Vectores utilizados en la manipulacin gentica - Una retrospectiva

Un vector es una molcula de ADN que es capaz de replicarse en un organismo husped, y puede
actuar como una molcula portadora para la transferencia de genes en el husped. La biologa de
la clonacin de genes se refiere a la seleccin y el uso de un vector adecuado, un sistema vivo o
husped en el que el vector puede ser propagado. En base a estudio de la literatura una visin
general se da en los vectores utilizados en la manipulacin gentica. Los vectores de clonacin
como plsmido, (insercin) vector, (sustitucin) vector, csmidos, fagmidos, M13 vector, YAC,
BAC y PAC son centrado principalmente. Vector de expresin y el vector lanzadera son revisados.
Vectores de clonacin en plantas superiores como plsmidos Ti, plsmidos Ri y vectores para
clulas animales como SV40, adenovirus, virus del papiloma bovino, vectores del virus de viruela,
tambin se incluyen. Esta comunicacin ser de utilidad para el lector que trabaja con diferentes
tipos de vectores utilizados en la clonacin de genes y expresin.
Palabras clave: vector, vectores de clonacin, vectores de expresin, vectores para plantas y
animales.
INTRODUCCIN
Un vector es un ADN de replicacin autnoma en la que se inserta un ADN extrao para la
transferencia o la propagacin en un organismo. En general, un vector debe tener un sistema de
replicacin autnoma que es independiente del ciclo celular, de manera que muchas copias se
pueden hacer. Vectores junto con los ADN forneos se pueden introducir en la clula husped
apropiada y son mantenidos para el estudio y la expresin. En esta comunicacin, basada en
revisin bibliogrfica, se ha recopilado informacin sobre los vectores de clonacin es decir, el
plsmido, (Insercin) vector , (sustitucin) vector , vectores csmidos, fagmidos, M13 vector,
YAC, BAC y PAC. Mucha atencin se ha dado sobre vector de expresin, vector transportador y un
nmero de otros vectores utilizados en plantas y animales.
Existe una amplia variedad de diferentes tipos de vector que estn disponible hoy, y muchos estn
altamente especializados y diseados para realizar una funcin especfica. Caractersticas de los
vectores que lo hacen til para la clonacin molecular, se enumeran en la Tabla 1. En estos
artculos vectores se han clasificado en vectores de clonacin, vectores de expresin, los vectores
de las plantas superiores y vectores para clulas animales. El objetivo principal de la redaccin de
este manuscrito es permitir que el lector se conscientice de los vectores utilizados en la clonacin
de genes y expresin.
VECTORES DE CLONACIN
Vector de clonacin - una molcula de ADN que lleva ADN extrao en una clula husped, se
replica dentro de una clula bacteriana (o levadura) y produce muchas copias de s mismo y el
ADN extrao. Los genes clonados en estos vectores no se espera que expresen a nivel de
transcripcin o traduccin. Estos vectores se utilizan para la creacin de libreras genmicas o para
la preparacin de las sondas o en experimentos de ingeniera gentica u otros estudios bsicos. La
seleccin de vectores de clonacin depende del objetivo de experimento de clonacin, facilidad de
trabajo, el conocimiento existente sobre el vector, conveniencia y fiabilidad. Una variedad de
molculas pequeas, de replicacin autnoma se utilizan como vectores de clonacin (Voet et al.,
1999). Los vectores que se utilizan comnmente en experimentos de clonacin se presentan en la
Tabla 2.
Los plsmidos como vectores

