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1
3S
, EDICIN1
ALWAYS L E A R N I N G
A. Tejeda
R.M. Montesinos
I
!
R. Guzmn
PEARSON
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UNIVERSIDAD DE SONORA
"El b e r d e m li hijo
har m i grandeza"
Bioseparaciones
Segunda Edicin
Armando Tejeda Mansir
Departamento de Investigaciones Cientficas y Tecnolgicas
Universidad de Sonora
Hermosillo, Sonora Mxico
PEARSON
http://www.fullengineeringbook.net 3 of 703.
_________________ /
H fje d a M a n s ir , A r m a n d o ; M o n t e s in o s C fc n e ro s,
R o sa M a r i a ; G u z m i n Z a m u d i o , R o b e r t o .
B i o s e p a r a c io n c s . S e g u n d a edicin.
Pginas: 704
Editor de desarrollo:
S E G U N D A E D I C I N . 2011
D .R . 2011 por Universidad de Sonora
Av. Rosales y Blvd. Encinas S/N
C ol. Centro
83000. H erm osillo, Sonora
www.uson.m x
D .R . 2 0 11 por Pearson Educacin de M xico . S A . de C .V .
Atlacom ulco 500- 5o Piso
Industrial Atoto
53519. Naucalpan de Jurez, Estado de M xico
Cmara Nacional de la Industria Editorial Mexicana. R cg. N m . 1031
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lis t e lib ro se public con el a p o y o d el P ro g ra m a de M e jo ra m ie n to del P ro fe so ra d o P R O M F .P / 1 033/11/1535
IS B N : 978-607-32-0945-8
IS B N c-book: 978-607-32-0946-5
IS B N e-chapter: 978-607-32-0947-2
IS B N : 978-607-8158-28-7 ( U N I S O N )
Impreso en M xico. Prinicd in Mxico.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 - 1 4 13 12 11
PEARSON
w w w .p e a r s o n e d u c a c io n .n e t
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ISBN: 978-607-32-0945-8
Contenido
P re fa c io
XI
El Proceso de Bioseparacin
5
5
5
9
9
9
15
20
21
22
22
23
25
26
28
Sntesis d el B io p ro ce so
2.1 Introduccin....................................................................................
2.2 Fundam entos.................................................................................
2.2.1 Enfoque de D is e o .............................................................
2.2.2 Consideraciones Tcnicas de D is e o ................................
2.3 Equipo............................................................................................
2.3.1 R ecuperacin.....................................................................
2.3.2 Concentracin ..................................................................
2.3.3 Purificacin........................................................................
2.3.4 A cab ad o..............................................................................
31
31
31
32
32
35
35
36
36
36
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6
7
CONTENIDO
IV
2.4. D is e o ............................................................................................
2.4.1. Sntesis del Bioproceso.......................................................
2.4.2. Anlisis y Evaluacin del Bioproceso................................
2.5. S u m a rio .........................................................................................
2.6. Problem as......................................................................................
2.7. B ib lio g ra fa ....................................................................................
II
36
36
43
56
57
62
63
3. F iltra c i n
67
3.1. Introduccin.................................................................................... 67
3.2. Fundam entos................................................................................. 67
3.2.1. La Filtracin como Parte de los Sistemas de B S L ............ 68
3.2.2. Pretratamiento de Caldos para B S L ................................ 70
3.2.3. Teora de la Filtracin C onvencional................................ 73
3.2.4. Teora de Filtracin de Lecho P r o fu n d o ..........................
74
3.3. Equipo de F iltra c i n .....................................................................
75
3.3.1. Filtros por Lotes a P r e s i n ..............................................
76
3.3.2. Filtros Continuos al V a c o .................................................
76
3.3.3. Filtros de Lecho P ro fu n d o .................................................
77
3.4. Diseo de Equipo de F iltra c i n .................................................... 78
3.4.1. Filtracin por L o t e s .......................................................... 79
3.4.2. Filtracin Continua .......................................................... 92
3.4.3. Filtracin de Lecho P ro fu n d o ............................................ 98
3.4.4. Sistemas Expertos en Filtracin........................................... 100
3.5. S u m a rio ............................................................................................ 100
3.6. Problem as......................................................................................... 101
3.7. B ib lio g ra fa ...................................................................................... 108
4. C e n trifu g a ci n
111
4.1. Introduccin...................................................................................... 111
4.2. Fundamentos de la C en trifu ga ci n ................................................. 112
4.2.1. Ley de S to k es........................................................................112
4.2.2. Sedimentacin por Accin de la G ra ved a d ..........................114
4.2.3. Sedimentacin C e n trfu g a ....................................................115
4.2.4. Factor G ..............................................................................119
4.3. Equipo de C en trifu ga ci n ............................................................... 120
4.3.1. Equipos de Sedimentacin C e n tr fu g a ................................120
4.3.2. Equipos de Filtracin C e n trfu ga ........................................ 126
4.4. Diseo de Equipo de C en trifu ga ci n .............................................. 126
4.4.1. Diseo de Centrfugas T u b u la re s ........................................ 127
4.4.2. Centrfuga de D is c o s ............................................................ 135
4.4.3. E scalam iento........................................................................140
4.4.4. Filtracin Centrfuga............................................................ 144
4.5. S u m a rio ............................................................................................ 147
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CONTENIDO
157
5.3.2.
5.3.3.
Microfluid7a d o r ..................................................................178
III
6. E x tra c c i n
205
209
6.2.4.
6.4.3.
6.4.4.
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CONTENIDO
VI
7. A d s o rc i n
275
7.1. Introduccin...................................................................................... 275
7.2. Fundam entos................................................................................... 276
7.2.1. Tipos de Adsorcin: InteraccinSoluto-Adsorbente . . . . 277
7.2.2. Tipos de A d s o rb e n te s ......................................................... 277
7.2.3. Relaciones de E q u ilib rio ...................................................... 281
7.2.4. Cintica de la Adsorcin ...................................................... 286
7.3. Equipos de A d s o r c i n ..................................................................... 294
7.4. Diseo de A d sorbed orcs.................................................................. 295
7.4.1. Adsorbedorcs T ip o Tanque Agitado por L o te s .....................295
7.4.2. Adsorbedores T ip o Tanque Agitado C on tin u o.....................310
7.4.3. Adsorcin en Lecho F i j o ...................................................... 318
7.5. S u m a rio ............................................................................................349
7.6. Problem as.........................................................................................350
7.7. B ib lio g ra fa ...................................................................................... 356
TV
Purificacin delProducto
359
8. C ro m a to g ra fa p o r E lu cin
363
8.1. Introduccin...................................................................................... 363
8.2. Fundam entos................................................................................... 365
8.2.1. Tipos de Cromatografa Lquida: Principio de Separacin 365
8.2.2. M atrices................................................................................ 366
8.2.3. Tipo de Cromatografa por Presinde O peracin ............... 370
8.2.4. Relaciones de E q u ilib rio ...................................................... 371
8.2.5. Cintica de la Adsorcin...................................................... 371
8.3. Equipos Cromatogrficos.................................................................. 371
8.4. Diseo de Columnas Cromatogrficas..............................................372
8.4.1. Teora de Cromatografa L in e a l...........................................373
8.4.2. Modelos lin e a le s .................................................................. 373
8.4.3. Evaluacin del Comportamiento de las Columnas: Resolu
cin, Pureza y R en dim ien to.................................................396
8.4.4. Escalamiento y O p tim iza ci n ..............................................402
8.5. S u m a rio ............................................................................................411
8.6. Problem as.........................................................................................412
8.7. B ib lio g ra fa ......................................................................................419
9. P r e c ip ita c i n
421
9.1. Introduccin......................................................................................421
9.2. Fu ndam entos................................................................................... 422
9.2.1. Precipitacin por Disminucinde laSolubilidad................... 423
9.2.2. Precipitacin de Protenas porDesnaturalizacin Selectiva 437
9.2.3. Precipitacin por Afinidad....................................................441
9.3. Equipo de P rec ip ita c i n ..................................................................443
9.4. Diseo de Precipitado r e s .................................................................. 444
http://www.fullengineeringbook.net 8 of 703.
CONTENIDO
vil
9.4.1.
9.4.2.
Mtodos de D is e o ...............................................................449
461
513
...............................................................532
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CONTENIDO
V I II
V
12.
Operaciones de Acabado
547
C ris ta liza c i n
551
12.1. Introduccin......................................................................................551
12.2. Fundam entos................................................................................... 553
12.2.1. Tipos de C r is ta le s ............................................................... 553
12.2.2. Pureza de los Cristales......................................................... 554
12.2.3. Equilibrio: Solubilidad y Sobresatu racin ..........................554
12.2.4. Seleccin del Modo de O p era cin ........................................ 559
12.2.5. Cintica de la Cristalizacin.................................................560
12.2.6. Distribucin de Tamao en Poblacionesde Cristales . . . 565
12.3. Equipos de C ris ta liza c i n ............................................................... 568
12.3.1. Cristalizadores por Lotes ................................................... 568
12.3.2. Cristalizadores C o n tin u o s................................................... 568
12.4. Diseo de C rista liza d o res............................................................... 570
12.4.1. Cristalizadores por Lotes ................................................... 571
12.4.2. Cristalizador C ontinuo......................................................... 582
12.4.3. Cristalizadores Continuos con Remocin Selectiva . . . . 595
12.4.4. Balances de Masa y Energa en Cristalizadores Continuos 597
12.5. S u m a rio ............................................................................................611
12.6. Problem as.........................................................................................612
12.7. B ib lio g ra fa ......................................................................................615
13.Secado
617
13.1. Introduccin......................................................................................617
13.2. Fundam entos................................................................................... 617
13.2.1. Equilibrio y Propiedades T r m ic a s ..................................... 618
13.2.2. Mtodos de S ecado...............................................................627
13.2.3. Velocidad de Secado: transferenciade calor y masa . . . . 628
13.2.4. Efectos Colaterales del Secado ...........................................628
13.3. Equipos de S e c a d o .......................................................................... 630
13.3.1. Secadores A d ia b tic o s ......................................................... 630
13.3.2. Secadores no A d ia b tic o s ................................................... 632
13.4. Diseo de S e c a d o re s ....................................................................... 634
13.4.1. Diseo de Secadores Adiabticos: Calorconvectivo . . . . 635
13.4.2. Diseo de Secadores no Adiabticos: Calor conductivo . . 651
13.5. S u m a rio ............................................................................................653
13.6. Problem as.........................................................................................655
13.7. B ib lio g ra fa ......................................................................................657
VI
659
14. A n lisis d e l B io p ro c e s o
663
14.1. Introduccin......................................................................................663
14.2. Fundam entos................................................................................... 663
http://www.fullengineeringbook.net 10 of 703.
CONTENIDO
14.3.
14.4.
14.5.
14.6.
14.7.
IX
n d ic e a lfa b tic o
682
http://www.fullengineeringbook.net 11 of 703.
http://www.fullengineeringbook.net 12 of 703.
Prefacio
Actualmente, es impresionante el impacto que tiene la biotecnologa en diver
sas reas, particularmente en la diversificacin y optimizacin de los bioproccsos
para la produccin de alimentos y medicamentos, lo cual permite incrementar
nuestra capacidad para cubrir dos de las necesidades humanas bsicas.
Una parte importante de los bioproccsos, tanto desde el punto de vista
econmico como del tcnico, la constituye las operaciones de bioseparacin nece
sarias para procesar los caldos biolgicos y obtener los productos de acuerdo con
las especificaciones requeridas.
La motivacin para realizar este trabajo se deriva de nuestro convencimiento
de la importancia de la enseanza c investigacin de los principios bsicos y
las aplicaciones de las operaciones de bioseparacin, para poder complementar
los esfuerzos que se realizan en otros campos de estudio de los bioprocesos.
En este sentido, es nuestra intencin aportar un documento que contribuya a
sistematizar y ampliar la enseanza de las bioseparaciones.
Este libro est escrito para servir de introduccin al estudio de las biosepa
raciones, puede ser utilizado por alumnos de los ltimos semestres de carreras
de biotecnologa, qumica de alimentos, ingeniera bioqumica, ingeniera sani
taria, ingeniera en alimentos, ingeniera qumica o bien en los primeros cursos
de programas de posgrado en el rea de biotecnologa o reas afines.
Este trabajo se divide en seis partes y 14 captulos. La primera parte es una
introduccin a los procesos de bioseparacin y a los aspectos principales de la
seleccin de las operaciones que los integran. En las siguientes cuatro partes:
Recuperacin del producto, Concentracin, Purificacin y Acabado se abordan
las principales operaciones de bioseparacin siguiendo una secuencia tpica de un
bioproceso, tratando con ello de conservar mi enfoque unitario ms que describir
procesos particulares. La ltima parte del libro se relaciona con el Diseo del
Bioproceso e integra los aspectos que se revisan en las partes previas.
En cada captulo dedicado a una operacin determinada, se presentan los
fundamentos de la operacin, los equipos comnmente empleados para realizarla
y los principales mtodos de diseo. En cada seccin se incorporan ejemplos
ilustrativos que se complementan con problemas de final de captulo.
En esta segunda edicin que aparece 15 aos despus de la primera, hemos
realizado un esfuerzo por mejorar y actualizar el contenido del libro. Tambin
hemos renovado la presentacin de las ecuaciones y figuras del texto.
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PREFACIO
X II
http://www.fullengineeringbook.net 14 of 703.
P a rte I
El Proceso de Bioseparacin
http://www.fullengineeringbook.net 15 of 703.
http://www.fullengineeringbook.net 16 of 703.
3
Esta primera parte del libro destaca la importancia de las bioseparaciones en
los procesos para la obtencin de productos biotecnolgicos o bioprocesos. En el
Captulo 1 se presenta una perspectiva de las operaciones de bioseparacin y sus
principales caractersticas. El Captulo 2 trata sobre los factores y metodologas
que deben tomarse en cuenta para la correcta seleccin de un bioproceso.
http://www.fullengineeringbook.net 17 of 703.
http://www.fullengineeringbook.net 18 of 703.
C aptu lo 1
Introduccin
1.1.1.
Productos Biotecnolgicos
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1.1.2.
Bioprocesos y Bioseparaciones
con
el
permiso
de
vados.
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1.2.
http://www.fullengineeringbook.net 21 of 703.
"V3U7
Primera
Generacin
Segunda
Tercera
- 1975
No recombinantes
Alta
1985 Recombinantes
Baja
Rpido
Bajo
Alto
Rpido
Bajo
Alto
Lento
Alto
Medio
Alto
A lto
Medio
Antibiticos
Aminocidos
Extracclular
e intracelular
Intermedio
SI
Productos
Insulina humana
HC
Intracelular
M ac rom o lc ulas
No
Macromolculax
S
Alta
Baja
Muy alta
Alta
Muy alta
Alta
Bajo
Alto
Alto
1.2.1.
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producto a factores como la temperatura, pH, fuerza inica, enzimas degradativas o sustancias qumicas. La forma fsica, la pureza y los requerimientos de
calidad del producto tambin son factores que deben ser considerados en el
diseo.
El conocimiento tecnolgico de los procesos biotccnolgicos de segunda y ter
cera generacin es limitado. Actualmente es necesario profundizar en los mto
dos de escalamiento de algunas operaciones, ya que generalmente se han adap
tado a escala comercial a partir del laboratorio. En el proceso de escalamiento
es necesario considerar los volmenes y normas del mercado para el producto
(Nuil, 1987).
La biotecnologa ha adoptado con xito operaciones de la ingeniera qumi
ca para la purificacin de productos biotccnolgicos tradicionales. Sin embargo,
existen limitantes para lograr sto cuando se trata de obtener productos carac
tersticos de la segunda y tercera generacin. Existe una necesidad real de desa
rrollar procesos de bioscparacin apropiados, con la participacin de ingenieros,
bioqumicos y bilogos con el propsito de lograr, tanto la pureza deseada del
producto, como la eficiencia y rentabilidad del mismo (Wang, 1988).
1.3.
Operaciones de Bioseparacin
1.3.1.
Esquema R IP P
1.3.2.
Bioproceso Tpico
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10
Mtodo (Operacin)
Fh-opiedad
Recuperacin
Filtracin
Centrifugacin
Rompimiento celular
Extraccin
Adsorcin
Destilacin
Cromatografa
Precipitacin
Ultrafiltracin
smosis inversa
Electroforesis
Dilisis
Electrodilisis
Cristalizacin
Secado
Tamao
Tamao, densidad
Estructura celular
Distribucin entre fases
Sorcin superficial
Presin de vapor
Depende de fase estacionaria
Solubilidad
Tamao molecular
Difuvidad y solubilidad
Carga elctrica y movilidad
Difuvidad
Carga elctrica y movilidad
Punto de fusin o solubilidad
Temperatura, humedad
Concentracin
Purificacin
Acabado
insulina est formada por las cadena peptidicas A y B unidas por puentes disul
furo. La cadena A consta de 21 residuos de aminocidos y la cadena B de 30.
La demanda mundial de iasulina en el 2006 oscil entre 7,000 y 10,000 kg/ao
y se proyecta que alcanzar entre 15,000 y 20,000 kg/ao para el ao 2012. El
mercado mundial de la insulina se estima en $4,000 millones de dlares y las
principales compaas productoras son Novo Nordisk, Eli Lilly y Sanofi Aventis.
(Ainsworth, 2005).
A l menos tres tecnologas han sido desarrolladas para producir insulina
basadas en bioprocesos con clulas recombinantes. El Mtodo de las dos ca
denas fue desarrollado por la compaa Genetech y escalado por Eli Lilly. En
este mtodo las cadenas A y B de la insulina se producen en E. coli por separado
y posteriormente se fusionan para formar la insulina recombinante. El Mtodo
de la proinsulina intracelular ha sido comercializado por Eli Lilly y se basa en
la produccin en E. coli de las cadenas A y B fusionadas formando un complejo
llamado proinsulina que una vez procesado da lugar a la insulina rocombinante.
El Mtodo de la proinsulina extracelular fue desarrollado por Novo Nordisk y
se basa en la produccin en S. cerevisiae de las cadenas A y B fusionadas for
mando un precursor que es excretado por la clula y posteriormente procesado
para obtener insulina recombinante.
M to d o d e la proinsulin a in tra celu la r
En la Figura 1.2 se presentan los principales pasos para la produccin de
insulina por el Mtodo de la proinsulina intracelular. Las clulas de E. coli so
breproducen cuerpos de inclusin (C I) formados por el complejo Trp-LE-Metproinsulina (preproinsulina). Trp-LE-Met es una seal peptdicade 121 residuos
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11
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P i o m su la a - S S O ,
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Iniufcnn
Figura 1.2: Los principales pasos para la produccin de insulina por el "M todo
de la proinsulina intracclular"sc basan en la obtencin de: 1) E. coli por cosecha,
2) CI por rompimiento celular, 3) preproinsulina por solubilizacin de los CI,
4) proinsulina por rompimiento con CNBr, 5) proinsulina-SSO3 por sulfitolisis
oxidativa y 6) insulina por accin enzimtica.
En la Figura 1.3 se presenta el diagrama de flujo del bioproceso para obten
cin de insulina mediante el Mtodo de la proinsulina intracelular . El diagra
ma completo consta de las operaciones previas y las operaciones posteriores o
bioseparaciones.
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12
con
el
permiso
de
dos.
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13
con amonaco, para posteriormente esterilizarse por filtracin en el equipo AF101.Tanto el medio como la mezcla aire amonaco se alimentan al fermentador
V-102. Este fermentador es inoculado mediante un tren de preparacin de inculo de dos pasos (no se muestra). A l final de la fermentacin se obtiene en el
biorreactor un caldo celular de E. coli conteniendo los C I formados por TrpLE-Mct-proinsulina, que es bombeado a un tanque de almacenamiento donde
se mezcla con una solucin del cido etilendiaminotetraactico (E D TA ).
B ioseparac iones
Las bioscparaciones para la produccin de insulina por el mtodo de la proin
sulina intracelular. constan de las etapas de recuperacin, concentracin, purifi
cacin y acabado.
R ec u p e ra c i n
Cosecha celu la r El primer paso de la ruta de bioscparacin consiste en
la recuperacin de las clulas por centrifugacin. El caldo concentrado se enva
a un tanque de almacenamiento V-106 que es la interfase entre las operaciones
previas y las bioscparaciones. Este paso se realiza por medio de 3 centrfugas de
disco operando en paralelo DS-101 (slo se muestra una en el diagrama), bajo el
procedimiento 9 (P-9). El lodo recuperado se diluye con una solucin de EDTA
en buffer T R IS en el tanque de mezclado V-109 para facilitar la separacin de
los CI de los restos celulares.
R o m p im ie n to celu lar y recu p era cin d e C I En este caso, el producto
es intracelular y se requiere el rompimiento de las clulas por medio de homogeneizadores de alta presin IIG-101 para liberar los CI. El homogeneizado
obtenido es centrifugado para recuperar los CI, utilizando las mismas centrfugas
DS-101 bajo el procedimiento 13 (P-13). Los C I se recuperan en la fase pesada
y la mayora de los restos celulares quedan en la fase ligera, debido a la mayor
densidad y tamao de los CI. La fase pesada es mezclada con una solucin del
detergente Triton-XlOO y recentrifugada en las centrfugas DS-101. Este lavado
facilita la separacin de los C I de protenas solubles y restos celulares.
S olu b ilizacin d e C I La suspensin que contiene los CI se transfiere a
un reactor recubierto de vidrio V-103, donde se hace reaccionar con urea y
2-mercaptoetanol. La urea es un agente caotrpico que disuelve las protenas
desnaturalizadas de los CI y el 2-mcrcaptoctanol es un agente que reduce los
enlaces disulfuro. A l final de la reaccin de solubilizacin, se reemplaza la urea y
el 2-mercaptoetanol por agua para inyeccin (A P I) y se concentra la solucin en
la unidad de diafiltracin DF-101. Las partculas finas remanentes se eliminan
en el filtro DE-101 para evitar problemas en los equipos de cromatografa.
R eaccion es
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14
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15
P u rifica ci n
Acabado
1.3.3.
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16
Rendimiento
Las operaciones de bioseparacin para un proceso deben seleccionarse cuida
dosamente con el fin de que el costo sea mnimo. Es decir, si el rendimiento por
paso es bajo y se requieren varias pasos, puede tenerse un bioproceso no viable
econmicamente debido a su an ms bajo rendimiento global. El rendimiento
est dado por:
..
.. . .
cantidad de producto obtenido
Rendimiento = ---- -------- --------- ----------
cantidad de producto aumentado
,,
(1.1)
(1.2)
a)
R G % = (0.6 ) 10 x 100 = 0.006 x 100 = 0.6 %
b)
R G % = (0.3) 10 x 100 = 0.000006 x 100 = 0.0006%
Esto significa que se requiere 1000 voces ms cantidad de materia prima
para lograr la misma masa de producto purificado, cuando el R P desciende de
60 a 30 %. Por otra parte si el rendimiento promedio por paso fuese de 95%, el
rendimiento total alcanzado sera del 60% (Hcam y Anspach, 1990).
E je m p lo 1.2. G r fic a d el re n d im ie n to g lo b a l
Graficar el efecto del rendimiento por paso ( R P %) y el nmero de pasos (n)
sobre el rendimiento global ( R G % ) de mi bioproceso, considerando rendimientos
por paso de 60%, 70%, 80%, 90%, y 95%.
Solucin:
El programa M A T L A B para la solucin del ejemplo se presenta en la Figura
1.4.
La Figura 1.5 muestra como vara el rendimiento global en fimein del
nmero de pasos y el rendimiento por paso. El rendimiento global aumenta
conforme se disminuye el nmero de pasos de procesamiento y se aumenta el
rendimiento por paso.
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1-
s-
17
* e i o s e e a t a c i o n e s <m E d i c i n
* E ] a p lo _ 1 .2 C lc u lo d e l r e n d im ie n to g lo & e l
% NeaOrc d e l a rc h iv o c } a * t o _ 1 . 3
CleT
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* (n t r e d e de detoe
7 8 *
0
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% C alcu lo #
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10
11 - crieRtothicpi:
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14II
16 17
1810
SO
21 22-
t o i i . i i a i i r o n i / i o o i 'i i * i o o ;
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l*i> ie a i u de ic e u K e d o s
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p lo i < n ,r < l;.
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21 1424 2617 /H -
h old on
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p lo c (n , r g ( i , S ) , ' ko >
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> I M e l ( 'N i # e r A d peuoe*, Oonr.ui , le )
20-
, ' K J -9 5 ' |
P u re z a
La pureza necesaria y actividad generalmente estn definidos por agencias
reguladoras como la FD A de acuerdo al uso que se le va a dar al producto. En el
caso de productos para uso parcntal en humanos la pureza requerida es mayor
al 99.5 % generalmente. La pureza est dada por:
Pureza =
cantidad de producto
cantidad total
(1-3)
JV
(1.4)
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18
con
el
permiso
reservados.
Paso
Romp. celular
Precipitacin
Inter, inico
Cromat. gel
P r o te nn
to ta l (g )
E nzim a
to ta l (g )
FYaccin
en zim a x lO 3
12.000
1.800
0.240
0.036
0.080
0.060
0.048
0.036
6.667
33.333
200.000
1000.000
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Paso
Romp. celular
Precipitacin
Inter, inico
Cromat. gel
Prot.
tot. (g)
Enzima
tot. (g)
FVaccin
enz. x lO 3
Factor de
purific.
12.000
1.800
0.240
0.036
0.080
0.060
0.048
0.036
6.667
33.333
200.000
1000.000
1
5
30
150
% Rendimiento
Por etapa Global
100
75
80
75
100
75
60
45
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20
GMP
La obtencin de un producto biotecnolgico debe realizarse conforme a las
prcticas de buena manufactura para la industria (G M P de sus siglas en ingls),
para los mtodos, instalaciones y controles utilizados para la fabricacin, proce
samiento, empaque o manejo de una sustancia, para asegurar que sta cumpla
con los requerimientos de accin segura, y que presente la identidad y fuerza,
y cumpla con las caractersticas de calidad y pureza que pretende o represente
tener (L K Biosciences, 2009).
Todos los procedimientos deben mantenerse dentro de los lmites especifi
cados en los reportes de validacin de la empresa, para poder demostrar la
reproducibilidad de la operacin y la calidad del producto final. En el contexto
de la bioseparaciones, los procesos de validacin comprenden todos los pasos
crticos del proceso, especialmente las operaciones con membranas y las opera
ciones cromatogrficas, particularmente las empleadas para remover bacterias y
virus contaminantes (Kalyanpur, 2002).
In stalacion es
Debido a que la mayora de los bioprocesos requieren control microbiolgico.
las instalaciones deben ser diseadas bajo las normas apropiadas (H V AC ), con
gradientes positivos de presin de aire y entradas seguras para el personal. Las
operaciones secucncialcs deben estar prximas una a la otra (proximidades de
proceso) para minimizar tiempos y costos. En recomendable la segregacin de las
etapas del bioproceso para prevenir la contaminacin. El grado de segregacin
depende del mimero de productos de la planta
1.4.
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21
reservados.
1.5.
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22
1.5.1.
1.5.2.
Diseo Interior
DESCRIPCIN
Anlisis ingenien!: escalabilidad, costos, rendimiento,
facilidad de impleinentacin, robustez
Descripcin y status del banco de clulas
Lista y justificacin
Diagrama y plan de muestreo
Documentacin de corridas y protocolo
Pureza, composicin, justificacin y almacenamiento
Formulacin, justificacin y almacenamiento.
Lista de anlisis de control
Especificaciones, criterios de aceptacin y manual
Demostracin de la aplicabilidad de los mtodos
Rangos aceptables probados y parmetros crticos
Datos de varios lotes de laboratorio
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1.6.
23
Tendencias en Bioseparaciones
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24
( ) P o m rtj e ltp j
C u ilH K lM d i N modn
bm
OHA
tmlpiocnt d*
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25
1.7. SUMARIO
1.7.
Sumario
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26
1.8.
Problemas
Paso
Rompimiento
Ads/Des (1)
Ads/Des (2)
Actividad Total
(Unidades)
6,860
6,800
5,380
Protena Total
F Purif.
A Esp.
Rend.
(m g)
76,200
2,200
267
Vol.
Conc.
Prot.
Act.
Act.
Act.
prot.
total
eir/iin.
total
esp.
mg
U/ml
U/mg
Material
mi
mg/ml
Extracto
1500
12.0
20,000
1er. paso
550
11.0
16,940
2do paso
125
4.5
14,387
Rend.
Etapa
Total
F'nc.
purif.
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27
1.8. PROBLEMAS
pero mucho ms grandes que las protenas. Su peso molecular es de 3,000 kDa
y a un p l = 8.0 su carga externa es muy negativa debido a los grupos fosfatos.
Para la produccin del plsmido se cuenta con los siguientes equipos:
a) Una columna de inercambio catinico.
b) Una columna de intercambio aninico.
c) Una centrfuga para cosechar clulas.
d) Una columna cromatogrfica de SEO que retiene molculas de peso mole
cular menor a 100 kDa.
e) Un equipo de choque osmtico para romper clulas.
f) Una unidad de ultrafiltracin.
Se p id e : Disear un esquema de bioscparacin del plsmido.
1.6 R e n d im ie n to . En una operacin de ultrafiltracin/diafiltracin se
procesan 120 L de una solucin eluda de una columna de Q Sefarosa, que
tiene una concentracin de protena de 1.9 mg/mL. La solucin concentrada
(retenido) ocupa un volumen de 30 L y tiene una concentracin de 7.4 mg/mL.
Se p id e : Calcular el rendimiento de la etapa.
R esp . 97 %
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28
1.9.
Bibliografa
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1.9. BIBLIOGRAFA
29
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30
Wiendahl, M.; Wierling, P.S.; Nielsen, J.; Chrlstcnsen, D.F.; Krarup. J.; Staby, A.; Ilubbuch, J. 2008. Iligh throughput screening for the design and
optimizaron o f chromatographic proccsses - miniaturization, automation
and parallelization o f breakthrough and elution studies. J. Chem. Technol.
Biotechnol. 31, 893-903.
Woodley, J.M.; Bisschops, M.; Straathof A. J.J.; Ottens, M. 2008. Futuro
dircctions for in-situ product rcmoval. J. Chem. Technol. Biotechnol. 86,
121-123.
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C aptu lo 2
Introduccin
2.2.
Fundamentos
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32
2.2.1.
Enfoque de Diseo
%
I
T>
0
TJ
$
C
t
E
5
1
m
3
1
i
a
<*
a
s
8
2.2.2.
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33
2.2. FUNDAMENTOS
O p era cio n es u n itarias d e separacin y su secuencia
Lmite comercial
por operacin simple
Destilacin
Extraccin
Cristalizacin
Adsorcin
Osmosis inversa
Sin lmite
Sin lmite
10-70 x 106 kg/ao
Sin lmite
0.45 x 10fl kg/ao flujo de agua por mdulo,
con varios mdulos por unidad
0.45 x 106 kg/ao deflujo de agua por mdulo,
con varios mdulos por unidad
450 x 106 kg/ao de flujo de agua
0.45 xl0 kg/ao de flujo de agua
1000 kg/ao de producto
0.99 x 10 kg/ao de lquido
100 kg/ao de producto
Ultrafiltracin
Intercambio inico
Electrodilisis
Electroforesis
Cromatografa
Filtracin por gel
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34
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35
2.3. EQUIPO
d)
El ahorro msico anual en sal si en el desarrollo del proceso se logra
adems una disminucin del 10% en la concentracin de buffer de elucin.
Solucin:
a)
Volumen de buffer 820
L
CV
x 2
CV
Ciclo
Ciclo X
Lote
ano
= 328 x 103 L
b)
Masa de sal = 328 x 103 L x 1.0
x 132.14
mol
103 g
= 43,342 kg
c)
Ahorro volumen = 328 x 103 L x
= 32.8 x 103 L
d)
x 132.14
mol
x
= 35,107 kg
103 g
2.3.
Equipo
2.3.1.
Recuperacin
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36
R o m p im ie n to celu lar
En esta etapa los equipos que ms se manejan son los homogeneizadores y
los molinos de perlas. La lisis alcalina en tanques agitados o sistemas tubulares
ha sido considerada en varios desarrollos.
2.3.2.
Concentracin
2.3.3.
Purificacin
2.3.4.
Acabado
2.4.
Diseo
2.4.1.
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37
2.4. DISEO
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38
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39
2.4. DISEO
1
a
Figura 2.2: Diagrama de bloques general de un proceso de bioseparacin con las etapas caractersticas. Puente: Pctridcs et al., 1989.
Reproducida cou el permiso de Americau Instituto o f Chemical Enftiueers. Copyright 1989 AIChE.
Todos loe derechos reservadoe.
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40
http://www.fullengineeringbook.net 54 of 703.
41
2.4. DISEO
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42
http://www.fullengineeringbook.net 56 of 703.
43
2.4. DISEO
2.4.2.
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44
Demanda
V Prd =
[Participacin (% )]
(
kg
\
Productividad |
| [Rendimiento global (% )]
^ L ao J
(2.1)
Tabla 2.2: Influencia de la demanda del mercado en el precio del producto. Datos
de USA.
C om p a a
G EN E N TE C II
Diversas
P ro d u c to
$/dosis
N o . dosis
M asa
t-P A (Activasa)
rBST*
$ 2,000.00
S
0.50
150,000
5 x 108
15 kg
50 ton
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45
2.4. DISEO
3
1
/
0
P 10
U 12
11-
H
is t<
17-
to
if 20 -
21i23
% Di o se pa r a c io n e s d a E d ic i n
V
V r i n c i d a cU l volum an da im a n t a c i n
*
% Noaore aei
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el#
* entrada ae
% tem id a de
datos
producto hg/a&u
da-lOOOj
% P a r t i c i p a c i n d e a e re a d o
pa-3 0 ;
V I n t e r v a l o de re n d im ie n to
r tlO tS i1 0 0 J :
IVi
(V)
<L)
impresin ae resultados
a u if (r a .p id .v p )
c o lo r b a r
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46
Figura 2.4: Solucin Ejemplo 2.2. Variacin del volumen de fermentacin con la
productividad y el rendimiento.
(2.2)
A n lisis d e costos Una vez que ha sido definido el objetivo de la bioseparacin, esto es, que se ha identificado el producto que se desea obtener y se
ha establecido el bioproceso, se deben estimar los costos asociados al mismo. En
la Figura 2.5 se presenta un enfoque para la estimacin de costos basado en el
costo de adquisicin del equipo.
C o s to d e adquisicin d e eq u ip o . Una vez definido el diagrama de flujo
propuesto y el volumen de producto a producir, se dimensionan los equipos, se
estima su costo y se calcula el costo de adquisicin del equipo (P C ). El costo
de adquisicin de un equipo representa el desembolso para adquirirlo y ponerlo
en condiciones de ser utilizado en la actividad. ste incluye la compra y dems
erogaciones necesarias, como fletes, seguros, honorarios de aduana, trmites de
registro en el caso de ser necesario, la construccin de plataformas, el montaje,
la puesta en operacin, los ensayos de puesta en marcha, el entrenamiento del
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47
2.4. DISEO
Bioingenieria
Rendimientos
Materias Primas
Volumen;Masa
- de Producto
Servicios
Costo de Adquisicin
de Equipo
Mano de Obra
Consumibles
Multiplicadores
Costos de Operacin
0*p(<UKtA
Inversin de Capital
Evaluacin
personal, entre otros. Puede incluirse tambin un estimado del costo de equipo
perifrico necesario, no incluido en el diagrama de flujo. Como el P C es la base
de la estimacin del capital, la precisin del clculo depender en gran medida
de este rubro. Las cotizaciones de los fabricantes y los datos de la literatura son
las principales fuentes de informacin.
In versin to ta l d e c a p ita l. A partir del costo total de adquisicin del
equipo, mediante el uso de multiplicadores se estima el monto de la inversin
total de capital ( T C I ). En la Tabla 2.3 se presentan los rubros que integran la
T C I y algunos valores tpicos de los multiplicadores utilizados.
(2.3)
La inversin fija directa est relacionada con los desembolsos para construir
la planta. El capital de trabajo es la inversin adicional necesaria para desa-
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48
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49
2.4. DISEO
R u b ro
C lcu lo
M o n to
C ostos d ire c to s to ta es d e p lan ta ( T P D C )
Adquisicin de equipo
1.00 x 21,400
$21,400
Instalacin de equipo
0.50 x 21,400
10,700
'lobera
0.40 x 21,400
8,560
Instrumentacin
0.35 x 21,400
7,490
Aislamiento
642
0.03 x 21,400
Electricidad
0.15 x 21,400
3,210
Edificios
0.45 x 21.400
9,630
Acondicionamiento
3,210
0.15 x 21,400
Sen-icios
0.50 x 21,400
10,700
TPDC
3.53 x 21,400
75,542
C ostos in d irecto s totales d e p lan ta ( T P I C )
Ingeniera
0.25 x 75,542
18,886
Construccin
0.33 x 75,542
24,929
0.58 x 75,542
43,814
TPIC
C o sto to ta l d e p lan ta (T P C )
TPC
TPD C + TPIC
119,356
O tras in versiones { A C )
Consultoras
0.05 x 119,356
5,968
Contingencias
0.10 x 119,356
11,936
17,904
0.15 x 119,356
AC
In versin fija d ire c ta ( D F C )
$137,260
DFC
T P C -f A C
Utilizando la ecuacin (2.3) se tiene:
T C I = $137.260 + $3,294 + $30,654 = $171,208
Dentro de los costos de operacin directos se puede resaltar los costos de las
materias primas que son consumidas directamente en el proceso de produccin
del producto o que son asadas en la recuperacin del mismo, debido a que stas
constituyen la mayor parte de estos costos. Los costos de las materias primas
son ms relevantes en sistemas de produccin basados en procesos biolgicos
que en plantas qumicas convencionales. En los primeros las materias primas
pueden representar del 30 al 80% del costo de produccin, mientras que en los
convencionales slo representan del 10 al 50 % de ese costo (Kalk y Langlykke,
1986).
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50
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51
2.4. DISEO
Utilidad bruta
Ingresos
x 100
(2.4)
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52
Mercado
Produccin
C o n ce p to
Precio
Dosis
Demanda
Conc. termentador
Rendimiento
Ciclo
Ao
M o n to
$200, 000/kg
1.0 g/dosis
1.555,260 dosis/ao
1.992 g/L
63.5%
84 h
330 das
1.23 x 106 - 4 -
11110
_________________ a n o
i- i 0 4 5
da
ciclo
24 h
ao
84 h
da
__ __
ciclo
Este volumen de 13,045 L/ciclo puede ser manejado por un solo termentador.
Si se considera el volumen de fermentacin como el 70% del volumen total del
termentador, entonces el volumen del termentador seleccionado Vf es:
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53
2.4. DISEO
$16,524
22,756
9.772
19,544
46
82
13,039
12,148
$93.911
M
kg
$311,052
$311,052
93,911
217,141
86,856
130.285
13,039
$143,324
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54
$143,324
$171,208
x 100 = 83.7%
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2.4. DISEO
E va lu acin social
Los bioprocesos pueden contribuir al desarrollo sustentable, pero esto no
ocurre automticamente. Para evaluar la sustentabilidad social de los bioprocesos, recientemente se han desarrollado varios conceptos y una metodologa
novedosa (Geibler et al., 2005). Mediante un enfoque multiperspectivo se han
identificado ocho aspectos que son significativos para realizar esta evaluacin
(Tabla 2.5).
Aspecto
Salud y seguridad
Calidad de las
condiciones de trabajo
Empleo
Educacin y entrenamiento
Manejo del conocimiento
Potencial de innovacin
Aceptacin y beneficio
social del producto
Dilogo social
Indicadores
Aplicacin de la tecnologa
Desarrollo tecnolgico
- Grupos de riesgo
- Riesgo esperado
- Factores de riesgo
- Sustancias txicas
- Pruebas en voluntarios
- Mediciones de salud
- Tiempo de trabajo
- Tiempo de trabajo esperado
- Participacin de mujeres - Participacin esperada
- Condiciones de trabajo
- Medidas para mejorar stas
- Estabilidad
- Estabilidad esperada
- Regiones de creacin
- Regiones posibles
- Continuidad
- Efecto en el mercado laboral
- reas de entrenamiento
- Planeacin
- Manejo de recursos
- Necesidades
- Calidad del intercambio
- Planeacin
- Sistemas de informacin
- Planeacin
- Potencial comercial
- Grado proyectado
- Contribucin cientfica
- Penetracin de mercado
- Patentes
- Nmero y tipos
- Participacin de clientes
- Aceptacin del producto
- Uso de Ing. Gentica
- Planeacin
- Contribucin
- Beneficio social
- Reportes voluntarios
- Canales de informacin
- Comunicacin planeada
- Comunidad local
- Participacin poltica
- Promocin del dilogo
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56
Los aspectos que se consideran son: salud y seguridad, calidad de las condi
ciones de trabajo, empleo, educacin y entrenamiento, manejo del conocimiento,
potencial de innovacin, aceptacin y beneficio social del producto, y dilogo
social. Para cada aspecto se han identificado 8 indicadores (en la Tabla 2.5 slo
aparecen algunos de stos) que cubren dos niveles de evaluacin: a. desarrollo
tecnolgico y b. aplicacin de la tecnologa. Esta distincin se ha hecho debido a
que las condiciones en que se desarrolla un bioproceso pueden ser muy diferentes
a las condiciones de su aplicacin. A cada indicador se le asigna una puntuacin
mxima de 3 puntos, de tal manera que cada nivel de evaluacin puede alcanzar
una puntuacin mxima de 96 puntos (8 aspectos x 4 indicadores x 3 puntos).
Este mtodo sencillo permite evaluar la sustentabilidad social de un bioproceso
y puede ser adaptado a diferentes contextos.
2.5.
Sumario
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57
2.6. PROBLEMAS
2.6.
Problemas
(A ) Mercado
Produccin
(B ) Costos anuales
Ao 1
Aos 2-10
(C ) Depreciacin
(D ) Inversin fija directa y de arranque
(E ) Capital de trabajo
(F ) ISR
1,000 kg/ao
Miles
$34,877.00
$31,525.00
$2,766.00
$30,468.00
$2,742.00
45%
Se p id e estim ar:
a) El precio de venta para obtener un retorno sobre la inversin { R O I ) del
40%.
b) El periodo de retomo.
R esp . a) $54.000/kg
2.3.C o m p a ra ci n d e esquem as d e b iop rocesos. Una protena puede ser
purificada por afinidad, mediante los siguientes 2 enfoques:
a) La protena se produce fusionada a una seal pcptdica y a una cola
que permiten que la protena sea excretada al medio de cultivo y pueda ser
eficientemente purificada por afinidad. Despus de la purificacin la protena
requiere de un paso enzimtico para eliminar la cola.
b) La protena se produce en forma convencional y se purifica mediante
afinidad con anticuerpos monoclonalcs como ligandos.
Se p id e: Desarrollar y comparar los diagramas de flujo de los dos enfoques.
http://www.fullengineeringbook.net 71 of 703.
58
http://www.fullengineeringbook.net 72 of 703.
59
2.6. PROBLEMAS
C a n tid a d p o r litro
1.0 g
1,000 unidades
2-0 g
3.0 g
10-0 g
C orrien tes (n o o rd en a d a s)
0.0
0.0
0.0
0.0
9,800 8 x 105 9 x 106 1 x 106
18.5
500.0
560.0
625.0
1.2
0.0
0.0
0.0
8.0
5.0
5.0
5.0
5.0
0.8
1800.0
90.0
1.0
1.3
7.0
7.0
4.0
6.0
6.0
0.0
500
1.0
1.5
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60
Se p id e:
a) Est ablecer la secuencia de las bioseparaciones( 1-5) y especificar la com
posicin de corrientes (A -D ) del bioproceso y razonar su respuesta.
b) Si la solucin final de protena M X debe estar a un pH =7.4, se requieren
bioseparaciones adicionales?.
2.8.
Secuencia d e b ioscparacin d e un a n tgen o . Un antgeno de su
perficie de peso molecular de 100 kDa de un virus es producido en im cultivo
de clulas de ratn recombinantes. A l final de la ferment acin el caldo de cul
tivo contiene 107clulas/cm3 y 500 /zg/cm3 de la protena de inters. El caldo
contiene adems, aproximadamente 900 /ig/cm3 de protenas contaminantes (no
consumidas como nutrientes o liberadas en la lisis de algunas clulas) y varios
compuestos de bajo peso molecular como aminocidos, vitaminas y sales. La
mayora de las protenas contaminantes tienen un peso molecular mayor a 50
kl)a. El producto requiere un alto grado de pureza dado que es para uso humano
en forma inyectable.
En el bioproceso se utilizan las siguientes bioseparaciones unitarias:
a) Una microfiltracin (dimetro de poro 0.2 /mi)
b) Una columna de intercambio catinico que se opera con un gradiente de
elucin de pH con bufer de acetatos.
c) Una columna cromatogrfica de SEC de rango entre 50 y 150 kD a
d) Una ultrafiltracin de tamao de corte de 10 kD a
e) Una columna de intercambio aninico que se eluye con un gradiente salino
de NaCl.
f ) Una unidad de diafiltracin para intercambio de buffers.
g ) Una columna de slica gcl para adsorcin de D N A que es altamente selec
tiva
h) Uno de los equipos se utiliza ms de una vez.
Los datos de control de calidad del bioproceso sobre la actividad especfica y
la concentracin del producto, as como la concentracin de DNA contaminante,
se presentan en la siguiente tabla:
P ro d u c to
DNA
Faso
/ig/cm 3
/ig//zg total
500
0.36
5,000
0.35
ND
9,000
0.50
ND
4
5
9,000
0.50
ND
8,000
0.95
1,000
> 0 .9 9
0 .1 <
800
> 0 .9 9
0 .1 <
3,000
> 0 .9 9
0 .1 <
Pg/m g
ND
Operacin
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61
2.6. PROBLEMAS
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62
2.7.
Bibliografa
http://www.fullengineeringbook.net 76 of 703.
P a rte I I
http://www.fullengineeringbook.net 77 of 703.
http://www.fullengineeringbook.net 78 of 703.
65
En esta Parte II del libro se revisan las operaciones de remocin de insolubles
y de ruptura celular que son utilizadas en las primeras etapas de los esquemas
de bioseparacin de acuerdo a las tres primeras reglas heursticas de la seleccin
de un bioproceso. Estas operaciones presentan retos importantes debido a que
deben ser ejecutadas de manera expedita para minimizar prdidas y cumplir
con las normas requeridas (Roush y Lu, 2008).
En la remocin de insolubles de un caldo pueden ser utilizados diversas
tipos de equipos. La seleccin depende de varios factores particularmente del
tipo de material a tratar, as como de la disponibilidad, eficiencia y costo de
los equipos. Los principales componentes insolubles que se consideran en esta
parte son clulas enteras, restos celulares, precipitados y cuerpos de inclusin.
Las operaciones tpicas de remocin de insolubles son: a) la filtracin que es
muy utilizada para la separacin de hongos filamentosos y en la clarificacin
de caldos y b ) la centrifugacin que es empleada en la separacin de levaduras,
bacterias y clulas de mamferos. Estas operaciones se tratan en los Captulos 3
y 4, respectivamente.
Cuando el producto de inters es intracelular despus que las clulas han
sido separadas del caldo es necesario romperlas. En el Captulo 5 se presentan
los fundamentos de la ruptura celular, los principales equipos que se emplean
en esta operacin a nivel industrial y las metodologas para su diseo.
http://www.fullengineeringbook.net 79 of 703.
http://www.fullengineeringbook.net 80 of 703.
C aptu lo 3
Filtracin
3.1.
Introduccin
3.2.
Fundamentos
La filtracin forma parte de un conjunto de operaciones llamadas Bioseparaciones Slido-Lquido (BSL). Para llevar a cabo un proceso de BSL generalmente
es necesario seleccionar entre ma operacin de filtracin y una operacin de sedi-
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68
CAPTULO 3. FILTRACIN
3.2.1.
http://www.fullengineeringbook.net 82 of 703.
69
3.2. FUNDAMENTOS
disminuir el volumen a manejar, lo que puede reducir los costos del proceso glo
bal de separacin slido-lquido. La mayor parte de los slidos es obtenida en la
etapa de separacin. Los slidos recuperados pueden requerir un postratamiento
de lavado o secado de acuerdo con los requerimientos del proceso.
En el diseo y seleccin del bioproceso de BSL es necesario considerar varios
factores de orden tcnico que deben conjuntarse para una adecuada decisin. En
la Tabla 3.1 se presentan algunos de estos factores agrupados de acuerdo a los
requerimientos del proceso, las propiedades del caldo y los equipos disponibles.
Propiedades
del Caldo
Caractersticas
del Equipo
Flujo
Intermitente o continuo
& Separacin
Postrat amiento
Esterilidad
Tamao de partcula
Densidad
Vise o idad
Tiem po sedimentacin
% Slidos
T ip o de torta
Espumeo
Toxicidad
Labilidad
CapaciTiwI
Intermitente o continuo
Tamao de partcula
Concentracin mxima
Capacidad de lavado
Esterilidad
Claridad de la descarga
En general, todos los sistemas mecnicos de BSL estn basados en dos prin
cipios que dan origen a las operaciones de sedimentacin y filtracin (Svarovsky,
2000). En el proceso de sedimentacin la separacin se basa en una diferencia de
densidad entre la fase slida y la fase lquida Entre mayor sea esta diferencia la
separacin es ms fcil. Cuando sto no ocurre, la diferencia puede ser aumenta
http://www.fullengineeringbook.net 83 of 703.
70
CAPTULO 3. FILTRACIN
3.2.2.
Las propiedades de los caldos sujetos a BSL pueden ser mejoradas por medio
de pretratamicntos fsicos, qumicos o biolgicos con el objeto de facilitar estas
operaciones. A continuacin se describen tres tipos de pretratamientos comn
mente empleados en caldos biolgicos.
P re tra ta m ie n to t rm ic o
El calentamiento de los caldos permite reducir su viscosidad, su volumen y
romper estructuras gelatinosas que dificultan las operaciones posteriores. En el
http://www.fullengineeringbook.net 84 of 703.
