore;
- determinarea farmacorezistenŃei microorganismelor izolate – ca inocul
se folosesc culturi în medii lichide, aflate în fază logaritmică, după 4 – 6 ore de
incubare, însămânŃate pe medii solide nutritive adecvate;
- preparare de seruri şi vaccinuri, pentru obŃinerea unor produse de
metabolism bacterian (vitamine, antibiotice etc) - se folosesc culturi continue: cultura
bacteriană se menŃine în fază exponenŃială în permanenŃă prin adăugarea de mediu
proaspăt culturii, în vase speciale, turbidistat sau chemostat.
Fig. 14. Curba multiplicării bacteriilor în cultură discontinuă
3
4
2
Punct de
autosterilizare
29
Capitolul VI
VI.1. DEFINIłII
Septic – infectat, contaminat cu germeni patogeni.
Aseptic (steril) – lipsit de microbi patogeni sau nepatogeni.
Asepsie – ansamblul de metode prin care se evită contaminarea unui substrat steril.
Sterilizare – distrugerea sau îndepărtarea oricăror forme de viaŃă, a tuturor
microorganismelor patogene sau nepatogene, forme vegetative sau sporulate de pe
o suprafaŃă sau dintr-un substrat neînsufleŃit.
DezinfecŃie – distrugerea formelor vegetative microbiene (mai rar a celor sporulate)
din sau de pe suprafaŃa unor substraturi neînsufleŃite, cu ajutorul dezinfectantelor.
Dezinfectant – substanŃă chimică, toxică pentru Ńesuturi vii, cu acŃiune microbicidă,
ireversibilă.
Antisepsie – distrugerea sau îndepărtarea temporară a formelor vegetative
microbiene de pe substraturi vii (mucoase, tegumente, plăgi), cu ajutorul
antisepticelor.
Antiseptic – substanŃă chimică, netoxică pentru Ńesuturile vii, cu acŃiune reversibilă,
bacteriostatică asupra microorganismelor.
Prezervare –prevenirea multiplicării unor microorganisme în produse farmaceutice,
vaccinuri, alimente etc.
30
VI.3.1. concentraŃia microorganismelor – la aceeaşi intensitate a agentului
antimicrobian, timpul de omorâre creşte proporŃional cu concentraŃia de
microorganisme asupra căreia se acŃionează;
VI.3.2. gradul de rezistenŃă al microorganismelor – diferitele specii prezintă
grade diferite de susceptibilitate la acŃiunea agenŃilor antibacterieni, chiar în cadrul
aceleiaşi specii existând uneori diferenŃe individuale de sensibilitate. De la cele mai
rezistente la cele mai puŃin rezistente putem enumera, în ordine: sporii bacterieni,
micobacteriile, virusurile fără înveliş extern, bacteriile Gram negative, fungii, bacteriile
Gram pozitive, virusurile cu înveliş extern.
VI.3.3. intensitatea agentului antibacterian – cu cât intensitatea agentului
antibacterian (concentraŃia, presiunea, temperatura ridicată, etc) este mai mare
proporŃional timpul de acŃiune eficientă al agentului antimicrobian este mai mic.
VI.3.4. influenŃa mediului – substanŃele organice, turbiditatea mediului,
duritatea apei, pH-ul mediului etc pot influenŃa în sens pozitiv sau negativ acŃiunea
unui agent antibacterian.
31
VI.4.1. 3. căldura uscată – are ca mecanism de acŃiune oxidarea sau
carbonizarea structurilor bacteriene. Se aplică sub formă de:
VI.4.1.3.1. flambare – metodă de completare a sterilităŃii, metodă de
asepsie;
VI.4.1.3.2. încălzire la incandescenŃă – pentru ansa sau acul de
platină;
VI.4.1.3.3. incinerare – pentru materiale contaminate, reziduuri,
animale;
VI.4.1.3.4. sterilizare cu aer supraîncălzit– se realizează în cuptorul
Pasteur (Poupinel; etuvă) la 180°C timp de 1 or ă, sau la 160°C timp de 2 ore.
VI.4.2. FRIGUL
VI.4.2.1. refrigerarea – temperaturi de 0 – 7° au efect bacteriostatic
asupra majorităŃii microorganismelor; unele bacterii mor (Neisseria meningitidis,
N.gonorhoeae, Haemophilus influenzae) altele se pot multiplica.
VI.4.2.2. congelarea – dacă este făcută lent, la temperaturi de (-20°C)
favorizează formarea cristalelor de apă care lezează membrana citoplasmatică a
celulei bacteriene care va fi distrusă (efect microbicid). Congelarea rapidă la (-80°C)
în bulion glicerinat duce la solidificarea amorfă a apei intracelulare ceea ce face ca
celula microbiană să rămână în viaŃă.
