Curs Analiza Medicamentului

Controlul analitic
al medicamentelor
Analiza
medicamentului
Generaliti
Metodele controlului
Motivele controlului - (organoleptice)
- producie ;
- depozitare ;
- comercializare ;
- cercetare/dezvoltare ;
- litigii
Obiectul controlului
- materiile prime ;
- intermediarii ;
- produsul finit ;
- ambalajul
- fizice
- control radioizotopic ;
- controlul proprietilor ;
- separarea componentelor ;
- identificarea componentelor ;
- dozarea componentelor
- chimice
- controlul proprietilor ;
- (separarea componentelor) ;
- dozarea componentelor
- biologice
- (dozarea componentelor)
Metode fizice (controlul proprietilor fizice)

Controlul proprietilor fizice (fr scanarea unei mrimi)
solubilitatea, punct de topire, punct de fierbere, punct de
picurare, interval de distilare, indice de refracie, putere
de rotaie, studiul formei de cristalizare (polimorfism),
vscozitate (dinamic, cinematic, intrinsec etc.),
Controlul proprietilor fizice (cu scanarea cel puin a unei
mrimi fizice sau geometrice)
spectrofometrie optic de absorbie (IR, UV, VIS, AAS),
spectrofotometrie de emisie (Raman, de fluorescen, AES),
difracie de raze X (diferite tehnici), rezonana magnetic
nuclear (NMR), rezonana electronic de spin (ESR),
spectrometrie de mas (diferite tehnici), metode termice de
analiz (TGA, DTA, DSC), specrofotometrie ORD i CD,
Separarea componetelor
- cromatografie (TLC, HPLC, GC)
- electroforez (capilar, CE)
- focalizare izoelectric (IEF)
- izotachoforez (ITP)
- cromatografie electrocinetic micelar (MEKC)
- extracie
- extracie solid (SPE)
- extracie fluid supercritic (SFE)
- recristalizare (fracionat)
- distilare (simpl sau la vid)
- rectificare
- distilare molecular, etc.
Metode fizice i fizico-chimice de control

prezentate n Farmacopeea European
- determinarea poteniometric a pH-lui
- determinarea pH-lui pe baza culorii indicatorilor
- densitate relativ
- indice de refracie
- rotaie optic
- vscozitate
- interval de distilare
- punct (temperatura) de fierbere
- determinarea apei prin distilare

- punct (temperatura) de topire
- punct (temperatura) de picurare

prezentate n Farmacopeea Europeana
- punct de solidificare
- titrare amperometric
- titrare poteniometric
- fluorimetrie
- spectrometrie de emisie atomic (AES, ICP etc.)
- spectrometrie de absorbie atomic (AAS)
- spectrofotometrie de absorbie n infrarou (IR)
- spectrofotometrie de absorbie n ultraviolet i vizibil (UV, VIS)
- cromatografie pe hrtie
- cromatografie pe strat subire (TLC)

- gazcromatografie (inclusiv tehnica head space) (GC)
- cromatografie lichid (LC, TLC, HPLC etc.)
- cromatografie de excludere steric (gel-filtrare)
- electroforez (gel, capilar) (CE)
- pierdere de greutate la uscare
- spectrometrie de rezonan magnetic nuclear (NMR)
- analiza termogravimetric (TGA)
- presiune osmotic / osmolalitate
- determinarea concentraiilor cu electrozi ion-selectivi
- spectrometrie de fluorescen cu raze X (XRF)

- conductibilitate electric
- spectrofotometrie n infrarou apropiat i mijlociu (NIR, IR)

- spectrometrie de dicroism circular (CD)
- spectrometrie de mas (MS)
- carbon organic total
- cromatografie fluid supercritic (SFC)
- tehnici de separare cromatografice
- spectrometrie Raman
- focalizare izoelectric (IEF)
Metode fizice i fizico-chimice de control suplimentare

prezentate n alte lucrri de specialitate
- calorimetrie diferenial cu scanare (DSC)
- analiz termic diferenial (DTA)
- rezonan electronic de spin (ESR , EPR)
- difracie de raze X (diferite tehnici, probe policristaline sau
monocristaline)
- spectrometrie Mssbauer
- extracie solid (SPE)
- cromatografie fluid supercritic (SFC)
- cromatografie electrocinetic micelar (MECC)
- tehnici analitice cu legare specific competitiv (RIA ,
DELFIA , ELISA etc.)
- tehnici tandem (GC/MS , HPLC/MS , HPLC/FTIR etc.)
10
Procedee de control chimic

- reacii de identificare calitativ
- metode titrimetrice de dozare specific a componentelor
- metode titrimetrice de determinare a unor parametri globali
(indice de aciditate, indice de ester, indice de hidroxil, indice
de iod, indice de peroxid, indice de saponificare, substane
nesaponificabile)
- determinarea azotului aminic din amine aromatice primare
- determinarea azotului prin dezagregare cu acid sulfuric
- titrare complexonometric
- determinarea apei
- determinarea aluminiului i calciului n vaccinuri adsorbite
- determinarea fenolului n imunoseruri i vaccinuri

- determinarea proteinelor i acizilor nucleici n vaccinuri cu
polizaharide
- determinarea proteinelor, acizilor nucleici, fosforului,
gruprii O-acetil, hexozaminelor, metilpentozelor, acizilor
uronici, ribozei i acidului sialic n vaccinuri cu polizaharide
- determinarea monoxidului i dioxidului de carbon n gaze
- determinarea monoxidului i dioxidului de azot n gaze

- determinarea oxigenului i apei n gaze
- determinarea dioxidului de sulf n gaze
- determinarea substanelor oxidante
- determinarea proteinelor totale
- determinarea acidului acetic n peptidele sintetice
11
12

- controlul limitelor (amoniu, arsen, calciu, cloruri, fluoruri,
magneziu i alte metale alcalino-pmntoase, metale grele, fier,
plumb, fosfai, potasiu, sulfai, aluminiu, formaldehida, steroli
n uleiuri grase, solveni reziduali, oxid de etilen, dioxan,
N,N-dimetilanilin, acid 2-etilhexanoic)
Procedee ale controlului farmacognostic

- cenua insolubil n acid clorhidric
- indice de umidificare
- apa i esteri strini n uleiuri eseniale
- acizi grasi i uleiuri sicative n uleiuri eseniale
- 1,8-cineol n uleiuri eseniale
- uleiuri eseniale n preparate vegetale
- reziduul uscat al extractelor
13
Secvena operaiilor de control

- prelevarea unei probe (semnificative)
- efectuarea testelor preliminare (deseori organoleptice)

- separarea probei (amestec) n componente individuale
- identificarea componentelor
- determinarea cantitativ a componentelor
- calificarea probei i eliberarea buletinului de analiz
n funcie de problema concret urmrit, etapele
de mai sus sunt parcurse integral sau numai parial
14
Prelevarea probelor
n vederea efecturii
controlului analitic
Prelevarea probelor
15
Probele prelevate pentru identificarea calitativ i determinarea

cantitativ a componentelor produselor farmaceutice trebuie s constituie
o imagine semnificativ a lotului sau a seriei analizate (FR-X)
Noiuni definite i utilizate n FR-X, referitoare la prelevare:

- lot (o cantitate de materie prim, presupus a fi unitar, din
care se obin una sau mai multe serii de produse)
- serie (totalitatea unitilor de produs obinute n condiii
identice, ntr-un singur ciclu de operaii)
- recipient (conine unitile de produs care constituie o serie,
ex. flacoane, fiole, folii, tuburi, cutii, pungi etc.)
- ambalaj (conine recipientele grupate adecvat)
FR-X formuleaz reguli privind prelevarea din:
- depozit
- din farmacii
- din industrie
- din puncte farmaceutice
16
Prelevarea probelor
Acid salicilic (materie prima)
O cantitate precizata: lot
sublimare, acetilare, recristalizare un ciclu de operatii

Acid acetilsalicilic cristalin
Cantitatea obtinuta: serie
comprimare, includere in blister (ex. 10 compr./blist.)

Comprimate grupate intr-un blister recipient
gruparea unui numar de blisrere (ex. 2) intr-o cutie
impreuna cu descrierea produsului
Blistere grupate in aceeasi cutie, impreuna cu

accesorii (ex. descrierea produsului).
ambalaj
Protocoalele de analiza contin reguli specifice privind prelevarea de

proba din unitatile mentionate (lot, serie, recipient, ambalaj)
Prelevarea probelor dintr-un depozit

Prelevarea dintr-un lot:
- probe lichide (omogenizare)
- probe solide sau pstoase
(diferite adncimi)
17
Cantitate: de 4 ori cea

necesar din care:
- 2 pri: proba propriu-zis
- 2 pri: contraproba
Probele/contraprobele: ambalate, sigilate, etichetate

Eticheta cuprinde:
- denumirea produsului
- numrul de ordine al lotului
- proveniena materialului
- data prelevrii probei
- numrul procesului verbal ntocmit
- cantitatea prelevat
- semntura celui care a prelevat proba
Prelevarea probelor dintr-un depozit
18
Prelevarea dintr-o serie (poate fi distribuita in recipiente diferite)

Se preleveaz din recipiente diferite:
prob reprezentativ pentru seria respectiv
Condiiile de prelevare sunt stabilite de productor, n
conformitate cu normativele n vigoare
Cantitatea prelevat din uniti:
- alese aleator
- de 3 ori cea necesar efecturii analizelor
Numrul de uniti (necesar analizei) din serie:
- n corelaie cu monografia individual
- n corelaie cu monografia general a formei farmaceutice
- n corelaie cu monografia metodei de analiz
Prelevarea probelor din farmacii

- identificarea substanei active (la masa de analiz)
- analiza complet (n laborator de control)
Control la masa de analiz
Cantitatea prelevat:
necesar pentru o analiz
Control de laborator
de 3 ori cea necesar pentru
analiz
- 2 pri : proba propriu-zis
- 1 parte : contraprob
Eticheta probelor/contraprobelor ambalate i sigilate conine:

- denumirea unitii respective
- numrul i data procesului verbal
19
Prelevarea pentru controlul produselor din industrie
De 3 ori cea necesar pentru analiz
- 2 prti : proba propriu-zis
20
Prelevare pentru controlul produselor elaborate n farmacii

De 2 ori cea necesar pentru analiz
- 1 parte : proba propriu-zis

21
22
Metode de control al
proprietilor fizice
simple
23
Controlul culorii
Control vizual (Farmacopeea Romn)
substanele solide - examinate fr prelucrare prealabil,
pe o suprafa mat, alb
substanele lichide - examinate n comparaie cu apa sau
cu etaloane de culoare
Etaloane de culoare
- soluie etalon de cobalt (6,5 % CoCl2 n HCl 1 %);
- soluie etalon de fier (5 % FeCl3 n HCl 1 %);
- soluie etalon de cupru (6,5 % CuSO4 n HCl 1%);
- soluie etalon cu dicromat de potasiu (0,55 % K2Cr2O7
n H2SO4 1 %).
Controlul culorii
24
Control optic (n special pentru probe solide)
- determinarea componentelor de culori de baz;

- determinarea spectrului de reflexie
Culoarea unei suprafee se poate exprima (cu aproximaie

bun) ca un amestec, realizat n raport corespunztor, de trei
culori de baz. Prin amestecarea celor trei culori de baz se
poate obine o mulime de nuane diferite. Cele trei culori de
baz se pot stabili convenional.
Unul din convenii (sistemul R.G.B.) se bazeaz pe culorile:
rou ("Red", 700,0 nm), verde ("Green", 546,1 nm) i albastru
("Blue", 435,8 nm).
Exist i alte sisteme, bazate pe alte nuane de baz, de
exemplu sistemul C.I.E.
Determinarea raportului de amestecare a culorilor de baz
se realizeaz cu aparate optice speciale.
25
Solubilitatea
Expresii
convenionale (FR)
Volum de solvent (ml) necesar

pentru dizolvarea a 1 g substan
solid sau 1 ml substan lichid,
la 20 2 oC
foarte uor solubil
cel mult 1 ml
uor solubil
de la 1 ml la 10 ml
solubil
de la 10 ml la 30 ml
puin solubil
foarte puin solubil
greu solubil
de la 500 ml la 1000 m
foarte greu solubil
practic insolubil
mai mult de 10000 ml
Densitatea
Densitatea relativ . . .
. . . raportul dintre masa unui volum de substan i masa unui
oC ( 20 ) (mrimi
volum egal de ap, la 20 oC ( d 20
)
sau
la
4
d4
20
adimensionale)
o
d 20
20
m (subst. 20 C)
m (ap 20 oC)
Densitatea absolut (masa volumic) . . .
. . . masa unitii de volum din substana examinat. n S.I. se

exprim n kg/m3 ; uniti tolerate: g/cm3 ; kg/l
20
mas
volum (20 oC)
26
Densitatea
27
Masurarea densitatii (cu picnometru)

Proba lichida
m0 = masa picnometrului gol ;
mr = masa picnometrului umplut cu lichidul de referinta (r)
m = masa picnometrului umplut cu proba lichida () ; V = volumul picnometrului
dr = densitatea relativa a lichidului in raport cu lichidul de referinta
m r m0 m m0
V
m m0
m m0
r
; dr
m r m0
r m r m 0
Densitatea
Masurarea densitatii (cu picnometru)
Proba solida
m0 = masa picnometrului gol

mR = masa picnometrului umplut cu lichidul de referinta (R)
mS = masa picnometrului cu proba solida introdusa
mSR = masa picnometrului continand proba solida si umplut cu

lichidul de referinta
= densitatea absoluta a probei solide
dR = densitatea relativa a probei solide in raport cu lichidul de

referinta
28
Densitatea
29
Masurarea densitatii (cu picnometru) Proba solida
VS mS m 0
VL R mSR m 0
m R m0
V
VS + VL
R
mS m 0
R
m R + mS mSR m 0
mS m 0
dR
R m R + mS mSR m 0
30
Densitatea
Masurarea densitatii lichidelor (cu balanta Mohr-Westphal)
Putere de rotaie (a planului de polarizare al luminii)

. . . proprietatea substanelor optic active de a roti planul de
polarizare al luminii plan-polarizate. Activitatea optic se datoreaz
asimetriei care se poate manifesta la nivelul:
- molecular (n stare solid, n soluie, n stare gazoas);
- supramolecular (n stare cristalin sau n soluii de
compleci intermoleculari)
Asimetrie la nivel molecular:
- cu un (sau mai muli) atomi cu configuraie spaial "chiral"
("centru de chiralitate") ( n special n cazul atomului Csp3 )
- asimetrie molecular global (fr un centru bine definit de
chiralitate)
- asimetrie alenic
la compui organici
- asimetrie spiranic
- asimetrie atropic
31
Putere de rotaie
(a planului de polarizare al luminii plan-polarizate)
Plan de simetrie
(oglindire)
W
Y
W
Z
enantiomer (+)
enentiomer (-)
Chiralitate molecular cu un singur centru de disimetrie:

o singur pereche de enentiomeri (relaie obiect-imagine n oglind)
32
Putere de rotaie
Omeprazol
(amestec racemic)
Pantoprazol
Esomeprazol
Rabeprazol
33
Putere de rotaie
Omeprazol
atomul de sulf
34
35
Planul de oscilatie al vectorilor intensitatii de camp

electric si magnetic la o radiatie plan-polarizata
Ansamblul de vectori intensitate
camp electric-intensitate camp
magnetic este chiral
Dextrogir Levogir
(D)
(L)
Activitate optica: rotatia planului de oscilatie a
vectorului E in jurul directiei de propagare (axa z)
36
Putere de rotaie
(a planului de polarizare al luminii polarizate)
Reprezentarea schematic a unui polarimetru

F : filtru cu transparen selectiv la l = 589,3 nm
P / A : prisme nicol pentru polarizare / analizare
F1 / F2 : fanta de intrare / ieire a radiaiei polarizate
S : surs de lumin alb
D : detector (senzor) de radiaie

Msura activitaii optice a mediului traversat de lumina
plan-polarizat: unghiul a cu care este rotit planul de
polarizare n jurul direciei de propagare OZ.
Unghiul de rotaie a depinde:
- de lungimea de und a luminii incide ( l )
- de natura substanei chirale ( putere "proprie" de rotaie,
numit i "putere rotatorie specific", [a] )
- de grosimea stratului de material chiral ( d ), traversat de
lumina polarizat
- temperatura materialului chiral
Pentru soluii :
Pentru lichide :
a [a]D c d
20
20
[a]D
37

Unitatea de msur pentru puterea rotatorie specific :
n uniti SI
[a]SI
a(rad)
;
3
d(m) c(kg / m )
(rad)
[]SI
;
3
d(m) (kg/m )
[a ]
[ ]
SI
SI
rad m 2 kg 1
rad m 2 kg 1
n uniti tolerate
a(grade)
[a ]
;
3
d(dm) c(g / cm )
[a] grade cm3 dm 1 g 1
a(grade)
[a ]
;
3
d(dm) (g / cm )
[a] grade cm3 dm 1g 1
38

Conversii ntre cele dou sisteme de uniti:
[a]SI = 5729,578.[a] ;
[a] = 0,17453.10-3.[a]SI
Dac n sistemul tolerat concentraia este exprimat n procente

(m/V, adic grame /100 ml), atunci relaiile de conversie devin:
[a]SI = 57,29578.[a] ;
[a] = 1,7453.10-2.[a]SI
Unghiul de rotaie a se msoar frecvent la lungimea de

und a radiaiei de rezonan a vaporilor de sodiu (linia D a
sodiului, l = 589,3 nm), la temperatura de 20 oC ; n consecin
20
i rotaia specific se exprim pentru aceste condiii: [a]D
39
Putere de rotaie
(a planului de polarizare al luminii polarizate)
Msurarea unghiului de rotaie permite:
- identificarea unei componente chirale n amestec cu
alte componente (nechirale)
- determinarea concentraiei unei componente chirale
n amestec cu alte componente (nechirale)
Substana chiral
Rotaia specific
Mediu (condiii)
de msurare
Riboflavin
-115 ~ -135
NaOH 0,05 M
Acetat de prednisolon
+112 ~ +119
dioxan
Clorhidrat de noscapin
+38,5 ~ +44,0
HCl 0,1 M
Sulfat de morfin
-107 ~ -110
apa
Digoxin
+10 ~ +13
piridin anhidr
Tetraciclin
-260 ~ -280
HCl 0,1 M
40
Presiune osmotic. Soluii izotonice

O manifestare indirect a afinitii moleculelor de solvent fa de
cele ale solutului este tendina solventului de a ptrunde ntr-o
soluie a solutului, micornd astfel concentraia solutului n
soluie.
41
42

Relaia vant Hoff
(pentru soluii diluate, fa de solvent pur)
P = R.T.C n care
P este presiunea osmotic ( Pa )

R este constanta universal a
gazului ideal ( R = 8,311 J/(mol.K) )
C este concentraia de echilibru a
solutului ( exprimat n nr. de moli/m3 )
Forma relaiei vant Hoff, n care apare concentraia molar ( Cm )

a solutului ( exprimat n nr. de moli/dm3 ) este :
P = R.T.Cm.1000
43
Hematiile sunt afectate n mod special de diferena de presiune

dintre compartimentul intra- i extracelular.
ntr-un mediu cu presiunea osmotic mai mic dect cea
din interiorul hematiilor (mediu hipotonic), hematiile se sparg
(fenomenul de numete hemoliz).
Un mediu exterior cu presiunea osmotic mai mare dect
cea a compartimentului interior al hematiilor este hipertonic.
Mediul exterior, care este n echilibru cu interiorul
hemariilor, n sensul c ntre cele dou fee ale membranei
hematiilor nu apare diferen de presiune, este izotonic cu
mediul intern al hematiilor.
44
Toate medicamentele administrate n forma de soluii injectabile sunt

izotonizate, fie la faza de condiionare, fie chiar nainte de utilizare,
cu componente inerte din punct de vedere farmaceutic (cu NaCl ,
glucoz etc.)
La baza calculrii cantitii necesare de compus izotonizant st
urmtoarea observaie (practic): o soluie 0,2308 molar a unui solut
nedisociat este izotonic cu serul sanguin. Rezult c suma
presiunilor osmotice ale componentelor dintr-o soluie izotonic este
egal cu cea a unei soluii n care concentraia unui solut ne-disociat
este 0,2308 mol/litru.
( Cm )i : concentraia molar a
componentei i
qi + 1
(C )i 2 0,2308
i 1
K
qi : numrul fragmentelor (ionice) n

care se disociaz o molecul la
dizolvare

Exemplu
S se calculeze masele de vitamin B1 (mB1 , clorhidrat de
tiamin) i clorur de sodiu ( mNaCl ) necesare pentru a prepara
500 ml ( V = 0,5 l ) soluie izotonic, cu concentraia de 2,5 %
(m/v) n raport cu clorhidratul de tiamin.
2Cl H2O
M = 355,29
mol
q B1 + 1
2
2
45
46
Concentraia molar impus pentru clorhidratul de tiamin este :
2,5
(C ) B1
0,07036
0,1 355,29
Pentru clorura de sodiu :
mol
l
q NaCl + 1
M NaCl 58,45 ;
1,5
2
Rezult :
m NaCl 1,5
0,07036 2 +
0,2308
58,45 0,5
m NaCl 1,7550 g
Dac izotonizarea ar fi fost realizat cu glucoz

(substant care nu disociaz n ioni la dizolvare n ap) n
loc de clorur de sodiu, atunci :
M glucoza 180,16 ;
0,07036 2 +
m glucoz
q glucoza + 1
m glucoz
180,16 0,5
8,1144 g
0,2308
47
48
Exemplu
S se determine masa de clorur de sodiu ( mNaCl ) aflat n 250 ml
soluie izotonic cu urmtoarea compoziie impus :
clorhidrat de morfin . . . . . . . . . . 10 g
bromhidrat de scopolamin . . . . . 0,2 g
clorhidrat de efedrin . . . . . . . . . . 15,0 g
clorur de sodiu . . . . . . . . . . . . . . . 4.( mNaCl ) g

ap distilat ad . . . . . . . . . . . . . . . 1000 ml
Rezolvare
Mase moleculare :
clorhidrat de morfin : 375,84
bromhidrat de scopolamin : 438,32
cloridrat de efedrin : 201,69
clorura de sodiu: 58,45
Concentraiile molare impuse :

clorhidrat de efedrin : 0,07437

Mase moleculare :
Concentraiile molare impuse :

cloridrat de efedrin : 201,69

clorhidrat de efedrin : 0,07437
49
0,2308 0,02661 1,5 0,00046 1,5 0,07437 1,5

58,45 0,25
1,5
m NaCl 0,7661 g
m NaCl
Deci n 250 ml soluie izotonic, n care concentraiile celorlalte

componente sunt impuse, cantitatea de clorura de sodiu este 0,7661 grame.
O soluie apoas de clorur de sodiu (unicul solut), este izotonic cu
eritrocitele umane, dac conine aproximativ 0,9 % m/v NaCl.
m NaCl 1,5
0,2308 ; m NaCl 0,89858 0,9
58,4 0,1
Controlul izotonicitii unei soluii (de exemplu a unei soluii
injectabile) n practic se efectueaz prin teste experimentale,
iar calculele bazate pe relaiile descrise au utilizare mai puin
frecvent.
n vederea controlului izotonicitii unei soluii, se introduce n
soluia studiat o hematie uman sau de iepure i se urmrete,
prin observare la microscop, tendina de umflare sau de
restrngere a acesteia.
Atenie ! Relaia de calcul din FR-X ( pag. 511 )
este greit !
50
51
Metode de separare
aplicate n controlul
analitic al
medicamentelor
52
Metode de separare
- metode de extracie selectiv se bazeaz pe dizolvarea
selectiv a componentelor din amestecul analizat prin alegerea
convenabil a unor solveni potrivii sau a unor condiii de pH
adecvate
- metode cromatografice se bazeaz pe partiia difereniat a
componentelor probei analizate ntre dou medii nemiscibile
(faza staionar i faza mobil), fenomen care determin
mobiliti diferite ale componentelor n faza staionar
- metode electrocinetice se bazeaz pe mobilitatea difereniat

a componentelor chimice posednd sarcin electric (ioni) n
condiii adecvate de cmp electric, aplicat ca atare sau n
combinaie cu pH potrivit (sau cu un gradient de pH)
53
Metode de extracie selectiv (metode mai cunoscute)

- metoda Stas Otto Ogier
- metoda Dragendorff
- metoda Florence
- metoda Street (cu wolframat de sodiu)
- metoda Griffon Le Breton
- metoda Fabre
- metoda Clarke
54
Jean-Servais Stas
(fizician si chimist belgian)
(1813 1891)
Friedrich Julius Otto

(chimist si farmacist german)
(1809 1870)
Ausmittelung der Gifte (1856)
55
Schema de separare dupa Stas - Otto

250 mg proba
+ 10 ml H2O + H2SO4 (pH 1)
Faza Et2O
Extr. 3x5 ml
3
NaOH 0,5 M
Faza H2O
Faza Et2O
Fractia B
Faza H2O
Faza Et2O
Fractia A
Extr. 3x20 ml Et2O
Acidulare cu
5
H2SO4 dil.
Extr. 3x20 ml Et2O
6
Neutralizare cu NaHCO3 10 %
Acidulare cu ac. tartric (pH 4-5)
Faza CHCl3
Fractia C
Extr. 3x20 ml
9
CHCl3
10
Faza H2O
Faza H2O
(Reziduu)
56
Schema de separare dupa Stas - Otto
13
Faza H2O
11
Alcalinizare cu NaOH
3M (pH 11-14)
Faza Et2O
Fractia D
Extr. 3x20 ml Et2O 12

Faza H2O
16
15
Faza Et2O
Fractia E
Extr. 3x20 ml cu amestec

CHCl3 si i-PrOH (3 + 1)
Faza H2O
Fractia F
17
Neutralizare cu H2SO4 dil.