71
3.2. FUNDAMENTOS
http://www.fullengineeringbook.net 85 of 703.
72
CAPTULO 3. FILTRACIN
Las A F ms utilizadas son las tierras diatomeas y las perlitas (Rees. 1990).
Las tierras diatomeas son restos de esqueletos de pequeas plantas acuticas
prehistricas que se obtienen de depsitos naturales. Las perlitas se obtienen de
vidrios volcnicos que contienen de 2 a 5% de agua, que permite romperlos por
accin trmica o de presin, formando un polvo con caractersticas apropiadas
como AF.
Con el uso de las A F la filtracin se convierte en una operacin de tres pasos:
1. Primero se forma una precubierta de A F sobre el medio filtrante haciendo
reciclar sobre ste una lechada de AF.2
3
2. Una vez formada la procubierta se inicia la alimentacin del caldo a filtrar,
al cual se le agrega continuamente una dosis de AF. Esto permite que las
caractersticas de la superficie de filtracin se mantengan uniformes.
3. A l final del ciclo la precubierta de A F debe ser removida.
La precubierta de A F permite retardar el taponamiento del filtro, facilita
su limpieza, disminuye la cada de presin y produce un filtrado de calidad
uniforme. La adicin continua de A F al caldo es uno de los mtodos ms efectivos
para minimizar los costos de filtracin. La dosis de A F que es necesario agregar
continuamente es funcin directa de la concentracin y compresibilidad de los
slidos del caldo. Asimismo, entre ms rpido se desee efectuar la filtracin,
la dosis necesaria es mayor, ya que para aumentar la velocidad de filtracin
se requiere un mayor gradiente de presin, lo que hace necesario aumentar la
incompresibilidad y porosidad del material slido.
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73
3.2. FUNDAMENTOS
3.2.3.
kAP
(3.1)
&
donde l *:
v : Velocidad superficial de lquido (flujo volumtrico por rea de filtracin).
F : F u e rza .
M : M asa.
L: L o n g it u d .
t:
T ie m p o .
: T e m p e r a t u r a .
L a s u n id a d e s b s ic a s e m p le a d a s e n la m a y o r p a r t e d e l te x to c o r r e s p o n d e n a la s d e l S is te m a
In te rn a c io n a l d e m e d id a s ( S I ) .
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74
CAPTULO 3. FILTRACIN
1 dV
V
(3.2)
di
AP
p.R
dt
(3.3)
R Rt + Rrn
(3.4)
I A
di
AP
n (R t + R,n)
(3.5)
Las ecuaciones (3.3) y (3.5) slo pueden ser aplicadas a soluciones diluidas
en rgimen laminar, cuando el nmero de Reynolds modificado es menor a 5, o:
sfer
< >
3.2.4.
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75
dC
\aQ
dz
- g ) ] ^
dc
\C
(3-7)
(3-8)
(1 - e ) L 1
(3.9)
donde:
Cc : Concentracin de partculas a la entrada del filtro
C , : Concentracin de partculas a la salida del filtro
o : Constante de eficiencia del filtro
: Porosidad
L : Profundidad del lecho
dc : Dimetro equivalente del medio
Esta expresin permite calcular la fraccin de partculas que permanece
en suspensin a la salida del filtro. Este valor depende dc las caractersticas
geomtricas del lecho, incluyendo el tamao y porosidad, as como de la longitud
del lecho. Tambin depende de la naturaleza del flujo, las propiedades fsicas de
las partculas en suspensin, y dc los fuerzas de interaccin entre las partculas
y el medio.
La ecuacin (3.7) en su forma ms sencilla fue formulada por T. Iwasaki
(Cushing y Lawler, 1998) y puede expresarse como:
dC
dz
= -A C
(3.10)
3.3.
Equipo de Filtracin
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76
CAPTULO 3. FILTRACIN
3. Filtros de lecho profundo
n) Modulares, apilados o lenticulares
1) Discos aplilados
2) Cassettes
6) Cpsulas
3.3.1.
En los filtros por lotes a presin la solucin que contiene el slido a separar
es alimentada continuamente al filtro. Una vez que se acumula una determinada
cantidad de slido sobre el medio filtrante, la operacin es interrumpida para
descargar la torta, limpiar el filtro e iniciar un nuevo ciclo. Este tipo de filtros
pueden ser agrupados en dos categoras: a) filtros prensa de marcos y placas y
b) filtros de cmara con elementos filtrantes (hojas, charolas o tubos).
En los filtros por lotes la torta debe ser descargada manualmente, por lo
que este tipo de equipos puede tipificarse como de mano de obra intensiva,
recomendables slo para bajas escalas de produccin.
F iltro s d e m a rcos y placas
Los filtros por lotes de ms amplio uso son los filtros de marcos y placas
(Fig. 3.4). La unidad de filtracin est formada por un marco que contiene dos
placas formando una cmara de filtracin. Los filtros constan de varias de estas
unidades que operan en paralelo produciendo un slido bastante seco. Los filtros
de marcos y placas normalmente operan en contacto con el ambiente y no son
recomendables para cuando se trabaja con sustancias txicas.
F iltro s d e cm a ra con e lem en to s filtra n tes
Los filtros de cmara con elementos filtrantes (Fig. 3.5) toman su nombre
del tipo y orientacin de los elementos filtrantes. Operan en ambientes cerrados,
tienen una relacin de rea/volumen relativamente alta y son utilizados cuando
los volmenes de filtracin son bajos. Los filtros verticales son ms baratos pero
presentan una mayor dificultad para descargar la torta.
3.3.2.
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77
3.3.3.
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78
CAPTULO 3. FILTRACIN
3.4.
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79
3.4.1.
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80
CAPTULO 3. FILTRACIN
(3.11)
donde tu es la cant idad de slidos base seca depositados por unidad de rea y a
es la resistencia especfica de la torta. La ecuacin (3.11) puede ser expresada
en trminos de parmetros ms fcilmente medibles:
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81
R t = ap0 ( ^ )
(3.12)
A AP
(3.13)
*K O +
La ecuacin (3.13) puede escribirse en su forma recproca, e integrarla con
las siguientes condiciones iniciales:
para
t = 0
V = 0
(3.14)
Rm
AP
/I
MS ;
<-5>
Otro caso particular de la filtracin por lotes con cada de presin constante
se produce cuando se desea asegurar una formacin uniforme de la torta evitando
fliyos altos al inicio de una corrida, que inducen la penetracin de slidos sobre
el medio filtrante. En este caso la cada de presin se incrementa gradualmente
hasta alcanzar una cada de presin constante (Fig. 3.9).
Bajo estas condiciones la integracin de la ecuacin (3.13) se efecta en el
rango de cada de presin constante, con las condiciones iniciales
para t = t
V = V
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82
CAPTULO 3. FILTRACIN
(t - t . ) A
( V - V .)
n a p Q (V + V ,)
2AP
u Rm
AP
i V - v a)
vs
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83
V (cm3)
210
300
400
500
600
650
100
200
380
700
978
1215
32.52
env
2A P
?r
2 x 70,000 - i r
nr
32.52
x 140.000
cm
--------2*-------- r = 3.035 x 1011
g
0.0011 x 0.015 2
cmJ
E je m p lo 3.2. E scalam ien to d e la filtra c i n d e levaduras.
En la filtracin de un caldo de levaduras a presin constante se obtuvieron
los datos que se presentan en la Tabla 3.3.
El rea del filtro utilizado fue de 0.28 m 2. La suspensin contiene 1.92 kg/m3
de masa seca y una viscosidad de 0.0029 kg/m-s. La resistencia especfica de la
torta formada es de 4.0 x lO 10 m/kg.
Se p id e d e term in a r:
a) La cada de presin en el filtro, A P.
b) La resistencia del medio filtrante, Rm.
c) El rea de filtracin necesaria para procesar 4,000 L de caldo en 20 min,
utilizando la misma cada de presin.
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84
CAPTULO 3. FILTRACIN
1
2
)
454
7
5-
i BicaeparocsoM* 2<teEdicin
k E;.b?1o_ 3.: m ira c i n de aciinoaicetoa.
k Xoxtore del c h iv o ejeplo_3.1
clear
c l
%Entrada de datos
1 rea (cb2)
af-110;
a1011
12 13 14
1516
17 -
otr i i s j
19 20 21
12 23 24252 62728 29 -
V [ 100:100:600 650):
1 Clcalos
atsv-al t./v;
vsa-v/al:
\ Ajaste de datos con restriccin de la ordenada
FBd3ta{vsa. ,atsv)/sa(voa.'2 );
1 Evaluacin del aodelo
aatsv*peod'vsa;
Clculo da ti
d-atsv-aatsv;
r 2 1 - tw |d/2) / sub latsv - aeaa(atsv)) .*2 );
1 Inpresin de resultados
plot(vsa, atsv, b, ,vsa, aatsv,
0, , 0, 220)
xltfcalfV/A (c a l')
ylabeH'At/V ( s/cb) ' )
tltlet'E je n p lo 3.1*)
pend * nuastr (pend);
tll-uuBnLi (ii|
eccad f y , peodl, 'x 'J i
r2cad f r * 2 \r21Jj
30 -
16X1(4,210,60000)
ie
U-=__
Solucin:
Del anlisis de los datos se desprende que la resistencia del medio es des
preciable, de tal manera que se realiza un ajuste del modelo lineal dado por la
ecuacin (3.14) a los datos. El programa M A T L A B para realizar el ajuste se
presenta en la Figura 3.12.
En la Figura 3.13 se presenta el resultado del programa, la lnea continua es
una recta ajustada.
a) Clculo de la cada de presin en el filtro, A P.
De la pendiente de la grfica se tiene que:
0.0029
2A P
= 329.51
0.0029
m s
nr
x 4.0 x 1010 ^
m
kg
kg
x 4.0 x 1010 P x 1.92 ^
m - 8_______________ kg________ m 3
2A P
kg
x 1.92 ^ x
3
m*
----
kg - m
AP =
2 x 329.51
m2
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= 3.38 x 105
_N_
m2
85
Figura 3.11: Ajuste lineal de los datos de filtracin del Ejemplo 3.1.
20
48
76
120
y (L )
115
365
680
850
1130
s
V Rm
= 456.33
AP
m
0.0029 x Rn
m-s
3.38 x 105
N
m2
s*
N
kg- m
456.33 - x 3.38 x 105
x
?
R m = ---------- O-------------- j ^ --------
0.0029 5 m 8
= 5.31 x 1010 m -1
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86
CAPTULO 3. FILTRACIN
1
6
3"
h
7
8910 -
cleat
CU
% Enerada de datos
1 arco |*21
af* 0 . 28;
t- )4 20 48 76 120);
rsnr:
v-O.001*v;
13
1 415 16
1 718
Clvulua
e t s v a t 't . / v ;
vsa-v/at :
i Ajaste de datos
coef-polyf it (vsa.atav, 1);
t Evaluacin del nodelo
19-
aar v - p n l y v a l | r w f ,v a a ) J
20
C lc u lo da r2
;21 tii3
2425 26 27-
d -a ts v -M tn i
ti * i - suata. 2 ) / su B ttatsv - a e a n ta ts v u . 2 );
\ presin de resultados
plot(vsa, atsv, b **,vsa, m tsv, *- ,0,4,0,2000)
x ate 11'V/A <) )
rlabelCAt/V (/ )')
tltle C E ie a p lo 3 .2 ')
78-
pand nia< * t r ( c o a f ( ) ) :
29 30
3132 33 -
(A ) (20 min)
_____________ \min )
<4000
L>( l)
4000 L
A
+ 456.33
A = 3.0 m 2
87
Figura 3.13: Ajuste lineal de los datos de filtracin del Ejemplo 3.2.
t(s )
9
46
126
240
405
610
860
Datos
V x 104 mJ
Clcu os
A t/ V (s/m)
V/A (m )
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
990.0
2530.0
4620.0
6600.0
8910.0
11183.3
13514.3
0.009
0.018
0.027
0.036
0.045
0.055
0.064
Se p id e estim ar:
a) La resistencia especfica del caldo a.
88
CAPTULO 3. FILTRACIN
b)
El nmero de ciclos del filtro por da, si cada operacin de descarga y
limpieza del filtro tiene ma duracin de 0.5 h y el filtro opera 24 h al da.
Solucin:
a) De acuerdo a la ecuacin (3.14), a partir de los datos es necesario calcular
los grupos A t/ V y V fA . Estos clculos se presentan en las columnas 3 y 4 de
la Tabla 3.4. Mediante una regresin lineal con restriccin de la ordenada en el
origen, es posible obtener la pendiente de los datos ajustados a dicha ecuacin,
(pendiente)(2) ( A P )
PPo
O* ) O9** S)
(
) ( 5)
440
101
..
. N -s \
2 x 10-3
kK \
m
x 10i
~ 9- 7
kg
m'
24 h
tc + 0.5
la resistencia del medio filtrante puede ser despreciada, entonces puede ser uti
lizada la ecuacin (3.15) para obtener:
y rc
\ = _ / _ 1_ \
d tc y te + Q .b )
{t* - 0.5)
\ 2v/ / ( t * + 0.5)2
89
24 h
0.5 h + 0 .5 h
= 24 ciclos
0.063 kg
253 cm 3
12.5 cm
9, 780 s
1.01 kg/cm2
s
Se p id e:
Estimar el nmero de marcos de 430 x 430 x 30 mm y el tiempo de filtracin
para procesar 40 kg/lote de peso seco de producto. Suponer que la bomba de
alimentacin produce una presin a la ent rada del filtro de 0.68 kg/cm2 y que
descarga a la atmsfera.
Solucin:
a) Estimacin de parmetros a partir de datos de laboratorio.
De acuerdo con los datos de laboratorio es necesario utilizar la ecuacin
(3.15) arreglada de la siguiente forma:
tA P A 2
Ha
2P0 ~
IV 2
/iQ
27o
(9,78 s) ( l .O l
(|
(0.063 kg )2
cm
= 1.01 x 109
s cm 2
kg
90
CAPTULO 3. FILTRACIN
Nmero de marcos
Nmero de marcos
29
Area de filtracin
rea de filtracin
t
t
ce)
W2
APA2
01 x 109
s enr
kg
:)
(40 kg)'
= 206 s
f o .68
) x (107,242 cm2)1
\
cm 7
(3.17)
91
cero para una torta incompresible, a 0.8 para una torta altamente compresible
(la correlacin es aceptable para s < 0.6 y A P > 0.2 atm).
La determinacin experimental de s y aJ requiere la realizacin de varias
corridas de filtracin a cada de presin constante a varios niveles. Los datos
pueden ser correlacionados en una grfica lo g (a ) vs lo g(A / }). Entre mayor sea
el valor de s el efecto de la presin sobre la resistencia de la torta es ms severo,
en estos casos es recomendable utilizar ayudas-filtro.
Combinando las ecuaciones (3.14) y (3.17) se puede obtener la ecuacin
para describir la filtracin por lotes de tortas compresibles con cada de presin
constante:
At _( tia'Po \ Y_ , PK
V
\ 2 A P '- > ) A
AP
(3.18)
Corrida
Nm.
AP
atm
Ordenada
Origen s/cm.
Pendiente
s/cm 2
1
2
0.68
26
3.00
1.36
2.04
3.40
12
8
2.00
1.10
3
4
1.60
92
CAPTULO 3. FILTRACIN
Para la primera corrida se tiene:
( 0 001
ai x
1 0 k g x 1QQOgx
m3
cm2
kg
106 cm3
1.0133 x 105
2x
0.68 atm x
_________mi
atm
a , = 4.13 x 1010 g
De igual manera pueden obtenerse los valores de a 2, a 3 y a 4 que aparecen
en la tabla siguiente:
Corrida
Nmero
AP
(atm )
1
2
0.68
3
4
1.36
2.04
3.40
a
(cm/g)
4.13
5.51
6.61
7.58
x lO 10
x l 0 lti
x lO 10
x 10l
Los datos de a y A P para cada una de las corridas pueden ser correlacio
nados de acuerdo con la ecuacin (3.17) en una grfica lo g (A P ) vs lo g (a ), tal
como aparecen en la Figura 3.14. Con la pendiente de la curva se puede estimar
el valor del ndice de compresibilidad:
s = 0.38
3.4.2.
Filtracin Continua
En esta seccin se aborda el diseo de los filtros continuos con tortas com
presibles que es el caso ms comn para las filtraciones de caldos biolgicos a
gran escala. En un filtro continuo (Fig. 3.6) el ciclo de filtracin consta de tres
pasos principales: a) formacin de la torta, b) lavado de la torta y c) descarga
de la to rta Los primeros dos pasos se relacionan con el proceso de filtracin y
el tercero es un aspecto de diseo mecnico. Esta seccin enfatiza lo referente a
los dos primeros pasos.
F orm acin d e la to rta
En los procesos de filtracin por lotes el rea de filtracin es constante y el
espesor de la torta vara con el tiempo de filtrado. En la filtracin continua se
puede suponer que el espesor de la torta es constante y el rea de filtracin vara
con el tiempo.
93
Log AP
Figura 3.14: Solucin grfica del Ejemplo 3.4. Resistencia especfica contra cada
de presin (log-log).
no 'pg \ V
\ 2 A P llv
) A'
(3.19)
Yl =
A
Q
2v R L N
donde
27tR L rea lateral del filtro
(3.20)
94
CAPTULO 3. FILTRACIN
El tiempo que dura cada etapa de filtracin se puede relacionar con el ngulo
de filtracin y la velocidad de giro del tambor, mediante la ecuacin siguiente:
(3.21)
(3.22)
V
i^ 'P o
= paQ:
(3.23)
)
Las ecuaciones (3.22) y (3.23) pueden ser utilizadas para predecir cambios
de la velocidad de filtracin con respecto a cambios de las variables de diseo y
operacin en filtros continuos al vaco.
L avad o d e la to rta
Una vez que se ha formado la torta sobre la superficie del filtro, mediante
un lavado se remueve del soluto retenido en el lquido y en la masa celular de la
torta. Existen diferentes tcnicas de lavado, siendo la ms utilizada la de lavado
por desplazamiento. En esta tcnica el lquido de lavado se aplica directamente
sobre la superficie de la torta.
Las curvas de lavado, donde se grfica la concentracin adimensional de
soluto a la salida de la torta ( C/C q) contra los volmenes de lavado (o el tiempo
de lavado), permiten analizar las operaciones de lavado (Fig. 3.15). En el caso
ideal donde slo existe el desplazamiento hidrulico, nicamente se requiere un
volumen de lavado para recuperar todo el soluto. En la prctica, inicialmente
el lquido de lavado produce un desplazamiento hidrulico del filtrado retenido
por la torta. Si el lavado contina parte del soluto contenido en el ulterior de la
biomasa puede pasar al lquido de lavado mediante mecanismos de transferencia
de masa
En la etapa de lavado la cantidad de solutos que puede ser recuperada de
pende del volumen del lquido de lavado que se emplee. Un factor de diseo es
el tiempo requerido para aplicar el lquido de lavado o tiempo de lavado, el cual
depende de la naturaleza de la torta. Debido a lo anterior el anlisis de la etapa
de lavado se efecta en dos pasos: a) clculo del volumen de lavado en funcin
de la recuperacin de soluto que se especifique y b) clculo del tiempo de lavado
necesario en funcin del tipo de torta.
95
(3.24)
donde:
r
96
CAPTULO 3. FILTRACIN
A A P l~a
di
, V
^ p 0-
(3.25)
A 2A P l ~9
& ~
m 'P o V!
(3.26)
V = 0
V = VL
es el tiempo de lavado re
/ A 2A P 1~*\
L " ( ^PoV f )
(3.27)
97
A P l~ a 1 1/2
2pa,p0t f
(3.28)
tL
L_ oYl
tf
(3.29)
V,
= 2F ^ = 2n/
Vr y j
(3.30)
2AP
= 29
s
cm 2
4>
*/ = 2n N
x 2n
JifiQ.
n
( 1.2
mm
2n x ^ x \mm
60 s
= 9s
98
CAPTULO 3. FILTRACIN
b)
El gasto que puede manejar el filtro puede ser estimado por medio de la
ecuacin (3.22).
Q=
RL
V P^Po )
2tu}>n \
Q - RL
I papo I
V 2A P /
sustituyendo valores:
Q = 150cmx430cm
65
1/2
cm
= 4,520-----= 16.272
(1 - e )"
0.01
( 1 - 0.8) "
entonces,
n = 2.86
Volumen de lavado
Volumen retenido
3.4.3.
Los F L P se alimentan tpicamente por una centrfuga que opera a flujo cons
tante. Conforme el fluido pasa a travs del filtro las part culas son removidas y
el filtro se va agotando, hasta que eventualmente se empieza a detectar y elevar
el nivel de slidos a la salida del filtro. Paralelamente, la cada de presin en
=r| r-
99
V (L/m 2)
0.0
1.0
3.0
4.5
7.0
8.5
11.0
12.0
14.0
16.0
18.0
22.0
F iltr o A
A P (psi)
FTU
0.0
1.0
1.2
1.4
1.6
2.2
3.3
3.9
5.5
5.9
7.8
9.0
0.0
4.8
5.2
5.3
6.0
7.0
7.5
7.6
8.0
8.1
8.2
V (L/m2)
0.0
1.0
3.0
5.5
7.0
9.0
10.5
12.5
14.5
17.5
19.0
F iltr o B
A P (psi)
FTU
0.00
1.00
1.20
1.30
1.40
1.45
1.50
1.60
1.80
1.90
1.95
0.0
4.0
4.5
4.9
5.3
6.3
7.5
10.5
14.5
19.5
25.5
8.3
100
CAPTULO 3. FILTRACIN
Figura 3.17: Curvas de filtracin del Ejemplo 3.7. a) Operacin limitada por la
ruptura y b) Operacin limitada por la cada de presin.
3.4.4.
3.5.
Sumario
101
3.6. PROBLEMAS
3.6.
Problemas
3.1.
E scalam ien to d e filtraci n . En la filtracin a nivel laboratorio de un
caldo para la recuperacin de gentamicina. la solucin present una viscosidad
de 1.2 cP y un contenido de slidos de 5 g/L. El rea de filtracin empleada fue
de 100 cm2 y el gradiente de presin de 1.8 m de agua Los datos de filtracin
son los siguientes:
t (s)
M L)
10
20
0.60
0.78
0.95
30
40
1.10
3.2.
F iltra c i n p or lo tes. Los datos de filtracin de S. griseu a un pH de
3.8 y a 2 atm de presin, se ajustan a una recta que pasa por los puntos {V/A,
A t/ V ) siguientes: (3,70) y (6,180), donde {V/A) est en cm y (A t/ V ) en s/cm.
Se p id e : Calcular el rea de filtracin necesaria para procesar 1000 L de
este caldo en un tiempo de 15 min bajo las mismas condiciones.
R esp. 18 m2
3.3.
F iltro d e placas y m arcos. Se efectuaron pruebas de filtracin con
un filtro prensa de marcos y placas bajo las siguientes condiciones:
Po
10.037 kg/m3
0.001 N - s / m 2
Marcos
430 x 430 x 30 mm
102
CAPTULO 3. FILTRACIN
Datos
Clculos
(V + Vs)/A
{ t - t . ) ] ( V - V a)
(N / m 2)
( 8)
(m 3)
(m )
(s/m3)
0.4
0.7
447
1262
1886
2552
3381
3686
4043
4793
5652
6610
8680
9256
0.04
0.9
0.10
0.16
1.1
1.2
0.22
1.4
0.28
0.30
0.32
0.36
0.40
0.44
0.52
0.54
1.6
4609.3
4484.4
4757.1
5244.8
5642.5
1.1
1.3
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.7
6604.5
6826.5
7274.2
7727.7
8399.0
8587.1
1.8
1.9
2.0
2.2
2.3
Se p id e: Estimar a) a y b) Rm
R esp . a) o = 1.069 x 1011 m/kg; b) Rm = 6.61 x 1010 m -1
3.4. F iltra c i n con A F . Un caldo de actinomicetos adicionado con 5 % de
ayudas-filtro se procesa en un filtro prototipo de 35 cm 2 de rea y a una presin
de 99,990 N/m2, obtenindose los datos siguientes:
t (s)
V x 10 (m 3)
20
9.5
16.5
40
60
120
180
300
420
22.0
35.0
45.0
61.0
74.5
103
3.6. PROBLEMAS
rea
89 cm2
AP
2.6 m de Hg
Po
(s )
v W
10
20
0.500
0.707
30
0.866
Tiem po de filtracin
10
20
271
191
163
138
30
40
104
CAPTULO 3. FILTRACIN
10
20
30
V ol. filtra d o
(L )
0.40
0.55
0.76
0.93
105
3.6. PROBLEMAS
Pez
vL
~Dl
Pep =
vd^
D ab
106
CAPTULO 3. FILTRACIN
P ro p ie d a d
V a lo r
Difusividad del soluto
~d I T ^
Tamao promedio de partcula
dp 5.96 x 10- m
Resistencia especfica de la torta
o- = 1.07 x 1011 m/kg
Porosidad de la torta
e l = 0.24
Resistencia del medio
R m = 6.5 x 101U m -1
Concentracin de slidos secos
p0 = 105.2 kg/nv*
Densidad de los slidos secos
p3 = 2600 kg/m3
Densidad del agua
P//,o = 1000 kg/m3
Viscosidad del agua
p = 0.001 N s/m2
Volumen del lquido en la suspensin
V, = 0.028 ma
filtrada para formar la torta
Se pide:
a) Estimar la razn de lavado n, utilizando la ecuacin (3.24).
b) Calcular el flujo de lavado. Q , utilizando la ecuacin (3.5) y considerando
que en el lavado el flujo se mantiene constante.
c) Estimar la velocidad intersiticial v en el lecho.
d) Estimar la profundidad del lecho, L.
e) Obtener la expresin para la cuna de lavado del sistema ( C/C q vs t)
utilizando el modelo de dispersin.
f ) Graficar la cu n a de lavado del sistema.
g ) Obtener la expresin de la curva de razn de lavado del sistema (r vs n).
h) Graficar la curva de razn de lavado del sistema.
R csp . a) n = 2; b) Q = 3.60 x 10-4 m3/s; c) t> = 3 x 10-3 m/s; d ) L = 2.
98 x 10-3 m; e) P e z 9.94.
f) P ista : Utilizar la instruccin de M A T L A B :
cscO = 0.5 * (1 + c r/ (3.15 * (1 - n )./(2 * n / 0 .5 )));
g ) P ista : Por balance de masa.
n
h)
P is ta : Para obtener una aproximacin de las integrales se puede utilizar
una instruccin como:
107
3.6. PROBLEMAS
Se pide estimar:
a) El incremento de las rpm requeridas, o bien,
b) El incremento del ngulo de formacin de la torta.
Resp. a) 69%
3.16. Uso de A F en un filtro de marcos y placas. Un lodo es filtrado
en un filtro prensa de marcos de 2.54 cm. En el procesamiento de un lote, en
los primeros 10 m in la bomba de alimentacin trabaja a su mxima capacidad.
Durante este periodo la presin se incrementa a 4.0 atm y se obtiene el 25 % del
filtrado total. El resto de la filtracin se realiza en 1.0 h y el tiempo de servicio
del filtro es de 15 min.
Se ha encontrado que si se utilizan ayudas-filtro en capas de 0.16 cm de
espesor, la resistencia de la torta se reduce en un 75 %.
Se pide: Calcular el incremento en la produccin de filtrado (L/min) si
aplicar la ayuda filtro toma 3 min.
Pista: Vf = (8 RmA) / (op0)
Resp. 8%
108
3.7.
CAPTULO 3. FILTRACIN
Bibliografa
Aiba, S.; Humphrey, A.E.; Mills, N.F. 1972. tiochcmiccd Engineering. Acadcmic Press. New York. 355-356.
Andcrson, S.W.; Collins, M.; Muchl, M. 2009. Expanding Disposablc DcpthFilter Applications. GEN. 29, 1-4.
Brown, T .R . 1982. Designing batch pressure filters. Chem. Eng. 89, 58-63.
Choudhury, A.P.R.; Dahlstrom, D.A. 1957. Prediction o f cake-washing results
with continuous filtration equipment. A IC H E , J. 3, 433-438.
Cushing, R.; Lawler, D. 1998. Depth Filtration: Fundamental Investigaron
through Three-Dimeasional Trajee tory Analysis. Enxron. Sci. Technol.
32, 3793-3801.
E PA. 2003. Analytical Method for Turbidity Measurement Method 180.1
Gerstenbcrg, H.; Sitting, W . 1980. Recovery o f fermentation producs. Chem.
Eng. Technol. 52, 19-31.
Holdich, R.G. 2003. Solid-liquid separation equipment sclection and modelling. Minerals Engineering 16, 75-83.
Jornitz, M .W .; Meltzer, T.H. 2008. Filtration and Purific.ation in the Biophannaceutical Industry. Vol 174. 2da Ed. Informa Healthare. New york.
N Y.
Lutz, II.; Blanchard, M.; Abbott, I.; Parampalli, A.; Setiabudi, G.; Cliiruvolu,
V.; Noguchi, M. 2009. Considcrations for scaling-up depth filtration o f
harvested cell culture fluid. Biopharm. 22, 58-63.
Mareek. N. 1980. Optimizing o f performance o f the leaf filters. Filtr. Separa
tion. 17,34-50.
Martin, R.E.; Bouwer, E.J.; Hanna, L.M. 1992. Application ofelean-bed filtrar
tion theory to bacterial deposition in porous media. Envlron. Sel. Technol.
26, 1053-1058.
Moir, D.N. 1982. Selecting batch pressure filters. Chem. Eng. 89, 47-57.
Olivier. J.; Vaxelaire, J.; Vorobiev. E. 2007. Modelling o f Cake Filtration: An
overview. Sep. Sci. Tech., 42, 1667-1700.
Petrides, D.P.; Cooney, C.L.; Evans, L.B. 1989. An intoducction to biochemical process design. En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology.
Shulcr, M .L. (Ed.). AIChE. New York. 351-391.
Rajniak, P.; Tsinontides, S.C.; Pham, D.; Hunke, W .A.; Reynolds, S.D.; Chem,
R.T. 2008. Sterilizing filtration Principies and practico for successful
scale-up to manufacturing. J. Memb. Se. 325, 223-237.
3.7. BIBLIOGRAFA
109
Roes, R.H.; Cain, C.W . 1990. Let Diatomite Enhance Your Filtration. Chem.
Eng. 97, 76-79.
Roush, D.J.; Lu, Y . 2008. Advances in primary recovery: Centrifugation and
mcmbrane tochnology. Biotechnol. Prog. 24. 488-495.
Svarovsky, I,. 2000. Solid-liquid scparations. Butterworth Heincmann. 4th Edition. Woburn Ma.
Tiller, F.M. 1974. Bench-Scale design o f SLS Systems. Chem. Eng. 81, 117-119.
v&n Res, R.; Zydne, A. 2007. Bioprocess membrane technology. J. Memb. Se.
297, 16-50.
C aptu lo 4
Centrifugacin
4.1.
Introduccin
112
4.2.
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
Fundamentos de la Centrifugacin
4.2.1.
Ley de Stokes
Figura 4.1: Factor de friccin para esferas. Fuente: Bird et a i, 1964. Reproducida
con el permiso de R evert S.A. Copyright 1964. Todos los derechos reservados.
113
La Ley de Stokes establece que cuando se aplica una fuerza a una partcula en
un medio continuo sta se acelera ( F = ina), hasta que alcanza una velocidad a
la cual la resistencia a su movimiento iguala a la fuerza aplicada (vip dv/dt = 0).
En una sedimentacin libre la fuerza que acta sobre la partcula es la de la
gravedad, mientras que en una sedimentacin centrfuga la fuerza es la del campo
centrfugo.
Las fuerzas que se oponen al movimiento de las partculas pueden agruparse
en la fue iva de flotacin descrita por el principio de Arqumidcs y la fuerza de
arrastre (resistencia de forma y de friccin) descrita por la Ley de Stokes. De
acuerdo a lo anterior, el balance de fuerzas para una partcula en equilibrio en
un medio continuo se expresa de la siguiente manera (Fig. 4.2):
n d lp a
tt(%p La
+ Indypvoc
donde:
dpi Dimetro de la partcula. \L] .
pp: Densidad de la partcula. [A//L3].
o: Aceleracin. [L/ t2].
pL : Densidad del lquido. [M / L 3].
p: Viscosidad del fluido. [M / L j.
(4.1)
114
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
(4.2)
4.2.2.
(4.4)
115
Solucin:
El balance de fuerzas sobre la partcula est dado por:
\PP9
/ 'ndpPp\
) dt
*<%Pl 9
0 ,
-------------------
4.2.3.
Sedimentacin Centrfuga
18/
(4.5)
donde:
a uPr. Aceleracin centrfuga. [L/t2].
oj:
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
116
d)
La velocidad de sedimentacin puede ser incrementada en mi equipo cen
trfugo aumentando la velocidad de rotacin o la distancia de sedimentacin
(dimetro de la centrfuga).
Para obtener una expresin para describir la sedimentacin en flujo no lar
minar la ecuacin (4.2) puede ser expresada como:
- (=?) (V-)
24 )
dpVocpL I
P
ncPaAp
=
*K f
TrtQaAp
6A K
117
donde:
A: rea caracterstica. [L2].
K : Energa por unidad de volumen. \M/Lt2\.
f : Factor de friccin, [adimcnsional.]
Particularmente, para flujo reptante alrededor de una esfera (Bird et al.,
2002) ,
24
/=
He <0.1
He
24
/ = I J - + .54 7 I
/ =0.44
Re < 6000
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
118
Re
producida con el permiso de Me Graw HUI Inc. Copyright 1986. Todos los derechos reservados.
Solucin:
De acuerdo a la ecuacin (4.5) y a la geometra del sistema, la velocidad de
sedimentacin est dada por:
dr
d?Apu/2r
La expresin anterior puede ser utilizada para el clculo del tiempo de sedi
mentacin integrando entre los lmites:
t = 0
r = Ri
t = t
r = R2
Aplicando la expresin anterior a cada partcula, (al ncleo N y a la mitocondia M ) se pueden obtener las siguientes proporciones:
119
(<$>M
tu
(4 )n
tN
(tjn )
o
(5 n m )
25
Solucin:
Se debe estimar el tiempo que tardan en sedimentar las levaduras que estn
ms apartadas del fondo del tubo, es decir en la superficie del lquido del tubo.
Aplicando la expresin desarrollada en el ejemplo anterior 9e tiene:
18/*
1n ( 2 * \
dApoj*m \ R j
4.2.4.
(t )
x
s~2
2,471s
Factor G
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
120
4.3.
Equipo de Centrifugacin
4.3.1.
Centrfuga tubular
Las Centrfugas Tubulares (C T ) consisten bsicamente de un tubo vertical
esbelto que gira a altas velocidades por la accin de un motor elctrico, o una
turbina de aire o vapor (Fig. 4.6a).
121
122
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
Reproducida con
123
El dimetro de los equipos de cmara mltiple vara de 335 a 615 mm, con
velocidades de rotacin entre 5.000 y 8,400 rpm, produciendo campos entre
5,000 y 9,000 G. respectivamente. Los tipos ms comunes constan de 2 a 6
cmaras. La capacidad de manejo de slidos vara entre 2.5 y 60.0 L dependiendo
del material y el nmero de cmaras. La descarga de slidos y mantenimiento
de estos equipos es ms difcil que el de las centrfugas tubulares, ya que la
centrfuga tiene que ser desmantelada para sacar los slidos. Este tipo de equipo
no permite el lavado de la torta.
124
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
Reproducid con el
permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985. Todos los derechos reservados.
C e n trfu ga d e discos
La centrfuga de discos coasta de un eje vertical sobre el cual se monta un
conjunto de discos en forma de conos truncados, uno sobre otro. El rotor de la
centrfuga provoca el giro tanto de los discos como del tazn de la centrfuga
(Fig. 4.10).
Las centrfugas de discos son las ms utilizadas en BSL. Los discos constan
de bordos internos que permiten mantener pequeas separaciones entre ellos,
del orden de 0.5 a 2.0 mm. El ngulo que forman los conos con la vertical vara
entre 35 y 50 dependiendo de la aplicacin particular. Entre la pila de discos
y el tazn existe un espacio que permite la acumulacin de los slidos.
125
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
126
4.3.2.
4.4.
127
Escalamiento de Centrfugas.
Diseo de Equipo de Filtracin Centrfuga.
4.4.1.
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
128
Tiempo de residencia
En una centrfuga tubular la velocidad del fluido en el sentido axial est
dada por:
Q
A
(4.7)
donde:
Q: Gasto volumtrico. [L 3/t].
A : rea de flujo. [L 2].
v: Velocidad de la partcula en el sentido axial. L/t],
De acuerdo a la Figura 4.12, el rea de flujo es igual a la seccin transversal
de la capa anular de fluido y est dada por:
>1 =
- 7T/e? = n (R l - R 2
x)
129
(4.8)
donde:
jRi :
/ ' - T / '*
<>
donde:
L: Longitud de la centrfuga. [L].
W- Tiem po de residencia de la partcula. [].
La integracin de la ecuacin anterior permite obtener la expresin para el
tiempo de residencia de la partcula siguiente:
(4.10)
d^Ap
u 2r
..jy
18/i
(4.11)
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
130
18/i
Ri
(4.12)
(4.13)
Es ms conveniente expresar la ecuacin (4.13) en trminos de v g dada por
la ecuacin (4.4), para obtener:
(4.14)
La condicin de diseo donde el tiempo de sedimentacin debe ser menor
o igual al tiempo de residencia, puede alcanzarse mediante la igualacin de las
ecuaciones (4.10) y (4.14). Este resultado permite obtener una expresin para
el gasto manejable en una centrfuga tubular para producir un lquido claro o
lograr un 100% de sedimentacin. Esta expresin es la siguiente:
Q = (vg)
(4.15)
Es una
prctica comn en las bioseparaciones slido-lquido, el que los equipos se es
pecifiquen para la remocin del 50% de las partculas de una suspensin de un
tamao dado o tamao de corte. Otra interpretacin del tamao de corte, es la
de especificar el tamao de partcula para el cual todas las partculas mayores
sedimentan en mayor proporcin y todas las menores de ese tamao sedimentan
en menor proporcin.
Si se considera que en la capa anular del lquido de una centrfuga tubular
las partculas del slido se distribuyen uniformemente, stas se encontrarn en
cantidades iguales en subcapas anulares de caldo de igual rea transversal. El
radio R$o que divide la capa anular en dos subcapas de igual volumen puede
obtenerse de la igualdad siguiente:
* { R l - R l ) )L = * (R * 0 - t t ) L
de tal manera que:
(4.16)
131
(4.17)
Rbi) ~
La ecuacin (4.11) debe ser integrada para este caso con lmites nuevos para
expresarla en la forma siguiente:
(4.18)
ln
(4.19)
~ V l*
donde
es el tiempo para lograr un 50 % de sedimentacin.
Combinando las ecuaciones (4.17) y (4.19) se obtiene la expresin para el
tiempo de sedimentacin en trminos de parmetros medibles.
50
ln
(4.20)
V9Uj2
(4.21)
Q
ln
para obtener:
132
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
Qso (2ttg)
(=7*)
E =
(4.23)
donde:
S
0
1
O
<<P
0.001 N -s/ m 2
50 kg/ma
133
Carac. Centrfuga
20.000 rpm
0.022 m
0.011 m
0.2 m
N
Ro
i
L
Se pide:
a) Calcular el flujo manejado en la separacin de clulas.
b) Calcular la relacin de flujos para claridad completa de sobrenadante con
respecto al flujo para 50 % de corte, en la separacin de clulas.
c) Calcular el flujo para separacin completa de los restos celulares.
Solucin:
a)
En el clculo del flujo manejado en la separacin de clulas se supone
que todas las partculas de la suspensin sedimentan, entonces se utilizar la
ecuacin (4.15), para lo cual es necesario calcular primero v g.
Sustituyendo datos en la ecuacin (4.4) se tiene:
( i o - m) 2 x
) x 9 '8 5
> \
m
s |
18 x ^ 0.001
N -s
^ m2 /
o m
cm
2.7 x 10" 8 = 2.7 x 10" 6
s
s
.
vQ =
it
b)
Para el clculo del flujo a un corte del 50 % se utiliza la ecuacin (4.22),
sustituyendo valores se tiene:
134
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
_
cm \
/ 2?r x 20, 000 \ 2 2
.
2 x (2.7 x 10-6 J x tt x ------ ------j s-2 x (20 cm)
Qso
980 5
( 2-2) 2 - ( l . l )2
/ 2 x ( 2.2)2
.
Qm
cm
V 2.22 + 1. 12J .
11.72
= 42.19 f
por lo tanto:
Qbo
42.19
______ D. = 2.91
14.31 f
Tambin puede ser demostrado utilizando las ecuaciones (4.15) y (4.22) que:
Qso = 2Q
c)
Para facilitar los clculos se puede obtener el cociente de los flujos de cada
tipo de caldo empleando la ecuacin (4.15) y obtener:
Sl
Q r _ Hr
Qc
He
donde el subndice R se refiere a los restos celulares y el C a las clulas enteras
135
Qr
X Ve
x l* R
^3.97
Qr
3.97 cm3
Qr
-7TZT
-
S
cm s J
= '89h
4.4.2.
Centrfuga de Discos
136
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
137
(4.25)
L
Esta expresin puede ser integrada dos veces entre los lmites:
Para y = | , vx = 0
a
Para y = , vx = 0
y obtener la expresin:
Vx
[-(?)'
&
(4.26)
*-//
0
A Pa2
(4.27)
8fxL
6/jlL
(4.28)
(4.29)
o bien en trminos del fliyo volumtrico total:
(4.30)
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
138
(4.31)
dr
(4.32)
dt9
por lo tanto:
dt9 =
gdr
(4.33)
v gU2r
dx
3Q
4n 7rra
/ 2y
\ a
139
dy = eos Odr
r R 0 zsen 0
con estas nuevas variables la ecuacin (4.34) se transforma en:
dy
^4-35^
para
la m
x = 0, y =
x - h
__ J
sen 0
v- -
,y 2
obtenindose:
27Tnw 2
- <
(i -/ ? )c o t0
(4.36)
Q = t,sE
(4.37)
donde E para este caso est definida por la expresin dentro del parntesis
cuadrado de la ecuacin (4.36).
(4.38)
donde E est dada por la misma expresin que la de la ecuacin (4.36) (ver
Ejemplo 4.4 inciso b).
E je m p lo 4.5. S ep aracin d e E . c o li m edian te una cen trfu ga de
discos.
Estimar el gasto volumtrico para producir un lquido claro de E. coli en
una centrfuga de discos (Brunner, 1983) bajo las siguientes condiciones:
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
140
D atos C e n trfu g a
radio externo 8.1 cm
radio interno
3.6 cm
72
no.discos
velocidad
8,400 rpm
ngulo
38
D a to s caldo
dimetro celular 0.8 pm
p celular
105 g/L
1.02 g/L
p medio
viscosidad
1.02 x 10~3 kg/m -s
Solucin:
El gasto de la centrfuga de discos puede ser calculado mediante la ecuacin
(4.36). Para aplicar esta ecuacin es necesario calcular primero v g. De acuerdo
a la ecuacin (4.4),
cm
(0.8 x 10~4 c m f x (1.05 - 1.02)
x 980 ^
_______________ 1__________________ <22*_________
18
v*
Kg
102 cm
cm
1.02 x 10"6
Q
Q
4.4.3.
Escalamiento
141
(4.39)
Partcula
Ncleo
Mitocondria
Ribosomas
t (min)
G t (min)
600
15,000
5
5
60
3,000
75,000
100,000
6,000,000
F a ctor sigm a
La expresin para calcular el factor Sigma de cada tipo de centrfuga es carac
terstica de cada geometra particular (Axelsson, 1985). Esta rea caracterstica
o factor E ha sido empleada para escalar equipos con similitud geomtrica. En
la Tabla 4.2 se presentan los rangos de los factores E para diferentes tipos de
centrfugas.
El escalamiento utilizando el factor sigma supone que para una misma sus
pensin, la velocidad de sedimentacin de las partculas es independiente de la
142
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
Centrfuga
Intermitente
Decantadora
Tubular
Discos
M )
20 - 200
150 - 2,500
2,000 - 3,000
400- 120,000
i = (V g h
(4.40)
(4.41)
donde:
pc : Densidad del cuarzo (2.65). [M / L 3].
pp: Densidad de la partcula en suspensin. [ M / I 3].
p L: Densidad del lquido. [M / L 3].
p A: Densidad del agua. [M / L 3].
143
T ip o de
Centrfuga
Tubular
CAmara mltiple
Discos y boquillas
Discos tazn abierto
Discos y boquillas
Discos intermitente
Tazn slido
Decantadora
T ip o de
Centrfuga
Tubular
Cmara mltiple
Discos y boquillas
Discos tazn abierto
Disco* y boquilla*
Discos intermitente
Tazn slido
Decantadora
Caractrsticas de procesamiento
Capacidad
Flujo de la
lavado de
Alimentacin
torta
L/miu
Ninguna
8-120
Ninguna
1.5 - 335
Moderada
38 - 3.780
Ninguna
3.8 - 1,500
Ninguna
U - /
Ninguna
0.38 - 1.500
Ninguna
1.5'-"250
Moderada
3.8 - 1.890
Fuerza g
Mxima
12,000- 16,000
5,000 - 9,000
5,000 - 8,500
5.000 - 7,000
4.0 - 1,o
5,000 - 8,000
500 - 80(1
2,000 - 120
Reproducida con d permiso de M cCraw-Hill Inc. Copyright 1988. Todos los derechos reservados.
144
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
^ 2^1
= 111,000 m:
4.4.4.
Filtracin Centrfuga
Alimentacin
'f
Filtrado
145
(4.42)
(4.44)
dr
(4.45)
(4.46)
A P = 2- ( * 2 - ^ )
t4-47)
1.a ecuacin (4.47) puede ser sustituida en la ecuacin (4.45) para obtener
una expresin del gasto volumtrico en cualquier instante t, obtenindose:
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
146
Q=
'2p l *
(4.48)
papo
Q=
dV_
(4.49)
dt
R rd R r
(4.51)
R t = Ro
t t
Rt = Rt
[a m
2p,,.^(ni - nf) [ U J
(4.52)
147
4.5. SUMARIO
1/2
Rt
Rt
*-()]
512 cm 2 -
l/2
= 48.9 cm
naprRtr
\ \/ R^ \ 2
\2pLu H R > - R * ) J [ U
tJ
1 21n
4.5.
8.6 min
Sumario
148
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
149
4.6. PROBLEMAS
4.6.
Problemas
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
150
iv ) Separacin de los restos celulares del homogeneizado. Este paso debe ser
realizado en menos de 15 h para evitar degradacin del producto.
Se pide establecer:
a) El nmero de centrfugas con capacidad de 400 L/h de homogeneizado
para realizar el paso iv).
b) El tiempo necesario para el paso iv).
c) E l tiempo necesario para realizar el paso i) con el mismo equipo.
d) De que otra forma se puede realizar este proceso.
Resp. a) 2; b) 11.25 h y c) 2.34 h
Fbse
Nombre
Densidad
Viscosidad
Temperatura
Pesada ( A )
Dextrauo T 5000 2%
1144 kg/m3
0.008 kg/m-s
20 C
Rt
R .
Se pide:
a) Desarrollar una expresin para obtener el gradiente de presin generado
por la fase ligera al girar.
b) Desarrollar una expresin para obtener el gradiente de presin generado
por la fase pesada al girar.
c) Desarrollar una expresin para el clculo de la posicin de la interfase
suponiendo que los gradientes anteriores son iguales.
d) Calcular la posicin de la interfase.
R esp . d) 3.76 x 10-2 m
151
4.6. PROBLEMAS
4.8. Escalamiento de una centrifuga tubular. La extraccin lquidolquido del problema anterior se desea escalar utilizando una centrfuga ms
grande donde: R b = 0.06 m. R A 0.066 m, L = 1.5 m y IV = 8,000 rpm.
Partiendo de que cuando se maneja el flujo de 1 x 10" 4 m 3/s en la centrfuga
ms chica se tiene una separacin adecuada de las fases y sea: 1: operacin en
el equipo menor y 2 : operacin en el equipo mayor.
Se pide calcular:
a) ( E s ) i
b)
( R ih
c) ( b )2
d) {Q b ) 2
e) El gasto total que puede manejar la nueva centrfuga
R esp. a) 730 m2; c) 4,782 m2; d) 6.56 x 10~4 m3/s.
152
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
Se pide:
Determinar el tiempo de centrifugacin para lograr una separacin de 1.0
cm entre los dos tipos de partculas.
Resp. 328 s
153
4.6. PROBLEMAS
Ri
Ro
10
Q
conc. celular
dimetro clulas
densidad clulas
viscosidad
densidad del fluido
5 cm
25 cm
5000 rpm
10 L/min
10 g/L
3 /mi
1.03 g/cm *1
1.1 cP
1.01 g/cm 3
A nivel de produccin se requiere procesar 500 L/min del mismo tipo de cal
do. La centrfuga que ser utilizada operar a 3500 rpm y tendr ima geometra
similar a la centrfuga piloto, es decir el mismo nmero de discos y el mismo
ngulo de rotacin. Los radios de los discos, /?o y R i, de la centrfuga grande
sern el doble de los utilizados en la centrfuga de nivel piloto.
Se pide:
Calcular el nmero de centrfugas necesarias a nivel de produccin.
Resp. 13
P ro b le m a 4.18. En el desarrollo de un proceso para producir una pro
tena recombinante en E. coli se cuenta con una centrfuga de discos a nivel
piloto. Durante la cosecha celular la centrfuga puede manejar hasta 200 L/h,
considerando que el dimetro promedio de las clulas es de 1.0 /xm.
