Scientia Chromatographica 2012; 4(4):287-297

Instituto Internacional de Cromatografia

http://dx.doi.org/10.4322/sc.2012.017

TCNICAS ELETROFORTICAS

ISSN 1984-4433

Conceitos bsicos em Eletroforese Capilar

Daniel Alfonso Spudeit, Maressa Danielli Dolzan, Gustavo Amadeu Micke*
Departamento de Qumica, Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC,
Campus Universitrio Trindade, CP 476, Cep 88040-900, Florianpolis, SC, Brasil
e-mail: gustavomicke@qmc.ufsc.br

Resumo
Historicamente, o qumico sueco Arne Tiselius foi o pioneiro na utilizao da Eletroforese como
ferramenta de separao, aplicando-a em protenas presentes no sangue. A Eletroforese Capilar surgiu
aps dcadas de aperfeioamento dessa tcnica, proporcionando aumento de eficincia e diminuio dos
tempos de anlise. Sua aplicao vasta e compreende desde molculas pequenas e simples, orgnicas e
inorgnicas, at molculas volumosas e complexas, como protenas e cidos nuclicos. Essa versatilidade
peculiar da Eletroforese Capilar a torna ferramenta promissora para diversas reas do conhecimento.
As metodologias desenvolvidas por essa tcnica podem ser auxiliadas e aperfeioadas offline atravs
de softwares de otimizao e simulao, destacando-se o software Peakmaster. O presente artigo ir
introduzir ainda aspectos da instrumentao da Eletroforese Capilar, modos de injeo e deteco, bem
como fenmenos peculiares da tcnica, como o fluxo eletrosmtico.
Palavras-chave
Eletroforese Capilar; fluxo eletrosmtico; instrumentao; modos de injeo.

Basic concepts in Capillary Electrophoresis

Abstract
Historically, the Swedish chemist Arne Tiselius was the first to use Electrophoresis as a separation
tool, applying in blood proteins. The Capillary Electrophoresis emerged after decades as an improved
technique providing an increase in efficiency and reduced analysis time. Its applications are wide and
the range is from small and simple molecules organic and inorganic, to large and complex, as protein
molecules and nucleic acids. This peculiar versatility of Capillary Electrophoresis makes it a promising
tool for several knowledge areas. The methodologies developed by this technique can be improved offline
by optimization and simulation softwares, highlighting the Peakmaster software. This present paper will
further introduce Capillary Electrophoresis instrumental aspects, injection modes and detection, as well
as peculiar phenomena of technique, as electroosmotic flow.
Keywords
Capillary Electrophoresis; electroosmotic flow; instrumentation; injection modes.

Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA

1 Introduo
A palavra eletroforese originada do grego
electro, eletricidade; phresis, transporte. Assim,
a tcnica de eletroforese definida como uma
tcnica de separao baseada na diferena de
migrao de compostos inicos ou ionizveis na
presena de um campo eltrico. Historicamente,
a eletroforese foi apresentada pela primeira vez
pelo qumico sueco Arne Tiselius[1] em sua tese
intitulada The Moving Boundary Method to
Study the Electrophoresis of Proteins, publicada
em 1930. A ideia surgiu pela necessidade de
separar as diversas protenas que estavam sendo
descobertas desde o incio do sculo XX, tornando possveis estudos aprofundados acerca
de cada protena. O trabalho pioneiro envolveu
a separao das protenas presentes no plasma
sanguneo[2].
Ao longo dos anos, a Eletroforese foi sendo
aperfeioada de forma a se obter uma maior eficincia e diminuio dos efeitos trmicos provenientes da aplicao de um campo eltrico[2].
Com esta finalidade, o avano instrumental das
tcnicas de eletroforese permitiu a introduo
de colunas capilares no sistema eletrofortico, e
esta foi denominada Eletroforese Capilar (CE, do
ingls Capillary Electrophoresis).
A primeira tentativa de realizar separao em tubos com pequenos dimetros internos surgiu em 1967, quando Hjertn realizou a
separao em tubos com dimetro interno (d.i.)
de 300 m. Porm, foi apenas aps a publicao de Jorgenson e Lukacs em 1981[3] que a tcnica comeou a ser reconhecida. Este trabalho,
publicado no Journal of Analytical Chemistry,
demonstrou a capacidade da realizao de separaes em capilares com dimetro interno reduzido, combinado com a aplicao de altas voltagens, resultando em um aumento de eficincia e
de resoluo e diminuio dos tempos de anlise.
288