Los plsmidos son molculas de ADN circulares que llevan una existencia independiente en las
clulas bacterianas. Ellos son de origen natural, fragmentos de ADN extra cromosmico que se
heredan de forma estable de una generacin a otra generacin en un estado cromosmico
adicional. La incorporacin de fragmentos de ADN en vectores plasmdicos que no slo permiten
ADN extrao a ser replicado en clulas clonadas para despus el aislamiento y la identificacin,
pero tambin puede ser diseado de manera que las clulas transcriben y traducen este ADN en
protena (Strickberger, 2004). Estn ampliamente distribuidos en los procariotas y varan en tamao
desde aproximadamente 1500 pb a ms 300kbp. Los Vectores plasmdicos comunes son de 2-4 kb
de longitud y son capaces de llevar 15 kb de ADN extrao (Hartwell et al., 2004). La mayora de los
plsmidos existen cerrados son molculas de ADN de doble cadena circular que a menudo
confieren un fenotipo particular a las clulas bacterianas en las que se replican. Pocos tipos de
plsmidos tambin son capaces de replicarse por s mismos en la insercin de los cromosomas
bacterianos que se llaman episomas.
Propiedades bsicas de plsmido se enumeran en la Tabla 3. Se pueden clasificar en dos grupos
es decir plsmido conjugativo y no plsmido conjugativo. Los plsmidos conjugativos pueden iniciar
su propia transferencia entre las bacterias por el proceso de conjugacin, que requiere funciones
especificadas por la TRA (transferencia) y mob (movilizacin) regiones llevadas en el plsmido.
Plsmidos No conjugativos no son auto transmisible, pero pueden ser movilizados por una
conjugacin
del
plsmido
dominio
si
su
regin
mob
es
funcional.
Una clasificacin adicional se basa en el nmero de copias del plsmido se encuentra en la clula
husped, una caracterstica conocida como nmero de copias. En funcin de los vectores del
plsmido comunes la frecuencia se puede clasificar como nmero de copias bajo (<10) o el nmero
de copias elevado (> 20).
Plsmidos de bajo nmero de copias tienden a exhibir un estricto control de la replicacin del ADN
con la replicacin de pDNA estrechamente ligada a acoger la replicacin del ADN cromosmico de
la clula. Los plsmidos de gran nmero de copias se denominan plsmidos relajado, la
replicacin del ADN no depende de la clula de replicacin del ADN cromosmico del husped
(Nicholl, 2002). La seleccin de vectores con bajo o alto nmero de copias depende del objetivo de
la clonacin. Si el objetivo es clonar y expresar un gen para la sntesis de protena en particular o
de metabolitos secundarios en el sistema bacteriano para una produccin ms elevada se prefiere
un alto nmero de copias. Sin embargo, en experimentos de transformacin, los plsmidos son de
baja copia de opcin automtica (Satya, 2007).
La clasificacin ms til de plsmidos de origen natural se basa en las caractersticas principales
codificadas por los genes del plsmido. Los cinco tipos principales de plsmido de acuerdo con
esta clasificacin se muestran en la Tabla 4 (Brown, 2006).
Los fagos como vectores
Los bacterifagos son vectores naturales que transducen ADN bacteriano a partir de una clula a
otra. Vectores de fagos tienen una ventaja natural sobre plsmidos que es que infectan las clulas
mucho ms eficientemente que los plsmidos las clulas transformadas, por lo que el rendimiento
de los clones vectores de fago es generalmente ms alta. Con vectores de fago, los clones no son
colonias de clulas, sino que son placas que se forman cuando un fago despeja a cabo un agujero
en un csped de bacterias (Weaver, 2005). El Bacterifago l es un virus genticamente complejo
muy estudiado extensivamente de E. coli. El ADN de fago l es una molcula dplex lineal de
aproximadamente 48.5kbp. Al igual que con vectores plasmdicos, vectores derivados de fagos
mejorados se han desarrollado. Ha habido varios objetivos, que se enumeran en la Tabla 5.

Aproximadamente un tercio de genoma l no es esencial y puede ser reemplazado ADN extrao.

ADN se empaqueta en partculas de fago infecciosas slo si es en entre 40.000 y 53000bp de
largo, una restriccin que se puede utilizar para asegurar envasado de slo ADN recombinante
(Nelson y Cox, 2007). Ingeniera de vectores son de dos tipos principales, es decir vectores de
insercin y vectores de reemplazo (Channarayappa, 2006)
Vector ( insercion)
Con un vector de insercin, un gran segmento de la regin no esencial ha sido suprimido, y dos
brazos se ligaron juntos. La insercin del vector de fago tiene el sitio de restriccin nico que se
utiliza para la insercin de ADN extrao. El tamao del fragmento de ADN que un vector individual
puede llevar depende, por supuesto, en la medida en que la regin no esencial ha sido borrada.
ADN extrao pequeo puede ser embalado aqu. El ejemplo de (insercin) es vector l gt10 y
Caronte 16A.
l gt10 es 43kb de ADN de doble cadena y se puede clonar fragmentos de hasta 7 kb. Puede llevar
hasta 8 kb de ADN nuevo, se inserta en un sitio EcoRI nico situado en el gen CI. Este vector da
placas claras. la Insercin de activacin de este gen hace que los recombinantes se distinguen tan
claramente en vez de placas turbias (calvas). En Caronte 16A hasta el 9kb de ADN extrao puede
ser clonado. Caronte 16, con el cual la insercin de ADN nuevo en un sitio nico EcoRI inactiva el
gen lacZ portado por el vector. Los recombinantes producen claro, en lugar de azul, placas de agar
X-gal.
Vector (sustitucion)
Un vector de reemplazamiento tiene dos sitios de restriccin que flanquean una regin conocida
como fragmento de relleno. A menudo, el fragmento reemplazable lleva sitios de restriccin
adicionales que se pueden utilizar para cortar en trozos pequeos, de manera que su propia
insercin durante un experimento de clonacin es muy poco probable. Vectores de repuesto
generalmente diseados para transportar grandes piezas de ADN que puede manejar un vector de
insercin. El ejemplo de vectores de reemplazo son EMBL4, Charon 40 y WES. B1. EMBL4 con
capacidad para 9-23 kb de ADN forneo al reemplazar un segmento flanqueado por pares de
EcoRI, BamHI y SalI sitios. Charon 40 puede tomar hasta 9-22 kb de ADN forneo. En WES. B1
dos sitios EcoRI flanquean el fragmento de sustitucin, y la seleccin recombinante es nicamente
sobre la base de su tamao. Un Inserto de hasta 15 kb pueden ser fcilmente clonado (Brown,
2006).
CSMIDOS
Los Csmidos se desarrollaron por primera vez en 1978 por Barbara Hohn y John Collins. Ellos
son plsmidos que contienen en el fago un sitio cos (Collins y Bruning, 1978). La primera parte de
su nombre, "cos" viene del hecho de que csmido contiene los extremos cohesivos, o en el sitio
cos de lo normal. Estos extremos son esenciales para el empaquetamiento del ADN en cabezas
de fagos. La ltima parte de su nombre "medio" indica que el cosmido lleva un origen de
replicacin del plsmido como el que se encuentra en el plsmido pBR322 (Zubey et al., 1995).
Como plsmidos, los csmidos contienen un origen de replicacin y un marcador seleccionable.
Tambin poseen un sitio nico de reconocimiento de la enzima de restriccin en el que los
fragmentos de ADN se pueden ligar. Despus de que ocurre la reaccin de embalaje, las partculas
recin formadas se utilizan para infectar clulas de E. coli. El ADN se inyecta en la bacteria como
el ADN normal y circulariza a travs de la complementacin de los extremos cos. El ADN que ser

