Ensanchamiento de banda y eficiencia de la columna.

La eficiencia de una columna cromatografica se ve afectada por la cantidad de

ensanchamiento de banda que ocurre a medida que un compuesto pasa por la
columna. Antes de definir la eficiencia de la columna en trminos ms
cuantitativos, se examinan las razones por las cuales las bandas se ensanchan
mientras bajan por la columna.
Teora cintica de la cromatografa.
La teora cintica de la cromatografa explica las formas y anchos de las
bandas de elucin en trminos cuantitativos con base en un mecanismo de
avance aleatorio para la migracin de molculas a travs de la columna. El
estudio detallado de esta teora esta fuera del alcance de este texto. Sin
embargo, es posible dar una visin cualitativa de por qu se ensanchan las
bandas y cules son las variables que mejoran la eficiencia de la columna. Si
examina las cromatogramas que se muestran en este captulo y en el
siguiente, observara que los picos de elucin se ven muy parecidos a las
curvas gaussianas o de error normal. Como se muestra en el apndice 1,
seccin a1B.1, las curvas de error normal pueden entenderse si se supone que
la incertidumbre asociada con cualquier medicin individual es la suma de un
gran nmero de pequeas incertidumbres, aleatorias e individualmente
indetectables, cada una de las cuales tiene igual probabilidad de ser positiva o
negativa. De una manera similar, la forma caracterstica gaussiana de una
banda cromatografica se atribuye a la combinacin aditiva de los movimientos
aleatorios de las diversas molculas a medida que descienden por la columna.
En el siguiente anlisis se supone que se ha introducido una zona angosta de
modo que el ancho de inyeccin no es el factor limitante que determina el
ancho total de la banda que eluye. Es importante tener en cuenta que los
anchos de las bandas de elucin nunca pueden ser ms angostos que el ancho
d la zona de inyeccin.
Es ilustrativo considerar una sola molcula de soluto mientras pasa por miles
de transferencias entre las fases estacionaria y mvil durante la elucin. El
tiempo de residencia en cualquiera de las fases es muy irregular. La
transferencia de una fase a otra requiere energa y la molcula la debe tomar
de los alrededores. Por consiguiente, el tiempo de residencia en una fase dada
a veces es momentneo despus de alguna transferencia y relativamente largo
despus de la otra. Recuerde que el descenso por la columna ocurre solo
mientras la molcula est en la fase mvil. Por tanto, ciertas partculas viajan
con rapidez gracias a su inclusin accidental en la fase mvil la mayor parte
del tiempo, mientras otras se retrasan a causa de que estn incorporadas en la
fase estacionaria por un tiempo mayor al promedio. El resultado de estos
procesos aleatorios individuales es una dispersin simtrica de velocidades

alrededor del valor medio, lo cual representa el comportamiento de la molcula

de analito promedio.
El ensanchamiento de una zona aumenta a medida que desciende por la
columna porque ha habido ms tiempo para que haya dispersin. Entonces, el
ensanchamiento de la zona est relacionado de manera directa con el tiempo
de residencia en la columna y de manera inversa con la velocidad de flujo de la
fase mvil.
Co0mo se puede ver en la figura 26.5, algunos picos cromatogrficos son no
ideales y presentan deformacin hacia la cola o hacia el frente. En el primer
caso la cola del pico, que aparece a la derecha en el cromatograma, se alarga y
el frente se acorta bruscamente. Cuando la deformacin es hacia el frente
ocurre lo contrario. Una causa comn de estas deformaciones es una constante
de distribucin que vara con la concentracin. La asimetra o deformacin del
frente tambin se presenta cuando se introduce demasiada muestra en una
columna. Las distorsiones de este tipo son indeseables porque ocasionan
separaciones deficientes y a tiempos de elucin menos reproducibles. En el
anlisis que sigue se supone que las distorsiones en el frente y en la cola son
mnimas. 1
Referencia:

1. Skoog D. A.; Holler F. J.; Crouch S. R.; Principios de anlisis instrumental.

6a Ed.CENGAGE Learning, 2008; p.p. 768, 769.
Establecimiento de la teora de la elucin mediante conceptos dinmicos.
Teora cintica de la elucin.
La teora de los platos aplicada al estudio de la elucin cromatografica de lugar
a leyes variables experimentalmente, pero ignora de manera palpable el hecho
de que la elucin es un fenmeno dinmico, es decir, que el funcionamiento de
la columna cromatografica es continuo y no discontinuo como supone la teoria
de los platos.
El hecho de que la fase mvil tenga una determinada velocidad influye
poderosamente en los resultados cromatogrficos, como se deduce al variar
dicha velocidad. En efecto, al modificarse la velocidad de la fase mvil se
observan aplastamientos o alargamientos de los picos de elucin, hechos que
la teora de los platos, ni por supuesto la teora directa, contemplan en modo
alguno.
La teora cintica o dinmica de la cromatografa debida a Giddings relaciona la
altura del plato terico equivalente (APTE), H, con la velocidad de paso de la