Eletroforese Capilar

O uso do capilar oferece muitas vantagens

sobre os outros meios utilizados para eletroforese (placas de gel, papel, etc). Devido a fatores
geomtricos (a relao entre a rea superficial
interna e o volume apreciavelmente grande),
um capilar possibilita a dissipao eficiente do
calor gerada pela passagem da corrente eltrica
(efeito Joule). Alm disso, a alta resistncia eltrica do capilar permite o estabelecimento de
campos eltricos elevados (100-1000 V cm1),
resultando em separaes de alta eficincia
(geralmente excede 105 pratos) e tempos de anlise apreciavelmente curtos. Outras vantagens da
Eletroforese Capilar so a pequena demanda de
amostra, volumes tipicamente da ordem de 1 a
10 nL e a possibilidade de injeo e deteco em
fluxo[1,4].
Comparando com os demais mtodos de
separao como Cromatografia Lquida de Alta
Eficincia (HPLC, do ingls High Performance
Liquid Cromatography) e Cromatografia Gasosa
(GC, do ingls Gas Chomatography), a CE considerada uma tcnica analtica recente e vem
ganhando cada vez mais ateno na comunidade
cientfica, bem como no controle de qualidade de
produtos e monitoramento de processos industriais. Uma das razes para a sua crescente utilizao sua gama de aplicaes. A princpio, a
tcnica ficou conhecida apenas pela separao
de macromolculas biolgicas. No entanto, o
avano dos equipamentos permitiu aos pesquisadores do mundo todo demonstrar o potencial
da Eletroforese Capilar na separao de molculas pequenas e diversas como aminocidos[5],
frmacos quirais[6], vitaminas[7], pesticidas[8],
ons inorgnicos[9], etc. Alm da sua utilizao
na separao e determinao quantitativa de
inmeros analitos, a CE permite estudar cinticas de reaes e interaes intermoleculares, no
modo online e offline, auxiliando na elucidao
destes mecanismos e obteno de constantes de
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associao[10,11]. A tcnica apresenta-se til e promissora para diversos campos da cincia, mas
destacam-se as vertentes da Qumica, Cincias
Forenses, e a Biologia Molecular.
Alm da vasta aplicao da CE, outras
caractersticas da tcnica a tornam bastante vivel, como, por exemplo, o baixo custo analtico
(destacando-se o baixo custo das colunas capilares, algo em torno de U$ 5,00 a U$ 20,00), a simplicidade na operao e no manuseio, o tempo de
execuo das metodologias desenvolvidas, alm
da reduo significativa nas quantidades de reagentes e solventes orgnicos utilizados, quando
comparada tcnica de HPLC. O solvente mais
utilizado em CE gua, e sempre em volumes
muito pequenos (poucos mililitros), gerando
quantidade mnima de resduo e toxicidade. Por
estas razes, dentre as tcnicas de separao, a
Eletroforese Capilar a que mais bem se enquadra nos parmetros da Qumica Verde.

2 Fundamentos tericos
2.1 Fluxo eletrosmtico
A utilizao de capilares de slica fundida na
execuo da tcnica introduziu uma importante
peculiaridade: a gerao do chamado fluxo eletrosmtico (EOF, do ingls Electroosmotic Flow),
como mostra a Figura1.

Figura 1 Ocorrncia do fluxo eletrosmtico.

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O fluxo eletrosmtico consequncia de

uma interao entre a soluo e a superfcie
interna do capilar. Quimicamente, a slica fundida caracterizada pela presena de vrios tipos
de grupos silanis (SiOH), os quais apresentam um carter cido. Em contato com o meio
aquoso, alguns desses grupos so ionizados, e
com isso, a superfcie do capilar torna-se negativamente carregada. Quando um campo eltrico
imposto tangencialmente superfcie, foras eltricas causam um movimento unilateral de ons
em direo ao eletrodo de carga oposta. Durante
a migrao, os ons transportam molculas de
gua, induzindo o fluxo da soluo como um
todo em direo ao ctodo (plo negativo). Este
modo conhecido como fluxo eletrosmtico
normal[1]. A velocidade do EOF pode ser definida pela Equao1.

