Biologa 135a laboratorio.

Resumen para segundo parcial

Ricardo Malta
Grupo 1.2a
Movimiento de las molculas a travs de las membranas
En estos procesos intervienen factores como la concentracin, presin y
temperatura. La actividad de una molcula puede estar determinada a travs de su
diferencia de concentracin, siempre que la temperatura y la presin sean constantes.
Difusin: Movimiento al azar de una sustancia de un lugar de mayor energa libre a uno
de menor energa libre, dicho de otra forma, de un lugar de menor mayor concentracin
a uno de menor concentracin. Se llega al equilibrio cuando la energa libre es
uniforme en todo el sistema. Podemos concluir que la difusin no slo existe cuando
hay una diferencia de concentracin, sino tambin cuando hay una diferencia de presin
y temperatura.
Osmosis: Mecanismo de difusin de las molculas de agua, el cual depende de la
permeabilidad de la membrana. Ocurre en direccin del lugar de mayor potencial de
agua a uno de menor potencial de agua.
Difusin de slidos en agua
Se dejo caer KMnO4 en un recipiente con agua. Al cabo de uno minutos este se
difundi por todo el recipiente. Esto es debido a que la el slido, que posea una mayor
concentracin en el fondo, viajo hacia los lugares de menor concentracin para alcanzar
un equilibrio de energa.
Osmosis de sacarosa
Se ata una membrana semipermeable a la boca de una probeta en donde hay una
solucin de sacarosa al 10%. Se coloca esto dentro de un recipiente con agua destilada
hasta que la bolsa que la membrana quede completamente rodeada de agua. Medir la
cantidad de agua que sube por la probeta. Repetir lo mismo pero con una solucin de
sacarosa al 40%. Los resultados fueron:
En 10% entra poco agua
En 40% entra mucha mas agua
En la probeta entra mayor volumen de agua cuando es mayor la concentracin
de la solucin.
Efecto de variacin de la presin osmtica en eritrocitos
Agua destilada = solucin hipotnica
Solucin salina 0,85% = solucin isotnica
Solucin salina 1,00% = solucin hipertnica

Los eritrocitos en solucin isotnica no presentan variacin

Los eritrocitos en solucin hipertnica sufren el fenmeno de crenacin, es decir,
perdida de agua. Se deshidratan
Los eritrocitos en solucin hipotnica presentan hemlisis, se rompen por la cantidad de
agua que entra. La turgencia es el proceso en donde entra agua a la clula debido a que
los eritrocitos se presentan en un medio hipotnico. Los restos de membrana en la
solucin hipotnica reciben el nombre de fantasmas.
Efecto del peso molecular
Las suspensiones diluidas de eritrocitos son muy opacas, no dejan pasar mucha
luz, pero las soluciones de las clulas hemolizadas son transparentes. Colocando una
hoja con letras detrs de cada solucin de eritrocitos con las molculas Urea,
Etilenglicol, Glicerol y Glucosa, calcularemos el tiempo en que los eritrocitos tardan en
sufrir hemlisis y as poder leer que lo que hay detrs del tubo de ensayo. Los tiempos
que se requieren para que las letras se hagan visibles son los siguientes:
Urea, masa 60 = 6 segundos
Etilenglicol, masa 62 = 12 segundos
Glicerol, masa 92 = 15 segundos
Glucosa, masa 180 = mas de tres minutos
Los resultados demuestran que a mayor peso molecular, mayor tiempo de
hemlisis.
Relacin entre la permeabilidad y el coeficiente de reparto
El coeficiente de reparto es la relacin de permeabilidad de un compuesto en
lpidos y su solubilidad en agua. Los alcoholes con pocos carbonos como el metanol y
el etanol son muy polares y poco solubles en lpidos, pero miscibles en todas las
proporciones con agua. Por el contrario, los alcoholes con ms carbono como el
pentanol, tienden a mezclarse fcilmente con lpidos. Por lo tanto, los alcoholes con
pocos carbonos tienen bajos coeficientes de reparto, y los alcoholes que poseen mas
carbono, altos coeficientes. Por regla, los alcoholes con mayor coeficiente de reparto
entran ms fcilmente a la clula.
Los tiempos de hemlisis para cada solucin de alcohol fueron los siguientes
Metanol (1C) = 9:33 min.
Etanol (2C) = 5:05 min.
Propanol (4C) = 2:43 min.
Pentanol (5C) = 0:15 min.
Se concluye que cuando un alcohol posee mayor cantidad de carbonos (mayor
coeficiente de reparto), es ms fcil que penetre por la membrana lipdica.