+ NH4OH 6M (pH 11-14)
14
57
Rp. nitrofuranoza (0,23 %), glicerina, alcool cetilic,
polietilenglicol, Me-paraben, Pr-paraben
Dizolvare la cald in amestec acetona - dimetilacetaldehida
3 Agitare cu solutie alcoolica de uree. Filtrare
Filtrat
nitrofuranoza
glicerina
Me-paraben
Pr-paraben
acetona
di-Me-acetaldehida
4
Et2O Reziduu
Filtrare
Filtrat
6
7 Distilare
Distilat
alcool cetilic
9
acetona
di-Me-acetaldehida
Reziduu
compusi de incluziune:
uree + alcool cetilic
uree + propilenglicol
Reziduu de
distilare
nitrofuranoza
glicerina
Me-paraben
Pr-paraben
acetona
(uree)
8
58
Et2O
11
10
Extractie
12
Faza Et2O
Me-paraben
Pr-paraben
Faza H2O
nitrofuranoza
glicerina
(uree)
Determinarea cantitativa prin

spectrofotometrie de absorbtie la
lungimea de unda 375 nm
13
59
Proba primara (comprimat) 1
2
Triturare, dizolvare (apa 50 oC), filtrare
Filtrat
Reziduu
4
Na2CO3
5%
Control metale grele

6
Filtrat
Controlul limitei
de anioni (FR X)
Filtrare
Reziduu
Reziduu
amidon
sulf
excipienti
anorganici
Dizolvare (EtOH 50 oC)

filtrare
5
Filtrat
Evaporare la sec
11
8
Mineralizare
10
Dizolvare
Controlul
anionilor
anorganici
si oxizilor
12
13
Dizolvare
Secventa Stas-Otto
60
Metode de separare cromatografice

Metodele cromatografice de separare a componentelor unui amestec
se bazeaz pe partiia difereniat a componentelor probei analizate
ntre dou medii nemiscibile (faza staionar i faza mobil),
fenomen care determin mobiliti diferite ale componentelor.
Mobilitatea diferit a componentelor se manifest prin deplasare
cu viteze diferite de-alungul suportului cromatografic .
Suport cromatografic:
- hrtie poroas (cromatografie pe hrtie)
- strat subire depus pe un suport plan (TLC)
- coloan umplut cu faza staionar
- tub capilar cu suprafaa intern acoperit cu faza staionar
61
Clasificarea metodelor cromatografice

Criterii de clasificare:
1) dup starea de agregare a fazelor mobil (FM) i

staionar (FS)
2) dup polaritatea fazelor (FM i FS)
3) dup mecanismul de interaciune a componentelor
probei cu FM i FS
1) Dup starea de agregare a fazelor
1.1 Faza mobil gazoas (gazcromatografie, GC)

1.1.1 Faza staionar solid (solid - gaz)
1.1.2 Faza staionar lichid (lichid - gaz)
1.2 Faza mobil lichid
1.2.1 Faza staionar solid (solid - lichid)
1.2.2 Faza staionar lichid (lichid - lichid)
62

2) Dup polaritatea fazelor
2.1 Cromatografie cu faza normal (FS polar, FM nepolar)
2.2 Cromatografie cu faza invers (FS nepolar, FM polar)
Exemple
FS polare : silicagel, oxid de aluminiu, celuloz, Florisil
FS nepolare : diferite tipuri de silicagel silanizat
FM polare : metanol, acetonitril, etanol, ap, tetrahidrofuran
FM nepolare : diclormetan, cloroform, hexan, benzen, toluen
63

3) Dup mecanismul de interaciune a componentelor cu FM i FS
3.1 Cromatografie de adsorbie (adsorbia componentelor pe FS
solid, polar)
3.2 Cromatografie de partiie (partiia componentelor ntre FS i
FM , ambele lichide dar nemiscibile)
3.3 Cromatografie pe rini schimbtoare de ioni (interaciuni
ionice ntre componente i FS rin solid)
3.4 Cromatografie de gel-permeaie (gel-filtrare) (potrivire sau
nepotrivire steric a moleculelor componentelor n cavitile
unui gel - FS - inert; separare dup criteriul volumelor
moleculare)
3.5 Cromatografie de afinitate (interaciuni specifice, de natur
biochimic, ntre componente i FS: interaciuni de tipul
antigen-anticorp, enzim-substrat, enzim-coenzim,
enzim-inhibitor)
Istoric
64
Friedlieb Ferdinand Runge (1795 - 1867)

farmacist i chimist - separri pe hrtie de filtru
"Der Bildungstrieb der Stoffe" (1855)
Mikhail Semenovich Tswett (1872 - 1919) botanist rus
n 1903: separarea componentelor din extract de frunze verzi
FS: Al2O3 si CaCO3 (umplutur polar)
FM: eter de petrol (eluent nepolar)
propune (1906) termenul de "Cromatografie"
Zechmeister (1936): apare prima carte care trateaz cromatogarfia

Egon Stahl (1956): bazele cromatografiei n strat subire (TLC) ;
n 1975 firma "Merck" lanseaz plci cromatografice de performan
Martin & James : bazele teoretice ale cromatografiei ; separarea acizilor
grai
Martin & Singe - n 1952 - premiu Nobel
Cs. Horvath ~ 1960 - cromatografia lichida de performan nalt (HPLC)
65
Friedlieb Fredinand Runge

(1795 - 1867)
Mikhail Semenovich Tswett n 1911

(1872 - 1919)
66
Cldirea Universitii din Varsovia unde M. S. Tswett a

descoperit metoda cromatografic de analiz (1903)
67
Placa memorial cu inscripia:

ntre 1901 1906 n aceast cldire a descoperit
Dr. Mikhail S. Tswett cromatografia
semntura: Chimistii analiti polonezi
68
Laszlo Zechmeister
(1889 - 1972)
Egon Stahl
Umplutura: CaCO3
Eluent: eter de petrol
Separare cromatografic realizat de M.S. Tswett
Noiune important : timp / volum de retenie
69
70
Caracterizarea mobilitii cromatografice a componentelor

- prin distana (xi) parcurs de componenta " i " ntr-un interval de
timp dat (comun pentru toate componente) - n special la
cromatografia n strat subire
- prin timpul necesar (ti - timp de retenie al componentei " i ") pentru
parcurgerea lungimii L a sistemului cromatografic - n special la
cromatografia n coloan
xi
(R F )i
1 ; (hR F )i (R F )i 100
xF
(R M )i lg 1 1
(R )
F i
Literatura de specialitate contine

numeroase valori RF , RM si hRF
pentru substante farmaceutice,
masurate in conditii de executie
specificate.
71

Mobilitatea cromatografic este exprimat prin valorile RF sau RM
RF este,
RM are
RM
prin definiie, mrime pozitiv, subunitar, adimensional
domeniul valorilor (-
, + ) (adimensional)
a fost propus de Bate-Smith E. C. i Westall R. G. C. n 1950
Dependena valorilor RF i RM unei

componente de polaritatea ei
72
- prin distana (xi) parcurs de componenta " i " ntr-un interval de timp dat
(comun pentru toate componente) - n special la cromatografia n strat subire
- prin timpul necesar (ti - timp de retenie al componentei " i ") pentru parcurgerea
lungimii L a coloanei cromatografice
Cromatografie n strat subire cu zona de preconcentrare
73
74
Cromatografie n strat subire bidimensional
75
Separarea TLC a unor analgezice

FRONT (70 mm)
FS: ADAMANT UV 254

FM: CHCl3 / acetat de etil (1 : 1 v/v)
Volum aplicat: 1 ml
Ibuprofen (1 %) ; Rf = 0,57
Naproxen (0,5 %) ; Rf = 0,42
Diclofenac (0,5 %) ; Rf = 0,30
Acid acetilsalicilic (0,5 %) ; Rf = 0,12
Tolmetin (1 %) ; Rf = 0,05
START (0 mm)
Separarea TLC a unor barbiturice

FRONT (73 mm)
FS: ADAMANT UV 254

FM: CHCl3 / acetona (95 : 5 v/v)
Volum aplicat: 1 ml
Tiamilal (0,5 %) ; Rf = 0,69

Tiopental (1 %) ; Rf = 0,65
Hexobarbital (5 %) ; Rf = 0,41
Pentobarbital (1 %) ; Rf = 0,26
Fenobarbital (1 %) ; Rf = 0,18
START (0 mm)
76
Cromatografia cu coloana (umpluta sau capilara)
77
Reprezentarea tipica a unei cromatograme
78
Forma i caracteristicile unui peak cromatografic

Forma unui "peak" cromatografic: curb de distribuie tip Gauss.
C i (t) f(Q v , i , m i ) e
La HPLC :
1 t t 0

2 i
mi
f(Q v , i , m i )
2 Qv i
Forma i caracteristicile unui peak cromatografic
79
t inf 2
t inf 0,850 t 0,5
t b 4
t b 1,700 t 0,5
t e 2 2
t e 1,201 t 0,5
A C(t ) dt 2 Cmax 1,065 t 0,5 Cmax
80
Abaterea de la liniaritate a izotermei de retentie cromatografica
Performana de separare a unui sistem cromatografic

Caracterizarea performanei n raport cu componenta i :
numrul de talere teoretice, Ni , n raport cu componenta
respectiv.
Lungimea sistemului cromatografic L

Ni
HETPi
Hi
81
Valoare mare pentru Ni nseamn eficien bun de separare a

sistemului pentru componenta " i " (n timpul parcurgerii lungimii
L a sistemului, componenta " i "este implicat ntr-un numr mare
de echilibre de partiie)
2
ti
ti
ti
N i 5,55
8

i
(t i )e
(t i )0,5
2
ti
ti
16
4
(t i ) b
(t i )int
82

Eficiena intrinsec (independent de natura componentelor) a
unui sistem cromatografic se exprim prin numrul limit de
talere teoretice (N)
N lim Ni
t
i
Ex.
- n gazcromatografie N este de ordinul 100.000

- n HPLC numarul N este de ordinul 10.000
N depinde de :
- natura FM i FS
- temperatura de lucru
- viteza liniar de deplasare a FM
- lungimea ( L ) parcurs de componente
83
84
Dependena N de viteza liniar de deplasare ( u ) a FM :

ecuaia v a n D e e m t e r
L
B
H A + + Cu
N
u
A,B,C
constante caracteristice
sistemului cromatografic
A : depinde de factorii geometrici ; [ cm ]
B : determinat de difuzie ; [ cm2/s ]
C : determinat de transferul
componentelor ntre FM i FS ; [ s ]
u optim
H minim A + 2 B C
85
J.J. van Deemter
Cromatografie n faz gazoas ( gazcromatografie )

FS - solid ( mai rar ) sau lichid ( mai frecvent )
FM - gaz ( hidrogen, heliu, neon, argon, azot )
n GC se realizeaz :
- separarea ( analitic sau preparativ ) a componentelor
- identificarea calitativ a componentelor pe baza indicilor de retenie
- determinarea cantitativ a componentelor din prob
Variante :
- coloan cu umplutur ( scop analitic sau preparativ )
- coloan capilar ( scop analitic )
Temperatura : 80 250 oC ( la controlul medicamentelor )
Regim de lucru :
- la temperatura constant n timp ( regim izoterm )

- la temperatura variabil n timp ( regim cu programare de
temperatur )
86

Evenimente realizate n coloan :
- separarea componentelor fr descompunerea termic a
acestora ( eveniment tipic )
- descompunerea termic (piroliza) probei n condiii strict
controlate i reproductibile, urmat de decelarea produilor de piroliz
( "amprent de piroliz" )
Faza staionar deseori

este un lichid vscos,
depus n forma de
pelicul subire, pe un
purttor solid, inert, sau
pe peretele interior al
unui tub capilar
87
Cromatografie n faza gazoas ( gazcromatografie )
GP : gaz purttor
DB : debitmetru
Col : coloan de separare
IF : interfa
Red : reductor de presiune

Inj : injector
Det : detector
PD : procesarea datelor
88
89
Gazcromatograf (Agilent Technologies)
90
Gazcromatograf (Varian)
91
Gazcromatograf (National Physical Laboratory - UK)

Indici de retenie
Timpul de retenie al unei componente depinde :
- identitatea chimic a componentei respective
- natura FS
- debitul de gaz purttor
- temperatura coloanei cromatografice
- caracteristicile geometrice ale coloanei i umpluturii
Scop : a se defini mrimi alternative, care . . .
- s depind semnificativ de identitatea chimic a componentei
respective, . . . dar . . .
- s depind n msur minim de ceilali factori
indici de retenie n locul timpilor de retenie
92
93
Indici de retenie
- indice Kovts ( I ) ( E. Kovts , 1958 )
- indice liniar de retenie ( J )
- - - - etc - - Indice Kovts
Observaie : n seria omoloag a n-alcanilor, logaritmul timpilor de
retentie redui ai membrilor seriei variaz liniar cu numrul atomilor
de carbon ( n ) din molecula alcanului, dac msurrile sunt fcute n
condiii identice de lucru
S-a impus (arbitrar) : indicele Kovts al unui n-alcan, cu " n "

atomi de carbon n molecul, s aib valoarea:
Iz = 100.n
Kovts Ervin
ervin.kovats@epfl.ch
94
Cromatografie n faza gazoas ( indici de retentie )

Relatia dintre timpul de retentie si numarul
atomilor de carbon in molecula n-alcanilor
95
96
Indice Kovts
Relatia dintre timpul

de retentie si numarul
atomilor de carbon in
molecula n-alcanilor
(1) Coloana polara SCOT 06

(2) Coloana nepolara SCOT 09
(3) Coloana polara SCOT 06
(cu Carbowax 20M/KOH)
(4) Coloana nepolara SCOT 09

(cu Apiezon L/KOH)
97
AD ED
AB BC
98
AD ED
AB BC
lg(t x t 0 ) lg(t n t 0 )
Ix In
I x 100 n
lg(t n +1 t 0 ) lg(t n t 0 ) I n +1 I n
100
I x 100 n + 100
lg( t x t 0 ) lg(t n t 0 )
lg( t n +1 t 0 ) lg( t n t 0 )

Indice Kovts
Exerciiu
ntr-o coloan gazcromatografic se injecteaz un amestec care
conine n-heptan (C7H16), n-octan (C8H18), n-nonan (C9H20),
n-decan (C10H22), fenacetin. n condiiile separrii indicele
Kovts al fenacetinei este 1250. Semnalul cromatografic al
fenacetinei este situat . . .
a) . . . naintea "picului" heptanului
b) . . . ntre "picurile" heptanului i octanului
c) . . . ntre "picurile" octanului i nonanului
d) . . . ntre "picurile" nonanului i decanului
e) . . . dup "picul" decanului
Rspuns : e
99
100
Indice Kovts al stimulantilor SNC la diferite coloane
Stimulant al SNC
Dexamfetamin
Metilamfetamin
Mefentermin
Fenilpropanolamin
Nicotin
Efedrin
Clorfentermin
Niketamid
Coloan (Apiezon-L/KOH) ; 150 oC

SCOT03
SCOT04
SCOT05
1144,3 1,3
1197,7 1,3
1275,1 1,6
1331,3 1,5
1350,3 2,6
1370,1 2,0
1383,0 2,2
1462,6 3,7
1138,3 1,7
1194,3 1,5
1272,1 0,9
1320,6 2,2
1341,3 2,1
1360,7 1,4
1375,4 1,5
1459,3 0,9
1141,3 2,3
1196,8 2,2
1275,1 2,3
1332,0 3,4
1346,3 2,7
1368,3 2,2
1380,4 1,0
1469,9 2,8
101
Dependenta indicelui Kovts de temperatura

Faza staionar
Stimulant al SNC
Carbowax 20M/KOH
Apiezon-L/KOH
150 oC
190 oC
150 oC
190 oC
Tranilcipromin
1852
1915
1248
1271
Nicotin
1876
1926
1353
1392
Clorfentermin
1916
1950
1380
1422
Modalin
1969
2015
1473
1499
Cipenamin
1976
2022
1419
1456
Fendimetrazin
2009
2057
1475
1505
N-metilefedrin
2022
2108
1405
1437
Efedrin
2072
2179
1358
1400
Pseudoefedrin
2191
2217
1362
1398
Fenilpropanolamin
2212
2295
1339
1369
102

Indice liniar de retenie
t tz
J
+z
tz +1 tz
Notaiile corespund celor din relaia

de definiie a indicelui Kovts.
Exemple de valori ( I ) i ( J )
I
322 K
340 K
359 K
322 K
340 K
359 K
1,2-dimetilbutan
536,0
540,7
537,9
5,247
5,301
5,287
Benzen
636,8
640,3
644,9
6,256
6,299
6,348
3-metil-hexan
676,5
676,0
676,4
6,667
6,672
6,688
Toluen
746,9
752,8
755,8
7,347
7,415
7,459
3-metil-heptan
772,0
772,6
773,0
7,613
7,629
7,646
103
Indici de retenie
Exerciiu
ntr-o coloan gazcromatografic se injecteaz un amestec care
conine metan (CH4), n-nonan (C9H20), n-decan (C10H22), i tri-npropilamin. Componentele se elueaz la urmtorii timpi de retenie :
nonan la 1,8 minute , decan la 6,6 minute , tri-n-propilamina la 3,4
minute , metan (component neretardat) la 0,2 minute. Identificai
domeniile de valori n care se incadreaz indicele Kovts (I) i
indicele de retenie liniar (J) pentru tri-n-propilamin.
a) I < 800 i J < 8,250
b) I : ntre 800 - 900 i J = 8,533
c) I : ntre 900 - 1000 i J = 9,333
d) I : ntre 1000 - 1100 i J = 8,250
e) I > 1100 i J = 8,533
Rspuns : c
104
Indicii de retenie depind ntr-o oarecare msur de temperatura

coloanei. Dependena de temperatura coloanei a indicelui de
retenie Kovts, pentru o component oarecare, este descris
frecvent cu ecuaia Antoine.
B
IT A +
T+C
IT este indicele Kovts la temperatura absolut T, iar A , B i C
sunt constante (independente de temperatur) specifice componentei
n cauz i fazei staionare.
105
Analiza cantitativa cu etalon extern
106
Analiza cantitativa cu etalon intern (I)

SI substanta de interes
IN ingredienti
SD semnal detector
107
Analiza cantitativa cu etalon intern (II)

m EI k EI A*T k EI A*P
mSI k SI A T k SI A P
mSI m EI
k SI A P
k EI A*P
SI substanta de interes
IN ingredienti
EI etalon intern
SD semnal detector
108

Modaliti de analiz cantitativ (etalon intern)
Prin folosirea unui etalon intern, ales adecvat, se pot compensa unele erori
(pierderi) de analiz, efectuate la operaiile de prelucrare prealabil a probei
(operaii de extracii, purificri, diluri, derivatizri, concentrri etc.).
Cerine pentru un etalon intern bun:
- s prezinte proprieti asemntoare cu componentele de interes
din prob (s fie afectate de aceleai tipuri de erori la operaiile de
prelucrare premergtoare injectrii n coloana gazcromatografic)
- s nu interacioneze chimic cu nici una din componentele probei n
condiiile de prelucrare i separare gazcromatografic
- s genereze "peak" cromatografic separat clar de "peak"-urile tuturor
componentelor din prob.
Caz particular de utilizare a unui etalon intern: metoda adaosurilor

Modaliti de analiz cantitativ
109
c) Metoda adaosurilor
Se recomand n acele cazuri n care prezena unei componente (de interes
sau nu) modific sensibilitatea de detectare a unei componente de interes
("efect de matrice") sau eficiena operaiilor de prelucrare prealabil a
probei.
Esena metodei : Se adaug probei cantiti cunoscute din componenta de
interes, afectat de efectul de matrice i se injecteaz amestecurile n
coloana GC. Se reprezint grafic semnalul detectorului (aria), asociat cu
componenta de interes
dependen liniar.
Se extrapoleaz dreapta pn ce intersecteaz axa pe
care sunt reprezentate cantitile adugate. Acest punct de intersecie se
gsete pe semiaxa negativ a axei cantitilor adugate. Cantitatea
corespunztoare segmentului definit de punctul de intersecie i originea
axelor este egal cu cantitatea de component de interes prezent n proba
original.
110
Modaliti de analiz cantitativ (metoda adaosurilor)

Condiie necesar : posibilitatea msurrii unui semnal de detector care se
datoreaz exclusiv componentei de interes ("peak"-ul componentei de
interes s fie separat satisfctor de "peak"-urile altor componente din
prob) (EM=efect de matrice).
111
Tehnici i reactivi de derivatizare n GC

Derivatizare : transformarea chimic, n condiii controlate, a
componentelor probei nainte de injectarea probei
n gazcromatograf
Motivaia:
- prin derivatizarea grupelor funcionale polare
molecule cu
polaritatea diminuat
interaciune mai intens cu faza staionar
(frecvent) nepolar
accentuarea eficienei de separare
- prin derivatizare crete volatilitatea componentelor
volatilizare la
temperaturi mai mici
scade pericolul descompunerii termice
i crete eficiena de separare a coloanei GC
- prin derivatizarea selectiv a unor grupe funcionale se obin deseori
informaii suplimentare despre structura molecular a componentelor
112
Tipuri de reacii implicate (mai frecvent) :

- silanizri
- acilri cu derivai ai acizilor carboxilici
( pe gruparea -NH2 , -NH- sau OH )
- acilri cu acizi boronici
- transformare n O-alchiloxime
113

Derivatizare prin trimetilsilanizare
a) cu clor-trimetil-silan (CTMS) i hexametil-disilazan (HMDS)
Grupe funcionale afectate: -OH , -NH2 , -NHR , -SH
CTMS se utilizeaz n combinaie cu HMDS i cu piridin, n
N,N-dimetilformamid (DMFA) sau dimetilsulfoxid (DMSO).
Separat, nici CTMS, nici HMDS nu are eficiena de silanizare
corespunztoare.
3R-OH + Cl-Si(CH3)3 + (CH3)3Si-NH-Si(CH3)3
(CTMS)
(HMDS)
3R-O-Si(CH3)3 + NH4Cl

b) cu t-butil-dimetil-clorsilan
Grupe funcionale afectate: -OH , -NH2 , -NHR , -SH
[imidazol]
R-OH +
DMFA ; - HCl
Temperatura camerei
Volumul mare al gruprii t-Bu-di-Me-silil permite uneori

silanizarea difereniat a grupelor -OH .
114

Exemplu :
- grupele -OH secundare din poziia 3 i gruparea -OH primar din

poziia 21 se silanizeaz rapid i cantitativ ;
- gruparea -OH ( 20b ) se silanizeaz extrem de greu din cauza mpiedicrii sterice ;
- gruparea -OH secundar din poziia 11 i gruparea -OH teriar din
poziia 17 nu se poate silaniza deloc cu acest reactiv.
115

c) cu N,O-bis -(trimetil-silil)-acetamid (BSA)
BSA este un agent de silanizare eficient pentru gruprile
-OH i -NH2
Un reactiv nrudit cu (BSA) este N-(trimetilsilil)-acetamida

(TMSA), utilizat n special pentru derivatizarea glucidelor.
116

d) cu N-(trimetilsilil)-acetamida (TMSA), utilizat n special
pentru derivatizarea glucidelor.
+ R-OH
( TMSA )
R-O-Si(CH3)3 +
117

e) cu (izopropeniloxi)-trimetil-silan (IPOTMS)
- IPOTMS este un reactiv asimilat mai recent n GC
- IPOTMS este folosit cu succes mai ales pentru silanizarea

acizilor carboxilici, alcoolilor alifatici i fenolilor
- att agentul (IPOTMS) ct i produsul secundar de
reacie sunt volatili
se recomand pentru
silanizarea compuilor hidroxilici volatili (excesul de
IPOTMS i acetona format se ndeprteaz uor)
118

f) cu N-(trimetil-silil)-dimetilamin (TMSDMA)
- TMSDMA este utilizat mai ales pentru silanizarea aminelor
i aminoacizilor
- n prezena (CTMS) (catalizator) se poate folosi i pentru
silanizarea grupelor hidroxilice
119

120
g) cu N-(trimetilsilil)-imidazol (TMSIM)
TMSIM este utilizat mai ales pentru derivatizarea grupelor -OH.

