Bioqumica e Fisiologia Microbiana

Ciclo celular bacteriano

Ciclo celular bacteriano

Diviso celular

Aps decatenao dos cromossomas, estes migram para os plos protenas

Par, que se ligam ao DNA e alinham os nucleides ao longo do eixo da clula.
nicio da formao do septo
Localizao do septo regulao pelo produto dos genes minC, minD, minE
Mutantes originam mini-clulas, anucleadas
Recrutamento da protena FtsZ e formao da constrio

Formao do septo
Recrutamento de protenas
Ftz, PbP3 (formao de peptidoglicano especificamente no septo), ZipA, FtsN, FtsA,

Mutantes fts filamentous temperature-sensitive

CELL DIVISION IN
GRAM-NEGATIVE RODS

Eventos do ciclo celular em procariotas e eucariotas

Vrios mtodos para estudar o ciclo celular em microrganismos:

Tcnica de eluio em membranas
Anlise de clulas separadas de acordo com o seu tamanho
Citometria de fluxo

Perodo B: durao depende da taxa especfica de crescimento

Perodo C: durao de cerca de 40 minutos

Perodo D: durao de cerca de 20 minutos

Tempo de gerao 60 minutos

durao B = 0

Fig. a-b Overlapping replication cycles at rapid growth. a

Replication of the circular bacterial chromosome starts at a unique
site, oriC, and proceeds bidirectionally to the terminus, terC. The
picture shows the chromosome at four different stages of
replication. The circles viewed from the side appear as lines
without or with branches.
B the generation time of bacteria can be varied by using different
growth media. The C periods of E. coli are essentially 40 min and 20
min, respectively, at 37 oC. Time -100 means 100 min until cell
division. At time 0, cell division takes place. The figure shows the
time of initiation of the cell cycle at different growth rates. At
generation times beyond the C + D periods (60 min), there is a
period without DNA replication (B period) in the young cells. The
cells are born with a non-replicating chromosome. At generation
times between 30 and 60 min. DNA replication starts in the mother
cell, and the cells are born with a partly replicated chromosome:
hence , two origins are present in these cells, and two initiations
occur in each cell during one cell cycle. Finally, at generation times
between 20 and 30 min, DNA replication starts in the grandmother
cell, and the cells are born with chromosomes in which there are
two consecutive replication cycles, and initiation of replication
takes place at four origins during each cell cycle.

Genes involved in cell division

Regulao do Metabolismo
A clula bacteriana catalisa um n elevado de reaces (1000 2000),
organizadas em vias metablicas. de importncia vital para a clula a
coordenao entre as vrias vias metablicas.
As vias metablicas so reguladas ajustando a velocidade de um ou mais
enzimas regulatrios da via e que determinam a velocidade global da via.

Existem basicamente duas formas de regular a velocidade com que fluem os

metabolitos nas vias metablicas:
- Quantidade de enzima

- Actividade enzimtica

Actuao ao nvel da quantidade de enzima:

- Transcrio/Traduo

Actuao ao nvel da actividade das enzimas:

- Controlo por inibio de feedback

Feedback inhibition. The final product of a series of enzymatic reactions, metaboliten, has
the property of binding to the regulatory site of the allosteric protein, enzyme1, and
thereby inhibiting it. A scheme of this sort, with appropriate assignment of kinetic
parameters, can guarantee that metaboliten is produced only as rapidly as it is used in
some subsequent process.

Inibio simples, sequencial e cumulativa; isoenzimas

Patterns of feedback inhibition found in

bacterial biosynthetic pathways.
(A) Isofunctional enzymes for the regulated reaction
allow differential feedback effects by the two
pathway end products.
(B) Cumulative feedback inhibition involves multiple
allosteric sites on the regulated enzyme, assuring
that there will be some activity unless all of the
end products are in excess.
(C) In sequential feedback inhibition, different end
products operate separately on the various
branches of the pathway.
(D) Inhibition plus activation uses both positive (+)
and negative (-) allosteric effectors to coordinate
complex pathways.

- Ligao no covalente de intermedirios das vias efectores alostricos

estimulam ou inibem uma enzima regulatria da via metablica.