Enzimas
En el interior de las clulas procariotas y eucariotas existe un gran nmero de
sustancias especificas de naturaleza proteica, macromolculas de origen biolgico con
funciones biocatalizadores llamadas enzimas. Estas aceleran reacciones disminuyendo
la energa de activacin necesaria para que se lleven a cabo. Estas enzimas trabajan
con un substrato especifico, pero pueden ser inhibidas por sustancias que compiten con
el sustrato o sustancias que hacen que la enzima pierda su funcionalidad.
La catalasa es una hemoproteina enzimaticamente activa, es decir, contiene un
protohemo como grupo prosttico parecido a la hemoglobina. Se encuentra en grandes
cantidades en las clulas hepticas. Esta enzima previene la acumulacin de perxidos
txicos que pudieran formarse durante la respiracin celular. La reaccin general de esta
enzima es:
2 H 2 O2 2 H 2 O O2

En esta reaccin el donador de electrones es la segunda molcula de perxido de

hidrgeno.
Para la experiencia se prepar 20 gramos de hgado que fue macerado
(machacado). Se le agrego 20 ml de agua destilada, se filtro y se preparo dos soluciones:
un homogeneizado concentrado y uno diluido. El concentrado es el que se obtiene
directamente de la solucin y el diluido es otro al cual se le agregan 15 ml mas de agua
destilada.
Verificacin de la liberacin de oxgeno en la reaccin del perxido de hidrgeno
con la catalasa
Unas cuantas gotas de homogeneizado concentrado se hace reaccionar con 5 ml
de perxido de hidrgeno en un tubo de ensayo, luego se acerca un palillo de madera
ardiente, sin llama, a la boca del tubo de ensayo. Se aprecia que este vuelve a encender.
Esto se debe a que la reaccin de la catalasa y el perxido de hidrgeno libera oxgeno y
este promueve la combustin del palillo.
Estudio de la cantidad de calor liberado durante la reaccin de la enzima con el
substrato.
En un tubo de ensayo se coloca 10cc de solucin de H 2O2 3% y un termmetro.
Se lee la temperatura inicial y se toma como temperatura de referencia. Luego, se
agrega 1 ml de solucin enzimtica y se lee las variaciones de temperatura cada 30
segundos durante 5 mintos.

Los resultados entregaron la siguiente grfica

concentracin

tiempo

La temperatura sube hasta llegar a los 41 C. Luego desciende. Esto sucede por
que cuando se satura la cantidad de enzimas, la liberacin de calor es constante. Cuando
la totalidad del substrato es completamente catalizado, la temperatura desciende. La
reaccin de descomposicin del perxido de hidrgeno en oxgeno y agua, mediado por
la catalasa, es un procedo exotrmico.
Efecto de la concentracin de la enzima en la velocidad de la reaccin
Si en un determinado volumen de una mezcla de reaccin se mantienen
constantes el pH, la temperatura y la concentracin del sustrato, y se dobla la cantidad
de enzima, se aumenta tambin la cantidad de producto de la reaccin. La velocidad
inicial de la reaccin es directamente proporcional a la concentracin de la enzima. Para
esto se necesita que la concentracin del substrato sea suficientemente elevada, de modo
que la totalidad de las enzimas interacten.
Para comprobar esto se colocan uno, dos, tres y cuatro discos de papel filtro con
homogeneizado concentrado en cuatro botellas de reaccin, de modo que aumente la
concentracin de enzimas en cada botella. A estas se le agregan 10 ml de perxido de
hidrgeno y se mide la cantidad de oxgeno liberado. Los resultados nos indicaron que
al aumentar la concentracin catalasa aumentaba la cantidad de oxigeno liberado. El
grfico donde se presentan cada una de las cuatro reacciones, desplazamiento en
funcin del tiempo, es el siguiente