Particulariti:
- n absena catalizatorului, TMSIM nu reacioneaz cu grupri aminice bazice

- n prezena BSA sau TCMS agentul TMSIM devine extrem de eficient chiar i
n cazul grupelor -OH cu mpiedicare steric (din acest motiv se folosete pentru
derivatizarea total a hidroxisteroizilor i a altor compui polihidroxilici)
- TMSIM este agentul de silanizare al compuilor cu grupri -OH care poate fi
utilizat i n prezena apei (de exemplu silanizarea glucidelor din siropuri se
poate realiza chiar la un coninut de 30 % ap n prob)

Derivatizare prin dimetilsilanizare
121
Derivaii dimetil-silil sunt mai volatili dect derivaii trimetil-silil

corespunztori
separarea GC a derivailor dimetil-silil se
realizeaz la temperaturi mai mici
- scade pericolul descompunerii termice a componentelor din prob;
- la temperaturi mai mici crete puterea de separare a coloanei GC
Particulariti:
- dimetilsilanizarea se aplic mai ales n cazul compuilor
polihidroxilici
- derivaii dimetilsilanizai sunt mult mai susceptibili la reacii de
hidroliz dect derivaii trimetilsilanizai
dimetilsilanizarea
se execut n condiii strict anhidre.

Derivatizare prin dimetilsilanizare
122
a) N,O-bis-(dimetilsilil)-acetamid (DBSA)
b) amestec de clordimetilsilan (CDMS) i tetrametil-disilazan (TMDS)

123
Derivatizare prin clormetilsilanizare

Proprietile derivailor (clormetil)-dimetilsilil:
- prezena atomului de clor n compusul derivatizat

detectare la
sensibilitate foarte mare, prin captur de electroni (ECD)
- (clormetil)-dimetilsilil-derivaii au timpi de retenie considerabil mai mari
dect derivaii trimetilsilanizai corespunztori
separare GC mai bun
a componentelor din prob
Reactiv : cloro-(clormetil)-dimetilsilan n combinaie cu bis-(clormetil)tetrametil-disilazan, n piridin sau n N,N-dimetil-formamid drept solvent

Derivatizare prin esterificare (acilri pe atomul de oxigen)
a) cu cloruri acide (reacie Schotten - Baumann)

Alcoolii, fenolii i aminele reacioneaz cu cloruri acide cu
formare de derivai acilai. Dac se utilizeaz clorura unui acid
aromatic, greu hidrolizabil, atunci acilarea se poate realiza chiar
n mediu apos (soluie alcalin, ex. NaOH 10 %).
124

b) cu halogenuri de bor
BX3 + 3R-OH
B(OR)3 + 3HX
( BF3 , BCl3 )
c) cu dialchilacetalii N,N-dimetilformamidei
n gazcromatografie a fost utililzat prima dat de Horning
(derivatizarea acizilor grai i a amino-acizilor)
125

d) cu acizi alchilboronici
Domeniu de utilizare : compui care conin n molecul dou sau mai multe
grupe funcionale (aminoacizi, glucide, catecolamine), dar i n cazurile
probelor cu acizi grai, prostaglandine, sfingozine, steroizi etc.
126

127

128
Compuii ciclici (alchilboronai) - proprieti GC excelente:

- sunt stabili fa de agenii de acetilare, de trimetilsilanizare i de metilare
- reaciile de alchilboronare decurg la temperatura camerei
- raportul molar de utilizare a reactivului de derivatizare este 1 : 1 (sau un mic
exces de acid alchilboronic)
- reacia decurge n cteva minute
Reactivi folosii frecvent :
acid metilboronic ( R = -CH3 ) sau acid n-butil-boronic

Derivatizare prin transformare n O-alchiloxime
Reactivi: O-alchil-hidroxilamine
129
Utilizare: compui carbonilici,

compui hidroxi-carbonilici
Procedeul se utilizeaz pentru derivatizarea cetosteroizilor i a

derivailor de prostaglandine
n cazul n care molecula de interes conine grupare cetonic i

grupare -OH , gruparea cetonic se transform n prealabil n
O-alchil-oxim (de exemplu n cazul aldolilor / cetolilor)
130
131
Anaesthetics (GC-packed column)

Column: 4 m x 2 mm I.D. glass
SF: 3 % SE-30 , Chromosorb W HP 100/120
T: 160 oC to 260 oC ( 6 oC/min )
Carrier gas: N2
Detector: FID
1) Benzocaine
2) Lidocaine
3) Procaine
4) Oxyprocaine
5) Tetracaine
6) Oxybuprocaine
7) Cinchocaine
Separation of TMS-derivatives of steroids (capillary GC)
132
1) androsterone ; 2) etiocolanolone ; 3) dehydro-epiandrosterone ; 4) dS-androstene-3b, 17bdiol ; 5) 11-keto-etiocolanolone; 6) oestradiol ; 7) 11-hydroxy androsterone ; 8) 11-hydroxyetiocolanolone ; 9) epiprednonalone ; 10) 16-a-OH-dehydro-epiandrosterone ; 11) allopregnanediol ; 12) pregnanediol ; 13) pregnanetriol ; 14) 16-keto-androstenediol ; 15) dS-androstene-3b,16a, 17b-triol ; 16) & 17) by-products ; 18) 17-keto-pregnanetriol ; 19) 16a-OH-pregnenolone ; 20) pregnene-3b, 17a, 20a-triol ; 21) tetrahydrocortisone ; 22) tetrahydrodioctylphtalate ; 23) tetrahydrocorticosterone ; 24) tetrahydrocortisol ; 25) allotetrahydrocortisol ;
26) a-cortolone ; 27) b-cortolone ; 28) choloesterol ;
29) a-cortol ; 30) methyldesoxycholate (I.S.)
Column: 25 m x 0.22 mm
SF: CP-Sil 5 (0.12 mm)
T: 100 oC to 210 oC in 25 min
then 1.5 oC/min to 265 oC
Carrier gas: He
Detector: FID
Cromatografie cu faza mobil lichid

FS - solid (mai rar) sau lichid (mai frecvent)
FM - lichid (solvent unic sau amestec de solveni)
n cromatografia lichid se realizeaz :
- separarea (analitic sau preparativ) a componentelor unei probe
- identificarea calitativ a componentelor pe baza mobilitii cromatografice (timp de retenie, valoare RF sau RM etc.)
- determinarea cantitativ a componentelor din prob
Variante :
- FS n forma de strat subire, ntins pe un support plan (TLC)
- coloan cu umplutur (scop analitic sau preparativ)
Regim de lucru :
- cu compoziie constant n timp a FM ( regim "izocratic" )
- cu compoziia variabil n timp a FM ( regim cu "gradient" )
133
134
Cromatografie n strat subire (Thin Layer Chromatography - TLC)

. . . este tehnica citat frecvent n Farmacopeea Romn i n cele ale
altor ri (inclusiv Farmacopeea European).
Avantaje :
- rezoluie bun (mai ales cu variantele actuale, performante);
- posibilitatea analizrii mai multor probe n condiii strict identice;
- posibilitatea separrii "bidimensionale" a componentelor din prob;
- se realizeaz prin operaii simple (nu necesit specializare deosebit);
- literatura de specialitate conine multe informaii privind condiiile de
lucru
- dotarea cu tehnica TLC nu presupune efort financiar deosebit
Stratul subire (FS):
- silicagel
- oxid de aluminiu (Al2O3) cu umiditate controlat
- celuloz
- acetat de celuloz
135
Tipul de interaciuni cu FS (i cu FM) n care sunt implicate

componentele probei :
- adsorbie pe suprafaa solid a FS (cromatografie de adsorbie);
- partiia ntre dou faze lichide nemiscibile

(cromatografie de partiie);
- potrivire / nepotrivire steric a moleculelor componentelor
cu cavitile FS (cromatografie de gel-permeaie / cromatografie
de gel-filtrare / cromatografie de excludere steric);
- interaciuni ionice (cromatografie cu rini schimbtoare de ioni);
- interaciuni specifice de tip biochimic
(cromatografie de afinitate)
136

Identificarea / vizualizarea componentelor pe placa cromatografic :

- prin mrimile RF i RM (vezi la partea general a metodelor
cromatografice);
- prin rzuirea spotului, urmat de extracia componentei i
identificarea prin metode fizico-chimice (ex. IR);
- prin stropirea plcii cu reactivi de culoare, universale sau
specifice componentelor;
- prin modificarea fluorescenei stratului subire
( ex. plci cu indicativul F254 )
. . . etc. . . .
137

TLC cu presiune (Overpressure Thin Layer Chromatography - OPTLC)
Eluentul trece prin stratul subire a FS datorit presiunii de aprox. 25 atm.

- realizarea mult mai rapid a separrii
- separri mult mai performante comparativ cu TLC obinuit
14 componente separate
138
OPTLC

Cromatografia lichid de performan, la presiune nalt
(High Performance Liquid Chromatography - HPLC)
Faza staionar :
- solid (mai rar) sau lichid (mai frecvent)

- deseori fixat chimic de un suport inert
Faza mobil :
- lichid
- presiune: 80 - 300 atm
- debit FM: 0,8 - 2,0 ml/min.
Date tipice ale coloanelor HPLC :

- lungime 15 - 25 cm
- diametru interior: 3 5 mm
- diametrul particulelor : 5 - 20 m
Performan : uneori comparabile cu cea a GC
Natura FS : - faza staionar polar = HPLC cu faza direct (DP)
- faza staionar nepolar = HPLC cu faza invers (RP)
139
140
Cromatografia lichid de
performan, la presiune
nalt (HPLC)
( Horvth Csaba - printele
metodei analitice HPLC )
1966 realizarea tehnicii
HPLC
1970 recunosterea
potentialului analitic deosebit
al fazei stationare inverse
(nepolare)
Horvth Csaba
(1930 - 2004)
Cromatografie cu faza mobil lichid - HPLC
Reprezentarea
schematic a unui
sistem HPLC
141
Cromatografie cu faza mobil lichid - HPLC
142

HPLC
143
Mrimi derivate caracteristice n HPLC

Factor de capacitate
t
i
0
k 'i
t0
Factor de separare
k 'j
i, j
1 ; ( k 'j k i' )
k i'
Rezoluie
R i, j
t0 timpul de retenie al
componentei neretardate
1,18 (t j t i )
t 0,5; j t 0,5;i
t 0,5;i reprezint limea "peak"-lui nr. " i " la semi-nlime

(exprimata ca interval de timp)
144

HPLC
Derivatizarea componentelor din prob
Scopul :
- modificarea (frecvent reducerea) polaritii moleculelor
- obinerea diastereoizomerilor unei perechi de enantiomeri n
vederea rezolvrii unui amestec racemic n antipozi optici
- introducerea unui cromofor cu scopul detectrii optice a unei
componente
Exemplu : derivaii acizilor grai saturai prezint absorbie slab
chiar n domeniul spectral UV. Prin derivatizare se introduce n
molecul un cromofor
absorbie puternic n domeniul optic
ultraviolet
detectare convenabil.

HPLC
a
Rolul eterului coroan:
solvatarea puternic a ionilor
metalelor alcaline
se
accentueaz mult solubilitatea
srii alcaline a acidului carboxilic n solventul aprotic
(acetonitril)
145
146

HPLC
Faza staionar n HPLC : silicagel sau material polimer (purttor)
cu suprafaa derivatizat. n urma derivatizrii
suprafa cu
proprieti modificate (hidrofobicitate / hidrofilicitate modificat)
150 - 250 oC
3 - 8 ore
+ HO-R
- H2O
+ H2N-R
+ SOCl2
- SO2
- HCl
- HCl
147
Conditii
anhidre
- HCl
Conditii
anhidre
- HCl
+ H2O
- HCl
+n
+ H2O
- (n+1) HCl
148
Gruparea Si-NH-R este stabil la hidroliz ns cea mai stabil grupare este
Si-O-Si-R . Faza staionar modificat n aceast manier, utilizat cel mai
frecvent, este aceea n care R este un rest octadecilic:
Si-O-Si(CH3)2-(CH2)17-CH3
Aceast faz staionar este foarte nepolar.
Alte grupri legate de support :
Octadecil
-(CH2)17-CH3
Aminopropil
-(CH2)3-NH2
Octil
-(CH2)7-CH3
Alchilamino
-(CH2)n-NH2
Hexil
-(CH2)5-CH3
Nitro
-NO2
Dimetilsilil
-Si(CH3)2
Nitril
-CN
Trimetilsilil
-Si(CH3)3
Alchilnitril
-(CH2)n-CN
Ciclohexil
-C6H11
Propionitril
-CH2-CH2-CN
Fenil
-C6H5
Oxipropionitril
-O-CH2-CH2-CN
Dimetilamino
-N(CH3)2
-CH(OH)-CH(OH)-
Amino
-NH2
Hidroxi vicinal
(diol)
149
HPLC
Alte tipuri de faze staionare :
- copolimer stiren - divinilbenzen ;

- rini schimbtoare de ioni ; oxid de aluminiu ;
- agaroz ; silicat de magneziu ; grafit poros ;
- gel de hidroxi-metacrilat ; sticl poroas ; hidroxiapatit ;

- grafit cu suprafaa procesat chimic
. . . etc. . . .
150
HPLC
Faze mobile utilizate n HPLC

Seria eluotrop a solvenilor (ordinea cresctoare a polaritii)
utilizai frecvent n HPLC :
Miscibil cu
ap . . .
Limita spectral
de utilizare (nm)
Vscozitate la
20 oC (cP)
Hexan
nu
190
0,31
Izooctan
nu
190
0,50
Tetraclorur de carbon
nu
263
0,97
Cloroform
nu
245
0,57
Diclormetan
nu
233
0,44
Tetrahidrofuran
da
212
0,55
Dietil-eter
nu
218
0,23
slab
256
0,45
Solvent
Acetat de etil

151
HPLC
Faze mobile utilizate n HPLC Seria eluotrop a solvenilor (continuare)
Solvent
Miscibil cu ap . . .
Limita spectral
de utilizare (nm)
Vscozitate
la 20 oC (cP)
Acetat de etil
slab
256
0,45
Aceton
da
330
0,30
1,4-dioxan
da
215
1,32
Acetonitril
da
190
0,37
2-propanol
da
190
2,30
Metanol
da
190
0,60
Ap
da
190
1,00
Acid acetic
da
1,22
Solvenii utilizai cel mai des n HPLC cu faz invers (hidrofob) : tetrahidrofuran,
acetonitril, metanol, ap, soluii tampon cu pH potrivit
n cazul FS polare (faz direct) nu se utilizeaz solveni polari (apa nici chiar n urme!)
deoarece poate dezactiva ireversibil FS (n special silicagelul nederivatizat)
152
Separarea HPLC a unor antibiotice
1) Amoxicilin
2) Benzilpenicilin
3) Feneticilin (sarea de sodiu)
4) Flucloxacilin (sarea de potasiu)
Coloana ChromSep; FS: C18

FM: 0,02 M Na2HPO4 (pH 3,3) + MeOH (70:30)
Debit: 0,8 ml/min.
153
Compararea separarii HPLC in regim izocratic si cu gradient
Analiza HPLC a puritii Aceclofenacului ( Ph. E. ed. V )

C
O
NH
Cl
Cl
COOH
154
Faza staionar : C18 (5 m, pori de 10 nm)

Faza mobil : (A) tampon fosfat cu pH 7,0
(B) acetonitril : ap (9 : 1 ; v/v)
Detectare : 275 nm ; Debit : 1 ml/minut
Aceclofenac
timp
A
(min) (% v/v)
B
(% v/v)
0-25 70
50 30
50
25-30 50
20 50
80
30-50
20
50-52 20
52-65
80
70 80
70
30
30
Analiza HPLC a puritii Aceclofenacului ( Ph. E. ed. V )
155
COOH
O
NH
O
NH
Cl
Cl
Cl
Cl
Cl
C O
N
O
NH
(I)
Aceclofenac
Cl
Cl
Cl
( II )
( III )
(1) (I) R : H
(2) Aceclofenac
(3) (II) R : -CH2-COOH
(4) (II) R : -CH2-COO-CH2-COOH
(5) (III)
(6) (II) R : -CH3
(7) (I) R : -CH3
(8) (II) R : -C2H5
(9) (I) R : -C2H5
(10) (II) R : -CH2-C6H5
Determinarea selectiva a impuritatilor de acridona in

Carbamazepina prin suprimarea semnalului Carbamazepinei
(Carter)
156
157
Determinarea selectiva a impuritatilor de acridona (A)

in Carbamazepina (C) prin suprimarea semnalului
Carbamazepinei (Carter)
Din spectrul Carbamazepinei: eC(256) = eC(307)

in timp ce pentru acridon eA(256) eA(307)
S(256 ) d eC (256 ) CC + e A (256 ) CA
S(307 ) d eC (307 ) CC + e A (307 ) CA
S(256 ) S(307 ) d CC eC (256 ) eC (307 ) +

+ d C A e A (256 ) e A (307 )
S(256 ) S(307 ) d CA e A (256 ) e A (307 )
158
159
Separarea enantiomerilor Bendrofluometiazidei.
160
Controlul puritii Esomepromazolului prin HPLC chiral
Coloana: 10x0,4 cm ; FS: a1-AGP;
FM: fosfat de sodiu (60 mM, pH 6,0) + acetonitril (85:15)
Detectare: 302 nm ; Debit: 1 ml/min.
161
Rezoluia chiral a Ibuprofenului

Coloana: 25x0,46 cm
FS: polara si chirala Whelk-01
FM: C6H14 + i-PrOH + Ac. acetic
(98:2:0,5)
Debit: 0,9 ml/min.
k1 = 1,13 ; k2 = 1,40 ; a12 = 1,24
162
Separarea enantiomerilor
Clortalidonei
Colana Chiurobiotic T (FS nepolara)

F.M.: MeOH + H2O (20:80)
Debit: 1 ml/min
Temp.: 50 oC
Separarea enantiomerilor Naproxenului

dintr-un amestec neechimolar (R : S = 3 : 7)
Coloana (25x0,46 cm) cu FS polara (S,S)-ULMO
FM: C7H16 + PrOH (90:10) + 0,1 % acid trifluoracetic
kR = 1,54 ; kS = 2,065 ; aRS = 1,34
163
164
Rezoluia enantiomerilor
Bendrofluometazidei
Colana Chiurobiotic T (FS nepolara)

F.M.: MeOH + H2O (20:80)
Debit: 1 ml/min
Temp.: 50 oC
Separarea enantiomerilor i
diastereoizomerilor Bemetizidei
165
Coloana: Chiracel OD-RH
FM: acetonitril + apa (35:65)
Temperatura: 25 oC

Cromatografia de gel-permeaie (gel-filtrare)
166
Gel Permeation Chromatography (GPC) - sortarea mecanic a

moleculelor din prob dup dimensiunile lor n soluie
Utilizare : mai ales pentru separarea componentelor cu molecule mari

(oligomeri, macromolecule): proteine (anticorpi, toxine,
enzime), peptide, oligo- i polizaharide etc.
Mecanism de interaciune cu FS : n cazul ideal interaciunile fizicochimice dintre FS i componentele probei sunt neglijabile
Singurul factor de separare: potrivirea / nepotrivirea unor molecule
n cavitile FS
Molecule mai voluminoase
mobilitate cromatografic
mai mare

167
V0 - volum interstiial
VT - volum liber total
(accesibil moleculelor)

168
ntr-o prim aproximaie: volumul molecular este proporional cu

masa molecular relativ ; din acest motiv se afirm c n cromatografia de gel-permeaie componentele sunt separate n funcie de
masa molecular relativ a lor
Derularea separrii se poate exprima prin timpul de retenie sau prin
volumul de retenie. n GPC deseori se utilizeaz volumul de retenie
(volumul de FM care a prsit coloana pn n momentul ieirii unei
componente din coloan). Dac componentele probei nu sunt implicate
n interaciuni specifice cu FS (separarea are loc strict dup criterii de
potrivire steric), atunci se verific relaia :
VT > V > V0
n care V este volumul de retenie al componentei care are masa
molecular relativ egal cu

169
ntre moleculele probei, unele au volumul (masa molecular relativ

M) suficient de mare pentru ca s nu se potriveasc n nici una dintre
cavitile gelului. Toate moleculele care au volumul molecular egal
cu sau mai mare dect acest prag, elueaz la volumul de eluie
egal cu V0.
ntre moleculele probei, unele au volumul (masa molecular relativ
m) suficient de mic pentru ca s se potriveasca n toate cavitile
gelului. Toate moleculele care au volumul molecular egal cu sau
mai mic dect acest prag, elueaz la volumul de eluie egal cu VT.
Dac o component (notat prin X) are volumul de retenie mai

mare dect VT , nseamn c aceasta este implicat n interaciuni
specifice cu faza staionar (fenomen nedorit n cromatografia de
gel-filtrare).
170

VT > V > V0
VM > V > Vm
n cazul n care separarea are

loc strict dup criterii sterice,
un anumit gel (cu o anumit
extindere a dimensiunilor
cavitilor) poate separa
molecule cu volum molecular
(i implicit cu mas molecular) cuprins ntre o limit
superioar (LS) i o limit
inferioar (LI)

171
Cromatografia de gel-permeaie se utilizeaz i pentru determinarea masei

moleculare a unor molecule mari, cazuri n care alte metode nu pot fi
utilizate
Migrarea unei componente se caracterizeaz prin capacitatea de reinere
(K) sau prin coeficientul de distribuie al coloanei [ (Kd) ] , date
referitoare la componenta n cauz (avnd masa molecular ) :
V V
0
K
V
0
V V
V V
0
0
(K d )
V
VT V
0
pori
Vpori reprezint volumul fazei staionare

(Kd) reprezint fraciunea din volumul fazei staionare care este
disponibil pentru componenta cu masa molecular relativ .