La centrfuga tambin puede ser empleada para que una vez rotas las clulas,
se puedan separar los cuerpos de inclusin (que forman las protenas) de los
restos celulares presentes en el caldo. Esto es debido a la gran densidad de los
cuerpos de inclusin de 1.3 g/cm3, no obstante que su dimetro promedio oscila
entre 0.3 y 0.7 /xm.
Se pide:
a) Calcular el rea efectiva de la centrfuga
b) Calcular el flujo que puede manejar la centrfuga para separar los cuerpos
de inclusin.
Establecer las suposiciones empleadas en la solucin.
Resp. a) 2041 m2 y b ) 54 L/h
154
4.7.
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
Bibliografa
4.7. BIBLIOGRAFA
155
C aptu lo 5
Rompimiento de Clulas
5.1.
Introduccin
Ejemplos
Protenas reoombinantes
Enzimas
Plsmidos
Vacunas
Otros
158
secrecin celular del producto de inters. Esto hace necesario contar con tcni
cas de rompimiento celular eficientes y selectivas en la produccin de protena
intr acelular.
La tcnica de rompimiento celular seleccionada determina el tamao de los
desechos resultantes y la influencia que stos tendrn en las operaciones que se
utilicen para su separacin. Asimismo, la tcnica es funcin del tipo de microor
ganismo que contiene al producto de inters, particularmente en relacin a su
estructura externa (Ascnjo, 1990).
En este captulo, en la seccin 5.2 se presentan los fundamentos de la ope
racin de rompimiento. La seccin 5.3 se centra en los equipos de rompimiento
que se utilizan a nivel industrial. El diseo de estos equipos se discute en la
seccin 5.4.
5.2.
Fundamentos
5.2.1.
5.2. FUNDAMENTOS
159
160
5.2.2.
5.2.3.
M to d o s qu m icos
C h o q u e o sm tico El rompimiento de clulas por medio de choque osmtico
se fundamenta en el conocimiento del fenmeno de smosis. Cuando una mem-
161
5.2. FUNDAMENTOS
Tcnica
Principio
Ejemplos
Qumicos
Choque
osmtico
Disolucin
Hpfclica
Ruptura osmtica
de membrana
Desestabilizacin
de la pared celular
por solventes org.
Digestin de la
pared celular
Ruptura de
glbulos rojos
Rompimiento de
levaduras por
tolueno
M. lysodeikticus
tratados con
lisozima
Rompimiento de E. coh
para produccin
de plstnidos
Digestin
enziintica
Mecnicos
TVatamiento
alcalino
Solubilizacin de
membranas por
saponificacin de
lpidos
Molido en
Molinos de
Perlas
Homogeneizacin
Las clulas se
rompen por fuerzas
de corte al pasar
por un orificio
pequeo
TVatamiento de
suspensiones
celulares a
gran escala
TVatamiento de
suspensiones
celulares a
gran escala
162
(5.1)
El potencial qumico externo del agua pura debe incluir un valor de referencia
y una correccin en la presin. El potencial qumico interno involucra un valor de
referencia, la correccin en la presin y una correccin para la concentracin de
la solucin; de tal manera que para ma solucin ideal incompresible, la ecuacin
(5.1) se expresa como:
/flaO + y HiOPe = Mil aO + V lliO P i + TI' ln (l 1)
(5.2)
donde:
P h 2o : Potencial de referencia. [L-atm /m ol].
RT ,
,
RT ,
l n ( l - x i ) = = ------ ( - x i - . . . )
H jO
V\H 30
163
5.2. FUNDAMENTOS
y finalmente:
Pc Pi = Kl'c\
(5.3)
164
M to d o s m ecnicos
En el rompimiento de clulas a gran escala se han preferido los mtodos
mecnicos. Las tcnicas empleadas son: la molienda hmeda en molinos de perlas
agitados a alta velocidad (esfuerzo de corte slido) y la homogeneizacin a alta
presin (esfuerzo de corte lquido) (Bjustrom, 1985; Kula y Schtlttc, 1987).
El equipo que se utiliza en estas tcnicas originalmente fue diseado para
otros usos. El uso del molino de perlas se origin en la industria de la pintura
por la necesidad de obtener mezclas homogneas de los pigmentos constituyentes
de la pintura. El uso del homogeneizador se origin en la industria alimenticia,
particularmente en la homogeneizacin de leche y productos lcteos (obviamente
la ruptura celular no es ma homogeneizacin). Estos equipos han sido adaptados
para utilizarse en la desintegracin celular.
La desintegracin celular no es una tarca fcil si se considera la alta re
sistencia mecnica de las paredes celulares y el tamao tan pequeo de los
microorganismos (1 - 10 /mi). Para poder alcanzar rendimientos altos, esto es,
obtener un grado de desintegracin celular mayor que 90%, con frecuencia se
requieren dos o tres pasos tanto en el homogeneizador como en el molino.
El paso repetido de la suspensin celular a travs de los equipos de rompimien
to produce una distribucin amplia del tamao de los residuos de la pared celu
lar, extendindose hasta por abajo de las 0.3 /mi. En esta operacin es impor
tante controlar el tamao de los desechos celulares debido a que la separacin
slido-lquido posterior depende del tamao de las partculas.
5.2.4.
M to d o s de P e rm e a b iliz a c i n
5.2. FUNDAMENTOS
165
166
S u lta n a to d e Socfco
(S O S )
( m o m e o )
(a ro o m e o )
B ro m u ro d e C o tilb m e t
A /n o m o ( C T A B )
Tutor X
100
( n o t o n c o , pofc d o p e n o )
(c a b o n ic o )
C H it C H A s 'M O V s 8 .
T m w o r lla lo d e S o d io
(tiru o ra c o )
OH
OH
_
> r - N C H ,C H ,S O , Na
OH
167
5.3.
168
5.3.1.
Separador
de perlas v
Motor >
Perlas
rodan d o
Suspensin
celular
169
170
Reproducida con el permiso del American Institute o Chemical Engineer*. Copyright 1987
AlC hE . Todos los derechos reservados.
n D mN
60 x 1000 1 : s
_______
(5.4)
Dm = 2ye2+ ^
donde:
D m: Dimetro promedio de los anillos excntricos, jmm].
e: Dimetro de la flecha del agitador, [mm].
d: Dimetro de los anillos del agitador, [mm].
N : Velocidad angular del agitador, [rpm].
Para el caso de impulsores concntricos, en la ecuacin (5.4) se utiliza direc
tamente el dimetro del impulsor.
Normalmente la velocidad perifrica flucta entre 5 y 15 m/s. Al incremen
tar la velocidad perifrica la fuerza de corte generada se incrementa, y con sta
171
172
173
174
(5.5)
donde:
Vp: Volumen del lecho de perlas. [L 3].
Vc = Vt - Va: Volumen vaco del molino sin perlas.
Vi: Volumen de la cmara de molienda. [L 3].
Va: Volumen del agitador (discos o barras y flecha). [L3].
08
la fraccin vaca est dada por:
F V a c c i^ ^
0-3\V + a2VVe
175
5.3.2.
H o m o g e n e iz a d o r d e A lt a P resi n
176
177
178
5.3.3.
M ic ro flu id iz a d o r
179
Parmetros operacionales
A continuacin se describe el efecto de la temperatura, del tamao de los
restos celulares y de la concentracin celular en el proceso de ruptura utilizando
un microfluidizador.
Temperatura de operacin
180
5.4.
5.4.1.
Los molinos de perlas de alta velocidad pueden ser operados en dos formas:
a) por lotes y b) continua
181
Vm ^
= * (* m - R)V m
(5.6)
- f e
) - "
(5.8)
182
'"(fifrfi) *
producirn rectas de pendiente k y ordenada al origen cero.
En la Figura 5.13 se muestra la liberacin de protena a partir de Sacharomyses ccrcvisiae utilizando un molino Nctzsch LME20 con diferentes tipos de
agitadores. El resultado muestra claramente que la desintegracin celular sigue
una cintica de primer orden independiente del tipo de agitador. Observndose
tambin diferentes valores de k para cada tipo de agitador.
ln( ^ ) =fct
(59)
183
R x 10*
(s)
(kg/kg)
A x 10*
(m ol/m in-kg)
00
0.000
0.000
15
30
45
60
Max.
1.025
2.150
2.525
3.425
0.625
1.150
1.675
2.150
6.700
10.000
Se pide calcular:
a) La constante cintica para la liberacin de protena.
b) La constante cintica para la liberacin de enzima.
Solucin:
Las constantes cinticas pueden ser obtenidas mediante el empleo de las
ecuaciones (5.8) y (5.9). Los clculos necesarios son los siguientes:
T ie m p o (s)
Rm
l n t ___
7 / An T
InU m - J
00
0.0000
0.0000
15
30
45
60
0.1081
0.2421
0.2910
0.4193
0.0979
0.1883
0.2877
0.3870
fc = 6.412 x 10" 3 s -1
Operacin continua
Durante la operacin continua del molino de perlas, la suspensin celular a
tratar es alimentada continuamente al molino en uno de sus extremos y retirada
continuamente en el extremo opuesto.
En el diseo de los molinos de perlas es necesario considerar el grado de
dispersin de los tiempos de residencia de las clulas en el molino. A diferencia
de la operacin por lotes, en una operacin continua el tiempo de residencia
vara para las diferentes clulas de la suspensin, generndose una distribucin
de tiempos de residencia de la poblacin celular. El tiempo de residencia medio
t de la distribucin de tiempos de residencia es diferente al tiempo de residencia
ideal tu dado por:
184
donde:
t i: Tiempo de residencia ideal, [t].
Vxf. Volumen libre del molino. [L3].
F : Flujo alimentado al molino. [L 3/t].
(5.10)
185
CN = 0
0=0
N = \ ,2 ,S ,..N
C\ = N C q
0 >0
CF = 0
J
NC0
N dO
Ci
(5.13)
N I
(5.14)
(5.15)
o en forma integrada:
^ = N 20 e x p (- N 0 )
Co
Siguiendo este procedimiento es posible demostrar que para la etapa N se
tiene que:
186
(5.17)
(1 - O rn&x)
Solucin:
En la Figura 5.15 se presenta un programa M A T L A B para obtener la grfica
de las curvas de respuesta que se muestran en la Figura 5.16.
1
2
I
-
% Ito M fH tc lo a o a Edictos
* > * j M
f | N U
*t
t o ix iu o * n
e ll
1 -
91 -
n*3 14 11f^
tto-[00.0S:JJ>
0 -
< B-l)) ) .
l l l ( ) :
to a
\ IwccotOn de reoultodoo
j -.
t -
rlafecl |
noto on
H -
b o l d 00
9
U-
t l o t ( t c t a . c t c t B l i . 1 0 k . 'tev
hoto on
Bold so
p l o t | t t , ototB|! , IB) , * 0- ' J|
layaM M'H.*1,
lO-tO*.
1- 1.1..|
I -
t-) ;
Figura 5.15: Programa para obtener las curvas de respuesta del Ejemplo 5.3.
Puede observarse en la Figura 5.16 que entre mayor sea el nmero de etapas,
el sistema presenta menor dispersin del pulso.
187
dt
- F R 1 + k ( R m - R 1) ^
(5.18)
donde:
R\: Concentracin de protena liberada en la etapa 1. [M / L 3\.
t: Tiempo de operacin, [t]
k: Constante de velocidad especfica de primer orden. [t_1]
La ecuacin anterior puede ser expresada en funcin de un tiempo adimen
sional dado por:
tF
(5.19)
NVm
y obtener,
dRx
dr
= -fi,+ kV,u
( Rm ~
NF
Rx = 0
(5.20)
188
r = 1
R x = Ri
y obtener:
i = Rm
kVxt
NF
kVM
1+
NF
(5.21)
Rm
kVM \
U rn -R l
N F )
(5.22)
Continuando con este procedimiento puede ser demostrado que para la etapa
N se tiene:
Rm
Rm ~ R n
(5.23)
189
( 2)
t (s)
C(U)
CAt
0.0
25
50
75
11.5
52.2
93.0
107.3
101.7
85.3
65.0
47.5
32.8
143.8
796.3
1815.0
2503.8
2612.5
2337.5
1878.8
1406.3
1003.8
682.5
448.8
286.3
177.5
108.8
65.0
37.5
21.3
16,325
100
125
150
175
200
225
250
275
300
325
350
375
400
425
21.8
14.1
8.8
5.4
3.3
1.9
1.1
0.6
Suma =
<4 )
(5 )
E
0.000
0.18
0.36
0.54
0.72
0.90
1.09
1.27
1.45
1.63
1.81
1.99
2.17
2.35
2.53
2.71
2.89
3.07
0.097
0.442
0.788
0.909
0.861
0.722
0.550
0.402
0.278
0.185
0.119
0.075
0.046
0.028
0.016
0.009
0.005
Se pide:
a)
b)
c)
d)
e)
f)
Solucin:
a)
b)
ii
= 138.24 s
(F)(ECAt)
Vm
Utilizando el mtodo de los trapecios, se obtienen los datos de la columna
(3 ) de la tabla anterior, de tal manera que:
190
Co = m
0 [ =118.1 Unidades
c)
En las columnas (4 ) y (5) de la tabla anterior aparecen los clculos del
tiempo adimensional 0 y la concentracin adimensional E . La Figura 5.17 mues
tra un programa M A T L A B para obtener la cu n a correspondiente.
11
2
1
4
i *
7 9 10
tt
11
*
14
1
11
17
10
1*
10
11
12
1J
14
15
74
17
*
-
19
1
10
J1
1
14
1
14
r
*
-
t9
10 n
41 42
4
lo a La l e ion
4 E jca vlo_S .4 O ctcrnloALla d el o i m i o e etapas eq u iva len tes
% iW un w l i B f i rt p # r U t ,
% Nim I m p V I M rk ivti
% 4 .
e le ; e U a t; c l
4 I m t M i M atoa
V4| 4 l
iw t t.H i
*-S 0l U k
fS O / lM O , 4 U
* - ( 0 *6 ISO 7. 100 1*S 190 17. 200 *26 ISO 276 lOO 176 1*0. . . .
17 400 4 1 ); 4
e ( 0 11.5 U . l *1 .0 107.1 101.7 O i.l tS.O 4 7 . 12.4 2 1 .0 ....
14.1 0 .0 ( . 4 1.1 1.0 1.1 0.4114 0
4 c a io a lo a w c c '.c n x l a o r t ic a o* a ic t n s u c ie n oc
% t t m i i B r e s a n l a
n t* v i
llW l 4
r<V!t l i a | i i | l , r ) ;
0 > (*vM 4 / v<
a-e/eO;
ta ta * t/ tn
4 c a ic a io o cara oe ten er e l tie a e o naxtao
(car. t ) m > ( a > <
;
4 C a lea ln .I naiaa-t ti ila
a p *.
n -l/ ( 1-tataaa) j
n-round m i ;
4 lardearon M t i n l t a a o i
tio titc ta .e .w i
e ia a e iC M b e t a ' i
T la b l(* C < \ tb e ta )11
a ta ((0 ,4 ,0 .l))
a l - a w i a u (a)
K a d - ( 'l i
a l);
M i (2 ,0 .4 ; ncaai
a c ia aa
4 (arrearon ae rectiita o o a raawriaaoo
tetax*(OiO.OC^lt4) i
% Fin t V l p i v y i M
191
=
(1
0m x)
1
(1 - 0.72)
4
e)
La eficiencia de rompimiento
en cada etapa de acuerdo con la ecuacin
(5.21) es:
Eficiencia =
192
5.4.2.
(5.24)
donde:
R: Concentracin de protena liberada (clulas rotas) despus de N pasos.
[M / L 3].
R m: Concentracin mxima de protena que puede ser liberada. [Af/L3].
N : Nmero de pasos a travs de la vlvula del homogeneizador.
k ': Coastante cintica de primer orden. [1/pasos]
La ecuacin anterior puede 9er integrada con las condiciones:
N = 0
R = 0
N = N
R = R
obtenindose la ecuacin:
(sS*)-*'*
(5.25)
(5.26)
193
Microfluidizador
En el caso del microfluidizador la cintica de rompimiento presenta una cierta
dependencia no lineal con el nmero de pasos expresada mediante la ecuacin:
(5.28)
donde 6 es un exponente que vara con el tipo de clula y toma valores entre
0.28 y 1.00 (Sauer et al., 1989).
194
Molino de Perlas**
Act.
Pasos
Prod.
solub."
No.
*g/h
Enzima
liberada
Homo ecncizador***
Act.
Pasos | P ro d .
solub.
No. | kg/h
Levaduras
S a c c h a ro t u y<:e s
c o rls b c r g c n s is
S a cch a ro m y cc
c c r e v is ia c
C a n d id a
b o id in ii
B acterias
1. ce re us
B r c v ib a c t e r iu m
a m rn o n ia q e n e s
H. c o l i
L a c to b a c illu s
c o n fu tv s
D-glucosa
6-fosfato
deshidrogenase
D-glucosa
6-fosfato
deshidrogenasa
I'ormnto
Deshidrogenasa
Leu cia
deshidrogenasa
Fumar asa
Penicilina
acilasa
D-Lactato
deshidrogenasa
86 %
60
91%
98 %
70
95%.
95%
88%
65
84%
ni
82%
67
85%
12
10%
95 94
89%
67
92%
20
84 %
65
60
60
* Actividad solubllizada
* Nctwch LM E 20
Gaulin M3
Adaptada de: K u la y SchUtte, 1987
Reproducida con el permiso del American Instituto of Chemical Enginecrs. Copyright 1987
AIC hE . Todo los derecho reservados.
D atos E je m p lo 5.5
(3 )
( 2)
% P ro te n a
L ib era d a
ln [/ W ( m - R)\
1
2
63.0
79.0
0.994
1.560
3
5
88.0
2.120
96.0
99.9
3.219
6.908
( 1)
Paso
10
Se p id e:
195
M o lin o de
P e r la *
2 min.
3 min.
4 min.
M nntonG a u lln * *
1 paso
2 pasos
3 pasos
M ic ro llu i d iz a d o r * *
1 paso
1 paao
1 paso
2 pasos
3 posos
5 pasos
10 pasos
Peso soco
de
bto masa
(g/I->
liberacin de
0-Galac tosidas
Protena
Actividad
Distribucin de
tamao
media
Pico()
(nm )
(nm )
Viscosidad
a
10
100 a~ 1
(m Pa-s)
(m Pa-s)
<*>
(* )
49.5
49.5
49.5
62
72
79
62
74
79
612
553
529
461.806
465. 787
471, 777
63
38
19
28
19
14
48.4
48.4
48.4
53
76
82
58
75
78
5t31
414
217
457
180, 457
191
113
8
8
30
6
6
101.9
73.2
47.6
47.6
47.6
47.6
47.6
62
65
63
79
88
96
100
62
61
61
76
87
97
100
693
693
673
480
451
493. 833
489, 800
486. 800
468
445
51
35
28
10
6
26
15
10
7
6
Reproducida con el permiso de John W iley and Sons. Copyright 1990. Todos los derechos reser
vados.
ln ( n Rm n ) = k ' P ^ N
de tal manera que de la pendiente de la grfica de \n[Rm/ (R rrl - R )i contra N
es posible estimar k . Los clculos necesarios se muestran en la columna (3) de
la tabla anterior. Mediante un ajuste por mnimos cuadrados de estos datos se
obtiene:
k P 2 2 = 0.688
y para P = 60 MPa,
k" = 8.4 x 10 5 M Pa -2 2
b)
es:
'"(1.00-0.93)
0.000084 x GO22
88 pasos
a-
196
5.5.
Sumario
197
5.6. PROBLEMAS
5.6.
Problemas
5.1.
Rompimiento celular en molino de perlas. En estudios de libe
racin de protena intracelular en funcin de la velocidad del agitador empleando
un molino de perlas tipo Netzsch LM E 4, con perlas de dimetro entre 0.55 y 0.85
mm , se utiliz una suspensin celular de concentracin de 50% (peso/volumen),
un flujo de alimentacin de 50 L/h y ma carga de perlas del 85 %. Bajo estas
condiciones se obtuvieron los siguientes datos:
Protena
liberada
rpm
(mg/mL)
1200
15.88
22.35
22.90
22.94
23.00
1500
1750
2000
2250
Se pide:
a) Estimar la velocidad ptima para el agitador.
b) Discutir sobre el consumo de potencia del agitador para velocidades su
periores a la ptima.
Agitador 2
Agitador 1
Tiempo
de residencia
(min)
3
5
10
15
20
25
30
lGg[Rrn/i&n ~ R )]
Tiempo
de residencia
(m in)
log [Rm/(i2m - R ))
0.037
0.090
0.160
0.225
0.300
0.365
0.437
3
5
0.060
0.150
0.225
0.325
0.425
0.525
0.650
10
15
20
25
30
Se pide:
a) Estimar la constante cintica k para cada tipo de agitador,
b. Calcular el tiempo para el cual se obtiene el 80% de rompimiento con
cada tipo de agitador.
198
P res i n (M P a )
P asos
1
2
90
50
Se p ide:
a) Estimar los parmetros cinticos del homogeneizador.
b) Comparar la energa por unidad de masa de alimentacin necesaria para
cada condicin.
c) Qu condicin se recomienda para realizar la ruptura.
R es p . a) k = 3.56 x 10-4 M P a -1,87 y b) 67% de diferencia.
5.7. E ficien cia glob al. Obtener la ecuacin (5.23) mediante el procedimien
to descrito en el texto.
5.8. S eleccin de h om ogen eiza d ores. Se desea recuperar la enzima glu
cosa 6 fosfato deshidrogenasa de cultivos de Ijeuconostoc mesenteroides por homogeneizacin a alta presin en una o ms unidades en un tiempo de 6 horas.
199
5.6. PROBLEMAS
(5.29)
C a p a cid a d (m a/h)
0.45
1.14
2.27
4.54
C o s to ($ )
22,000
32,000
45,000
69,000
Se p id e:
a) Si se desea minimizar la inversin de capital, establecer el nmero y tipo
de equipo que se requiere si se realizan 1, 2, 3, 4 o 5 pasos de rompimiento
(completar tabla siguiente).
Pasos
F lu jo (m 3/h)
1
2
U n id ad es
T ip o
C
C o s to ($ )
45,000
3
4
5
b) Establecer la presin de operacin necesaria para alcanzar un 90% de
recuperacin de la protena intracelular si se utilizan 1, 2, 3, 4 o 5 pasos de
ruptura.
c) En funcin de las respuestas de los incisos a) y b), seleccione el eqipo a
utilizar.
5.9. C on su m o d e p oten cia. La cintica de rompimiento en un homogeneizador a escala piloto se puede representar por la ecuacin (5.27).
ln
= k ' N = k" P N
(5.27)
200
k'
200
0.020
270
330
500
0.045
0.070
0.290
P ro te n a
(g)
1
2
400
990
3
4
5
1,200
1,100
6
7
8
9
10
1,410
1,425
1,475
1,473
1,483
1,490
Se pide:
Si la operacin del molino cuyo volumen libre es de 100 L se realiza en forma
continua, alimentando el caldo a un flujo F, cual es la mxima velocidad de
dilucin ( D = F f V ) que puede ser utilizada que permita obtener un 95% de
liberacin de protena?. Se pude suponer que las levaduras contienen el 50 % en
peso seco de protenas y el molino 4 etapas.
5.7. BIBLIOGRAFA
5.7.
201
Bibliografa
11- 20.
Bclter, P.A.; Cusslcr, E.L.; Hu; Wci-Shou. 1988. Bioseparations: Downstream
Processing fo r Biotechnology. Jolm W iley & Sons. New York. 77-88.
Bcnov, L.; Al-lbrahccm, J. 2002. Disrupting Escherichia coli: A Comparison
o f methods. J. Biochem. Molec. Biol. 35, 428-431.
Bjustrom, Ed. 1985. Biotechnology: Fermentation and downstream processing.
Chcm. Eng. 18, 126-159.
Danilevich, V.N.; Petrovskaya, L.E.; Grishin, E.V. 2008. A higlily efficient
proccdure for thc cxtraction o f soluble proteins from bacterial cells with
mild chaotropic Solutions. Chem. Eng. Technol. 31, 904-910.
Datar, R.V.; Cartwright, T.; Rosen, C. 1993. Process cconomics o f animal cell
and bacterial fermentations: A case study analysis o f tlssue plasminogen
activator. Bio/Technology. 11, 349-357.
Doucha, J.; Lvansky, K. 2008. Influence o f processing parameters on disintogration o f Chlorella cells in various types o f homogenizers. A ppl Microbiol.
Biotechnol. 81:431-440.
Edebo, L. 1969. Desintegration o f cell. En: Fermentation Advances. Perlman,
D. (Ed.). Acadcmic Press. London. 249-271.
Foster. D. 1992. Cell disruption: Breaking up Ls hard to do. Biotechnology. 10.
1539-1541.
Harrison. S.T.; Dennis, J.S.; Chase. H. 1990. The effcct o f culture history on
the disruption o f alcaligenes eutrophus by Higli Pressure Homogenisation.
En: Separations fo r Biotechnology. Pyle, D. L. (E d.). Elsevier Applied
Science. England. 38-47.
Hcim, A.; Kamionowska, U.; Solecki, M. 2007. The cffect o f microorganism
conccntration on yeast cell disruption in a bead mili. J. Food Eng. 83,
121-128.
202
5.7. BIBLIOGRAFA
203
Wang, D.I.C. 1988. Biotcchnology: Status and Perspectives. AIChE. 84, 1-21.
Zaragoza, A.; Aranda, F.J.; Espuny, M.J. Teruel, J.A.; Marques, A.; Mameso,
A.; Ortiz, A. 2009. Mechanism o f membrane permeabilization by a bacte
rial trchalosc lipid biosurfactant produccd by Rhodococcus sp. Ixingmuir.
25, 7892-7898.
P a rte I I I
207
Esta Parte III del libro trata en el Captulo 6 la operacin de extraccin
y en el Captulo 7 la de adsorcin. Estas operaciones que son utilizadas para
concentrar los producto diluidos de los caldos biolgicos que son obtenidos en la
etapa de recuperacin del producto. Tanto la extraccin como la adsorcin son
tcnicas de separacin no muy selectivas. Sin embargo, la adsorcin cuando se
realiza por afinidad es una tcnica de separacin altamente selectiva y necesaria
en la etapa de purificacin de productos en los cuales se requiere de ima alta
pureza.
C aptu lo 6
Extraccin
6.1.
Introduccin
210
CAPTULO 6. EXTRACCIN
6.2.
Fundamentos de la Extraccin
6.2.1.
211
6.2.2.
La extraccin de un soluto desde una fase acuosa polar a una fase orgnica
no polar, involucra con frecuencia interacciones hidrofbicas. Las interacciones
hidrofbicas son responsables de un gran nmero de fenmenos fsicos en solu
ciones acuosas. Aun en ausencia de interacciones especficas, la transferencia de
un soluto desde el agua hasta el solvente, es favorecida debido al incremento en
la entropa asociada con el desorden del agua.
Cuando un soluto es repartido entre las fases del extracto y el refinado, E
y R, formando soluciones diluidas, al alcanzarse el equilibrio los potenciales
qumicos del soluto en ambas fases son iguales, es decir:
ti(E)=fi(R)
61
.
(6.2)
(6.3)
(6.4)
212
CAPTULO 6. EXTRACCIN
H (E ) - n (R )
RT
(6.5)
o bien como:
( 6.6)
A G = R T ln K p
Soluto
Solvente
Aminocidos
Glicina
Lisina
Ac. Gluturico
n-butanol/agua
n-butanol/agua
n-butanol/agua
Cclcsticctina
Eritromicina
n-butanol/agua
Am il acetato/agua
12 0 .0 0
Novobiocina
Butil acetato/agua
10 0 .0 0
Antibiticos
0 .0 1
Observa
ciones.
25 C
0 .2 0
0.07
1 1 0 .0 0
0.04
0 .0 1
Penicilina F
Arail acetato/agua
Penicilina K
Am il acetato/agua
32.00
0.06
12 .0 0
0 .1 0
Protenas
Glucosa
Lime rasa
Catalana
PEG 1550/fosfato
de potasio
PEG/dextrano crudo
a
a
a
a
a
a
pH
pll
pH
pH
pll
pH
7.0
10.5
4.0
6.0
4.0
6.0
3.00
3.00
213
214
CAPTULO 6. EXTRACCIN
Cambios en el solvente
Lo primero que puede hacerse para mejorar mi sistema de extraccin es
cambiar el solvente de extraccin, esto es, elegir uno cuyo potencial qumico en el
estado estndar est ms prximo a n {R ). Desafortunadamente esto no es fcil
de lograr debido a que la teora termodinmica no puede predecir con seguridad
los potenciales qumicos para determinar el mejor solvente. Sin embargo, es
posible utilizar enfoques aproximados para el clculo de coeficientes de particin,
basados en la estimacin de n (E ) utilizando parmetros de solubilidad. De
acuerdo con este enfoque, el coeficiente de particin K p dado por la ecuacin
(6.4) puede ser expresado como:
ln K p =
VR(6A - 6 Ry - V E (6 A - 6 E)*
KTV a
(6.7)
donde V son los volmenes molares parciales del solvente pesado Ii, el solvente
ligero E y el soluto A , respectivamente. 6 son los parmetros de solubilidad
correspondientes.
El grado de disolucin de slidos en lquidos vara considerablemente con
la naturaleza del slido y del lquido, la temperatura y en grado menor con
la presin. En todos los casos el lmite de solubilidad es la saturacin. En un
sistema de un solvente y un soluto particular, la concentracin de saturacin a
una temperatura y presin dadas es constante y no depende de la manera en
que se prepara la solucin.
La influencia de la temperatura sobre la solubilidad de mi soluto en un
solvente particular es generalmente muy pronunciada, debido a que la mayora de
las sustancias absorben calor al disolverse y son ms solubles a una temperatura
elevada.
Para estimar el parmetro de solubilidad del soluto de inters <5,4, es nece
sario realizar dos extracciones con diferente solvente cada una de ellas y cuyas
solubilidades 6 sean conocidas. Una vez determinado a se pueden estimar los
coeficientes de particin para nuevos solventes a partir de los valores <5, conoci
dos. Estas son slo estimaciones que pueden servir de gua para nuevos experi
mentos. En la Tabla 6.2 se muestran los parmetros de solubilidad para algunos
solventes.
Cambios en el soluto
Cuando no es factible cambiar el solvente para mejorar una extraccin ya
sea por razones econmicas o tcnicas, entonces es necesario ver la posibilidad
de realizar cambios en el soluto. Dado que el soluto es el producto que se de
sea obtener mediante la extraccin, los posibles cambios deben ser de carcter
reversible.
215
Solvente
Amilacetato
Disulfuro de carbono
Tetracloruro de carbono
Cloroformo
Ciclohexano
Tolueno
Agua
8.0
10.0
8.6
9.2
8.2
8.9
9.4
esta ionicidad sin alterar el soluto, entonces la unin del soluto a este material
permitir aumentar la solubilidad del soluto en el solvente de extraccin.
Los cambios a solutos empleando contraiones se basan en el hecho de que un
soluto que es inico en el agua, formar un par-in sin carga neta en un solvente
orgnico.
Esta formacin de par-in se puede ejemplificar cuando en una solucin
acuosa de cloruro de tetrabutilamonio se extrae el catin utilizando cloroformo:
[ n (C 4h <,)+ en cloroformoj
( 6 .8)
[n (C 4H9)+ en agua]
Si se agrega acetato de sodio a la solucin acuosa de cloruro de tetrabutila
monio y se realiza nuevamente la extraccin, se encuentra:
|n (C 4H 9) 4 en cloroformo]
Kp=
= 132
(6-9)
N (C 4H9). en agua
Puede observarse que en el primer caso se extrae una solucin diluida de
par-in de N(C, i H 9)4 C l" y que en el segundo caso, se obtiene una solucin ms
concentrada de par-in de CH 3COO~N(G\ i H9);J'.
El empleo de pares inicos, requiere de la seleccin de contraiones solubles
en la fase no polar. Este tipo de sustancias se conoce como sales grasas y se
listan en la Tabla 6.3
Algunos productos que son de inters biotecnolgico como las protenas o los aminocidos, son sensibles a cambios en el pH
por lo que el conocimiento y comprensin de las propiedades cido-base de los
aminocidos es sumamente importante en las bioseparaciones de protenas. Mu
chos de los solutos que se desean aislar son cidos o bases dbiles, su extraccin
puede tambin ser fuertemente afectada por cambios en el pll.
216
CAPTULO 6. EXTRACCIN
Estructura Qumica
Observaciones
Acetato
CH3 CO O -
Butirato
C H a(C H a )a C O O '
Tetrabutilamonio
Hcxadociltributihunonio
Pcrfluoroct anato
(C 4 H0)4N +
Simple, no es muy
soluble en sol
ventes orgnicos.
Ms soluble en
solventes orgnicos
que el acetato.
Slido
C H sC H a iftC a H ^ a N ' C F 3 (C F a) 0 C O O -
Dodecanato
C H 3 (C H a) 10COO
Linolato
ll 3 (C H a ) 4 C U - H C H a C H -(C H a ) 7 COO
Tetrafenilboru ro
b ( c ch 3) -
Puede formar
incelas.
Puede permanecer
inico en solventes
orgnicos.
Puede formar
rncelos.
Puede formar
cristales lquidos.
Puede degradarse
en varios
solventes.
Reproducida con el permiso de John W iley and Sons. Copyright 1988. Todos los derechos reser
vados.
[R C O O -U H ^
[RCOOH] w
(6.10)
Cuando este cido dbil se distribuye entre dos fases, una orgnica E y una
acuosa R. el coeficiente de particin aparente agrupa las concentraciones de
la forma ionizada y no ionizada del cido en la fase acuosa. En este caso el
coeficiente de particin se expresa como:
K
[RCOOH] g
p
[RCOOH] r + [R C O O - ]/?
( 6. 11)
Ki
Kp =
1 +
217
( 6 . 12)
Kn
[H+ ]
[RCOOHIe
[RCOOHjf
(6.13)
lo8io
(6.14)
log 10
(6.15)
K P( B )
Se pide calcular:
a) La constante de disociacin aparente K a.
b) El p K a del cido.
c) El grado de disociacin del cido.
Solucin:
218
CAPTULO 6. EXTRACCIN
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
pK%
Grupo R
6.0
10.53
pKs
Grupo R
4.45
10.58
10.5
Reproducida cou el permiso de John W iley and Sons. Copyright 1988. Todos los derechos reser
vados.
a)
La constante de disociacin de un cido est dada por la ecuacin (6.10),
en este caso se tiene que:
[//-*-] [c h 3 - c h 2 - c o q - ]
*a
[CH 3 - CH 2 - COOH]
[H+ ] = 0.1 M
y a un pH de 2.935, la concentracin de H + es
[//+] =
1
antilog(2.935)
= 1.16 x 10" 3 M
219
5
M
GD =
T T F ~ ! x 10 = !.16%
0.1 M
220
CAPTULO 6. EXTRACCIN
_ K P{ * F )
100.0
K p( K )
79.68
= 1.26
a pH = 3
Los resultados obtenidos para las dos penicilinas con los pHs respectivos se
muestran en la siguiente tabla:
pH
K P{ UK )
K P( F )
p .W J D .
K 0( " K )
3.0
4.0
79.68
100.00
12.00
32.00
1.3
2.7
6.2.3.
S eleccin d el S o lve n te
Selectividad.
Coeficiente de particin adecuado para el producto.
Grado de solubilidad.
Facilidad de recuperacin.
Densidad.
Tensin superficial.
Estabilidad para el soluto.
Inocuidad.
221
6.2.4.
Componente 1
Componente 2
Referencia
PEG
PEG
PEG
PEG
PEG
PEG
Ficoll
Dextrano
Citrato
Hidroxipropil de almidn
Xantana
Fosfato de potasio
Sulfato de potasio
Dextrano
Albertsson (1986)
Porto (2008)
Tjemeld (1986)
Chcthana (2007)
Albertsson (1986)
Albertsson (1986)
Albertsson (1986)
222
CAPTULO 6. EXTRACCIN
D iagram as d e fases
Los sistemas de dos fases acuosas pueden ser caracterizados mediante diagra
mas de fases nicos donde se grafican la composicin de las fases en el equilibrio.
Comnmente, los ejes se especifican en unidades de concentracin del polmero o
la sal en porcentaje en peso de mezcla. Fin la ordenada se grfica la concentracin
del polmero 1 (que origina la fase superior) y en la abscisa la concentracin
del polmero 2 o la sal (que origina la fase inferior).
La Figura 6.3 muestra un diagrama de fases para el sistema PE G 3400/Dextrano T-5000/Agua. La curva binodaJ caracterstica de estos sistemas pasa por
los puntos CPD .
C a racterstica s d e l d ia gra m a d e fases Es importante distinguir algunas
caractersticas del diagrama de fases de los SDFA, como las siguientes:
a)
La curva bimodal C P D separa la regin de una fase localizada abajo de la
curva, de la regin de dos fases situada arriba de la curva. El punto A se sita
223
Figura 6.3: Curva binodal para un sistema de dos fases acuosas inmiscibles P E G
3400/Dextrano T-5000/Agua. Adaptada de: Huddleston et al., 1991. Reproducida
con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1991. Todos los derechos reservados.
y d.
e) Si se considera la lnea de unin que pasa por los puntos Q i , Q y Q 3,
todos los puntos representan la composicin total de tres sistemas con diferente
proporcin de volumen.
Los SDFA que sean preparados con fracciones peso situadas sobre las lneas
de unin, producirn sistemas de igual composicin de las fases pero con dife
rentes volmenes de cada fase.
P ro p o rc i n d e los vol m en es d e las fases I>a proporcin de volmenes de
las fases conjuntamente con el coeficiente de particin constituyen un factor de
diseo fundamental de la extraccin. L a proporcin de volmenes de las fases
puede obtenerse grficamente utilizando balances de masa. Considrese la lnea
CBD de la Figura 6.3 y sea:
M : Masa total del sistema de dos fases. [M ],
M e - Masa de la fase rica en PEG . [M ].
224
CAPTULO 6. EXTRACCIN
M :
[M].
(6.17)
Mqsi
= MfqE + Mnqn
M r _ <?a; - qn
Mr
qE - q\{
(6.18)
DD
M r ~ JJ
(6.19)
donde B D y B C son las longitudes de los segmentos entre los puntos respectivos.
Cuando la densidad de las fases es muy prxima, la relacin de volmenes
de las fases est dada por:
E
BD
R~B
(6 .20)
\(qE - q n f + ( P E -P R f
(6.21)
donde:
Pe Fraccin masa de dextrano en fase superior (rica de P E G ). [adim.].
P r : Fraccin masa de dextrano en fase inferior (rica de dextrano). [adim.].
C o m p o rta m ie n to d e las fases
El comportamiento de un sistema (polmero A)-(polm ero B)-(agua), de
pende de las interacciones entre las molculas presentes. Estas interacciones
pueden ser mediante puentes de hidrgeno, fuerzas de van der Waals, inicas,
interacciones dipolo-dipolo e interacciones liidrofbicas. En un sistema pueden
225
(6.22)
donde la prima ( ' ) y la doble prima ( " ) , representan la fase superior y la fase
inferior respectivamente, y N es el nmero total de componentes.
Existen varios modelos que tratan de explicar el comportamiento terico de
la particin o distribucin de las protenas en los sistemas de dos fases acuosas
a partir de considerar una serie de factores que afectan la particin de este tipo
de soluto en el equilibrio.
F actores qu e afectan al c o e ficie n te d e p artici n
Los estudios empricos realizados en sistemas de dos fases acuosas han mos
trado que la particin de protenas es una funcin compleja que depende de
factores tales como: hidrofobicidad, tamao molecular, conformacin molecular,
bioespecificidad de la protena, electroqumica, pH, concentracin del buffer,
fuerza inica, temperatura y concentracin de la protena (Baskir et al., 1989).
En general la particin de protenas en sistemas de dos fases est definida
por el coeficiente de particin
KV
S i
(6.23)
[P h
226
CAPTULO 6. EXTRACCIN
(6.24)
donde los subndices: clq, hf, bioc, tam y conf, indican las contribuciones so
bre el coeficiente de particin de las propiedades electroqumicas, hidrofbicas,
de bioespecifcidad, tamao y conformacin, respectivamente, del soluto y los
polmeros que forman las fases. K incluye otros factores tales como la solvatacin del soluto en las fases. En general, es ms ilustrativo expresar el coeficiente
de particin en la forma logartmica de la ecuacin (6.24) misma que se puede
escribir como:
(6.25)
Figura 6.4: Factores que afectan al coeficiente de particin. Adaptada de: Iluddleston et al., 1991. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1991.
Todos lo derechos reservados.
T am a o d e las b iom olcu las Las molculas pequeas como los aminocidos
se distribuyen uniformemente entre las fases. Cuando se trata de partculas
ms grandes la particin no es tan uniforme, de tal manera que las protenas
grandes tienden a repartirse menos uniformemente que las protenas pequeas
(Fig. 6.5a). Las molculas de peso molecular muy grande como el DNA y los
virus se reparten casi por completo en una sola fase. Sin embargo, las partculas
extremadamente grandes como las clulas, se distribuyen entre la interfase y
una de las fases o pueden agruparse completamente en la interfase (Baskir et
a i, 1989).
227
Figura 6.5: Efecto del peso molecular de los componentes sobre el coeficiente
de particin, a ) Tamao del soluto en un sistema P E G 6000-dextrano 500 y b)
Tamao de los polmeros sobre la particin de una enzima. Sistema 12% PEG y
1 % DextranO. Fuente: Daskir, 1089. Reproducida con el perinitto de John W lley juid S oiih.
Copyright 1989. Todos loe derechos reservados.
228
CAPTULO 6. EXTRACCIN
entre las fases. sta resulta de las preferencias de los diferentes iones de la sal
por las diferentes fases lo que puede afectar fuertemente la particin de las
biomolculas cargadas .
El p H d e la solu cin Adems de los efectos del pH mencionados en el prrafo
anterior, los cambios en el pH pueden inducir tambin cambios conformacionales
en la estructura de la protena que alteran su particin.
C o n cen tra ci n d e la p ro te n a Si la concentracin de la protena permanece
baja (un orden de magnitud ms baja que la concentracin del polmero), s
ta no afecta significativamente al coeficiente de particin. Sin embargo, a altas
concentraciones de protena es posible que la concentracin afecte el coeficiente
de particin ya que pueden alterarse significativamente las propiedades del sis
tema. Las protenas pueden inclusive formar fases separadas si su concentracin
es suficientemente alta.
M o d e lo s para p re d e c ir el coeficien te d e p a rtici n en sistem as d e d os
fases
Existen varios desarrollos para obtener modelos que permitan predecir el
coeficiente de particin en un sistema dado (Baskir et al.,1989; Clark, 1989;
Jiang y Prausnitz, 2000). Los modelos reportadas han sido obtenidos utilizando
bsicamente tres enfoques termodinmicos: integral, vinal y de red (Shao et al,
2009). A manera de ejemplo se presentan dos modelos a continuacin.
M o d e lo e m p r ic o d e B rn sted Uno de los modelos ms sencillos para des
cribir la particin de biomolculas en sistemas de dos fases acuosas fue pro
puesto por Brnsted (Baskir et al., 1989). Este modelo describe en forma apro
ximada el efecto del tamao de la partcula (o biomolcula) sobre el coeficiente
de particin:
K p = exp
(6.26)
donde:
M : Peso molecular de la partcula que se particiona. [g/mol].
k : Constante de Boltzmann. (1.3806668 x 10~23J K _1).
T : Temperatura absoluta. ( K ).
A: Parmetro agrupado sobre la influencia de las fases y la partcula.
La ecuacin (6.26) muestra la influencia del tamao del soluto y la tempe
ratura sobre el coeficiente de particin, la influencia de los factores restantes los
agnipa en el parmetro A.
M o d e lo te rm o d in m ic o m o le cu la r El modelo termodinmico molecular
(virial) est basado en la teora de soluciones de McMillan-Mayer. En este mo
delo el agua se considera mi medio continuo. Las interacciones entre los solutos
229
(6.27)
donde:
K p\ Coeficiente de particin.
K p: Coeficiente de particin cuando el gradiente de potencial es cero.
Z p: Carga de la protena.
F : Constante de Faraday, 96,487 C/equiv.
A4>: Diferencia de potencial elecrosttico entre la fase inferior y la fase su
perior.
R: Constante de los gases ideales.
T : Temperatura absoluta.
E strategia s heu rsticas El desarrollo y optimizacin de procesos de recu
peracin que utilizan SDFA requiere realizar un buen nmero de experimen
tos, para asegurar un buen rendimiento y pureza del producto de inters. La
metodologa de la superficie de respuesta es comnmente empleada en estos
estudios (Azcvcdo d al., 2007), pero puede requerir recursos significativos. Re
cientemente, han sido presentadas algunas reglas y estrategias heursticas para
facilitar este tipo de trabajos (Benavides y Rito-Palomares, 2008). Las estrate
gias se dividen en:
a) Caracterizacin fisicoqumica del caldo a procesar. Los principales parme
tros son el peso molecular del soluto, el punto isoelctrico y su hidrofobicidad.
Esta informacin se establece en base a reportes de la literatura y mediante
exper imentacin.
b) Seleccin del tipo de SDFA. Los sistemas polimero-sal (particularmente
PEG-fosfato) son altamente recomendados como punto de partida debido a que
son menos costosos, estn bien caracterizados y por su estabilidad.
c) Seleccin de los parmetros del sistema El pH, el peso molecular del
polmero y el diagrama de fases del sistema requieren ser establecidos. Se re
comienda trabajar a un pH ligeramente superior al punto isoelctrico o pK del
soluto. Los sistemas PEG-fosfato son recomendados para trabajar a pH>7.0 y
los sistemas PEG-sulfato a pH<6.5.
Una vez seleccionado el SDFA es necesario construir el diagrama de fases del
sistema. Se sugiere investigar la influencia del peso molecular del polmero sobre
la longitud de las lneas de unin, manteniendo el pH constante y la relacin de
volmenes de las fases E / R = 1. Se recomienda usar polmeros de bajo peso
molecular y L L U bajas o medias, para la recuperacin de compuestos hidroflicos
de alto peso molecular (>10,000 g/mol). Por lo contrario, utilizar polmeros de
alto peso molecular y L L U medias o altas para recuperar solutos hidrofbicos
de bajo peso molecular.
d) Evaluacin de la influencia de los parmetros de proceso sobre el rendimien
to y la pureza del producto. Se sugiere evaluar la influencia de la cantidad de
230
CAPTULO 6. EXTRACCIN
6.3.
Equipo de Extraccin
Dinmica
Separacin de
Tamao
las fases por:
de gotas por:
Gravedad
Agitacin
Gravedad
Agitacin
Gravedad
Gravedad
Gravedad
Gravedad
Gravedad
Agitacin
Gravedad
Agitacin
Gravedad
Gravedad
Agitacin
Pulsos
Centrfuga
Dcflcctorcs
Intermitente
Equipo
Continuo
Etapas mltiples
Columna* de
contacto diferencial
M - S
M-S
Aspersin
Platos perforados
Lecho empacado
Aspersin tipo
Rush ton-OUlshue
Discos giratorios
T ip o Karr
platos y empacadas
W t falia y
Robatcl
Podbiclniak y
A lfa La val
M-S Mezclador-Sedimentador
6.3.1.
231
Figura 6.6 se muestran algunos de los equipos utilizados para este tipo de extrac
cin. En la Figura 6.6(a) se muestra un mezclador sedimentador tpico donde
el mezclador o agitador est completamente separado del sedimentador. Las fa
ses se alimentan al mezclador y posteriormente se separan en el sedimentador.
En la Figura 6.6(b ) se muestra una combinacin de mezclador-sedimentador.
Los mezcladores sedimentadores pueden combinarse en serie para extraccin en
etapas mltiples o a contracorriente.
6.3.2.
232
CAPTULO 6. EXTRACCIN
pender del flujo a ser procesado y de las propiedades fsicas de ambos lquidos.
Cuando la extraccin involucra reacciones qumicas el tiempo de contacto puede
ser muy importante. Algunos extractores de etapas mltiples como los Westfalia
y los Robatcl emplean fuerzas centrfugas para separar las fases durante la ex
traccin.
233
6.4.
234
CAPTULO 6. EXTRACCIN
Extraccin continua.
Extraccin fraccionaria.
6.4.1.
La extraccin por lotes, tambin llamada extraccin de una sola etapa, con
siste en poner en contacto ntimo la solucin a t ratar con el solvente de extraccin
y formar dos fases. Despus de este contacto y una vez que se ha alcanzado el
equilibrio, las fases deben separarse. En este proceso es conveniente que el con
tacto se realice con un alto grado de turbulencia para obtener altas velocidades
de transferencia de masa.
El proceso de extraccin en una sola etapa se presenta en la Figura 6.11.
El separador est incluido en la etapa debido a que la extraccin del soluto
persiste en tanto las dos fases se encuentren en contacto y hasta que se alcance
el equilibrio.
Existen dos mtodos para el clculo de extractores por lotes que dependen
de la informacin disponible y de la complejidad de sta: a) el analtico y b) el
grfico.
235
concentracin final del soluto puede ser obtenida en algunos casos en forma
analtica mediante el empleo de dos ecuaciones.
La primera de ellas es una relacin de equilibrio para las soluciones que
intervienen en el proceso y la segunda es un balance de masa para el soluto.
Cuando la relacin de equilibrio es lineal se tiene:
x = Ky
(6.28)
donde:
x : Concentracin del soluto en la fase ligera E.
y: Concentracin del soluto en la fase pesada R.
K : Constante de equilibrio.
La ecuacin (6.28) es la ecuacin de una recta que pasa por el origen.
La segunda relacin es un balance de masa que establece que en el proceso
de extraccin:
Cantidad de soluto inicial = Cantidad soluto final
236
CAPTULO 6. EXTRACCIN
El balance de masa para el soluto, referido a la Figura 6.11 es:
R v Va + E 0x 0 = Ry + E x
(6.29)
donde:
ya '. Concentracin de soluto en la alimentacin o fase pesada.
y: Concentracin de soluto en el refinado, esto es, la concentracin del soluto
que permanece en la alimentacin despus de la extraccin.
x 0: Concentracin inicial de soluto en el sbente de extraccin y general
mente es igual cero.
x : Concentracin de soluto en el extracto al final de la operacin.