VEOF = / E

(1)

onde a constante dieltrica; a viscosidade

do eletrlito; E o campo eltrico aplicado e
o potencial zeta medido entre plano de cisalhamento e a interface lquido-slido.
O potencial zeta essencialmente determinado pela carga na superfcie do capilar. Como
a ionizao dos grupos silanis so dependentes do pH, temos que a magnitude do EOF varia
com o pH. Para valores de pH mais elevados
onde os grupos silanis esto mais desprotonados, a magnitude do EOF maior que em valores
de pH menores, onde os grupos silanis esto
menos ionizados (Figura2)[12].
Uma caracterstica do EOF seu perfil
radial, o que permite que o componente velocidade seja adicionado a todos os analitos de forma
homognea, independente da posio radial do
analito. Essa caracterstica permite separaes
com maiores eficincias, distinguindo a CE dos
mtodos cromatogrficos em fase lquida em
coluna, que apresentam um perfil de velocidade
parablico, caracterstico do fluxo gerado por
presso (Figura3)[13].

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Eletroforese Capilar

o da superfcie interna do capilar, que pode ser

dinmica ou permanente, atravs da adsoro ou
alterao qumica da slica, respectivamente[15].
A separao das espcies por eletroforese
se d pela diferena da velocidade do soluto na
presena de um campo eltrico. A velocidade
eletrofortica de um determinado on pode ser
definido pela Equao2.
Figura 2Variao da mobilidade do fluxo
eletrosmtico em funo da variao do pH em
um capilar de slica fundida. Legenda: EOF, fluxo
eletrosmtico.

Figura 3Perfil de velocidade do fluxo radial

(eletrosmticoEOF) e laminar (presso).

Em condies normais, o fluxo proveniente do nodo (eletrodo de carga positiva) para

o ctodo (eletrodo de carga negativa). Os nions
so levados em direo ao ctodo nos casos em
que a magnitude do EOF maior que a magnitude da sua mobilidade efetiva. Assim, ctions,
nions e molculas neutras podem ser analisados
em uma nica corrida. Porm, no haver distino das molculas neutras quando houver mais
de uma destas[14].
O EOF pode ser reduzido ou at mesmo
invertido. A reduo do EOF ocorre com a alterao dos valores de pH para faixas mais cidas,
onde os grupos silanis esto menos ionizados.
Outra alternativa utilizar aditivos catinicos no
eletrlito de corrida que interajam com a superfcie do capilar, de forma a reduzir a carga negativa dessa superfcie. J a inverso do fluxo pode
ocorrer tambm pela adio de componentes no
eletrlito, como surfactantes, ou pela modifica290

Vep = ep E

(2)

onde Vep a velocidade do eletrofortica, ep a

mobilidade eletrofortica e E o campo eltrico
aplicado[13].
Todo on em soluo possui uma mobilidade que caracterstica para cada on. Essa
mobilidade, tambm conhecida como mobilidade eletrofortica (ep), determinada pela fora
eltrica que as espcies ionizadas, molculas ou
partculas, sofrem, balanceada com as foras de
frico geradas pela passagem das espcies pelo
meio. Para um determinado on, sua mobilidade
eletrofortica pode ser determinada atravs da
Equao3[13-14].
e =

q
6 r

(3)

onde q a carga do on, a viscosidade da soluo e r o raio inico.

Com base na Equao3, evidente que espcies menores e mais carregadas possuem mobilidades elevadas. Por outro lado, espcies com
maiores raios inicos e menos carregadas possuem valores baixos de mobilidade. As mobilidades eletroforticas so determinadas no ponto
em que o soluto est completamente ionizado
(= 1) e extrapoladas para diluio infinita[1].
Espcies que se comportam como cidos
ou bases fracas apresentam, no equilbrio, duas
espcies: uma neutra, com mobilidade nula, e
outra inica, que possui mobilidade que passa
agora a ser chamada de mobilidade efetiva (()ef)
e pode ser obtida atravs da Equao4.
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Eletroforese Capilar

ef = i .e

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(4)

onde i o grau de ionizao de uma determinada molcula.