VI.4.2.3. şocul rece – unele bacterii pot fi distruse prin scăderea
bruscă a temperaturii, de la 45°C la 15°C.
VI.4. 4. RADIAłIILE
VI.4.1. radiaŃii neionizante – radiaŃiile UV au efect microbicid, dar au
putere de penetrabilitate mică. Se pot folosi la dezinfecŃia aerului în încăperi, din
boxele de lucru sau la dezinfecŃia suprafeŃelor în laboratorul de microbiologie, ca o
metodă complementară măsurilor de curăŃenie şi dezinfecŃie chimică.
VI.4.2. radiaŃii ionizante corpusculare (α, β) şi electromagnetice (γ, X)
au efect microbicid, au mare putere de penetrare. Ionizarea compuşilor celulari prin
expulzarea electronilor cauzează moartea microorganismelor. Această metodă de
sterilizare se utilizează pentru medicamente, instrumentar confecŃionat din material
degradabil termic. Ca surse de radiaŃii gama sunt folosite cobaltul 60 sau cesiul 137.
VI.4. 5. DESICAREA
RezistenŃa bacteriilor la desicaŃie este variabilă. Sporii bacterieni, sporii
fungici, chisturile protozoarelor rezistă timp îndelungat la uscăciune în timp ce
formele vegetative se distrug în câteva ore. RezistenŃa formelor vegetative la
desicaŃie creşte în produsul patologic (materii fecale, spută, puroi), la temperaturi
scăzute, în mediu proteic etc.
Asocierea a 2 factori fizici (frigul şi desicaŃia) a dat naştere unei metode de
păstrare timp îndelungat a microorganismelor – liofilizarea. Metoda constă în
congelarea rapidă a suspensiei microbiene într-un mediu protector urmată de
uscarea rapidă în vid şi înfiolarea produsului obŃinut.
32
VI.4. 6. ULTRASUNETELE
Au acŃiune microbicidă prin acŃiune mecanică, spărgând peretele celular acele
sunete care ating 16.000 cicli/sec. Utilizând ultrasunete de diferite frecvenŃe s-au
putut obŃine unii constituenŃi ai celulei bacteriene.
VI.4.7. FILTRAREA
Prin procesul de trecere a unui lichid sau gaz printr-un material poros, pot fi
reŃinute, mecanic sau electrostatic, cele mai multe dintre bacterii dacă dimensiunea
porilor este de aproximativ 0,22 µm. Filtrele cu dimensiunea porilor de 0,01 µm pot
reŃine şi virusurile mici aceste filtre având în mod real rol sterilizant al materialului
filtrat. Este o metodă se sterilizare la rece aplicată soluŃiilor denaturabile termic.
VI.4. 8. LASERUL
Laserul (light amplification by stimulated emission of radiation) are efect
microbicid instantaneu.
33
a. de nivel înalt – substanŃe care distrug toate microorganismele cu
excepŃia unui număr redus de spori bacterieni, cu condiŃia timpului de contact de cel
puŃin 20 de minute – peroxid de hidrogen stabilizat (6%), acid peracetic, hipoclorit de
sodiu (5%, 25%), glutaraldehida (2%), cloramina B (2%);
b. de nivel mediu – substanŃe care distrug virusuri, fungi, formele
vegetative bacteriene (inclusiv Mycobacterium tuberculosis) dar nu distrug endosporii
bacterieni şi unele virusuri fără înveliş extern (rhinovirus, enterovirus). Timpul de
contact este de 10 minute: fenoli, iodofori, alcooli, compuşi pe bază de clor etc;
c. de nivel scăzut – substanŃe care distrug majoritatea formelor
vegetative bacteriene, unele virusuri, unii fungi dar nu distrug M.tuberculosis,
endosporii bacterieni şi virusurile nude. Timpul de contact este de 10 minute:
clorhexidina, compuşi cuaternari de amoniu.
AcŃiunea antimicrobiană a antisepticului sau dezinfectantului depinde de
concentraŃie, de timpul de contact şi de prezenŃa substanŃelor organice
VI.5.4.1. clasificare
Antibioticele şi chimioterapicele pot fi clasificate în raport cu multe criterii:
a. după modul de obŃinere – se folosea termenul de antibiotic pentru
substanŃele obŃinute prin biosinteză microbiană şi chimioterapic pentru cele obŃinute
prin sinteză chimică. Astăzi această graniŃă a fost depăşită aproape toate
antimicrobienele fiind obŃinute, mai economic, sau îmbunătăŃite prin sinteză chimică.