Las unidades de concentracin pueden estar en % en peso, fraccin mol o
masa/volumen ( E y R en unidades consistentes). En este desarrollo se supone
que E y R son constantes.
Para encontrar una expresin para calcular la concentracin al final de la
extraccin o de equilibrio, se sustituye el valor de x dado por la ecuacin (6.28)
en la ecuacin (6.29). El valor para y se obtiene de manera similar. Esta com
binacin de ecuaciones conduce a:
K va
1 +F
1 +F
Va
(6.30)
(6.31)
RyA
(6.33)
misma que puede ser escrita en trminos del factor de extraccin para dar:
F
P ~ 1 +F
(6.34)
237
(a )
con
F =
KE
R
20 L
~ 10 L
la concentracin x es:
Ky
1 + F
20 x (10 f )
_________ k _
1 + 2
2
1 + 2
0.666
238
CAPTULO 6. EXTRACCIN
___ V o _
v0 y
x E + yR
R{ 1 + F )
donde:
R
Para utilizar la ecuacin anterior es necesario calcular primero el valor de E
mediante un balance,
V0 + V = E + R
entonces,
Va + V - R
3 x 10-3 m3
GC =
fr .
v 1in-5
m
3'|
U
III )
y A
= 58.57
5 x 10 5 m 3
yJL
C 0V0
239
x E + yR
y en trminos del grado de concentracin:
-(G o()-(wnx(fil)-a.0.976
M to d o gr fic o : E x tra c to re s p o r lotes
En la solucin de problemas de extraccin por lotes se emplean con mucha
frecuencia mtodos grficos, los cuales son tiles en situaciones en las que el
equilibrio es complejo y no se ajusta a una relacin lineal como la ecuacin
(6.28). Al igual que el mtodo analtico el mtodo grfico tambin depende de
dos ecuaciones bsicas: una relativa al equilibrio y otra al balance de masa del
soluto.
La relacin de equilibrio establece que la concentracin x del soluto en el
solvente de extraccin despus de que las fases se ponen en contacto, es una
funcin que depende de la concentracin y del soluto en el refinado,
* =
f(y )
(6.35)
De acuerdo con la Figura 6.11, la ecuacin para el balance de masa del soluto
(solvente libre de soluto) es:
R oVa
= Ry +
Ex
consecuentemente:
X=
(^ )
(yA ~ V^
(636)
240
CAPTULO 6. EXTRACCIN
R oVa + E0x0 = Ry + E x
de tal manera que la expresin de la lnea de operacin est dada por:
241
E,
y= J
{(x - x)x
sustituyendo valores se obtiene:
y = 4.7(0.006 -
x)
P=
%
Ex0
(1.0 L) (0.012
M )
(4.7 L ) (0.006 M )
i*>
Figura 6.14: Curva de equilibrio y lnea de operacin piara el sistema toluenoagua. Ejemplo 6.5.
6.4.2.
Extraccin Continua
242
CAPTULO 6. EXTRACCIN
(6.37)
243
(6.38)
Cuando las concentraciones de las corrientes de salida de cada etapa son las
de equilibrio y el solvente est libre de soluto x Q = 0, las ecuaciones (6.37) y
(6.38) se combinan para obtener:
V2 = ( l + F ) ( V i )
(6.39)
% 3 + E x i = Ry2 + E x 2
(6.40)
+ F 2) (y ,)
(6.41)
(6.42)
( )
244
CAPTULO 6. EXTRACCIN
RVn+l
(6.44)
(1
l 2
...
1 ") (y i) =
(u +
Ryu+i - Ryn
(n - f l)y i - yi
Ryn +1
( n + l)y i
n +1
P =
l)y i
Solucin:
De acuerdo a los datos, yn+ i = 10 g/L; K = 20; R = 10.0 L/min; E
1.0 L/min y n = 3.
1.a fraccin extrada puede ser obtenida mediante la ecuacin (6.44), para lo
cual es necesario calcular primero el factor de extraccin, entonces:
1.0
EK
rmn
x 20
=
10.0 min
1) = 2 x (2 3 -
m+i _ 1
2> -
1)
= 0.93
245
Solucin:
El nmero de etapas puede ser calculado mediante la ecuacin (6.43), para
lo cual es necesario calcular primero el factor de extraccin,
is p
F =
50 x 10
---- jasa. =5
100
L
min
( F n+l
1/n+ l
yi
5n+1 - 1
20 7
0.1
L
n
F 1
5 -1
=
3.15 ~ 4
(6.45)
xn = j { y n +1
1/ 1)
(6.46)
las ecuaciones (6.45) y (6.46) pueden graficarsc sobre el mismo plano coorde
nado para obtener las lneas de equilibrio y operacin, respectivamente. En la
Figura 6.16 se muestra ma grfica de este tipo.
246
CAPTULO 6. EXTRACCIN
247
y\ = 0.01 x 260
1J
[mg/L]
2/n+l
/n+l
450
n
de tal manera que:
Vn+i
.m
0.01 y n + i
(4 .6 9 )n+1 - 1
4.69 - 1
248
CAPTULO 6. EXTRACCIN
6 . 8.
n = 2.8
se requieren tres etapas para esta extraccin lo que coincide con el resultado
obtenido por el mtodo grfico.
E jem p lo 6.9. C on cen tracion es en una o p e ra ci n a con traco rrien te.
En una operacin de extraccin a contracorriente en cada etapa se alcanza
el equilibrio, el cual est dado por una relacin lineal.
Se p id e:
a) Establecer un algoritmo para el clculo de las concentraciones de equilibrio
en cada una de las n etapas de un sistema.
b) Calcular las concentraciones de equilibrio utilizando los siguientes datos:
*0 0, Jfo+i 10 g/L; K = 20; R = 10.0 L/min; 1.0 L/min y n = 3
c) Calcular la fraccin extrada o rendimiento de la operacin.
Solucin:
a) La relacin de equilibrio est dada por:
x n Ryn
El balance de soluto en la etapa n puede expresarse como:
249
Ry n+1 + E x n - i = Ry + E x n
o bien como:
F x n-\ (1 + F ) x n + x n+i = 0
donde: F = K E / R .
El conjunto de balances para cada una de las etapas pueden expresarse
matricialmente como:
A X
= B
donde:
- (1 + F )
- (1 + F)
( 1 + F )
( 1 + F )
F
0
- (1 + F )
F
1
- ( 1 + F).
Fxo
0
0
Xl
x2
*3
;
R =
Xn
-Ft/,,+1
1
2
3
13.3
40.0
93.3
Vn
0.67
2.00
4.67
250
CAPTULO 6. EXTRACCIN
p = 0.93
En la Figura 6.18b se muestra como vara el rendimiento con el nmero
de etapas para este sistema. Los rendimientos marginales son muy pequeos
despus de la etapa 3, para las condiciones estudiadas. El comportamiento de
pender de todos los parmetros de un sistema particular.
(6.47)
( D 2\ 038
(H E T S ),
\d J
( VR )2 =
(VR),
\ d 2J
(6.48)
(6.49)
251
Ei
R2
R\
(6.50)
Qi
(6.51)
Di ~ Di
donde Q = E + R.
Coeficiente particin
Flujo fase ligera
Flujo del caldo
Conc./conc.
Longitud columna (operacin)
Damet ro de la columna
Velocidad reciprocante
yi/!/n+i =0.07
L\ = 1.83 cm
D\ = 2.54 cm
VRy = 280 ciclos/min
Se pide calcular:
a) I.as dimensiones de la columna industrial:
y 2b) L a velocidad reciprocante de la columna industrial: V R 2
Solucin: a)
Paso 1. Se calcula las H E T S \ , para lo cual es necesario calcular F\ y m .
KEx
7.5 x 105
70
mL
mL
= 11.25
min
Sabemos que:
252
CAPTULO 6. EXTRACCIN
1)1+1}
"
A
Ti! =
ln (F )
(n -25- j >
+ 1
^ -1 = 1.06
ln (11.25)
E2
105
Ei
mL
Ra
70 m i
min
de tal manera que:
150 000 I
Q2 = E 2 + R 2 = 1.5R 2 + 2 = 2-5R2 = 2.5 x ---- ? ^
.
12 h x ^ ^
h
I
= 520.8
520.8
x (2.54 cm )2
-------- ------------- ----------- 138.6 cm
175 mL
^
min
103 mL
ln (11.25)
^ - 1 = 1.41
0.38
iHETS>*
=173mx(ftr^F =791
253
( V R ) 2 = (V R ),
6.4.3.
O11 =280 ^
2)
mm
/ 2.54 cm \ 0'14
\ 138.6 cm )
ciclos
~
min
Extraccin Diferencial
1 = Kym
(6.52)
i- .
254
CAPTULO 6. EXTRACCIN
Ry + E x 0 - Rya + E x
(6.53)
(6.M)
X = J: (V ~ Vo)
(6.55)
0=
(6.56)
j/*)
(6.57)
255
S -(
) '-*
<>
Las tres relaciones descritas se relacionan entre s para obtener una ecuacin
de diseo.
La ecuacin (6.58) est en fimcin del diferencial dz. Esto permite calcular
la longitud del extractor diferencial utilizando para ello las ecuaciones (6.52) y
(6.54).
De acuerdo a la ecuacin (6.58) la longitud del extractor diferencial puede
ser obtenida mediante la siguiente expresin:
L =
(y - s / * )
combinando con la ecuacin (6.52) se obtiene.
VL
L =
J _
Vi
f ___________ dy___________
kaAy { y -
[ m iy-
*> ]}
* y
+ f - i )
L =
(6.59)
256
CAPTULO 6. EXTRACCIN
(6.60)
N-n-dodecil-l-hidroxiprolina en octanol
Agua (conteniendo 1-leucina y
d-leucina)
64 cm
240 |im
96
19.2 cnvVh
76.8 cm3/h
0.331
Solucin:
Se requiere utilizar la ecuacin (6.59) para estimar el parmetro A*n y ex
presarla en trminos de la recuperacin p que en este caso est dada por la
expresin:
P~
Exl
Vl
otra expresin necesaria es la del balance global del soluto que es:
Exl
= R {y L - y0)
257
E xl =
V L -P )
Rv l
Va
Vl
bien como:
KF
=
--------------J L . L
19.2
32-4
cm'
cm
ka
ka
19 2 ~h~ X 36I
(64 cm)(4.43 x 10 2 cm2)
1.324
\ 1.324 l )
1ln
0.9997
1.324
1 - 0.9997
5.15 x 10 2 s" 1
258
CAPTULO 6. EXTRACCIN
L = (I I E T P ) { N )
(6.61)
0
70 mol de agua/min
3.5 mol de solvente/min
10%
Se p id e calcular:
a) La fraccin mol de penicilina en el extracto de salida.
b) El nmero de etapas tericas de la operacin.
Solucin:
a)
La fraccin de soluto en el extracto de salida puede ser obtenida mediante
la ecuacin (6.54),
(vl -
xl
70
xL
xl
y0)
mol \
b)
El nmero de etapas tericas puede ser calculado mediante la ecuacin
(6.43) que en este caso se puede escribir como:
Vo _
yL
F - 1
F * +1 - 1
259
F =
KE
R
25 x 3.5
70
mol
SUS. = 1.25
mol
min
0.1
n
6.4.4.
1 .2 5 -1
(1.25 )" +1 - 1
4.6
(6.62)
r = ka(yn y *)
(6.63)
E x n-1 + r R =
Exn
(6.64)
Ry n+1 = Ryn + R r
(6.65)
Xn + Rkayn = 0
6 . 66)
260
CAPTULO 6. EXTRACCIN
(6.67)
+ (R k a )Y = D
(a)
(b)
donde :
(1 + ka)
- 1 0
(1+fco) - 1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
(1 + ka)
0
-1
(1 + ka)
0
0
C =
0
E
B =
0 '
-E X 0
0
0
0
0
.Vn+l.
261
x i
vi
X2
y-2
*3
r =
Xnm
1/3
.Vn.
Puede ser demostrado que para este sistema se cumple que (Elnashaie y
Uhlig, 2007):
-1
[ d [ 4 + [JUa]
CB + D
C X D - RkaY
(c)
(d)
262
CAPTULO 6. EXTRACCIN
n
1
2
3
6.4.5.
Xn
15.74
42.72
88.98
/n
1.10
2.68
5.37
Extraccin Fraccionaria
K p{A ) = ^
Va
= 1
263
= Z .O
ye
264
CAPTULO 6. EXTRACCIN
I-a extraccin fraccionaria con una fase mvil es de aplicacin general y puede
emplearse como tcnica de bioseparacin para diferentes tipos de solutos como:
protenas, cidos nucleicos, lpidos y aminocidos. Este principio tambin sirve
de base para las operaciones cromato grficas que se revisan posteriormente.
/ (r n ) = ^ r b j ! pn r ( 1 - p )r
265
(6-G8)
donde:
F
P ~ 1+ F
r = 0,1,2,3.... n
Cuando el nmero de t ransferencias n es muy grande la ecuacin ( 6.68) se
aproxima a una distribucin gausiana y se tiene que:
f ( r , n ) = ----------------- r -2
[2irnp( 1 p )]1
- ' " 7 i P^
\ 2np(l-p)J
(6.69)
Solucin:
a) De acuerdo a la ecuacin (6.69) la fraccin de soluto / tiene un mximo
cuando r = np, ya que en este punto el valor de la exponencial es mximo c
igual a uno.
El tubo que tiene la concentracin mxima de soluto es:
r = np = 400..
= 200
1 +1
266
6.5.
CAPTULO 6. EXTRACCIN
Sumario
267
6.6. PROBLEMAS
6.6. Problemas
6.1. S e le c tiv id a d d e s o lv e n te. En la separacin de Ajmalicina de p K a =
6.3 y Serpentina de p K a = 10.8, dos alcaloides vegetales de estructura muy se
mejante; se dispone de un solvente en el cual el coeficiente de particin intrnseco
es igual para ambas especies.
Se p id e:
a) Calcular el valor de K p/K i para ambas especies a los pH de 2, 4, 6, 8, 10
y 12.
b) Calcular la selectividad de Ajmalicina a los pH de 2, 4, 6, 8, 10 y 12.
c) Qu sistema recomienda a para realizar la extraccin?
R esp . b )
pH
0
2
31,621
4
31,465
6
21,065
8
620
10
7.3
12
1.1
268
CAPTULO 6. EXTRACCIN
E
K aA
Etapa
1
2
3
4
5
Fase acuosa
ppm d e H g ( I I )
Inicial
Final
1091.00
146.40
19.60
146.400
19.600
2.00
0.090
0.005
0.09
2.000
C o e fic ien te
d e p a rtici n
KP
6.4
54.6
555.0
12,499.0
100.000.0
Se p id e calcular:
a) La eficiencia de recuperacin de cada etapa.
b) La eficiencia de recuperacin global al final de cada etapa.
c) La relacin de fase acuosa a fase orgnica empleada en cada etapa (R / E ).
269
6.6. PROBLEMAS
270
CAPTULO 6. EXTRACCIN
6.12. Clculo del nmero de etapas. A partir del programa del Ejemplo
6.9, escribir un programa que calcule las etapas necesarias para alcanzar un
determinado rendimiento en una cascada a contracorriente con equilibrio lineal.
Se pide:
a) Calcular el valor del coeficiente de transferencia de masa, ka, para que la
operacin alcance el equilibrio.
b) Cal aliar las concentraciones de equilibrio.
271
6.6. PROBLEMAS
272
6.7.
CAPTULO 6. EXTRACCIN
Bibliografa
Albertsson, P.; Johansson, G.; Tjerneld, F. 1990. Aqueous two-phase separations. En: Separation Proccsses in Biotechnology. Ascnjo, J.A. (Ed.).
Marcel Dekker Inc. New York. 287-319.
Azevedo, A.M .; Rosa, P.A.J.; Ferreira, I.F.; Aires-Barros, M. 2007. Optimisation o f aqueous two-phase extractkm o f hmnan antibodies. J. Diotech. 132,
209-217.
Baskir, J. N.; Hatton, T . A.; Suter, U. W . 1989. Protein partitioning in two phase aqueous polymcr systems. Biotech. Bioeng. 34, 541-558.
Belter, P.A.; Cusslcr, E.L.; Hu, W . 1988. Bioseparations: Doumstream Process
ing fo r Biotechnology. John W iley and Sons. New York. 5, 99-143.
Benavides, J.; Rito-Palomares, M. 2008. Practical experiences from the development o f aqueous two-phase proccsses for the rccovery o f high valu
biological products. J. Chem. Technol. BiotechnoL 83,133-142.
Chethana, S.; Rastogi, N.K.; Raghavarao, K.S.M.S. 2007. New aqueous two
phase System comprising polyethylene glycol and xanthan. Biotech, Letters. 28: 25-28.
Clark, W .M . 1989. Thermodynamics o f protein partitioning in aqueous two
phase systems. En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology. Shuler,
M .L. (Ed.). New York. 147-181.
Diamond, A.D.: Hsu, J.T. 1990. Protein partitioning in PEG/Dextran aqueous
two-phase systems. A lC h E J. 36, 1017-1024.
Ding, H.B.; Carr, P.W.; Cussler E.L. 1992. Racemic leucinc separation by
hollow-fiber extraction. A lC h E J. 38, 1493-1498.
Elnashaie, S.; Uhlig, F. 2007. Numeric.al Tcchniques fo r Chemical and Biolo
gical Engineers Using M A T L A B & . Springer Science and Business Media.
LLC. New York, N Y .
Huddleston, J.; Veide, A.: Kohler, K.; Flanagan, J.; Enfors, S.; Lyddiatt, A.
1991. The molecular basis o f partitioning in aqueous two-phase systems.
TibTech. 9, 381-388.
Jiang, J.; Prausnitz, J.M. 2000. Molecular thermodynamics for partitioning
o f na tive and denatured proteins in aqueous two-phase systems. J. Phys.
Chem. B. 104, 7197-7205.
Karr, A.E. 1980. Design, scale-up, and applications o f the reciprocating pate
extraction column. Sep. Sci. Tech. 15, 877 - 905.
6.7. BIBLIOGRAFA
273
Mazzola, P.G.; Lopes, A.M .; Hasmann, F.A.; Jozala, A.F.; Penna, T.C.V.;
Magalhaes, P.O.; Rangel-Yagui, C.O.; Pessoa A. 2008. Liquid-liquid extraction o f biomolecules: an overview and update o f the main techniques.
J. Chem. Technol. Biotech. 83, 143-157.
Mattiasson, B.; Ling, T.G .I. 1987. Extraction in aqueous two-phase Systems for
biotechnology. En: Separations f o r Biotechnology. Verral, M.S. y Hudson,
M.J. (Eds.). Ellis Horwood Limited. New York. 270-292.
Mattiasson, B.; Rajni, K. 1991. Extractivo bioconversions in aqueous twophase Systems. En: Extractive Bioconversions. Mattiasson, B.; Holst, O.
(Eds.). Marccl Dekkcr Inc. New York. 173-188.
Naganagouda, K.; Mulimani, V.H. 2008. Aqueous two-phase extraction (A T P E ):
An attractive and economically viable tcchnology for downstream Process
ing o f Aspergillus oryzae a-galactosidase. Process Biochem. 43,1293-1299.
Patil, T .A .; Jafarabad, K.R.; Sawant, S.B.; Joshi J.B. 1991. Enzime mass
transfer coefficicnt in aquoos two phasc systcm using packcd extraction
column. Caad. J. Chem. Eng. 69, 548-556.
Porto, T.S.; Silva, G.M.M.; Porto, C.S.: Cavalcanti, M .T.II.; Neto, B.B.; LimaFilho, J.L.; Convert, A.: Porto, A.L.F.; Pessoa, A. 2008. Liquid-liquid
extraction o f protcases from fermented broth by PEG/citrate aqueous
two-phase System. Chem. Eng. Processing. 47, 716-721.
Shao, Z.; Kong, F.; Cao, X. 2009. Phase diagram prediction o f reeyeling aque
ous two-phase Systems formed by a light-sensitive copolymer and dextran.
Korean J. Chem. Eng. 26, 147-152.
Shibukawa, M.; Ichikawa, R.; Baba, T.; Sakamoto , R.; Saito, S.; Oguma, K.B.
2008. Separation selectivity o f aqueous polyethylene glycol-based separation systems: DSC, LC and aqueous two-phase extraction studies. Polymer. 49, 4168-4173.
Stella, A.; Mensforth, K.H.; Bowser, T .; Stevens, G.W .; Pratt, H.R.C. 2008.
Mass transfer performance in Karr reciprocating pate extraction columns.
Ind. Eng. Chem. Res. 47, 3996-4007.
Wisniak, J.; Schorr, G.; Zcovsky, D.; Belter S. 1990. Extraction o f mcrcury(Il)
with sulfurized jojoba oil. Ind. Eng. Chem. Res. 29, 1907-1914.
C aptu lo 7
Adsorcin
7.1.
Introduccin
276
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.1: Las etapas de la adsorcin como proceso unit ario. Adsorcin, Lavado,
Elucin y Regeneracin. Fuente: Clonis,1990. iiepro<iuci<in con ci permiso de Marcd
Dckkcr Inc. Copyright 1990. Todos los derechos reservados.
7.2.
Fundamentos
7.2. FUNDAMENTOS
277
7.2.1.
7.2.2.
Tipos de Adsorbentes
278
CAPTULO 7. ADSORCIN
Adsorbentes fsicos
Actualmente se utilizan diferentes tipos de adsorbentes en la operacin de
adsorcin. En el caso de la adsorcin fsica, el adsorbente ms utilizado en
bioscparaciones es el carbn activado (vegetal) y la slica gel (Fig. 7.3a). Existen
varias formas de slica gel como la de borosilicato poroso y las aereogeles.
Figura 7.3: Estructuras bsicas de adsorbentes, a) Adsorbentes fsicos y b) Zeolitas de intercambio inico
Tambin son utilizadas como adsorbentes fsicos resinas sintticas. Las resinas
no polares derivadas del estireno-divinilbenceno son utilizadas para la adsorcin
de solutos no polares a partir de solventes polares. Las resinas basadas en steres
acrbeos tienden a ser ms efectivas para remover solutos polares de solventes
no polares.
Adsorbentes inicos
Los adsorbentes utilizados en intercambio inico pueden ser inorgnicos, sin
tticos u orgnicos. Los inorgnicos como las zeolitas son poco utilizados para
aplicaciones biotecnolgicas (Fig. 7.3b). Los adsorbentes inicos sintticos estn
formados por matrices de polmeros unidos lateralmente, como la poliacrilamina,
polimetacrilato y el policstireno devinilbenceno. A la matriz se le unen grupos
funcionales que le dan la capacidad de intercambio inico.
7.2. FUNDAMENTOS
279
Adsorbentes hidrofbicos
Los adsorbentes hidrofficos se fabrican de carbohidratos como la agarosa
entrecruzada (Sefarosa), dextrao (Sefadex) y celulosa (Celufine). Tambin se
utilizan matrices de slica y polmeros sintticos. Los ligandos pueden ser alcanos
lineales de 1 a 8 carbonos tpicamente, grupos aromticos como el fenilo y ligandos de hidrofobicidad media como el polietilengligol (P E G ), polipropilenglicol
(P P G ) y politetrametilenglicol (P T M G ).
Adsorbentes de afinidad
En la adsorcin por afinidad el adsorbente consta de dos partes, el soporte
o matriz y el ligando. El ligando se une a la matriz por medio de un brazx) que
evita impedimentos esfricos en un determinado arreglo (Fig. 7.5).
Las matrices utilizadas en la adsorcin por afinidad son fabricadas de polmeros
naturales y sintticos como: Celufine, poliacrilamida (o derivados), Sefadex y Se
farosa (Fig. 7.6).
280
CAPTULO 7. ADSORCIN
Propiedad
Slice
Celulosa
Estabilidad
Reactividad
Permeabilidad
Especificidad
No. de ligandos
Costo
buena
alta
buena
baja
bajo
bajo
buena
alta
baja
baja
bajo
bajo
Material
Poliacri lamida
buena
alta
buena
baja
alto
medio
Agarosa
buena
baja
buena
alta
alto
alto
7.2. FUNDAMENTOS
281
Tipos de ligandos Los ligandos son molculas de alta afinidad por el soluto
de inters y pueden ser de varios tipos (Fig. 7.8).
a) Bioespecfeos estrictos:
Sustratos para adsorcin de enzimas.
Antgenos para adsorcin de anticuerpos.
Sondas para obtencin de cidos nucleicos.
Protenas acarreadoras para obtencin de hormonas.
b) Bioespecficos amplios: Cofactores y lectinas.
c) Pseudocspccficos biolgicos: Aminocidos.
d) Pseudoespecficos no biolgicos: Colorantes y metales.
7.2.3.
Relaciones de Equilibrio
282
CAPTULO 7. ADSORCIN
Langmuir y d ) lineal (Hall et al., 1966). Las Isotermas irreversibles son caracte
rsticas de sistemas altamente especficos. Las isotermas tipo FYeundlicli normal
mente se presentan en sistemas de adsorcin por intercambio inico. La adsor
cin por afinidad generalmente presenta isotermas tipo Langmuir. La isoterma
lineal es menos comn, pero puede ser utilizada para aproximar otras isotermas
en la regin de baja concentracin de soluto.
(7.1)
283
7.2. FUNDAMENTOS
Figura 7.8: Tipos de ligandos en adsorbentes de afinidad. Adaptada de: Vijayalakshmi, 1989. Reproducida con d permiso de EIscvier Science Inc. Copyright 1989. Todos
los derechas reservados.
(7.2)
1
q
qm c
+ _L
qm
(7.4)
de tal manera que en una grfica cartesiana de l/q vs 1/c, se puede obtener una
recta de pendiente K d/qm y ordenada en el origen \/qm. Las unidades de qm y
K d de esta isoterma son las mismas que las de q y c, respectivamente.
284
CAPTULO 7. ADSORCIN
Irreversible
(7.5)
ki
[sitios ocupados]
(7.6)
285
7.2. FUNDAMENTOS
(7.7)
>
(7.9)
[NaR] [H+ ]
(7.10)
(7.11)
/(-[H+] + [Na+ ]
como q es proporcional a [NaR] y qrn es proporcional a [R~], la adsorcin inica
monovalente puede ser descrita por medio de una expresin tipo Langmuir,
siempre y cuando la concentracin [H+] permanezca constante: como en el caso
de que se utilice una solucin amortiguadora. En el caso de adsorciones inicas
no monovalentes el anlisis anlogo frecuentemente conduce a expresiones tipo
Freundlich.
286
CAPTULO 7. ADSORCIN
q (mg/mL)
Log{c)
Log(q )
1/c
1/q
0.05
30.00
43.70
56.53
73.85
76.81
78.37
-1.30
- 1.00
-0.70
1.477
1.640
1.752
20.00
10.00
0.00
1.868
1.00
0.30
0.60
1.885
1.894
0.50
0.25
0.0333
0.0229
0.0177
0.0135
0.0130
0.0128
0.10
0.20
1.00
2.00
4.00
5.00
Solucin:
La solucin se presenta en forma grfica en la Figura 7.10. De acuerdo con
la Figura 7.10a, una Isoterma lineal no se ajusta a los datos. La grfica log-log
de los datos (Fig. 7.10b) no produce una lnea recta, por lo que la isoterma no
es del tipo Freundlich. Utilizando el mtodo del doble recproco se encuentra
que la isoterma de Langmuir presenta un buen ajuste a los datos (Fig. 7.10c).
La ordenada en el origen es 0.0125, entonces qm = 80 mg/mL. La pendiente de
la recta es igual a 1.0 x 10-3 , por lo que K d = 0.08 mg/mL. En la Figura 7.10d
se presentan los datos experimentales y la lnea continua representa el modelo
de Langmuir ajustado.
7.2.4.
Cintica de la Adsorcin
7.2. FUNDAMENTOS
287
Figura 7.10: Solucin grfica del Ejemplo 7.1. a) Datos experimentales, b) Isoter
ma de FYeundlich, c) Isoterma de Langmuir y d) Datos y modelo ajustado de
Lagmuir.
Mecanismos de transporte
El estudio de los mecanismos de transporte consiste en establecer las ex
presiones de la rapidez de la adsorcin a nivel local, es decir considerando el
comportamiento de una partcula de adsorbente o un elemento de volumen de
un sistema.
En los procesos de adsorcin se utilizan materiales porosos que ofrecen una
gran rea por unidad de volumen con el propsito de recuperar la mayor cantidad
de soluto posible en un volumen dado. Para que una partcula de soluto pueda
ser adsorbida en la superficie de un poro del adsorbente, el soluto tiene que
pasar del seno de la fase lquida a la superficie del adsorbente (Fig. 7.12).
Varias resistencias al movimiento del soluto existen en este proceso que
pueden visualizarse principalmente como:
a) Resistencia de la pelcula del lquido que rodea el adsorbente. Primero el
soluto difunde desde el seno del lquido a travs de la pelcula de lquido que
rodea a la partcula de adsorbente.
b) Resistencia a la difusin en el seno del adsorbente. En algunos tipos de
adsorbentes el soluto difunde a travs del seno del adsorbente. A este fenmeno
se le conoce como difusin en la fase del adsorbente.
c) Resistencia a la difusin dentro del poro. Debido a que el rea de la super-
288
CAPTULO 7. ADSORCIN
Reproducida con
el permiso de M&rccl Dckkcr Inc. Copyright 1990. Todos los derechos reservados.
ficie interior del poro es mucho mayor que la superficie exterior, generalmente
la adsorcin se efecta principalmente dentro del poro, por lo que el soluto debe
difundir a travs del lquido al interior de los poros.
d)
Resistencia a la reaccin en la superficie. El soluto una vez situado en el
sitio de adsorcin se une a ste por medio de una reaccin de superficie, la cual
es un proceso finito pero generalmente ms rpido que los procesos anteriores.
C o n tro l d e la resisten cia en la p elc u la Las resistencias anteriores actan
combinadas en serie y en paralelo como puede apreciarse en la Figura 7.12.
Particularmente, la resistencia de la difusin en el poro puede relacionarse di
rectamente con las otras dos. Generalmente la resistencia de la pelcula o la del
poro o una combinacin de ambas, controla la velocidad de adsorcin local.
Cuando la resistencia de la pelcula es mucho mayor que la del poro o la de
la reaccin de superficie, la velocidad de adsorcin est controlada a nivel local
por el flqjo del soluto a travs de la pelcula que rodea al adsorbente. En este
caso la velocidad de adsorcin puede expresarse como:
= k L a(c - c *)
(7.13)
donde:
k f. Coeficiente de transferencia de masa. \M /(T L 2 - A / L 3 lquido)].
a: rea especfica del adsorbente. [L 2/L3].
c: Concentracin de soluto en el seno de la fase lquida. [A /L3].
c*: Concentracin hipottica de soluto en el lquido, en equilibrio con la con
centracin de soluto en el adsorbente. [Af/L3].
289
7.2. FUNDAMENTOS
= 7dp-
(7>4)
(7.15)
290
CAPTULO 7. ADSORCIN
(7.16)
D ab
Rep -
(7.17)
Pl
(7.18)
Se = r
P^Dab
k, =
^L).m
dv
+ 0.31
(7.19)
(7.20)
(7.21)
ah
= 3.31 x 10" 15
/xL(p6)2/3
donde:
D a b : Difusividad. [m2/s].
v: Velocidad superficial del lquido (Flujo/rea). [m/s]
fi: Viscosidad, [kg/m-s].
T : Temperatura. [Kj.
M a . Peso molecular soluto.
bp: Nmero de pares de bases del plsnudo.
(7.22)
291
7.2. FUNDAMENTOS
di
n ( d2q ,
2&A
*\ d r2
rd r)
donde:
D a: Difusividad efectiva del soluto en la fase slida. \{L2/t)\.
r: Coordenada radial al interior de la partcula. [L\.
q-. Concentracin de soluto en la fase slida [M / L 3].
Fu erza im p u lsora lineal en la su p erficie ( L D F ) La ecuacin (7.23)
suele ser aproximada utilizando una fuerza impulsora lineal expresndose de la
siguiente forma:
^
(7-24)
60D ,
(7.25)
4
C o n tro l d e la d ifu sin d e l solu to en la fase lqu id a al in te rio r d e los
p oros Cuando la velocidad de adsorcin est controlada por la difusin del
soluto al interior de los poros de la partcula de adsorbente, hasta el sitio de
adsorcin, el balance de soluto al interior de la partcula est dado por la ex
presin:
dct _
6tdt
/ 0a*
20 c A
lD' \ d r 2 + r d r )
.%
(1
dt
(7.26)
292
CAPTULO 7. ADSORCIN
En el caso en que la acumulacin del soluto al interior del poro sea mucho
menor que la velocidad de la adsorcin, la ecuacin (7.26) puede ser escrita
como:
(7.27)
para lquidos la difusividad D x puede ser expresada como:
Di =
L>a b
(7.28)
(7.29)
^ Q= co^D ,
{7 30)
ap
C o n tro l d e la reaccin d e su p erficie Generalmente la reaccin de adsor
cin en la superficie del adsorbente es mucho ms rpida que los otros meca
nismos y rara vez es el mecanismo controlante. En las expresiones cinticas
ms utilizadas la reaccin de superficie es tratada como una reaccin qumica,
reversible o irreversible, de un cierto orden.
Dos expresiones conninmente utilizadas principalmente para sistemas de in
tercambio inico, son:
Cintica reversible de primer orden:
Oq
Ot = e k l c - k - l q
(7.31)
- q ) - fc-,9
(7.32)
293
7.2. FUNDAMENTOS
E fectos d e m e zc la d o
P lil p la n o d e v o lo o d a d
F lu d u n o o n e . d e b d o s a
d ilu c i n m o l c u la / y
tu b u to n a o
x
^
x
*
___
K__
---------------------
*
w
'
Figura 7.13: Modelo de flujo tapn con dispersin. Adaptada de: Levenspiel,
1962. Reproducida con el permiso de John W ilcy and Sons. Copyright 1962. Todos los derechos
reservado*.
(7.33)
donde:
Dax'. Coeficiente de dispersin axial. [L 2/t\.
u: Velocidad superficial de flujo. [L/t].
Es conocido que para flujo laminar de lquidos en lechos empacados (caso
ms comn) el nmero de Reynolds basado en el dimetro de las partculas del
lecho es menor a 10. Bajo esta consideracin el nmero de Pcclct (el cual es una
medida del grado de dispersin en la columna) toma un valor constante de 2
(Fig. 7.14) entonces,
P e = L = 0.5
D az
(7.34)
294
CAPTULO 7. ADSORCIN
7.3.
= kda ( c - c ' )
(7.35)
Equipos de Adsorcin
Figura 7.15: Sistemas de adsorcin tipo tanque agitado, a) Por lotes y b) Con
tinuo.
295
7.4.
Diseo de Adsorbedores
7.4.1.
296
CAPTULO 7. ADSORCIN
Solucin
Alimentacin
de
lavado
Cido 1
Producto
Solucin
agotada
Solucin de
lavado
Alimentadn
Cido 2
Produdo
Soludn
agotada
Soludn Produdo
agotada
297
muir.
298
CAPTULO 7. ADSORCIN
V*
FCs
f c,
Sq,
1I
(7.36)
El balance de masa del soluto de acuerdo a la Figura 7.18 puede ser expresado
como:
F cq + Squ = F c 2 + Sq
(7.37)
299
(7.38)
Se pide:
Estimar la cantidad de resina necesaria para procesar 100,000 L de un caldo
de fermentacin que contiene 6 g/L de estreptomicina en una operacin por
lotes.
Solucin:
El balance de masa para esta operacin es:
S (q 2 - qo) = F (c o - C2)
con los valores: Qo 0; q2 1.56 g/g; C2 = 0, se puede calcular S:
Fcn
100.000 L x 6
S = -----= ---------------^----- = 384,615 g de adsorbente
<72
1.56 g
Como puede observarse se requiere una gran cantidad de adsorbente. Esto
implica que sera adecuada ma operacin continua, sin embargo el problema
que significa el movimiento continuo de los slidos, conlleva a utilizar con ms
frecuencia operaciones semi-oontinuas.
E je m p lo 7.3. A d s o rc i n d e fenilalanina.
La adsorcin de fenilalanina en un adsorbente de policstircno (amberlita
X AD -2) puede ser descrita por la siguiente isoterma:
g = 6.1 x 10 3 c0 0
300
CAPTULO 7. ADSORCIN
donde q tiene unidades de g/g y c de g/L. En una operacin por lotes se ponen
en contacto 300 g de adsorbente con 2.0 L de solucin que contiene 15 g/L de
fenilalanina.
Se p id e estim ar:
a) Las composiciones en el equilibrio.
b) El porcentaje de recuperacin.
Solucin:
Util 7ando el mtodo grfico el balance de masa para esta operacin (ecuacin
7.38), permite encontrar la ecuacin de la lnea de operacin.
= 0 + 35(1 5 - a)
a) La curva de operacin y de equilibrio se grafican en la Figura 7.19, el
punto donde intersectan representa las condiciones al final de la operacin, por
lo tanto:
q2
0.042 g/g
c2
8.6 g/L
Re =
hc x 100 =
F cq
x
cq
301
<72 =
(2 - c2)
en el equilibrio:
02 0.087 C2
y de acuerdo con la recuperacin deseada, c2 = O.lco.
Combinando las dos expresiones anteriores se puede encontrar la interseccin
de la curva de operacin con la de equilibrio.
q = 0.0174 g de soluto/g de adsorbente
c 2 = 0.2 g de soluto/L
del balance de masa,
S = 206.9 g
T e o ra cin tica
Gran parte de la informacin necesaria para evaluar el comportamiento de los
procesos adsorcin est contenida en las curvas de los perfiles de concentracin
(c vs t). Estas curvas pueden ser utilizadas para determinar: a) la capacidad
del adsorbente que ha sido utilizada, b) la cantidad de soluto que no se adsorbe
al final de la operacin y c) el tiempo de proceso. Asimismo, para estudiar
el efecto de las variables de operacin sobre el comportamiento del sistema
Un modelo matemtico que pueda usarse para predecir apropiadamente este
comportamiento dinmico, proporciona una forma prctica de obviar muchos
experimentos, adems de ayudar en el diseo y escalamiento de los procesos de
adsorcin.
302
CAPTULO 7. ADSORCIN
Velocidad de acumulacin
(7.39)
(7.40)
c = cQ;
<7= 0
(7.41)
303
(742)
La ecuacin para describir el cambio de concentracin de soluto en el fluido
de los poros del adsorbente puede ser obtenida mediante un balance de soluto
en la partcula.
(& *
2dd\
\ d r2 + 7 d r )
(7.43)
304
CAPTULO 7. ADSORCIN
(7.44)
c = ca
(7.45)
en t = 0
Ci = 0,
0 < r < rm
(7.46)
en t = 0
9 = 0,
0 < r < r tn
(7.47)
r = 0
dCi
= 0,
dr r=0
t >0
(7.48)
en r r.
dcj
k , (c
c)lrs=rm *D ~dr
t > 0
(7.49)
Este modelo de tres resistencias en serie no tiene una solucin analtica, debe
ser resuelto por mtodos aproximados.
M o d e lo d e p a r m etro s agru p ad os El modelo de parmetros agrupados
(Chase, 1984) utiliza un enfoque emprico sencillo para describir el proceso de
adsorcin, donde se supone que todos los procesos que limitan la velocidad de
adsorcin del soluto pueden ser representados por las constantes cinticas. Este
modelo ha sido utilizado para simular la adsorcin de protenas en adsorbentes
porosos (Aboudzadeh, et al., 2006; Horstmann.y Chase, 1989). Se supone que
las constantes agrupan todas las resistencias del proceso.
En este enfoque la velocidad de transferencia de masa de 9oluto al adsorbente
se describe por una cintica de segundo orden:
da
-j = k ic (q m - q ) - k - i q
(7.50)
305
l V
9=
;(c o -c )
( l - e b) V
(7.51)
0 -g )
~dt
gfe/f-! (Cp ~ C) 1
b{co-c)'
( l - e 6) .
< l - * 6)
La solucin analtica de la ecuacin anterior est dada por:
1 exp
(b + a)
= 1Co
2 n (1 ~ b ) ( M
(1 ~ b )
bCo
j - exp
(7.52)
(7.53)
j
donde:
Cob
a 2 = 62 -
b=l
Cob
2 [O - )
+ (m +
(7.54)
Qtn
Kdb
(7.55)
40 c
0.019 + c
(min)
(mg/mL)
(min)
(mg/mL)
0.00
0.500
40.24
0.272
1.95
0.443
80.49
0.223
4.88
0.416
120.00
0.199
6.10
0.396
159.76
0.181
9.76
0.368
200.00
0.171
19.51
0.324
240.24
0.165
306
CAPTULO 7. ADSORCIN
Qm ~
0.5 mg/mL
25.25/25.50 = 0.9902
0.019 mg/mL
40 mg/mL
1 f0.5 x 0.9902
2 (1 -0.9902)
0.019 x 0.99021
(1 -0.9902)
a 2 = (46.21)2 -
0.5 x 0.9902'
(1 -0 .9 9 0 2 )
= 46.21
x 40
a = 10.74
de tal manera que:
c
Co
(1.9794 x 10"2) |
La expresin anterior puede ser evaluada en el intervalo de 0 < t < 2-10 min
utilizando como parmetro de ajuste k \(parmetro agrupado). Los resultados
se muestran en forma grfica en la Figura 7.22 con k\ 0.001 niL/mgs.
307
Figura 7.22: Perfil de concentracin de ImG del ejemplo 7.5. (o) datos ex
perimentales. ( - ) ajuste del modelo de parmetros agrupados con k\ 0.001
m L/m g-s.
i = - ( i ^ r ) fct0(c- c )
(A )
,= (r=rr)(c - e)
(B )
La expresin de equilibrio:
_
q
qmc m
K d + c
(C )
c = co;
<7 = 0
(D )
308
CAPTULO 7. ADSORCIN
Adsorbente
Protena
Solucin
V
Pp
M
Pl
90 x 10" m
1028 kg/m
150.000 Da
1000 kg/mJ
9.5 x 10-4 kg/m -s
D AB = 9-4 x 10"15 x
m
298
= 5.5 x 10- n
kL
2DAb
dp
+ 0.31
(
Pl \
\P p D a b J
/ ( &PP l 9 \ ' /
\ Pp )
309
2 x ^5.5 x 1Q- 11 ^
kL
90 x lO " 6 m
9.5 x 10" 4
kg
-2/3
1 1/3
kL
4 x 10" 6
m
s
dp ~ 90 x 10~e m
= 6.67 x 10* m _1
i =
e, =
0.96
0.4
310
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.23: Programa principal y funcin para la solucin del Ejemplo 7.6
7.4.2.
311
Figura 7.24: Perfil de concentracin de ImG del Ejemplo 7.6. (o ) datos experi
mentales. ( - ) ajuste del modelo de resistencia en la pelcula con: a ) Ic l = 4 x 10-6
in/s y b )
= 4 x 10 7 m/s.
M o d e lo s d e teo ra c in tic a
Para un adsorbedor continuo tipo tanque agitado el modelo que describe
la adsorcin, debe integrar la isoterma de adsorcin, el balance de masa, la
312
CAPTULO 7. ADSORCIN
Velocidad de acumulacin
(7.56)
(7.57)
c = 0;
3= 0
(7.58)
313
(7.59)
donde
es nuevamente el coeficiente de transferencia de masa, a es el rea de
adsorbente por unidad de volumen de mezcla, c es la concentracin de soluto en
el seno del lquido, y c* la concentracin hipottica de lquido en equilibrio con
la concentracin de soluto en el adsorbente.
La isoterma de adsorcin lineal se puede expresar como:
q K c*
(7.60)
314
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.27: Perfil de concentracin de ImG del Ejemplo 7.7. (o ) datos exper
imentales. ( - ) ajuste del modelo de tres resistencias con fcL = 4 x 10-6 m/s,
k\ = 1.0 mL/mg -8 y D i = 6.0 x 10~12 m2/s.
cp - c _
cq
r2 erit _ n era*
(r2 - r i )
(r2- r , )
(7.61)
315
r-
- B + v/R2 - 4A C
2A
- B - V B * - 4A C
2A
1
F
kL a{ l - b)
bV
eb
(1+ ( ! - ) * )
F k La
eiK V
316
CAPTULO 7. ADSORCIN
Solucin:
a) Las constantes A. B y C estn dadas por:
A
1.0
0.8 x 1.0 L
0.8
] ( 1+ 2lTu)
= 84.59 h _1
312 h " 1 x 3 r
-2
______________ h_
= 10.63 h
0.8 x 110 x 1.0 L
"
-------------------------------- 2--------------------------------
-0.126 b - 1
r2 =
-84.46 b - 1
J
Recuperacin =
Fcodt -
Fcdt e V c
0_________ o_____________
t
Fcodt
0
combinando la expresin anterior con la ecuacin (7.61),
Recuperacin
efectuando la integracin,
317
t Recuperacin
t -
=
, / l i
F 1
l
T2
(eT -l) +
(erat - 1)
r ifa - r i)
r 2(r 2 - n )
r2er,t
r2 ~ ri
i r,er " i
r 2 - r, )
t
sustituyendo valores,
0.9
de donde:
t = 1.2 h
b) La expresin de la concentracin adimensional a la salida del tanque es:
C
0 1
co " "
84.46c-0-1261
-0 .1 2 6 c-84-4
-84.46 + 0.126 + -84.46 + 0.126
bV7 t = F (c - c) - V R
( 7-62)
318
CAPTULO 7. ADSORCIN
en = 0
c = 0;
q = 0
(7.64)
6^
^6
Kd q
*'
(7.65)
(9m~g)J
'
(<7m - </).
(7.66)
7.4.3.
A d s o rc i n en L ech o F ijo
319
Curva de ruptura
En la descripcin de la adsorcin en columna se utilizan grficas de la
variacin de la concentracin de soluto a la salida de la columna con el tiempo,
llamadas curvas de ruptura. La prediccin del comportamiento real de la curva
de ruptura (anlisis frontal), permite disear columnas para lograr cierto grado
de recuperacin, estimar las prdidas y determinar el tiempo tu de cada ciclo,
as como para estimar dimensiones y arreglos de los equipos para la fase de ad
sorcin. Esta es la informacin requerida para optimizar la separacin (Arnold
et al., 1985; Yang y Tsao, 1982). En la Figura 7.31 se presenta un esquema de
adsorcin en una columna de longitud L (la columna se presenta acostada slo
para efectos explicativos).
320
CAPTULO 7. ADSORCIN
321
At =
<1m S
F cq
1.56 ^ x 10,000 g
min
L
h
En la Figura 7.32 se presenta un esquema de la columna y de la cuna de
ruptura para este ejemplo.
Produccin
cq
8 x 10 -JL
4- x
F
ao
20
ano
310 da
r-
da
= 5.37 x 10
n
322
b)
CAPTULO 7. ADSORCIN
Clculo de la cantidad de resina necesaria en proceso.
r,
5.37x10* l- x 20 f
L de resina
S = t ^ = --------------- t -------- 9,763
qrn
c)
no f
Resistencia
Controlante
Efecto
Mezclado
Lineal
Favorable
Desfavorable
Irreversible
Poro
Superficie
Pelcula
Combinadas
323
A n lisis a p ro x im a d o
El mtodo de anlisis aproximado es especialmente til cuando las isotermas
del sistema son favorables. Bajo estas condiciones, se supone que la adsorcin se
desarrolla formndose una zona de transferencia de masa dentro de la columna
con un perfil de concentracin constante que viaja a lo largo de la columna
(Fig. 7.33).
= O.lco y Cs = 0.9c<>
324
CAPTULO 7. ADSORCIN
(7.67)
donde
II
16
* -
y L la longitud de la columna.
Combinando las expresiones anteriores se obtiene:
(7.68)
(7.69)
0=
f(c o )L
0 = 1-
(7.70)
La fraccin de lecho utilizado dada por la ecuacin (7.70) debe ser obtenida
experimentalmente y puede ser utilizada para escalamiento. En este proceso, la
longitud de la columna y la velocidad de alimentacin deben permanecer iguales
en ambas escalas para mantener el mismo patrn de adsorcin. Esto conduce al
diseo de columnas poco esbeltas con poca cada de presin en las cuales debe
asegurarse ma distribucin uniforme del lquido.
325
Velocidad de acumulacin
(7.71)
326
CAPTULO 7. ADSORCIN
(7.72)
= F {c -l - c n)
(7.73)
= [e + (\ -e )K ]V
Para
t = 0,
Para todo
Cn = 0
t = t,
para
n = 1,2,3,4,... N
c(ah mentacin) = cq
(7.74)
NFt
T ~ [ e + ( \ -e )K \ V c
donde iV es el nmero de etapas.
La ecuacin (7.73) queda expresada como:
327
Cn=CO
l- c "T
(7.76)
CpTn
1e r
(7.77)
(n 1)!
dr
dc .
dr
\ 1(
Cp
( 2tt) * o a CXP [
2{
oA
t0
(7.78)
V=
T -T 0
2?<ta
(7.79)
328
CAPTULO 7. ADSORCIN
E rf(x ) = -j= J e
r'2di]
o
En la Figura 7.35b se presenta la curva de c(L , r ) vs r para el caso de
N = 100. En la misma figura se presenta la curva para la derivada de la funcin:
co
dr
La ecuacin (7.79) puede ser expresada en funcin del tiempo real utilizando
la definicin de r para obtener:
c(L ,t)
co
1+ E r f
\
t-to
2* 0
(7.80)
\ V )
La ecuacin (7.80) describe la curva de ruptura que predice la teora de
platos. Esta permite caracterizar columnas mediante el ajuste de datos experi
mentales y la determinacin de los parmetros hipotticos N y I I E T P dados
por la ecuacin:
H E T P = jj
(7.81)
329
c(z.)