Como o grau de ionizao pode ser definido pelo pKa do soluto, a mobilidade efetiva
altamente dependente do pH e da composio
do eletrlito de corrida. O efeito da variao do
pH na mobilidade efetiva pode ser observado na
Figura4, onde temos um grfico de mobilidade
efetiva versus pH para o cido p-hidroxibenzico
(pKa1 4,53 e pKa2 9,31), cido actico (pKa 4,75) e
cido clordrico.
Observando-se o grfico de curva de mobilidade podemos perceber que para os cidos
p-hidroxibenzico e actico, a mobilidade efetiva varia consideravelmente com a variao do
pH. Isso ocorre pelo fato destes serem eletrlitos
fracos. Por sua vez, o cido clordrico em soluo
um eletrlito forte, ou seja, sua ionizao ser
completa. Sendo assim, o on cloreto no sofre
variao de mobilidade efetiva com o pH.
A combinao vetorial do fluxo eletrosmtico e a mobilidade do analito resulta na mobilidade aparente do composto.

Figura 4Curva de mobilidade para o cido

p-hidroxibenzico (1), cido actico (2) e cido
clordrico (3).

3 Instrumentao
Uma caracterstica fundamental da CE sua
simplicidade instrumental. Uma representao
esquemtica de um equipamento de Eletroforese
Capilar demonstrada na Figura5.
Basicamente, um equipamento de CE consiste em um sistema de injeo, uma coluna capilar onde ocorre a separao, uma fonte de alta
tenso, representada por F na Figura5 (que opera
com voltagens at 30 kV), um par de eletrodos
(e1 e e2), um detector (D) e um computador (C)
para obteno e tratamento dos dados[13,14].

A fonte de alta tenso conectada, por meio

dos eletrodos, aos reservatrios que contm o
eletrlito adequado (R1 e R2). Os capilares preenchidos com eletrlito ajudam a manter o contato

eltrico, funcionando como um canal de migrao.

Para minimizar os efeitos gerados pelo
aquecimento, os capilares devem ser mantidos
temperatura constante, mantida principalmente
atravs da circulao de lquidos ou de ar.

Figura 5 Esquema ilustrativo de um equipamento

de Eletroforese capilar. Onde R1 e R2, e1 e e2 so
os reservatrios e eletrodos, respectivamente. F
representa a fonte de alta tenso, D o detector, C
o computador para obteno dos dados e EOF
representa o fluxo eletrosmtico, que gerado aps
ser aplicado o potencial[16].

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Eletroforese Capilar

3.1 Capilares
Em geral, os capilares utilizados em CE so
abertos, constitudos de slica fundida e revestidos externamente com polmeros que fornecem
flexibilidade e resistncia, geralmente poliimida ou poliacrilato. Dependendo do modo de
deteco, necessria uma janela de deteco
no capilar, que seria um pequeno seguimento
ausente destes polmeros, j que estes absorvem
luz em comprimentos de onda que podem prejudicar ou tornar impossvel a deteco dos analitos. A janela de deteco feita num comprimento especfico do capilar atravs da remoo
do polmero, geralmente realizada por calor. Os
capilares utilizados em eletroforese apresentam
tamanhos que variam de 10 a 100cm, mais comumente se utilizam comprimentos de 25-75cm e
dimetros internos entre 25 e 75 m, embora
possam ser encontrados capilares comerciais de
10 a 200 m de d.i.[14].
3.2 Modos de injeo da amostra
Em CE, as amostras podem ser introduzidas
por injeo hidrodinmica ou eletrocintica. A
injeo hidrodinmica feita aplicando-se uma
diferena de presso que se estabelece entre o
reservatrio do eletrlito e o capilar. O volume
da amostra injetada depende do tamanho do
capilar, da viscosidade da amostra e da diferena
de presso usada, e apresenta-se na ordem de
nanolitros (1-50 nL). O volume (Vi) de injeo
pode ser calculado atravs da Equao5.
Vinj =