Este corect să se utilizeze termenul de antibiotic pentru toŃi agenŃii antimicrobieni
utilizaŃi în terapie indiferent de modul lor de obŃinere, evitând astfel şi confuzia creată
de termenul de chimioterapic care desemnează produse utilizate în tratamentul unor
afecŃiuni neoplazice.
b. după categoria de microorganisme asupra cărora acŃionează –
există antibiotice antibacteriene, antivirale, antifungice, antiparazitare.
c. după structura chimică
34
d. după efectul lor
d1. bacteriostatic – opreşte multiplicarea bacteriană – tetracicline,
cloramfenicol, eritromicina, sulfamide etc;
d2. bactericid – distruge bacteriile: peniciline, cefalosporine, aminoglicozide,
etc.
e. după mecanismul de acŃiune
e1. inhibă sinteza peretelui bacterian: antibiotice beta-lactamice, glicopeptide,
izoniazida, etc; au efect bactericid;
e2. afectează funcŃiile membranei citoplasmatice: polimixine, colistina,
nistatina, amfotericina B; au efect bactericid;
e3. perturbă sinteza proteinelor celulare la nivelul ribozomilor: aminoglicozide,
tetracicline, macrolide, licosamide, acid fusidic, mupirocin etc;
e4. blochează sinteza acizilor nucleici: chinolone, rifampicina, metronidazol,
sulfamide, trimetoprim, chinolone etc.
f. după spectrul de acŃiune
f1. cu spectru „îngust”:
o de tip penicilinic: active pe bacili Gram pozitivi, coci Gram pozitivi
şi negativi (peniciline, macrolide, lincosanide etc);
o de tip streptomicinic: active pe bacili Gram negativi, coci Gram
pozitivi şi negativi (aminoglicozide, polimixine etc.);
f2. cu spectru larg: active pe bacili Gram pozitivi şi negativi, coci Gram pozitivi
şi negativi, spirochete, leptospire, chlamydii, mycoplasme etc (cloramfenicol,
tetracicline).
35
Materialul genetic se transmite orizontal la toŃi membrii populaŃiei bacteriene prin
transducŃie, transformare, conjugare, transpoziŃie.
c. monovalentă – germenii sunt rezistenŃi faŃă de un singur antibiotic;
d. plurivalentă – rezistenŃa la mai multe antibiotice, concomitent;
e. manifestată direct – leagă o anumită bacterie de un singur antibiotic;
f. manifestată încrucişat – rezistenŃa unei bacterii faŃă de mai multe
antibiotice cu structură sau cu mecanism de acŃiune asemănător;
g. după ritmul de instalare
• rapid (monostadială) – de tip streptomicinic
• intermediar – de tip eritromicinic
• lent (pluristadială) – de tip penicilinic
• foarte lent de tip vancomicină.
▪ lantibiotice tip A:
Sub comanda unor gene localizate cromozomal sau plasmidic, sunt sintetizate
la nivel ribozomal ca proteine precursoare inactive care, prin modificări enzimatice
sunt transformate în peptide active. Sunt produse de stafilococi, bacili Gram negativi
şi lactococi, cele mai cunoscute lantibiotice fiind nisina (gene pe cromozomul celulei
bacteriene), subtilina, epidermina (gene pe plasmidul pTu32), gallidermina (produsă
de Staphylococcus gallinarum cu plasmid Tu3928) . Nu se cunoaşte cu exactitate
modul de acŃiune al lantibioticelor.
Nisina are acŃiune inhibantă asupra unor germeni Gram pozitivi
(Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus, Clostridium, Listeria) şi inhibă sporularea
germenilor din genul Bacillus şi Clostridium, având acŃiune maximă la pH sub 5,5. Nu
are acŃiune asupra bacteriilor Gram negative, asupra fungilor şi levurilor. Epidermina
produsă de Staphylococcus epidermidis are acŃiune antimicrobiană faŃă de
microorganisme patogene pentru piele: Streptococcus, Staphylococcus,
Propionibacterium acnes.
Sunt utilizate în industria alimentară şi în medicină:
- nisina
conservant pentru vegetale, brânzeturi, carne, peşte, băuturi
alcoolice, vin etc.;
component al preparatelor cosmetice;
agent terapeutic cu aplicare locală în infecŃii bacteriene în
medicina veterinară.
- epidermina
tratament în cazurile de acnee juvenilă şi eczeme la om
- gallidermina
în tratamentul foliculitelor, al impetogo-ului.
36
▪ lantibiotice tip B
Cea mai cunoscută este lanthiopeptina care are acŃiune antivirală faŃă de
Herpes simplex virus.
VI.6.2. BACTERIOCINE
VI.6.3. BACTERIOFAGUL
Este virusul care parazitează bacteriile. Are structură complexă fiind alcătuit
din (fig. 15):
capul fagului este alcătuit dintr-o capsidă cu simetrie icosaedrică
ce adăposteşte în interior acidul nucleic (ADN dublu catenar sau ARN);
coada fagului cu simetrie helicală este alcătuită din următoarele
elemente: cilindrul axial înconjurat de teaca cozii, placa bazală cu croşete de fixare şi
fibrele cozii. Coada fagului este de natură proteică şi are rol în adsorbŃia şi
penetrarea în celula bacteriană.