P e l c u la
tn tra d a do
A peo
d u p o 'iK J n
A do o cdo n do A . . |
fcA
Acum ulacin
do A
z L
b M
ld t
A por
eonvocoon
S M M todO
AP
c<L.t>
Acumulacin
gA V c| t+A< - g A Vc\t
Fc\z - Fe\z+Az
At
-R A V
dividiendo entre A V = A A z y tomando lmites, se obtiene la ecuacin diferen
cial que describe el balance de soluto en una columna:
dc
di ~
cPe
dc _
5 + v ~dl ~ ~ 7
(7.82)
330
CAPTULO 7. ADSORCIN
<783>
con,
= ( ! - * )
(7.84)
de dt
de
dq de
e d t ~ ~ vd z ~ ^ ~
4 + (1- ) ^
^ d t
de
de
dt
m dz
rearreglando,
de
di
ev
(7.85)
331
S-
ev
-& L _
de
fz
(7.86)
+ ( , - ) ^
S-"
d*c
de
3 (1 - e)
* d z 2 + v dz ~
k. ( c - c , ) | ra
(7.87)
2 dCi\
\dr* + r d r )
(7.88)
332
CAPTULO 7. ADSORCIN
= k ia (Qm - qi) ~ k - i q i
(7.89)
c = 0,
0< z < L
(7.90)
en t = 0
Ci = 0,
0 < r < rm
(7.91)
en t = 0
Qi = 0,
0 < r < rm
(7.92)
Las condiciones frontera que se utilizan para la columna son las de Danckwerts (Danckwerts, 1953) que consideran dispersin a la entrada de la columna
y mezclado perfecto a la salida,
en
en
z 0
z= L
v c \q - c D
de
-
de
QXd~z 2=0
= eveo
= 0,
t > 0
(7.93)
t> 0
(7.94)
t >0
(7.95)
t >0
(7.96)
2= L
r = 0
= 0,
r=0
en r = r.
fc/, ( c - C i ) l ,
333
de .
de
= - ( 1 - ) ?
+^
(7-97)
(7.98)
= f(c,q )
q 0
(7.99)
z = 0
c = Co
(7.100)
en
.d q
(7.101)
^
= - (1 ~ ) F
Las soluciones particulares de este sistema de ecuaciones se obtienen adimen
sional izando el modelo anterior utilizando los siguientes grupos adimensionales
de las concentraciones:
X =
Y = -2Co
(7.102)
<7o
(1 - e ) q m
donde T es el factor de separacin y r es el tiempo adimensional dados por:
T= i+lv
(7-104)
(7.105)
334
CAPTULO 7. ADSORCIN
(1 - e ) g mk iL
Hk =
(7.106)
ev
(1 - e ) k LaL
Nl =
(7.107)
ev
15(1 - e ) e xD i L
.108)
rm
2 ev
(7.109)
= k ic (q m - q ) ~ k - iq
(7.111)
En este caso particular, se tiene una solucin analtica del modelo no disper
sivo que 9e expresa de la siguiente forma:
_________J(f^)
j
( y , n t ) + [ 1 - J ( Ar ;T ' ) ] exP
(1 - -f)(V - JVT)
(7.112)
335
(7.113)
0.00
0.000
100.43
0.500
50.43
0.0-11
107.57
0.598
71.86
0.095
114.71
0.696
75.43
0.187
118.28
0.810
86.14
0.288
125.43
0.899
93.28
0.383
161.14
0.975
V a lo r
cQ = 7.14 x lO -3 mol/nv1
F = 1.67 x 10" 8 m V s
L = 0.014 m
C d 0.01 m
e = 0.39
rm = 5 x 10-& m
K d = 1.748 x 1 0 '* mol/m3
q,n = 1.333 mol/m -5
^
\ K d + c0J
(7.114)
336
CAPTULO 7. ADSORCIN
(7.115)
de esta manera se reduce considerablemente la complejidad del modelo (Helfferich y Carr, 1993). Matemticamente, la operacin de patrn constante ase
meja una operacin a contracorriente con una lnea de operacin con pendiente
de 45 (Vermculen et a, 2007).
Cuando una isoterma es favorable, slo en la regin inicial de la columna la
Z T M se ensancha conforme avanza, pero a cierta distancia alcanza una forma
asinttica como ZTM estable sin cambios adicionales. La forma de la curva de
ruptura depende slo del paso limitante de la adsorcin.
Tericamente es posible alcanzar un patrn constante slo cuando el equili
brio es favorable, dado que es el nico tipo de equilibrio que tiende a compactar
la Z T M y compensar los efectos dispersivos de la resistencia a la transferencia de
masa. En la prctica, la suposicin de patrn constante es generalmente vlida
para sistemas de equilibrio muy favorables o irreversibles (Yang yTsao, 1982).
Cuando el equilibrio es de tipo Langmuir c > K y el factor de separacin T > 1.
En equilibrios irreversibles c
K, y T * oo. En este caso la concentracin
adimensional a la salida de la columna se reduce a:
X = f (T ,N )
(7.116)
337
(7.117)
N p { T - 1)
3^6
(7.118)
(7.119)
338
CAPTULO 7. ADSORCIN
q = Kc *
(7.120)
o
Velocidad de transferencia de inasa.
(7.122)
R = (1 - e)k,a(c - c*)
Balance de soluto en el adsorbente.
(1 - e ) - = R
(7.123)
> 0, 2 = 0,
<7= 0
c = Cq
~VTz
= (1 _
^La (c
# )
( l - e ) ^ = ( l - e ) ^ a(c--| )
(7-124)
(7.125)
NT
( 1 - )kLaL
ev
kLa
(* - )
K
c
CQ
Q
Kco
339
ON
dY
dNT
-(X -Y )
(7.126)
= (X -Y )
(7.127)
o bien
dY
dX
dNT~
dN
(7.128)
N = 0,
y=
0, V N
X = 0, V N T
X = 1-
(7.129)
o
donde i = y/l, y Jo es una funcin Bessel de primer tipo y orden 0.
En la Figura 7.39 se presenta una solucin grfica de la ecuacin (7.129).
Esta grfica puede ser usada para evaluar k^a a partir de datos de laboratorio o
predecir curvas de rompimiento utilizando correlaciones para kLa. Sin embargo,
es importante recordar que las consideraciones del modelo deben ser aplicables
al caso particular.
Cuando el equilibrio es lineal estos resultados son anlogos para cada uno
de los casos donde mi mecanismo es el controlante, de tal manera que N o el
nmero de unidades de transferencia que se puede utilizar en la ecuacin (7.129)
es cualquiera de los establecidos en las ecuaciones (7.106)-(7.108), debido a que
para un equilibrio lineal (Y * - Y ) = ( X - X *). La curva de ruptura tiene igual
forma independientemente del mecanismo controlante (Hall et al., 1966).
Este modelo puede ser utilizado para predecir curvas de ruptura a partir
de correlaciones para k^a y para obtener valores de este coeficiente a partir de
datos experimentales de curvas de ruptura utilizando la Figura 7.39.
340
CAPTULO 7. ADSORCIN
341
(7.130)
(7.131)
jd z = j
o
co
de
(c - c * )
integrando se obtiene:
m
]
{ l - e ) k La\
Co
de
J (c - c * )
.c
(7.132)
o bien,
L = [IIT U ][N T U \
donde HTU es la altura de una unidad de transferencia y NTU es el nmero
de unidades de transferencia.
La aplicacin de este mtodo requiere una integracin numrica de datos
de laboratorio para evaluar kLa, con el cual se pueden efectuar estudios de
escalamiento.
342
CAPTULO 7. ADSORCIN
1+ E rf
\ V
I 2 ____
2*
(7.133)
k,aL
v
dP
entonces,
L
v '/ ' 2
Anlogamente, cuando el mecanismo controlante es la difusin del soluto en
el seno del adsorbente,
N ~
L
vdl
343
N ~
L
vd l
De tal manera que para el modelo combinado lineal se puede generalizar que:
N ~
(7.134)
Con:
n = 1/2 para control de la pelcula,
n = 1 para control de la difusin en el slido,
n = 1 para control de la difusin al interior del poro,
n = 0 para control de la dispersin.
Datos de la solucin:
dp = 90 x 10" m
e = 0.35
p = 1028 kg/m3
qm = 43 mg/mL
K d 0.019 mg/mL
i = 0.9G
pL = 1000 kg/mJ
p L 9.5 x 10" 1 kg/m -s
F 0.4 cm3/min
E a b 5.5 x 10-11 m^/s
4
d ab
= 2 + 1 .4 5
Hl
\P
l d a b
344
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.41: Curva de ruptura experimental ImG-Protena A. Datos de: Hortsman y Chase, 1989.
Se pide:
a) Estimar grficamente el porcentaje de prdidas si se deja correr la adsor
cin hasta que c/cq = 0. 1.
b) Estimar a partir de la curva de ruptura la fraccin de lecho ocupado
cuando c / cq = 0.1, suponiendo que el locho se agota a los 200 min.
c) Comparar los datos experimentales con la prediccin del modelo de platos.
d) Comparar los resultados experimentales con la prediccin del modelo
cintico: equilibrio lineal-resistencia lineal.
e) Comparar los resultados experimentales con los del modelo de lecho con
tinuo.
Solucin:
a) Las prdidas se pueden calcular mediante la siguiente expresin:
Prdidas =
( 2)( 110)
x 1 0 0 = 0 .9 %
345
[ ( 200- 110)
{ts - r )
1-
1-
2 x 110
= 0.60
Para
Para
c
co
c
0.5
t0 140 min
0.1
Co
/ 1 1 0 - 140'
\
!)1
346
CAPTULO 7. ADSORCIN
Clculos:
Arca de la seccin transversal de la columna:
n x 1.0 cm 2
4
= 0.785 cm 2
Velocidad superficial:
v =
1/2
2 + 1 .4 5
1/3
m s
m
kg
1000 - 4 x 5.5 x 10- 11
kL
m
3 x 10" s
dp
90 x 10-6 m
= 66,666 m
-i
347
(1 - e)k La L
= 41.8
2.67 cm x 0.35
o
, in
100 cm
8.3 x 10" 5 x ---- _________ LLL
NT
NT
8 x 10- 3 ( 112.6)
348
CAPTULO 7. ADSORCIN
c
1.7099
1.7095
1.7090
1.7050
0.5000
0.2000
0.1000
0.0500
0.0300
0.0100
0.0050
'/
42.5250
42.5150
42.5026
42.4031
12.4349
04.9740
02.4870
01.2435
00.7461
00.2487
00.1243
c*
q*
1.7009
1.6657
1.6236
1.3498
0.0077
0.0025
0.0012
0.0006
0.0003
0.0001
0.0001
42.5274
42.5273
42.5272
42.5261
41.4258
39.2694
36.1345
31.1594
26.3265
14.8276
08.9583
1/ (* - < * )
111.7
022.8
011.7
002.8
002.0
005.1
010.1
020.2
033.7
101.1
202.2
^
1(1 - e ) k La
Ic l (i
kLa =
de
Jc (c-c)
m
-Mre)L\
o o
in -l m
100 cm
8.3 x 10 5 x -------____________ ______ m
(1 - 0.35) x 2.675 cm
(1.346)
7.5. SUMARIO
7.5.
349
Sumario
350
7.6.
CAPTULO 7. ADSORCIN
Problemas
7.1.
P a r m etro s d e e q u ilib rio . La Figura 7.45 muestra los datos de equi
librio del sistema para el sistema albmina-S Sefarosa F F a pH = 5 y T = 25
C.
Se p id e : C a la llar las constantes k y qm del sistema
351
7.6. PROBLEMAS
352
CAPTULO 7. ADSORCIN
Resp. 150 L/h
353
7.6. PROBLEMAS
X = 1
2
3
- 0.273Np ( T 1)
354
CAPTULO 7. ADSORCIN
R esp . ktja = 100 h 1
E ta p a
A d sorci n
E lucin
A d s o rb e n te
T ip o A
T ip o B
qm = 0.7 g/L
(]m 0-4 g/L
K d = 0.001 g/L
K d = 0.0001 g/L
q, = 0.005 g/L
q, = 0.001 g/L
K d = 0.001 g/L
K d = 0.05 g/L
9 0.01 + c
(7.135)
355
7.6. PROBLEMAS
0.000
0.000
0.155
9.729
0.019
2.709
0.204
11.023
0.045
3.922
0.338
14.326
0.070
4.402
0.455
14.491
0.107
6.998
Se p id e:
a) Estimar los parmetros de equilibrio qm y K ajustando el modelo de
Langmuir a los datos experimentales, por regresin lineal utilizando el mtodo
del doble recproco.
b) Estimar los parmetros de equilibrio qm y K d ajustando el modelo de
Langmuir a los datos experimentales, utilizando una regresin no lineal.
c) Graficar los datos experimentales, la curva ajustada mediante regresin
lineal y la curva ajustada mediante regresin no lineal, en un sistema coordenado
q vs c. P ista: Se puede utilizar el programa M A T L A B de la Figura 7.46.
7.21 T ie m p o m e d io . Demostrar que en el punto medio de la curva de
ruptura de acuerdo al modelo de platos se cumple que:
356
CAPTULO 7. ADSORCIN
7.7.
Bibliografa
Aboudzadeh, M.R.; Jiawenl, Z.; Bin, W . 2006. Modeling o f protein adsorption to D E AE sepharose FF: Comparlson of data with model simulation.
Korean. J. Chem. Eng. 23, 124-130.
Am old, F.II.; Blanch, II.W .; Wilke, C.R. 1 98 5.1.- Predicting the performance
o f affinity adsorbers. II.- The characterization o f affinity columns by pulse
techniques. Chem. Eng. J. 30, B9-B36.
Belter, P.A.; Cussler, E.L.; Hu, W . 1988. Bioseparations: Doximstream Process
ing fo r Biotechnology. John W iley and Sons. 6, 145-179.
Bird, R.B.; Stewart, W.E.; Lightfoot, E.N. 2002. Transport Phenomena. John
W iley and Sons. New, York. 2da Edicin, p. 755.
Clonis, Y.D. 1990. Process affinity chromatography. En: Separations Processes
in Biotechnology. Asenjo, J.A. (E d.). Marcel, Dckker. New York. 13, 401445.
7.7. BIBLIOGRAFA
357
Chase. H.A. 1984. Prediction o f the performance o f preparativo affinity chromatography. J. Chromatogr. 297. 179-202.
Danckwerts, P.V. 1953. Continuous flow systems. Distribution o f residence
times. Chem. Eng. S c i 2, 219-230.
Draeger, N.M.; Chase, II. A. 1990. Modelling o f protein adsorption in liquid fluidized bods. En: Separations fo r Biotehnology 2. Pylc, D.L.(Ed.). Elsevier
Applied Science. London. 325-334.
Foo, S.C.; Rice, R.G. 1975. On the prediction o f ultmate separation in parametric pumps. A IC h E J. 21, 1149-1158.
Gailliot, F.P.; Gleason, C.; Wilson, J.J.; Zwarik, J. 1990. Fluidized bed ad
sorption for whole broth extraction. Biotech. Prog. 6, 370-375.
Geankoplis, C. J. 1983. 7Yansport processes and unit operations. Allyn and
Bacon, M A, 2nd Ed.
Gebauer, K.H.; Thbmmes, J.; Kula, M R . 1997. Breakthrough performance
o f high-capadty membrane adsorbers in protein chromatography, Chem.
Eng. Sci. 52, 405-419.
Hall, K.R.; Eagleton, L.C.; Acrivos, A.; Vermeulen, T. 1966. Pore and solid diffusion kinetics in fixed-bed adsorption under constant-pattern conditions.
IE C Fundamentis. 5, 212-223.
Helfferich, F.G.; Carr, P.W . 1993. Non-linear waves in chromatography, I.
Waves, shocks, and simpes, J. Chromatogr. A. 629, 97-122.
Hicstcr, N.K.; Vermeulen, T. 1952. Saturation performance o f ion-exchangc
and adsorption columns, Chem. Eng. Prog. 48, 505-516.
ILorstmann, B.J.; Chase, II.A . 1989. Modelling the affinity adsorption o f immunoglobulin G to protein A inmobilised to agarosa matrices. Chem. Eng.
Res. Des. 67, 243-254.
Levenspiel, O. 1962. Chemical Reaction Engineering. John W iley and Sons.
New York. 14, 426-489.
Montesinos, R.M.; Tejeda-Mansir, A ; GuzmAn, R; Ortega, J.; Schiesser, VV.E.
2005. Analysis and simulation o f frontal affinity chromatography o f proteias. Sep. Purif. Technol. 42, 75-84.
Payne, G.F. 1989. Bioseparations o f traditional fermentations producs. En:
Chemical Engineering Problems in Biotechnology. Schuler, M .L. (Ed). AIChE.
New York. 1, 183-207.
Polson. A. 1950. Some aspeets o f diffusion in solution and a defintion o f a
colloidal particle. J. Phys. Chem. 54, 649-652.
358
CAPTULO 7. ADSORCIN
P a rte I V
361
Una vez que los caldos biolgicos han sido concentrados el paso siguiente
dentro de un esquema general de separacin, es la purificacin del producto de
inters. En esta Parte IV del libro se presentan los principios generales de las
operaciones ms utilizadas para efectuar esta purificacin: la cromatografa por
elucin, la precipitacin, la ultrafiltracin y la electroforesis.
En el Captulo 8 se presenta la operacin de cromatografa por elucin que
puede analizarse empleando gran parte de los conceptos utilizados para describir
la adsorcin en lecho fijo revisada en el captulo anterior. En el Captulo 9 se
presenta la operacin de precipitacin, que requiere un enfoque fuertemente fisicoqumico muy caracterstico de esta operacin. En los Captulos 10 y 11, se
presentan las operaciones de ultrafiltracin y electroforesis dado que sus princi
pios permiten un enfoque unificado.
C aptu lo 8
Introduccin
364
8.2. FUNDAMENTOS
365
Figura 8.2: Cromatograma tpico. Adaptada de: Belter et al., 1988. Reproducida
con el permiso de John W iley and Sons. Copyright 1988. Todo los derecho reservado.
8.2.
Fundamentos
8.2.1.
Cromatografa lquido-lquido
En la cromatografa lquido-lquido se utiliza un adsorbente slido impreg
nado con un lquido que funciona como fase estacionaria. La separacin de los
solutos es resultado de las diferencias en los coeficientes de particin de cada
uno de los solutos de la mezcla entre las fases lquidas (estacionaria y mvil).
366
8.2.2.
M a tric e s
8.2. FUNDAMENTOS
367
2. Polmeros orgnicos sintticos: poliacrilamida (marca Biogcl P ), polimctacrilato (marca Spheron) y poliestireno.
3. Polisacridos: celulosa (marcas Whatman, Cellulofine y Sephacel), dex
trano (marca Scpliadcx) y agarosa (marcas Sepharosa, Supcrosa, Ultrogel A y
BioGel).
4. Compuestos polmeros orgnicos con polisacridos: poli-N, Ar -bisacrilamida
con dextrano (marca Sephacryl), agarosa con dextrano (marca Superdex) y
agarosa con poliacrilamida (marca Ultrogel A cA ).
Desde el punto de vista funcional se pueden distinguir dos tipos de geles:
microporosos y macroporosos (Fig. 8.4).
Los geles microporosos se obtienen por entrecruzamiento puntual de polmeros
lineales como celulosa, dextrano y la poliacrilamida. Este tipo de geles son uti
lizados en cromatografa de filtracin en gel y tienen baja resistencia mecni
c a Los geles macroporosos se obtienen por entrecruzamiento y agregacin de
polmeros, como la agarosa y la poliacrilamida macroreticular. Este tipo de
geles son empleados en cromatografa de intercambio inico y de afinidad donde
368
369
8.2. FUNDAMENTOS
C eH s-
O ctadedl
- ( C H 2 ) 17-C H 3
Octil
- ( C H 2 )7 -C H 3
Butil
- ( C H 2 )3 -C H 3
Etil
c h 2- c h
370
c)
8.2.3.
371
8.2.4.
Presin (atm)
Dimetro (/zm)
90-100
30-50
5-10
2-50
51-350
Relaciones de Equilibrio
8.2.5.
Cintica de la Adsorcin
8.3.
Equipos Cromatogrficos
372
Re
producid con el permiso de Kluwcr Acudcmic Publvhcrs. Copyright 1991. Todos los derechos
reservados.
8.4.
8.4.1.
373
8.4.2.
Modelos lineales
374
Acumulacin en el lquido =
375
e V E ^ = Fc - l - F c n - ( \ - E ) V E ^
( 8. 1)
donde:
Ve ' Volumen de la etapa (lquido ms adsorbente).
e : Volumen del lquido por volumen de etapa.
F: Flujo de alimentacin.
c: Concentracin de soluto en la solucin en la etapa n.
qn: Concentracin de soluto en el adsorbente en la etapa n.
El modelo supone que cada etapa est en equilibrio y que la relacin de
equilibrio est dada por una Isoterma lineal, de tal manera que en cada etapa
la relacin de concentraciones puede ser expresada como:
dn = ECn
(8.2)
{\e + ( l - e ) K ] V E} ^ - = F(cn. 1 - c n)
(8.3)
376
t <
0.
Cn =
para n
= 1,2,... N
t = 0,
Ci ca
\ T N - l e~r ]
^
A [ (JV 1)!_
(8-4)
Ft
T _ [e + ( l - e ) K ] V E
(8.5)
o bien
r =
Ft
[e+(l -e)K\Vc
{ }
(8.7)
M
donde:
377
(8.8)
o
la cual puede ser aproximada a
00
(8.9)
00
378
M =
[(2 k) * *
8 10)
( .
] ( V * C o)
( 8.11)
M = (2ir)*<MK*cp
como M = V * ca , entonces,
-
CA
(2n)<rA
( 8. 12)
(8.13)
y
(8.14)
Mediante la ecuacin (8.5) se puede definir un r 0, dado por:
T
como
t q
N Fto
[e + ( i - )K]Vc
(8.15)
= N , entonces:
fr +
to
(i-)jqyc
F
(8.16)
21
c = c0exp
H
_2
N
(8.17)
379
CA
C
y una desviacin estndar:
a =
tp
y/
(8.19)
y entonces,
(8.20)
(8.21)
380
0.5 = exp
N
16 t i
W2
( 8 . 22)
381
y el tiempo de retencin,
tQ 41 nn
sustituyendo valores,
0 < 0,
para
Cj, = 0
para n = 1,2,... N
para
9 > 0P,
Cq = Cq
co = 0
eVe
Una vez aplicada la muestra sta se cluye mediante un gradiente salino que
puede expresarse como:
i = te
para
(0 0P) <
(1 -e)
382
para
donde i es la fuerza inica y K 'es una constante de equilibrio de referencia.
Bajo esta condiciones la relacin de equilibrio es funcin de la fuerza inica
y la concentracin de tal manera que:
q = K (c ,i)c
Se p id e:
a) Utilizando el modelo de platos obtener la expresin de la variacin de la
concentracin de soluto con el tiempo adimensional.
b) Obtener los perfiles de concentracin en la columna utilizando los datos
siguientes:
O
II
o
o
II
N =20
Ai/AO = 0.001
C 0 = 0.8
e = 0.4
y la siguiente expresin para la constante de equilibrio:
K ( c , i ) = 0.44
Solucin:
a) El balance de soluto en la etapa n es:
eV E ^
= F c n - i - Fcr,
- (1 - e )V E ^
{C n -l
x_
Cn)
,
+
(U!n
s
donde:
e
utilizando la regla de la cadena para desarrollar el trmino dqnfd0 de la ecuacin
anterior se obtiene:
dCn
dQ
iV (C n- , - C ) - ( 1 - e ) ^
e
1 1 ( 1 " e)
e
' rs/s-* ?\ ^
d K (c , i)
di
d K (c ,iy
donde:
c
c
Cq
fd i\
w
383
T e o ra cin tica
I xds modelos basados en la teora cintica describen el comportamiento de
una cromatografa mediante los perfiles de concentracin de los solutos obtenidos
mediante balances de masa, relaciones de equilibrio y expresiones cinticas. Este
enfoque resulta ms complejo que el de la teora de platos pero permite mejorar
la descripcin y comprensin de estos sistemas.
Para iniciar la revisin de algunos modelos cinticos es conveniente describir
cuatro comportamientos generales de una columna cromatogrfica operando en
modo elucin Isocrtica, descritos en la Figura 8.15.
384
Tiempo adimensional. e
C aso 3 Un pulso que contenga un soluto que pueda ser adsorbido, sufrir un
retardo y un cierto grado de dispersin al pasar por la columna. La dimensin de
estos efectos depender de la naturaleza de la adsorcin. La tcnica cromatogrfica se basa en el hecho de que diferentes solutos pueden sufrir diferentes retardos
en un mismo adsorbente.
C aso 4 Un pulso inyectado a una columna donde exista adsorcin y efectos
de flujo no ideal simultneamente, tendr un tiempo de retencin igual al del
caso 3, pero una mayor dispersin.
Se han desarrollado varios modelos para predecir los perfiles de concentracin
de las columnas cromatogrficas desde el punto cintico, los cuales presentan
diferentes grados de complejidad y difieren entre s en: a) el tipo de equilibrio
que consideran, b ) el nmero y tipo de resistencias a la transferencia de masa
que toman en cuenta, c) la cintica en la superficie del adsorbente y d) los efectos
de mezclado que incorporan.
Balances d e masa en la colu m n a La integracin del modelo de la columna
se inicia con el balance de masa de soluto en la fase lquida en una seccin de
la misma.
de
m
Pe
de
- D~ d * + v T z = - 7
donde:
e: Fraccin vaca del lecho. [L3/L3\.
c: Concentracin de soluto en el lquido. [M / L 3].
t: Tiempo, [t].
(8.23)
385
(8-24)
(8.25)
386
(8.26)
(8.27)
(8.28)
o
al trmino entre parntesis cuadrados de la ecuacin anterior se le llama altura
de una mudad de transferencia I I T U (de sus siglas en ingls), y al trmino entre
corchetes se le llama nmero de unidades de transferencia N T U (de sus siglas
en ingls); de tal manera que la ecuacin anterior puede ser expresada como:
L = IIT U N T U
(8.29)
de
dt
(Pe
dz2
TT ~ D a*
de
dz
R
e
+ V = ----
(8.30)
3(1 - g )
f'm
donde:
(8.31)
387
Si dt
***
dt
1
\ di_2
r2
r d r j)
(8.32)
(8.33)
- * ( - # )
(834 )
en:
r =0
z> 0
r >0
z 0
z 0
para:
>0
t= 0
t= 0
0 < t < tj,
t >t p
se tiene:
d ei/ d r = 0
c= 0
a = o
c = cA
c
= 0
388
oo
(8.35)
O
de tal manera que el momento absoluto n es,
(8.36)
y el momento central n,
(8.37)
Mi =
(8.38)
Mi
(8.39)
389
j c(t, L )(t f a f dt
>h = ~ ----- -----------------
(8-40)
J c(t, L )d t
0
y de acuerdo al modelo general,
Ll
390
Para Albmina:
'* " 2 = I + ( 1 - ) ^
sustituyendo valores en la expresin anterior para el caso de la mioglobulina se
tiene:
0.87
i
0.8
0.69
0.35 + (1 0.35)e,
0.52
391
(8.42)
v
ev
c c 0 exp
(1 - )kLa L ( t _ _
2ev
\ tQ
\2
)
(8.43)
a = tQ
(8.44)
\(1 - e ) k La l
(8.45)
ev
(1 - e)kLa
a 2L
(8.46)
kL
1.17
392
n x (0.41 cm)2
Vc =
x 25 cm = 3.30 cm3
I< =
* enr
62 min x 2
(1 -e)
(1 - 0 .3 8 )
3.30 cm3
-0 .3 8
=60
622 min
32 min2
por la definicin de H E T P dada en la ecuacin (8.45),
L
25 cm
IIE T P = =
= 0 0585 0111
c)
cm3
min
2 -----x ----- V
...j n m
________ g ( L s
0.132 cm2
cm
= 0.25
s
393
-0.42
1.17 x 0.25
s
0.01
0.01 cmga
1.0 - A r
cm0
kL
cm s
-0 .67
pm*
0.7 x 10~5 ----
5.67 x io -3 2
s
dp
0.0045 cm
= 1333.33 cm - i
entonces,
cm
c\lr n T
5.67 x 10 3 x 826.G7 cm.- i1 x 25 cm
N = -(1 )kLL = ----------------- --------m ---------------------= 4 6 8
ev
o.25
s
De acuerdo a la ecuacin (8.46),
(
ev
\^
62 min
a t0 \ ----- ---- - ) = = = - = 2.86 mus
\(1 e)k L a L J
v/468
De la ecuacin (8.46),
HETP =
<j 2L
(2.86 min)2 x 25 cm
_
75- = -------:
-------= 0.052 cm
3
(63 min)2
d) Para resolver este inciso necesariamente se tiene que hacer uso del modelo
combinado lineal. Esta es la ventaja de este tipo de modelo; es decir, nos permite
hacer predicciones con la variacin de ciertos parmetros.
Una columna de 20 cm representa la reduccin de un 20% en longitud de
tal manera que:
cm
5.67 x 10~3 x 826.67 cm 1 x 20 cm
N = ----------------- 2-------- ^ ---------------------= 374
Ai
0.25
s
por otra parte:
ta = [0.38+ (1 - 0.38) x 60] x 11132 C111..xi 20 cm = 49.6 min
cm3
2 rmm
De la misma manera se pueden efectuar los clculos para L = 30 cm (+ 2 0 % ).
394
HETP
(8.47)
donde:
: Longitud de mezclado. [L\.
D a b : Coeficiente de difusin del soluto. [L 2/t].
ly. Tortuosidad del lecho.
En la expresin anterior el coeficiente de dispersin axial e D ax se considera
que est conformado por dos contribuciones: la difusin molecular en la direccin
axial y un trmino de mezclado que es proporcional a la velocidad, esto es,
eDax i ) D a b + tev
(8.48)
395
Mi = t 0
y
i = <72
de tal manera que:
HETP = ^
Fi
La expresin anterior conjuntamente con las ecuaciones (8.39), (8.41), (8.48)
y las condiciones particulares:
tP
&
0
0
conducen a:
( H E T P ) momentos { H E T P ) V&U Deemter
E cuacin d e van D e e m te r sim p lifica d a La ecuacin de van Deemter
(8.47) en su versin ms popular y simplificada se escribe como:
HETP = A + -^ + C (e v )
(8.49)
donde:
El trmino A es funcin del tamao y uniformidad del adsorbente de la colum
na, ya que esto determina la longitud y uniformidad del mezclado. Las
partculas de dimetro pequeo, producen valores bajos de A.
El trmino B se relaciona con la difusin molecular axial. Este trmino puede
ser despreciado en el caso de cromatografa lquida y particularmente cuan
do el soluto es una molcula grande como una protena.
Si la velocidad superficial en una columna disminuye, el trmino B j (e v)
aumenta, esto significa que al ser mayor el tiempo de retencin hay ms
tiempo para que el pulso se disperse por difusin molecular. Consecuente
mente la contribucin de este trmino tiende a disminuir la eficiencia de
la columna; es decir, a incrementar el H E T P .
396
8.4.3.
397
R esolu cin
En la cromatografa por elucin un objetivo puede ser el separar los compo
nentes de una muestra en forma satisfactoria. La medida del grado de separacin
de dos componentes en una operacin cromatogrfica se conoce como resolucin
o eficiencia de separacin.
La resolucin de una columna depende de dos factores: a) la selectividad de
la columna que es una medida de la afinidad de los solutos por el adsorbente
dada por el factor de separacin o selectividad a = K^/Ky y b) la eficiencia de la
columna que est relacionada con el grado de dispersin de los picos ( H E T P ) .
La separacin de dos solutos (Fig. 8.17a ) puede aumentarse mejorando el factor
de separacin (Fig. 8.17b ), aumentando el nmero de platos (Fig. 8.17c ) o
combinando ambos efectos.
fts
2 ( o2
tol)
Wy + VV2
> 2
(8.50)
y
W = 4o
(8.51)
398
M h)
(h)
Co
A n tic u e rp o
6.42
0.80
82
399
Im p u reza
7.600
0.175
43
W2
= (4)(0.80 h) = 3.2 h
= 0.3
(8.52)
donde:
S E ji Masa del soluto j eluida en el intervalo de tiempo.
F : Flujo de solvente en la columna.
Cji Concentracin del soluto j a la salida de la columna.
La pureza del soluto j , P R j , se define como la razn de la masa de soluto
j obtenida en el intervalo de i a , entre la masa total obtenida en ese mismo
intervalo, es decir:
400
(8.53)
PRj =
STj =
F cjd t
(8.54)
o
La proporcin de soluto j recuperada en el intervalo de t a t o rendimiento R E j
puede entonces expresarse como:
t
Fcjdt
it E > ~ j ~
j Fcjdt
(855)
0
Las ecuaciones (8.53) y (8.55) combinadas con los modelos que describen los
perfiles de concentracin en las columnas, nos permiten calcular y/o predecir
(segn el tipo de modelo) rendimientos y pureza en columnas.
E jem p lo 8.8. P u re za y R e n d im ie n to . La Figura 8.19 muestra los perfiles
de concentracin del anticuerpo y la impureza del Ejemplo 8.7. Puede observarse
un traslape de los picos de estas sustancias debido a la baja resolucin de la
operacin.
Se p id e : Describir la variacin de la pureza y el rendimiento del anticuerpo
con el tiempo de operacin, si la masa de anticuerpo y la masa de impureza
alimentadas a la columna son de 1.63 g y 0.45 g, respectivamente (se usa el
subndice 1 para el anticuerpo y el subndice 2 para la impureza).
Solucin:
Combinando las ecuaciones (8.17) y (8.55) se obtiene una expresin para el
rendimiento en funcin del tiempo,
401
SEx
ST\
F c 0i exp
2*?
j Fc01exp
o
( t - t o l ) 21
dt
dt
2*?
cuando
r
, (t - t o X )21
j FFCoi
c0i exp |
^di
|-----77~2
2af
PRi
21
J F C o i exp | -
2a?
dt+ J
(t-to2) dt
21
F co2 exp
2o?
402
RE 1
RE2
1+ E rf
1+ E rf
82 RE\
PR\
82 R E , + 43 R E
Los resultados sobre los clculos de los rendimientos y la pureza de anticuerpo se muestran en fonna grfica en la Figura 8.20. Se puede constatar en la
figura el hecho de que en una operacin de separacin generalmente se pueden
obtener altas purezas o altos rendimientos, pero no ambos.
8.4.4.
Escalamiento y Optimizacin
El mercado del producto o el inters social del mismo son los elementos prin
cipales a considerar en el escalamiento de mi proceso. En el caso de productos
novedosos de alto precio o alto inters social y de bajo volumen de produccin, el
escalamiento del proceso se hace de manera expedita, tanto tcnicamente como
desde el punto de vista regulatorio (oferta al mercado y el tiempo controlan).
403
Por otro lado, para productos de alto volumen o que van a competir con pro
ductos existentes, el diseo del proceso debe ser ms cuidadoso (la oferta excede
la demanda y el costo controla).
El escalamiento de una columna cromatogrfica consiste generalmente en
determinar el diseo de la columna que permita cumplir con una productivi
dad mayor a la de la columna empleada en la obtencin de los datos para el
diseo. En general las tcnicas de escalamiento surgen del reconocimiento de la
imposibilidad del diseo de este tipo de equipo mediante modelos estrictamente
tericos (Gibbs y Lighfoot, 1986).
Factores de escalamiento
Son varios los factores a considerar en el escalamiento de columnas cromatogrficas dentro de los cuales se pueden destacar los siguientes.
404
(8.57)
405
igual en ambas escalas. En este caso lineal los perfiles gaussianos estn dados
por la relacin ya conocida.
c = c0 exp
t = [<: + ( l - e) K l
(8.59)
406
t0 (min)
a (min)
Transferrina
41
4
Sales
88
4
Se pide:
a) Calcular el tiempo necesario para obtener el 90% de rendimiento de trans
ferrina.
b) Si se desea incrementar la productividad de la columna manteniendo la
misma geometra y suponiendo que la etapa controlante es tal que la desviacin
estndar es proporcional a (e u )_ -, calcular la velocidad de alimentacin m
xima y el tiempo del ciclo necesario para obtener un rendimiento de 99 % de
transferrina con 98% de pureza (transferrina = 1 y sales 2; escalas I y II).
Solucin:
a) De acuerdo a la ecuacin desarrollada en el Ejemplo 8.8,
1+ E rf
sustituyendo valores,
407
masa de transferrina
PR i
PRi
masa total
(masa de transferrina)(/2'i)
(masa de transferrina)(iEi) + (masa de sal)(-ft2)
( V
\<j , ) 2
\ e v ,i)
VWi
6111
evn
( n ]
\ t Ql ) 2
Vl
X}II
0.98
0.99
(R E n ) 2
(0.8 ) { R E n \
(0.8) ( * / / ) , + (0.2) (R E n ) 2
\ [ 1+Erf
[ 1 + B rf
12.65
(*//) i
W ll) 2
(to n ) i
(to n ) 2
(e v n ) t
12.65
(e v n )l
410
e v ji
880
evn
Suponer ma e v .
408
2. Calcular
e v ,
t
7.4 min
409
410
NC =
Pt
(8.60)
Pcc x n
= l
rm
[= ]
Qm X U
(8.63)
Co
Para el caso particular que ta es despreciable,
Pt x L x
NC
/BV\
k
(B V \
(B V \
k
)
qm x Vc x U
(B V \
1
(8.64)
411
8.5. SUMARIO
Pt x L
e v x c0 x Vc
(8.65)
8.5.
Sumario
La cromatografa por elucin se utiliza para obtener productos biotecnolgicos con un alto grado de pureza. Existen varias formas para llevar a cabo una
operacin cromatogrfica que dependen del tipo de adsorbente empleado y las
condiciones en las que se realiza.
Las operaciones cromatogrficas se desarrollan generalmente en columnas
empacadas fabricadas en diversos tipos de materiales y operadas tanto a pre
siones moderadas como a altas presiones.
Las columnas cromatogrficas han sido escaladas principalmente a partir de
columnas de laboratorio, pero existe una creciente necesidad de apoyar el dise
o de las columnas mediante el empleo de modelos. Hoy los bioprocesos bien
establecidos utilizan modelos matemticos en la optimizacin y simplificacin de
la validacin de las operaciones de cromatografa. La modelacin y simulacin
de esta operacin puede ayudar a reducir tiempos y costos, en el desarrollo y
operacin de los bioprocesos.
412
8.6. Problemas
8.1. Nmero de platos tericos. El ancho W de un pico es de 50 s y el
tiempo de retencin es de 50 min.
Se p id e : Calcular el nmero de platos tericos de la columna bajo estas
condiciones.
R es p : 57,600.
8.2. Resolucin. Ix>s tiempos de retencin de los compuestos A y B, son
de 800 s y 815 s, respectivamente. La columna se puede considerar que tiene
8,100 platos tericos para ambos compuestos.
Se pide:
a) Calcular la resolucin para estos compuestos en la columna.
b) Estimar el nmero de etapas para obtener una resolucin de 1, suponiendo
que los tiempos de retencin son iguales.
R esp: a) 0.42 y b) 45,500.
8.3. V e lo c id a d p tim a . La ecuacin (8.49) describe la variacin de H E T P
con la velocidad en una columna cromatogrfica.
Se p ide: Obtener una expresin matemtica para la e v ptima y la altura
equivalente de im plato terico ( H E T P ) mnima, a partir de esta ecuacin.
8.4. Expresin de la resolucin. Utilizando el modelo de platos tericos y
considerando iguales las H E T P de dos solutos que se desea separar, demostrar
que:
Rs = i .? ! (
2(a + l) Vi +
*7
N *
413
8.6. PROBLEMAS
Se p id e : Demostrar que bajo estas condiciones,
414
8.10.
C ro m a to g ra fa d e exclu sin p o r ta m a o (S E C ). Una columna
de laboratorio ( Ghose, 1990) de 0.02 m de dimetro, se empaca con 0.065 kg
de Sephadcx G-100 cuyo poder hidratante es de 0.003 m3/kg de gel seca, pro
ducindose un lecho empacado de 100 cm de altura.
La columna se utiliza para separar una mezcla de albmina de suero de
bovino (A S B ) y glucosa. El volumen utilizado de muestra es de 2 x 10 m3,
el cual tiene una concentracin de ASB de 5 kg/m3 y 10 kg/m3 de glucosa.
La cromatografa se desarrolla utilizando agua como cluyentc. El volumen de
elucin ( V0) de la ASB es de 1.05 x 10-4 m3 y el de glucosa de 2.95 x 10-4 m3.
El volumen vaco de la columna ( V ) se midi utilizando el dextrano de
alto peso molecular y fue de 1.05 x 10~4 m3 (en cromatografa en gel donde la
cantidad de lquido en los poros de la matriz es considerable, esta medicin con
dextrano no incluye el volumen de dicho lquido Vi).
El coeficiente de particin de los solutos A (A S B ) y B (glucosa) est dado
por:
{V0) a = eVc + K pa V
(V o )B = e V c + K pBVi
_ Vc{ l - g ) g P
P~
Vi
415
8.6. PROBLEMAS
S: Costo del adsorbente. [$/kg de adsorbente].
P : Poductividad promedio, [kg de prodncto/kg de adsorbente-ciclo].
n: Duracin del ciclo, [ciclo/h].
t: Tiempo de vida del adsorbente, [h].
C a : Costo del adsorbente por kg de producto.[$/kg de producto].
Se p id e:
a) Obtener una expresin del impacto del costo del adsorbente sobre el costo
del producto.
b) Graficar C a v s P para valores de S/nt de 0.1, 0.5 y 1.0, en el rango de
0 < P < 0.05
c) En una operacin cromatogrfica el adsorbente tiene un costo de SlO.OO/kg
y tiene una vida de 2,000 h. La operacin se efecta de tal forma que se inyecta
una muestra cada 2.5 h y la productividad promedio P es de 0.02 kg de producto/kg de adsorbente-ciclo. Estimar el impacto del costo del adsorbente sobre el
producto.
R esp . c) C a = S0.625/kg de producto.
8.12.
A n lisis eco n m ico . Se desea efectuar un anlisis econmico de una
operacin cromatogrfica considerando los siguientes parmetros:
5: Costo del adsorbente. [$/kg de adsorbente].
P : Productividad promedio, [kg de producto/kg de adsorbente-ciclo].
n: Duracin del ciclo, [ciclo/h].
t: Tiempo de vida del adsorbente, [h].
L = n t: Nmero de ciclos en la vida del adsorbente.
C t ' Costo del adsorbente, regenerante y eluyentc por kg de producto. $/kg].
M : Costo de eluyente. [S/kg de adsorbente-ciclo].
R: Costo del regenerante. [$/kg de adsorbente-ciclo de regeneracin].
L r \ Ciclos/ciclo de regeneracin.
Se p id e d em o s tra r que:
r=^x( +S +Mt)
5
416
8.13.
P a r m etro s d e la ecu acin d e van D e e m te r. En la cromatografa
de ASB se obtienen los siguientes datos experimentales:
ev (cm/s)
0.005
0.010
0.015
H E T P (cm)
0.12
0.19
0.26
Conc. mxima
Tiempo de elucin
Conc. en un tiempo t
Tiempo t
A lb m in a
0.25 g/L
680 s
0.11 g/L
600 s
H e m o glo b in a
0.22 g/L
820 s
0.10 g/L
670 s
417
8.6. PROBLEMAS
P [-0.1307
+ 1 2 4 5 ) c / 2]
donde:
M : Peso molecular de la mioglobina =16,890 Da.
T : Temperatura = 293 K .
/ : Viscosidad del solvente = 0.01 g/cm -s.
C/: Concentracin de polmero en la partcula de adsorbente = 0.04 g/cm3.
8.18. A n lisis d e la o p era cin d e una colu m n a En una operacin cromatogrfica se producen dos picos. El pico A con un tiempo medio de retencin
de 15 min y con un ancho 2.60 min cuando la concentracin es la mitad de la
mxima. El pico B con un tiempo medio de retencin de 10 min y con un ancho
de 1.0 min cuando la concentracin es la mitad de la mxima.
Se p id e:
a) Estimar el nmero de etapas tericas de esta columna para cada soluto.
b) Si se aumenta 3 voces la longitud de la columna manteniendo todas las
otras condiciones guales, cual ser la separacin de los picos en minutos.
R esp. b) 15 min
8.19. E fecto d e la lon gitu d d e la colu m n a. Se desea predecir el com
portamiento del pico de un soluto cuando se dobla la longitud de una columna,
utilizando la teora de platos.
Se p id e :e s tim a r el e fe c to sob re:
a) El tiempo de elucin.
b) La altura del pico.
c) El ancho del pico.
R esp. c) La anchura aumenta en \/2
P ro b le m a 8.20. R e n d im ie n to : p roceso vs o p e ra ci n . Se requiere pu
rificar lotes de 20,000 L de un caldo que contiene de MaBs a una concentracin
de 2.5 g/L. De acuerdo a la forma del pico de elucin del soluto, la columna
cromatogrfica disponible puede operarse de las dos formas siguientes:
Ciclos/lote
Volumen colectado (L/ciclo)
Conc. promedio (g/L)
G e los /ao
I
5
1350 - 1800
21.3
18
II
5
135 0- 1600
36.8
20
418
8.7. BIBLIOGRAFA
8.7.
419
Bibliografa
Arnold, F.H.; Blanch, H.W.; Wilke, C.R. 1985. Analysis o f affinity separations.
Chem. Eng. J. 30, B9-B23.
Asenjo, J.A.; Andrews, B.A. 2009. Protein purification using chromatography:
selection o f type, inodelling and optimization o f operating condi tions. J.
Mol. Rccogriit 22, 65-76.
Azevedo A.M .; Rosa, P.A.J.; Ferreira, I.F.; de Vries, J.; Visser, T.J.; AiresBarros, M.R. 2009. Downstream processing o f human antibodies integrating an extraction capture step and catin exchange chromatography.
J. Chromatog. B. 877, 50-58.
Belter, P.A.; Cussler, E.L.; IIu, W . 1988. Bioseparations: Dovmstream Process
ing fo r Biotechnology. John VViley and Sons. New York. 7, 183-219.
Bird, R.B.; Stewart, W .E.; Lightfoot, E.N. 2002. Ihm sport Phenomena. John
W iley and Sons. New, York. 2da Edicin.
Boycr, P.M.; Hsu, J.T. 1992. Experimental studies o f restricted protein diffusion in agarose matriz. A IChE, J. 38, 259-272.
Cowan, G.H.; Gosling, J.F.; Sweetenham, W .P. 1987. Modeling for scale-up
and optimisation o f packed-bed columns in adsoption and chromatogra
phy. En: Scparations fo r biotechnology. Vcrral, M.S.; Hudson, M.S. (Eds.).
Ellis Ilorwood. England. 10, 152-175.
Curling, J. 2007. Process chromatography: Five decadcs o f innovation. Biopharrn Intematinal. 20, 10-48.
Fulton, S.P.; Mcys, M.; Vrady, L., Janscn, R.; Afcyan, M.B. 1991. Antibody quantification in seconds asing affinity perfasion chromatography.
Biotechecniques. 11, 226-231.
Ftousawa, T .; Suzuki, M.; Smith, J.M. 1976. Catal. Rev. S c i Eng. 13, 43-76.
Ghose, T .K . 1990. Bioproccss computations in biotechnology. Vol. 1. Ellis Horwood. New York. 9, 229-264.
Gibbs S.J.; Lighfoot E.N. 1986. Scaling up gradient clution chromatography.
IE C Fund. 25, 490-498.
Janson J. C.; Hedman, P. 1982. Largo scale chromatography o f proteins. En:
Adv. Biochcm. Eng. Fiechner, A. (Ed.). Springer-Verlag. New York. 25,
43-99.
Janson J. C.; Hedman, P. 1987. On the optimization o f process chromatogra
phy o f proteins. Biotech. Prog. 3, 9-13.
420
Knox J . ; Pypcr, H.M. 1986. FYamcwork for maximizing throughput in preparative liquid chromatography. J. Chrornatogr. 363, 1-56.
Ladisch, M .R. 1987. Separation by sorption. En: Advanced Diochemical Enginnering. Bungay, H.R.; Bclfort, G. (Eds.). John W ilcy and Sons. New
York. 9, 219-237.
Lapidas, L.; Amundson, N.R. 1952. The effect o f longitudinal diffusion in ion
exchange and chromatograpliic columns. Mathematics o f adsorption in
bcds VI. J. Phys. Chcm. 56, 984-988.
Nicoud, R.M.; Pcrrut, M. 1991. Opcrating modcs, scalc-up and optimization o f
chromatographic processes. En: Chromatographic and Membrane Procesaes in Biotechnology. Costa, C.A.; Cabral, J.S. (Eds.). Kluwcr Acadcmic
Publlshers. Netherlands. 381-413.
Simpson, J.M. 1994. Conventional chromatography. En: Protcin purification
engineering. Ilarrison, R.G. (Ed.). Marcel Dekker. New York. 7, 209-258.
van Deemter, J.J.: Zuiderweg, F.J.; Klinkenberg, A. 1956. Longitudinal diffu
sion and rcsistancc to mass transfer as causes o f nonidcality in chromatog
raphy. Chem. Eng. Sci. 5, 271-289.
Wang, N.L. 1990. Ion exchange in purification. En: Separation processes in
biotechnology. Asenjo, J.A. (E d.). Marcel Dekker. New York. 12, 359-400.
Wankat, P.C: Koo, Y . 1988. Scaling rules for isocratic elution chromatography.
A IC h E J . 34, 1006-1019.
C aptu lo 9
Precipitacin
9.1.
Introduccin
422
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
9.2.
Fundamentos
A g e n te P re c ip ita n te
Disminucin de la solubilidad
Desnaturalizacin selectiva.
Temperatura
pH
Solventes
Afinidad
Ligandos
423
9.2. FUNDAMENTOS
9.2.1.
