MUTACIN Y REPARACIN DEL DNA

Que es una mutacin?

MUTACIONES
Cambios en el material gentico que se propagan a
travs de sucesivas generaciones tanto en clulas
aisladas como en organismos complejos.
De Vries, 1901

Las mutaciones pueden afectar a uno (puntuales), unos

pocos (pseudopuntuales) o a un gran nmero de
nucle8dos de una secuencia de DNA (cromosmicas).

DAO GENTICO
Metabolismo Oxidativo
Endgeno
Sntesis de DNA

Agentes Qumicos
Exgeno
Agentes Fsicos

Mutaciones
Espontneas

Inducidas

A.- Errores en la Replicacin

A.- Mutgenos Fsicos

B.- Lesiones fortuitas

B.- Mutgenos Qumicos

C.- Elementos Transponibles

C.- Mutgenos Biolgicos

Daos que puede sufrir el DNA

Unin covalente entre bases de la misma cadena

Unin de grupos alquilo

Ruptura de simple cadena (nick)

Ruptura de doble cadena

Prdida de bases

Desaminacin

Mismatch (mal apareamiento)

Mutaciones Espontneas

Inserciones

deleciones

Mutaciones Espontneas

Mutaciones Espontneas

il
A
alqu
s
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adia
R

alor
C

EFECTOS DE LOS CAMBIOS (MUTACIONES)

Se expresan cuando el gen pasa a su protena
correspondiente. Los efectos de los cambios pueden
ser:
Mutacin silenciosa: Tripletes que codifican para el mismo
aminocido: AAG(arg)CGG(arg)

Mutacin neutra: Tripletes que codifican para aminocidos

equivalentes distintos. AAA(lys)AGA(arg). Ambos son
aminocidos bsicos

Mutacin cambio de sentido: Aparece un nuevo triplete que

codifica para un aminocido de distinto tipo. La protena pierde su
funcin.

24

Mutacin sin sentido: Aparece un triplete de terminacin o Stop:

CAG(gln)UAG(Stop)

Mutacin cambio de fase o pauta de lectura: Adicin o delecin de

un nico par de nucletidos o de varios pares de nucletidos, siempre
que no sean mltiplo de tres.

25

S
Sistemas de Repacin del DNA

 Los sistemas de reparacin comparten

componentes con los sistemas de
replicacin y transcripcin.
Hipersensibilidad a agentes genotxicos es
frecuentemente el resultado de fallas en los
sistemas de respuesta al dao en el DNA
ms que a defectos en los sistemas de
reparacin.
cap. 9 Hum Mol Gen.

34

Las mutaciones en los sistemas

de reparacin conducen a
enfermedades gentica como el
xeroderma pigmentosum

Daos en el ADN no reparados

Bloqueo de la replicacin y
transcripcin

Mutaciones
Regiones intergnicas
Codn sinnimo

Silenciosas
Mutacin silenciosa

Genes
Codn No sinnimo

Missense: aminocido distinto

Non sense: codn de terminacin
Read through: codn de terminacin eliminado

Mecanismos biolgicos de Reparacin

1.- Detoxificacin
2.- Reversin Directa de la Lesin
3.- Vas de Escisin General
4.- Vas de Escisin Especfica
5.- Reparacin posterior a la replicacin
6.- Sistema S.O.S.

Reparacin de dmeros de
pirimidinas mediante
fotoreactivacin

200-300 nm

300-500 nm

Reparacin por Escisin

de Nucletidos (NER)

Se emplea para corregir bases

mal apareadas, dmeros de
bases, etc.

NER
E.coli

Sistema Uvr ABC

Remocin de 12nt

Eucariotas

Remocin de 24-29 nt

Reparacin por Escisin

de Bases (BER)

Se emplea para corregir

pequeos errores en las bases
tales como deaminacin,
oxidacin, depurinacin, etc.

2. Reparacin por escisin

BER
Remocin de la base daada
Especfico (especificidad dada en la etapa de remocin)

NER
Repara daos que distorsionan la doble hlice
No especfico

Polimorfismo

Clasificacin del DNA Eucarionte

DNA Espaciador
No se conoce su funcin, se piensa que puede tener algn rol estructural.