Între bacteriofag şi bacteria gazdă se stabilesc două tipuri de relaŃii:
37
această rezistenŃă datorându-se lipsei receptorilor specifici sau unei stări de
imunitate.
Fagii care evoluează prin ciclu litic se numesc fagi virulenŃi şi infecŃia cauzată
de ei are efect bacteriolitic.
Ciclul litic poate fi evidenŃiat la nivelul culturilor bacteriene, cultura în mediul
lichid devenind limpede după inoculare cu bacteriofag iar pe mediul solid însămânŃat
uniform, inocularea fagului litic duce la apariŃia zonei clare de liză (plajă de liză).
38
Capitolul VII
GENETICA BACTERIANĂ
VII.1. DEFINIłII
Genetica bacteriană se ocupă cu studiul eredităŃii şi a variabilităŃii bacteriene.
Genom – suma genelor unui organism;
Genotip – totalitatea informaŃiei genetice a unui organism;
Fenotip – totalitatea caracterelor observabile, produse de genotip în
interacŃiune cu mediul ambiant.
39
FuncŃiile ADN-ului ca material genetic:
▪ depozitar al informaŃiei genetice;
▪ rol în replicare;
▪ rol în transcrierea şi traducerea informaŃiei genetice;
▪ rol în reglarea şi controlul activităŃii celulare.
VII.3.1. PLASMIDELE
40
- bacterii F+ - bacterii care au factor F în citoplasmă, numite „celule
mascule”, capabile de a acŃiona ca donoare de material genetic, au pili sexuali;
- bacterii Hfr (high frequency of recombination) – bacterii care au
factorul F integrat în cromozomul bacterian. Au o mare frecvenŃă de conjugare şi
recombinare. Sunt donatoare de material genetic, fiind transferate şi un număr
variabil de gene cromozomale, mai rar chiar şi factorul F.
- bacterii F’ – deŃin factor de fertilitate recombinant, adică plasmida
care a fost anterior integrată în cromozomul bacterian, s-a desprins încorporând în
structura sa unele gene cromozomale. Sunt bacterii donatoare de material genetic.
„Sunt secvenŃe specifice de ADN care îşi menŃin integritatea fizică, structurală,
genetică, funcŃională în cursul translocaŃiei de la o poziŃie la alta pe acelaşi genom
sau pe genomuri diferite”.
Elementele genetice transpozabile se împart în 3 categorii:
VII.3.2.2. transpozoni
41
Transpozonii poartă gene care conferă bacteriilor funcŃii noi: rezistenŃă la
antibiotice, capacitatea de a sintetiza enzime, enterotoxine, factori de colonizare
intestinală, antigene de suprafaŃă (K88).
VII.3.2.3. bacteriofagi
VII.4.2.1 mutaŃia
42
VII.4.2.2. transferul genetic
VII.4.2.2.1. transformarea
VII.4.2.2.3. conjugarea
43
Capitolul VIII
VIII.1. DEFINIłII
AderenŃă (ataşare, adeziune) – procesul prin care bacteria se leagă de
suprafaŃa celulei Ńintă. Este principalul pas în iniŃierea procesului infecŃios.
Diseminare (invazie) – procesul prin care microorganismul se răspândeşte de
la poarta de intrare în tot organismul.
InfecŃie – multiplicarea unui agent infecŃios patogen în interiorul organismului,
chiar dacă este neînsoŃită de manifestări clinice de boală.
Microorganism nepatogen –microrganism care face parte din flora normală,
care nu produce îmbolnăvire.
Microorganism patogen – microorganism care întotdeauna cauzează boală.
Microorganism potenŃial patogen (oportunist) – microorganism capabil să
cauzeze îmbolnăvire doar atunci când este afectat sistemul de apărare al
macroorganismului.
Microorganism saprofit – bacterii care trăiesc în natură, se stabilesc rar în
organism, au importanŃă redusă ca factori patogeni.
Patogenitate – capacitatea unui microorganism de a a cauza boală prin
virulenŃă sau toxigenitate.
Purtător asimptomatic – persoană care adăposteşte microorganismul fără a
prezenta semne clinice de boală, care poate transmite microorganismul celor din jur.
44
VIII.2. PATOGENEZA INFECłIEI BACTERIENE
Patogeneza infecŃiei bacteriene include iniŃierea procesului infecŃios şi
mecanismele care duc la instalarea semnelor şi simptomelor bolii infecŃioase.