Pd 4 tinj
128 L

(5)

onde P a presso aplicada no capilar, d o dimetro interno do capilar, t o tempo em que a

presso aplicada, a viscosidade da amostra e
L o comprimento total do capilar. Por exemplo,
em uma injeo de uma soluo aquosa a 25 C
292

por 3 segundos, aplicando-se uma presso de 50

mbar em um capilar de 70cm de comprimento
total e dimetro interno de 50 m, o volume corresponde a aproximadamente 3,7 nL e o comprimento seria igual a 1,9mm[14].
A injeo hidrodinmica em CE permite
ser realizada individualmente ou em sequncia,
sendo denominada de injeo simples e injees mltiplas, respectivamente. Esta ltima
vem sendo demonstrada em trabalhos publicados principalmente na ltima dcada, tanto em
metodologias para determinao quantitativa de
analitos, quanto para metodologias empregadas
em estudos de interao intermoleculares[17,18].
A principal vantagem em se utilizar o modo de
injees mltiplas o aumento da frequncia
analtica do mtodo, ou seja, a possibilidade de
um maior nmero de anlises num dado intervalo de tempo[18,19].
O segundo modo de injeo mais comum
em CE a eletrocintica ou por eletromigrao.
Neste caso, a amostra introduzida atravs da
aplicao de uma tenso eltrica. A quantidade
injetada pode ser calcula atravs da Equao6.

(
Q=

ep

+ eo V r 2Ctinj
L

(6)

onde e a mobilidade eletrofortica do analito,

EOF a mobilidade do fluxo eletroosmtico, V
a voltagem, r o raio interno do capilar, C a
concentrao do analito, tinj o tempo de injeo
e L o comprimento total do capilar.
Assim sendo, a quantidade de amostra injetada no capilar ser dependente da mobilidade
eletrofortica de cada analito, o que pode acarretar discriminao entre espcies inicas de maior
e menor mobilidade. Este fato pode ser limitante
deste tipo de injeo, bem como uma forma de
injeo seletiva. A injeo eletrocintica simScientia Chromatographica 2012; 4(4):287-297

Eletroforese Capilar

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ples, no requer nenhum equipamento adicional

e vantajosa quando utilizada em amostras com
maior viscosidade[1,2].
3.3 Detectores
A Tabela1 apresenta de forma resumida os
detectores mais comuns em CE e seus limites de
deteco caractersticos.
Muitos dos detectores utilizados em CE
so tambm empregados em HPLC. Em ambas
as tcnicas, o detector de absorbncia no ultravioleta/visvel (UV-Vis) o mais utilizado[13].
No entanto o espectrmetro de massas (MS, do
ingls Mass Spectrometer) apresenta-se universal
e altamente seletivo.
De um modo geral, para a escolha de um
detector adequado o analista deve atentar-se
primeiramente ao fato dos compostos separados apresentarem caractersticas que permitam
que sejam detectados pelo mtodo selecionado.
Assim como em HPLC, outros fatores devem ser
levados em considerao na escolha do modo de
deteco, tais como sensibilidade, seletividade,
faixa linear e a capacidade de fornecer dados
quantitativos[14].
No caso de CE equipada com detector
UV-Vis, a tcnica tem sua sensibilidade prejudicada com relao ao mesmo modo de deteco
em HPLC. Isso se deve ao reduzido caminho
ptico, cujo dimetro do capilar da ordem
de m. Para detectores deste tipo, a absortivi-

dade do analito respeita a Lei de Lambert Beer,

Abs=b.C., onde Abs a resposta em absorbncia, b o caminho ptico, C a concentrao
molar e a absortividade molar do analito. Por
este motivo, o feixe ptico deve ser bem focalizado no capilar, de forma a minimizar a disperso da luz[13,14].
3.3.1 Modos de deteco no UV-Vis:
direto e indireto
O modo de deteco direto comumente
utilizado e adequado quando as espcies a
serem determinadas apresentam absoro na
regio do ultravioleta e/ou visvel. Nesse caso,
normalmente so utilizados como eletrlito de
corrida compostos que no apresentam absoro
nessa regio. Assim sendo, o tamanho do pico
referente dependente da Lei de Lambert Beer,
como descrito anteriormente[4,14,20].
J a deteco indireta aplicada com sucesso
em Eletroforese Capilar para analitos que no
apresentam absoro no UV-Vis, ou apresentam
absoro pouco intensa. Neste modo, faz-se uso
de um cromforo no eletrlito de corrida, ou seja,
um dos componentes do eletrlito deve apresentar absoro na regio UV-Vis. Os compostos
que so normalmente analisados utilizando-se
esse tipo de deteco so ctions e nions inorgnicos, cidos carboxlicos, aminocidos e aminas
de cadeia curta[4].