El hecho de que las protenas sean molculas anfotricas se debe a que sus
superficies (Fig. 9.1) presentan regiones hidrofbicas, y regiones hidroflicas car
gadas ya sea positiva o negativamente.
+
+1
424
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
425
9.2. FUNDAMENTOS
(9.1)
donde n//20 simboliza el agua ordenada alrededor de los residuos hidrofbicos de la protena P . Debido a este ordenamiento la entropa del proceso A S ?
es grande y negativa. Es conocido que este proceso es espontneo y entonces
la energa libre A G ? es negativa. Consecuentemente la entalpia A//? es muy
negativa ( A I I o = A G + T A S ) .
En el segundo paso que es hipottico, se considera a dos molculas de pro
tena en solucin que podran unirse al interactuar a travs de sus residuos
hidrofbicos, liberando agua de acuerdo a la reaccin siguiente:
(P n,H 20 ) + (P ' n2H20 ) -
(9.2)
(9.3)
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
426
(9.4)
(P - P ') + ( A + m H 20 ) + (B - n2II20 )
La Figura 9.4 muestra un esquema del efecto de una sal en la precipitar
cin de protenas (insolubilizacin por salado) basado en el proceso descrito
anteriormente.
(9.5)
donde:
5: Solubilidad de la protena a una fuerza inica dada.
5o: Solubilidad a fuerza inica cero.
/: Fuerza inica.
3: Constante caracterstica.
k: Pendiente de la curva de insolubilizacin por salado.
La fuerza inica de una solucin est dada por:
* = \ E C<Z ?
(9.6)
427
9.2. FUNDAMENTOS
donde:
C,: Concentracin del in.
Z i. Carga del in.
La ecuacin de Cohn se puede escribir en fonna simplificada como:
lo g 5 = A m[conc. de sal]
(9.7)
428
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
3. Seleccionar una sal que sea barata debido a las altas concentraciones que
requiere el mtodo.
4. Seleccionar una sal que produzca un precipitado cuya densidad sea dife
rente a la de la solucin para facilitar su separacin.
429
9.2. FUNDAMENTOS
s
(mg/mL)
C o n cen tra ci n
sulfato de amonio (M )
0.0064
0.0140
0.0700
0.0300
0.3700
0.8000
1.1000
2.85
2.80
2.60
2.50
2.45
2.38
2.34
Se p id e:
a) Determinar los parmetros de la ecuacin de solubilidad A y m.
b) Calcular la solubilidad de la enzima predicha por el modelo a una con
centracin 2.34 M de sulfato de amonio.
Solucin:
a) Parmetros de solubilidad. De acuerdo a la ecuacin (9.7) la solubilidad
de la enzima est dada por:
log S A m [conc. sal]
donde A es la ordenada al origen y m es la pendiente de la curva.
Para determinar los valores de los parmetros de la ecuacin anterior, los
valores experimentales se ajustan por mnimos cuadrados y se obtiene que A
10.2 y m = -4.34. La Figura 9.G muestra la grfica correspondiente.
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
430
9.2. FUNDAMENTOS
431
Figura 9.8: Efecto del pH sobre la concentracin de protena de soya que per
manece en solucin, expresada como ma fraccin de la concentracin inicial del
extracto acuoso. Fuente: Bell ct ai., 1983. Kcproducidacon el permiso de Springcr-Vcrlag.
Copyright 1983. Todo* loa derecho* reservados.
432
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
Pro tena
Pepsina
Ovoalbmina
Seroalbmina
Ureasa
# -Lactoglobulina
- Globulina
Hemoglobina
Mioglobina
Ribonucleasa
Lisozima
~ 1.0
4.6
4.0
5.0
5.2
6.6
6.8
7.0
9.6
11.0
Agua
Mctanol
Etanol
Acetona
Benceno
Ilexano
80.0
33.0
24.0
21.4
2.3
1.9
433
9.2. FUNDAMENTOS
/W A,
/W A
/W
/V-
'W 'A .
Solvente
Protenas en solucin
organco
Protenas agregada*
(9.8)
donde:
D t : Constante dielctrica de la mezcla solvente-agua, misma que vara de
pendiendo de la cantidad de solvente agregada.
K : Constante que toma en cuenta la constante dielctrica original del medio
acuoso.
S0- Solubilidad extrapolada.
S eleccin d e l solven te La mayor desventaja de la precipitacin con solventes
es la desnaturalizacin que puede sufrir la protena por accin del solvente, de
tal manera que es importante seleccionar adecuadamente ste. En el caso del uso
de monoalcoholcs como solventes, la desnaturalizacin se incrementa conforme
la cadena alquilo se incrementa.
Tambin debe tenerse muy en cuenta la flamabilidad del solvente principal
mente cuando se trabaja a gran escala, ya que algunos de ellos como los alcoholes
son altamente inflamables y el uso seguro de los mismos ocasiona incrementos
en los costos.
Algunos criterios que es necesario considerar en la seleccin del solvente es
que ste debe ser: a ) completamente miscible en agua, b ) no reactivo con las
protenas, c) un buen agente precipitante y d) seguro.
P re c ip ita c i n con p olm ero s n o inicos
La precipitacin de protenas tambin puede realizarse utilizando polme
ros neutros como el polictilcnglicol (P E G ) en lugar de sales o solventes. Dichos
polmeros de elevado peso molecular son solubles en agua y sus soluciones pre
sentan viscosidades moderadas (Guo et a l, 1996).
434
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
(9.9)
donde:
r , : Radio de la molcula de protena. [L].
r p: Radio del cilindro del polmero. \L\.
i. Longitud total de la molcula de polmero por unidad de volumen. [L].
Considerando que el volumen total (Vf ) es igual al volumen disponible (Vd)
ms el volumen excluido (Vc ), el volumen excluido por peso del polmero (W )
est dado por:
^
= ( l - 1 0 - KC)
(9.10)
2.303 V
rp
Vc,
1 - 10"KC
Vdf
10-KC
435
9.2. FUNDAMENTOS
S = fcx 1 0 -KC
donde k es una constante de proporcionalidad. La ecuacin anterior puede ser
escrita en forma ms conveniente como:
log 5 = logfc - K C
o bien como:
log S = X - K C
(9.11)
(9.12)
donde:
i: Protena.
j : Polmero.
Potencial qumico de la protena en el estado estndar.
R: Constante de los gases ideales.
T : Temperatura absoluta.
na: Molalidad de la protena.
m.j: Molalidad del polmero.
c,,: Coeficiente de interaccin protena-protena.
Cij'. Coeficiente de interaccin pro tena-polmero.
Cuando la molalidad del polmero m .j se incrementa, el potencial qumico se
eleva y el sistema reacciona insolubilizando protena (inicindose la precipita
cin). Despus de sto el potencial permanece constante.
En un sistema polietilenglicol-protena en solucin acuosa, en el que sola
mente las interacciones polietilenglicol-protena y protena -protena son signi
ficativas, la ecuacin (9.12) puede ser escrita como (Foster el a l, 1973):
Ki
= ln S + f S + aC
donde:
S: Solubilidad de la protena.
C : Concentracin de polietilenglicol.
/ : Coeficiente de interaccin protena-protena.
a: Coeficiente de interaccin protena-polietilenglicol.
(9.13)
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
436
(9.14)
donde:
y
RT
En este sistema puede suponerse que el trmino f S es mucho ms pequeo
que ln S entonces la ecuacin (9.14) puede ser escrita como:
ln S = X - a C
(9.15)
9.2. FUNDAMENTOS
437
9.2.2.
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
438
(9.16)
donde:
[P]: Concentracin de protena disuelta. [M / L 3].
t : Tiempo, [t].
k : Velocidad especfica de desnaturalizacin. [-1 ].
La dependencia del proceso de desnaturalizacin con la temperatura est
dada por:
k = ko exp
( 9-17)
dt
ko exp
(9.18)
donde:
kQ: Constante caracterstica. [t~ 1].
E : Energa de activacin de la desnaturalizacin. [kJ/mol].
R: Constante de los gases ideales. [kJ/m ol-Kj.
T : Temperatura. [K].
Las protenas tienen energas de activacin relativamente altas de tal manera
que presentan una variacin muy significativa de la velocidad de desnaturali
zacin con la temperatura. El mecanismo de desnaturalizacin puede involucrar
varios pasos, lo importante es determinar cual es la energa de activacin del
paso ms lento o controlante. Por regla general el primer paso es el ms lento c
involucra el rompimiento de los enlaces que le dan la conformacin a la protena.
La Figura 9.11a muestra un diagrama terico del porcentaje de protena que
permanece estable despus de 10 minutos de incubacin, cuando la energa de
activacin es de E = 400 kJ mol-1 .
La Figura 9.1 Ib muestra un esquema terico de las posibles curvas de desna
turalizacin para diferentes enzimas. Cuando la enzima de inters es la P 5, que
es estable a temperaturas de hasta 58 C, si la solucin se calienta a 57 C, se
desnaturalizan completamente las enzimas P\ y P y en grado substancial la
y la P 4. Esto significa que es posible seleccionar ma temperatura que produzca
9.2. FUNDAMENTOS
40
439
*9
90
Tmpafatur* X
Solucin:
a) Constante de velocidad. La forma integrada de la ecuacin (9.16) es:
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
440
M O -5) _
Ky,
" ln(0.9) - b a8
combinando el resultado anterior con la ecuacin (9.17) se obtiene:
::k
W t 10%
6.58
la temperatura es:
r . =46 c
Desnaturalizacin por pH
Debido a que ciertas protenas de inters son estables a pHs extremos, se ha
utilizado esta propiedad para purificarlas mediante la precipitacin por desna
turalizacin selectiva de sus protenas contaminantes.
I-a desnaturalizacin por pH ocurre tanto por la formacin en la molcula
de protena de regiones con cargas iguales que tienden a repelerse, como por el
rompimiento de las fuerzas de atraccin que le dan su conformacin (Fig. 9.12).
La velocidad de desnaturalizacin a pHs extremos ya sean cidos o bsicos
depende del tiempo que tarde la protena en abrirse y perder su conformacin.
Este proceso es esencialmente similar al que ocurre en la desnaturalizacin por
temperatura.
9.2. FUNDAMENTOS
441
9.2.3.
442
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
Figura 9.14: Representacin esquemtica de la formacin de agregados por inmunoafinidad y por afinidad, a) Agregado en forma de cadena constituido por
un anticuerpo policlonal y una protena monomrica y b) Agregado en forma
de red producido por un anticuerpo policlonal y una protena tetramrica o por
ligandos bis-NAD y una protena tetramrica. Fuente: Scopes, 1994. Reproducida
con el permiso de Springer-Verlag. Copyright 199-1. Todos los derechos reservados.
443
b)
* ' w
O _ O o
o D ofld
no o o
o
o * < t 0 o
a
dt
e>
. V " 0 0 ^
- w
. %
Figura 9.15: Esquema de precipitacin por afinidad, a) Adicin del macroligando a la solucin proteica, b ) Formacin del complejo ligando-protena, c)
Sobrenadante y d) Recuperacin de la protena purificada.
9.3.
Equipo de Precipitacin
444
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
9.4.
Diseo de Precipitadores
9.4.1.
Cintica de la Precipitacin
445
(9.20)
donde:
pr. Densidad de la solucin, [g/cm3].
u: Viscosidad cinemtica. (cm2/s|.
P / V : razn de potencia por unidad de volumen del sistema de agitacin.
[HP/cm3].
Combinando las ecuaciones (9.19) y (9.20) se pueden estimar tiempos de mez
clado mediante parmetros del sistema. Este tiempo es una medida del tiempo
necesario para obtener una mezcla homognea y de inicio de la precipitacin.
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
446
N u cleacin
yi AI
yioMo
(9.23)
M = M 0( l + yi0kt)
447
(9.24)
donde:
M a: Peso molecular inicial de las partculas de precipitado.
M : Peso molecular promedio de las partculas de precipitado.
La ecuacin (9.24) se representa grficamente en la Figura 9.17. La ordenada
al origen es M a y el valor de la pendiente est dada por (MoViok) . Si se conocen
Vio y AI 0 puede estimarse k.
(9.25)
donde:
d es el dimetro de la molcula de soluto; D , es el coeficiente de difusin; y
Ar. es el nmero de Avogadro.
El valor del coeficiente de difusin de la ecuacin anterior es un valor prome
dio de todas las partculas en el sistema, de tal forma que a medida que la
partcula crece, el valor del coeficiente de difusin disminuye. De acuerdo a la
ecuacin (9.25) an cuando esto suceda, el valor de la constante no se altera pues
la disminucin en D tiene como causa un incremento en la misma proporcin
del dimetro de la partcula d. de tal manera que el producto D d permanece
constante, y en consecuencia k permanece constante. Es decir, la determinacin
experimental de k puede ser aplicada a diversos sistemas.
Generalmente el tiempo de formacin de las partculas primarias es mucho
menor que el tiempo global del proceso de precipitacin.
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
448
(9.27)
en esta ecuacin a representa un coeficiente que indica la eficiencia del choque,
es decir, indica la frecuencia con que un choque da lugar a un agregado. Este
coeficiente puede ser estimado estudiando la velocidad con que decrece el nmero
de partculas durante el crecimiento ortocintico. El trmino entre parntesis
cuadrados es una medida del esfuerzo de corte promedio para flujos isoentrpicos
turbulentos.
Si se sustituye la expresin de k en la ecuacin (9.26) se obtiene:
(9.28)
(9.29)
Despejando
de la ecuacin anterior y sustituyendo en la ecuacin (9.28), se
obtiene una ecuacin en la cual no est involucrado el dimetro de las partculas
y es:
dyj
dt
Vi
(9.30)
449
9.4.2.
M to d o s de D ise o
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
450
Se pide estimar:
a) El tiempo en que el crecimiento est limitado por la difusin y la concen
tracin de partculas al final de este tiempo.
b) El tiempo para alcanzar un tamao de partcula de 50 pin.
451
Solucin:
Se tienen los siguientes datos:
p, 1.032 g/cm3
pv = 1.367 g/cm3
i/ =0.01 cm^/s
P = 1.0 H P = 746 x 10' g-cn ^/s'5
V = 1000 L_______________________
yo = 0.1 g/L_____________________
M = 27,000 Da
d = 0.002 x 1Q-1 cm
D = 8.5 x 10 ' cmz/s
a = 0.08
3.46 s
Vi
= + (8 n D d N )t
V io
452
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
_1_
Vi
( 0.002 x 10~ 4cm ) x ^6.02 x 1023
_1_
Vi
3.7 x 10- 9
cm
+ 8 .9 X 1 0 12
cm 3
mol
mol
entonces,
yi = 1.12 x 10"13
mol
cm3
(t )
pN
( l . 367
5.39 x 10,e
7T (50 x 10-4)
cm'
3T
enr
partcula
mol
entonces.
Vi
Vio
27,000 7
--------m oL _ = 5 X i o- t 3
5.39 x 1016
mol
453
ero3
* =
= 731 x 10" 5
0-1
- ln(5 x 10~13)
( \ x 0.08
l
(
7.31 x 10~5N\ I
-
|l 106 c m 3
'
1.032 - 4 r x 0.01
/
cmJ
s '
4,474 s
el paso controlante en esta precipitacin es el crecimiento ortocintico.
P re c ip ita d o re s continu os
En un reactor tubular cuando se tiene un buen mezclado en el punto donde
se agrega el agente precipitante, la protena se ubica rpidamente a las condi
ciones finales en que ocurre la precipitacin. Las fuerzas de corte a las que est n
sujetas las partculas pueden ser las que produce el flujo laminar, aun cuando
la velocidad media de corte puede exceder a la de un tanque agitado.
En un reactor continuo tipo tanque agitado la protena es puesta en contacto
instantneamente con el agente precipitante, alcanzndose al mismo tiempo las
condiciones finales de precipitacin. Las condiciones de corte son muy parecidas
a las de un precipitador por lotes, y las partculas estarn sujetas a las fuerzas
de corte durante el tiempo de residencia en el reactor (Glatz, 1990).
La Figura 9.18 muestra la influencia del tipo de reactor sobre la cu n a de
insolubilizacin por salado de la funmrasa (Bell et al., 1983). Puede obsenarse
que existe un desplazamiento en la cunas, que puede ser debido a diferencias
locales en el pll. provocadas por la forma como se agrega el sulfato de amonio.
El mismo corrimiento se obsena cuando hay variacin en el grado de mezclado
en un tanque agitado.
Los resultados anteriores sugieren que un factor importante a considerar en
el diseo del reactor, es la agitacin que se proporciona a la solucin en la que se
encuentra la protena de inters. Esto es particularmente importante cuando se
desea escalar el proceso debido a la relacin que hay entre potencia y agitacin.
Para visualizar el diseo de precipitadores continuos, se puede partir de un
sistema sencillo donde se cuenta con una suspensin diluida ( < 20 g/L) y ve
locidades de agitacin moderadas, de tal manera que el rompimiento de los
agregados pueda ser despreciado (Rohani y Chen, 1993). Bajo estas condiciones
es posible utilizar balances poblacionales para derivar expresiones de las veloci
dades de nuclcacin, crecimiento y agregacin a partir de datos experimentales.
Las correlaciones empricas que se obtienen son de la siguiente forma:
454
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
Figura 9.18: Influencia del tipo de contacto sobre la curva de insolubi Azadn por
salado de fumarasa. ( V ) contacto intermitente con sulfato de amonio slido: (o)
contacto intermitente con solucin saturada de sulfato de amonio; ( ) contacto
continuo r = 96 s , V = 0.38 L y solucin saturada de sulfato de amonio; ( A )
contacto continuo r = 918 s, V = 1.87 L y solucin saturada de sulfato de
amonio. Bell ct a/, 1983. Reproducida con el permiso de Springcr-Verlag. Copyright 1983.
Todos los derechos reservados.
B = k exp ( - ^ r ) aaI bu cr i
(9.32)
G - k o exp
(9.33)
=
donde:
B : Velocidad de nucleacin. [nmero de ncleos/L-h].
G : Velocidad de crecimiento pericintico. [/zm/h].
Iogg'- ndice de agregacin. Medida del crecimiento ortocintico.
[adim.].
kb , k c y k: Constantes cinticas, [unidades consistentes;.
E b - E q y E a - Energas de activacin. [kJ/mol].
o : Sobresaturacin aparente.
(9.34)
455
(9.35)
donde:
N p: nmero de partculas por unidad de volumen en el precipitado. [nm/L3].
N u: nmero de partculas formadas por nuclcacin en un tiempo de residencia.
[mim/L3].
Cuando la agregacin es total el ndice toma el valor de uno, cuando no
existe agregacin el ndice toma el valor de cero.
1.a definicin de sobresaturacin en un proceso de precipitacin es compleja.
En el caso de ma precipitacin continua la sobresaturacin puede definirse como:
C c -G ,
<7
donde Ce y
cipitados
(9.36)
Ce
-16540 y j
RT )
4.8 x 1016
-2860
0.7 [exp ^
) ] <r-67r
RT
Ia 9 9
1.2 [e x p ^
-470 \ |
0.5.723^-0.1^0.905^.-0.215
-0.091, 0.625_0.833
0J
a 0.0071-0.003^,0.00^0.008
RT )
Se pide estimar:
a)
La velocidad de nuclcacin, la velocidad de crecimiento y el ndice de
agregacin cuando la precipitacin se efecta a las condiciones siguientes: a =
0.6246, r = 0.048 h, u = 270 rpm, I = 0.027 mol/L y T = 295 K.
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
456
-16540
B
~W ~
mol K
____
x 295 K
[(0.6246)5-723(0.027)- o l (270)o,9O5(0.048)_o'215
num
=
1 .6 7 x l O 15
L - h
-2860
0.7 exp I ------------ -----------------V 8.314
x 295 K /
V
mol K
/
-470
logg
kJ
1.2 exp
kJ
moL
kJ
8.314
mol K
x 295 K
[(0.6746)OOO7(0.027)_o'OO3(270)o'0O'i (0.048)'008]
0.99
'099
b)
9.5.
Nn
B t ( 1 - I agg)
Nn
^1.67 x 1015
8 .0 1 6 x 1 0 "
(0-048 h) (1 - 0.99)
num
Sumario
457
9.5. SUMARIO
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
458
9.6.
Problemas
9.1. P a r m etro s d e p rec ip ita c i n . En la precipitacin de alcohol deshidrogenasa con sulfato de amonio utilizando un volumen de 30 m L , en determina
ciones realizadas en el sobrenadante se obtuvieron los resultados siguientes:
% d e S atu racin
(N H 4)2SO,
A c tiv id a d
Especfica
50
45
40
35
25
180,000
200,000
650,000
440,000
430,000
P ro te fn a
total (mg)
29.80
21.28
17.87
8.65
23.87
9.7. BIBLIOGRAFA
9.7.
459
Bibliografa
Bell, D.J.; Hoare, M.; Dunnill, P. 1983. The formation o f protein precipitates
and their centrifugal recovery. En: Doumstream Processing. Advances in
Biochemical Engineering. Springcr-Vcrlag. New York. 26, 1-72.
Chan, M .Y.Y.; Hoare, M.; Dunnill, P. 1986. The kinetics o f protein precipitation by different reagents. Biotech. Biocng. 27, 387-393.
Clieng, Y.; Lobo, R.F.; Sandler, S.I.; Lenhoff, A.M . 2006. Kinetics and equilibria o f lysozymc prccipitation and crystallization in conccntratod ammoniuin sulfate Solutions. Biotech. Bioeng. 94, 177-188.
Clark, VV.M. 1989. Thermodynamics o f protein partitioning in aqucous two
phase System. En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology. Shuler,
M.L. (Ed.). AIChE. New York. 147-179.
Foster, P.R.; Dunnill, P.; Lilly, M.D. 1973. The precipitaron o f enzimes from
cell extraets o f Saccharomyces cerevisiae by polyethylene glycol. Biochem.
Biophys. Acta. 317, 505-516.
Glatz, C.E. 1990. Prccipitation. En: Separation Processes in Biotechnology.
Asenjo, J.A. (Ed.). Marcel Dckkcr. New York. 329-356.
Guo, R.; Guo, M.; Narsimlian, G. 1996. Thermodynamics o f precipitation of
globular proteins by nonionic polymcrs. Ind. Eng. Chem. Res. 35, 30153026.
Hilbrig, F.; Freitag, R. 2003. Protein purification by affinity prccipitation. J.
Chromatogr. B. 790, 79-90.
Janson, J. 1984. Largc-scale affinity purification. State o f thc art and futurc
prospeets. Trends Biotech. 2, 31-38.
Juckcs, I.R.M. 1971. Fractionation o f proteins and viruses with polyethylene
glycol. Biochem. Biophys. Acta. 229, 535-546.
Luong, J.H.T.; Nguyen, A.L.; Male, K.B. 1987. Rocent devclopmcnts in downstream processing based on affinity interactions. Tibtech. 5, 281-286.
McDonald, P.; Victa, C.; Carter-Franklin, J.N.; Fhhrncr, R. 2009. Selectivo
antibody precipitation using polyelectrolytes: a novel approach to the pu
rification o f monoclonal antibodies. Biotech. Bioeng. 102, 1141-1151.
Mondal, K.; Gupta, M.N.; Roy, I. 2006. Affinity-Based Stratcgies for protein
purification. Anal. Chem. 78, 3499-3504.
Rohani, S.; Chen, M . 1993. Aggregation and precipitation kinetics o f cala
protein by isoelectric precipitation. Caad. J. Chem. Eng. 71, 689-698.
460
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
C aptu lo 10
Ultrafiltracin
10.1.
Introduccin
462
10.2.
Fundamentos
10.2.1.
Actualmente existen varios procesos que emplean una membrana para lograr
una separacin dada (M e Gregor, 1986). Estos procesos se pueden caracterizar
en forma general con base: a) la fuerza impulsora del proceso, b) el tipo de
membrana que emplean y c) el rango de tamao de partcula que retienen sus
membranas.
De acuerdo al tipo de fuerza impulsora los principales procesos con mem
branas (Tabla 10.1) se pueden clasificar de la siguiente forma:
Gradiente de presin
Ultrafiltracin (U F ).
Microfiltracin (M F ).
sinosLs Inversa (O I).
Gradiente de concentracin
Dilisis (D).
Gradiente de Voltaje
Electrodilisis (E D ).
El tipo de membrana puede ser microporosa convencional o anisotrpica
(Fig. 10.1). Estas son las ms utilizadas en U F debido a que las membranas
microporosas convencionales poseen una estructura tortuosa que provoca reten
cin irreversible de partculas dentro de la matriz, lo que dificulta su limpieza y
reuso. Las membranas anisotrpicas tiene dos capas caractersticas: una pelcula
delgada y densa de 0.1 1.5 /n de espesor y bajo la pelcula una subestructura
microporosa de 0.1 1.0 mrn que presenta aberturas progresivamente mayores
(en forma de v), que facilitan el paso del solvente y los solutos que logran pasar
la pelcula. En el caso de las membranas tipo composite se utilizan dos tipos de
materiales para formar la membrana anisotrpica.
463
10.2. FUNDAMENTOS
Fueran impulsora
Presin de operacin (k P a)
T ip o de membrana
- - 10 *
300 - 104
3 0 0 - 1CP
30 - 300
1 0
*
1 0 *
1 0 *
300
- 10
- 10
- 10
10*
2 0 0 - 400
100- 500
1 - 1
1 0
OI
A/>
100-500
Microporosa
Asimtrica
A l>
A C
700-20.000
Semiper
meable
Asimtrica
Dilisis
10 - 2 0 0
1- 2 0
Simtrica
-
nm
Hongos
Levaduras
Bacterias
Coloides
Virus
Protenas
Polisac rido
Enzimas
Antibiticos
Azcar
Ac. Orgnico
ln inorgnico
UF
A/'
100-500
Microporosa
Simtrica
50-1000
Tanino
*-*
0
B
1
Rango de retencin
Especie
MF
2 - 1 0
2 - 1 0
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
2-5
- 1.2
0 .8 - 1
0 . 1 - 0 .8
0 .6
- 6.4
X
X
X
U ltra flltra c i n
La ultrafiltracin utiliza membranas generalmente asimtricas o anlsotrpicas para separar macromolculas y partculas, de molculas pequeas y solventes
(Fig. 10.2a). El dimetro de los poros de este tipo de membranas vara entre
0.001
0.1
m.
464
10.2. FUNDAMENTOS
465
10.2.2.
466
Flux de fluido
Membrana
x=0
x -b
Capa limite
Figura 10.3: Gradiente de concentracin durante la UF. Fenmeno de polari
zacin. Fuente: Tutunjian. 1985b. Reproducida con el permiso de Elscvicr Science Inc.
Copyright 19S5. Todos los derechos reservados.
10.2.3.
Teora de la Ultrafiltracin
Flux
En UF se utiliza la variable J para describir el flux de permeado o velocidad
del permeado a travs del lecho filtrante, mientras que en la filtracin conven
cional se utiliza la variable u para el mismo efecto, es decir,
Q
Gasto volumtrico
rea
467
10.2. FUNDAMENTOS
b)
>
- pf
o bien.
A P
A P T A / = + P0 - Pf
donde:
A P T A / : Gradiente de presin transmembrana.
P i:
P0:
(10.1)
468
R*ik>o
Po
*
^
<s>moniacwi
W
Mdduto
A*
- i v*
7
Monteara
[Yf
0*UF
* n*rw*>
FV*3C).
ir
PtnrmaOo
U im rta o a n
Q *
Figura 10.5: Relacin de presiones en UF. a) Flujo y b) Vlvulas. Fuente: Tutunjian, 1985b. Reproducida con el permiso de Elscvier Science Inc. Copyright 19S5. Todo
lo* derechos reservados.
A P = Pi - P0
entonces
Po = (1.70 - 0.68)
cm
= 1.02
cm2
y
A P T A / = P - 7 + L 0 2 ) J i L = i.3 6
2
cm2
cm2
469
10.2. FUNDAMENTOS
con el permiso de Johu WUey and Sons. Copyright 1987. Todos los derechos reservados,
1983.
(10.2)
470
Modelo basado en la ley de D arcy Por otro lado, cuando se utiliza la ley
de D arcy como se hizo en el caso de la filtracin convencional (Captulo 3) se
obtiene la siguiente expresin:
A P T A / (tA tt
Hiftm + R a)
(10.3)
donde:
R m: Resistencia de la membrana.
R a: Resistencia de la capa de soluto de polarizacin.
El coeficiente de retencin en un instante dado durante el proceso de U F
est definido de la manera siguiente:
a = 1-
Cr
Cu
(10.4)
donde:
C p : Concentracin de soluto en el permeado.
C b : Concentracin de soluto en el seno de la solucin.
a: Coeficiente de retencin del soluto por la membrana.
<7 = 1: Retencin completa del soluto por la membrana.
<7 = 0: Retencin nula del soluto por la membrana.
Modelo de resistencias
471
10.2. FUNDAMENTOS
A n lisis d e l c o m p o rta m ie n to e x p e rim e n ta l d e la U F
Movimiento
convectivo de
soluto hacia la
interfase
Movimiento
difusivo del
soluto de la
interfasc al
seno del fluido
Movimiento
convectivo de
soluto fuera
de la interfase
472
re =
ab~
dx
rc ,
donde:
* : Constantes en estado estacionario.
A P T M : Constante.
D a b ' Difusividad del soluto en la solucin.
x : Coordenada espacial.
Separando variables c integrando a lo largo de la capa lmite con:
i = 0;
x = 6;
C C b
C = Cw
(10.7)
473
10.2. FUNDAMENTOS
( 10.8)
(10.9)
r = k, ln
(10.10)
(10.11)
(10.12)
474
(10.13)
o bien cuando se usa el esfuerzo cortante definido como:
(10.14)
entonces,
(10.15)
donde 7 es el esfuerzo cortante del fluido sobre la membrana.
2.
oc u 0 *3
(10.16)
10.2. FUNDAMENTOS
475
476
J = k, I n ( ^ )
(10.17)
A P T M (kg/cm2)
0.00
0.33
0.66
1.00
1.33
1.66
2.00
Concentracin % peso
1
10
5
20
00.00
18.00
33.00
47.00
50.00
52.00
54.00
00.00
17.50
30.00
36.00
36.50
37.00
37.50
00.00
17.00
21.80
22.20
22.60
23.00
23.40
0.00
7.00
7.33
7.66
8.00
8.33
8.66
477
10.2. FUNDAMENTOS
o
11
CG
Cc = 30%
b) Clculo de k
El coeficiente est dado por la pendiente de las curvas en
la zona de formacin del gel y puede ser estimada con dos puntos sobre la recta.
Se puede resumir con base a la discusin de los dos modelos anteriores, que
en la ultrafiltracin el flux J se puede controlar por medio de la A P T M y la
velocidad de flujo cruzado. El flux aumenta linealmente con A P T M en su fase
inicial, posteriormente empieza a disminuir la rapidez de aumento, y finalmente
cuando ocurre la polarizacin J se hace independiente de A P T M y permanece
constante.
El flux puede mejorarse incrementado la velocidad del flujo cruzado, lo cual
implica un incremento en el esfuerzo cortante sobre la superficie de la membrana.
Incrustacin de la membrana
Uno de los problemas que se observa durante la operacin de un sistema
de UF es la reduccin progresiva en el flux manejable conforme aumenta el
478
J<J
Para
dm
dt
= C b J - km
dm
> j
~dt
= Cb J
donde k es una constante que depende del tamao y distribucin de las partculas
y el potencial de su adhesin a la membrana. El trmino km es la velocidad de
desprendimiento de la torta. El parmetro J es un flux crtico. La remocin
del gcl por flujo cruzado slo es efectiva si el flux J es menor que J .
Tambin se cumple que:
dV
dt
J A
Para
Para
dCn - A km
~dT ~ ~ V ~
J > J
P (Rrn + R*)
APTA/
P (Rm + )
APTA/
~~ P (bRm0 + Offll)
479
cq
Se p id e:
Obtener la variacin del flux de permeado y del volumen de permeado con
el tiempo de filtracin.
Solucin:
En la Figura 10.11 se presenta un programa M A T L A B para la solucin del
ejemplo y en la Figura 10.12 los resultados grficos.
10.3.
Equipos de Ultrafiltracin
480
Figura 10.12: Resultados del Ejemplo 10.3. a) Variacin del flux con el tiempo
y b) Acumulacin de volumen de permeado.
Figura 10.13: Sistema tpico de UF por lotes. Fuente: Belter et al., 1988.
Repro
du cid con el permiso de John W iley nd Son*. Copyright 1988. Todo lo derecho rcservndos.
10.3.1.
Membranas
481
Materiales:
Acetato de celulosa
Poliamida
Polisulfona
Politet rafluro
Etilcno
Polipropileno
Cermica
Polister
Estructura:
MF
Uk
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Asimtrica
Simtrica
% de Porosidad
Superficial:
Tamao de poro:
0 .1
30-70
1 |im
2 - 12
X
Asimtrica
1 - 1 0
1
tirn
Asimtrica
3-10
75
-
1-14
1-14
130
140
1-14
1-13
-
130
140
150
Simtrica
10 -2 0
0.3 3 n m
Reproducida con el permiso de Marcd Dekker Inc. Copyright 1990. Todo* lo* derecho* rwervado*.
10.3.2.
Mdulos
482
M d u lo s d e h o ja plana
Los mdulos de hoja plana (Fig. 10.14a) son muy similares a los filtros con
vencionales de marcos y placas. Su principal ventaja es su versatilidad. Este
tipo de mdulos pueden trabajar a presiones mayores que los otros tipos, por lo
que son empleados para manejar soluciones viscosas. Los mdulos de hoja plana
pueden ser utilizados tanto en M F como en UF. Adems, pueden ser desmon
tados para su limpieza y permiten restituir hojas defectuosas. Una desventaja
es que su rea por unidad de volumen es menor en relacin a los otros tipos de
mdulos y producen un flux moderado.
Rcpro-
ducida con el permiso de Elscvicr Science Inc. Copyright 19S5. T od o los derechos reservados,
b)
del Institutc of Food Tcchnologiosts. Copyright 1990. Todos los derechos reservados.
M d u lo s d e h o ja p lega d a
Los mdulos con membranas en forma de hoja plegada (Fig. 10.14b) per
miten un arreglo tubular con rea ampliada, por lo que presentan propiedades
similares a los de hoja enrollada en espiral.
M d u lo s d e h o ja e n ro lla d a en espiral
Los mdulos de hojas enrolladas en espiral (Fig. 10.15) utilizan un diseo
de membranas con espaciadores tipo malla separando la membrana. Este tipo
de arreglos producen un flux mayor que los de hoja plana debido a que pre
sentan una mayor rea por unidad de volumen. Son ms difciles de limpiar y
frecuentemente debe descartarse toda la unidad aun cuando slo parte del m
dulo est daado. Como consecuencia este tipo de mdulo se recomienda para
caldos relativamente limpios o en combinacin con un prefiltro.
M d u lo s d e tu bos y carcaza
Los mdulos de tubos y carcaza presentan una geometra similar a los in
tercambiadores de calor de tubos, con varios tubos unidos en sus extremos a
483
484
S istem as d e discos g ira to rio s Los sistemas de discos giratorios (Fig. 10.17b)
proveen una mayor rea de filtracin y consisten en un conjunto de discos mon
tados sobre una o varias flechas que giran entre membranas circulares de hasta
85 cm de dimetro y reas hasta de 100 m2. Estos sistemas toleran hasta 600
kPa de presin y estn disponibles con membranas polimricas o de cermica
(Serra y Wiesner, 2000).
485
10.4.
Diseo de Equipos de U F
486
Densidad de empaque
Area (m /m-*)
Tolerancia a slidos
suspendidos
Facilidad de limpieza
Reemplazo
Moderada
200-400
Moderada
300-900
Baja
150-300
Alta
9000-30.000
Moderada
R c n lar
Hojas o mdulo
Baja
Regular
Mdulo
Buena
Buena
Tubos
Baja
Fibra
hueca
Caracterstica
T ip o de mdulo
Hoja
Tubo y
carcaza
enrollada
Hoja
plana
Mdulo
El objetivo de la UF.
La mecnica de fluidos del sistema.
El mtodo de operacin apropiado.
El diseo de la unidad de UF.
10.4.1.
Objetivo de la UF
Diaflltracin
En la diaflltracin se separan macromolculas de una solucin, de molculas
pequeas como sales, azcares o alcoholes por medio de un equipo de UF. El
permeado que sale del sistema es reemplazado con agua desionizada o buffer
(Fig. 10.18b).
Purificacin
La UF donde el objetivo es recuperar el permeado que contiene un solvente
de inters o una solucin con solutos de bajo peso molecular se conoce como
purificacin (Fig. 10.18c).
487
reservados.
10.4.2.
Mecnica de Fluidos
- Pf
(10.18)
donde: A P = (P { - P u)
La ecuacin (10.18) permite optimizar la relacin de A P T M con A P , cuan
do la Pi se fija como la presin mxima de operacin del equipo. Bajo esta
condicin, al aumentar A P T M , la A P disminuye y por lo tanto la velocidad
del flujo cruzado del fluido. Por el contrario, al disminuir A P T M , la A P au
menta y por lo tanto aumenta la velocidad del flujo cruzado U . El flux ser
ptimo para una cierta combinacin de A P y A P T M ; visto de otra manera,
para una combinacin de P, y P a. Esto ocurre generalmente donde se inicia la
formacin de la pelcula de gel.
488
Figura 10.19: Variacin del flux con A P T A ! , a ) Datos Ejemplo 10.4 con presin
de entrada fija y la velocidad de recirculacin variable y, b) Regin de operacin
factible. Adaptada de: Tutunjian, 1985b. Reproducid con el permiso de Elacvicr Science
Inc. Copyright 01985- Todos los derechos reservados.
Q = 29.41 A P
donde A P tiene unidades de kg/cm2 y Q de L/min (rea fija).
Se p id e:
a) Encontrar la regin de operacin factible.
b) La combinacin A P T A y A P que permita el mximo flux.
Solucin:
a) Regin de operacin factible. A l fijar la presin de entrada P, a un valor
mximo de 1.7 kg/cm2, tanto la A P como la A P I 'A l se restringen a un rango
posible de valores, en funcin de la presin de salida Pa la cual puede ser regulada
mediante la vlvula de salida.
En la Tabla 10.5 se presentan algunos valores de este rango. La Figura 10.19b
muestra la regin de operacin factible con base a estos datos.
b) Flux mximo. En la Figura 10.19a se puede observar que para cada com
binacin de P, con Pa o A P con A P T A 1, existe un flux factible alcanzndose
un mximo cuando:
A P = 1.02 kg/cm2;
489
Tabla 10.5: Clculo de la regin de operacin factible. Datos del Ejemplo 10.4.
kf?/cm2
AP
Pi
Po
1.70
1.70
1.70
1.70
1.70
1.70
0.00
0.34
0.68
1.02
1.36
1.70
1.70
1.37
1.02
0.68
0.34
0.00
APTA/
0.85
1.02
1.19
1.36
1.53
1.70
L/min
JA
Q
50
40
30
20
10
00
2.30
2.80
2.90
2.40
1.70
0.00
10.4.3.
Mtodos de Operacin
I/DS sistemas de UF pueden ser diseados para operar por lotes (con o sin
recirculacin interna) o en forma continua.
O p e ra c i n p o r lotes
En una operacin por lotes sin rccirculacin (Fig. 10.20a), la solucin que
inicial mente est contenida en un tanque de proceso, es bombeada a la unidad de
UF y regresada al tanque. Conforme transcurre la operacin el volumen proce
sado disminuye hasta alcanzar la concentracin final deseada. De esta manera
la concentracin del producto en el tanque aumenta gradualmente durante el
proceso, a la vez que el flux decrece proporcional mente a sta.
La operacin por lotes con recirculacin interna (Fig. 10.20b) emplea dos
bombas. Una de recirculacin para proveer la velocidad de flujo cruzado ptima
y la bomba de alimentacin, La velocidad de alimentacin debe mantenerse alta,
de tal manera que la concentracin en el circuito de recirculacin sea cercana a la
concentracin del tanque alimontador. Esto generalmente se logra manteniendo
una relacin de 20 veces la velocidad de alimentacin a la de permeacin.
Cuando al tanque de proceso se le alimenta lquido para lavar la solucin
la operacin por lotes respectiva, se convierte en una operacin por lotes de
diafiltracin. La desventaja principal de los sistemas por lotes es que general
mente requieren ms tiempo de residencia (lo cual puede afectar al producto) y
tanques de proceso ms grandes. Este tipo de operaciones tambin pueden ser
tiles en el fraccionamiento de caldos (Lightfoot et al., 2008).
490
O p era ci n continua
La diferencia entre una operacin por lotes y una continua es que en esta
ltima, el retenido es retirado continuamente del sistema a la concentracin final
deseada (Fig. 10.21a). En estado estacionario el flux es constante y mnimo. Para
contrarrestar esta limitacin de la operacin continua, los sistemas utilizados son
generalmente de etapas mltiples (Fig. 10.21b).
10.4.4.
Diseo de la Unidad de U F
491
C B = C Bo
V = V
Cb = Cb
conduce a:
dCB
(CB - CP )
V V0 exp
( 10.20)
( 10. 21)
A dt
donde A es el rea de UF, puede ser integrada entre 0 y
ayuda de la ecuacin (10.20) de la siguiente forma:
r
At
c o
exp
Cbji
i
-
Vo - /
Obo
dCg
(Cb - C p )
y expresada con
i
dCQ
bo
J (C b - C P )
( 10.22)
492
(io23)
La ecuacin (10.23) puede ser utilizada para calcular el rea necesaria para
realizar una concentracin de C bo a C b / en un tiempo t o para calcular dicho
tiempo dada el rea de UF disponible. Este clculo requiere la evaluacin de la
parte derecha de la ecuacin (10.23), lo cual puede realizarse utilizando un pro
grama adecuado o calculando el rea bajo la curva de los datos experimentales
graficados como:
(i) - (A)
Para realizar estudios de escalamiento tambin puede utilizarse la expresin
experimental de la variacin del flux con C u obtenida en equipos de laboratorio,
conjuntamente con la ecuacin 10.23.
Se p id e calcular:
a) El rea de U F necesaria.
b) El nmero de tubos necesarios (diseo modular).
c) El flux promedio.
Solucin:
a) Clculo de rea. Con los datos y la ecuacin (10.23) se obt iene la expresin:
a
= 1000
uS
dx
81n(15x)
493
rea total
40 m2
5r x 0.012 m x 1.2 m
= 884 tubos
c)
Clculo del flux promedio. Mediante mi balance de soluto se obtiene
primero el volumen final de la solucin:
VoCo = Vf C f
de tal manera que,
V, =
= 2000 L
(10,000 - 2000) L
'V o m
40 m2 x 20 h
tn
" 10 m2 h
494
t-'n
(10.24)
Jn
Pn = AJn
(10.26)
495
(10.27)
Se p id e calcular:
a) El rea necesaria para un procesamiento por lotes y el flux promedio.
b) El rea necesaria para un procesamiento continuo de 5 etapas y el flux
promedio.
c) La variacin del rea total de la U F con el nmero de etapas.
Solucin:
a)
Area UF por lotes. Utilizando la ecuacin (10.23) se puede llegar a la
siguiente expresin:
^por lotes
496
b)
El rca/etapa para 5 etapas y el flux promedio. Et la Tabla 10.6 se
presentan los clculos utilizando las ecuaciones (10.24)-(10.28), donde la relacin
rea/etapa = 32.875 m2 satisface la condicin de diseo.
Tabla 10.6: Area para procesamiento continuo en 5 etapas. Datos del Ejemplo
10.6.
Fn
(L/h)
Cn
(% en peso)
Jn
(L/m2h)
Pn
(L/h)
5
4
3
2
1
0
500.00
766.59
1314.17
2216.14
3461.69
5000.00
20.00
13.04
7.61
4.51
2.89
2.00
8.11
16.66
27.44
37.89
46.81
266.59
547.57
901.97
1245.55
1538.79
Total
4.500.00
J prom
4500 y
- L = 27.38
m2 h
164.375 m2
c)
Variacin del rea total. Utilizando el procedimiento del inciso b) se rea
lizan los clculos para obtener la Tabla 10.7.
Tkbla 10.7: Clculos para diferentes nmero de etapas. Datos Ejemplo 10.6.
Nmero de
etapas totales
rea por
etapa (m 2)
rea
total (m2)
Flux promedio
(L/m2h)
1
2
3
5
10
555.00
119.22
63.98
32.88
14.77
555.00
238.44
191.94
164.37
147.74
8.11
18.87
23.44
27.38
30.45
497
Figura 10.24: Variacin del rea total de U F con el nmero de etapas. Datos del
Ejemplo 10.6.
(10.29)
donde:
Vr : Volumen retenido en el tanque. [L 3].
C i : Concentracin de impureza en el tanque. [M / L 3].
P : Flujo de permeado. \L3ft].
Dado que en la operacin V r es constante, el flujo de permeado puede
igualarse al flujo de solucin de lavado, entonces:
dVD
dt
= - c ,
dt
C7
C,
C Io
VD = 0
Vd = Vd
(10.30)
498
C = C /oexp
(-*)
(10.31)
(10.32)
vR
( A t
(10.33)
j = f c *in( 0
( i o '34)
il
Vr
(10.35)
1 ^ 1
Se p ide:
a) Calcular el efecto sobre la pureza de la solucin, de la razn del volumen
de diafiltracin a volumen de retenido o ndice de lavado.
b) Calcular el rea de diafilt racin necesaria para lograr una pureza del 99%
en un tiempo de 10 h.
c) E l volumen de solucin de lavado de diafiltracin para el inciso b).
Solucin:
a) Variacin de la pureza con el ndice de lavado. Utilizando la ecuacin
(10.31) se pueden obtener los resultados que se presentan en la Tabla 10.8.
b) rea de diafiltracin. Utilizando la ecuacin (10.35) y los datos se tiene
que:
499
Ci
CB
C + C b
3.00
1.10
0.41
0.15
0.05
15
15
15
15
15
18.00
16.10
15.41
15.15
15.05
2
3
4
-2 0 (A )(1 0 h)
0.05 = exp
r
L-B
Pureza = -----
C7 + Cfl
0.833
0.932
0.973
0.990
0.996
il
m2 h
5000 L
de donde se obtiene:
A = 108 m2
c)
Volumen de diafiltracin. La ecuacin (10.32) puede ser usada para cal
cular Vo. de tal manera que:
VD = J A t =
20 ln
(i)
m2 - h
donde:
C7: Concentracin de impurezas despus de n lavados.
(10.36)
500
(10.37)
o bien como:
donde:
501
At =
(10.40)
Co C
= 1 - l = 1 exp
CIo
Co
~
502
Co
C jn _
_ Cn
&
I)c acuerdo a lo anterior si V d
/V
__________________
= 2 el % de eliminacin de impurezas
es:
Operacin por lotes:
(1 - e " 2) x 100 = 86.5%
(1 + 2)1
x 100 = 66.7%
x 100 = 75.0%
1-
x 100 = 78.4%
503
- (
504
V d t /V r
0
2
4
6
8
10
% de eliminacin de impurezas
Intermitente
Continua
0.0
86.5
98.2
99.8
100.0
100.0
1
0.0
66.7
80.0
85.7
88.9
90.9
2
0.0
75.0
88.9
93.8
96.0
97.2
3
0.0
78.4
92.1
96.3
98.0
98.8
4.6V7
505
M L)
1000.00
500.00
333.33
250.00
200.00
166.67
142.86
125.00
111.11
100.00
90.91
v <L )
4600.00
2300.00
1533.33
1150.00
920.00
766.67
657.14
575.00
511.11
460.00
418.18
C n (% )
J A (L/h)
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00
12.00
14.00
16.00
18.00
20.00
22.00
1301.34
954.77
752.0-4
608.20
496.63
405.47
328.39
261.62
202.73
150.05
102.40
M b)
3.53
2.41
2.04
1.89
1.85
1.89
2.00
2.20
2.52
3.07
4.08
506
10.5.
Sumario
507
10.6. PROBLEMAS
10.6.
Problemas
J (mL/cm*s) x 10
15.1
12.0
11.0
8.5
7.0
6.5
e
donde e es la base de los logaritmos naturales.
10.3.
C o n cen tra ci n y d ia filtra c i n . Se desea concentrar 75,000 L de
una solucin proteica del 2 al 15 % en peso y reducir su contenido de sales 5
veces. El tiempo de proceso es de 12 horas y la expresin experimental del flux
es:
J =
L
m2 h
Se p id e:
a) Calcular el rea mnima para una operacin por lotes a volumen constante.
b) Calcular el rea total para una operacin continua en cascada con 3 etapas
de igual rea.
R esp. a ) 321 m2 y b) 410 m2.
10.4.
U F en fibras huecas. A l procesar un lote de 2.9 L de un caldo
que contiene 23.77 g/L de B. megatherium en una unidad de fibra hueca de
0.0316 m2 de rea, la solucin se concentra 5.3 veces en 14 min.
Se p id e:
a) Calcular la concentracin final del caldo.
b) Calcular el flux promedio de la operacin.
R esp . a) 0.547 L y b ) 319 L/m2h.
508
J=
(1 0 0 \
cm3
5xl taf e )
509
10.6. PROBLEMAS
M em b ra n a
PM-10
PM-30
S olu to
Proteasas
Sales
Protcasa
Sales
C o e fic ie n te
0.99
0.00
0.80
0.00
510
10.7. BIBLIOGRAFA
10.7.
511
Bibliografa
512
C aptu lo 11
Electroforesis
11.1.
Introduccin
11.2.
Fundamentos
514
cual se encuentra inmersa en un electrolito que sirve como buffer. Dichas matri
ces tienen la propiedad de constituir medios porosos altamente hidratados, que
proporcionan resistencia mecnica y disminuyen los efectos del calor generado
por el paso de corriente al aplicar el gradiente de potencial a la celda.
En la cloctroforcsis de zona cada componente de la mezcla se mueve a diferen
te velocidad, separndose los componentes de la mezcla sobre la matriz. Cuando
esta tcnica se utiliza con fines cualitativos, despus de un tiempo apropia
do para desarrollar la clcctroforcsis, las matrices son teidas para observar los
componentes de la muestra
11.2.1.