Rezultatul interacŃiunii dintre bacterie şi gazdă depinde de capacitatea
microorganismului de a se stabili în macroorganism şi de a cauza leziuni în ciuda
mecansimelor de apărare ale acestuia. Bacteria acŃionează prin capacitatea de
aderare la substratul specific, prin invazivitate, toxigenitate, abilitate de a se sustrage
răspunsului imun. Dacă bacteria sau reacŃiile imune lezează suficient
macroorganismul apare boala infecŃioasă manifestă clinic.
45
2. inactivarea specifică a genelor codificante ale fenotipului patogen
trebuie să ducă la scăderea măsurabilă a patogenităŃii sau virulenŃei
microorganismului;
3. revenirea sau reînlocuirea genelor mutante trebuie să restabilească
patogenitatea tulpinii.
Analiza infecŃiei sau a bolii infecŃioase în concordanŃă cu postulatele lui Koch
împarte microorganismele în patogene şi nepatogene.
Unele specii bacteriene sunt considerate ca patogene prezenŃa lor în
macoorganism fiind considerată anormală: M.tuberculosis, N.gonorrhoeae,
Treponema pallidum etc.
Alte specii fac parte din flora care populează biotopurile macroorganismului
alcătuind aşa-numita „floră normală”. Dintre componenŃii acesteia, unele specii pot,
în anumite condiŃii să cauzeze îmbolnăviri : E.coli, Klebsiella etc., germeni numiŃi
condiŃionat patogeni sau germeni oportunişti.
a. pătrunderea
Pentru a iniŃia infecŃia bacteria trebuie să pătrundă în macroorganism şi să se
stabilească acolo. Poarta de intrare, cel mai frecvent, este tractul respirator, gastro-
intestinal, genito-urinar. Bacteriile mai pot pătrunde în organism prin tegumente şi
mucoase lezate (mai rar prin cele intacte). Microorganismul patogen poate utiliza una
sau mai multe căi pentru a pătrunde, a se instala şi a se multiplica în organismul
gazdă.
c. multiplicarea bacteriană
După localizarea bacteriei în focarul primar de infecŃie începe multiplicarea
bacteriană şi diseminarea germenilor în organism.
d. diseminarea
Răspândirea (diseminarea) bacteriilor în organism poate avea loc direct prin
Ńesut (extindere locală în suprafaŃă, extindere în profunzime, extindere regională) sau
prin torentul sanguin.
PrezenŃa bacteriilor tranzitoriu în sânge, ca modalitate de diseminare a lor în
toate Ńesuturile şi organele sensibile la infecŃia cu bacteria respectivă, se numeşte
bacteriemie.
PrezenŃa permanentă a bacteriilor în torentul sanguin unde se varsă
încontinuu din focare septice primare şi/sau secundare, însoŃită de manifestări clinice
caracteristice se numeşte septicemie.
46
e. eliminare
Microorganismul poate fi eliminat din organismul infectat pe tot parcursul bolii
sau doar în anumite etape de evoluŃie ale bolii prin intermediul excreŃiilor şi secreŃiilor
eliminate de pacient: materii fecale, urină, spută, puroi etc.
VIII.2.2.1.1. VIRULENłA
47
colagenaza, fibrinolizina, hialuronidaza – stafilococ,
streptococ
hemolizine;
lecitinaza – clostridii;
proteaze, DN-aze, RN-aze, lipaze etc.;
▪ substanŃe care inhibă sau modifică răspunsul imun:
endotoxina – creşte sinteza de interleukină 1;
IgA proteaza – meningococ, gonococ;
proteina A – stafilococ; inhibă opsonizarea;
producerea superantigenelor – S.aureus; molecule care pot
activa independent limfocitele T ceea ce poate determina atât
anergie cât şi hiperactivarea sistemului imun.
VIII.2.2.1.2. TOXIGENEZA
Exotoxinele sunt produse fie de bacili Gram pozitivi, codificate de gene ale
profagilor (toxina difterică, toxina botulinică) sau codificate plasmidic (toxina tetanică,
toxina cărbunoasă). fie de bacili Gram negativi, codificate de gene cromozomale
(V.cholerae, Shigella dysenteriae tip 1, P.aeruginosa) sau plasmidic (unele tulpini de
E.coli). Exotoxinele pot fi citotoxine sau toxine A-B
Citotoxinele acŃionează asupra membranei celulelor eucariote.
Toxinele A-B sunt formate din 2 părŃi: polipeptidul A (active) (enzimă, ADP-
riboziltransferaza) şi una sau mai multe polipeptide B (bind) cu rol de liganzi.