172
n practic este greu de determinat volumul fazei staionare Vpori .

Din acest motiv este mai convenabil utilizarea constantei (Kav)
(constanta de "disponibilitate" " availability constant " referitoare
la componentele cu masa molecular relativ m).
V V
0
(Kav )
V V
0
col
Vcol reprezint volumul interior al coloanei, volum egal cu suma

volumelor spaiului interstiial, porilor i miezului solid:
Vcol = Vsolid + Vpori + V0

(Kav) reprezint fraciunea din volumul umpluturii colanei,
disponibil componentei cu masa molecular relativ .

n cazul unui gel dat, raportul
(K av )
173
este independent de natura
(K )
d
sau de concentraia componentei (cu masa molecular ). n cazul
componentelor care nu manifest interaciuni specifice cu gelul
(numai interaciuni sterice), se verific inegalitatea 0 < (Kav) < 1
Pentru gelurile comerciale se dau curbele de selectivitate

(dependena constantei Kav de lg ).
Substane utilizate drept faz staionar (gel) : agar-agar, acetat
de celuloz, copolimeri (stiren - divinilbenzen), polimeri
(poliacrilamid, alcool polivinilic, polistiren, polimetacrilat),
dextran, proteine globulare, silicagel hidratat etc.
Separarea gel-cromatografic
a unor enzime
1: glutamat dehidrogenaza
(290.000 Da);
2: lactat dehidrogenaza
(140.000 Da);
3: enolaz kinaza (67.000 Da);
4: adenilat kinaza (32.000);
5: citocrom C (12.400)
174
175

Purificarea crotaminei din
veninul de arpe (200 mg de
venin de Crotalus durissus
terrificus)
Gel: Sephadex G-100 (2,5x85
cm);
Faza mobil: tampon formiat de
amoniu (pH 3,0)
1: convulxin; 2: gyroxin;
3: crotoxin; 4: crotamin
Gel: Dextran (coloana ZORBAX FG-250
176
Separarea proteinelor prin

cromatografie de gel-filtrare
1. IgM de oarece
(M = 900 kDa);
2. Tiroglobulin bovin
(M = 670 kDa);
3. b-amilaz din cartofi
(M = 200 kDa);
4. Seralbumin bovin
(M = 67 kDa);
5. Albumin aviar
(M = 45 kDa)
6. Ribonuclez bovin
(M = 13,7 kDa);
7. Azid de sodiu
(M = 0,067 kDa)
Eluent: NaCl (130 mM) + Na2HPO4 (50 mM) ; pH: 7,0 ; Debit: 1 ml/min.

177
Relaia dintre logaritmului

masei moleculare i volumul
de eluie la cromatografia de
gel-permeaie.
Curbele individuale sunt
trasate cu fracii de polistiren
avnd mase moleculare
diferite.
Cele 7 curbe se refer la
geluri cu diametru diferit de
pori (exprimate n uniti ).

178
Cromatogramele suprapuse
ale dextranilor avnd mase
moleculare diferite.
1. Dextran-50 (43,5 kDa)

179
Cromatograma unei probe de dextran

avnd componente cu grade diferite
de policondensare (molecule
coninnd un numr variabili de
meri). Masa molecular medie a
amestecului este 1000 Da. Separarea
este realizat pe un gel de tipul
Sephadex peptid HR
(T. Anderson i colaboratorii:
J. Chromatography 1985:326, 33)
180
Cromatografie pe rini schimbtoare de ioni . . .

. . . este o tehnic performant de separare a compuilor anorganici sau
organici care, n condiiile de lucru, manifest caracter ionic (posed
sarcin electric).
Faza staionar :
rini (stare solid) n form de particule, care posed pe suprafaa lor
grupri chimice ionizabile, legate chimic ( SO3H ; PO3H2 ;
NH2 ; NR2 etc.). Gruprile pot schimba starea lor de ionizare n funcie
de pH-ul sau tria ionic a fazei mobile.
Mecanism de interaciune :
- interaciuni electrostatice ntre speciile ionice din prob i gruprile

ionizate legate pe suprafaa particulelor de rin
- echilibre de schimb ionic
- efect salin primar i interaciuni de solvatare
Cromatografie pe rini schimbtoare de ioni
181
Rinile schimbtoare de ioni se clasific :

- dup natura speciilor ionice schimbate
- cationii (schimb cationi; grupele ionizabile, legate chimic de
rin, au sarcina electric negativ)
- anionii (schimb anioni; grupele ionizabile, legate chimic de
rin, au sarcina electric pozitiv)
- dup tria acid (bazic) a gruprilor ionice legate de rin
- cationit / anionit tare
- cationit / anionit slab
Un cationit este n " forma H " dac ionul reinut pe suprafaa lui (prin interaciuni electrostatice cu gruprile legate chimic de rin) este protonul, H+. Dac
acest ion este dislocat din vecintatea grupelor legate de rin cu ali ioni, de
exemplu cu Na+, atunci cationitul este n " forma Na ".
Un anionit este n " forma OH " dac ionul reinut pe suprafaa lui (prin interaciuni electrostatice cu gruprile legate chimic de rin) este ionul OH . Dac
acest ion este dislocat din vecintatea grupelor legate de rin cu ali ioni, de
exemplu cu Cl , atunci anionitul este n " forma Cl ".
182
Ionii (A) imobilizai n

zona de imobilizare se pot
schimba cu ioni (B) n
funcie de preferina
grupelor de funcionale
(F) fa de cei doi ioni i
n funcie de condiiile
chimice din faza lichid
(pH, trie ionic, etc.)
183
Eluarea secveniala a
diferiilor cationi sub
aciunea progresiv
cresctoare a concentraiei
eluentului (acidul HX)
Exemplu :
184
Ionii Na+, prezeni n soluie,

disloc protonul din gruparea
sulfonic a rinii i sunt fixai,
prin fore electrostatice, n sfera
de solvatare a anionului sulfonat.
Protonul trece n soluie n forma
disociat (electrolit tare).
Procesul este reversibil.
Echilibrul nu este deplasat predominant ntr-un anume sens.

Dac n urma dislocrii protonului, acesta trece n soluie n
forma de electrolit slab (concentraia de H+ mic), atunci
echilibrul este deplasat spre
" forma Na " a rinii.
Exemplu :
185
Dac rina aflat n "forma Na"

este plasat ntr-o soluie cu
concentraie destul de mare a
ionilor de K+ (electrolit tare),
atunci ionii Na+ din sfera de
solvatare a anionului sulfo-nat
pot fi dislocai (proces reversibil)
de ionii de K+. Rina aflat n
"forma K" sau n "forma Na" se
poate transforma din nou n
"forma H" dac este introdus
ntr-un mediu cu concentraia
suficient de mare a ionilor H+
(nu n ap distilat, deoarece aici
concen-traie ionilor H+ este
mic, de ordinul de mrime 10 7
mol/l la 22 oC).
186
Gruparea ionizabil activ, legat chimic de rina de tip cationit, poate fi

alta dect sulfonic, de exemplu poate fi grupare carboxilic. Avnd n
vedere faptul c acizii carboxilici sunt acizi mai slabi dect acizii sulfonici
(acizii carboxilici disociaz n msur mai mic dect acizii sulfonici),
n " formele H " protonul din sfera de solvatare a gruprii sulfonice este
disociat n msura mai mare dect protonul din sfera de solvatare a gruprii
carboxilice.
187

Exemplu :
Un anionit este capabil s schimbe anionul reinut n sfera de solva-tare
a grupei active (un cation cu sarcina electric pozitiv) cu un alt anion,
aflat la concentraie suficient de mare n mediul cu care rina este n
contact.
Anioniii au gruparea activ cu caracter bazic (n
funcie de tria bazic a
grupei active, anionitul
poate fi tare sau slab).
Rinile schimbtoare de
ioni rein ionii n mod difereniat.
188
Cteva rini schimbtoare de ioni ( I )

Cationit
Structura rinii
Gruparea ionogen
Amberlit IR-100
Amberlit IR-105
Amberlit IR-112
Amberlit IR-120
fenolic
-OH ; -CH2-SO2OH
copolimer stiren - DVB
-SO2OH
Zeo-Carb 215
fenolic
-OH ; -CH2-SO2OH
Zeo-Carb 225
copolimer stiren - DVB
-SO2OH
Amberlit IR-50
polimer de acid metacrilic -COOH
Zeo-Carb 216
fenolic
Sephadex SE-25
Dextran
Sephadex CM-50
-OH ; -COOH
-O-CH2-CH2-SO2OH
189
Cteva rini schimbtoare de ioni ( II )

Anionit
Amberlit IRA-400
Amberlit IRA-410
Structura
rinii
Gruparea ionogen
copolimer
+
stiren - DVB -N R3
-OH ; grupare amino pe
nucleu aromatic
Amberlit IRA-4B
fenolic
Amberlit IR-45
copolimer
stiren - DVB -N(C3H7)2
Sephadex DEAE A-25 Dextran
-O-CH2-CH2-N(C2H5)2
190
Schema unei instalaii simple

pentru separare cu coloan
umplut cu rin
schimbtoare de ioni.
Montajul asigur acoperirea
n permanen a rinii cu
eluent.

Instalatie de cromatografie ionica
191

Izolarea acizilor slabi (organici) dintr-un amestec ( I )
Acizii slabi (organici, R-COOH), datorit gradului de ionizare redus, sunt
reinui din soluii apoase sau alcoolice numai pe rini anionice puternic
bazice, de pe care se elueaz cu soluia unui acid puternic
( X H+ , de exemplu acid clorhidric n etanol sau acid acetic ), cu grad de
ionizare avansat.
Exemple n acest sens : derivaii acidului barbituric, acidul salicilic, acidul
acetilsalicilic, salicilamida, teofilina, teobromina etc.
192

Izolarea acizilor slabi (organici) dintr-un amestec ( II )
193
194
Izolarea bazelor organice dintr-un amestec ( I )

Bazele organice sunt reinute pe rini cationice puternic acide. Eluarea lor
de pe rin se realizeaz concomitent cu regenerarea rinii folosind soluii
diluate de acizi minerali.

Izolarea bazelor organice dintr-un amestec ( II )
Bazele organice mai pot fi eluate cu soluii diluate de hidroxid de sodiu
sau cu amoniac n solveni organici (ex. alcooli).
Exemplu : izolarea alcaloizilor din produse vegetale
195
Separarea bazelor organice

din srurile lor formate cu
acizi tari (sulfat de chinin,
clorhidrat de efedrin etc.).
196
197

Separarea bazelor organice din srurile lor formate cu acizi slabi
(maleat de prometazin etc.).
198
Separarea amestecurilor de alcaloizi (amestec de morfin i codein)

Separarea unui alcaloid de alte principii active
199

Separarea glucidelor ( I )
Glucidele formez cu acid

boric compleci ionizabili
Proiectia Fischer
a moleculei de
glucoza
200
201
Separarea glucidelor ( II )
Acid boric 0,005 M

Complexul zaharozei
Acid boric 0,02 M
Complexul fructozei
Acid boric 0,03 M
Complexul glucozei
202

Determinarea efedrinei (sulfat) dintr-un sirop
203

Ordinea de elutie a anionilor de pe un anionit
densitate de sarcina
AcO-
OH-
F-
Cl-
NO
NO2
NO3-
SO4 -
SO3
2-
200

Ordinea de elutie a cationilor de pe un cationit
densitate de sarcina
K+
Na+
Li+
Ag+
Zn
2+
Al
3+
205

Ordinea de elutie acizilor si bazelor de pe un anionit
respectiv de pe un cationit
Anionit
taria acida
Cationit
taria bazica
206
Separarea unor anioni
Coloana: Waters IC-Pak Anion HC

Eluent: borat/gluconat
Debit: 1 ml/min
Detectare: conductometrica
207
Metode de
spectrometrie optic
Spectrofotometrie
Generaliti
208
Esena metodelor de spectrometrie optic :

- descompunerea spectral a unei radiaii emise de proba
- modificarea spectrului unei radiaii electromagnetice ca urmare a
trecerii acesteia prin prob
Clasificarea metodelor : - spectrofotometrie de absorbie optic
- spectrofotometrie de emisie optic
- spectrometrie de fluorescen / Raman
- spectrometrie de rotaie optic (ORD)
- spectrometrie de dicroism circular (CD)
Mecanismul de generare a spectrelor la nivel molecular / atomic :
- tranziii electronice ntre strile staionare (cuantificate) ale

moleculelor sau ale atomilor
- tranziii ntre strile staionare de vibraie ale moleculelor
209
Obiective urmrite :
- identificarea unei componente chimice pe baza ntregului spectru
- determinarea cantitativ a unei componente pe baza unor
caracteristici locale ale spectrului probei
- depistarea i studierea cantitativ a unor echilibre chimice
Modul de manifestare a interaciunii radiaiei cu proba :
- absorbie
- emisie
UV-A : 320 400 nm
- fluorescen
Domeniul spectral implicat :
UV-B : 280 320 nm
UV-C : 100 280 nm

- ultraviolet (UV) : 200 - 380 nm
- vizibil (VIS) : 380 - 800 nm
- infrarou apropiat (NIR) : 800 - 2500 nm
- infrarou mijlociu (IR) : 2500 - 50000 nm
- infrarou ndeprtat (FIR) : 50000 - 1000000 nm
210
Corelarea ntre modul de manifestare al interaciunii

radiaiei cu proba i mecanismul de generare a
semnalului optic util
Modul de manifestare a interactiunii radiaiei cu proba
Domeniu
spectral
UV
VIS
Absorbie
Emisie
Fluorescen
Efect
Raman
Rotaie
optic
Tranz.
elect.
Tranz.
elect.
Tranz. elect.
Tranz.
vibr.
Dispersie
NIR
IR Tranz. vibr.
FIR
211
Spectrometrie optic
de absorbie
Spectrofotometrie de
absorbie n domeniul
ultraviolet i vizibil
212
Esena metodelor :
Msurarea variabilelor de energie ale unei radiaii monocromatice
la trecerea acesteia printr-un strat de prob, n funcie o variabil
de und a radiaiei
Variabile de und :
Variabile de energie :
- lungime de und ( l ) ( nm )
- numr de und ( n ) ( cm-1 )
- flux energetic ( F )
- frecven ( f ) ( Hz )
- transmisie ( T ) (transmitan)
- vitez de propagare ( v )
- transmisie ( transmitan )
procentual ( T% )
Relaii ntre variabile de

und :
~
v f
1
;
- intensitate de radiaie ( I )
- absorban ( A )
213
Definirea mrimilor
(variabilelor) energetice
caracteristice absorbiei
optice
A(l) lgT(l) 2 lg T%(l)
Moduri de reprezentare a spectrelor de absorbie ( I )
Avantaj : domeniu extins pentru reprezentarea comportrii optice

a probei
214
Moduri de reprezentare a spectrelor de absorbie ( II )
Reprezentare potrivit pentru determinri cantitative
215
Moduri de reprezentare a spectrelor de absorbie ( III )
Reprezentare utilizat pentru cataloage de spectre in

vederea identificrii compusilor
216
Schema contructiv a unui spectrofotometru de absorbie

Spectrofotometru monofascicol
217
218
Proba este deseori un amestec (ex. substana de interes &

solventul) din care intereseaz absorbia optic numai a unei
(unor) componente chimice. Componentele chimice, care sunt
prezente n prob dar nu prezint interes spectrofotometric
(formeaz numai mediul n care se gsete substana de interes),
constituie "matricea" probei. Pentru a scade automat spectrul
matricei (deseori spectrul solventului) din spectrul amestecului,
se utilizeaz spectrofotometre cu fascicol dublu.
Spectrofotometru bifascicol
219
Relaii cantitative ntre variabilele de energie

i datele de interes analitic
220
Fie - A(l) - absorbana unei probe la lungimea de und l ;

- d - grosimea probei (stratul de material prin care a
trecut radiaia) ;
- c - concentraia molar a speciei chimice care
absoarbe la lungimea de und l ;
atunci, n condiii ideale se verific relaia (Bouguer - Lambert - Beer)
F (l ) F 0 (l ) e
k (l )d
F 0 (l ) 10
k * (l ) c e (l ) ; A (l ) lg
k*(l )d
F 0 (l )
F (l )
c d e (l )
Relaii cantitative ntre variabile de energie

221
Conform relaiei Bouguer - Lambert - Beer, absorbana este direct

proporional cu concentraia molar a speciei chimice rspunztoare
de absorbia optic.
Coeficientul e(l) se numete coeficient de absorbie molar (sau
absorbtivitate molar) i este o caracteristic a speciei chimice care
cauzeaz absorbia optic ( depinde de l ).
Relaia Bouguer - Lambert - Beer (BLB) se verific cu urmtoarele
condiii :
- concentraia molar s nu fie prea mare ( c < 10-2 mol/l ) ;
- radiaia difuz n spectrofotometru s fie neglijabil ;
- speciile chimice rspunztoare de absorbie optic, sau matricea
(solventul) s nu fie implicate n echilibre chimice, dependente de
concentraii.
222
Pierre Bouguer (1698 1758)
223
Johann Heinrich Lambert

(1728 1777)

224
La concentraii mai mari dect 10-2 mol/l , relaia Kortm

descrie mai fidel dependena absorbanei de concentraie ;
A(l) proporional cu expresia urmtoare :
() n ()
A () ~ c d 2
2
[n () + 2]
n relaia de mai sus n(l) este indicele de refracie al probei la
lungimea de und l.
Citirile de absorban se efectueaz, de regul, la lungimea de und

corespunztoare unui maxim de absorbie (excepie de la aceast
regul n cazul existenei n sistemul studiat a unor echilibre
chimice).

Relaia BLB deseori este utilizat n una din urmtoarele forme :
1%
A
(
l
)
A
A (l ) e(l ) d C ;
1cm (l ) d C%
n care:
A(l) este absorbana msurat la lungimea de und l ;
e(l) este absorbtivitatea molar a speciei absorbante la lungimea
de und l ;
%
A11cm
(l )
este absorbia specific a speciei absorbante la

lungimea de und l ;
d este grosimea de strat traversat de radiaia electromagnetic ;
C este concentraia molar n prob a speciei absorbante ;

C% este concentraia procentual (m/V) a speciei absorbante
225

226
Uniti de msur
(tolerate, utilizate n practica spectrofotometric):
tolerat
cm
mol mol
C
litru
l
gram
g
C%
decilitru dl
litru
l
e tolerat
mol cm mol cm
decilitru
dl
1%
A1cm
tolerat
gram cm g cm
Relaie ntre absorbia

specific i absorbtivitatea
molar
%
A11cm
M 10 e
n care:
M este masa molecular a
speciei absorbante
Combinaii de mrimi utilizate n controlul analitic al

medicamentelor
227
Raportul valorilor de absorban, msurate n spectrul unei specii chimice la

dou lungimi de und diferite l1 i l2 , nu depinde (conform relaiei BLB) de
concentraia speciei chimice absorbante, deci se poate utiliza pentru stabilirea
identitii chimice a componentei respective :
A(l1)
nu depinde de concentratie, (c), nici de grosimea de strat (d )
A (l 2 )
Diferena valorilor de absorban, msurate n spectrul unei specii chimice
la dou lungimi de und diferite l1 i l2 , este direct proporional
(conform relaiei BLB) cu concentraia speciei absorbante, deci se poate
utiliza pentru determinarea cantitativ a speciei chimice respective
A (l1) A (l 2 ) c d [e (l1) e (l 2 )]
228
Analiza
spectrofotometric
a amestecurilor
Analiza spectrofotometric a amestecurilor
n cazul amestecurilor absorbana se compune aditiv din

contribuiile tuturor speciilor chimice absorbante prezente n
prob:
S
i 1
i 1
A (l ) d e i (l ) Ci d
1%
[A1cm (l)] i [C%] i
n practica analitic se recurge la msurarea absorbanei la

lungimi de und diferite i utilizarea unei expresii de corectare
n cazurile n care benzile de absorbie a dou (sau mai multe)
specii chimice se suprapun ntr-o msur considerabil
229
A12 e 2 (l1 )
A 21 e1 (l 2 )
r21
; r12
A 22 e 2 (l 2 )
A11 e1 (l1 )
A1 A11 + A12 A11 + r21 A 22
A 2 A 21 + A 22 r12 A11 + A 22
230
231
Morton i colaborrii au propus o metod spectrofotometric,

practicat n domeniul ultraviolet, pentru determinarea vitaminei A
(n form de alcool) dup saponificarea prealabil a formelor
esterificate (ex. acetat). La determinarea din soluii uleioase (pe
baza de ulei din ficat de pete), absorbia uleiului interfer cu cea a
vitaminei A; din acest motiv autorii recomand citirea absorbanei
la trei lungimi de und diferite (325 nm , 310 nm i 334 nm) i
calcularea unei valori corectate de absorban, A(cor), conform
relaiei de mai jos.
A(cor) = 6,815.A(325 nm) - 2,555.A(310 nm) - 4,260.A(334 nm)
Cantitatea de vitamin A din prob se determin utiliznd valoarea
corectat a absorbanei.
232
n 1966 E. Farkas a propus, pentru controlul puritii

tolazolinei, raportul absorbanelor msurate la 257 nm i
250 nm. Pentru o soluie de tolazolin nedescompus, acest
raport trebuie s aib valoarea 0,55.
A(257 nm)
0,55
A(250 nm)
Drept test de puritate (substan nedescompus) pentru
soluia etanolic de tolazolin V. Georgescu-Parazina i A.
Cosmin au propus urmtorul raport de absorbane.
A(257 nm)
1,51
1,53
A(263,5 nm)
233
Teste de puritate
Ampicilin
A(268 nm)
1,10 1,30
A(266 nm)
Cianocobalamin
A(361 nm)
1,54 1,78
A(351 nm)
Riboflavin
A(375 nm)
0,31 0,33
A(267 nm)
A(444 nm)
0,36 0,39
A(267 nm)
Benzilpenicilin
sodic
0,18%
1cm
264 nm
,18%
A10cm
280 nm
0,72
Analiza amestecurilor fr separarea chimic a

componentelor
234
Trasarea spectrelor etalon : pentru tratare mai simpla a problemei se considera

cazul in care fiecare din cele N solutii etalon conine cte o singura componenta a
amestecului, la concentraii (Cet)n , ( n = 1, 2 , . . . , N ) cunoscute
Soluia
etalon 1
Soluia
etalon 2
---
Soluia
etalon n
---
Soluia
etalon N
(Cet)1
(Cet)2
---
(Cet)n
---
(Cet)N
A1(1)
A2(1)
---
An(1)
---
AN(1)
A1(2)
A2(2)
---
An(2)
---
AN(2)
---
---
---
---
---
---
A1(l)
A2(l)
---
An(l)
---
AN(l)
---
---
---
---
---
---
A1(L)
A2(L)
---
An(L)
---
AN(L)

componentelor
235
Fie concentraiile (necunoscute) celor N componente n prob :