11.2. FUNDAMENTOS
515
Tal como se muestra en la Figura 11.2, la carga neta de una protena depende
entre otros factores del pH al que sta se encuentre. A un p ll relativamente
bajo existen ms grupos - N H 3f y COOH y la protena tiene una carga neta
positiva: a un pH relativamente alto la protena tiene ms grupos N II 2 y
- C O O ~ y se encuentra cargada negativamente. Existe un pH particular para
cada protena donde la carga neta de sta es cero, a este pH se le conoce como
punto isoelctrico.
La carga que adquiere una protena en determinado pH, as como el punto
isoelctrico de sta, son dos propiedades que se utilizan para la correcta sepa
racin electrofortica de protenas.
Figura 11.2: Cambio de la carga neta de un protena con el pH. El punto Isoelc
trico en este caso se alcanza a pH = 4.0.
11.2.2.
Teora Electrocintica
516
Un balance de las fuerzas que actan sobre la partcula cuando sta se mueve
a una velocidad constante (en equilibrio), despreciando los efectos difusivos y
gravitacionales, establece que la fuerza que acta sobre la partcula debida al
campo elctrico, es igual a la fuerza debida al arrastre de la partcula, es decir:
Fk - F e
(11.1)
( 11.2)
F k = Sn^idv
donde:
v : Velocidad terminal de la partcula. [L/t\.
fx: Viscosidad lquido. [M / L ].
d: Dimetro de la esfera. [L].
(iu )
donde:
Z\. Valencia de la partcula o carga puntual.
T . Constante de Faraday. [96,500 C/molequivj.
N 0: Nmero de Avogadro. [zi ioncs/mol-oquiv).
E : Campo elctrico. [V/cmj.
Si la partcula est en equilibrio es posible combinar las ecuaciones (11.1),
(11.2) y (11.3) para obtener:
(11.4)
En la expresin anterior N 0 puede ser expresada en funcin de la constante
de Boltzman kB y la constante de los gases ideales R para obtener:
Z kBF E ^
V3T t f id jy
(11.5)
517
11.2. FUNDAMENTOS
D ab =
knT
37rpd
( 11. 6)
a b
Z\EE
(11-7)
KT
m =
( 11.8 )
T:
En este caso particular del modelo de esfera, la movilidad est dada por:
D \ b Z\T
m = W
(11.9)
518
Figura 11.3: Esquema de la doble capa cerca de una superficie cargada. Adap
tada de: Ivory, 1990. Keproducida con el permiso de Maree) Dckkrr Inc. Copyright 1990.
Todos los derechos reservados.
519
11.2. FUNDAMENTOS
Radio medio de la capa difusa El radio de la capa difusa tambin tiene una
influencia importante sobre la movilidad de la partcula. Utilizando la teora de
Debye-Hckel lia sido calculado el radio medio de la capia difusa o la longitud de
Debye A>. Esta longitud vara inversamente con la raz cuadrada de la fuerza
inica / (C&stellan, 1971), es decir,
Xd 7
donde la fuerza inica es una medida de la concentracin y valencia de los iones
que rodean la p>artcula, y est dada por:
= \ E c ^i
1=1
(u - io )
donde:
C*: Concentracin de la especie i.
zt: Valencia de la especie i.
En la mayora de los casos prcticos A d cs menor a 1000 A.
En el caso de electrolitos simtricos y monovalentes,
C+
= C ~ = C Q\
z+ = - z ~ = z0
se tiene:
(11.11)
donde:
e: Constante dielctrica del medio. [C2/Nm2 =F/m ].
Para analizar
los efectos del espesor de la capa difusa sobre la movilidad de la partcula,
es conveniente considerar tres casos particulares: a) con fuerzas inicas bajas,
es decir a concentraciones salinas bajas, la capa difusa es grande pero muy
diluida en contra iones, de tal manera que su presencia puede ser ignorada, b)
en ambientes de fuerzas inicas altas, como los caractersticos de los lquidos
fisiolgicos (0.15 M ), el espesor de la capa difusa es muy bajo ( ~ 2 A ) y su
presencia tambin puede ser ignorada y c) entre los dos extremos anteriores, se
puede considerar la situacin en la cual el espesor de la capa difusa es intermedio.
520
(11.12)
(11.13)
(11.14)
en este caso:
q\: Carga aparente de la partcula. [C].
q: Carga correspondiente al campo. (Cj.
r : Distancia entre las cargas, [m].
e: Constante dielctrica del medio. [C2/N m2 = F/m].
El potencial Z est dado por:
C= - e rc
(11.15)
(11.16)
(11.17)
(11.18)
521
11.2. FUNDAMENTOS
(11.19)
Esta movilidad es menor a la esperada si slo se considera la carga real de
la partcula y es aplicable cuando la relacin de radio de corto a longitud Debye
es muy pequea {rc/Xo
1)E je m p lo 11.1. C lcu lo del c a m p o qu e gen era un p ro t n . La carga,
radio y constante dielctrica del medio para un protn son las siguientes:
1.6 x 1 (T 19 C
r
1
31 x 1 0 "10 m
1
4Tf,
= 9 X 109
N-m 2
C2
E = T
~ -2
47T0
r
sustituyendo los datos se tiene:
^9 x 109
1.5 x 108
1.5 x 10
[(31 x 1 0 - )2 m2
V
m
_V_
cm
522
-()<->-()Kft)]
Algunos modelos predicen reducciones en la movilidad de Hllckel de hasta
60 % en el rango aproximado de
0.6 < < 6
AD
Para relaciones de r c/Xo
donde:
( 11.21)
que es una movilidad 50 % mayor que la predicha por la ecuacin de Ilckel.
Frierzas d e re la ja ci n y re ta rd a m ie n to A nivel microscpico la varia
cin de la movilidad ha sido explicada utilizando el modelo de doble capa y
proponiendo los efectos conocidos como: a) fuerza de relajacin y b) fuerza de
retardamiento.
Cuando la partcula emigra en direccin opuesta a su carga neta, se pre
senta una distorsin de la capa difusa (Fig. 11.5). Los contraiones de la capa
difusa tienden a emigrar en direccin opuesta creando un campo que se opone
523
11.2. FUNDAMENTOS
11.2.3.
Difusin
En una clcctroforcsis generalmente existe algo de dispersin de la mezcla
debida a la difusin molecular, sin embargo este fenmeno normalmente no es
la causa principal de la dispersin. De acuerdo a Jorgenson y Lukacs (Rudge
y Ladisch, 1986), la desviacin estndar de una muestra dispersada slo por
difusin est dada por:
a = y/2DABt
(11.22)
524
D a b = 9.4 x 10~11
T
it { M Ay/3
(11.23)
donde:
T : Temperatura. [K].
M a Peso molecular del soluto. [Daj
fi: Viscosidad de la solucin, [kg/m-s].
PM
Difusividad (cm/s)
Ovalbmina
ImG
Colgeno
45,000
150.000
345.000
7.88 x H T 7
5.27 x 10"7
3.99 x 10"7
525
11.2. FUNDAMENTOS
1 d<i>
dr*2 + r* dr*
= ^Scnh(<l>)
(A )
en r* = 0
y de la superficie del tubo,
(B )
526
en r* = 1 *> = C*
(C )
11.2. FUNDAMENTOS
527
G ra d ie n te s d e con d u c tiv id a d
Si la conductividad de la muestra es mayor que la del buffer, cuando el
campo se incrementa arriba de un valor crtico, puede provocarse una distorsin
en forma de puntas de la interfase. El buffer puede presentar ima menor
conductividad que la muestra por efecto de los iones que contiene.
S ob recalen tam ien to: E fe c to s trm ico s
Cuando una corriente elctrica se hace pasar a travs de un medio con una
determinada resistencia parte de la energa se convierte en calor, fenmeno cono
cido como Efecto de Joule. En una operacin electrofortica el calor generado
es proporcional al cuadrado del campo aplicado y al cuadrado del espesor del
gel, de tal manera que la cantidad de muestra est limitada por este espesor.
La existencia de gradientes trmicos puede desnaturalizar solutos lbiles,
daar el gel o estimular la evaporacin de solvente.
S ob recalen tam ien to: E fe c to d e con veccin lib re
Si la electroforesis se desarrolla en mi medio lquido en ausencia del gel de
soporte, los gradientes de temperatura pueden originar movimientos convectivos
libres debido a la accin de la gravedad sobre los gradientes de densidad que se
originan. Esta es la principal causa de mezclado en electroforesis. El grado de
conveccin se caracteriza por el nmero adimensional de Rayleigh, Ra, el cual
est dado por:
(11.24)
donde:
l: Longitud caracterstica de la geometra del aparato de electroforesis (en una
celda es el espesor del gel). [L\.
g: Aceleracin de la gravedad. \L/t2}.
p: Viscosidad del medio. [M / L - t].
a: Difusividad trmica del medio. [L 2/t].
A p/A z: Gradiente de densidad en la direccin z. [M / L 4].
Entre menor sea el valor del R a , menor es el efecto de la conveccin natural.
De acuerdo con la ecuacin (11.24) sto se puede lograr de varias formas. La
ms empleada a nivel laboratorio es incrementar de la viscosidad mediante el
uso de geles de soporte.
En equipos industriales que operan en forma continua se utilizan membranas
porosas para separar regiones de electroforesis de diferente pH. Esto tiende a
disminuir la conveccin al disminuir la longitud caracterst ica l.
528
11.2.4.
Medios anticonvectivos
Se han utilizado diferentes medios para realizar las operaciones electroforticas (Lehninger, 2005). Inicialmente se realizaban en medio lquido en celdas
especiales . En 1939 fueron introducidos los primeros materiales anticonvectivos
como papel filtro, fibra de vidrio y almidn granulado.
A mediados de los cuarenta se inici el uso de geles cuyo comportamiento
es superior a los materiales anteriores por su menor tamao de poro y menor
carga superficial. A partir de 1959 fueron introducidos los geles de poliacr i lamida
(P A G de sus siglas en ingls) y de agarosa.
Los geles de agarosa tienen una estructura porosa altamente hidratada con
poca carga que asemeja un medio lquido. Este tipo de gel es muy utilizado
en anlisis de cidos nuclicos. Los geles de poliacr i lamida estn formados de
polmeros ms entrecruzados que producen poros ms pequeos. Este gel es
muy empleado en el anlisis cloctrofortico de protenas, tcnica conocida como
PAG E (de las siglas en ingls de electroforesis en gel de poliacrilamida).
Una variante de la tcnica PAGE es la PAGE-SDS. En sta se agrega dodecil
sulfato de sodio a la solucin amortiguadora que provoca la desnaturalizacin de
las protenas. Las cadenas desnaturalizadas migran a una velocidad proporcional
al logaritmo de su peso molecular P M ,
log ( P M ) = A - B m
donde A y B son constantes y m es la movilidad.
Modos de la electroforesis
En un proceso electrofortico la velocidad de migracin de las especies, de
pende tanto de su carga, tamao y forma, como de las propiedades del medio.
La resolucin que se puede lograr considerando slo estos parmetros ha sido
mejorada imponiendo a los sistemas restricciones adicionales como el uso de
geles porosos que incrementan la separacin por filtracin o la utilizacin de
gradientes de p ll que orientan a las especies de acuerdo a su punto isoelctrico.
Este tipo de modificaciones ha dado origen a una amplia gama de tcnicas clectroforticas analticas y preparativas, cuya clasificacin es difcil, pero que en
trminos generales se pueden dividir en (Bier el al., 1983; Varennea y Descroixb,
2008 ): a) electroforesis de interfase mvil (M B E ), b) electroforesis de zona (ZE),
c ) electroforesis capilar, d) isotacoforesis (IT P ) y e ) enfoque isoelctrico (IE F ).
11.2. FUNDAMENTOS
529
530
.-1
E le c t r o li t o d e
A lt a M o v ilid a d
F ro n te ra d e F a s e N o
_________ 5 _____
5
1 -5
1 -3
E le c t r o li t o d e
;i
23
1 -4
l - 2 \
A lt a M o v ib d a d
N o d e C o m p o n e n te s
F n .s c N o
531
11.2. FUNDAMENTOS
disolucin que contiene los analitos o las molculas a separar y el buffer o medio
electroltico que es el encargado de conducir la corriente. El electrolito controla
el pH y la fuerza inica del medio donde se realiza la separacin. La separacin
se basa en el tamao, la forma y la carga de los solutos a separar. Debido a su
alta relacin de rea a volumen la disipacin de calor es ms fcil.
Bajo la accin del campo elctrico, los iones migran a travs del tubo con
diferentes velocidades y alcanzan el punto de deteccin en diferentes tiempos.
De esta manera, los perfiles de concentracin pueden ser detectados y graficados
en forma de electroferogramas de los picos de los solutos.
E lc c tio lito d e B a ta
-5
M o v ilid a d
E le c tr o lito d e
A lta M o v ilid a d
F ro n te ra d o F a c e N o
E le c tr o lito d e B a ta
M o v ilid a d
C o m p o n e n te N o
V
\
E le c tr o lito d e
A lta M o v ilid a d
F ase N o
532
A lio
pH
-*
A nodo
-O
C a ta d o
9
pl
C to d o
P u n to iB o e t d rK D
11.3.
Equipos de Electroforesis
11.3.1.
En los equipos de flujo libre a diferencia de los equipos que presentan recircu
lacin, el medio no se recircula La estabilizacin de los flujos se logra empleando
distancias pequeas de migracin o estabilizacin rotacional. Los principios de
los diferentes modos de electroforesis de flujo libre tambin lian sido aplicados
533
Pelcula
Cel
la celda
Geometra
Srcci a
traaarcraal
Longitud d*
operacin
9.Ca m po T ipl eo
l.Ylempo J e
op er a cl i tpico
1 1 Tomado tpico
de la m uretra
11. Produccin tiplea
33. E u fr lA ft le t lo
14 Detector
14 Co lec tor d a fraccioaea
XII.ero de fracclonea
Procreo de coleccin
PtlfcVlft OU
l u j o libre
ile uiie r , Hotel
Elpbor VaP 13
1**7
* 0 000
57
No
No
No
No
Si
SI
SI
Contlaia
No
No
SI
No
con reclrc.
B lo -laJ
F rtela TecT
Hotufor Prep l i
140 000
7,000
UK4
10
30.0 00
19S7
Si
P e l c u l a --------------
Si
No
No
No
No
No
Si
No
Con lia ua
No
No
No
No
No
No
I n te r m ll r al e
No
No
Intermitente
No
No
SI
No
Si
SI
No
No
No
No
No
No
No
Si
S(
SI
No
Rectangular
Anular
260 roa.2
60 mm2
$ 1 7 mm2
ISO mm2
1 0 cm
100-4(10 V/cm
4 cm
'.00-150 V/cm
1 2 .5 cm
50-1 00 V/cm
cm
23 0 -3 7 5 V/em
C o a ll a a o
Continuo
3- 5 h
2 b
2 5 X 1 0 6 ce l/ml
500 X 1 0 cel/ b
SI
V / V 1. Variable
5 X 1 0 a cal/mi
100 X 1 0 cel/h
SI
L'V/VIa Ver.
10 0 M g - 1 S
0.2-500 m g/d la
SI
No
Si
Si
45
SI
St
20
Rpido
30
Rpido
90
Lento
Rpido
A da pta d de: E b r . 10 1 .
Reproducida con el permiso de Nnturc Puhlbthing Co. Copyright 1991. Todo lo derecho reser
vados.
P elc u la d elga d a
Los equipos de electroforesis de pelcula delgada han sido estudiados des
de los aos cincuenta (Hamel y Ilunter, 1990). En tales sistemas se inyecta
una corriente continua y puntual de muestra sobre una pelcula de buffcr que se
mueve verticalmente en flujo laminar entre dos placas (Fig. 11.12). En las partes
laterales de este arreglo se sitan los electrodos en forma de placas. La mues
tra emigra horizontalmente conforme pasa por la cmara Los solutos forman
bandas discretas de acuerdo a sus movilidades electroforticas, y son eluidos
continuamente por el fondo de la cmara y colectados por medio de una bomba
de canal mltiple. El calor generado es removido por medio de refrigerantes que
enfran las paredes laterales.
534
Electroforesis anular
La electroforesis de flujo libre tambin se ha conducido en arreglos anula
res basados en el diseo de Philpot-Harwell (Fig. 11.13). En estos sistemas el
cilindro interno es fijo y funciona como ctodo, mientras que el exterior gira a
velocidades hasta de 150 rpm. Este movimiento permite neutralizar los efectos
convectivos radiales. La muestra y el buffer son inyectados en la base del anillo
y se mueven axialmcnte hacia el colector mltiple situado en la parte superior.
11.3.2.
535
apropiadamente las zonas. Cada cmara posee una posicin para alimentar la
muestra y una para descargarla, lo cual se efecta por medio de vaco.
El campo elctrico se provee por medio de dos electrodos situados en los
extremos de la cmara. El enfriamiento se realiza por medio de un tubo de
cermica por el cual fluye el lquido de enfriamiento por el interior del tambor.
536
grande; y en direccin contraria cuando el soluto tenga una movilidad tal que
logre tener un desplazamiento mayor que el provocado por el movimiento de la
recirculacin.
11.3.3.
Equipos Electrocromatogrficos
Otra alternativa para disminuir los problemas convectivos en la electroforesis son los sistemas que utilizan medios con partculas como las usadas en cro
matografa y se pueden mencionar dos tipos: a) equipos de electrocromatografa
anular rotativa continua y b) equipos de electrocromatografa de efectos opues
tos.
537
11.4.
11.4.1.
Teora de Platos
a = (2Dt)
(11.25)
538
C o m p o n e n te
d o B a ta
S ecoon de
m b
U o v .h d ..d
C o m p o n e n te
d e AHa
M o v fe fe d
donde:
D : Dispersin axial. [L2/t\.
t: Tiempo. [].
a: Desviacin estndar. \L).
La ecuacin (11.25) se puede expresar en trminos de parmetros electroforticos introduciendo la expresin:
(11.26)
donde:
v: Velocidad del soluto. [Lft\.
m : Movilidad. [L 2f V t\.
E : Campo. [V/L].
V : Voltaje. [V].
L : Longitud de la celda. [L\
El tiempo puede expresarse como:
t;
(11.27)
539
a =
/2 D L 2y
V mK )
(11.28)
H ETP=
(11.29)
la
H ETP
2D L
=
mV
(11.30)
como:
L = (H E T P ){N )
(11.31)
entonces
(11.32)
De estos resultados es importante notar que N es independiente de L . Asimis
mo, N puede incrementarse aumentando V . Por otro lado, H E T P aumenta con
L . Esto implica que las distancias cortas de migracin son las ms eficientes para
la separacin.
La resolucin de dos componentes del sistema cuando su coeficiente de dis
persin es el mismo est dado por (Rudge y Ladisch, 1986):
540
(11.33)
donde mi y 7712 son las movilidades del soluto 1 y 2, respectivamente y:
m =
m i + nv
541
L = vt = mEt
de tal manera que:
cm2
V
3000 s
L i = 3.38 x 10-5 ------ x 1.8 x 7.5 h x = 1.64 cm
V s
cm
h
y,
L 2 = 1-33 x 1 0 '5 v Cin2 x 1.8 x 7.5 h x
V cm
cm
= 0.64 cm
H ETP
2D
mE
! ( i , 10-
= 6.57 x 10~3 cm
(H E T P )i
3.38 x 10"5
{H E TP)2
V s
x 1.8
cm
= 1.67 x 10 2 cm
1 .3 3 x 1 0 - 5 x 1.8
V s
cm
c) Utilizando la ecuacin (11.33) se puede calcular la resolucin. Primero es
necesario calcular la movilidad promedio,
m=
7711 +7712
cm2
V -s
542
. cm2
V
2.334 x 1(T 5 - -----x 1.8 x 2 cm
cm
V -s
1
4
\
\i *18
2 x 2 x lO "7
s
2
v m ~ 5 0111
V s
2.334 x 10-5
Rs
11.4.2.
V - s
3.18
Teora Cintica
mEYz + "^IT z =
(1134>
Electrocromatografa
En el caso de electrocromatografa en columna si se supone que m E es inde
pendiente de la concentracin, en ausencia de elcctrosmosis el modelo empleado
es:
543
11.5. SUMARIO
de
- =
Oc
vx-
Oc
n d2c
de
(Pe
+ mE- - D
+ R
(11.35)
rearreglando,
de
| = ( v I + m ) | - i J0
(n .3 6 )
11.5.
Sumario
544
11.6.
Problemas
11.7. BIBLIOGRAFA
11.7.
545
Bibliografa
Ahmadzadeh, H.; Prcscott, M.; Mustcr, N.; Stoyanov, A. 2008. Revisiting clcctroosmotic flow: An important parameter affecting separation in capillary
and microchip electrophoresis. Chem. Eng. Comm. 195, 129-146.
Bier, M. 1986. Scale-Up isoelectric focusing. En: Separation, Recovery and Purification in Biotechnology. Asenjo J.A.; Hong, J. (Eds). ACS Symposium
Series 314. ACS. Washington, D.C. 13, 185-192.
Bier, M.; Palusinski, O.A.; Mosher, R.A.; Saville, D.A. 1983. Electrophoresis:
Mathematical modeling and Computer simulation. Science. 219,1281-1286.
Bird, R.B.; Stewart, W .E.; Lightfoot, E.N. 2002. Transport Phenomena. John
W iley and Sons. New, York. 2da Edicin, p. 61.
Brinton, C.C.; Lauffer, M .A. 1959. The electrophoresis of viriles, bacteria, and
cells, and thc microscopc methods o f electrophoresis. En: FAcctrophoresis:
Theory, Methods, and Applications. Bier, M . (Ed.). Academic Press. New
York. 10, 427-492.
Castcllan, G .W . 1971. Fisicoqumica. Fondo Educativo Interamcricano. Mxi
co. 18, 430-431.
Condeelis, J.S. 1977. A sodium dodecil sulfate microgel-electrophoresis technique suitable for routine laboratory analysis. Anal. Biochem. 77, 195-207.
Eby, M.J. 1991. Prep-phoresis: A wealth o f novel possibilities. Bio/Tech. 9.
528-530.
FVcnz, J.; Hancok., W.S. 1991. High performance capillary electrophoresis.
Tibtech. 9, 243-250.
Gobie, W .A .; Ivory, C.F. 1986. Iligh-resolution, high-yield continuous-flow
electrophoresis. En: Separation, Recovery and Purification in Biotechnolo
gy. Asenjo J.A.; Hong, J. (Eds). ACS Symposium Series 314. ACS. Wash
ington, D.C. 12, 169-184.
Hamel, J.P.; Hunter, J.B. 1990. Modeling and applications o f downstream
Processing. En: Downstream Processing and Bioseparaiions. Hamel, J.P.,
Hunter, J.B.; Skidar, S.K. (Eds.). ACS Symposium Series 419. ACS. Wash
ington, D.C. 1, 1-35.
Horstmann, B.J.; Chase, H.A. 1989. Modclling the affinity adsorption o f inmunoglobulin G to protein A inmobilised to agarose matrices. Chem. Eng.
Res. Des. 67, 243-254.
Ivory, C.F. 1990. Electrically driven separation processes: Analytical and preparative methods. En: Separation Processes in Biotechnology. Asenjo, J.A.
(Ed.). Marcel Dekker. New York. 16, 517-567.
546
Kohlheyer, D.; Eijkel, J.C.T.; Bcrg, A.; Schasfoort, R.B.M . 2008. Miniaturizing free-flow electrophoresis. Electrophoresis. 29. 977-993.
Maul, J. 1998. Pulsed-Field Gel Electrophoresis. Molec. BiotechnoL 9, 107126.
Nclson, D.L.; Cox, M.M. 2005. I-ehningcr: Principios de bioqumica. Cuarta
Edicin. Ed. Omega. 92-93.
Rudge, S.R.; Ladisch, M.R. 1986. Process considerations for scale-up o f liquid
chromatography and electrophoresis. En: Separation. Recovery and Pu rification in Biotcchnology. Ascnjo J.A.; Hong, J. (Eds.). ACS Symposium
Series 314. ACS Washington, D.C. 10, 122-152.
Varennea, A.; Descroix, S. 2008. Recent strategies to improve resolution in
capillary electrophoresis. Anal. Chim. Acta. 628, 9-23.
P a rte V
Operaciones de Acabado
549
Las operaciones finales de un proceso de bioseparacin son las de acabado
del producto. Estas operaciones permiten incrementar la pureza del producto,
facilitar su manejo y mejorar su apariencia. En esta Parte V del libro se revisan
dos de las operaciones de acabado ms utilizadas en los procesos biotecnolgicos.
En el Captulo 12, se trata la operacin de cristalizacin que es muy emplea
da tanto en la obtencin de productos biotecnolgicos tradicionales como los
antibiticos, como en la obtencin de productos provenientes de la tecnologa
del r-D N A como las protenas teraputicas.
En el Captulo 13 se presenta la operacin de secado, la cual se utiliza como
fase terminal de los procesos de cristalizacin, o bien para el secado de caldos
en la produccin masiva de algunos productos.
C aptu lo 12
Cristalizacin
12.1.
Introduccin
552
12.2. FUNDAMENTOS
553
12.2.
Fundamentos
12.2.1.
T ip o s d e C rista le s
554
las distancias caractersticas (largo, ancho y alto) como los tres ngulos carac
tersticos son iguales. Otros tipos de sistemas difieren de este comportamiento
originando los sistemas tetragonal, ortorrmbico, hexagonal, monoclnico, triclnico y trigonal.
Desde el punto de vista industrial el trmino hbitat del cristal" se refiere a
los tamaos relativos de las caras del cristal. El hbitat de un cristal es de gran
importancia: los cristales largos como agujas se rompen muy fcilmente durante
su centrifugacin y secado; los cristales en forma de disco son difciles de lavar
durante su centrifugacin y difciles de filtrar. Los cristales esfricos son los ms
fciles de manejar.
12.2.2.
P u re z a d e los C rista le s
( 12.1)
donde:
masa de soluto A en la fase cristalina
Ea =
( 12.2 )
(12.3)
12.2.3.
S olu b ilidad
Las relaciones de equilibrio para los sistemas de cristalizacin se presentan
en forma de curvas de solubilidad (Fig. 12.3). En estas curvas la solubilidad se
555
12.2. FUNDAMENTOS
expresa comnmente en por ciento de peso de soluto a peso de solvente.
Reproducid con
el permiso de John W iley and Sons. Copyright 1988. Todos los derechos reservados.
556
donde:
X 2 - Fraccin mol en la saturacin.
A //,{,: Entalpia de fusin en el punto de fusin.
T m: Temperatura de fusin en grados Kelvin.
T : Temperat ura en grados Kelvin.
Para /-serina la temperatura de fusin T m es de 501 K y la entalpia de
fusin A H/n se ha estimado en 4,230.82 cal/mol.
Se p id e: A partir de la informacin anterior comparar los resultados expe
rimentales con los derivados de la teora de las soluciones ideales para 1-scrina
Solucin:
Sustituyendo valores en la ecuacin de las soluciones ideales se tiene:
ln
'- ( (t
http://www.fullengineeringbook.net 570 of 703.
557
12.2. FUNDAMENTOS
donde M i = 18 y M2= 105.1 en g/mol, son los pesos moleculares del agua y la 1serina , respectivamente; con estos valores la expresin anterior puede ser escrita
como:
5 = 5,838.89
combinando ambas expresiones, la solubilidad terica de la 1-serina es:
5,838.89
r
/501
exp |4.25 - 1
ll ,
y-1
T*C
S obresatu racin
Pudiera pensarse que una solucin con una concentracin de soluto mayor a
la de sat uracin forma inmediatamente cristales pequeos o ncleos. Sin embar
go, actualmente es bien conocido que bajo diferentes condiciones una solucin
puede contener ms soluto que el correspondiente a la saturacin, formando lo
que se conoce como solucin sobresaturada. El estudio del fenmeno de sobre
saturacin es fundamental en el diseo de cristalizadores.
La curva de solubilidad (Fig. 12.5) separa dos regiones: a) la regin de sub
saturacin donde una solucin es capaz de disolver ms soluto a las condiciones
dadas y b) la regin de sobresaturacin.
558
12.2. FUNDAMENTOS
12.2.4.
559
560
S obresatu racin p o r e n fria m ie n to
12.2.5.
Cintica de la Cristalizacin
561
12.2. FUNDAMENTOS
B = i r = M c c#)<
donde:
H: Velocidad de nucleacin. [ncloos/t-L3].
kn: Parmetro emprico.
(12-4)
562
i: Parmetro emprico.
( c - c * ) : Sobresaturacin. [A//L3].
c: Concentracin de soluto en la solucin. [M / L 3].
c : Concentracin de saturacin del soluto. [M / L 3].
N : Nmero de ncleos por unidad de volumen de solvente. [M / L 3].
C re c im ien to
El crecimiento de cristales es un fenmeno cuya fuerza impulsora tambin es
la sobresaturacin. El crecimiento de un cristal es un proceso de adicin capa
por capa En la Figura 12.8 se muestra el proceso donde un cristal cbico ideal
crece por adicin de pequeos cubos sobre su superficie.
V e lo c id a d d e c rec im ie n to El crecimiento slo puede ocurrir en la superficie
del cristal y las resistencias involucradas en el crecimiento son la de la difusin
del soluto hasta la superficie del cristal y la resistencia a la integracin del soluto
a la superficie del cristal; dado que estas resistencias actan en serie, la velocidad
de crecimiento de un cristal se puede expresar en forma emprica como:
dM c
di
K cA {c c * )9
(12.5)
12.2. FUNDAMENTOS
563
( 12.6 )
donde:
M c: Masa del cristal. [M ].
t: Tiempo. [].
g: Parmetro emprico.
K c : Coeficiente global de transferencia de masa. [L/t\.
564
(12.7)
(12.8)
(12.9)
Solucin:
a) El rea y volumen de una esfera de dimetro d son:
A = Trd2;
V = ?d3
l = d;
<t>A ?r;
<f)v = -
V = L3
<pA = 6;
<t>y = \
565
12.2. FUNDAMENTOS
d(Pc
f ] = (* c
- c->
( 12. 10)
o bien,
(U
( 12.11 )
dt
| = k g( o - c - ) s
( 1 2 .1 2 )
(12.13)
12.2.6.
566
Nmero
Volumen
Figura 12.9: Curva de densidad poblacional. Adaptada de: Belter et al., 1988.
Reproducida con d permiso de John W ilcy and Sons. Copyright 19$8. Todos los derechos reser
vados.
dN
di
(12.14)
j l k [n (01 di
ftb = *5------------
(12-15)
J l k {n (l)]d l
O
donde n (l) es la densidad poblacional para el tamao l. Existen cuatro casos
particulares de inters:
a) Para k = 0, el momento fraccionario /0 representa la fraccin del nmero
de cristales de una poblacin que tiene un tamao entre 0 y /,
567
12.2. FUNDAMENTOS
/ H l)]d l
Mo = ^ ---------
(12.16)
[n(0] di
f l [(!)] di
Mi = -=5-----------
(12.17)
fl[n (l)]d l
c)
Para k = 2, el momento fraccionario /x2 es la fraccin que representa
la suma del rea de los cristales de tamao entre 0 y /, del rea total de una
poblacin de cristales.
02 = k ------------
(12-18)
<j>Aj p [ n { l ) ] d l
o
d)
Para k = 3, el momento fraccionario /X3 es la fraccin que representa la
masa de los cristales de tamao entre 0 y l, de la masa total de una poblacin
de cristales.
Pc<t>vJ 13W01dl
(12.19)
03 =
di
568
12.3.
Equipos de Cristalizacin
12.3.1.
Los cristalizadores por lotes son tanques agitados con sistemas de vaco y
enfriamiento (Fig. 12.10). El ciclo de la cristalizacin dura entre 2 y 8 horas. Al
final del ciclo, el material cristalizado se retira del cristalizador para lavarse y
secarse. La mayora de los productos biotecnolgicos que involucran una crista
lizacin se obtienen en operaciones por lotes.
Figura 12.10: Cristalizador por lotes. Adaptada de: Bennett, 1988. Reproducid
con el permiso de McGraw-Hl Inc. Copyright 198$. Todos los derechos reservados.
12.3.2.
569
570
producindose la sobresaturacin.
C ris ta liza d o r con tu b o d e tir o y m a m para
En el cristalizador con tubo de tiro y mampara (Fig. 12.13), los cristales de
mayor tamao que sedimentan en el fondo del cristalizador son impulsados hacia
la regin superior donde se efecta la evaporacin y se origina la sobresaturacin,
mediante un impulsor grande que se mueve a bajas velocidades. Una mampara
externa al tubo de tiro permite formar una zona de sedimentacin externa, a
partir de la cual los cristales finos pueden ser retirados para incrementar el
tamao del cristal. La alimentacin mezclada con la corriente de finos se hace
pasar por un intercambiador de calor y se introduce por la parte inferior del
cristalizador.
12.4.
Diseo de Cristalizadores
571
Figura 12.13: Cristalizador con tubo de tiro y mampara. Adaptada de: Bennett,
1988.
Reproducida con
el
reservados.
12.4.1.
C ris ta liza d o re s p o r L o te s
572
B alan ce p ob lacio n al
La descripcin de la cristalizacin se realiza mediante balances poblacionales
de cristales. Estos balances consideran que el nmero de cristales es una cantidad
balanceable. Se supone que los cristales son lo suficientemente numerosos y
pequeos, de tal manera que su distribucin de tamao puede considerarse una
funcin continua de la longitud caracterstica o tamao del cristal. Se supone
adems en el siguiente caso que no ocurre rompimiento ni aglomeracin de
cristales.
El balance poblacional de cristales en un cristalizador considerando slo los
cristales en un rango de tamao di = h li , puede expresarse en palabras como:
573
^ (V n ) = FAnA - F n - V ? ^ p -
( 12.20)
+ gTi =0
(122I)
f ( )^/"^
4
(1222)
574
J_
Pp
Pm
D = kb exp
7 = 0.414fcwT
c m
o bien como:
G -G m
En el cambio de unidades de las concentraciones se puede utilizar la ecuacin
siguiente:
575
Los valores de las variables y parmetros del sistema son las siguientes:
P a r m e tro o variable
D
C (conc. fase lquida)
C* (solubilidad)
Ca (conc. fase slida)
Cm
Cm
Cm,0 = Alo soluto/ AI0 solvento
E (energa de activacin)
Gm
G
9
kb
k o constante de Boltzmann
kg.o
AIp soluto
n
Na
R
T
Ve
7
soluto
pa solvente
Pp
4>a octaedros
4>v octaedros
V a lo r y / o unidades
1/ (nr* - s ) ~
mol soluto/L solucin
mol soluto/L solucin
mol soluto/L solucin
masa soluto/masa solvente
masa soluto/masa solvente
(0.125 k g )/ (0.263 kg) = 0.475 kg/kg
41.6 kj/mol
k g / m ^ - s )
m/s
2
3.96 x 1024 1/m3s
1.38 x 10-'^ J/K
2.68 x 104 kg/ (nv* - s - (kg/kg solvente)5')
151.16 g/mol
1/ (m m 3)
6.02 x 10j3/ ^ F
8.314 J / (K - mol)
K
0.10 C/min.
J/m^
1293 kg/m3
789 kg/m3
v/3( ^ F )^ = 3. 7153
x/3/2
Se p id e:
a) Establecer el balance de la densidad poblacional en el cristalizador.
b) Desarrollar el balance de masa de soluto en el cristalizador.
c) Discrctizar la ecuacin del balance de la densidad poblacional empleando
el mtodo de diferencias finitas de Runge-Kutta de primer orden.
d) Discretizar la ecuacin del balance de soluto empleando el mtodo de
diferencias finitas de Runge-Kutta de primer orden.
e) Desarrollar un programa M A T L A B para resolver el sistema de ecuaciones
acopladas y graficar la curva de densidad poblacional a intervalos de 15 min
cuando la cristalizacin se opera por espacio de 10 h.
Solucin:
576
Ot
01
n= 0
V /
n = S.
V i
C = Co
Ai
xn
(i)
(Ijitj)
A/,
n(h,U+i)
n^U) -
{ [ G W]
j A
C ( t i+1) - C { t j )
Ai
o bien,
C (i,+i) = C ()
Aij
Ai
e)
En la Fig.12.14 se presenta un programa M A T L A B para la solucin del
modelo del cristalizador.
Las curvas de densidad poblacional se muestran en la Fig. 12.15
577
.
2
>
I
i
<*
1
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s* U"
II
U
H
H
H
U
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9
11 u 21
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I *
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I m M ~ .J < iu u ln ;ia M n b i K a t i te .h * i a t u n t a i l
M e *1 a n tin > y i u i
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.............. .. ............. .. ........................................................ .
1
lu iu a r a K .t ae Mece
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.iV 9
W IM .IU
. , . * - 9t;
n - u ili
w W i
X .K U t.
W-S.U
Im > I i Ce t m > U)
tlte/tttl
i i w * m m i
tna-eMi a u
lia*:: * laurala * tiene
n v i< ;
1 m u lince
Hv-m-Min.il,
t u i - i iu
u(i,l|-i>alucj
91
*1
9*- a-iemtat.lmo.
99- :-eeteiei.ii/
t - fnr j-l ' j *
9*- t i >.}!;
K - tu
1
II.DncCH^M ^innaC/ivei.
u - n t.i>eae*ai u ^M 'rtaau iM ri t m - u i m
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*
m
%
.. . .
..................
578
TamaAo (pm)
579
0 = v ^
+ T \ (C ~ C' )
+ ks )
At
(numero de cristales)
L<M?)[<M
'+Gt)]
Ar
(12.24)
(12.25)
donde:
M s- Masa total de los cristales sembrados.
lB: Longitud de los cristales sembrados.
En la ecuacin (12.25) G es la velocidad lineal de crecimiento del cristal dada
por la ecuacin (12.11), es decir;
(12.26)
-()(!)<' <*
(12.27)
580
d
dt
(12.28)
dt
(12.29)
(12.30)
(12.31)
(12.32)
y se define una longitud adimensional ij que caracteriza las veces que se incre
menta la longitud del cristal respecto a su tamao inicial dada por:
(12.33)
sustituyendo (12.32) y (12.33) en (12.30) se obtiene:
M \
T = T0 -
(3 Vr) 1 +
ijt
(12.34)
(12.35)
581
1 +*rr + i(*?r)21
Tf - T 0
(12.36)
(12.37)
Mf
J_
M f
(12.38)
7J3
T o -T f
(12.39)
(30 - T )
(30 - 20)
T
582
12.4.2.
583
solvente Fj\ que presenta una concentracin yA de soluto disuelto por volumen
de solvente. La distribucin del tamao de los cristales a la entrada est dada
por nA.
El cristalizador contiene un volumen V de solvente, con una concentracin
de soluto disuelto por volumen de solvente y y una distribucin de tamao de
cristales caracterizada como n. Como el cristalizador est perfectamente agitado
el flujo volumtrico de sbente a la salida F tambin est caracterizado por y
y n. El balance poblacional del cristalizador continuo est dado por la ecuacin
(
12. 20).
(12.40)
ii
o
i,
nA = 0
f)
es decir,
(12.42)
con base a lo anterior, el ltimo trmino de la ecuacin (12.20) puede expresarse
de la siguiente manera:
d {n G )
di
dG
d n
dn
~ n d i + G di ~ G di
(12.43)
(12.44)
como el tiempo de residencia promedio en el cristalizador est dado por:
584
T=
(12.45)
(12.46)
n(0) = = A
Do
= _
(12.47)
dt
l a ecuacin (12.47) puede utilizarse como condicin de frontera para la in
tegracin de la ecuacin (12.46), obtenindose la ecuacin:
(12.48)
o bien,
(12.49)
La ecuacin (12.49) puede ser utilizada para: a) estimacin de parmetros
en un cristalizador RPM SM y b) diseo de cristalizadores RPM SM.
^ - J -
(12.50)
585
(12.51)
A lpc4>v l z
donde:
M r - Densidad de cristales en el magma (masa de cristales por unidad de vol
umen de solvente en la suspensin).
A W : Fraccin de la masa total de cristales retenida en una malla.
I: Longitud de la abertura de la malla.
A l: Intervalo de abertura de malla donde se retienen los cristales.
pc : Densidad de los cristales.
<pv : Factor geomtrico de volumen.
El numerador de la ecuacin (12.51) representa la masa de cristales de
tamao promedio l. El denominador contempla la masa de un cristal de tamao
promedio l y el intervalo A l.
E je m p lo 12.5. A n lisis d e la cristaliza ci n d e urea. Se obtiene una
muestra de cristales de urea en un cristalizador RPM SM . La masa de cristales
en la suspensin es de 450 g/L, la densidad de la urea es de 1.335 g/cm3 y
el tiempo de residencia de 3.38 h. El factor geomtrico de volumen <pv puede
considerarse igual a la unidad.
586
(2 )
% de
masa
acumulada
Trac.
masa
A W
14
Tamao
abertura
malla
(m m)
Longitud
promedio
Incremento
7 (m m )
A l (m in)
1.016
lu( n)
0.349
40.581
10.61
0.718
0.246
533.070
13.19
0.508
0.175
3.566.200
15.09
0.359
0.123
18,795,000
16.75
0.254
0.087
36,865.000
17.42
0.180
0.061
70,703.000
18.07
1.190
0.044
20
4.4
28
14.4
35
24.2
48
31.6
65
15.5
100
7.4
Fondo
2.5
0.841
0.144
0.595
0.242
0.420
0.316
0.297
0.155
0.210
0.074
0.149
0.025
Reproducida con el permiso de McGraw-Hill Inc. Copyright 1973. Todos los derechos reservados.
Al
7
587
450 f
2 0
2 0
ln (2 o )
Lj
x 0.044
cm3
0.349 nim x 1.335 %r x 1 x 1.016 mm3 x
cmJ
103 mm3
nmero de cristales
40,521
mm L
10.61
Los clculos para las otras mallas aparecen en la Tabla 12.1 en las columnas
(5), (6), (7 ) y (8).
Los datos de ln ( ) vs l se presentan en la forma grfica en la Figura 12.18.
Los parmetros de la recta ajustada son:
Pendiente
-9.05 m m "1
Ordenada en el origen
19.765
-9.05
mm
= 0.0327
x 3.38 h
mm
~
588
nmero de cristales
mm L
r (min)
G V
(i.)
rain /
315
630
1,260
Fuente: Moyers
nm. \
B (^cm3
min J
0.092
13.993
0.042
9,960
0.019
6,729
y Rousseau, 1987.
Reproducida con d permiso de John W iley and Sons. Copyright 1987. Todos los derechos reser
vado.
589
kn( c - c y
kg( c - c * )
(12.52)
donde:
=0.46;
In(fcjv) = 10.66
B = 42,699(G)(M6
nmero
cm3 min
590
El valor de 0.46 indica una dependencia moderada de la velocidad de nucleacin respecto a G (o a la sobresaturacin). Esto es caracterstico de molcu
las grandes e indica que el mecanismo de nucleacin no es muy sensible a la
sobresaturacin y que la nucleacin secundaria es la dominante.
Dado que i es especfico del sistema, se supone que este valor no cambia con la
escala y puede determinarse mediante experimentos de laboratorio (cristalizador
de 4 a 8 L ).
El parmetro k s es necesario determinarlo en una corrida a nivel piloto o
a escala real, ya que es dependiente de la escala. Esto se realiza efectuando un
anlisis de mallas a la escala de inters para obtener G y B . Con estos valores
y la i determinada en el laboratorio se obtiene kN mediante Inecuacin (12.52).
o
la cual puede resolverse para obtener,
N t = n G r
(12.53)
591
i
N<
/ p ( )
iV,
n G r [ l - exp ( g ) ]
(12.54)
1 - exp
n G r
= 1 cx p (-X )
(12.55)
Empleando un procedimiento similar al anterior se pueden obtener los otros momentos. En la Tabla 12.3 se presentan las expresiones de los momentos
restantes.
Momento
0
1
Significado
nmero de
cristales
longitud de
los cristales
n G r
Fraccin
1 -e -*
n (G r )J
1 - (1 + X )(e - * )
, _ ( 1+X + l ) ( e - * )
rea de los
cristales
2<t>An (G r )*
masa de los
cristales
fy v P c n (G r )*
' - ( 1+ X + f
(12.56)
M r = 6<j>v pc71(G t )4
combinando las dos expresiones anteriores se tiene:
(12.57)
592
dW
di
l3
~ 6 (G r )4 n
(12.58)
l D = 3G t
(12.60)
C V = (*16 ~ 84)
2l D
(12.61)
593
sustituyendo valores,
A/t
(12.62)
A/t
458 f
594
b)
N = Jndl
o bien
N = (total de cristalcs)(fraccin en el rango)
de acuerdo a la Tabla 12.3,
(n G r ) (1 - e~x )
v
Id
y X ----:
Gr
G
(B T ) ( l - e - x )
sustituyendo valores,
nm
L -h *
100 L '
| ( l - e - 3) =
nm
- t i
c)
De acuerdo a la Tabla 12.3 la fraccin de cristales de tamao en el rango
0 < l < l D es:
( l - e 3) =0.95
d)
/
MT
o s
, m3
(6 ) x (1 ) x (1.769 J L ) x ( 155n_
\
5) x
I a ftr, mm
100 L
x | 0.056 x ------
" i
Mt
560
nm
/1.88 x 107 ~
X -
595
c)
De acuerdo a la Tabla 12.3, la fraccin masa de cristales con tamao
menor o igual a l es:
( 1+
X +
X2
X 3\
+ J (e ~x )
(1+
X2
X 3\
X + + J (e ~ x )
12.4.3.
Malla
Tamao
( mm)
20
28
35
48
100
0.841
0.595
0.420
0.297
0.149
*
II
7.51
5.31
3.75
2.65
1.33
Masa
retenida. %
5.4
22.3
48.3
72.6
95.4
596
Modelo de remocin de finos
M odelo combinado
En el caso de un modelo combinado de remocin ideal de finos y gruesos
llamado modelo R - Z , los balances poblacionales conducen (Moyers y Rousseau,
1987) a las tres expresiones de intervalo siguientes:
1. Para l < l j :
2.
3.
= n c x p ( ^ )
(12.63)
n = n o exp( - ^ ) e x p ( - )
(12.64)
Para l > l c
n = no ex p ( - ^ ) e x p ( ^ ; & ) e x p ( - ^ )
(12.65)
donde:
lf . Tamao mnimo aceptable de los cristales.
lc : Tamao mximo aceptable de los cristales.
R : ndice de remocin de finos.
Z : ndices de remocin de gruesos.
Cuando R = 1 no existe remocin de finos, cuando Z = 1 no existe remo
cin de gruesos. Un cristalizador con remocin tanto de finos como de gruesos,
produce una distribucin de cristales con tamao de cristal dominante alto y
bajo coeficiente de variacin.
597
12.4.4.
Vapor
Alimentacin
re i
Ra
Q 4
F*
Suspensin
Solucin S
Rt
Cristales C
Rendimiento = ^ Q.-
*' R<
(12.66)
donde:
Fa: Flujo msico de solvente en la alimentacin. [Af/t].
Ra: Masa de soluto por masa de solvente en la alimentacin. [A//A/].
S: Flujo msico de solvente en la suspensin de salida. [M /t].
R,.: Masa de soluto disuelto por masa de solvente en la solucin de salida.
[M / M ].
/?*.: Masa de solvente evaporada por masa de solvente alimentada. [M / M ].
C: Flujo msico de cristales en la suspensin de salida \M/t\.
598
(12.67)
( 12.68)
Fg = FgRgC + ^
(12.69)
(12.70)
599
C = F a[Ra - (1 R .)# c ]
(12.71)
Rendimiento =
(12.72)
FaRo
sustituyendo la ecuacin (12.71) en la (12.72),
Rendimiento =
R a - R c( 1 - R )
Ra
(12.73)
ST =
(12.74)
E* + E*Rn F ,R , c
combinando (12.71) y (12.74) se obtiene:
R a - ( l - R ge)R c
1 + Ra ~ Rae
(12.75)
(12.76)
ST =
lia
Ra - R,
1 A Ra
(12.77)
(12.78)
600
(12.79)
(12.80)
ST =
(12.81)
1 + R n Re-
En este caso a
diferencia de los dos casos anteriores, adems de los balances de masa se re
quiere efectuar un balance de energa para determinar la cantidad de solvente
evaporado en el cristalizador.
Balance de energa
F9R x
(12.82)
donde:
A T : Temperatura de alimentacin menos temperatura del cristalizador. [].
C p: Capacidad calorfica de la alimentacin. [cal/A/ - ].
Xv: Calor de evaporacin del solvente. [cal/A/].
A/: Calor de cristalizacin del soluto. [cal/A/].
601
X f i R a - R J + C p & r j l + R*)
\v-\fRc
Rendimiento
ST =
Rg
(1
Rsc)Re
Ra
Rg ~ (1 ~ Rse)Rc
1 + R r R at.
(12.83)
(12.84)
(12.85)
Balances y cintica
En el diseo de un cristalizador es necesario combinar las expresiones de
la cintica de la cristalizacin con los balances de masa y energa. El uso de la
cintica de la cristalizacin para el anlisis y diseo provee una nueva dimensin
602
(2)
T
160
135
90
60
65
60
50
40
(3)
Re
(4)
Rse
val)
(5)
Rend.
(6)
ST
K c r is ta le s
E c r is t a le s
E s o lv e n t e
E s o lv . a lim .
E s o lu to a lim .
E t o ta le s
0.100
0.072
0.043
0.028
0.374
0.419
0.502
0.582
0.835
0.890
0.944
0.969
0.316
0.347
0.400
0.453
s o lu to
O p
K s o lv . e
kN
cm3 min
/ fim \0.4<
\ min /
603
S
100c
Composicin alimentacin
0-379
Temperatura alimentacin
Calor especfico de la suspensin y solucin
Calor de evaporacin del solvente
Calor de cristalizacin
Gravedad especfica de los cristales
Gravedad especfica del lquido
Factor volumtrico del cristal
0.556 cal/g
100 cal/g
33.3 cal/g
1.23
0.84
T Cristalizador
C
65
60
50
40
30
Re
".'trVi wMilg..