fase mvil y con algunos factores no considerados en las teoras anteriormente

mencionadas.
La relacin entre H y la velocidad de la fase mvil es debida a Van Deemter,
quien la propuso para la cromatografa en fase gaseosa, y expresa la relacin
entre la velocidad lineal de la fase mvil, v, la difusin turbulenta, A, la difusin
longitudinal, B, y la resistencia a la transferencia de materia, C; es decir:

B
H= A+ +Cv
v
Donde A expresa la difusin turbulenta por el paso irregular de la fase mvil a
travs de la fase estacionaria debido a que sus partculas son de diferente
tamao, de forma que las velocidades sern diferentes en los distintos puntos
de la columna. En consecuencia, las sustancias a separar progresaran de
manera irregular en la columna.
El trmino A es independiente de la fase mvil (o mejor de su caudal), depende
nicamente de las partculas y crece con su dimetro.
El trmino B/v da cuenta de la influencia de la difusin longitudinal, es decir, de
la difusin de las molculas en la direccin del paso de la fase mvil. Este
fenmeno es general para todas las partculas que se encuentren en
movimiento y tanto ms importante cuanto ms dbil es la velocidad. La
expresin de B es la siguiente:

B=2 Dm
Donde es el factor de tortuosidad y representa la influencia de la columna:
granulometra de las partculas regularidad del relleno, etc., y es tanto menos
elevado cuanto ms uniforme sea el recorrido de las partculas de la sustancia
a eluir; Dm es el coeficiente de difusin, del compuesto a separar, en la fase
mvil y tiene un valor reducido (casi despreciable) usando la fase mvil es un
lquido, mientras que en los gases es de 10 4 a 106 veces ms elevados que en
los lquidos.
C representa las desigualdades de paso de las molculas de una fase a otra.
Tambin se llama factor de res9stencia, existiendo su accin tanto en la etapa
de fijacin como en la de elucin. En la fase mvil la totalidad de las molculas
no es arrastrada con la misma velocidad, puesto que las del interior de flujo
progresan ms rpidamente que las que se encuentran en el exterior (que
tienen que recorrer caminos ms largos), dndose por este motivo condiciones
de reparto diferentes. por otra parte, el contacto fase mvil-fase estacionaria
no se efecta de manera idntica en todos los puntos, ya que el trayecto de la
partcula en su recorrido fase mvil-fase estacionaria es mayor hacia las

cavidades que hacia las convexidades. Finalmente, cuando la fase estacionaria

est constituida por un lquido sobre un soporte poroso, las molculas fijadas
estn situadas a distancias diferentes de la fase mvil y la elucin no tiene
lugar en todas partes a la misma velocidad, por lo que el tiempo de
permanencia en la fase estacionaria es funcin del camino a recorrer.
Todos estos fenmenos implican un retardo en el establecimiento de los
equilibrios, tanto ms importante cuanto mayor es el caudal de la fase mvil,
por lo que la manera de atenuar estos efectos de resistencia consiste en
disminuir las distancias a recorrer, reduciendo el dimetro de los granos, el
espesor de la fase estacionaria y utilizando columnas regularmente rellenas y
compactas.
Referencia:
2. Batanero P. S.; Medel A. S.; Qumica analtica bsica. Ediciones Simancas.
Valladolid, 1985; p.p. 327, 328.

La cromatografa es una tcnica analtica de separacin con un doble

fundamento termodinmico y cintico. Los aspectos termodinmicos son los
que rigen el equilibrio de distribucin o reparto de los solutos-analitos entre
las dos fases, mvil y estacionaria, y por tanto, son responsables de
caractersticas cromatogrficas tan importantes como la retencin y la
selectividad.
Los aspectos cinticos constituyen un hito fundamental en las separaciones
cromatogrficas. La cintica juega en cromatografa un doble papel: por una
parte, debe considerarse el tiempo en que se alcanza el equilibrio de
distribucin de cada plato terico; por otra parte, la velocidad de
desplazamiento diferencial de la mezcla de solutos en el lecho
cromatogrfico es la responsable ltima de la separacin. Sobre ella influye
adems los aspectos termodinmicos antes mencionados, aspectos cinticos
fsicos relacionados con la dispersin axial, flujo a travs del medio poroso,
etc.
3. M. Valcrcel Cases, A. Gmez Hens; Tcnicas analticas de separacin;
Editorial Revert; Espaa, 1988; p.p. 339