C1 , C2 , . . . , Cn , . . . , CN
Conform relaiei BLB rezult :

N
(l) A + d e (l) C ; (n 1,2,, N ; l 1,2, L)

A
0
n
n 1
Pentru cele N soluii etalon (cu concentraii cunoscute) rezult :
A n (l) d en (l) (Cet ) n ; (n 1,2,, N ; l 1,2,, L)

A n (l )
d e n (l )
(Cet ) n
Cn
A (l ) A 0 +
A n (l )
n 1 (Cet ) n

componentelor
N
Cn
A (l ) A 0 +
A n (l )
n 1 (Cet ) n
N
(l ) A + p A (l )
A
0
n
n
n 1
236
Cn
Raportul
exprim
(Cet ) n
de cte ori este mai mare
concentraia componentei n
n prob dect n soluia etalon
(n 1,2,, N ; l 1,2,, L )
pn reprezint ponderea soluiei
etalon nr. n n determinarea
valorii absorbanei amestecului
(probei)
n practic L > N + 1 pentru a

minimiza efectul erorilor de msurare
asupra rezultatului final al analizei
sistem de ecuaii supradeterminat, care se rezolv cu metoda
celor mai mici ptrate

componentelor
L
(l )
F(A 0 , p n ) A(l) A
l 1
237
; (n 1,2,, N)
2
F(A 0 , p n ) A(l) A 0 p n A n (l) min

l 1
n 1
Condiia de minim (necesar dar nu i suficient) :
F(A 0 , p n )
F(A 0 , p n )
0 ;
0 ; (n 1,2,.N)
A 0
p n

componentelor
N
n 1
l 1
l 1
238
A 0 L + p n A n (l ) A (l )
L
l 1
n 1
l 1
l 1
A 0 A n* ( l ) + p n A n ( l ) A n* ( l ) A ( l ) A k* ( l )
(n* 1,2,, N)
Dup rezolvarea sistemului de ecuaii
A0 i pn
Concentraiile componentelor din prob se calculeaz astfel :

Cn = pn.(Cet)n ; ( n = 1 , 2 , . . . , N )

componentelor
239
Dup rezolvarea sistemului de ecuaii n raport cu A0 i

pn (n = 1 , 2 , . . . , N) se recalculeaz absorbanele probei la cele
L valori de lungime de und :
N
Potrivirea valorilor de
absorban msurate ale
probei cu cele recalculate,
se exprim prin ptratul
coeficientului de corelare
(r2) :
0 < r2 < 1
r2
1 L
1 L
A (l ) A (l ) A
L l 1
L l 1
(l ) A + p A (l )
A
0
n
n
n 1
(l 1,2,, L )
[A(l) A ] [A(l) A ]
l 1
l 1
l 1
[
A
(
l
)
A
]
[
A
(l ) A ]

componentelor
Exemplu
240
Exemplu L = 17 ; N = 3 ; absorbane msurate la 17 lungimi de und

Amestec (prob)
Acid salicilic
Cafein
Paracetamol
0 ,4 8 7 8
0 ,0 9 0 1
0 ,2 0 9 7
1 ,7 7 1 5
0 ,4 4 5 4
0 ,0 5 5 0
0 ,2 9 0 6
1 ,4 7 6 1
0 ,4 1 4 0
0 ,0 5 3 4
0 ,3 9 7 5
1 ,11 6 9
0 ,3 9 8 7
0 ,0 7 2 7
0 ,5 0 8 0
0 ,7 8 7 7
0 ,4 0 1 6
0 ,11 4 7
0 ,5 8 7 9
0 ,5 6 0 7
0,4105
0,1 8 1 6
0 ,6 0 1 4
0,4452
0 ,4 0 5 1
0 ,2 7 2 0
0 ,5 2 6 5
0 ,3 8 4 8
0 ,3 7 4 1
0 ,3 7 5 0
0 ,3 7 8 8
0 ,3 1 3 6
0 ,3 2 4 6
0 ,4 6 4 6
0 ,2 0 0 8
0 ,2 3 3 8
0,2793
0,5 1 7 1
0 ,0 7 4 7
0,1551
0 ,2 3 9 1
0 ,4 9 9 8
0 ,0 2 5 7
0 ,0 8 6 0
0 ,1 9 5 2
0 ,4 2 1 4
0 ,0 1 4 9
0 ,0 4 2 3
0 ,1 4 0 1
0 ,2 9 2 9
0 ,0 1 3 0
0 ,0 2 8 8
0 ,0 8 8 2
0 ,1 6 5 8
0 ,0 111
0 ,0 2 4 2
0 ,0 5 5 3
0 ,0 8 4 0
0 ,0 1 0 7
0 ,0 2 2 6
0 ,0 3 5 2
0 ,0 3 7 7
0 ,0 0 8 6
0 ,0 1 9 7
0 ,0 2 8 2
0 ,0 2 0 2
0 ,0 0 9 8
0 ,0 2 0 9
241

componentelor
Exemplu
L = 17 ; N = 3
Concentraii n
soluii (mg/l)
Amestec (prob)
C1 ; C2 ; C3
Acid salicilic Cafein
242
Paracetamol
(Cet)1
(Cet)2
(Cet)3
20,02
10,03
20,03
17,0000 A 0 + 3,71800 p1 + 3,86970 p 2 + 7,48990 p3 4,72240

3,71800 A 0 + 1,31281 p1 + 0,71305 p 2 + 0,99028 p3 1,04982
3,86970 A 0 + 0,71305 p1 + 1,71985 p 2 + 2,62596 p3 1,53587
7,48990 A 0 + 0,99028 p1 + 2,62596 p 2 + 8,03468 p3 3,13591
A 0 0,01252 ; p1 0,39947 ; p 2 0,39183 ; p3 0,20133

C1 p1 (Cet )1 0,39947 20,02 7,997 mg / l acid salicilic
C2 p 2 (Cet ) 2 0,39183 10,03 3,930 mg / l cafeina
C3 p3 (Cet )3 0,20133 20,02 4,030 mg / l paracetamol
A (l )
(l )
A
0,4878
0,4873
0,4454
0,4455
0,4140
0,4144
0,3987
0,3991
0,4016
0,4016
0,4105
0,4103
0,4051
0,4049
0,3741
0,3738
0,3246
0,3237
0,2793
0,2797
0,2391
0,2395
0,1952
0,1952
0,1401
0,1404
0,0882
0,0880
0,0553
0,0548
0,0352
0,0349
0,0282
0,0286
243
R2 = 0,999994
Supresarea contributiei ingredientilor
244
CARTER, G.T., SCHIESSWOHL, R.E., BURKE, H., YANG, R.

J. Pharma. Sci., (1982) 71: p. 383
I ( 2 )
R I (1, 2 )
I (1 )
S ( 2 )
R I (1, 2 )
S (1 )
I ( 2 ) - R I (1, 2 ) I (1 ) 0
S ( 2 ) - R I (1, 2 ) S (1 ) 0
A(1 ) d I (1 ) CI + S (1 ) CS
A( 2 ) d I ( 2 ) CI + S ( 2 ) CS
A R I (1 , 2 ) A(1 ) A( 2 )
d CS R I (1 , 2 ) S (1 ) S ( 2 )
d CI R I (1 , 2 ) I (1 ) I ( 2 )
245
Spectrele Lovastatinei si ingredientilor suprapuse
HO
O
C
H3C
H3C
C
O
CH3
246
Se observ din spectre c :
A I (246,8 nm) I (246,8 nm) 0,5938
0,9467
A I (243,8 nm) I (243,8 nm) 0,6271
AS (246,8 nm) S (246,8 nm) 1,1186
1,1270
AS (243,8 nm) S (243,8 nm) 0,9925
Rezult c :
AI(246,8 nm) 0,9467.AI(243,8 nm) = 0
indiferent de concentraia ansamblului de ingredieni, n timp ce . . .

AS(246,8 nm) 0,9467.AS(243,8 nm) 0
247

Dreapta de etalonare Semnal corectat vs. Concentratie (mg/ml)
0.1800
0.1600
0.1400
0.1200
0.1000
0.0800
y = semnal corectat (d = 1 cm)
0.2000
y = 2.808646x + 0.000086
R = 0.999879
0.0600
0.0400
0.0200
0.0000
0.000
0.010
0.020
0.030
0.040
0.050
x = concentratie ( mg/ml )
0.060
0.070

Rezultatele analizei produsului MEDOSTATIN
Blister 1
Blister 2
248
Blister 3
Semnal
optic
Cantitate
(mg/comprimat)
Semnal
optic
Cantitate
(mg/comprimat)
Semnal
optic
Cantitate
(mg/comprimat)
0,1181
21,02
0,1184
21,08
0,1142
20,33
0,1132
20,15
0,1075
19,13
0,1187
21,13
0,1134
20,19
0,1126
20,05
0,1117
19,88
0,1127
20,07
0,1148
20,43
0,1094
19,48
0,1112
19,79
0,1160
20,66
0,1135
20,21
0,1114
19,83
0,1131
20,14
0,1134
20,19
0,1131
20,13
0,1152
20,51
0,1186
21,11
0,1180
21,00
0,1110
19,77
0,1142
20,33
0,1126
20,05
0,1130
20,12
0,1149
20,45
0,1131
20,13
0,1182
21,05
0,1125
20,02
Medie:
20,236
Medie:
20,294
Medie:
20,313
STD:
0,429
STD:
0,590
STD:
0,507
249
Metoda adaosurilor
Spectrul amesteului Aam(l)

(substanta de interes si ingredienti)
Spectrul ingredientilor A0(l)
Fie:
A0(l1) = A0(l2)
250
Metoda adaosurilor
A0(l1) = A0(l2)
251
Spectrofotometrie cu derivare in raport cu lungimea de unda

Exemplu: determinarea prin spectrofotometrie a Diazepamului
si a Bromurii de Otiloniu in amestec
B. Morelli : FreseniusAnal. Chem., 1997:357, 1179
O
C C
CH3
N
N
O
H 3C
C2H5
N+
C2H5
O
O
Br
NH
O
Diazepam
Cl
(anxiolitic, sedativ,
anticonvulsant, relaxant
al muschilor scheletici)
H3C
C
O
Bromura de Otiloniu
(relaxant al musculaturii netede
intestinale)
252
B. Morelli : FreseniusAnal. Chem., 1997:357, 1179

A.Y.E. Sayed, N.A.E. Salem : Analytical Sciences 2005:21, 595
Determinarea
Diazepamului si
Bromurii de Otiloniu
O
C C
CH3
N
N
O
Cl
H 3C
C2H5
N+
C2H5
O
O
Br
NH
O
H3C
C
O
253
Determinarea Paracetamolului si acidului ascorbic din Eferalgan
V. David, Iulia Gabriela David, V. Dumitrescu
Metoda zero crossing

Spectre de absorbtie
(1) Paracetamol
(2) Acid ascorbic
(3) Eferalgan
Spectrele de absorbtie ale
constituentilor se suprapun
in toata regiunea spectrala
investigata
254
Determinarea Paracetamolului si acidului ascorbic din Eferalgan
V. David, Iulia Gabriela David, V. Dumitrescu
Metoda zero crossing

In spectrul derivat al
Eferalganului la 243,5 nm
contribuie numai acidul
ascorbic (2), iar la 264,5 nm
numai Paracetamolul (1) la
absorbtie globala.
In concluzie:
- la 243,5 nm se poate
determina concentratia
acidului ascorbic (2);
- la 264,5 nm se poate
determina concentratia
Paracetamolului (1)
Metoda First Derivative Ratio Spectrophotometry

Absorbanta unui amestec de componente X , Y , Z etc., la
lungimea de unda l, este :
A(l) d [eX (l) CX + eY (l) CY + e Z (l) CZ + ]

et
et
,
A
,
A
Absorbantele Aet
X
Y
Z etc. ale unor solutii etalon care
contin componentele unice X , Y , Z etc. la concentratii molare

et
et
,
C
,
C
cunoscute Cet
X
Y
Z etc. sunt :
et
A et
(
l
)
e
(
l
)
C
X
X
X
F. Salinas, J.J. Berzas, A. Espinosa
et
A et
(
l
)
e
(
l
)
C
Y
Y
Y
Talanta, 1990:37,347
et
A et
(
l
)
e
(
l
)
C
Z
Z
Z
255
A(l) d [eX (l) CX + eY (l) CY + e Z (l) CZ + ] (*)

et
A et
(
l
)
e
(
l
)
C
X
X
X
et
A et
(
l
)
e
(
l
)
C
Y
Y
Y
et
A et
(
l
)
e
(
l
)
C
Z
Z
Z
(*)
Termenii incadrati in
acest semn nu depind
de lungimea de unda
C X C Y e Y (l ) C Z e Z (l )
d et + et
+ et
+
et
A X (l )
C X C X e X (l ) C X e X (l )
C X e X (l ) C Y C Z e Z (l )
A (l )
d et
+ et + et
+
et
A Y (l )
C Y e Y (l) C Y C Y e Y (l )
C X e X (l ) C Y e Y (l ) C Z
A (l )
d et
+ et
+ et +
et
A Z (l )
C Z e Z (l ) C Z e Z (l ) C Z
A (l )
256
C X C Y e Y (l ) C Z e Z (l )
A (l )
d et + et
+ et
+
et
A X (l )
C X C X e X (l ) C X e X (l )
C X e X (l ) C Y C Z e Z (l )
A (l )
d et
+ et + et
+
et
A Y (l )
C Y e Y (l) C Y C Y e Y (l )
C X e X (l ) C Y e Y (l ) C Z
A (l )
d et
+ et
+ et +
et
A Z (l )
C Z e Z (l ) C Z e Z (l ) C Z
257
Dupa derivare
termenii marcati
(*)
cu
dispar
C Y d e Y (l ) C Z d e Z (l )
d A (l )
+ et
+
D1X
et
d et
dl A X (l)
C X dl e X (l) C X dl e X (l)
C X d e X (l ) C Z d e Z (l )
d A (l )
+ et
+
D1Y
et
d et
dl A Y (l)
C Y dl e Y (l) C Y dl e Y (l)
C X d e X (l ) C Y d e Y (l )
d A (l )
+ et
+
D1Z
et
d et
dl A Z (l)
C Z dl e Z (l) C Z dl e Z (l)
258
C Y d e Y (l ) C Z d e Z (l )
d A (l )
+ et
+
D1X
et
d et
dl A X (l)
C X dl e X (l) C X dl e X (l)
C X d e X (l ) C Z d e Z (l )
d A (l )
+ et
+
D1Y
et
d et
dl A Y (l)
C Y dl e Y (l) C Y dl e Y (l)
(*)
C X d e X (l ) C Y d e Y (l )
d A (l )
+ et
+
D1Z
et
d et
dl A Z (l)
C Z dl e Z (l) C Z dl e Z (l)

Se observa :
D1X nu depinde de concentratia molara CX a componentei X in amestec
D1Y nu depinde de concentratia molara CY a componentei Y in amestec
D1Z nu depinde de concentratia molara CZ a componentei Z in amestec
---------------------------------------------------------
Determinarea smultana a Atorvastatinei si Fenobibratului

cu metoda Ratio Derivative Spectrophotometry
259
N.K. Vipul, M. Rajshree : Anal. Sci., 2007:23, 445

O
OH
C
N
H
OH
O
C
OH
Cl
Atorvastatin :
reduce in special
colesterolemia serica
C
O
C O
O
O
Fenofibrat :
reduce in special
concentratia trigliceridelor
serice

(1) 12 g/ml sare calciu a Atorvastatiei
(2) 12 g/ml Fenofibrat
(3) Amestecul celor doua solutii
260

4 , 8 , 12 , 16 , 20 si 22 g/ml Atorvastatin-Ca in MeOH
Divizor : 16 g/ml Fenofibrat in MeOH
261

2 , 4 , 8 , 10 , 12 , 16 , 18 , si 20 g/ml Fenofibrat in MeOH
Divizor : 12 g/ml Atorvastatin-Ca in MeOH
262

263
4 , 8 , 12 , 6 , 20 si 22 g/ml Atorvastatin-Ca in MeOH

Divizor : 16 g/ml Fenofibrat in MeOH

2 , 4 , 8 , 10 , 12 , 16 , 18 , si 20 g/ml Fenofibrat in MeOH
Divizor : 12 g/ml Atorvastatin-Ca in MeOH
264
265
Analiza
spectrofotometric
a sistemelor cu
echilibre chimice
Determinarea numrului de echilibre chimice independente
266
ntr-o soluie componentele chimice X i Y, prezente n momentul preparrii

soluiei, interacioneaz chimic n diferite rapoarte stoechiometrice i prin
procese de echilibru formeaz M compui chimici noi :
Importana n controlul
medicamentului:
numeroase substane active formeaz compleci de transfer de

sarcin (compleci moleculari)
fie cu substanele active ale altor
medicamente, fie cu unii
ingredieni
este afectat
biodisponibilitatea medicamentului
Scopul urmrit este determinarea numrului de echilibre chimice

independente din sistem

Se vor nota n continuare :
eX , eY absorbtivitatea molar a speciilor X respectiv Y ;
CX concentraia analitic (iniial) a componentei X ;

CY concentraia analitic (iniial) a componentei Y ;
[X] , [Y] concentraiile de echilibru ale speciilor X respectiv Y ;
[(XY)m] concentraia de echilibru a speciei XamYbm
Bilanul speciilor chimice X i X se exprim astfel :
CX = [X] + a1.[(XY)1] + a2.[(XY)2] + . . . + am.[(XY)m] + . . . +

+ aM.[(XY)M]
CY = [Y] + b1.[(XY)1] + b2.[(XY)2] + . . . + bm.[(XY)m] + . . . +
+ bM.[(XY)M]
267
268
Totalitatea speciilor chimice prezente n sistem verific aditivitatea

absorbanelor. Absorbana amestecului, msurat la lungimea de und
l dup stabilirea echilibrului, este :
A(l) = d.{eX(l).[X] + eY(l).[Y] + e1(l).[(XY)1] + . . . + eM(l).[(XY)M]}

Dup exprimarea concentraiilor de echilibru [X] i [Y]
n funcie de concentraiile analitice cX i cY , rezult:
A(l) = d.{eX(l).(CX - a1.[(XY)1] - . . . - am.[(XY)m] - . . . - aM.[(XY)M] ) + eY(l).(CY - b1.[(XY)1] - . . . -
- bm.[(XY)m] - . . . - bM.[(XY)M] ) + e1(l).[(XY)1] + . . . +

+ em(l).[(XY)m] + . . . + eM(l).[(XY)M]}
269
n cazul n care componentele iniiale X i Y nu ar fi implicate n

nici un echilibru chimic, absorbana soluiei, A*(l), s-ar compune
aditiv numai din contribuiile acestor dou componente.
A*(l)
= d.(eX(l).CX + eY(l).CY)
Diferena dintre absorbana de echilibru a sistemului i absorbana A*(l)

este absorbana de exces Aex(l) ; aceasta se poate atribui modificrilor
din sistem cauzate de echilibrele chimice.
Aex(l) = A(l) A*(l) = A(l)
d.(eX(l).CX + eY(l).CY)
nlocuind expresiile pentru A(l) i A*(l) n relaia de mai sus, rezult :

M
Aex(l) = d .
m=1
[(XY)m].(em(l) eX(l).am eY(l).bm)
270
Se prepar s = 1 , 2 , . . . , S soluii care se deosebesc prin valorile de concentraii

analitice CX i CY . Se msoar pentru fiecare soluie, la acelai set de lungimi de
und l1 , l2 , . . . , lL convenabil ales, absorbana de exces Asex(l) ; (s = 1 ,
2 , . . . S). Se impune ca att numrul S al soluiilor preparate ct i numrul L de
lungimi de und s fie mai mare dect numrul de echilibre M prognostizat. Valorile
Asex(l) ; (s = 1 , 2 , . . . S) , (l1 , l2 , . . . , lL) obinute se organizeaz ntr-o matrice :
A1ex (l1)Asex (l1)ASex (l1)
e
x
A A1ex (li ) Asex (li ) ASex (li )
ex
A (l )A ex (l )A ex (l )
L
s
L
S
L
1
Prin determinarea rangului matricii se

poate preciza numrul M al speciilor
chimice care coexist n soluie ca
urmare a echilibrelor, n afara speciilor
X i Y, deci numrul speciilor ale
cror concentraii de echilibru se pot modifica independent prin modificarea
concentraiilor analitice CX i CY.

Msurarea absorbanei de exces
Soluie stoc X
(CX)0
Soluie stoc Y
(CY)0
Soluie stoc X
(CX)0
(VX)s (s = 1, . . . , S) (VX)
s
Soluie stoc Y
(CY)0
(VX)s (s = 1, . . . , S) (VX)s
solvent
V (CX)s
A*
V
A*
Xs(l)
Ys(l)
nsumare
A*s(l) = A*Xs(l) + A*Ys(l)
amestecare
(CY)s
solvent
[X]s
[Y]s
[XaYb]s
scdere
Aesx(l) = As(l) - A*s(l)
As(l)
271
Amestecare
Scadere

Msurarea absorbanei de exces
272
Punct izosbestic
CX = [X] + a.[XaYb]
A(l) = d .{eX(l).[X] + eY(l).[Y] + eXY(l).[XaYb]}
Se va admite, c eY(l) este neglijabil n domeniu spectral

investigat ; n acest caz rezult :
A(l) = d .{eX(l).[X] + eXY(l).[XaYb]}
Dac n domeniul spectral exist cel putin o lungime de und (l*)
pentru care eXY(l*) = a.eX(l*) = e(l*) atunci rezult :
A(l*) = d .{eX(l*).[X] + a.eX(l*).[XaYb]}=
= d .{e(l*).[X] + a.e(l*).[XaYb]}=
= d . e(l*) .{ [X] + a.[XaYb]} = d . e(l*).CX
273
Punct izosbestic
274
Exemplu : componenta Y (a crei absorbie este neglijabil) poate fi

protonul ( H+ ) ; de exemplu echilibrul protolitic al eugenolului
(protonul nu absoarbe n ultraviolet)
Apariia unui punct izosbestic poate fi cauzat nu numai de un

echilibru, dar i de un proces ireversibil, cu condiia ca n sistem
s se desfoare un singur proces
Spectrele suprapuse, nregistrate n momentele diferite ale desfurrii procesului, pot prezenta punct izosbestic cu condiia s existe
o lungime de und (l*) pentru care eX(l*) = eY(l)
Punct izosbestic (la procese ireversibile)
Acid acetilsalicilic (Aspirin)
1,4-dihidro-2,6-dimetil-4-(2-nitrofenil)-3,5-piridin-carboxilat de dimetil
(Nifedipin)
Anion salicilat
1,4-dihidro-2,6-dimetil-4-(2-nitrozofenil)-3,5piridin-carboxilat de dimetil
275
276
Fototransformarea compusului Nifedipin
277
Fototransformarea acetatului de retinil (iradiere: 300 400 nm)

1.20
289 nm
Abszorbanta (d = 1 cm)
1.00
0.80
0.60
0.40
0.20
0.00
264
274
284
294
304
314
lungime de unda (nm)
324
334
344
354
Determinarea raportului stoechiometric. Metoda Job.