Secuencias repetidas funcionales codificantes

(medianamente repetido)

Familias de genes dispersas: Actina (5 a 30)

Tubulina (3 a 15)
Familias de genes en tandem: Organizadores nucleolares (genes que codifican para
rRNA, 280).
Histonas (100 a 1000)

Seudogenes: copias de genes no funcionales. Son un vestigio evolutivo, genes que

han sido desactivados por mutaciones

Secuencias altamente repetidas

Repeticiones en tandem de nmero variable

DNA satlite: DNA centromrico, alto contenido A/T , DNA alfoide de 170pb

DNA minisatlite: Unidades repetidas de 15 a 100 pb, normalmente de 25pb,

que forman complejos de hasta 20 kb de extensin (LTR)

DNA microsatlite Unidades de repeticin de no mas de 13 pb y 150 pb de

extensin (STR). Lo ms frecuente son repetidos de dinucletidos con
alrededor de 140.000 copias en todo el genoma, normalmente CA.

Repeticiones Dispersas

Secuencias transpuestas (transposones)

LINES (long interpsersed elements): 1 a 5 kb presentes en 20.000 a 40.000

copias por genoma humano (21%)
SINES (short interpsersed elements): secuencias de 200 a 300 pb como
secuencias Alu en humanos, con 1.200.000 copias por genoma (14%)

POLIMORFISMO GENTICO

POLIMORFISMO: Una serie de fenotipos alternativos

normales y comunes

En sentido estricto:
El polimorfismo se refiere a la ocurrencia de alelos multiples en
un locus, donde al menos dos alelos aparecen con una frecuencia
>1% en la poblacin general.

POLIMORFISMO GENTICO
CARACTERSTICAS
- La mayora de los polimorfismos no tienen efecto sobre el
fenotipo (caen en regiones no codificantes).
- Algunos pocos afectan nuestro fenotipo
(Estatura: alta/baja; Cabello: claro/oscuro; Color de ojos)
- Un numero muy pequeo de polimorfismos son responsables
de enfermedades genticas.

MARCADORES DE DNA

Fragmentos de Restriccin de Largo Polimrfico (RFLP)

Variaciones en el largo de los fragmentos de DNA producidos por cortes con enzimas de restriccin
La variacin se debe a cambios en un solo par de nucletidos (ca mbio de bases, deleciones, adiciones)
que modifica el sitio de reconocimiento de la enzima de restriccin.
Se distribuyen en forma aleatoria en el genoma, en humanos se han detectado varios miles, y se heredan
en forma Mendeliana

St
3 Kb

7 Kb

Cromosoma A
10 Kb

Cromosoma B
Regin detectada por la sonda

A/A

A/B

BB

Teniendo marcadores RFLP

para los cromosomas, se pueden
hacer mapas de ligamiento para
otros genes.
Sirven para estudios de
divergencia evolutiva entre
especies relacionadas
Sirven para estudios de
variabilidad gentica en una
poblacin.

Identificacin de un marcador RFLP

4 Kb

8 Kb

12 Kb
GGATTC

12 Kb

8 Kb

4 Kb

: Sitio de reconocimiento de EcoR1 (GAATTC)

: Sonda especfica para reconocer por Southern blot

UTILIZACIN DE UN MARCADOR LIGADO A UNA ENFERMEDAD

Uso de RFLP:
Se dispone de marcadores RFLP de los 24 cromosomas
humanos diferentes
Son ms tiles aquellos para los que la mayora de los miembros
de la familia son heterocigotos
El anlisis se hace por ensayo y error usando varios RFLP
Si un RFLP y el gen para una cierta enfermedad gentica estn
en el mismo cromosoma mostrarn ligamiento
Se debe analizar la probabilidad de que el patrn de herencia
observado sea al azar

Logaritmo de las probabilidades o puntuacin lod:

Probabilidad de no ligamiento/ probabilidad de ligamiento

F y H : siempre juntosligados?
A y B: en hijos uno o el otro.alelos?
Un valor de lod de 3 o ms es prueba de que el marcador RFLP y A y D: no hay patrn..no ligados?
el gen estn ligados
I y C : siempre en afectados..ligados a P?

