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GENERALIDADES
1. TTULO
Fenotipo killer en levaduras productoras de etanol aisladas de chicha de
jora del distrito de Moche, regin La Libertad, Per.
2. PERSONAL INVESTIGADOR
2.1. Autor
Acadmico
Profesional
de
Microbiologa
Parasitologa.
Facultad de Ciencias Biolgicas.
Universidad Nacional de Trujillo.
2.2. Asesora
3. TIPO DE INVESTIGACIN
3.1. De acuerdo a la orientacin: Bsica.
3.2. De acuerdo a la tcnica de contrastacin: Descriptiva.
4. RGIMEN DE INVESTIGACIN: Orientada.
8. CRONOGRAMA
ETAPAS
TIEMPO (MESES)
a. Recoleccin de Datos
12
b. Anlisis de Resultados
TOTAL
18
: 27 de Febrero de 2009.
Autor
: 15 horas.
10.2.
Asesora
: 2 horas.
Personal
-
Autor
Asesora
Tcnico de laboratorio
Personal de servicio
1
1
1
1
Equipos
-
11.2.2.
Autoclave Vertical
Balanza analtica AND
Cmara de Neubauer Ehartnack
Centrfuga Safeguard Centrifuge
Estufa Precisin Scientific C.O.
Horno Memmert
Microscopio binocular Micros Austria
Refrigeradora Electrolux
1 unidad
1 unidad
1 unidad
1 unidad
1 unidad
1 unidad
1 unidad
1 unidad
Instrumento
-
1 unidad
60 cultivos
Bagueta s/m
Baln de 1000 mL Duran
Beacker de 1000 mL Kimax
Lmina porta objeto Marienfeld
Laminilla cubre objeto Marienfeld
Matraz de 500 mL Boeco
Mechero s/m
Pipeta de 5 mL Marienfeld
Pipeta de 10 mL Marienfeld
Placa de Petri Pyrex
Set de coloracin Gram
Termmetro de -10 C a 110 C Boeco
Tubo de ensayo de 13 100 mm Pyrex
Vial s/m
1 unidad
1 unidad
1 unidad
30 unidades
30 unidades
2 unidades
2 unidades
1 unidad
2 unidades
30 unidades
1 unidad
1 unidad
50 unidades
200 unidades
11.4. Locales
-
CDIGO
5.3.11.20
5.3.11.22
COSTO S/.
Viticos y asignaciones
240.00
Movilidad local
240.00
Vestuario
115.00
45.00
5.3.11.30
Mandil 2 unidades
50.00
20.00
Material de consumo
2145.00
Material biolgico
1436.40
718.20
718.20
451.50
220.00
Agua destilada 10 L.
10.00
16.50
190.00
Etanol de 96 Aky 3 L.
15.00
Material de Escritorio
23.00
4.00
13.00
6.00
unidades
Material de limpieza
59.60
25.00
6.60
6.00
Franela 1 metro
5.00
10.00
7.00
Otros
174.50
13.00
90.00
Encendedor 2 unidades
2.00
14.00
Pabilo 1 cono
6.00
45.00
unidades
Ron de quemar 3 L.
5.3.11.39
4.50
5.3.11.51
173.00
8.00
Encuadernacin 7 ejemplares
105.00
30.00
30.00
20.00
20.00
COSTO S/.
5.3.11.20
Viticos y asignaciones
240.00
5.3.11.22
Vestuario
115.00
5.3.11.30
Material de consumo
2145.00
5.3.11.39
173.00
5.3.11.51
20.00
TOTAL
2693.00
13. FINANCIACIN
13.1.
13.2.
II.
