UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA
MICROBIOLOGIA II
Integrantes:
Snchez Wladimir
Hernndez Jos
Villacrs Sebastin
Fecha: 17 de Febrero de 2015
1. TEMA: Aislamiento de microorganismos degradadores de
hidrocarburos.
2. INTRODUCCIN
2.1 JUSTIFICACIN
La contaminacin por hidrocarburos, como petrleo, gasolina, aceite
mineral, es una problemtica de carcter mundial y amplia
distribucin geogrfica (lagos, suelos, zonas freticas, ros y playas)
( Lesser, 1995).
En suelos contaminados expuestos a diferentes productos que tienen
hidrocarburos tales como petrleo, gasolina, aceite mineral que ha
sido afectada desde hace varios aos existen bacterias que han
evolucionado y sobrevivido a dichos hbitats han generado
resistencia a los componentes antes mencionados emplendolos
como fuente de carbono para su desarrollo(Mrquez et al., 2001).
Los residuos de hidrocarburos producidos por la industria petrolera
continan siendo un problema ambiental respecto a su tratamiento y
disposicin final. La recuperacin de un ambiente contaminado con
hidrocarburos como este por medio de la bioremediacin, por
ejemplo, exige un adecuado estudio y caracterizacin de los
microorganismos presentes(Mrquez et al., 2001).
El Centro de Investigaciones Microbiolgicas de la Universidad de los
Andes ha desarrollado diferentes estudios encaminados al
aislamiento y bioaumentacin de bacterias nativas degradadoras de
crudo en suelos impactados por derrames del oleoducto Cao Limon
Coveas. En otros estudios se han tratado suelos a travs de
biolabranza y adicin de nutrientes, obteniendo porcentajes de
degradacin de hidrocarburos totales del petrleo entre el 35%-61%
(Castro et al., 2004; Vallejo et al., 2005)

2.2 OBJETIVOS
2.2.1 GENERAL
Aislar
microorganismo
degradadores
de
hidrocarburos.
2.2.2 ESPECFICOS
Identificar microorganismos degradadores de
hidrocarburos.
Determinar la cantidad de microorganismos
degradadores de hidrocarburos presentes en el
suelo contaminado.
Identificar el contaminante del suelo utilizado.
2.3 HIPTESIS

Existen varias especies de bacterias que utilizan hidrocarburos

como fuente de carbono para su desarrollo.
2.4

MARCO TERICO

Los hidrocarburos son compuestos formados por tomos

de carbono e hidrgeno, de gran abundancia en la naturaleza,
presentes principalmente en el petrleo (Chappin, 1988 y PEMEX,
1988).
Se considera a los hidrocarburos de petrleo como una mezcla lquida
compleja de gases, lquidos y slidos, existiendo pequeas cantidades
de mezclas de nitrgeno, oxgeno y azufre, adems de contener
compuestos de hierro, nquel, vanadio y otros metales (PEMEX, 1988).
Los idrocarburos Antrpicos son aquellos que son introducidos como
resultado de cualquier tipo de actividad humana. Los procesos de
combustin industrial que contribuyen con niveles mucho ms altos
debido principalmente al humo generado por carbn, combustibles
fsiles y petrleo refinado, las descargas de aguas municipales, las
actividades de transporte y los derrames son algunas de las
principales fuentes de estos contaminantes (Bidleman et al., 1990).
Los HAPs constituyen contaminantes orgnicos relacionados con las
actividades humanas. Los compuestos que ms conciernen de los
hidrocarburos del petrleo y de la pirlisis de combustibles son los
hidrocarburos aromticos policclicos, sus homlogos alquil y los HAP
s sustituidos con sulfuro o nitrgeno. Muchos de esos compuestos
son estables y altamente txicos, algunos son potentes carcingenos
y otros mutagnicos. Se ha reportado que los HAPs son producidos a
altas temperaturas de 400 a 500C, mientras los homlogos alquil
sustituidos se producen a bajas temperaturas de 100 a 150 C
(Lesser, 1995).
Con el fin de contrarrestar los efectos nocivos causados por la
presencia del petrleo en los ecosistemas se han desarrollado
tcnicas fsicas, qumicas y biolgicas que buscan remover el mayor
porcentaje del contaminante y disminuir el impacto generado tras un
derrame o acumulacin progresiva. Entre las diversas tcnicas, la
biodegradacin es considerada actualmente la alternativa menos
costosa para transformar contaminantes presentes en diversos
ecosistemas, teniendo en cuenta que gran variedad de bacterias
cuentan con la maquinaria enzimtica para transformar los
compuestos xenobiticos persistentes y stas pueden ser aisladas de
lugares donde haya existido una previa exposicin al contaminante
(Mrquez et al., 2001).