circularizado, sin embargo, se mantiene en E. coli como un plsmido. Por lo tanto la seleccin de
los transformantes se hace sobre la base de la resistencia a los antibiticos y las colonias
bacterianas (en lugar de la placa) se formar que contiene el csmido recombinante (Reece, 2004).
Con un vector csmido de 5 kb, demandamos la insercin de 32-47 kb de ADN forneo, que es
mucho ms de lo que un vector de fago puede acomodar. Con el fin de clonar ADN forneo en
vector de csmido, el ADN csmido se hace primero para linealizar por el corte con la enzima de
restriccin apropiada. A continuacin se tratarn con el fosfato del intestino de ternero para eliminar
el grupo fosfato en sus extremos 5a fin de evitar la recircularizacin de ADN csmido. La Ventaja
de utilizar un vector de csmido es ms grande de lo que el ADN se puede clonar lo que es posible
con el fago o plsmido. Como insertos ms grandes son posibles, biblioteca genmica puede ser
creado que se compone de un menor nmero de clones que se proyectarn.
La Eficiencia de csmido es lo suficientemente alta como para producir una biblioteca genmica
completa de 106 a 107 clones a partir de una solo 1 ug de inserto. Las bibliotecas genmicas de
Drosophila, ratn y varios otros organismos se han producido con los vectores de csmido
(Jogdand, 2006).

FAGMIDOS
Los fagmidos son plsmidos que contienen origen del fago f1 de la replicacin para la produccin
de ADN de una sola hebra. Por lo general son pequeos plsmidos de modo que tengan la
capacidad de aceptar insertos de ADN ms grandes que los vectores basados en M13. Ellos fueron
desarrollados originalmente en la dcada de 1980, cuando se descubri que la insercin del origen
de replicacin f1 podra ser clonado en pBR322 para conducir la produccin de ADN de una sola
hebra. El origen de replicacin f1 no era suficiente para dirigir la produccin de ADN de una sola
hebra, pero si una bacteria que lleva un fagmido se superinfeccin con un tipo salvaje funcional
M13 o f1 fago auxiliar, a continuacin, la produccin de ADN de fagmido monocatenario se
producira. Los fagmidos tienen varias caractersticas atractivas que supere los problemas ms
frecuentes con la clonacin en el bacterifago (Sambrook y Russel, 2001) y se enumeran en la
tabla 6.
VECTOR M13
M13 es un fago filamentoso. Su molcula de ADN es mucho ms pequeo que el genoma. Se trata
de 6407 nucletidos de longitud, circular y consiste en su totalidad de ADN de una sola hebra. El
genoma es de menos de 10 kb de tamao, bien dentro de la gama de un vector potencial. Tras la
infeccin de E. coli, el ADN se replica inicialmente como una molcula de doble hebra
posteriormente por la produccin de viriones de hebra nica para la infeccin de nuevas clulas
bacterianas (Wilson y Walker, 2005). Forma replicativa de doble cadena del genoma M13 se
comporta muy parecido a un plsmido y se puede tratar como tal con fines experimentales. Los
genes clonados con un vector basado en M13 se pueden obtener en la forma de ADN de una sola
hebra. Fago M13 se usa en el mtodo de secuenciacin de ADN de Sanger.
BAC
Los Cromosomas artificiales bacterianos (BAC) estn diseadas en una versin F de plsmidos
(Shizuya et al., 1992). Ellos son capaces de llevar aproximadamente 200 kpb de la secuencia de
ADN insertada. El origen de replicacin (ORI) del factor F mantiene su nivel en aproximadamente

una copia por clula. Adems de oriS, BAC que contienen cuatro genes de los factores necesarios
para la replicacin y el mantenimiento del nmero de copias