PLAN DE INVESTIGACIN
1. REALIDAD PROBLEMTICA
Las levaduras se hallan ampliamente distribuidas en el medio ambiente, en el
suelo de los viedos, sobre la piel de algunas frutas, en la superficie de los vegetales,
en el aparato digestivo de los animales, etc (Lee, 2000). La microflora natural de los
frutos ricos en azcares fermentables est compuesta fundamentalmente por mohos
y en menor nmero bacterias y levaduras, y vara con el clima y tipo de suelo; hay
una gran variabilidad de los tipos microbianos encontrados en la flora natural de los
frutos procedente de una regin a otra (Bourgeois y Larpent, 1995).
Las levaduras son microorganismos fascinantes, porque sus actividades
dinmicas y diversas afectan a muchas reas de la ciencia y la tecnologa. Algunas
especies juegan un rol benfico en la produccin de alimentos, bebidas y frmacos,
no obstante, otras son nocivas y pueden ocasionar importantes prdidas econmicas
en la industria o ser causantes de enfermedades en el hombre (Buscott et al., 1996;
Deak y Beuchat, 1996; Kurtzman y Mannarelli, 1998; Loureiro y Querol, 1999;
Loureiro y Malfeito Ferreira, 2003).
La chicha de jora, es un producto oriundo del Per, que se elabora
artesanalmente y se consume adems en otros pases de Amrica del Sur,
constituyendo un producto potencialmente industrializable. Se denomina chicha de
8
Sobre el origen de las levaduras existen dos teoras. La primera sostiene que
los frutos daados sirven de "depsito" para microorganismos, entre los que se
incluye Saccharomyces cerevisiae, y que por tanto, desarrollan en las
fermentaciones espontneas (Mortimer y Polsinelli, 1999). La segunda teora afirma
que proceden de las bombas, tuberas, depsitos de fermentacin etc. de la bodega;
aunque no se descarta una presencia minoritaria de S. cerevisiae en los frutos
(Martini, 1993; Fleet y Heard, 1993; Vaughan-Martini y Martini, 1995).
Las fermentaciones espontneas son aqullas que se producen de forma
natural, es decir, las realizan las levaduras provenientes de los frutos y del material
de bodega, sin inoculacin externa. Esto hace que las fermentaciones espontneas
no sean producto de la accin de una nica especie o cepa de levadura, sino una
sucesin de especies y cepas de levaduras diferentes a lo largo del proceso (Kunkee
y Amerine, 1970; Ribreau-Gayon et al., 1975; Lafon-Lafourcade, 1983;
Zambonelli, 1988).
As, en los primeros das de fermentacin, los gneros mayoritarios son
Hanseniaspora/Kloeckera, Candida y en menor medida Hansenula, Pichia,
Rhodotorula y Metschnikowia (Querol et al., 1990; Longo et al., 1991; Fleet y
Heard, 1993; Schtz y Gafner, 1994). Despus de los 2 3 primeros das, estos
gneros reducen su nmero, dando paso al crecimiento de otras especies ms
tolerantes al etanol como Saccharomyces; controlando finalmente la fermentacin
9
actividad K2 se encuentra entre 2,9 y 4,9 (Shimizu et al., 1985). En chicha de jora
los valores de pH encontrados fluctan entre 3,5 y 5,4 , siendo en su mayora
inferiores a 3,9 (Manrique, 1978).
En Saccharomyces cerevisiae las VLP se transmiten a las clulas hijas
mediante mecanismos distintos de los descritos por la gentica clsica
(heredabilidad citoplasmtica). La persistencia de estas partculas vricas en las
clulas es asintomtica, en contraste con algunos virus fngicos que se asocian con
efectos adversos en su portador. Estos tipos de partculas vricas son consideradas no
infectivas, ya que no se ha identificado, hasta el momento, ningn tipo de va de
transmisin extracelular (Schmitt y Breinig, 2002).
Existen otras especies portadoras del carcter killer en los cuales los
determinantes genticos para la toxina difieren del descrito para S. cerevisiae. En el
caso de Kluyveromyces lactis son plsmidos constituidos por DNA, mientras que en
Hanseniaspora uvarum, la protena txica est codificada a nivel cromosomal
(Wickner, 1996).