Exotoxina se leagă de receptorul specific celular, prin pinocitoză. PorŃiunea A ajunge
în citoplasmă unde va ataca o anumită Ńintă moleculară ceea ce face ca fiecare
exotoxină să aibă acŃiune specifică. Exotoxinele A-B au următoarele caracteristici:
- se desprind uşor de bacteriile care le produc, difuzând în mediul
înconjurător;
- pot fi obŃinute pe medii de cultură, pot fi separate prin filtrare;
- sunt proteine cu greutate moleculară mare;
- sunt termolabile (excepŃie enterotoxinele) şi sunt descompuse de enzimele
proteolitice;
- sunt antigene complete, puternice, anticorpii specifici formaŃi faŃă de
exotoxine numindu-se antitoxine. Pentru că doza toxică este mai mică decât cea
imunogenă, animalul de laborator moare intoxicat fără să producă anticorpi iar
pacientul care supravieŃuieşte după tetanos sau botulism rămâne receptiv pentru că
nu se imunizează. Antitoxinele se formează în urma vaccinării;
- pot fi transformate în anatoxine (toxoizi), netoxice, puternic antigenice,
sub acŃiunea concomitentă a căldurii şi a formolului. Se utilizează în profilaxia bolilor
produse de germenii respectivi şi pentru hiperimunizarea animalelor de laborator în
scopul obŃinerii de seruri antitoxice. Anticorpii (antitoxine) apăruŃi după vaccinare cu
anatoxină neutralizează activitatea toxică prin cuplare specifică cu toxina;
- au toxicitate foarte mare (DLM de ordinul ng/kg corp);
- efectul lor se instalează după o perioadă de incubaŃie;
48
- au efect specific, simptomele declanşate fiind specifice pentru fiecare
toxină în parte. Specificitatea toxinelor A-B are dublă condiŃionare: specificitatea
exotoxinei pentru receptorul celular şi specificitatea Ńintei pentru ADP-riboză.
bariere tegumentare
Tegumentul este cea mai eficientă barieră mecanică şi în acelaşi timp
ecologică şi chimică prin:
- integritatea sa – microorganismele nu pătrund prin tegumentul intact
(excepŃie leptospira);
- exfoliere - sunt îndepărtate microorganismele superficiale;
- microbiota rezidentă a tegumentului dominată de bacterii Gram pozitive
care produc lipoliza sebumului;
- pH-ul uşor acid datorat lipolizei sebumului.
49
bariere mucoase
Barierele mucoase sunt mai complexe dar mai puŃin eficiente decât
tegumentul. Prin mucoase pot pătrunde un număr destul de mare de bacterii în
organism. Barierele mucoase acŃionează ca:
- bariere mecanice – prin epiteliile pavimentoase stratificate şi variate epitelii
secretoare; prin secreŃiile care spală suprafeŃele;
- bariera glicoproteică – mucusul care împiedică aderarea bacteriilor de
substratul specific;
- bariera chimică – prin secreŃiile care conŃin lactoferină şi lizozim;
- bariera ecologică – prin microbiota mucoaselor.
bariere mecanice
Sunt reprezentate de Ńesutul conjunctiv dens care poate fi depăşit relativ uşor
de bacteriile care eliberează colagenaze.
bariera chimică
Este reprezentată de interferoni, de reactivii de fază acută şi de sistemul
complement.
INTERFERONII
50
interferon este prima linie de apărare nespecifică antivirală pentru că apare într-un
interval mai mic de 48 de ore de la infecŃie (începe la 4-5 ore de la infecŃie, atinge
nivel maxim la 20-50 ore după care se opreşte) determinând scăderea cantităŃii de
virus infectant încă înainte de apariŃia anticorpilor specifici (fig. 20). De asemenea
interferonul este activ şi la persoanele cu agammaglobulinemie.
microorganism
Tip de interferon
Caracteristici
α β γ
Produs de leucocite fibroblaşti limfocite T (CD4,CD8),
macrofage, celule NK
Număr gene 20 gene de pe 1 genă de pe 1 genă de pe cromozomul 12
codante cromozomul 9 cromozomul 9
AgenŃi inductori virus, ARN dc, virus lectină, mitogeni, stimulare cu
endotoxina Ag
Stabilitate la pH stabil stabil labil
2,0
Receptori celulari Proteine de membrană, comune pt IFN Proteine de membrană,
pt. interferon α, β, codaŃi de gene de pe cromozomul distincte pt IFN γ, codate de
21 gene de pe cromozomul 6 şi
21
51
REACTIVI DE FAZĂ ACUTĂ: Organismul supus unei agresiuni reacŃionează
prin sinteza şi secreŃia crescută a unor proteine plasmatice: inhibitori de proteaze,
proteine ale sistemului complement şi ale coagulării, proteina C reactivă,
protrombina, fibrinogenul, etc. Acestea măresc rezistenŃa gazdei, limitează leziunile
tisulare şi favorizează vindecarea.
bariera celulară
52
PorŃiunea antigenului de care se leagă anticorpul se numeşte grupare
determinantă sau epitop. Anticorpul posedă situs de combinare numit şi paratop
sau receptor pentru antigen, complementar epitopului.