- Modificao covalente do enzima ligao de grupos fosfato, nucletidos

Adaptao a alteraes ambientais

ADAPTAO A ALTERAES AMBIENTAIS

Os microrganismos podem alterar a sua morfologia, o metabolismo, o padro de

transcrio de genes e o comportamento como resposta a alteraes ambientais
tais como a disponibilidade de carbono, azoto ou fosfato, alterao da
osmolaridade e temperatura do meio, etc.
Por detrs das adaptaes esto sistemas atravs dos quais o microrganismo
monitoriza continuamente o meio ambiente e transmite sinais para alvos
intracelulares especficos, tais como a maquinaria transcricional, enzimas ou
componentes celulares como por exemplo os flagelos.
Na maior parte dos casos o sinal leva activao ou inactivao de factores de
transcrio no citoplasma. A activao / inactivao de factores de transcrio
como resultado da transmisso de sinal ocorre geralmente por modificao
covalente (fosforilao ou desfosforilao)do factor de transcrio ou por
alterao conformacional por ligao de um co-indutor.

Sistemas de sinalizao de 2 componentes

Incluem:
1- uma histidina cinase (HK), ou cinase sensora. Recebe um sinal e
autofosforila um resduo de histidina
HK + ATP

KH-P + ADP

2- um regulador de resposta (RR). fosforilado num resduo aspartato pela HK-P

RR + HK-P

RR-P (activo) + HK

3- uma fosfatase, que pode ser a histidina cinase, o regulador de resposta ou

uma protena
RR-P + H2O

RR + Pi

ESTRUTURA DA HISTIDINA CINASE

Fig. 1 Histidine kinase domain structure. (A) Schematic representation
of Class I histidine structure. This classification is based on the
position of the conserved histidine-containing region with respect to
the catalysis and ATP-binding (CA) domain (which contains the N, G1,
F and G2 conserved boxes) in the primary sequence. The conserved
His residue (h) is located in the H box of the dimerization (Dim)
domain adjacent to the catalysis domain. (B) Representative
secondary and ribbon diagrams of sensor PAS domain. Schematic
representation of the secondary structures of DOS, CitA, DcuS, and
EnvZ are shown. All secondary structures presented here are based on
solved structures, except for that of EnvZ, which is based on
secondary structure determinations and biophysical analyses
(Khorchid, Inouye, & Ikura, 2005). Ribbon diagrams of two dimeric
forms of CitA periplasmic domain observed in the crystal lattice are
represented with individual monomers shown in yellow or magenta.
(C) Multiple alignments of representative HAMP linkers in sensory
proteins. For the purpose of comparison amino acid code sequences,
immediately following TM2, for seven different sensory protein
(MCPs, first 2 rows; HK sensors, last 5 rows) were aligned. Numbers in
the rightmost column denote the positions within the full-length
protein sequences. The two predicted amphipathic helices are boxed.
Helical representation of the two amphipathic helices, I and II, Shows
the consensus sequence calculated: h indicates hydrophobic residues
(A,C, F, I, L, M, V, W, Y), al indicates aliphatic residues (I, L, V), p
indicates polar residues ((D, E, H, K, N, Q, R, S, T), s indicates small
residues (A, C, S, T, D, N, V, G, P), while x indicates non-conserved
residues. The hydrophobic face of the helices is shaded in grey. (D)
Ribbon diagrams of the dimeric kinase core domains of EnvZ and
CheY. Within each dimer, individual monmers are yellow or magenta.

MODELOS DE ACTIVAO
DAS HISTIDINA CINASES

Adaptao a Variaes de Osmolaridade e Temperatura

A clula utiliza vrias estratgias para contrabalanar as variaes de presso
osmtica do meio. Uma dessas formas ajustar a permeabilidade da
membrana externa.

Em E. coli existem 2 porinas maioritrias, OmpF e OmpC.

So geralmente sintetizadas em alternativa uma outra. Os poros de OmpC

so ligeiramente menores que os de OmpF e so sintetizados
preferencialmente em condies de elevada presso osmtica e elevadas
temperaturas. Os poros mais pequenos so usados preferencialmente em
meios com elevadas concentraes de substrato. Os poros maiores permitem
que os substratos diluidos entrem na clula por difuso mais facilmente.