En Latinoamrica, se han hecho revelamientos de flora killer en bodegas
de Brasil, Uruguay y Argentina. En este ltimo pas, tras el anlisis de las levaduras
aisladas de mostos en distintos estados de fermentacin procedentes de bodegas de
las provincias de Salta, La Rioja, San Juan y Mendoza, el fenmeno killer mostr
una distribucin heterognea. Desde su total ausencia en la provincia de Salta hasta
un 33.34% de cepas killer aisladas en bodegas de la provincia de San Juan, a
partir de mostos que no haban sido sembrados con levaduras seleccionadas
(Vazquez y Toro, 1994).
Desde el punto de vista industrial, si una cepa killer posee buenas
caractersticas de fermentacin, esta propiedad en s es favorable. Por el contrario, si
una cepa killer posee propiedades no deseables puede originar dificultades en el
proceso de fermentacin, aun si ste ha sido sembrado con cepas seleccionadas
(Castellanos et al., 2008).
11
la presente
2. PROBLEMA
Cul es el porcentaje del fenotipo killer en 60 cultivos de levaduras productoras
de etanol aisladas de chicha de jora del distrito de Moche, regin La Libertad, Per
durante al ao 2009 - 2010?
3. HIPTESIS
Implcita.
4. OBJETIVO
-
5. DISEO DE EXPERIENCIAS
5.1. Universo muestral
Cultivos de levaduras productoras de etanol aisladas de chicha de jora del
distrito de Moche, regin La Libertad, Per durante el ao 2009 - 2010.
13
5.5.3.
levadura
A partir de los cultivos de levadura conservados en AS, se sembrarn en
tubos conteniendo AEM; luego sern incubados entre 20 C a 22 C por
24 a 48 horas, cumplido el tiempo de incubacin, se harn coloraciones
Gram para determinar su pureza. Los cultivos puros sern conservados en
refrigeracin y los que estuviesen contaminados sern sometidos a
purificacin mediante diluciones en agua destilada y siembra en AS.
5.5.4.
15
Anlisis de resultados
6. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
ANGULO, L.; FREIRE, M.L.; LEMA, C.; VICENTE, J.A.; LPEZ, E. 1993.
Presencia de levaduras killer durante la fermentacin de mostos de O Baixo
Mio. En: XV Jornadas de viticultura y enologa de Tierra de Barros. Edit.
Junta de Extremadura. Zafra. Badajoz. 215-224.
BARRE, P. 1992. Le facteur killer. En: Les acquisitions rcentes en microbiologie
du vin. Editor Doneche, B. Pars. 63-69.
BISSON, L. 1999. Stuck and sluggish fermentations. American Journal of Enology
and Viticulture. 50: 107-19.
BOURGEOIS, C; LARPENT, J. 1995. Microbiologa Alimentaria, Tomo 2:
Fermentacin Alimentaria. Zaragoza (Espaa): Editorial Acribia SA.
16
17
Biotechnology,
vol.
5:
Food
and
feed
production
with
18
19
alcoholic
fermentation
determined
by
CHEF
gel
21
ANEXOS
Componentes
Cantidad
Extracto de malta
35 g.
Agar
20 g.
Agua destilada
1000 mL.
Componentes
Cantidad
Glucosa
40 g.
Mezcla de peptonas
10 g.
Agar
15 g.
Agua destilada
1000 mL.
Componentes
Cantidad
Extracto de levadura
10 g.
Peptona
20 g.
Dextrosa
20 g.
Agua destilada
1000 mL.
23
Caldo
Peptone
Dextrose
(YPD).
Yeast
Agar YPD-MB.
Componentes
Cantidad
Extracto de levadura
10 g.
Peptona
20 g.
Glucosa
20 g.
Agar
20 g.
Azul de metileno
0.03 g.
Agua destilada
1000 mL.
Componentes
Cantidad
cido ctrico
21 g.
K2PO4
28 g.
Agua destilada
100 mL.
24
25