ANTIGENE
53
Numărul determinanŃilor antigenici este variabil aflându-se în relaŃie de directă
proporŃionalitate cu greutatea moleculară şi volumul antigenului.
Orice modificare în structura grupării determinante (chiar şi schimbarea
orientării) atrage după sine modificarea specificităŃii.
Antigenele se pot clasifica în trei categorii:
- antigene sintetice – formate din polipeptide obŃinute prin sinteză;
- antigene artificiale – haptene legate de macromolecule purtătoare;
- antigene naturale – produse de celule, reprezentate de proteine,
polizaharide, acizi nucleici, alte macromolecule etc. Multe antigene sunt componente
ale structurilor de înveliş ale microorganismelor: capsula, lipopolizaharidul din
peretele bacteriilor Gram negative, glicoproteinele specifice ale membranei celulare
etc.
ANTICORPI
COMPLEMENTUL
Complementul, prezent în sângele tuturor vertebratelor este un complex
alcătuit din 15 proteine plasmatice care este activat de complexul antigen-anticorp
determinând anihilarea sau distrugerea antigenului (hemoliza, bacterioliza, citoliza
etc.).
La primul contact al organismului gazdă cu antigenul se instalează răspunsul
imun primar în care IgM apar primele şi predomină cantitativ.
Dinamica răspunsului imun primar este:
- perioadă de latenŃă – 5-7 zile, uneori 2 săptămâni în care nu se pot
evidenŃia anticorpi;
- perioadă de creştere treptată a titrului de anticorpi, atingând nivelul
maxim în 9-15 zile;
- perioadă staŃionară – de scurtă durată în care cantitatea de anticorpi
se menŃine nemodificată;
- scădere rapidă a cantităŃii de anticorpi până la valori foarte joase (fig.
19).
54
IgG şi IgA) creşte rapid (4-6 zile) şi la un nivel mult mai ridicat, persistând timp mai
îndelungat decât în răspunsul imun primar. Descreşterea se produce lent putându-se
detecta anticorpi şi după luni sau ani de zile. În răspunsul secundar apar IgM dar
predomină net cantitativ IgG.
55
Este realizată prin:
a) ReacŃii de neutralizare controlate de anticorpi tip IgG1 care sunt specifici
răspunsului imun secundar şi care pot traversa placenta. În aceste reacŃii antigenul
este reprezentat de toxine, produşi extracelulari netoxici ai bacteriilor (hemolizine,
hialuronidaze etc.), virusuri.
b) ReacŃii de opsonizare, adică de acoperire cu anticorpi şi / sau
complement pentru a fi fagocitate. Ca opsonine acŃionează în primul rând IgG active,
în absenŃa complementului. Anticorpii de tip IgM sunt opsonizanŃi doar prin
capacitatea de a activa complementul.
Unele componente bacteriene de suprafaŃă (lipopolizaharidul bacteriilor Gram
negative, acizii teichoici şi peptidoglicanul bacteriilor Gram pozitive) pot determina
legarea şi clivarea complementului în absenŃa anticorpilor (pe cale alternativă),
opsonizarea realizându-se numai prin C3.
56
Capitolul IX
IX.1. DEFINIłII
InfecŃie – interacŃiunea dintre organismul gazdă şi microorganismul (bacterii,
fungi, protozoare, helminŃi, virusuri) care a depăşit barierele antimicrobiene primare;
InfecŃie inaparentă – interrelaŃia se rezumă la răspunsul imun, agentul
infecŃios determină leziuni minime care nu perturbă homeostazia organismului
gazdă;
Boală infecŃioasă – interrelaŃia organism gazdă-microorganism are ca urmare
leziuni importante cauzatoare de perturbări ale homeostaziei manifestate prin
simptome şi semne de suferinŃă.
IX.2. INFECłIA
După provenienŃa agentului infecŃios infecŃiile pot fi:
- endogene –determinate de microorganisme ale microbiotei proprii;
- exogene – determinate de microorganisme provenite de la un rezervor de
infecŃie care a străbătut o cale de transmitere şi a găsit o gazdă receptivă.
57
murdară, alimente, muşte, rozătoare, vectori biologici (ŃânŃari, căpuşe, purici,
păduchi).
- poarta de intrare care diferă în raport cu natura agentului infecŃios
58
3. Perioada de stare în care se instalează semne şi simptome caracteristice
diferitelor boli infecŃioase.