Histidina cinase: EnvZ

Regulador de resposta: OmpR

Modelo de osmoregulao

Assimilao de Fosfato
Em E. coli e outras espcies prximas, quando o fosfato inorgnico abundante
extracelularmente, este transportado para a clula por um sistema de baixa afinidade,
Pit.
Sob limitao de fosfato, em E. coli estimulada a transcrio de pelo menos 38 genes (a
maior parte deles em operes), envolvidos na assimilao de fosfato que incluem genes
que codificam:
-

Uma fosfatase alcalina periplasmtica;

Uma porina da membrana externa, especfica para anies, incluindo fosfato (phoE);
Um sistema de transporte de fosfato de elevada afinidade (Pst) e uma protena
necessria para a sua represso pelo fosfato (pstSCAB-phoU);
Uma histidina cinase e o regulador de resposta (phoBR);
Catorze genes que codificam protenas que medeiam a entrada e utilizao de
fosfonato;
Genes entrada e utilizao de gliceraldedo-3-P e um gene que codifica uma
fosfodiesterase (ugpBAECQ)

Todos estes genes, excepto pit, so reprimidos pelo fosfato e esto no regulo PHO. Este
regulo controlado por PhoR, uma histidina cinase e um regulador de resposta PhoB.
Regulo uma rede relativamente simples de operes controlada por uma protena
regulatria comum e o seu efector.

Modelo de regulao do regulo PHO

Sistema Arc (aerobic respiration control)

O sistema Arc consiste numa histidina cinase ArcB e num regulador de

resposta ArcA. Mutaes nos genes arc levam induo de vrios genes e
represso de alguns outros, indicando que a protena ArcA fosforilada
tanto repressora como activadora em condies de anaerobiose.

Sistema Arc (aerobic respiration control)

O sistema Arc responsvel por:
1 Represso, em condies de anaerobiose, da transcrio dos genes que
codificam:
- Enzimas do TCA
- Enzimas do ciclo glioxilato
- Vrias desidrogenases necessrias para o crescimento aerbio (ex: piruvato
desidrogenase)
- Enzimas responsveis pela oxidao de cidos gordos
- Citocromo o oxidase
2 Induo, em condies de anaerobiose, de transcrio dos genes que
codificam:
- Piruvato formato liase
3 Induo, em condies de baixas concentraes de O2, dos genes para:
- Citocromo d oxidase, sntese de cobalamina e piruvato formato liase

Sistema Arc (aerobic respiration control)

A protena ArcB monitoriza a concentrao de O2 indirectamente e quando os

nveis de O2 so suficientemente baixos, autofosforila custa de hidrlise de
ATP, tranferindo de seguida o grupo fosfato para a protena ArcA.

Pensa-se que o controlo da actividade de fosforilao de ArcB envolver

metabolitos que aumentam a sua concentrao intracelularmente na ausncia
de O2, tais como piruvato, acetato, lactato ou NADH, e no por aco directa do
O2 sobre a protena.

Sistema Arc (aerobic respiration control)

A schematic representation of signal transduction by the Arc two-component system.

Kwon O et al. J. Biol. Chem. 2003;278:13192-13195

2003 by American Society for Biochemistry and Molecular Biology

Sistema FNR

O gene fnr codifica uma protena (FNR) que em condies de anaerobiose actua
como regulador positivo da transcrio de vrios genes expressos apenas durante
o crescimento em condies de anaerobiose e repressor de genes que no so
expressos em anaerobiose.
A protena FNR parece existir em quantidades semelhantes em clulas de E. coli
crescidas aerobica ou anaerobicamente. A protena activa FNR um homodmero
de uma protena Fe-S contendo um centro [4Fe-4S] sensvel ao oxignio. Quando a
protena est exposta ao O2, o centro [4Fe-4S] oxidado e pode mesmo ser
perdido da protena. Quando tal acontece, uma fraco da FNR perde os seus
centros Fe-S, tornando-se uma apoprotena. Tanto a protena contendo um centro
Fe-S oxidado como a apoprotena so inactivas. Ligam-se ao DNA com baixa
afinidade e no estimulam a sua transcrio.

Sistema FNR

Regulao do metabolismo aerbio/anaerbio em E. coli pelos sistemas

Arc, FnR e NarP e NarL

Vias bsicas de metabolismo aerobico e anaerobico em E. coli

Escherichia coli

AEROBIOSE

Escherichia coli

ANAEROBIOSE