( metoda variaiei continue )
278
n cazul n care ntr-un sistem componentele iniiale (X i Y) se implic

ntr-un singur echilibru chimic de tipul celui de mai jos, se poate determina
raportul coeficienilor stoechiometrici asociai cu speciile iniiale X i Y
prin prelucrarea convenabil a datelor de absorbie optic.
Metoda variaiei continue

Concentraiile speciilor X i Y n una din soluiile preparate :
VX
VY
CX C
; CY C
VX + VY
VX + VY
Fraciile molare ale substanelor dizolvate n amestecul obinut

sunt:
nX
C VX
VX
xX
x
n X + n Y C VX + C VY VX + VY
xY
nY
C VY
VY
1 x
n X + n Y C VX + C VY VX + VY
Concentraiile molare CX i CY se exprim n funcie de

variabila introdus (x) astfel:
CX = C.x
CY = C.(1-x)
279
280
Concentraiile molare de echilibru ale speciilor prezente, X , Y i

XaYb , satisfac relaiile :
[X] = CX a.[XaYb] = C.x a.[XaYb]
[Y] = CY b.[XaYb] = C.(1 x) b.[ XaYb]
[X]a.[Y]b = K.[XaYb]
Dac se prepar o serie de soluii de lucru amestecnd volume diferite
(VX)i i (VY)i , (i = 1 , 2 , . . . , S) ale soluiilor stoc, astfel nct la
fiecare soluie de lucru suma volumelor amestecate s fie aceeai,
(VX)i + (VY)i = V ; i = 1 , 2 , . . . , S, atunci valorile xi i concentraiile
de echilibru [X]i , [Y]i , [XaYb]i vor fi diferite.
281
Fie x0 valoarea variabilelei x pentru care concentraia de echilibru

[XaYb] are valoare maxim ( [XaYb]0 = max ) . . .
. . . atunci n soluia respectiv concentraiile de echilibru corespunzatoare ale celorlalte specii se vor nota [X]0 i [Y]0 , iar derivata
concentraiei [XaYb] n raport cu variabila x , pentru x = x0 , este nul.
d[X a Yb ]
dx x
x0
a
Se poate demonstra faptul c :

b 1 x0
n caz concret, valoarea x0 se poate determina din date spectrofotometrice.
282
Dac la amestecarea celor dou soluii stoc componentele X i Y ar

coexista fr a participa la echilibru, atunci absorbana (msurat la
lungimea de und l) soluiei de lucru (caracterizat de valoarea x
a variabilei de echilibru) ar fi A*(l,x) :
A*(l,x)
= d .{eX(l).C.x + eY(l).C.(1-x)} + Asolv(l)
Dac componentele X i Y interacioneaz chimic i se realizeaz

starea de echilibru, atunci absorbana soluiei de lucru este A(l,x):
A(l,x)
A(l,x)
= d .{eX(l).[X] + eY(l).[Y] + eXaYb.[XaYb]} + Asolv(l)
= d .{eX(l).[X] + eY(l).[Y] + eXaYb.[XaYb]

eX(l).C.x eY(l).C.(1-x)}

Se poate demonstra c :
d A ( l )
0
dx x 0
Absorbana de exces are
valoare extrem tocmai
pentru x = x0
modalitatea de
determinare experimental a valorii x0.
283
284
Aspecte calitative ale

analizei spectrofotometrice
n domeniul spectral
ultraviolet (UV)
i vizibil (VIS)
Aspecte calitative ale spectrofotometriei n UV-VIS
285
Mecanismul cuantic de producere a spectrelor de absorbie - tranziii

de electroni din strile staionare inferioare (fundamental) n strile
staionare superioare.
Domeniul de lungimi de und:
- ultraviolet de vid : l < 200 nm ;

- ultraviolet (UV) : 200 - 380 nm ;
- vizibil (VIS) : 380 - 800 nm.
Absorbia - la probele aflate n starea condensat - se prezint n forma de

benzi mai mult sau mai puin largi.
Lungimea de und a maximului benzii de absorbie este cu att mai
mare cu ct este mai mic diferena de energie ntre strile staionare
(fundamental i excitat) implicate (conform relaiei Max Plank).
Intensitatea absorbiei, deci i valoarea coeficientului molar de absorbie
e(l), este proporional cu probabilitatea tranziiei electronice i cu
modificarea momentului de dipol electric al moleculei n timpul tranziiei
electronice.
286
287
n cazul moleculelor substanelor organice, cele mai frecvente tipuri

de tranziii electronice moleculare sunt:
- tranziii de tipul - * se realizeaz de pe un orbital molecular de

legtur pe un orbital molecular de antilegtur * ;
- tranziii de tipul * se realizeaz de pe un orbital molecular de
legtur pe un orbital molecular de antilegtur * ;
- tranziii de tipul n - * se realizeaz de pe un orbital molecular de
nelegtur n pe un orbital molecular de antilegtur * ;
- tranziii de tipul n - * se realizeaz de pe un orbital molecular de
nelegtur n pe un orbital molecular de antilegtur *.
Tranziiile * sunt caracteristice moleculelor care posed numai legturi
(n special alcanii, izoalcanii, cicloalcanii). Deoarece energia tranziiei este
n general mare, benzile de absorbie produse de acest tip de tranziie sunt
situate n domeniul ultraviolet de vid (
importan analitic redus).
Aspecte calitative ale spectrofotometriei n UV-VIS ( IV )
288
Tranziiile * sunt caracteristice moleculelor nesaturate care

posed, pe lng legturi , i legturi chimice de tip (n special la
alchene, poliene, hidrocarburi aromatice, dar i la molecule nesaturate n care un heteroatom este implicat ntr-o legtur ).
Energia tranziiilor de acest tip este mai mic dect n cazul tranziiei
*, deci banda de absorbie produs apare la lungimi de und
mai mari (accesibile spectrofotometrelor obinuite).
Extinderea conjugrii electronilor n starea fundamental, deplaseaz maximul benzii de absorbie spre lungimi de und mai mari
("deplasare batocrom").
Reprezentarea simplificat
a unei tranziii *
289
Tranziiile n - * sunt caracteristice moleculelor saturate care conin un heteroatom cu electroni neimplicai n legtur chimic n starea fundamental a moleculei
(alcoolii saturai, eterii saturai, aminele saturate, derivaii halogenai saturai).
Benzile de absorbie asociate cu acest tip de tranziie apar n domeniul ultraviolet,
la lungimii de und mici. Maximul de absorbie se deplaseaz batocrom odat cu
accentuarea electronegativitii heteroatomului.
Tranziiile n - * sunt caracteristice moleculelor nesaturate care posed heteroatom
cu electroni neimplicai n legtur chimic. Aceste tranziii produc n general benzi
de absorbie intense, la valori relativ mari ale lungimii de und, domeniu accesibil
uor de spectrofotometrele obinuite, motiv pentru care aceste tranziii au cel mai
nsemnat rol analitic. Extinderea conjugrii n - sau n starea fundamental
a moleculei cauzeaz deplasarea batocrom a benzii de absorbie.
Reprezentarea simplificat a
unei tranziii p - *
290
Factorii care influeneaz poziia i intensitatea benzilor :

- conjugarea electronic n starea fundamental a moleculei
determin intensificarea absobiei i deplasarea batocrom a
maximului benzii de absorbie ;
- pH - ul mediului poate influena att poziia ct i intensitatea
benzilor de absorbie n cazul n care molecula absorbant
este implicat n echilibre protolitice ;
- mediul influeneaz poziia maximului benzii de absorbie
prin solvatarea difereniat a moleculei n starea fundamental
i starea excitat (solvatocromie) ;
- ntr-o oarecare msura temperatura poate influenta poziia
i/sau intensitatea benzii de absorbie (termocromism).
Influena solventului asupra poziiei benzii de absorbie
Efect hipsocrom
Efect batocrom
291
292
Influena factorilor structurali asupra poziiei i intensitii

benzilor de absorbie
Realizarea unor tranziii electronice de anumite tipuri este legat de existena
unor fragmente structurale specifice n constituia moleculei absorbante.
Aceste fragmente structurale sunt cromoforii moleculei. Din forma spectrelor
de absorbie se pot formula concluzii privind natura cromoforilor. Cromoforii
tipici sunt prile moleculei peste care se ntind electronii delocalizai.
Modificri structurale sau de mediu pot modifica att poziia maximului de
absorbie (deplasare spre lungimi de und mai mari - deplasare batocrom sau deplasare spre lungimi de und mai mici - deplasare hipsocrom) ct i
intensitatea absorbiei (diminuarea absorbiei - efect hipocrom - sau sporirea
absorbiei - efect hipercrom).
Gruprile de atomi din molecul care nu constituie cromofor dar care, grefate
de un cromofor, pot induce deplasri batocrome sau hipsocrome, se numesc
grupri auxocrome.
293
Influena factorilor structurali asupra

poziiei i intensitii benzilor de absorbie
Influena conjugarii si a solventului asupra spectrului de absorbtie

in UV-VIS
n = 1
l 30 nm
(efect batocrom)
n = 1
ef (1,5-2)xei
(efect hipercrom)
Cresterea polaritatii solventului

determina ...
... efect batocrom la -*;
... efect hipsocrom la n-*;
... efect hipsocrom la n-*
294
295
Spectrometrie de
fluorescen
Spectrometrie de fluorescen
296
Moleculele unei probei, n urma absorbiei unei radiaii, se pot ajunge n

stri excitate de diferite tipuri: - stri singlet (este posibil revenirea n
starea fundamental) ;
- stri triplet (revenirea este "interzis" n
starea fundamental).
Revenirea n starea fundamental :
- prin proces radiativ (energia strii excitate se emite n forma de radiaie
electromagnetic);
- prin proces neradiativ (energia strii excitate este disipat n form de
cldur prin ciocniri cu alte molecule din prob).
n modul de revenire radiativ se emite o radiaie caracteristic probei.
Revenirea radiativ n starea fundamental este desemnat prin denumirea

comun: luminescen
Revenirea radiativ dintr-o . . .
- stare excitat de tip triplet: - fosforescen
- stare excitat de tip singlet: - fluorescen
Denumire comun :
luminescen
Schema constructiv a
unui spectrofluorimetru
Randamentul
F F (l 2 )
F F (l 2 )
cuantic al fluorescenei : (l1, l 2 )

F ab (l1) F 0 (l1) F (l1)
297
298
Condiii necesare pentru apariia fluorescenei utilizabile n scopuri analitice:

- proba s prezinte absorbie puternic la lungimea de und de excitare l1
( prezena unor cromofori adecvai ) ;
- molecula s se ntoarc n starea fundamental printr-un proces radiativ ;
- deplasarea Stokes ( vezi mai jos ) s fie suficient de mare
299
George Gabriel Stokes

(1819 1903)
300
Determinarea fluorimetrica a antibioticului Gatifloxacin
K. Venugopal si colab., Indian J. of Pharm. Sci., 2006:68 (6), 726-730
HN
OH
Gatifloxacin: antibiotic
de generatia a patra a
fluorochinolonelor
Spectrele de absorbtie si de emisie ale solutiei (10 mM HCl) de Gatifloxacin
Determinarea fluorimetrica a antibioticului Gatifloxacin
301
K. Venugopal si colab., Indian J. of Pharm. Sci., 2006:68 (6), 726-730

6000
y = 36.084615x + 7.730769
R2 = 0.999991
5000
4000
3000
2000
1000
0
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
302
+
N
Cl
O
Clorhidrat de Paroxetin
l1
Absorbie / Emisie
400
300
l2
350
l4
l5
150
l6
Cl
250
200
+
N
l3
300
Clorhidrat de Paroxetin
Fluo
Abs
6
100
50
0
250
300
350
400
450
500
Lungime de und (nm)
Explicarea deplasrii Stokes
304
305
Structurile heterociclice, capabile de conjugare n - , prezint absorbie puternic, deci n multe situaii sunt capabile s genereze fluorescen semnificativ. Modificrile structurale care amplific absorbia, deseori determin
creterea fluorescenei (aceast regul ns nu este universal valabil).
Multe substane ionizabile prezint fluorescen numai n una din
formele de ionizare - fluorescena este dependent de pH-ul mediului
indicatori de fluorescen acido-bazici.
Exemplu :
306
Dac concentraia substanei fluorescente n prob este mare, atunci lumina

incident este absorbit n cea mai mare parte de primul strat de substan,
la straturile urmtoare ajungnd flux de radiaie mai mic.
Fluorescena probei este neuniform i fluxul de radiaie emis de
prob ( FF(l2) ) nu este proporional cu concentraia speciei chimice
fluorescente. Din acest motiv msurtorile de fluorescen se execut cu
concentraii mici ale speciei fluorescente.
F ab (l1 ) F 0 (l1 ) F (l1 ) F 0 (l1 ) (1 10
e ( l 1 ) d C
F F (l ) (l1 , l 2 ) F ab (l1 ) (l1 , l 2 ) F 0 (l1 ) (1 10
10
e ( l 1 ) d C
1 ln(10 )d e ( l1 )C
e ( l 1 ) d C
Dac e(l1).d.C < 0,05 ,

eroarea relativ < 0,12 %
F F (l 2 ) (l1 , l 2 ) F 0 (l1 ) ln(10) d e (l1 ) C
307
F F (l 2 ) (l1, l 2 ) F 0 (l1 ) ln(10) d e(l1 ) C

Aceast relaie st la baza determinrilor cantitative prin msurarea
fluorescenei.
La concentraii foarte mici fluxul radiaiei de fluorescen este (cu aproximaie acceptabil) proporional cu concentraia molar a speciei chimice
generatoare de fluorescen. Fluxul FF(l2) mai este proporional i cu
fluxul de radiaie incident F0(l2) , deci prin creterea fluxului de radiaie
incident se poate mri sensibilitatea determinrii analitice a concentraiei
molare a speciei chimice fluorescente (n acest aspect const diferena
fundamental ntre determinrile analitice cantitative prin spectrometrie
de absorbie i prin spectrometrie de fluorescen).
Prin spectrometrie de fluorescen se pot pune n eviden concentraii
foarte mici (uneori de ordinul a 10-5 M).
Unele impuriti din prob sunt capabile s diminueze intensitatea
fluorescenei; fenomenul poart numele de stingerea fluorescenei
("quenching").
308
Exemple de aplicaii analitice :

a) Chinina este un exemplu clasic pentru un compus determinat la sensibilitate foarte mare prin fluorescen: n acid sulfuric de 0,05 M randamentul cuantic al fluorescenei chininei este 0,3 ; maximul de absorbie
este la lungimea de und l1 = 350 nm iar fluxul de radiaie fluorescent
emis are maxim la l2 = 450 nm (fluorecen albastr). n mediu de
acid clorhidric intensitatea fluorescenei chininei este mai redus dect
n acid sulfuric.
b) Aflatoxinele (substane foarte toxice, provenite din unele mucegaiuri)
se depisteaza prin fluorescena lor:
Aflatoxina B1 i B2 (fluorescen albastr Blue)
Aflatoxina G1 i G2 (Fluorecen verde Green)
Ordinea toxicitatii: B1 > G1 > B2 > G2
309
Structura
aflatoxinelor
Aflatoxina B1
Aflatoxina B2
Aflatoxina G1
Aflatoxina B2
c) vitaminele sunt adesea identificate sau determinate cantitativ pe baza
fluorescenei lor:
310
311

d) Farmacopeea European (ediia 6) prevede, la capitolul Control al limitelor de impuriti, controlul cantitii de formaldehid liber. Formele
farmaceutice vizate sunt vaccinurile de uz uman i toxoide de uz veterinar. Reactiv : acetil-acetona.
Excitare : 410 nm
Emisie : 510 nm
H3C
H3C
O
+
NH Cl
e) Determinarea fluorimetric a Papaverinei

(reacia coralin)
*
O
(CH3-CO)2O
- CH3-COOH
- H2O
H3C
H3C
Cl
N
H3C
W. Schneider ; K. Schroeter ; O. Boger (1920 1921)
CH3
Reacia are loc la nclzire ;

dup rcire se adaug 2-3
picturi de H2SO4 conc.
CH3
Coralin (produs de reacie)

O
2[H]
H3C
CH3
Clorhidrat de Papaverin
O
+
O
produs fra
fluorescen
Cl
H
CH3
culoare galben
fluorscen verde
CH3
Pentru ca reacia sa fie pozitiv, gruparea

metilenic ( * ) trebuie s fie nesubstituit
CH3
O
O
312
CH3
CH3
Reacia este specific papaverinei si se preteaz

chiar la determinare cantitativ. Morfina d un
produs colorat dar fr fluorscen.
313
Exemple de aplicaii analitice:

f) Determinarea spectrofluorimetric a Carnitinei
45 - 60 oC
Carnitina
HCl
produs fluorescent
l ex = 260 nm
l em = 310 nm
reactiv de derivatizare
g) Determinarea fluorimetrica a agentului fungicid Ciclopirox
314
(a) 70 ng/ml Ciclopirox

(b) 700 ng/ml
Ciclopirox
M.I. Walash; M.S. Rizk; M.I. Eid;

M. El-Sayed Fathy
Acta Pharm., 2006:56, 431-440
EDTA: 2,310-5 mol/l

Tb3+: 2,510-5 mol/l
pH: 10 (tampon borat)

lex = 295 nm
lem = 485 nm & 545 nm
315
M.I. Walash; M.S. Rizk; M.I. Eid; M. El-Sayed Fathy
Acta Pharm., 2006:56, 431-440
316
M.I. Walash; M.S. Rizk; M.I. Eid; M. El-Sayed Fathy
Acta Pharm., 2006:56, 431-440
Din raportul pantelor

rezulta raportul molar
de implicare a ionului
Tb(III) si Ciclopirox, 1:3
(1,09/0,39 = 2,79 3)
317
HO
O
N C
M.I. Walash; M.S. Rizk; M.I. Eid;

M. El-Sayed Fathy
OH
H2N
Acta Pharm., 2006:56, 431-440
CH3
(6-ciclohexil-1-hidroxi-4-metil-2(1H)-piridon +
+ 2-aminoetanol (amestec in raport molar 1:1)
HO
3+
3
CH3
H2EDTA
+
-3H
CH2COO
Tb
N C
HOOCH2
Tb
2-
N
HOOCH2
CH3
CH2COO
pH: 10 (tampon borat) ; lex = 295 nm ; lem = 485 nm & 545

nm
318
Spectrometrie de
absorbie n domeniul
infrarou mijlociu (IR)
Bazele teoretice ale spectrofotometriei IR

Localizare spectral : 2500 50000 nm (4000 200 cm-1)
319
Mecanismul de producere a absorbiei : tranziii ntre strile de vibraie

ale moleculelor probei
Spectrofotometria IR ofer informaii despre vibraiile interne ale
moleculelor sau despre vibraiile reelei cristaline (dac proba este
solid)
Spectrofotometria IR ofer informaii despre structura moleculelor
probei
Spectrofotometria IR se utilizeaz frecvent pentru identificarea unei substane
(spectrele IR sunt bogate n informaii) dar se utilizeaz mai rar pentru
determinarea cantitativ a componentelor unei probe (radiaia difuz este
nsemnat n IR)
Obs. Spectrometria Raman este o alt tehnic (complementar tehnicii IR)
care permite identificarea unei substane datorit vibraiilor moleculare.
320
n timpul vibraiei unei molecule se modific, periodic n timp, elementele

geometrice: lungimea legturilor covalente, unghiul dintre dou legturi covalente
centrate pe acelai atom sau unghiul diedru definit de trei legturi covalente
adiacente.
Cteva coordonate interne
La o molecul biatomic,
numarul de und al vibraiei
de alungire a legturii
covalente este:
~
n
k a ,b
1
2 c a ,b
1
1
+
ma mb
a ,b
321
n timpul tranziiei de vibraie se modific geometria moleculelor (modificarea

coordonatelor interne). n principiu, la fiecare tranziie de vibraie se modific
toate lungimile de legtur i toate unghiurile de legtur i diedre ale
moleculei. n anumite condiii ns se poate corela, n msur satisfctoare,
apariia unei benzi IR cu prezena n molecula probei a unor fragmente
structurale (unele tipuri de legturi sau unele grupri funcionale). Aceste
corelri aproximative sunt justificate n urm-toarele cazuri :
- o legtur covalent leag doi atomi dintre care unul are masa mult diferit de masa
majoritii atomilor din molecul
(de exemplu legturile ntre H i un atom mai greu) ;
- o pereche de atomi posed o legtur multipl (dubl, tripl), cu o constant de
for mult diferit de constanta de for a celorlalte legturi din molecul ;
- atomii dintr-o grupare funcional formeaz un ansamblu care are stri de

vibraie oarecum independente de strile de vibraie ale restului moleculei (de
exemplu, gruparea amidic, nucleele aromatice, gruprile alchilice etc.).
Dup msura contribuiei unor fragmente moleculare la apariia

unor benzi de absorbie, frecvent se deosebesc urmtoarele tipuri
de vibraii corelate cu tipuri ale benzilor de absorbie :
- vibraii "caracteristice" de valen ("stretching") ;
- vibraii "caracteristice" de deformare a unghiului de
legtur ("scissoring") ;
- vibraii "caracteristice" de deformare ale unor unghiuri
diedre ("rocking", "wagging", "twisting") ;
- vibraii "caracteristice" de vibraie ale unor cicluri
("breathing") ;
- " vibraii caracteristice de grup " ale unor grupri funcionale

(ex. gruparea amidic)
322
Reprezentarea modurilor normale de vibraie ale unor grupuri de atomi :

a) gruparea de tipul XY2 ( de exemplu >CH2 , >CCl2 etc. )
323
Reprezentarea modurilor normale de vibraie ale unor grupuri de atomi : 324
b) gruparea de tipul -XY3 (de exemplu -CH3 , - CCl3 etc.)
325
Reprezentarea modurilor normale de vibraie ale unor grupuri de atomi :
c) gruparea XY (de exemplu C H , C Cl etc.)
326
Absorbtiile caracteristice ale unor fragmente moleculare
d) gruparea
C-H
327
C-H
e) gruparea
vibraia de valen:
3300 - 3380 cm-1 (faz gazoas)