59
60
61
62
Fig. 4. Structura peptidoglicanului la bacteriile
Gram pozitive (A) şi Gram negative (B) (după D. Buiuc, 2003)
63
Fig. 5. Structura peretelui bacteriilor Gram
pozitive si Gram negative
64
Fig. 7. Bacterie cu cili şi fimbrii (după J. Carnahan, C.Brinton)
Fig. 8. Structura cilului şi a fimbriei (după Ingraham J.L., Maaløe O., Neidhardt
F.C., 1983)
Monotriche Lofotriche
Amfitriche Amfilofotriche
65
Fig. 10. Tipuri de bacterii sporulate
66
Fig. 16. Factorul de rezistenŃă (după Watanabe)
1. celula
infectată
2. producere de
IFN
3. eliberarea
IFN
4. acŃiune pe
altă celulă
5. sinteză de
proteine antivirale
protective
67
Bibliografie selectivă
Buiuc D., NeguŃ M.: „Tratat de microbiologie clinică”, Editura Medicală, 1999
Buiuc D.: „Microbiologie medicală. Ghid pentru studiul şi practica medicinei”,
Ed. A VI-a, Editura „Gr.T.Popa” Iaşi, 2003
Popa M. I.: „Microbiologie generală şi microbiologie specială”, Editura Concept
Publishing House, 1999
68
Cuprins
CAPITOLUL I....................................................................................................................................1
MICROBIOLOGIA – DEFINIłIE, OBIECT, SCOP ..................................................................................................... 2
CAPITOLUL II...................................................................................................................................4
ISTORICUL MICROBIOLOGIEI................................................................................................................................. 4
CAPITOLUL III..................................................................................................................................9
CAPITOLUL IV ...............................................................................................................................11
STRUCTURA CELULEI BACTERIENE................................................................................................................... 11
IV.1. ELEMENTE OBLIGATORII ALE CELULEI BACTERIENE ......................................................................... 12
IV.1.1. PERETELE BACTERIAN.................................................................................................................... 12
IV. 1. 2. MEMBRANA CITOPLASMATICĂ..................................................................................................... 14
IV.1.3. CITOPLASMA BACTERIANĂ............................................................................................................. 14
IV.1.4. MATERIALUL NUCLEAR ................................................................................................................... 15
IV.2. ELEMENTE FACULTATIVE ALE CELULEI BACTERIENE........................................................................ 15
IV.2.1. GLICOCALIXUL BACTERIAN ............................................................................................................ 15
IV.2.2. CILII SAU FLAGELII ........................................................................................................................... 15
IV.2.3. FIMBRIILE SAU PILII.......................................................................................................................... 16
IV.2.4. ENDOSPORUL BACTERIAN ............................................................................................................. 16
CAPITOLUL V ................................................................................................................................18
FIZIOLOGIA BACTERIANĂ..................................................................................................................................... 18
V.1. CONSTITUłIA CHIMICĂ A BACTERIILOR................................................................................................. 18
V.2. NUTRIłIA, METABOLISMUL ŞI CREŞTEREA BACTERIANĂ ................................................................... 20
V.2.1. NUTRIłIA BACTERIANĂ .................................................................................................................... 20
V.2.2. METABOLISMUL BACTERIAN ........................................................................................................... 23
V.2.3. CREŞTEREA ŞI MULTIPLICAREA BACTERIILOR ............................................................................ 25
V.2.4. DINAMICA MULTIPLICĂRII BACTERIILOR........................................................................................ 28
CAPITOLUL VI ...............................................................................................................................30
69
ACłIUNEA AGENłILOR FIZICI, CHIMICI ŞI BIOLOGICI ASUPRA BACTERIILOR ............................................ 30
VI.1. DEFINIłII .................................................................................................................................................... 30
VI.2. EFECTE ANTIMICROBIENE ALE FACTORILOR FIZICI, CHIMICI, BIOLOGICI....................................... 30
VI.3. FACTORI CARE INFLUENłEAZĂ EFECTUL ANTIMICROBIAN AL FACTORILOR FIZICI, CHIMICI,
BIOLOGICI.......................................................................................................................................................................... 30
VI.4. AGENłI FIZICI............................................................................................................................................ 31
VI.5. AGENłI CHIMICI ........................................................................................................................................ 33
VI.6. AGENłI BIOLOGICI ................................................................................................................................... 36
VI.6.1. LANTIBIOTICE ................................................................................................................................... 36
VI.6.2. BACTERIOCINE ................................................................................................................................. 37
VI.6.3. BACTERIOFAGUL.............................................................................................................................. 37
CAPITOLUL IX ...............................................................................................................................57
INFECłIE ŞI BOALĂ INFECłIOASĂ ...................................................................................................................... 57
IX.1. DEFINIłII .................................................................................................................................................... 57
IX.2. INFECłIA.................................................................................................................................................... 57
IX.3. BOALA INFECłIOASĂ ............................................................................................................................... 58
BIBLIOGRAFIE SELECTIVĂ.........................................................................................................68
CUPRINS ........................................................................................................................................69
70