Desplazamiento
de O2

tiempo
El grfico de velocidad con respecto a la concentracin se calcul con la
pendiente de cada recta de desplazamiento en funcin del tiempo, y se grafic en
funcin de la concentracin de enzima.
velocidad

concentracin
Se concluye que la velocidad de reaccin de la enzima es proporcional a la
concentracin de esta misma. A mayor concentracin de enzima, mayor velocidad de
reaccin
Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica
El aumento de temperatura influye de distinta manera sobre la actividad y la
velocidad enzimatica.
1.
2.
3.
4.

En la estabilidad de la enzima
En la velocidad de escisin del complejo Enzima-Substrato
En la afinidad de la enzima por su substrato
En la afinidad entre la enzima y sus inhibidores y activadores

En los casos 2, 3 y 4, al aumentar la temperatura, se observa un aumento en la

velocidad de la reaccin. En cambio, en el primer caso, al verse afectada la
estabilidad de la enzima se puede producir una disminucin de la velocidad de
reaccin de esta.
Para todas las enzimas existe una temperatura ptima en la cual desarrollan su
mxima accin. Por debajo de esta temperatura la enzima es ms estable y puede

actuar por mas tiempo, pero al velocidad de reaccin que esta ejerce es menor. Por
encima de la temperatura ptima, la velocidad de reaccin aumenta, pero la enzima
puede ser rpidamente inactivada debido a que se desnaturaliza a mucha
temperatura.
Para el estudio de este efecto se midi la velocidad de la reaccin de la catalasa a
diversas temperaturas, 8C, 37C y 60C. El grfico que representa los resultados es
el siguiente:
Temperatura
velocidad
ptima

8C

37C

60C
temperatura

La temperatura ptima de la catalasa esta en un rango de 37C, es decir que a

37C la velocidad de reaccin de la catalasa es mxima pues su temperatura es ptima.
Por lo tanto, la velocidad de reaccin de una enzima aumenta al presentarse en una
temperatura ptima.
Efecto del pH sobre la actividad enzimtica
Todas las reacciones enzimticas son influenciadas por el pH del medio. Cada
enzima tiene un pH ptimo, en el cual esta ejerce su mxima accin.
La mayor parte de las enzimas intracelulares tienen un pH ptimo cerca de la
neutralidad, por lo que puede actuar en medio cidos o bsicos, pero los cidos y bases
enrgicos las inactivas irreversiblemente.
La accin del pH sobre la actividad enzimtica es debido:
1.
2.
3.
4.

El efecto sobre la velocidad de desnaturalizacin de la enzima

Al efecto sobre el substrato
Al efecto sobre los centros activos de la enzima
Al efecto sobre los grupos que participan en la reaccin

Los resultados de la velocidad de reaccin de la enzima catalasa para los pH 4, 7 y 9

fueron representados en el siguiente grfico

velocidad

pH ptimo

9
pH

El pH ptimo de la catalasa es cercano a 7, por que la velocidad de reaccin

aumenta en ese valor. De esto podemos concluir que la velocidad de reaccin aumenta
al presentarse en un pH ptimo
Efecto de la concentracin del substrato
La velocidad de la reaccin enzimtica se encuentra tambin influida por la
concentracin del substrato. Al aumentar la concentracin del substrato, aumentar la
velocidad de la reaccin, hasta alcanzar la velocidad mxima. Se alcanza esta velocidad
por que la todos los sitios activos de las enzimas estn saturados. Aqu la velocidad de
reaccin se hace constante.
Para esta experiencia se utilizaron 3 sistemas con:
- 5 ml de H2O2 + 10 ml de agua destilada
- 10 ml de H2O2 + 5 ml de agua destilada
- 10 ml de H2O2