Hay dos teoras para explicar el proceso cromatogrfico:

1. Teora clsica o esttica

2. Teora cintica o dinmica

Teora clsica o esttica: propuesta en 1941, en la cual se asimila la columna
cromatogrfica con una columna de destilacin.
Teora cintica o dinmica: propuesta en 1956 por Van Deemter, que considera
el proceso dinmico de la separacin.
Teora clsica o esttica: se considera un sistema esttico en equilibrio, en el
cual el soluto recorre la columna mediante una serie de equilibrios, cada uno
de los cuales se alcanza, en toda su extensin, en un segmento o porcin de la
columna, llamado plato terico.
Se supone que la columna cromatogrfica est dividida en una serie de
segmentos o platos tericos, donde se producen un equilibrio de distribucin
del soluto entre la fase mvil y la estacionaria.
Af.mvil

A f. est

Dado que la separacin se produce como consecuencia de estas

transferencias, la eficacia de la columna depender del nmero de equilibrios
que tiene lugar en el interior de la columna durante la elucin, es decir,
depende del nmero de platos tericos que tenga la columna, N.
Cuanto ms estrecho sea el plato terico, mayor nmero de ellos habr para
una longitud L de columna, por tanto, la eficacia de la columna ser
inversamente proporcional a la altura equivalente del plato terico:
AEPT= H=L/N
Cuando los solutos viajan a travs de la columna los picos se ensanchan, y ms
cuanto ms larga es la columna, por tanto para determinar si una separacin
es posible tenemos que tener en cuenta dos factores:
1. La diferencia en la velocidad de migracin de los solutos, que determina la
posicin de los picos en el cromatograma.
2. La velocidad finita que tarda en alcanzarse el equilibrio en cada plato
terico, que traer el ensanchamiento en las bandas del cromatograma.
TEORA CINTICA O DINMICA.
La eficacia de la columna para separar los componentes de la muestra vendr
dada por dos factores:
1. La diferencia de la velocidad de migracin de los solutos de la mezcla, que
origina la separacin fsica entre los picos

2. La velocidad que tarda en alcanzarse el equilibrio en cada plato terico que

traer consigo un ensanchamiento del pico cromatogrfico.
El ensanchamiento de la banda depende de la velocidad de transferencia finita
del soluto entre la fase mvil y la fase estacionaria en cada plato terico. Este
ensanchamiento se debe a un avance diferente de las molculas de un mismo
soluto a travs de la columna.
No todas las molculas de un mismo soluto fluyen de igual forma en el mismo
instante de tiempo, es decir, no presentan un comportamiento ideal. Este
comportamiento no ideal se debe a tres factores:
1. difusin en remolino.
2. difusin longitudinal.
3. Resistencia a la transferencia de materia. 4
Referencia 4.
http://www.ulpgc.es/hege/almacen/download/39/39360/separaciones_por_crom
atografia_1.pdf
Descripcin cuantitativa de la eficiencia de la columna.
Dos trminos afines se utilizan ampliamente como medidas cuantitativas de la
eficiencia de una columna cromatografica:
1) La altura de plato H y
2) El nmero de platos o cantidad terica de platos, N. los dos estn
relacionados por La ecuacin:

N=

L
H

Donde L es la longitud del relleno de la columna. La eficiencia de la

columna cromatografica aumenta cuanto mayor es el nmero de platos
N y cuanto menor es la altura H del plato. Se ha encontrado enormes
diferencias en las eficiencias debido a diferencias en el tipo de columna
y en las fases mvil y estacionaria. Las eficiencias en trminos del
nmero de platos varan desde pocos cientos a varios ciento de3 miles;
son frecuentes las alturas de plato que oscilan desde unas pocas
dcimas hasta una milsima de centmetro o menos.
El origen de los trminos altura de plato y cantidad de platos
tericos proviene de uno de los primeros estudios tericos realizados
por Martin y Synge en que trataron a una columna cromatografica
como si fuera similar a una columna de destilacin que estuviera
constituida por numerosas capas angostas, o platos, distintos pero
contiguos, a las que denominaron platos tericos. Se supona que en
cada plato se estableca el equilibrio de la especie entre las fases mvil

y estacionaria. El descenso del soluto por la columna se trataba

entonces como una transferencia por etapas de fase mvil equilibrada
de un plato al siguiente. La teora del plato explica de manera
satisfactoria la forma gaussiana de los picos cromatogrficos y su
velocidad de desplazamiento por la columna