3310 - 3320 cm-1 (soluie de CCl4)
Banda intens
caracteristic
vibraie de deformaie: 610 - 680 cm-1 (una sau dou benzi intense)
f) gruparea Car H
vibraie de valen:
3000 - 3100 cm-1 (interpretare dificil)
vibraii de deformare:
- n cazul benzenului: 671 cm-1

- n cazul derivailor substituii:
5 H adiaceni: 730 - 770 cm-1

4 H adiaceni: 735 - 770 cm-1
3 H adiaceni: 750 - 810 cm-1
2 H adiaceni: 800 - 860 cm-1
1 H : 835 - 875 cm-1
; 690 - 710 cm-1 ;

;
;
;
328
Numere de und caracteristice de vibraie ale unor fragmente moleculare

g) alte cteva domenii spectrale de absorbie corelate cu diferite fragmente de
structur molecular
329
330
Literatura de specialitate conine multe date referitoare la domeniul

spectral de apariie a benzilor de absorbie determinate de vibraiile
normale ale unor grupe funcionale
Aspecte practice ale spectrofotometriei IR
Starea probelor supuse analizei IR :
- starea gazoas ( mai rar n controlul medicamentelor )

- starea lichid ( film lichid )
- stare dizolvat
- starea dispersat ( proba solid n ulei de parafin Nujol )
- starea solid microcristalin - comprimat n KBr sau polietilen
- tehnica ATR
331
Aspecte practice ale spectrofotometriei IR
332
Tehnica ATR
(Attenuated Total Reflexion)
Includerea probei
microcristaline n
comprimat de KBr
sau de polietilen
prob pstoas
Prisma ATR
presiune
a)
2
8
4
7
spre pompa de vid
prob pstoas
IR
Prisma ATR
IR
n
b)
IR
prob lichid
IR
(cm-1)
333
Domeniu de transparen
(pentru transmisie de 10 % la
grosimea de 2 mm)
Solubilitate n ap
(g/100 g)
Cuar (Infrasil)
50000 2220
insolubil
MgF2 (Irtran 1)
10000 1087
0,008 (la 18 oC)
ZnS (Irtran 2)
10.000 680
insolubil
CaF2 (Irtran 3)
25000 870
0,0015 (la 20 oC)
ZnSe (Irtran 4)
10000 454
insolubil
MgO (Irtran 5)
40000 1175
0,009 (la 30 oC)
Safir (Al2O3)
58820 1540
insolubil
As2S3
16660 870
insolubil
KRS-5 (TlBr/TlI)
20000 250
0,05 (la 20 oC)
KRS-6
(TlBr TlCl)
47600 295
0,32 (la 20 oC)
NaCl
47600 385
35,7 (la 0 oC)

39,1 (la 100 oC)
Diamant
40000 125
insolubil
Polietilen
625 sub 50
insolubil
Material
334
335
336
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
337
338
339
340
341
342
343
Spectrometrie Raman
344
Chandrasekhara Venkata Raman

(1888 1970)
Spectrometrie Raman
345
Surs alternativ de informaii despre strile de vibraie ale materiei,

complementar spectroscopiei n infrarou (IR)
Probele studiate cu aceast tehnic pot fi gazoase (mai rar), lichide
sau solide (mai frecvent), cristaline sau amorfe.
- radiaia excitatoare, care delimiteaz aria investigat a probei, poate fi focalizat
la dimensiuni mai mici n tehnica Raman dect n tehnica IR ;
- emisia Raman este generat prin alt mecanism (alte reguli de selecie) dect
absorbia IR, n consecin cele dou tehnici se completeaz fericit n privina
informaiilor de structur molecular sau cristalin ;
- n timp ce la analiza IR a probelor amorfe sau microcristaline se urmrete
numai o singur mrime (absorbana), la tehnica Raman se poate urmri
att intensitatea de emisie ct i gradul de depolarizare n funcie de numrul
de und a radiaiei emise de prob ;
- spre deosebire de tehnica IR, n care chiar urmele de ap pot compromite
analiza, n tehnica Raman probele se pot dizolva chiar i n ap, deoarece
benzile Raman ale apei sunt slabe i largi, iar sticla este tranparent n
domeniul spectral utilizat (materialele transparente n IR deseori sunt
higroscopice)
Spectrometrie Raman
346
Din punctul de vedere al generrii semnalului util, spectroscopia Raman este o

tehnic de emisie de radiaie n contrast cu spectroscopia uzual IR la care se
sesizeaz numerele de und ale radiaiei incidente la care proba absoarbe
preferenial radiaia incident.
Din punctul de vedere al informaiei oferite, spectroscopia Raman oglindete
modurile normale de vibraie ale moleculelor (sau ale reelelor cristaline n cazul
probelor solide), asemntor cu spectrofotometria IR.
Din punctul de vedere al domeniului spectral utilizat, tehnica Raman se practic
n domeniul ultraviolet (mai rar) sau vizibil (mai frecvent).
Din punctul de vedere al complementaritii cu spectroforometria IR :
- La dou structuri izomere, n spectrul IR al izomerului cu simetria molecular mai
redus se pot observa mai multe benzi de absorbie dect n spectrul IR al
izomerului cu simetria mai avansat ;
- Dac o molecul are centru de inversiune, atunci toate modurile normale de vibraie
IR-active sunt Raman-inactive i toate modurile normale de vibraie Raman-active
sunt IR-inactive; cu alte cuvinte, informaiile provenite din spectrele IR i Raman
sunt n totalitate complementare n aceste cazuri (regula de excluziune).
Spectrometrie Raman
347
Aspecte de construcie i de funcionare

Detector CCD
Laser si
filtru optic
Retea de
difractie
Oglinda
Div.
Oglinzi
Proba Lentila
Filtru
Noch
Fanta de intrare ajustabila
Mecanismul de generare a semnalului Raman
348
349
Spectrometrie
Raman
( IE ) mprtiere Rayleigh
( S ) semale (benzi) Stokes
( aS ) semnale (benzi) anti-Stokes
Grupare chimic
Domeniu ( cm-1 )
Asignare
Intensitate n
comparaie cu IR
RC
CR
2300 2190 ( i )
n(C
C)
Mai intens n Raman

dect n IR
RC
CR
2140 2100 ( i )
n(C
C)
Mai intens n Raman

dect n IR
>C=C<
1675 1600 ( m-i )
n(C=C)
respiraie
de nucleu
350
Mai intens n Raman

dect n IR
Mult mai intens n
Raman dect n IR
Aromatic
1010 990 ( fi )
Aromatic
1620 1580 ( m-i )
n(C=C)
Mai intens n Raman

dect n IR
Nitril
2260 2220 ( i )
n(CN)
Mai intens n Raman

dect n IR
Aldehide
1730 1700 ( m )
n(C=O)
Mai intens n IR dect

n Raman
Cetone
1750 1650 ( m )
n(C=O)
Mai intens n IR dect

n Raman
850 650 ( i )
n(CCl)
Mai intens n Raman

dect n IR
CCl
351
Acid acetilsalicilic ( Spectru Raman )

Excitare : 488 nm
Vibratia de deformare a patru
atomi de hidrogen adiacenti
grefati pe nucleu benzenic
352
Paracetamol ( Spectru Raman )

Excitare : 488 nm
Vibratia de deformare a doi
atomi de hidrogen adiacenti
grefati pe nucleu benzenic
353
Metode termice de
analiz
Metode termice de control analitic al medicamentelor
354
Avantajul metodelor termice: permit studierea probelor neomogene din

punct de vedere chimic sau fizic.
Metode termice:
- termomicroscopie ;
- analiz termogravimetric (ATG - TGA) ;
- analiz termodiferenial (ATD - TDA) ;
- calorimetrie diferenial cu scanare
("Differential Scanning Calorimetry" - DSC)
Termomicroscopie: n timpul nclzirii progresive a probei se

observ vizual schimbrile produse (topire, sublimare, schimbare a
formei de cristalizare etc.)
Studiile de termomicroscopie se realizeaz cu microscoape speciale
(ex. de tip Boetius). La unele termomicroscoape proba se poate urmri
cu lumina polarizat.
1 surs de lumin
2 mas de prob nclzit
3 termometru
4 obiectiv
5 surs de lumin
6 ocular
7 mner pentru
poziionarea probei
355
356
357
Informaii obinute prin termomicroscopie:

- observarea schimbrilor de faz (topire, modificarea formei de
cristalizare) i a temperaturii la care acestea au loc ;
- formarea amestecurilor eutectice, specifice unor amestecuri de
substane ;
- decelarea impuritilor n probe cristaline prin modificarea
(scderea) temperaturii de topire ;
- evidenierea formelor polimorfe prin extinderea domeniului de
topire ;
- observarea fenomenului de birefringen (n lumina polarizat),
fenomen caracteristic unor substane optic active n forma cristalin.
358
Amestec eutectic binar
TA temperatura de topire a
componentei pure A
TB temperatura de topire a
componentei pure B
PE punct eutectic
TE temperatura eutectic
n stare lichid (topitur) substanele A i B sunt miscibile n orice proporie,

dar n stare solid sunt nemiscibile (la solidificare se formeaz cristale de
componente A i B pure)
Eutectic binar Fenacetina acid p-aminobenzoic
359
xe(Fenacetina) = 0,6359
xe(ac. p-am. benz.) = 0,3641
Te = 116 oC

Amestec eutectic
binar i compus
stoechiometric
TA temperatura de topire a
componentei pure A
TB temperatura de topire a
componentei pure B
PE1 , PE2 puncte eutectice
TE1 , TE2 temperaturi
eutectice
360

Amestec eutectic ternar
TA , TB , TC temperaturile de
topire ale componentelor
pure A , B respectiv C
EAC , EBC , EAB puncte
eutectice binare
EABC punct eutectic ternar
Ex.
ac. acetilsalicilic (60 %)
paracetamol (20 %)
uree (20 %)
Te = 72 oC
361
362
Exemple de aplicare a termomicroscopiei n controlul

medicamentelor
Aminofenazon (I)
p. t. 106,4 oC
Derivat N-demetilat (II)

p. t. 106,3 oC
Diferena numai
de 0,1 oC
Att compusul (I) ct i compusul (II) formeaz amestec eutectic cu acetanilid

(n raport molar 1 : 1) ; cele dou amestecuri eutectice au temperaturi de topire
mai diferite:
amestecul (I - acetanilid) are p. t. 61 oC

amestecul (II - acetanilid) are p. t. 63 oC
Diferena de 2 oC
363

medicamentelor
Fenilbutazon
Fenilbutazona are trei forme de

cristalizare care se pot evidenia
prin termomicroscopie:
formele I , II , III .
La rcirea lent a topiturii cristalizeaz formele I i II

La rcirea rapid a topiturii cristalizeaz formele I i III
Apariia formelor caracteristice de cristalizare n condiii precizate de rcire
permite identificarea compusului n prezena altor ingrediente.
364

medicamentelor
Cristalele individuale de rifampicin
prezint birefringen optic la

iluminarea lor cu lumin polarizat.
(FR-X p. 828)
Rifampicin
Birefringen : proprietatea unui mediu de a manifesta valori diferite de indice

de refracie n funcie de orientarea planului de polarizare a unei radiaii planpolarizate n raport cu axele cristalografice (se poate evidenia cu microscop
prevzut cu sistem de polarizare).
Formele polimorfe ale Paracetamolului

4
Forma I
(sistem monoclinic)
(din solutie)
Forma II
(sistem ortorombic)
(din topitura)
365
366
Formele polimorfe ale Paracetamolului
Forma I : monoclinica
Termodinamic forma stabila ; se obtine prin cristalizare din solutii
Nu se poate presa in comprimate decat in prezenta liantilor

Birefringenta: ne no = 0,124
Forma II : ortorombica
Se poate pastila usor, dar se obtine foarte greu (prin cristalizare din topitura)
Birefringenta: ne no = 0,349
De regula: din solutie cristalizeaza mai repede forma care este mai putin
stabila din punct de vedere termodinamic.
b-estradiol cristalizat din acetat de etil (lumina polarizata)
b-estradiol
20 m
367
368
b-estradiol cristalizat din alcool izopropilic (lumina polarizata)
20 m
369
6
Transformarea solid-solid (recristalizarea in timpul incalzirii

fara topire). Cristalele transparente cresc pe seama celor
netransparente (microscopie cu polarizoare incrucisate)
20 m
Observarea microscopica a sublimarii. Cristalele se

formeaza pe lamela superioara a probei. Se observa
formarea a cel putin doua feluri de cristale.
(observare cu polarizoare partial incrucisate)
50 m
370
371
8
Desolvarea hemihidratului de b-estradiol

(observare la 90 oC cu polarizoare partial incrucisate)
100 m
372
Desolvarea hemihidratului de b-estradiol
(observare la 105 oC cu polarizoare partial incrucisate)
Se observa modificarea imaginii suprafetei cristalului
datorita pierderii solventului de cristalizare.
100 m
Depistarea prin microscopie optica a impuritatii cristaline (prezenta

in urme) intr-o proba cristalina. Se observa microcristalul de NaCl
lipit de cristalul compusului majoritar. Prin difractie de raze X nu s-a
sesizat prezenta urmelor de NaCl.
9
373
374
Analiza termogravimetric (ATG - TGA)

Esena metodei : n timpul nclzirii progresive se urmrete modificarea masei
probei analizate.
ATG se preteaz la urmrirea proceselor nsoite de modificare de mas
(descompunere termic, deshidratare, volatilizare, sublimare, oxidare etc.) oferind
informaii asupra temperaturilor la care ncepe i la care se termin un proces. Din
modificarea de mas se pot formula ipoteze privind compozi-ia probei i natura
procesului.
n controlul de medicamente ATG permite determinarea puritii, stabilitii i
identitii chimice a substanelor analizate, determinarea simultan a mai multor
componente chimice i urmrirea cineticii (neizoterme) a reaciilor chimice.
Curba termogravimetric - reprezentarea masei n funcie de temperatura
probei : m = f(T)
Prile mai abrupte ale curbelor - procese. Palierele relativ orizontale - specii
chimice distincte, stabile la temperatura respectiv.
375
Analiza termogravimetric (ATG - TGA)

Schema unei
termobalane
C cuptor
TC termocuplu
B solenoid
M miez magnetic
P prob
S surs de lumina
O oglind
FD fotodiod
F1 , F2 fante
376
377
Descompunerea termic
a monohidratului
oxalatului de calciu
Ca(COO)2 H2O
Ca(COO)2
CaCO3
Ca(COO)2 + H2O
CaCO3 + CO
CaO + CO2
n unele variante ATG :

- se reprezint grafic derivata
masei probei n raport cu
temperatura, n funcie de
temperatur ;
- proba poate fi ntr-un gaz
inert sau ntr-un spaiu vidat
378

Analiza termodiferenial (ATD - TDA)
Esena metodei : nregistrarea diferenei de temperatur ntre interiorul unei

probe i interiorul unei referine inerte (care n intervalul de temperatur
considerat nu sufer nici un proces chimic), n timp ce temperatura spaiului
n care ele se gsesc se mrete progresiv.
La ATD procesele urmrite nu trebuie neaparat s fie nsoite de
modificarea masei probei (spre deosebire de ATG).
Dac la o temperatur se declaneaz n prob un proces exoterm, acesta
grbete nclzirea probei n raport cu referina, deci n interiorul probei
temperatura momentan depete pe cea din interiorul referinei.
Dac n prob are loc un proces endoterm, acesta consum o cantitate de
cldur, deci temperatura n interirorul probei crete cu vitez mai mic dect
n interiorul referinei.
Referina: deseori este Al2O3 .
379

ATD ofer informaii despre procesele chimice i fizice care sunt

nsoite de modificri de entalpie i despre valorile de temperatur la
care ncep i la care se sfresc aceste procese.
Procese tipice, studiabile prin ATD: uscarea, pierderea apei de
hidratare, modificarea formei de cristalizare, topirea, sublimarea,
adsorbia, desorbia, polimerizarea, izomerizarea, descompunerea
termic etc. Pentru fiecare tip de proces se poate msura variaia de
entalpie a probei.
Forme posibile de prob: pulberi, film subire, (micro)cristale,

amestecuri eterogene (ex. comprimate).
380

Schema unui montaj ATD
381
382
Termograma
ATD tipica
Intensitatea semnalului este proporional cu cantitatea speciei chimice

care l-a generat; deci dac se cunoate variaia molar de entalpie a
procesului asociat cu semnalul detectat, se pot realiza determinri
cantitative ale componentelor de interes coninute n amestecuri (chiar
eterogene).
383
Calorimetrie diferenial cu scanare (Differential Scanning

Calorimetry DSC)
Esena metodei : msurarea energiei (cantitii de cldur) care trebuie
introdus n sau ndeprtat din proba analizat, pentru a menine proba la
aceeai temperatur cu o referin inert, n timp ce temperatura incintei, n care
se gsete proba i referina, crete progresiv (cu viteza prescris de
experimentator).
Dac la o temperatur oarecare n prob se declaneaz un proces endoterm,
atunci puterea de nclzire a probei trebuie mrit pentru a menine la aceeai
temperatur cu referina. Se reprezit grafic puterea introdus (sau ndeprtat)
n (sau din) prob n funcie de temparatura momentan a incintei n care se
gsesc proba i referina.
Diferena ntre ATD i DSC :
- la ATD semnalul urmrit este o diferen de temperatur

- la DSC semnalul urmrit este o putere (cantitate de cldura / unitate de
timp)
384
Calorimetrie diferenial cu scanare (DSC)

Forma tipic a unei curbe DSC :
Pentru etalonare:
Indiu
Ttop = 156,4 oC
ltop = 28,47 kJ/kg

Uree
Ttop = 132,7 oC
ltop = 241,89 kJ/kg
385

Detalii constructive si de functionare
386
387

Transformari de faza forma idealizata a traseului DSC
388
Comportarea temodinamica a formelor de cristalizare ale acidului
flufenamic (3 forme din cele 7 cunoscute). Formele I si III sunt
polimorfi enantiotropici (temperatura de transformare 42 oC); formele II
si III sunt polimorfi enantiotropici (temperatura de transformare 104 oC);
formele I si II sunt polimorfi monotropici.
Ttop(I) = 131 oC
Ttop(II) = 128 oC
Ttop(III) = 126 oC
389
endo

Transformari de faza topirea acidului acetilsalicilic
390
endo

Traseul de topire a Carbamazepinei (forma de cristalizare I)
391
endo

Traseul de topire a Carbamazepinei (forma de cristalizare III)
endo

Traseul de topire a monohidratului de lactoza
392

Procedeul de determinare a temperaturii de topire
393

Decelarea impuritatilor determinarea puritatii
394
Determinarea puritatii din curba DSC de topire
395
AF
F
A PQ
F Fractia transformata in
topitura pana in momentul cand
temperatura este Tm
T0 Tm
R T02
x2
H top
R T02 x 2
T0 TF F
H top
T0 Tm
F
T0 TF
396
Relatia (1) rezulta din ecuatia vant Hoff
(1)
(2)
(3)
1 R T02 x 2
TF T0
(4)
F H top
T0 reprezint temperatura de topire a

substanei pure;
Tm este temperatura de topire a
substanei impurificate;
x2 este fracia molar a impuritii;
Htop este entalpia molar de topire a
substanei pure;
R este constanta universal a gazului
ideal.
La impartirea (1) cu (2) rezulta (3)

Eliminand Tm din (1) si (3) rezulta
(4)
397
Ordonata la origine a dreptei: T0

Val. abs. a pantei:
R T02 x 2
H top
Daca se cunoaste entalpia molara de

topirea componentei dominante, se poate
calcula fractia molara a impuritatii
Determinarea puritatii Sulfapiridinei prin DSC de topire
x2
H top (T0 Tm )
R T02
; R 8,314
J
mol K
398
T0 = 428,14 K
Tm = 427,91 K
Htop = 27,845 kJ/mol
x2 = 0,0042
399
Metode titrimetrice de
control al
medicamentelor
400
Joseph Louis Gay-Lussac

(1778 - 1850)
initiatorul metodelor titrimetrice
Metode titrimetrice de control al medicamentelor
401
adugarea controlat a unui reactiv (R) la sistemul analizat,

care conine substana de interes (X) ntr-un solvent adecvat (S). Adugarea
reactivului de titrare (R) se continu pn se consum integral substana X.
Consumarea integral a substanei X (atingerea punctului de echivalen) este
indicat printr-o metod chimic sau fizic adecvat. Volumul solutiei (R),
consumat pana la punctul de echivalenta, este Ve.
Titrimetrie :
Metode chimice : utilizarea unui indicator (I). La consumarea substanei X

(i numai atunci), reactivul reacioneaz cu indicator transformnd dintr-o
form chimic iniial (I1) ntr-o form chimic nou (I2). Formele I1 i I2 se
deosebesc prin proprieti vizibile (culoare, fluorescen).
Metode fizice :
indicare conductometric ;
indicare poteniometric ;
indicare amperometric ;
. . . etc . . .
402
X+R Y+P
I1 + R Q + I 2
X analit (compusul care urmeaza a fi determinata cantitativ)
R reactivul de titrare
(care se adauga controlat in vasul de titrare)
I1 indicatorul chimic in forma initiala
I2 indicatorul chimic in forma finala
403
X+R Y+P
(1)
I1 + R Q + I2
(2)
V
f
Ve
Titrare simpla (directa)
404
Titrare indirecta
Alura generala a curbelor de titrare (I)
405
Alura generala a curbelor de titrare (II)
406

Metode de titrare dup tipul reaciei chimice implicate
- titrare acido/bazic (acidimetrie) AH + B
A + BH+
- titrare complexonometric (complexonometrie)

Men+ + H2Na2EDTA
[Me(EDTA)](n-2)+ + 2H+
- titrare cu formare de precipitat

- titrare redox (oxidimetrie)
- permanganometrie ( KMnO4 )
- iodometrie ( I2 , KI3 , IBr)
- bromatometrie ( KBrO3 )
- cerimetrie ( Ce(SO4)2.4H2O )
- cromatometrie ( K2Cr2O7 )
- ascorbinometrie ( acid ascorbic )
407
Reacii redox implicate n titrrile cu schimb de electroni

(oxido-reducere)
-
Permanganometrie
MnO4 + 8H+ + 5e
Iodometrie
I3 + 2e
Bromatometrie
BrO3 + 6H+ + 6e
3I
Mn2+ + 4H2O
Br + 3H2O
BrO3 + 6H+ + 5Br
Cerimetrie
Ce4+ + e
Cromatometrie
Cr2O72 + 14H+ + 6e
Ascorbinometrie
C6H8O6
3Br2 + 3H2O
Ce3+
2Cr3+ + 7H2O
2H+ + 2e + C6H6O6
408
409
Acidimetrie
Titrarea unui acid monobazic tare cu o baz tare, la 22 oC, pentru

concentraii analitice diferite ale acidului:
(1) C = 1 M; (2) C = 10-1 M; (3) C = 10-2 M; (4) C = 10-3 M; (5) C = 10-4 M
14
(1)
(2)
12
(3)
(4)
10
(5)
pH
8
PE (pH 7,00)
6
(5)
4
(4)
(3)
2
(2)
(1)
0
0
0.2
0.4
0.6
0.8
grad de titrare (f)
1.2
1.4
1.6
410
Acidimetrie
Titrare ale acizilor slabi monobazici cu o baz tare (NaOH 0,1 M)
Constantele de aciditate: (1) 10-3 M; (2) 10-4 M; (3) 10-5 M; (4) 10-6 M;
(5) 10-7 M; (6) 10-8 M; (7) 10-9 M; (8) 10-10 M
14
12
10
(8)
(7)
8
pH
(6)
(5)
(4)
(3)
(2)
(1)
2
HCl
0
0
0.2
0.4
0.6
0.8
grad de titrare (f)
1.2
1.4
1.6
Titrare bazelor tari monoacide cu un acid tare (NaOH 0,1 M)