Los resultados para estos experimentos estn representados en el siguiente

grfico:
velocidad

Concentracin
del sustrato
La grfica nos permite concluir que la concentracin de sustrato influye en la
velocidad de la reaccin, llegando a ser constante cuando todos los sitios activos de la
enzima catalasa estn saturados.
Metabolismo
La suma de todos los cambios qumicos que tienen lugar en la clula constituye
el metabolismo. Una metabolito es una sustancia que se ocupa o se deshecha en las
reacciones metablicas. El metabolismo se divide en dos partes que se llevan a cabo al
mismo tiempo en los procesos de la clula: Catabolismo y Anabolismo. En las
reacciones catablicas o de degradacin ocurre una ruptura de las molculas en partes
cada vez ms pequeas. En el anabolismo o reacciones de sntesis se integran partes
pequeas para dar molculas ms complejas.
Respiracin aerobia, produccin de CO2
Se introducen 40 semillas en germinacin de frijoles en un matraz tapado. Un
tubo conecta este matraz con otro matraz que contiene Ba(OH) 2. Otra abertura del
mismo tapn esta unida a un embudo. Se deja una hora para luego sacar las pinzas de
los tubos y dejar caer el agua hacia el sistema. El agua provocar que el CO2 avance
desde el matraz con los frijoles hasta el matraz con Ba(OH)2, reaccionando con este,
produciendo BaCO3 + H2O y un leve burbujeo. El BaCO 3 se presenta como un
precipitado blanco.
Respiracin anaerobea, produccin de CO2
Es similar a la experiencia anterior, solo que en vez de frijoles se utiliza
levadura. Esta levadura, gracias al proceso de fermentacin, libera CO 2. Un tubo
conecta este matraz con otro matraz que contiene Ba(OH) 2. Otra abertura del mismo
tapn esta unida a un embudo. Se deja una hora para luego sacar las pinzas de los tubos
y dejar caer el agua hacia el sistema. El agua provocar que el CO 2 avance desde el
matraz con la levadura hasta el matraz con Ba(OH) 2, reaccionando con este,
produciendo BaCO3 + H2O y un fuerte burbujeo. El BaCO3 se presenta como un
precipitado blanco.

Efecto de un antimetabolito en la respiracin de las clulas de levadura

La enzima enolasa cataliza la reaccin que convierte el 2PG en PEP. La enolasa
para reaccionar requiere la presencia de iones Magnesio. El fluor se presenta como un
antimetabolito pues precipita los iones Mg y asi inhibe la reaccin. Esta inhibicin se
puede detectar por la disminucin de la velocidad del proceso respiratorio.
3PG (1) 2 PG (2) PEP (3) Puruvato( 4) Acetaldehido CO2 (5) E tan ol

Las enzimas que realizan este proceso son:

(1)
(2)
(3)
(4)
(5)

Fosfogliceromutasa
Enolasa
Piruvato cinasa
Piruvato descarboxilasa
Alcohol deshidrogenada