Tabela 1 Detectores mais comuns usados em Eletroforese Capilar.

Modo de deteco
UV-Vis

Limite de deteco1
105-107

Fluorescncia (LIF)

1013-1016

Espectrometria de Massas (MS)

108-1010

Amperomtrico

107-1010

Condutomtrico

107-109

Concentrao em mol L .

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Eletroforese Capilar

4 Modos de operao em
Eletroforese Capilar

4.3 Cromatografia Eletrocintica

Capilar (CEC)

Durante as dcadas passadas, a Eletroforese

Capilar e suas muitas variantes, tal como a
Cromatografia Eletrocintica Micelar (MEKC, do
ingls Micellar Electrokinectic Chromatography),
Eletroforese Capilar em Gel (CGE, do ingls
Capillary Gel Electrophoresis), Cromatografia
Eletrocintica (EKC, do ingls Eletrokinetic
Chromatography),

Isotacoforese

Capilar

(CITP, do ingls Capillary Isotachophoresis) e

Eletroforese Capilar em Soluo Livre (FSCE,

4.4 Isotacoforese Capilar (CITP)

do ingls Free Solution Capillary Electrophoresis),

A Isotacoforese Capilar uma tcnica em

que so empregados dois tipos de eletrlito e
os solutos ficam confinados entre duas regies
compostas por estes eletrlitos. O primeiro eletrlito, que apresenta mobilidade eletrofortica
maior que todos os componentes da amostra,
chamado de eletrlito lder. O segundo, que
apresenta mobilidade eletrofortica menor que
todos os componentes da amostra, conhecido
como eletrlito terminador. Quando o potencial aplicado, cria-se um estado estacionrio
no qual as zonas dos analitos migram em ordem
decrescente de mobilidade, mas com velocidade
constante e nica. Outro aspecto importante
que todas as zonas adotam a concentrao do
eletrlito lder. Desse modo, esse fenmeno pode
ser utilizado para concentrao de amostras no
interior do capilar.

tm se demonstrado como tcnicas de grande

poder de separao[14,21,22].
4.1 Cromatografia Eletrocintica
Micelar (MEKC)
A cromatografia eletrocintica micelar se
aplica principalmente anlise de compostos
neutros. Neste mecanismo de separao baseada na partio diferenciada dos solutos entre a
fase mvel e uma pseudo-fase composta por
micelas, cuja mobilidade efetiva uma resultante
da mobilidade do fluxo eletrosmtico e da mobilidade da prpria micela.
4.2 Eletroforese Capilar em Gel (CGE)
Essa tcnica usada para a separao de
compostos, principalmente protenas e cidos
nucleicos, por diferenas de tamanho relativo. A
separao obtida preenchendo-se um capilar
com uma matriz polimrica. A maior vantagem
sobre a clssica eletroforese em placas a obteno de resultados quantitativos mais exatos,
tempo de anlise mais curtos e a possibilidade de
automao do processo.
294

A CEC uma tcnica recente de separao que combina as vantagens da cromatografia lquida de alta eficincia com a Eletroforese
Capilar. Nesta tcnica, o transporte de solvente
(fase mvel) feito atravs do fluxo eletrosmtico ao longo da coluna. Os capilares utilizados
para esse tipo de separao so recheados com
uma fase estacionria, como C18 (octadecilslica).

