PRCTICA No.

1
DETERMINACION DE VOLUMEN MINIMO DE LECTURA Y
OBSERVACIN
DEL EFECTO MENISCO
OBJETIVO
Calcular la cantidad exacta de volumen que requiere el
espectrofotmetro de uso frecuente en el laboratorio de bioqumica
clnica para la correcta lectura de absorbancia.
FUNDAMENTO
En las determinaciones fotomtricas es de vital importancia que el
volumen que se deposita en la celda de lectura sea el adecuado para
asegurar que el rayo de luz atraviesa completamente la solucin.
El manejo de volmenes inferiores al volumen mnimo requerido
ocasiona lecturas errneas y como consecuencia resultados incorrectos.
Cuando se coloca una cantidad insuficiente de solucin en la celda, el
rayo de luz atraviesa por el menisco de la misma y por efecto de
difraccin se obtienen lecturas elevadas.
En un espectrofotmetro, la luz blanca que proviene de una fuente de
luz (una bombilla) atraviesa un monocromador, de donde sale la luz de
la longitud de onda (color) seleccionada. Esta luz pasa a continuacin a
travs de una solucin contenida en la celda ptica, llamada cubeta. La
solucin absorbe una fraccin de la luz y un detector mide la reduccin
de intensidad de luz resultante (la absorbancia). Cuanto ms intenso sea
el color de la solucin, mayor ser la medida de absorbancia.

Las cubetas ms comnmente utilizadas tienen una longitud de 1cm y

requieren un volumen mnimo de 3 ml de solucin para obtener medidas
satisfactorias. El objetivo principal de un espectrofotmetro de uso
general es la medida exacta y precisa de la absorbancia. Por tanto, la
seleccin de la longitud de onda debe ser lo ms exacto posible y la luz
altamente monocromtica (es decir de un estrecho rango de longitudes
de onda).
PROCEDIMIENTO

Ajustar el
aparato a
cero con
aire, a una
longitud de
onda de 500
nm

Colocar en la
celda 0.2 ml
de la
solucin de
dicromato de
potasio y
tomar la
primera
lectura

Agregar 0.2
ml de la
solucin
nuevamente
y registrar
la lectura

Determina
r el
volumen
mnimo de
lectura

Repetir la
adicin de la
misma cantidad
de solucin
tomando las
lecturas hasta
que permanezcan
constantes

RESULTADOS
Nmero de lectura
1
2
3
4
5
6
7
8

Absorbancia
-0.100
0.414
0.145
0.144
0.146
0.150
0.148
0.148
VOLUMEN TOTAL

Volumen (ml)
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
1.6

CONCLUSIN
Dado el volumen y el nmero de veces que se agregaron los 0.2 ml a la
celda, concluimos que para que el espectrofotmetro pueda leer
correctamente la absorbancia y se puedan obtener resultados
coherentes, la celda debe contener aproximadamente lo de 1.5 ml.