0.100
0.072
0.043
0.028
0.018
604
T C
65
60
50
40
30
Enfriamiento Indirecto
ST
Rend.
0.74
0.81
0.89
0.93
0.95
0.20
0.22
0.24
0.25
0.26
Enfriamiento Adiabtico
ST
Rend.
0.83
0.89
0.94
0.97
0.98
0.32
0.35
0.40
0.45
0.51
07* _ fy ~~0 ~
R s c ) R c
1 + Ra ~ Rsc
sustituyendo valores,
0.379 - (1 - R ) x 0,043
1 + 0.379 - R , c
se obtiene:
Rx = 0.65
Este resultado indica que es necesario remover el 65 % del solvente que entra
para cumplir con S T = 0.5.
El balance de masa del sistema de acuerdo a la Figura 12.21 puede desarro
llarse de la siguiente manera:
605
En la corriente de salida,
0.5 =
455 ^
_______
masa de cristales
(5 + 5 ^
masatotal
+ 455
S
h
SRC =
436.24
18.76
kg de solvente
h
kg de soluto disuelto
F.
FaR a
(455 + 18.76) ^
0.379 ^
kg
473.76 -2
h
606
F aR at = 812.5 ^
n
El rendimiento de acuerdo a la ecuacin general (12.73) es:
Hendimiento =
Ra
(1
fis e )fic
Rg
= 0.96
FsRsc K
F a( R a - R c ) Xf + Fa( l + R <I)C pA T
F aRc R ae\ f + Q
1000 g
1250 ^ ( fo.65 ^ x 100 - X
x
r
kg J
M I
kg
8
cal .. 1000 g l
(0.379 - 0.043)
5
kg J
kg
g '
cal
1000 g
^1 + 0.379 ^
x 0.556
x (1 0 0 -5 0 ) C
kg
g -
cal .. 1000 g
043 ^ x 0.65 ^ x 33V
kg
kg
g
kg .
kg
]}
1 .8 1 8 x l0 7 ~
h
607
kN (G )'
6 <t>v p cn ( G T ) *
Mr
\ ( j + 3)
y&PvPckNT 4 )
De acuerdo a los balances de masa, la masa de cristales por unidad de volu
men de solvente en la suspensin est dada por:
Mt
C
W * ~ F , x R fC)
= 0.87
Mt
[1250-(1250 x 0.65)]
g
cm3
0.84 ^
en r
La fraccin masa de cristales menores a l = 100 /m (Tabla 12.3) est dada
por:
Frac, masa = 1 - ^1 + X + X a +
(e X )
(0.87 X W j S i . )
____________________V__________ cm3 /__________________
(
nm
\ / min\
6 x 1.23 x 42,699 [ =----- ] ( ------ )
\ cm3 - min J \ pm )
0.328
10
x (107 min)
min
3.46
608
la longitud adimensional es:
328
min
A 1U
( e- * ) = 0.32
En la Tabla 12.9 se muestran los resultados del resto de los clculos del efecto
de la variacin del tiempo de residencia sobre la velocidad de crecimiento, el
parmetro X y la fraccin masa de cristales de longitud menor a 100 /m.
Tabla 12.9: Efecto del tiempo de residencia sobre la fraccin masa de cristales
menor a 100 /zm.
r
m in
G
/xm/min
X
Adim
Frac, masa
< 100 /zm
107
315
630
1260
2520
0.328
0.094
0.042
0.019
0.009
2.8
3.4
3.8
4.2
4.7
0.32
0.44
0.52
0.60
0.68
609
Figura 12.22: Sensibilidad del tamao del producto al tamao de corte de finos.
Tomada de: Moyers y Rousseau, 1987. Reproducida con el permiso de John W iley and
Sons. Copyright 1987. Todos los derechos reservados.
Masa de cristales
610
2388.75 kg
rsusp.
1.23
0.84
Productividad
1000 cm3
L
kg
1000 g
2388.75 kg
'susp.
cm3
1000 cm3
cm'
~k8~
1000 g
4.786 L
455
4.786 L
= 0.095
kg
L -h
Figura 12.23: Diseo conceptual que satisface las condiciones de diseo del Ejem
plo 12.10. Tomada de: MoycrS y Rousseau, 1987. Reproducida con el permiso de John
W iley and Sons. Copyright 1987. Todos lew derechos reservarlos.
611
12.5. SUMARIO
12.5.
Sumario
612
12.6. Problemas
12.1.
C ris ta liza d o r R P M S M . En el estudio cintico de la cristalizacin
por enfriamiento de Na 2S(>4-51120 (Graber y Taboada, 1991) en un cristali
zador RPM SM de forma cilindrica de 15.2 cm de dimetro y 39 cm de altura,
cuando el cristalizador operaba en estado estacionario, se obtuvo una muestra
de cristales contenidos en 2.04 L de solvente, con las siguientes caractersticas:
M a lla N o .
16
18
20
30
40
50
70
100
140
Fondo
T am a o d e
a b e rtu ra d e
m alla
(mm)
1.180
1.000
0.850
0.600
0.425
0.300
0.212
0.150
0.106
M asa en la
m alla
(g )
9.12
32.12
39.82
235.42
89.14
54.42
22.02
7.22
1.22
0.50
613
12.6. PROBLEMAS
Se p id e calcular:
a) El incremento adimensional del tamao de crist al i).
b) La velocidad de crecimiento de los cristales.
c) El tiempo necesario del proceso.
d) La expresin de la curva de enfriamiento de acuerdo a la ecuacin (12.34).
e) La expresin de la cuna de enfriamiento de acuerdo a la ecuacin (12.39).
R csp. a) 10.11, b ) 0.042 cm/h y c) 2.18 h.
12.5.
12.6.
614
12.7. BIBLIOGRAFA
12.7.
615
Bibliografa
Abbas, A.; Romagnoli, J.A. 2007. Multiscale modeling, simulation and validation o f batch oooling crvstallization. Sep. Purif. Tech. 53, 153-163.
Barthe S.; Rousseau. R.W . 2006. Utilization o f Focused Beani Reflectance
Measurement in thc control o f crystal sizc distribution in a batch cooled
crystallizer. Chem. Eng. Tech. 29, 206-211.
Dakar, M .R.A.; Nagy, Z.K.; Saleemi, A.N.; Rielly, C.D. 2009. The Impact of
dircct nueleation control on crystal sizc distribution in pharmaccutical
crystallization processes. Cryst. Growth Des. 9, 1378-1384.
Belter, P.A.; Cussler, E.L.; Hu, W . 1988. Bioseparations: Downstream Process
ing fo r Biotechnology. John W iley and Sons. New York. 10, 273-305
Bennett, R.C. 1973. Miscellaneous Separation Processes. En: Chemical Enginners Handbook. Perry, R.H. y Chilton, C.H. (Eds.). McGraw-Hill. New
York. Quinta edicin. 17, 1-58.
Bcnnctt, R.C. 1988. Matching crystallizer to material. Ckem. Eng. 95, 118127.
Bolilin, M.; Rasmuson, A.C. 1992. Application o f controlled cooling and seeding in batch crystallization. Canadian J. Chem. Eng. 70, 120-126.
Charmolue, H.; Rousseau. R .W . 1991. L- Serine obtained by methanol addition
in batch crystallization. A IC h E J. 37, 1121-1128.
Grabcr, T.A .; Taboada, M.E. 1991. Crystallization: An interesting expericncc
in the Ch.E. laboratory. Chem. Eng. Ed. Spring. 102-105.
Hekmat, D.; Hebel, D.; Weuster-Botz, D. 2008. Crystalline proteins as an
alternative to standard formulations. Chem. Eng. Technol. 31, 911-916.
Kumar, J.; Wameckc, G.; Pcglow, M.; Heinrich, S. 2009. Comparison o f numerical methods for solving population balance equations incorporating
aggregation and breakage. Powder Technology. 189, 218-229.
Lindenberg, C.; Krattli, M ; Comel, J.; Mazzotti, M. 2009. Design and optimization o f a combined cooling/antisolvent crystallization process. Cryst.
Growth Des. 9, 1124-1136.
Martino, P.D.; Censi, R.; Malaj, L.; Capsoni, D.; Massarotti, V.; Martclli, S.
2007. Influence o f solvent and crystallization method on the crystal habit
o f metronidazole. Cryst. Res. Technol. 42, 800-806.
Moycrs, C.G.; Rousseau, R.W . 1987. Crystallization operations. En: Handbook
o f Separation Process Technology. Rousseau, R .W . (Ed.) John W iley and
Sons. New York. 11, 578-643.
616
C aptu lo 13
Secado
13.1.
Introduccin
El secado es el ltimo paso en la recuperacin de ciertos productos biotecnolgicos. Consiste bsicamente en la reduccin del contenido de solvente en el
producto por medio de una evaporacin o ima sublimacin. Tiene como propsi
to estabilizar el producto, preservar su actividad, reducir su volumen o recuperar
el solvente.
Existen varias formas de secar un material. En el caso de productos biolgi
cos una limitante en la seleccin del mtodo de secado, es la temperatura que
puede soportar el material de inters sin perder actividad, de tal manera que
las alternativas para estos materiales son ms limitadas.
En la prctica de secado el solvente generalmente es agua y el medio hacia
donde sta se elimina es aire. Por esta razn, el anlisis del secado se basa
fundamentalmente en los sistemas aire-agua, sin embargo los resultados que se
logran pueden ser generalizados a otros sistemas.
Siendo el secado una operacin limitada por el equilibrio en la seccin 13.2
sobre fundamentos del secado, se revisan los conceptos bsicos del equilibrio
de los sistemas agua-aire y las formas de efectuar una operacin de secado.
Asimismo, se revisan las expresiones bsicas para el clculo de la velocidad de
secado y de la velocidad de desactivacin de compuestos trmicamente lbiles.
En la seccin 13.3 sobre equipo de secado, se presentan los principales tipos de
secadores utilizados en los procesos biotecnolgicos. Los principios de diseo de
algunos tipos de secadores se presentan en la seccin 13.4.
13.2.
Fundamentos
618
13.2.1.
(13.1)
619
13.2. FUNDAMENTOS
(13.2)
Masa seca de slido
esta definicin es til cuando la masa de slido es constante.
En la Figura 13.1 se distinguen dos zonas caractersticas: a) la zona de
humedad no ligada y b) la zona de humedad ligada. La zona de humedad ligada
comprende desde una humedad \V = 0 hasta una humedad tal que la presin de
vapor del slido es igual a la del agua pura. Un slido con tal humedad estar en
equilibrio con aire cuya presin parcial de vapor sea igual a la del agua pura, es
decir, cuya humedad relativa sea igual a la unidad. En la zona de humedad no
ligada, la humedad del slido puede ser mayor pero su presin de vapor es cons
tante e igual a la del agua pura. De tal manera que la Hr permanece constante
e igual a la unidad.
VV =-
S agUa
x 100 = 20 %
g peso seco
g peso seco
100 = 8 %
620
621
13.2. FUNDAMENTOS
masa agua
masa aire seco
(13.3)
622
II
12 mm de Hg
(760 12) mm de Hg
001
kg de agua
t=)
S i
kg de aire seco
17.5 mm de Hg
Hs =
(7 6 0 - 17.5) mm de Hg
kg aire seco
29
% IIr =
------- f x 100 = 68.57 %
\17.5 mm de Hg/
623
13.2. FUNDAMENTOS
C)
3
18
33
60
75
90
95
a s
(kPa)
0.7577
2.0640
5.0340
19.9400
38.5800
70.1400
84.5500
J{
/ kg ag .a \
\ kg aire seco J
0.0047
0.0129
0.0324
0.1521
0.3816
1.3958
3.1275
624
CS = C B + H C a
(13.7)
donde:
C s : Calor hmedo de la mezcla en kJ/(kg aire seco K ).
C : Capacidad calorfica del aire seco. 1.005 k j/ (k g aire seco - K ).
C
Cs = 1.005+ 1.884//
kJ
kg aire seco - K
(13.8)
(13.9)
C s = 1.005 + (1.884)<0.08)
kJ
kg aire seco K
625
13.2. FUNDAMENTOS
(13.10)
kg aire seco
(13.11)
kg aire seco
(13.12)
EnVada
dol g u
_______________
A
,&
H. T
#
'
S a lid a
gas
del
tro
H# Ts
%
Agua do
rM K :n n n
11 . O
T s
626
(13.13)
Cs _
( T - T S)
AS
(1.005 + 1.884//)
AS
'
// = 0.049
Hs = 0.05
kg agua
kg aire seco
13.2. FUNDAMENTOS
627
Solucin:
Se puede suponer que la temperatura de bulbo hmedo es igual a la tempe
ratura de saturacin adiabtica. Recorriendo la curva de saturacin adiabtica
de 30 C hasta la temperatura de bulbo seco de 70 C , se puede leer la humedad
de 0.01 kg agua/kg aire seco.
13.2.2.
Mtodos de Secado
Mtodos adiabticos
Estos mtodos consisten en el secado por medio de adicin de calor con aire
caliente. Los secadores por aspersin y los secadores de tipo instantneo operan
de acuerdo a este mtodo. Son utilizados para secar partculas que no toleran
altas temperaturas como protenas unicelulares y enzimas.
628
13.2.3.
13.2.4.
629
13.2. FUNDAMENTOS
E: Energa de activacin del material, [cal/mol].
R: Constante de los gases ideales, [cal/(mol K )].
T : Temperatura absoluta. [K].
La integracin de la ecuacin (13.15) entre los lmites:
t = t0
t = t
P r = P ro
Pr = Pr
genera la expresin:
ln ( t 2) = k oC xp (~ f ) 1
(13.16)
Solucin:
Utilizando la ecuacin (13.16) se pueden obtener dos ecuaciones que permiten
determinar los parmetros feo y E .
ln
ln
Pro
-E
fe0 exp
1.99
cal
mol K
-E
cal
exp
fe,
1.99
mol - K
(10 min)
x 310 K
(30 min)
x 293 K
feo
23,453
cal
mol
3.22 x 1015 m in "1
630
exp
j
1.99
V mol -
i|
(90 min)
x 277 K i
K
/
0.91
Bajo estas condiciones se desnaturaliza slo el 9% de la enzima.
13.3.
Equipos de Secado
Los equipos de secado son muy variados. Los empleados en los procesos
biotecnolgicos se pueden clasificar de acuerdo al mtodo de secado empleado
en:
Secadores adiabticos.
Secadores no adiabticos.
13.3.1.
Secadores Adiabticos
631
Figura 13.4: Secado por aspersin. Tomada de: Brocklcbank, 1990. Reproducida
con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1990. Todos los derechos reservados.
Secador instantneo
Los secadores instantneos o flash (Fig. 13.5) son utilizados para secar sli
dos de baja humedad o slidos difciles de manejar por formar partculas muy
pequeas o ser muy pegajosos en forma seca (protenas y almidn).
En un secador instantneo el material slido que se va a secar se alimenta
conjuntamente con aire caliente a un ducto, a travs del cual el slido viaja
y se seca por accin del aire. A l final del ducto la corriente de aire-slido se
separa por accin de un cicln. Parte de la corriente es recirculada para secar
las partculas grandes que son ms difciles de secar. Si debido a su tamao
las partculas de la alimentacin no pueden ser transportadas por el secador,
el secador puede incorporar un molino desintegrador a la entrada del ducto de
secado.
632
13.3.2.
Secadores no Adiabticos
Secador de charolas
Los secadores de charolas (Fig. 13.7), son utilizados a escala piloto o para
producciones bajas de productos de alto valor econmico, susceptibles a tem
peraturas elevadas o a dao por manejo mecnico excesivo.
En el secador de charolas la muestra se coloca en las charolas que se intro
ducen a una cmara. Las charolas son calentadas por medio de chaquetas de
633
Liofilizadores
Los liofilizadores son utilizados para obtener slidos secos de alto valor co
mercial. Se emplean cuando los slidos son muy lbiles o frgiles para ser trata
dos por un mtodo convencional de secado o una filtracin, o bien son muy
634
solubles (sales de sodio) de tal manera que no pueden ser obtenidos por preci
pitacin o cristalizacin. La liofilizacin ha sido empleada para la obtencin de
enzimas, hormonas y otro tipo de protenas de uso farmacutico.
En un proceso de liofilizacin (Fig. 13.9) la solucin a secar, con una con
centracin entre 5-25% peso/volumen, se alimenta a un sistema de filtrado (0.2
/xm) para ser esterilizada y entrar al secador que opera en forma estril. En el
proceso de secado la solucin primero se congela, y posteriormente se deshidrata
mediante un sistema de calentamiento y un sistema de vaco, acoplados de tal
manera que el agua de la muestra siempre est en forma slida y su prdida sea
slo por sublimacin.
Recientemente se ha investigado el uso de liofilizadores que operan a la at
msfera como una alternativa a los liofilizadores al vaco con el propsito de
reducir los costos de operacin en el secado (Claussen ei aL, 2007).
13.4.
Diseo de Secadores
635
13.4.1.
636
Secado de slidos
Para obtener experimentalmente la velocidad de secado de un material sli
do, se procede a colocar una muestra en una charola, de tal manera que slo se
exponga la superficie del slido a la corriente de aire que se utilice para secar.
La variacin de la humedad del slido puede medirse por medio de una balanza.
Las condiciones de secado deben ser constantes y aproximadamente iguales a
las que se utilizarn a gran escala.
637
a evaporarse dentro del slido y el vapor a difundirse a travs del slido hasta
el aire. Este proceso es ms lento y por lo tanto retarda la velocidad de secado.
Debido a la situacin descrita anteriormente, el tiempo de secado de un proceso
debe ser calculado sumando los tiempos de los periodos de secado constante y
de secado decreciente.
(13.17)
638
(13.18)
J = k p (H i-H )
(13.19)
donde:
J : Flux de agua. [M / ( L 2 1)]_
C,: Concentracin de agua en la superficie del slido. [M / L 3].
C : Concentracin de agua en el seno del aire. M / L 3\.
k: Coeficiente de transferencia de masa en la pelcula estancada de aire sobre
el slido. Lft\.
p : Densidad de aire seco, [kg aire seco/(L3de mezcla)].
p : 1IV u
El balance de agua en el sistema puede expresarse como:
tn ~ = - J A
dt
(13.20)
639
(13.21)
q = ( X ) (J A )
(13.22)
<1323>
II
tc
obtenindose:
te
mX
hA { T - T i )
{Wo - Wc )
(13.24)
(13.25)
640
donde:
k: Coeficiente de t ransferencia de masa de la ecuacin (13.18).
p : Densidad msica total del gas.
C p : Capacidad calorfica. [cal/A/ - ].
La ecuacin (13.24) puede ser utilizada en forma combinada con la ecuacin
(13.25) o con la (13.26).
"
a W /
W Wc
(1327)
641
t = t
W = W
(i328)
Tiempo de secado
(i329)
En el diseo de secadores el clculo del tiempo de secado permite su dimensionamiento adecuado. En el caso de los secadores por aspersin, el tiempo de
secado debe ser menor al tiempo que dura la partcula en alcanzar la pared del
secador, de tal manera que cuando esto ocurra la partcula ya est seca y deslice
suavemente por la pared del secador. Es decir, el tiempo de secado determina
el dimetro del secador (Oakley, 2004).
Solucin:
Para el clculo de la velocidad de secado se utiliza la ecuacin (13.23):
~~dt ~~~)ST
m dW
642
m3 mezcla
Vh
VH
i,
VH
.
0.974
kg aire seco
mezcla
[ m3
aire seco
kgaii
m3 mezcla
kg aire seco
0.974
El flujo msico es:
kg
3600 s
kg
G = 6.1 x 1.037
x
=22.770
s
1
uh
m2 h
m3
El coeficiente de transferencia de calor se puede calcular con la ecuacin
(13.25):
62.45
W
m2 - K
c) Clculo de A.
El calor de evaporacin se obtiene de tablas de vapor a T, = 28.9 C , este
valores:
A = 2,433 f kg
y de acuerdo a la ecuacin (13.23),
m dW
2'45 m ^ K
X W X H E T X (65'6 -
A dt
m dW
~A~di
= 3.39
kg agua
m2 h
643
dw
d2W
dt
(13.30)
e/ dy2
W 0 - Wc
(2i + l ) 2
exp
(2i + l ) 2 7T2
AL2
(13.31)
W0 - W '
(13.32)
(13.33)
644
D'f = D 0c/exp(^j ^ r )
M o d e lo d e varia cin d e la te m p e ra tu ra d e l p ro d u cto :
Para describir el cambio de la temperatura en las placas experimentales de
pimiento rojo se utiliza el siguiente balance de energa:
= ^ F . [- J A H v + h s { T - T )]
JA _
Jav
ps
Ps 2798exp -15.83
+845.2 exp O . 1 2 5 ^ 0 j
para ^
> 0.1
para
W < 0.1
ps = 1138exp 2.33 ( ^ j ) ]
La rea especfica de transferencia de calor por:
y Qyo
iu9- 18 8 13 (S )+28684 a- 14 0 2
kaA,
donde:
645
ka koa exp
k o a = K laW K'
2jS. = K 3a + KtaW
Los parmetros experimentales del sistema se presentan en la tabla siguiente:
Parmetro
Smbolo
Valor
Aa0
tO
A)e/
Ed
kqO
A'la, A 2a
K'Sa y
R
Ta
T*
wc
W0
A Hv
646
647
Figura 13.14: Esquema del sistema de secado por aspersin del Ejemplo 13.11.
La capacidad calorfica de los slidos es de 0.4 kcal/ (kg - C ) y la tempe
ratura de referencia es de 0 C. En el proceso se requiere producir 316 kg/h de
antibitico con una humedad del 5 % y una temperatura de 60 C.
Se pide estimar:
a)
b)
c)
d)
648
F x 0.25
kg slidos
kg slidos
316 ^ x 0.95
h
kg totales
kg totales
F
b)
La cantidad de agua evaporada puede calcularse mediante un balance de
agua en los slidos.
Agua evaporada
Agua evaporada
1200 ^ x 0.75
n
-3 16 ^ x 0.05
n
kg agua
kg
kg agua
kg
Agua evaporada
c)
La humedad del aire a la salida y el flujo de aire, pueden calcularse
mediante un balance de masa y un balance de energa.
El balance de masa se pude escribir como:
G (H 2 - / / , ) = 884
kg agua
h
La humedad 1I\ del aire a la entrada puede encontrarse en la carta psicomtrica de la Figura 13.2,
H i = 0.005
kg agua
kg aire seco
649
1200
0.25
kg
1200 ^ x 0.75
h
kg
kcal
15.300
x 0..1 _ ^ L _
x (15 0) C +
kg slido - C
kcal
x 1.0
x (15 - 0) C
kg agua - C
2
kg
x 1.0 ,
kCa'
x ( 6 0 - 0 ) C
kg agua C
= 8 ,152.8 ^h
La entalpia del aire a la entrada puede calcularse utilizando la ecuacin
(13.12),
kg aire seco
39.33 G
( g kgarhe W
) {[1.005 + (1.884)(J/2)](7 5 )+
(2502)<H ( i d ^ ) ( o
=
18 G + 631.3 G H 2
| ^
Tkcsl
650
0 = 30.320 ^
, ^
J/a =0.0341
*
kg aire seco
d) Flujo de vapor
A I r/rom
prom ~ 0.0341 +
1
18
28.9
= 28.33 J L
mol
PM
A m - u -
1 atm x 28.33
82. x 10-
kg
^
103 6 = 0.993 4
- rrT . . . . .
m3
2 - x 348 K
mol - K
Gv =
0.993
f)
de 35 s.
mv
m3
V = G v t = ^31575
x 35 s x
h
3600 s
o
= 307 m3
7r x D 2
TT
7T x D 2
o
---- - x // = ---- - x 0.8D = 307 m3
H = 6.3 m
13.4.2.
651
(13.34)
652
q = jA (T a - T z )
(13.35)
donde:
h: Coeficiente de transferencia de masa, [cal/ ( I 2 - t )j.
k:
(13.36)
(t
donde:
A : rea de la seccin transversal de la charola. [L 2].
A: Calor de evaporacin. [cal/A].
pQ: Masa de agua ligada y no ligada por volumen de slido mojado. [M / L 3].
Combinando las ecuaciones (13.35) y (13.36) e integrando entre los lmites,
t = 0
Z = l
t = t
z =z
se obtiene:
= l2 -
2k (T q Tz)~\
(13.37)
PA/2
2 [ k (T 0 T z)\
(13.38)
653
13.5. SUMARIO
PoA/2
(13.39)
=
P ilo t o
In d u s t r ia l
Esta ecuacin supone que las condiciones a nivel piloto son iguales a las de
nivel industrial: temperaturas, niveles de vaco y el porcentaje del volumen total
que es ocupado por el slido (50-65%).
13.5.
Sumario
El secado es una operacin empleada en la preparacin final de los bioproductos. Consiste en una reduccin del contenido de humedad de los slidos
con el propsito de mejorar su estabilidad, reducir su volumen y preservar su
actividad.
Los mtodos para efectuar una operacin de socado se clasifican en adiabti
cos y no adiabticos. En el secado adiabtico se agrega aire caliente directamente
sobre el material que se desea socar. El socado no adiabtico se realiza mediante
un calentamiento indirecto del material de inters.
Existen diversos equipos de secado, los cuales se pueden clasificar mediante
la forma en que se realiza el secado. Los secadores adiabticos ms utilizados
son el de aspersin, el secador instantneo y el de lecho fluidizado. Entre los no
654
adiabticos se pueden citar los secadores tipo charola, de doble cono, tambor
rotatorio y los liofilizadores.
El diseo de los secadores est basado en una combinacin de la teora de
secado y datos experimentales obtenidos directamente con el material de inters.
655
13.6. PROBLEMAS
13.6.
Problemas
13.2. Temperaturas para el clculo de humedad. Una mezcla airevapor de agua tiene una temperatura de bulbo seco de 65.6 C y una temper
atura de bulbo hmedo de 32.2 C.
656
P e s o (kg)
0.0
0.4
0.8
1.4
2.2
3.0
4.2
5.0
7.0
9.0
12.0
4.944
4.885
4.808
4.699
4.554
4.404
4.241
4.150
4.019
3.978
3.955
Se p id e:
a) Graficar los datos de humedad del slido W contra el tiempo.
b) Obtener la velocidad de secado en cada punto y graficarla contra la
humedad del slido.
c) Estimar la velocidad de secado en el periodo de velocidad constante.
d) Estimar la humedad crtica.
e) Estimar la humedad de equilibrio.
f)
Estimar el tiempo para disminuir la humedad del slido de 0.25 a 0.09
kg/kg.
R esp . c) 0.996 kg/h -m 2, d) 0.17 kg/kg e) 0.05 kg/kg y f ) 4.1 h.
13.7. BIBLIOGRAFA
13.7.
657
Bibliografa
658
Thybo, P.; Hovgaard, L.; Lindclov, J.S.; Andera Brask, A.; Andersen, S.K.
2008. Scaling up the spray drying process from pilot to production scale
using an atomized droplet size criterion Pharm. Research. 25, 1610-1620.
Tsotsas, E.; Gnieliaski, V.; Schlucndcr, E. 2003. Drying o f solid materials.
En: Bohnet. M. Ullmannis encyclopedia o f industrial chemistry. Vol. 11 :
Diuretics to energy management in Chemical industry. 6. Wiley-VCH. S.
47-82
Treybal, R.E. 1980. Operaciones de Transferencia de Masa. McGraw-Hill. 2
ed. Mxico. 12, 723-791.
Turhan, M.; Tur han, K. N.; Sahbaz, F. 1997. Drying kinetics o f red pepper.
J. Food Proc. Preservation. 21, 209-223.
Wang, S.; Langrish, T . 2009. A review o f proccss simulations and the use o f
additives in spray drying. Food Res. Int. 42, 13-25.
P a rte V I
661
En esta Parte V del libro en su Captulo 14 se combina la informacin pre
sentada en los captulos anteriores para analizar en forma integral un bioproceso
de inters. La metodologa requiere considerar por un lado aspectos de mercado
como el precio y la demanda especfica del producto. Por otro lado, aspectos
tcnico-econmicos como la produccin anual, las dimensiones de los equipos,
las necesidades de insumos, los costos asociados, la inversin proyectada y el
impacto ambiental. Este enfoque ayuda a seleccionar el mejor diseo entre las
alternativas tcnicamente plausibles.
C aptu lo 14
Introduccin
14.2.
Fundamentos
664
14.2.1.
Demanda
V P rd
[Participacin (% )]
kg
V L - ao )
(14.1)
| [Rendimiento global (% )i
f-S s U l =
\ L - ao) \
665
14.2. FUNDAMENTOS
Rend. volumtrico ( ^ )
Rend. especfico
j
v w .
VkL .
[Tiempo de procesamiento (h)]
TAO
\ 8110/
(14.2)
14.2.2.
Submodelo biolgico
El submodelo biolgico comprende generalmente la cintica, la termodinmi
ca (calor de reaccin y equilibrio) y la estequiometra de las biorrcaccioncs. sta
es la informacin bsica para el diseo de las operaciones previas del bioproceso
(biorrcactor, esterilizador de aire, preparacin de medio). La cintica determina
el tiempo necesario para lograr una conversin especificada, la termodinmica
permite calcular la cantidad de calor que es necesario remover en el biorreactor
y la estequiometra es la base para desarrollar los balances de masa del bioproceso. Esta informacin es obtenida a partir de los datos de laboratorio y/o
planta piloto, as como de la literatura.
Submodelo fsico
El submodelo fsico se basa en el diagrama de flujo desarrollado en la sn
tesis del bioproceso, organizado por secciones, v.g. fermentacin, recuperacin,
concentracin, purificacin y empaque. Incluye todas las operaciones y procesos
unitarios necesarios para la obtencin del producto. Las operaciones unitarias
son los pasos bsicos en el bioproceso como la esterilizacin, la fermentacin
y la cromatografa. Los proceso unitarios comprenden un conjunto de acciones
que se desarrollan secuencialmente para llevar acabo una operacin unitaria.
Por ejemplo, equilibrar, adsorber, lavar, eluir y regenerar una columna durante
la operacin cromatogrfica. El submodelo fsico tambin requiere de datos de
todos los materiales que entran y salen del proceso, incluyendo sus principales
propiedades fsicas y qumicas.
Submodelo de costos
El submodelo de costos involucra los costos unitarios y los mtodos de esti
macin de costos necesarios para calcular los costos de inversin y operacin de
un bioproceso dado. Esta informacin se obtiene a partir de los proveedores o
bien de bancos de datos disponibles.
666
14.2.3.
14.2.4.
Evaluacin Econmica
Mtodo del V P N
El mtodo del valor presente neto consiste en calcular la suma algebraica
de los flujos netos de efectivo actualizados utilizando una tasa de descuento,
que generalmente es la tasa de rendimiento mnima aceptable (T R E M A ). La
ecuacin para el clculo del V P N es:
F,
V P N = -F + ]T
f=l (1 + i ) "
donde:
F q: Inversin inicial.
F t: Flujo neto de efectivo del periodo t.
(14.3)
667
M todo del T IR
La tasa interna de rendimiento es la tasa de descuento que iguala a cero el
valor presente neto de los flujos de un proyecto. La ecuacin para el clculo del
T IR es:
n
V PN = -F o+ E
(=1
Ft
(1 + t ) n
(14.4)
donde:
Fq: Inversin inicial.
F t : Flujo neto de efectivo del periodo t.
i: T IR
Cuando la tasa interna de rendimiento es mayor al T R E M A (T I R > T R E M A ),
la rentabilidad del bioproceso es mayor al T R E M A y es un indicador positivo
para la evaluacin.
14.3.
Caso de Diseo
14.3.1.
Plsmidos
14.3.2.
668
C **W "*< M W
MKMMI < M n i
O l CUVl*
Q n ln ( M n
C#A
NA
Mn
San
DMA
NA
PnunM
( iWmhi
UmhIhh
Mn
14.4.
Actualmente, es altamente recomendable el uso de simuladores computacionales para facilitar la representacin y el anlisis de todo el bioproceso. Var
ios simuladores como Aspen Plus, ChemCAD, HYSYS y PR0/1I, son utilizados
generalmente para el diseo de procesos de estado estacionario en la industria
petroqumica. Algunos simuladores como SuperPro Designer, Biotechnology De-
669
Concepto
Demanda
Dosis
Rend. global
Rend. volumtrico
Rcnd. especfico
Cantidad
1.16 x 10' ampolletas/ao
2 mg/ampolleta
0.65
7 g de biomasa/L
0.007 g de plsmido/g de biomasa
14.4.1.
14.4.2.
B ases d e D ise o
Para desarrollar el anlisis del bioproceso es necesario establecer las bases del
diseo, que estn relacionadas con la demanda del producto y la tecnologa de
produccin. En la Tabla 14.1 se presentan las bases correspondientes al presente
caso. Mediante el uso de esta informacin se calaa la demanda de plsmido,
el volumen de operacin del Termentador y las entradas al bioproceso.
Demanda anual
Con los datos anteriores es necesario calcular la demanda de plsmido,
670
Compuesto
Composicin
Triptona
Extracto de levadura
Cloruro de sodio
Kanamicina
16.0 g/L
10.0 g/L
5-0 g/L
o .l g/ L
V =
OO O ^
ao
103 g y ^
kg
7920 h
-g-------------------------------= 4,415
7 ? x 0.007 _L_________
48
L
lote
x 0.65
lote
(1 - 0.02)
L
lote
Entradas al bioproceso
Para realizar la simulacin es necesario establecer las entradas de masa al
bioproceso (agua, medio slido y antibitico) tomando como base el volumen de
operacin y la composicin del medio de cultivo (Tabla 14.2). En este coso se
utilizan 4, 226 L de agua y 131 kg de medio por cada lote.
14.4.3.
P re p a ra c i n d el D ia gram a d e F lu jo
671
Recuperacin primaria
La biomasa se cosecha en una centrfuga (P-10) que remueve el 98% de la
biomasa y concentra el caldo 20 veces aproximadamente. Despus de la cen
trifugacin la pasta se resuspende y se somete a un proceso de lisis alcalina con
N aO II en el biorreactor ( P - l l) . A l final de la lisis la solucin se neutraliza con
acetato de potasio que permite precipitar restos celulares, DN A gcnmico y pro
tenas contaminantes. Este precipitado es removido por un sistema de filtracin
( P - l 2, P-13 y P-14).
Recuperacin intermedia
Para lavar, purificar parcialmente y concentrar el caldo se utiliza una unidad
de diafiltracin (P-15). El caldo se concentra primeramente 5 veces, despus se
lava diez veces y finalmente se concentra de nuevo dos veces.
Purificacin final
La purificacin final del caldo se realiza en 5 columnas de membranas de
intercambio inico que operan en paralelo a razn de 4 ciclos por lote ( P - l 6).
La operacin se realiza en forma frontal en la etapa de adsorcin y e luyen do
con gradiente salino. Para su preparacin final la solucin de plsmido eluida
de la columna se concentra 2 veces, se lava 10 veces y se vuelve a concentrar 5
veces, en el equipo de diafiltracin (P-17). Finalmente, la solucin se esteriliza
mediante filtracin (P-18).
672
673
14.4.4.
Triptona
100 biomasa
674
14.4.5.
14.4.6.
675
V alor
$10.00/caja
Slo operacin
15 aos
3 aos
100% anual
lineal 10 aos
10%
40%
7%
14.4.7.
676
I I . C ostos F ijo s
A. Depreciacin
a. Materias primas:
Base de datos y usuario
b. Costo de operacin: 0.06 T P D C
c. Mantenimiento: 0.10 P C
a. Horas equipo
a. Vapor: $4.20/100 kg
b. Electricidad: $0.1/ kVV-h
c. Agua: $0.10/1000 kg agua fra
d. Tratamiento de desechos: $0.3/nr*
a. 0.1 D F C
677
kg/ao
2,651,791
9,992
11,080
6,924
267
1,821,930
334
1,383
529,076
742
k g/ lote
16,169
61
68
42
2
11,109
2
9
3.226
5
14.4.8.
Anlisis de Resultados
El bioproceso tiene un margen bruto del 73% que refleja una diferencia
considerable entre los ingresos y los costos de operacin. El ROI y el periodo
de retomo indican que la inversin se recupera al primer ao de produccin.
La tasa interna de rendimiento es del 57% que es sustancial mente mayor al
T R E M A del 7 % empleado en el anlisis. El valor presente neto del proyecto es
678
In versin
E valu acin
C o n ce p to
Ingresos
Costo de operacin
Costo unitario
Inversin total de capital
Margen bruto
Retorno sobre la inversin (R O I)
Periodo de retomo
Tasa intema de rendimiento (T IR )
Valor presente neto (V P N )
V a lo r
$40,311,000/ao
$10,930,000/ao
$2.71/caja
$18,669,000
73%
103%
1 ao
57%
$111,253,000
679
14.5. SUMARIO
14.5.
Sumario
680
14.6.
Problemas
V a lo r
100 kg
100 mg
S350/dosis
20 g de tPA/L de leche
S4.000/L
Se p id e:
a) Desarrollar el diagrama de flujo del bioproceso consultando la literatura
(v.g. Morcol y Bell, 2001).
b) Calcular el T IR y el V P N del proyecto.
c) Evaluar el efecto sobre el T IR de la variacin del costo de la leche en 20
y 10 % .
14.2. P ro d u cc i n d e alb m ina d e suero hum ana ( A S H ) . Para la eva
luacin de un bioproceso para la produccin de ASH (protena no glicosilada) a
partir de un extracto de plantas de tabaco recombinante ( Nicotiana tabacum)
obtenido en la etapa de recuperacin primaria de la pro tena, se cuenta con los
datos siguientes (Goldman et a l 2002):
C o n c e p to
Demanda anual ASII
Precio
Concentracin
Cost o extracto
Peso molecular
V a lo r
150 ton
$3.56/g
200 g de A S II/L de extracto
S100/L
66,500 Da
14.7. BIBLIOGRAFA
14.7.
681
Bibliografa
FYcitas, S.; Canrio, S.; Santos, J.A.; Prazcrcs, D.M. 2009. Altcrnativcs for thc
intermedate recovery o f plasmid D N A : performance, economic viability
and environmental impact. Biotechnol J. 4, 2G5-278.
FVeitas, S.; Santos, ,J.; Prazeres, M. 2006. Plasmid D N A . En: Heinzle, E.;
Biwer, P.; Cooncy, C. Dcvelopment of Sustainable Bioproccsscs Modeling
and Assessment. John W iley and Sons. Ltd. p. 270-285.
Goldman, I.L.; Kadulin, S.G.; Razin, S.V. 2002. Transgenic goats in the world
pharmaccutical industry o f the 21st ccntury. Russian J. Genctics. 38, 1-14.
Harrison, R.G.; Todd, P.W .; Rudge, C.R.; Pctrides, D. 2003. Bioscparations
Science and engineering. Cap. 11. Oxford University Press.
Holler, C.; Zhang, C. 2008. Piirification o f an acidic recombinant protein from
transgenic tobceo. Biotech. Bioeng. 99, 902-909.
Marcol, T.; Dell, S.J.D. 2001. Method for processing milk. US6183803.
Nfor, B.K.; Ahamed, T .; van Dedem, G.W .; van der Wielen, L.A.; van de Sandt,
E.J.; Eppink, M.H.; Ottcns, M. 2008. Dcsign strategics for integrated
protein purification processes: challenges, progress and outlook. J. Chem.
Ikchnol. Biotechnol. 83,124-132.
Petrides, D.; Koulouris, A.; Siletti, C.; Jimnez, J.; Lagonikos, P. 2010. The
role o f simulation and scheduling tools in thc dcvelopment and manufacturing of active pharmaceutical ingredients. ain Ende, D.J. (Ed.). Chemical
Engineering in the Pharmaceutical Indxistry: From R & D to Manufacturing. John W iley and Sons.
Indice alfabtico
Osmosis inversa, 464
Actividad especfica, 17
Adsorbentes hidrofbicos, 279
Adsorcin, 275
columna
patrn constante, 335
Adsorcin fsica, 278
Adsorcin por afinidad, 279
Anfisis del bioproccso, 663
balances de masa y energa, 666
escala y modo de operacin, 664
evaluacin econmica, 666
modelo del bioproceso, 665
submodelo biolgico, 665
submodelo de costos, 665
submodelo fsico, 665
Ayudas-Filtro, 71
Bacterias, 158
Gram negativos, 158
Gram positivas, 158
Bioprocesos, 6, 7
anlisis, 22
sntesis, 22
tpico, 9
Bioseparaciones, 6. 13
tendencias, 23
Capa de Gody-Chapman, 518
Carga de perlas, 174
Caso de diseo, 667
Centrifugacin, 111
Cintica de la adsorcin, 286
Cintica de la cristalizacin, 560
crecimiento, 562
velocidad de crecimiento, 562
nucleacin, 560
primaria, 561
secundaria, 561
velocidad de nucleacin, 561
Coagulacin, 71
Coeficiente de particin, 211
Coeficiente de transferencia de masa,
289
Costo de adquisicin de equipo, 46
Cristales
anfisis de momentos, 566
deasidad del magma, 592
distribucin de tamao, 565
ley delta, 565
longitud caracterstica, 564
pureza, 554
tamao dominante, 591
tipos, 553
Cristalizacin, 551
curvas de solubilidad, 554
estrategia de diseo, 652
modo de operacin, 559
sobresaturacin por enfriamien
to, 560
sobresaturacin por enfriamien
to evaporativo, 560
sobresaturacin por evaporacin
trmica, 560
sobresaturacin por evaporacin
trmica al vaco, 560
sistema, 552
sobresaturacin, 557
NDICE ALFABTICO
Cristalizadores
diseo
enfriamiento controlado y con la
nucleacin suprimida, 578
Cromatografa, 363
escalamiento, 402
factores, 403
por elucin isocrtica, 363
pureza, 399
rendimiento, 400
resolucin, 397
teora cintica, 383
tipos, 365
Curva de ruptura, 319
Desarrollo del diseo, 668
anlisis de resultados, 677
bases, 669
bases de anlisis econmico, 674
descripcin general del bioproceso, 669
especificaciones de equipos, 674
preparacin del diagrama de flujo,
670
procesos unitarios, 673
simulacin del proceso, 675
Dilisis, 464
Difusividad, 290
Diseo de adsorbedores, 295
columna
anlisis adimensional, 332
anlisis aproximado, 323
lecho a contracorriente, 340
modelo cintico lineal, 337
modelo de Thomas, 334
teora cintica, 328
teora de platos, 325
teoras plato-cintica, 341
por lotes, 295
modelo cintico, 301
modelo de parmetros agrupa
dos, 304
tanque agitado continuo, 310
Diseo de columnas cromatogrficas, 372
cromatografa lineal, 373
escalamiento con modelos, 409
683
escalamiento directo, 404
mtodos lineales
cintico, 385
teora de momentos, 386
teora platos-cintica, 390
van Deemcter, 394
modelos lineales, 373
platos tericos, 374
sistema, 410
Diseo de cristalizadores, 570
balance poblacional, 572
continuos, 582
continuos
balances de masa, 597
con remocin selectiva, 595
continuos R PM SM , 583
diseo, 590
estimacin de parmetros, 584
escalamiento por lotes, 581
por lotes, 571
I )isco de equipo de centrifugacin, 126
de discos, 135
filtracin, 144
tubular, 127
Diseo de equipo de electroforesis, 537
teora cintica, 542
teora de platos, 537
Diseo de equipo de extraccin, 233
continua, 241
de etapas mltiples, 242
diferencial, 253
por etapas no en equilibrio, 259
por lotes, 234
mtodo grfico, 239
por lotes
mtodo analtico, 235
Diseo de equipo de filtracin, 78
continua
lavado de torta, 94
de lecho profundo, 98
filtracin continua, 92
formacin de torta, 92
optimizacin, 86
por lotes, 79
paralelo, 89
tortas compresibles. 90
684
NDICE ALFABTICO
tortas incompresibles, 80
Diseo de equipo de rompimiento celu
lar, 180
homogeneizador de alta presin, 192
microfluidizador, 193
molino de perlas de alta velocidad,
180
continuos, 183
por lotes, 181
Diseo de precipitadores, 444
agregacin ortocintica, 448
cintica, 444
continuos, 453
crecimiento pericintico, 446
floculacin, 449
mtodos, 449
nucleadn, 446
por lotes, 450
Diseo de secadores, 634
adiabticos, 635
curvas de secado, 636
no adiabticos, 651
al vaco, 653
tortas estacionarias, 651
slidos no porosos, 643
secado de slidos, 636
tiempo de secado. 641
velocidad de secado, 637
Diseo interior, 22
Diseo operaciones de equipos de ultrafiltracin, 485
concentracin
continua, 493
concentracin por lotes, 486, 491
conccntracin-diafiltracin, 503
continua, 490
diafiltracin, 486
continua en cascada, 500
por lotes repetida, 499
por lotes, 489
purificacin, 486
Efecto de Joule, 527
Electrosmosis, 524
Electroforesis, 513
de zona, 514
dispersin, 523
medios, 528
Enfoque de diseo, 32
Equipo, 35
Equipo de filtracin, 75
a presin, 76
continuos al vaco, 76
de cmara, 76
lecho profundo, 77
marcos y lotes, 76
Equipos cromatogrficos, 371
Equipos de adsorcin, 294
columna, 295
por lotes, 294
Equipos de centrifugacin, 120
cmara mltiple, 122
de discos, 124
decantadora, 123
filtracin, 126
sedimentacin, 120
tazn slido, 121
tubular, 120
Equipos de cristalizacin, 568
continuos, 568
con circulacin forzada de mag
ma, 569
con tubo de tiro y mampara, 570
cristalizador-evaporador, 569
por lotes, 568
Equipos de electroforesis, 532
con recirculacin, 534
desplazada, 535
pelcula delgada, 535
de flujo libre, 532
anulares, 534
de pelcula delgada, 533
cloctrocromatogrficos, 536
anular rotativa cont inua, 536
de efectos opuestos, 536
Equipos de extraccin, 230
continua, 231
de etapas mltiples, 231
diferencial, 232
por lotes, 230
Equipos de precipitacin, 443
Equipos de rompimiento celular, 167
685
NDICE ALFABTICO
comparacin, 193
homogeneizador de alta presin, 175
microfluidizador, 178
molinos de perlas de alta veloci
dad, 168
Equipos de secado, 630
adiabticos, 630
instantneo, 631
lecho fluid izado, 631
por aspersin, 630
no adiabticos, 632
de charola, 632
de doble cono, 633
liofilizadores, 633
tambor rotatorio, 633
Equipos de ultrafiltracin, 479
mdulos. 481
dinmicos, 483
fibra hueca, 483
hoja enrollada en espiral, 482
hoja plana, 482
hoja plegada, 482
tubos y carcaza, 482
membranas, 480
Escala de operacin, 33
Esfera cargada sumergida, 515
Evaluacin ambiental, 54
Evaluacin econmica, 44
Extraccin fraccionaria, 262
Extraccin lquido-lquido, 209
cambios de soluto, 214
cambios de solvente, 214
seleccin del solvente, 220
sistemas, 210
Extraccin SDFA, 221
diagramas de fases, 222
factores, 225
longitud de las lneas de unin, 224
modelos, 228
Factor sigma, 141
Filtracin, 67
convencional, 73
de lecho profundo, 74
mecanismos, 67
Floculacin, 71
NDICE ALFABTICO
686
de zona, 529
enfoque isoelctrico, 531
isotacoforesis, 531
Momentos, 388
Movilidad, 517
concentraciones intermedias y al
tas, 521
efecto de la capa difusa, 519
soluciones diluidas, 520
Nmero adimensional de Raylcigh, 527
Pared celular, 158
PAT, 23
Periodo de retorno, 52
Polarizacin, 471
Potencial qumico, 211
Potencial Z, 518
Precipitacin, 421
con polmeros no inicos, 433
con sales, 423
con solventes, 431
isoelctrica, 430
por afinidad, 441
por desnaturalizacin selectiva, 437
por disminucin de la solubilidad,
423
Presin transmembrana, 487
Proceso unitario, 34
Procesos con membranas, 462
Punto Isoelctrico, 515
Pureza, 17
Rendimiento, 16
Rentabilidad, 51
Retorno sobre la inversin, 51
R IPP , 9
Rompimiento celular. 157
El libro de Bioseparaciones est diseado para ser usado por estudiantes de licenciatura,
de posgrado y profesionales de la industria, de los diversos cam pos relacionados con los
procesos biotecnolgicos.
El te x to se d iv id e en s e is p a rte s . La p rim e ra p a rte c o n s titu y e una in tro d u c c i n a los
procesos de bioseparacin. En las siguientes cuatro partes: R ecuperacin del Producto,
C oncentracin, Purificacin y A cabado; se abordan las principales operaciones de biosepa
racin siguiendo una secuencia tpica de un bioproceso, tratando con ello de conservar un
enfoque unitario m s que describir procesos particulares. La ltim a parte se relaciona con el
D iseo del B ioproceso e integra los aspectos que se revisan en las partes previas.
En cada captulo, dedicado a una operacin determ inada, se presentan los fundam entos
de dicha operacin, los equipos com nm ente em pleados para realizarla y los principales
m todos de diseo.
A spectos relevantes
S e p re se n ta un tra ta m ie n to d e ta lla d o y a c tu a liz a d o d e las p rin c ip a le s o p e ra c io n e s
de bioseparacin utilizadas en los bioprocesos.
Se incluyen varios ejem plos y problem as propuestos en cada captulo.
Un buen nm ero de ejem plos y problem as propuestos se resuelven con M ATLAB.
C ada captulo contiene bibliografa de consulta.
Se incluye un captulo final integrador sobre el anlisis y evaluacin de esquem as de
bioseparacin utilizando paquetes de com putacin.
A cerca de los autores
ISBN 9 7 8 - 6 0 7 - 3 2 - 0 9 4 5 - 8
90000