4.5 Eletroforese Capilar em soluo

livre (FSCE)
Tambm
denominado
Eletroforese
Capilar de Zona (do ingls Capillary Zone
Electrophoresis), o modo de operao em CE
mais utilizado pelos analistas. Neste modo, a
amostra injetada dentro da coluna capilar previamente preenchida com o eletrlito de corrida,
Scientia Chromatographica 2012; 4(4):287-297

Eletroforese Capilar

e o potencial aplicado gerando um campo eltrico, fazendo com que os solutos migrem dentro do capilar em zonas distintas. Dessa forma,
os solutos so separados de acordo com as diferentes mobilidades efetivas resultantes da composio entre as mobilidades eletroforticas e a
mobilidade eletrosmtica.
4.5.1 Simulao de Eletroforese Capilar
em soluo livre
A ferramenta que se destaca para otimizao
e simulao de FSCE o software Peakmaster[27].
Vale reconhecer que a Eletroforese Capilar no
modo FSCE o nico, dentre todos os mtodos
de separao, que pode apresentar simulao
completa da separao.
Para utilizao do software necessrio
que sejam conhecidos os valores de mobilidade
inica e pKa dos componentes da anlise. Estes
dois parmetros fsico-qumicos so, na verdade,
as informaes preliminares mais teis quando se
deseja desenvolver um mtodo por CE. Quando
se pretende utilizar softwares de otimizao e/ou
simulao, so fundamentais.
Conhecidos esses parmetros, possvel
construir curvas de mobilidade efetiva versus
pH. A partir dela so obtidas informaes como
pH timo e componentes do eletrlito de corrida
adequados para a anlise.
O software Peakmaster foi desenvolvido por
Bob Bohuslav Ga[27-29] e fornece caractersticas
relevantes, como pH, fora inica, condutividade
e capacidade tamponante do eletrlito de corrida j estabelecido, bem como eletrodisperso
dos analitos (EMD, do ingls Electromigration
Dispersion) que acarreta alargamento dos picos e
mobilidades efetivas dos componentes da anlise
nas condies determinadas. Deteco indireta e
deteco por condutividade tambm podem ser
simulados pelo software[23,25].

Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA

5 Concluses
Dentre as tcnicas analticas de separao, a
Eletroforese Capilar considerada a mais recente
e, de fato, ainda no est inserida nas comunidades acadmicas, bem como em indstrias, tanto
quanto as tcnicas cromatogrficas. No entanto,
vem crescendo exponencialmente o interesse
pela tcnica. Isto se deve principalmente a caractersticas como baixo custo operacional, abrangncia das anlises (versatilidade), simplicidade
instrumental, tempo e quantidades e toxicidade
de reagentes e resduos extremamente reduzidos se comparados s tcnicas de HPLC e CG.
Por outro lado, a CE necessita de investigaes e
aperfeioamento para melhoria de sensibilidade
e reprodutibilidade das anlises. De fato, a tcnica extremamente verstil, porm apresenta-se como complemento s tcnicas de separao,
assim como as demais. Quando se deseja fazer
uma anlise especfica, necessrio uma escolha
criteriosa da tcnica adequada, e para isto deve-se considerar seletividade, sensibilidade, robustez, tempo, quantidade de reagentes e amostras
disponveis, concentrao de analito, custo,
quantidade de resduo, e outros. A relevncia de
cada um destes fatores ir depender do objetivo
da anlise que se deseja e das condies as quais
se encontram. A CE apresenta diversos modos
de operao e cada um adequado para sistemas
determinados. No modo CZE possvel otimizar metodologias com auxlio de softwares de
otimizao e simulao, destacando o simulador
Peakmaster, desenvolvido por Ga et al.[23]. No
mais, todos utilizam a mesma instrumentao,
exceto a eletrocromatografia capilar, em que a
coluna capilar se difere pelo empacotamento.
Anlises de molculas pequenas, como frmacos, vitaminas, aminocidos, ons inorgnicos, etc, so possveis de ser realizadas por CE,
bem como molculas maiores, como polmeros,
protenas e cidos nucleicos. Alm disso, estudos

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cinticos e de interao para clculos de constantes de ligao tambm vm sendo realizados

exaustivamente por pesquisadores de todo o
mundo, demonstrando-se uma ferramenta til
para diversas reas do conhecimento.
O sistema da CE permite modificao de
diversos parmetros, como os exemplos citados
ao longo do texto, modificao interna do capilar
e mltiplas injees.

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Recebido: 10/09/2012
Aceito: 31/10/2012

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