El antimetabolito es NaF y acta inhibiendo a la enolasa. Esto es debido a que el

Fluor precipita los iones Mg que requiere la enolasa para poder llevar a cabo la
reaccin. El resultado observable de esta inhibicin es la no produccin de CO2
Tubo 1: 5 ml de una suspensin de levadura + 10 ml de agua destilada
Tubo 2: 5 ml de una suspensin de levadura + 5 ml de glucosa + 5 ml de agua destilada
Tubo 3: 5 ml de una suspensin de levadura + 5 ml de glucosa + 5 ml de NaF 0,01M
Tubo 4: 5 ml de una suspensin de levadura + 5 ml de glucosa + 5 ml de NaF 0,05M
Tubo 5: 5 ml de una suspensin de levadura + 5 ml de glucosa + 5 ml de NaF 0,10M
Colocados a 37C los resultados de liberacin de CO2 fueron los siguientes:
Tubo 1 : No libera CO2
Tubo 2 : Bastante liberacin de CO2
Tubo 3 : Descenso de la liberacin de CO2, 2 ml
Tubo 4 : Descenso de la liberacin de CO2, 1 ml
Tubo 5 : Descenso de la liberacin de CO2, 0,5 ml
Se conluye que la liberacin de CO2 esta dada indirectamente por la accin de la
enolasa, que es inhibida por el antimetabolito NaF. A mayor concentracin de
antimetabolito, menor respiracin celular.

Medicin de la velocidad del proceso respiratorio en los animales

Se pesan dos animales de la misma especie y se encierran (por separado) en una

cmara de respiracin junto con un tubo de ensayo con Na(OH) levemente tapado para
no quemar al animal. El hidrxido de sodio absorbe el CO2 producido en la respiracin
y esto produce un cambio en la presin. Este cambio representa el oxgeno consumido
por el animal. Con este valor podemos determinar el consumo de oxgeno por hora. Por
ejemplo: si la marca se desplazo 5 ml en 5 minutos, tenemos:
5mlO2
XmlO2

15 min 60 min

X corresponde a la cantidad de O2 consumida por hora. Los resultados fueron

que a mayor peso del animal, mayor consumo de oxgeno. La grfica de consumo de
oxigeno por hora vs peso del animal es la siguiente:
Consumo de O2

Peso del
animal
La tasa metablica corresponde al consumo de oxgeno dividido por el peso del
animal.
tasa metabolica

Consumo de O2
peso

Al ser el animal con mayor peso el que consume ms oxigeno, tenemos una
relacin inversamente proporcional. El grfico es el siguiente:
Tasa metablica

Peso del
animal
La tasa metablica es menor para animales con mayor peso por que estos poseen
tejidos que consumen menos oxgeno.

Fotosntesis
Se toman tres hojas, una completamente verde, otra con pigmentos verdes y
pigmentos de otro color, y otra hoja que debe estar 36 horas dentro de una bolsa sin
cortarla del rbol (a la obscuridad). El da en que se realiza el experimento es cuando se
debe cortar la hoja del rbol. La hoja debe perder su pigmentacin verde.
Esta experiencia nos permite comprobar si la clorofila es necesaria par la
fotosntesis. Se llena un vaso qumico con agua hasta la mitad y se pone a calentar. En
otro vaso se agregan 200 ml de alcohol etlico al 95% y se coloca a bao mara. Cuando
el agua este hirviendo se introduce la hoja por dos minutos y posteriormente se
transfiere al vaso con alcohol etlico y se deja calentar por tres minutos. A travs de este
procedimiento la clorofila se elimina. Es necesario eliminar la clorofila por que esta
oculta la presencia de almidn. Se hace la prueba de lugol a cada hoja. Los resultados
fueron:
Hoja verde : Completamente negras, presencia de almidn
Patrones con mancha : Donde era verde, se tie de negro, presencia de almidn. Donde
era de color no se tie, no hay presencia de almidn.
Hoja a la obscuridad : no hay tincin, no hay presencia de almidn.
En el caso de la hoja a la obscuridad este resultado se debe a que gast todas las
reservas de almidn que posea cuando se dejo en la obscuridad, y al no poder realizar
fotosntesis, se atrofiaron los cloroplastos y no pudo sintetizar ms almidn.
Se concluye que los componentes del almidn son sintetizado por la clorofila a
travs de la fotosntesis