Concentratia initiala a bazei: (1) 1 M; M (2) 10-1 M; (3) 10-2 M; (4) 10-3 M; (5) 10-4 M
14
(1)
(2)
12
(3)
(4)
10
(5)
pH
8
PE (pH 7,00)
6
(5)
4
(4)
(3)
2
(2)
(1)
0
0
0.2
0.4
0.6
0.8
grad de titrare (f)
1.2
1.4
1.6
411
412
Titrare bazelor slabe monoacide cu un acid tare (HCl 0,1 M)

Constantele de bazicitate: (1) 10-3 M; M (2) 10-4 M; (3) 10-5 M; (4) 10-6 M;
(5) 10-7 M; (6) 10-8 M; (7) 10-9 M; (8) 10-10 M
14
NaOH 0,1
M
(1)
12
(2)
10
(3)
(4)
pH
(5)
(6)
(7)
(8)
0
0
0.2
0.4
0.6
0.8
grad de titrare (f)
1.2
1.4
1.6

Exemple de determinri titrimetrice :
indici pentru caracterizarea chimic global a amestecurilor
1. Indice de saponificare , IS (mg KOH/g prob)
IS exprim cantitatea de acid liber i cantitatea de esteri din proba

analizat. Punctul de echivalen se surprinde cu un indicator care
vireaz la pH mai ridicat.
R-COOH + KOH
R-COOR' + KOH
m1 (g)
prob
m2 (mg)
KOH
R-COO K
R-COO K + H2O
m2 (mg)
IS =
m1 (g)
+ R'OH
413
414
Indice de saponificare
2 g prob (m)
25 ml soluie KOH n etanol (0,5 M)
Refluxare (30 60 minute)
25 ml ap de 80 oC (fr CO2)
Soluie de fenolftalein (n etanol)
Titrare pn la virajul
roz
incolor
V ml soluie HCl n etanol (0,5 M)

(V0 pentru proba martor)
IS =
(V0 V).28,05
m
28,05 reprezint jumtatea masei moleculare a KOH

2. Indice de aciditate , IA (mg KOH/g prob)
IA exprim cantitatea de acid liber din prob. Punctul de echivalen se
surprinde cu un indicator care vireaz la pH mai sczut.
R-COOH + KOH
m1 (g)
prob
m2 (mg)
KOH
R-COO K + H2O
IA =
m2 (mg)
m1 (g)
FR-X : reactiv de titrare: soluie KOH (0,1 M) n ap

indicator : fenolftalein ( viraj : incolor
3. Indice de ester , IE (mg KOH/g prob)
roz )
IE = IS - IA
415

3. Indice de hidroxil , IH (mg KOH/g prob)
IH exprim numrul de miligrame de hidroxid de potasiu echivalent cu
acidul acetic consumat prin acetilarea cantitii de 1 g prob
416
417

4. Indice de iod , II (g iod/100 g prob)
II exprim numrul de grame de iod fixat de 100 g prob
(iodul poate fi fixat ca urmare a unei reacii de oxidare sau ca urmare

a adiiei la partea nesaturat a moleculelor probei)
Red - 2em1 (g)

prob
Ox ; I2 + 2e-
2I - II =
m2 (g)
m2 (g) 100
m1 (g)
FR-X : reactiv de iodurare : monobromur de iod (IBr)

retitratea excesului de iod : cu tiosulfat de sodiu ;
indicator : soluie de amidon (viraj : albastru
incolor)

5. Indice de peroxid , IP . . .
. . . este numrul de militri de soluie 0,01 M tiosulfat de sodiu oxidat de
iodul eliberat din acidul iodhidric prin aciunea peroxizilor din 1 gram
prob analizat (FR-X, pag. 994).
. . . este cantitatea de peroxid, exprimat ca numr de miliechivaleni de

oxigen activ, care se gsete n 1000 grame prob (DA-IX, pag. 86).
R-O-O-R + 2I + 2H+
R-OH + R-OH + 2I2
m (g) prob
2Na2S2O3 + I2
V (ml) soluie
0,01 M
(V0 la martor)
2-
4Na + 2I + S4O6
IP = 10 .
V(ml) V0(ml)
m(g)
418
419

Exemple (FR-X)
Prob
IS
IA
IH
II
IP
94 - 106
<1
18 - 32
<6
Alcool cetilstearilic
<2
<1
200 - 220
<3
Alcool cetilstearilic
emulgator
<1
180 - 220
<3
Balsam de Tolu
160 - 220
112 - 168
Unt de cacao
188 - 195
< 2,25
32 - 38
Cetaceu
115 - 135
<2
<8
<8
< 1,5
Ulei de floarea soarelui
185 - 196
<2
119 - 136
< 10
Ulei de floarea soarelui

neutralizat
< 0,2
<5
45 - 60
<2
65 - 85
19 - 24
Lanolin anhidr
Ulei volatil de lmie
Polisorbat 80

Titrri in mediu neapos
Solvenii neapoi se utilizeaz n titrrile acido-bazice (frecvent) i n
titrrile redox (mai rar)
Din punct de vedere al schimbului de proton, solvenii pot fi :
- protogenici (acid acetic glacial, acid formic)
- protofili (dioxan, piridin, alcoolii, formamid, aceton)

- polari aprotici (dimetilsulfoxid, hexametil-fosfotriamid)
- indifereni (benzen, toluen, tetraclormetan, cloroform)
- amfiprotici (ap)
420
421

Titrarea unui acid slab (AH) cu o baz tare (B)
ntr-un solvent protofil (S)
AH + B
BH + A
422

Titrarea unei baze slabe (B) cu un acid tare (AH)
ntr-un solvent protogen (SH)
B + AH
BH + A
423

Criterii de alegere a solventului la titrrile n mediu neapos
1. Analitul, reactivul de titrare i produii de reacie trebuie s fie solubili n
solventul ales
2. Un solvent protogenic exalteaz caracterul bazic (niveleaz bazicitatea

substanelor) i difereniaz substanele cu caracter acid
3. Un solvent protofil exalteaz caracterul acid (niveleaz aciditatea
substanelor) i difereniaz substanele cu caracter bazic
n consecin :
- un acid slab se titreaz ntr-un solvent protofil (bazic) cu o baz puternic
(KOH, CH3ONa, (C4H9)4NOH etc.)
- o baz slab se titreaz ntr-un solvent protogenic cu un acid tare (HClO4)
- pentru titrarea difereniat a doi acizi slabi se utilizeaz un solvent

(cu
caracterul acid intermediar celor doi acizi)
protogenic
- pentru titrarea difereniat a dou baze slabe se utilizeaz un solvent protofil

(cu caracterul bazic intermediar celor doua baze)
424

Exemple de titrare n mediu neapos
1. Titrarea maleatului de mepiramin (Mepyramini maleas) cu
acid percloric n acid acetic anhidru (FE-5)
2 CH3COOH
2 ClO4
2 CH3COO
2 HClO4
1 ml soluie 0,1 M de acid percloric

corespunde la 20,07 mg C22H27N3O5
425

2. Titrarea fenitoinei (Phenytoinum) cu metoxid de sodiu n
dimetilformamid (DMFA) (FE-5)
DMFA
CH3OH
CH3O
DMFAH
1 ml soluie 0,1 M de metoxid de sodiu

corespunde la 25,23 mg C15H12N2O2

3. Determinarea urmelor de ap prin titrare Karl Fischer (FR-X)
Reactivul : dioxid de sulf, iod i piridin dizolvat n metanol absolut
Metoda se poate utiliza pentru determinarea apei chiar n urme.
1935 publicarea metodei originale Karl Fischer (cu piridin);
1979 mbuntiri aduse de Eugen Scholz (cu dietanolamin i mai trziu cu
imidazol);
1980 - 1986 alte mbuntiri ale firmei Riedel-de Han.
CH3OH + SO2 + B
+
[BH ][CH3SO3 ]
H2O + I2 + [BH ][CH3SO3 ] + 2B
[BH ][CH3SO4 ] + 2BHI
( B = baz: piridin, dietanolamin, imidazol)

Reactivul propriu-zis: anionul metilsulfit care se oxideaz cu iod la anion
metilsulfat, iar reacia necesit ap. Conform cercetrilor recente, baza ideal
este imidazolul.
426

Determinarea apei prin
titrare Karl Fischer
(FR-X)
Indicarea punctului
de echivalen:
- vizual (indicare nesigur);
- la folosirea piridinei drept baz (pH 4 - 5) galben
maro (SO2 cu I2
formeaz un complex galben n piridin);
la folosirea imidazolului drept baz (pH 6 - 7) - nu se formeaz complexul
galben
alte metode de indicare.
- electrometrice: biamperometrice, bipoteniometrice, conductometrice etc.
- fotometrice (525 - 600 nm).
427
428
Determinarea apei prin titrare Karl Fischer (FR-X)
Vizualizarea
spectrofotometric
a punctului de
echivalen

Substanele insolubile n metanol absolut se
dizolv n etanol absolut, cloroform sau acid
acetic anhidru.
T.(VII VI) .100
C% =
C% = concentraia de ap n prob (% m/m);
m
VI = volumul de reactiv KF consumat la etapa I a titrrii (ml);
VII = volumul total de reactiv KF consumat inclusiv etapa II a titrrii (ml);
T = titrul reactivului KF (mg ap / ml reactiv);
m = masa probei (mg)
429

Ecuaiile chimice nu reflect complet evenimentele din sistem,

deci calculele nu se pot baza pe stoechiometria lor. Din acest
motiv se folosesc standarde cu coninut cunoscut de ap.
Standard solid :
Tartrat de sodiu.2 H2O (15,66 % H2O, se dizolv relativ
bine n metanol absolut)
Standard lichid :
solveni cu coninut cunoscut de ap, pstrai n fiole nchise
ermetic (sudate)
430
431

A = anod
C = catod
SA = spaiu anodic
SC = spaiu catodic
F = plac poroas
EI = electrozi indicator
Amestec anodic i catodic:
SO2 + imidazol (sau alt substan
bazic) + KI n metanol i cloroform
Proba: n spaiul anodic (SA)
Generare de reactiv n spaiul anodic :
2I
- 2e-
I2
Proces de electrod n spaiul catodic :
2H + 2e-
H2

Surse de erori n titrarea Karl Fischer
a) La titrarea apei din cetone, metanolul poate reaciona cu

cetona genernd ap:
+ 2 CH3OH
Ceton
+ H2O
Acetal
Remediu: metanolul este nlocuit cu ali solveni

(ex. 2-cloretanol, 2-metoxietanol)
432

b) Dac proba conine cantiti apreciabile de aldehide, se

consum ap din prob:
Remediu:
tehnici speciale de titrare :"flying start ( se reprezint grafic
viteza de consumare a reactivului adaugat n funcie de timp
curba de titrare ; prin extrapolarea prii finale a curbei de
titrare se elimin sursa de eroare vezi n continuare)
433

Surse de erori n titrarea Karl Fischer - Tehnica Flying Start
Se reprezint grafic reciproca vitezei de consum al unei doze de reactiv

adugat n funcie de volumul total de titrant adugat. Cazul (I) : nu exist
proces generator de ap ; Cazul (II) : exist un proces generator de ap
434

c) Compuii organici ai sulfului, prezeni n prob, consum iod:

2R-SH + I2
R-S-S-R + 2HI
Remediu: cuplarea tiolilor cu N-etil-maleinimid
R-SH +
435

d) Prezena peroxizilor i hidroperoxizilor n prob genereaz iod:
R-OOH + 2HI
R-OH + I 2 + H2O
+ 2HI
2R-COOH + I 2
Remediu: titrare la temperatur sczut ( - 20 oC )

viteza reaciilor secundare este mult micorat
436

Exemple de determinri titrimetrice
4. Determinarea titrimetric a zaharinei (titrare acido-bazic)
Funciunea chimic sulfamidic prezint caracter acid suficient de
pronunat pentru titrare cu hidroxid de sodiu:
Metoda permite determinarea zaharinei din comprimate ; n acest scop :
- se dizolv comprimatele n ap acidulat

- se extrage zaharina cu amestec de 9 volume cloroform + 1 volum alcool
- se separ faza organic
- se evapor la sec
- se redizolv n ap
- se titreaz soluia obinut cu soluie de NaOH (0,1 M)
437

5. Determinarea titrimetric a sulfatiazolului

(titrare acido-bazic)
Substana se dizolv ntr-un amestec neutralizat de aceton-ap

(1:1 v/v) prin nclzire la 60 oC. Dup rcire se titreaz n prezena
timolftaleinei (viraj incolor
albastru persistent).
438

6. Determinarea titrimetric
a fenobarbitalului (titrare
acido-bazic)
Indicator : albastru de timol
439

7. Determinarea titrimetric a fosfatului de codein
Solvent : acid acetic anhidru (exaltarea caracterului slab bazic al anionului

dihidrogen-fosfat) ;
indicator: cristal-violet (se titreaz pn la coloraia albastr)
440

8. Determinarea titrimetric a
clorhidratului de papaverin
Proba: dizolvat n cloroform
Acetat de mercur: dizolvat n dioxan
Acid percloric: n soluie de dioxan
Indicator: galben de metanil n dioxan
(titrare pn la culoarea violet)
441

9. Determinarea titrimetric a vitaminei B1(titrare acido-bazic)
Solvent: acid acetic anhidru

Indicator: cristal-violet
442

10. Determinarea titrimetric a vitaminei C (titrare redox)
acid ascorbic
acid dehidroascorbic
Metoda de lucru: se adaug iodul n exces, iar dup terminarea

reaciei se retitreaz excesul de iod cu soluie de tiosulfat de sodiu
(indicator: amidon solubil titrare pna la dispariia culorii albastre)
443

11. Determinarea titrimetric a cloraminei B (titrare redox)
HClO + 2KI
I2 + KOH + KCl
Iodul format se titreaz cu soluie de tiosulfat de sodiu

(indicator amidon solubil)
444

12. Determinarea titrimetric a timolului (titrare redox)
Reactiv de titrare : soluie de bromat de potasiu (n prezena KBr)

Indicator : metilorange
Punct de echivalen (nu se mai consum bromul generat) : decolorarea
indicatorului metilorange
445

Exerciiu: determinarea titrimetric a timolului
Dac la titrarea unei probe s-a consumat volumul de 13,31 ml soluie de

titrare (de concentraia 0,01667 mol/l), ce cantitate de timol a coninut
proba analizat ?
Masa molecular a timolului este 150,2 g/mol.
446
447
M = 150,2 (g/mol)
V = 13,31 (ml) = 0,01331 (l)
C = 0,01667 (mol/l)
2
1 mol Timol . . . . . . . 2 moli Br2 . . . . . . . . . . . . . . 3 mol KBrO3
m
150,2 mol Timol . . . . . . . . . . . . . . . 0,01667.0,01331 mol KBrO3
0,01667 0.01331 3 150,2

m
0,049989 0,05 (g)
2

13. Determinarea Amlodipinei
3HBr
Amlodipin
3Br2
(necesar + exces)
Br2
(exces)
produsi de degradare
(incolori)
galben de metanil
(rou n mediu acid)
N2
Kanakapura Basavaiah i colab. (2005)
448
449
14. Determinarea Cofeinei prin titrimerie coulometric
10KCl
10Cl
10K + 10Cl
-
10e
10H
10Cl
(anod)
H2O
+
5Cl2
H + OH
+ 10e
(catod)
Cofein
10H
N.N.Chernysheva, I.F.Abdullin,
G.K.Budnikov: J. Anal. Chem.
2001:56(7), 663-665
Soluie KCl : 0,2 M
Soluie H2SO4 : 0,1 M
5H2
Titrare: mod galvanostatic

( i = 5 mA )
Indicare p.e. : amperostatic
( DE = 300 mV )
N-metil uree
Alloxan
450
15. Determinarea acidului salicilic i a derivailor acestuia prin

titrimerie coulometric (I)
I.F.Abdullin, N.N.Chernysheva,
Electrogenerare de halogen (clor / brom):
Soluie KCl sau KBr : 0,2 M
Soluie H2SO4: 0,1 M

2002:57(8), 721-723
Titrare: mod galvanostatic ( i = 5 mA )

Indicare p.e. : amperostatic ( DE = 300 mV )
Acidul salicilic reactioneaz cu

brom la 25 oC n raport molar 1:1
Cu clor , la temperatura camerei
reacioneaza n raporturi molare
cuprinse ntre 1:1 i 1:2,5
La temperatura de 30 oC raportul
molar al reaciei este 1:3
451
15. Determinarea acidului salicilic i a derivailor acestuia prin

titrimerie coulometric (II)
2002:57(8), 721-723
Soluie H2SO4: 0,1 M
Acidul acetilsalicilic nu reacioneaz cu halogenul electrogenerat, n schimb dup

hidroliz se poate determina acidul salicilic rezultat
posibilitatea determinrii
urmelor de acid salicilic n preparate farmaceutice cu s.a. acid acetilsalicilic
15. Determinarea acidului salicilic i a derivailor

acestuia prin titrimerie coulometric (III)
Soluie H2SO4: 0,1 M

452
2002:57(8), 721-723

Adidul p-amino-salicilic
reactioneaza cu bromul n
raport molar 1:4.
Cu clorul reacioneaz ireproductibil, conform unor rapoarte molare cuprinse ntre

1:10 i 1:14, evident datorit desfacerii oxidative a nucleului aromatic.
15. Determinarea acidului salicilic i a derivailor

acestuia prin titrimerie coulometric (IV)
Soluie H2SO4: 0,1 M

453
2002:57(8), 721-723

Spre deosebire de acidul p-amino-salicilic, Mesalazina reactioneaza usor i

reproductibil conform raportului molar de 1:4, att cu clorul ct i cu bromul.

16. Determinarea Acamprosatului de calciu
( Ph. E. ed. V )
Rin
2+
Ca
2
Acamprosat
de calciu
2
2 NaOH (0,1 M)
Rin
2+
Ca
indicarea
poteniometric a p. e.
+ 2Na
2H2O
454
455
17. Determinarea cantitativ titrimetric a Acetazolamidei ( Ph. E. ed. V )
+ NaOH
( 0,1 M n etanol )
- H2O
indicare
poteniometric
a punctului de
echivalen
dizolvare n dimetilformamid
18. Deterinarea Irbesartanului prin titrare spectrofotometrica

N. Rahman ; M.R. Siddiqui ; S.N. Hejaz Azumi (India)
Chem. Pharm. Bull. 2006:54(5), 626-631
Irbesartan : antagonist puternic,

de lunga durata, a receptorului de
angiotensina II (selectiv pentru
subspecia AT1) ; este tolerat mai
bine decat alte medicamente cu
actiune antihipertensiva
6H+ + IO3 + 5I
3I2 + 3H2O
Produs colorat, titrat

cu tiosulfat de Na
456
18. Determinarea Irbesartanului prin titrare spectrofotometrica

N. Rahman ; M.R. Siddiqui ; S.N. Hejaz Azumi (India)
Chem. Pharm. Bull. 2006:54(5), 626-631
457
N. Rahman ; M.R. Siddiqui ; S.N. Hejaz Azumi

Chem. Pharm. Bull. 2006:54(5), 626-631
458
18. Determinarea Irbesartanului prin titrare si cinetica spectrofotometrica

Curs Analiza Medicamentului

Hochgeladen von

Dokumentinformationen

Copyright

Verfügbare Formate

Dieses Dokument teilen

Dokument teilen oder einbetten

Freigabeoptionen

Stufen Sie dieses Dokument als nützlich ein?

Sind diese Inhalte unangemessen?

Copyright:

Verfügbare Formate

Curs Analiza Medicamentului

Hochgeladen von

Copyright:

Verfügbare Formate

Controlul analitic

Metode fizice (controlul proprietilor fizice)

Metode fizice i fizico-chimice de control

- determinarea apei prin distilare

Metode fizice i fizico-chimice de control

Metode fizice i fizico-chimice de control

Metode fizice i fizico-chimice de control

- spectrofotometrie n infrarou apropiat i mijlociu (NIR, IR)

Metode fizice i fizico-chimice de control suplimentare

Procedee de control chimic

Procedee de control chimic

- determinarea monoxidului i dioxidului de azot n gaze

Procedee de control chimic

Procedee ale controlului farmacognostic

Secvena operaiilor de control

- efectuarea testelor preliminare (deseori organoleptice)

Probele prelevate pentru identificarea calitativ i determinarea

Noiuni definite i utilizate n FR-X, referitoare la prelevare:

O cantitate precizata: lot

sublimare, acetilare, recristalizare un ciclu de operatii

Cantitatea obtinuta: serie

comprimare, includere in blister (ex. 10 compr./blist.)

Blistere grupate in aceeasi cutie, impreuna cu

Protocoalele de analiza contin reguli specifice privind prelevarea de

Prelevarea probelor dintr-un depozit

Cantitate: de 4 ori cea

Probele/contraprobele: ambalate, sigilate, etichetate

Prelevarea probelor dintr-un depozit

Prelevarea dintr-o serie (poate fi distribuita in recipiente diferite)

Prelevarea probelor din farmacii

Eticheta probelor/contraprobelor ambalate i sigilate conine:

Prelevarea pentru controlul produselor din industrie

Prelevare pentru controlul produselor elaborate n farmacii

Eticheta probelor/contraprobelor ambalate i sigilate conine:

Control optic (n special pentru probe solide)

- determinarea componentelor de culori de baz;

Culoarea unei suprafee se poate exprima (cu aproximaie

Volum de solvent (ml) necesar

foarte uor solubil

foarte puin solubil

foarte greu solubil

mai mult de 10000 ml

Densitatea absolut (masa volumic) . . .

. . . masa unitii de volum din substana examinat. n S.I. se

Masurarea densitatii (cu picnometru)

m0 = masa picnometrului gol

mSR = masa picnometrului continand proba solida si umplut cu

dR = densitatea relativa a probei solide in raport cu lichidul de

Masurarea densitatii (cu picnometru) Proba solida

Putere de rotaie (a planului de polarizare al luminii)

Chiralitate molecular cu un singur centru de disimetrie:

Planul de oscilatie al vectorilor intensitatii de camp

Activitate optica: rotatia planului de oscilatie a

vectorului E in jurul directiei de propagare (axa z)

Reprezentarea schematic a unui polarimetru

Putere de rotaie (a planului de polarizare al luminii)

Putere de rotaie (a planului de polarizare al luminii)

[a] grade cm3 dm 1 g 1

[a] grade cm3 dm 1g 1

Putere de rotaie (a planului de polarizare al luminii)

Dac n sistemul tolerat concentraia este exprimat n procente

Unghiul de rotaie a se msoar frecvent la lungimea de

i rotaia specific se exprim pentru aceste condiii: [a]D

Presiune osmotic. Soluii izotonice