3. MATERIALES Y MTODOS
3.1 MATERIALES
Asa metlica
Agua destilada estril
Agitador
Balanza
Matraz erlenmeyer

Medio LB 1/10
Pipeta de 1ml
Suelo contaminado desde hace 8 aos aproximadamente
regado por aceite contaminado seco de color caf oscuro,
olor fuerte y concentrado recogido en el sur de quito de una
mecnica automotriz
Tamiz
3.2 METODOS
Se tom el suelo contaminado y seco y se lo hizo pasar por
un tamiz para obtener mayor cantidad de bacterias que de
residuos grandes como piedras, despus se cogi 10 gramos
del suelo tamizado y se mezcl con 90 ml de agua destilada
y se agito por 15 min.
Despus se dej reposar por 30 min a lado del mechero para
separar el suelo de las bacterias que se quedan en el agua,
se cogi 1 ml del agua con las bacterias y se sembr en
medio LB y a continuacin se incubo.
Finalmente se analiz los resultados obtenidos
4. Resultados y discusin
Luego de incubar por seis das las muestras se llevaron al
estereomicroscopio para identificar diferentes morfologas
presentes en las tres cajas Petri inoculadas.
Se lograron identificar 5 diferentes tipos de morfologas en las
cajas con muestra de suelo de hidrocarburos Figura 1, mientras
que en la muestra control solo se identificaron tres morfologas
Figura 2.
De las morfologas identificadas en la muestra de suelo con
hidrocarburos, se cont un cuadrante para obtener nmeros
aproximados para cada morfologa, por lo que se identificaron
en total 480 Redondas con margen alzado (Fig 1 A); 840
redondas de color blanco (Fig 1 B ); 144 redondas y amarillas
(Fig 1 C)
12 filamentosas (Fig 1 D) y 504 bacterias carentes de pared
celular (Fig 1 E);
A

Figura 1. Morfologas identificadas en muestras de suelo con

hidrocarburos; A) Redonda con margen lazado; B) Redonda; C)
Redonda y amarilla; D) Filamentosa; E) Carentes de pared
celular.
Con respecto al control se identificaron tres tipos de morfologas
(Figura 2); de las cuales 140 fueron Redondas y blancas (Figura
2 A); 168 filiformes (Fig 2 B) y 108 Redondas y con margen
festoneado (Figura 2 C).

Figura 2. Morfologa identificadas en muestras de suelo sin

hidrocarburos (control): A) Redondas y Blancas; B) Filiformes; C)
Redonda con margen festoneado
Segn Yan, (2013), entre las principales morfologas identificadas en

muestras de suelos contaminados con hidrocarburos existen

circulares, circulares irregulares e irregulares, de las cuales los colores
pueden ser blanquesinos, amarillos o color pardo consistentes con los
obtenidos en los resultados de este trabajo; sin embargo no se puede
dar conlusiones definitivas a partir de la morfologa, para una
identificacin ms acertada Yan sugiere utilizar pruebas moleculares
como anlisis de secuencia de ADN 16s; Adegbola, (2014) sugiere
utilizar pruebas bioqumicas para la identificacin de colonias
aisladas de muestras de suelo contaminado con hidrocarburos donde
se pueden identificar Pseudomonas, Bacillus, Proteus, Salmonella y
Streptococcus de los cuales Bacillus spp. Es una de las bacterias ms
comunes identificadas en lugares contaminados con hidrocarburos
(Adegbola, 2014).
Segn Panda & Panda, 2013, las morfologas ms comunes en
muestras de suelo contaminado con hidrocarburos de una
observacin al microscopio las colonias se caracterizan por ser
redondas pequeas, de forma irregular y de colores blanco y amarillo
cremosos, pruebas bioqumicas posteriores identificaron a
Pseudomonas aeruginosa como una de las bacterias caractersticas
de suelos contaminados con hidrocarburos.

Para aislar cepas degradadoras de hidrocarburos, Hazzan T, et al,

(2013)sugiere utilizar medios selectivos a los que se aada petrleo
o diferentes hidrocarburos como la nica fuente de carbono, este
debe ser el paso siguiente en el presente trabajo.

5. Conclusiones
El aislamiento de bacterias degradadoras de hidrocarburos
requiere de a purificacin de cepas seleccionadas, por lo que se
recomienda hacer pruebas en medios enriquecidos con
hidrocarburos.
Se requieren de pruebas bioqumicas o moleculares para poder
identificar acertadamente las colonias y cepas degradadoras de
hidrocarburos, por lo que anlisis moleculares y pruebas
bioqumicas son indispensables.
El nmero de colonias vara mucho si se compara las presentes
en muestras contaminadas con hidrocarburos y muestras de
suelo comn, obtenindose una mayor variedad en las
muestras contaminadas.
6. Bibliografa
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bacteria from soil contaminated with used engine oil in Ogbomoso, Nigeria, Pelagia
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Castro, L., M. Perdomo y J. Benavides. 2004. Efecto de la adicin
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