Gen de Neurofibromatosis de tipo 1 (NF1), autosmico dominante (1/3.000), por RFLP se ubic en
cromosoma 17 cercano al centrmero, estudios posteriores localizaron el locus en 17q11.2, se identific el
gen, se secuencio y se determin que codifica para una protena implicada en la transduccin de seales
con regulacin negativa sobre un gen que controla el crecimiento celular

Sndrome de Marfan, autosmica recesiva(1/10.000) posible candidato gen de fibrilina, ubicado por FISH
en el cromosoma 15, luego se encontr ligamiento con RFLP de cromosoma 15, finalmente se encontr
una mutacin en los afectados

Polimorfismo en la Longitud de Fragmentos Amplificados (AFLP)

Amplificacin al Azar de DNAs Polimrficos (RAPDs)

A

2
D

D
B

!
!
!

A
C

Un nico primer de PCR es diseado al azar,

pudiendo amplificar diferentes regiones del genoma.
El resultado es un set de bandas amplificadas de
diferentes tamaos, que tambin ser un fingerprint.
Es muy usado en anlisis poblacionales

Segregacin familiar de un locus STR (short tndem repeat)

P H1 H2 H3 H4 H5 M
Deteccin por Southern blot usando la secuencia del microsatlite como sonda

Para hacer identificacin se debe

usar ms de una secuencia STR,
normalmente se usan 12 distintas

HUELLA DIGITAL DE DNA (DNA FINGERPRINT)

El anlisis puede realizarse en cantidades muy
pequeas de tejido y en muestras antiguas

Se analizan utilizando la estadstica, la probabilidad y

la gentica de poblaciones (frecuencia combinada:
cuan a menudo la huella molecular de DNA podra
observarse en la poblacin general)

La utilizacin de diversas sondas de STRs aumenta la

exactitud de la frecuencia combinada

Locus 1: 1/333
Locus 2: 1/83
Frecuencia combinada: 1/28.000

Locus 3: 1/100
Locus 4: 1/25
Frecuencia combinada: 1/70 millones

DNA microsatlite: Repeticin de

dinucletidos, frecuentemente CA

No se utiliza una sonda marcada, sino que se

amplifica la secuencia por PCR

Sirven como marcadores moleculares para

mapear genes: en este caso el alelo M se
encuentra ligado con el alelo P, puesto que todos
los hijos afectados lo han heredado de su madre.

Single Nucleotide Polymorphism (SNPs)

Variacin en un solo
nucletido (alelos)
Secuencias codificantes,
no-codificantes o
intergnicas
No necesariamente
producen un cambio de
aminocido
Corresponden al 90% de
toda la variabilidad
gentica humana
Se estudian ms
fcilmente por
microarrays

DIAGNSTICO Y RASTREO DE ENFERMEDADES GENTICAS

Uso de marcadores asociados, como los RFLP o microsatlites
Deteccin de la presencia de una mutacin, genes BRAC en cncer de mama

Diagnstico prenatal:
Amniocentesis (Muestra de fluido amniotico que contiene clulas del feto)
Extraccin de vellosidades corinicas (Mediante un cateter en el tero se toma
una muestra de tejido del corion fetal)

Beta Talasemia: enfermedad autosmica recesiva, asociada a la disminucin o

falta de -globina por delecin de 600 pares de bases

Anlisis gentico molecular de la mutacin T12706C en el gen

ND5 en un paciente con Sndrome de Leigh

NUCLETIDOS ESPECFICOS DE ALELOS

Se debe conocer la secuencia del alelo normal y del alelo mutado
Se usa un oligonucleotido especfico de alelo (ASO) que hibridar slo con su secuencia
complementaria y no con otra aunque difieran en slo un nucletido

Anemia falsiforme:
DNA extrado de glbulos blancos

Regin cubierta por sonda ASO

El DNA se amplifica por PCR, se pone una gota en un filtro de nitrocelulosa, se denatura,
se hibrida con la sonda ASO marcada (5-CTCCTGAGGAGAAGTCTGC-3)

Genotipos:

AA

AS

SS