Introduo

Gentica Molecular = Estrutura e

funo do material hereditrio no
nvel molecular.
Mas qual a constituio do
material hereditrio?
Caractersticas importantes:
1.Deve conter uma informao
complexa
2.Deve

replicar fielmente

3.Deve

codificar o fentipo

1868 J. F. Miescher = nuclena

1887 Cromatina = protenas +
DNA
Final 1800 = 4 bases nitrogenadas
Adenina
Timina
Citosina
Guanina

Incio do sculo XX = P.A. Levene

Tetranucleotdeos
Entre 1940-50:
E. Chargaff propores entre
nucleotdeos

Mas qual a constituio do

material hereditrio?
DNA?
Protena?
1928 F. Griffith
Princpio Transformante

1940-1950 O. Avery, C. MacLeod,

M. MacCarty
Natureza do princpio
transformante

O DNA o material gentico.

Ser? Duvido muito!!!

1940-1950 A. Hershey, M. Chase

Confirmao do princpio
transformante
1940-1950 A. Hershey, M. Chase

O DNA , realmente, a molcula

da hereditariedade.
1953 J. Watson, F. Crick
A estrutura da molcula de DNA.

Linha do Tempo

1956 H.
Fraenkel-Conrat & Bea Singer
RNA como material gentico.

A NATUREZA QUMICA DO GENE

Prof. Dr. Sandro J. Conde
Cincias Biolgicas

Estrutura do DNA 3 nveis

Estrutura primria
Nucleotdeos
Estrutura secundria
Dupla hlice
Estrutura terciria
Arranjos de compactao
DNA um polmero
(macromolcula)

Estrutura Primria
Unidade: Nucleotdeos
1 Acar
2 Fosfato
3 Base com Nitrognio

1 Acar
Monossacardeo - Pentose (5
carbonos)
Desoxirribose e Ribose

Enzimas celulares reconhecem e

so especficas para cada
nucleotdeo conforme o acar que
possuem.
DNA menos reativo e mais
estvel
RNA mais reativo e muito
instvel
2 Grupo fosfato

Apresentam carga negativa, que

d caracterstica cida ao
nucleotdeo

3 Base Nitrogenada
Purina ou Pirimidina
Purina = Anel de 6 lados ligados
um anel de 5 lados
DNA e RNA possuem duas purinas:
Adenina
Guanina

Pirimidina = Apenas um anel de 6

lados
DNA possui Citosina e Timina
RNA possui Citosina e Uracila

Nucleosdeos Juno do acar

com a base nitrogenada

Nucleotdeos incorporados e no
incorporados
Pontes de Hidrognio
Filamentos polinucleotdicos
Sentido: 5 para 3 (orientao da
pentose)

Estrutura Secundria
Tridimensional, dupla hlice.
O esqueleto acar-fosfato
Fitas em orientao anti-paralelas
Os filamentos no so idnticos,
mas complementares.

A estrutura tridimensional
mantida por foras moleculares.

As condies do meio e a
sequncia de bases contribuem
para a estrutura tridimensional

Implicaes
As instrues genticas so
codificadas pelas sequencias de
bases.
Possui capacidade de se replicar
fielmente.
Capaz de traduzir suas
informaes no fentipo.
REPLICAO E RECOMBINAO
DO DNA
A Replicao um processo
complexo e fundamental.
Necessita de um grande conjunto
de molculas e enzimas.
Exemplo:
E. Coli = 4,6 milhes de pares de
base.
Divide-se a cada 20 minutos.
Velocidade de replicao 1000
nucleotdeos por segundo.

A replicao semi-conservativa:
cada filamento conservado e
serve de molde para a produo
do novo filamento.
Modelos propostos:

Histrico
Experimento de Meselson e Stahl
(1958):
Istopos de Nitrognio = 14N e 15N
Centrifugao

O processo de
Replicao
O incio da replicao ocorre na
Origem de Replicao ou ORI.
Procariontes = nica ORI
Eucariontes = vrias ORI
Bolha de replicao e forquilha de
replicao
A replicao bidirecional

Em eucariontes, a replicao
mais lenta.
Procariontes = 1000 nuc./seg
Eucariontes = 500 a 5000
nuc./minuto

Requisitos da Replicao
- Molde de DNA unifilamentar
- Matrias-primas (dNTP)
-Enzimas de leitura do molde e
colocao dos novos nucleotdeos
-Trifosfato

de
desoxirribonucleosdeo

Sentido da replicao
-Enzima DNA polimerase
-Sentido

5 para 3

Como a sntese pode ocorrer,

simultaneamente, em ambos os
filamentos na forquilha?
Filamento contnuo (leading)
Filamento descontnuo (lagging)

Os Fragmentos de Okazaki

A replicao requer um grande

nmero de enzimas
Etapas da replicao:
-Iniciao
-Deselicoidizao
-Alongamento
-Trmino

Replicao do DNA bacteriano

Iniciao:
A origem de replicao (oriC)
uma sequncia de nucleotdeos.

Protena Iniciadora (DnaA)

desenrola essa sequencia.
Deselicoidizao:
DNA-helicase se liga na fita
descontnua e move a forquilha de
replicao
Protenas de ligao unifilamentar
(SSB) impedem que as fitas
voltem a se unir
DNA girase reduz a fora de toro
na forquilha
A enzima que faz a nova fita:
DNA-polimerase
Enzima de alta fidelidade
Necessita de iniciadores (primers)
para comear a sntese de uma
nova fita

Necessita de iniciadores (primers)

para comear a sntese de uma
nova fita
Ento como comea a sntese?
Primase: primers de RNA (10 a 12
nucleotdeos)
Fornece um grupo 3-OH para a
DNA-polimerase
Depois esses primers so
removidos
Alongamento:
E. coli possui cerca de 5 DNApolimerases.
DNA-polimerase I e III fazem a
sntese do DNA
Outras so responsveis pelo
reparo.

DNA-polimerase III tem duas

atividades:
Sntese 5 3
Exonuclease 3 5
DNA-ligase
Na forquilha de replicao deve
ocorrer a sntese das duas fitas ao
mesmo tempo.
Componentes da forquilha de
replicao:
- Helicase
- Protenas de ligao a um s
filamento
- A topoisomerase DNA-girase
- Primase
- DNA-polimerase
Termino:

Dado pelo encontro de duas

forquilhas ou por sequncias no
DNA
Reviso de erros:
Seleo dos nucleotdeos
Reviso
Reparo de pareamento errado
1 erro a cada 10 milhes de
nucleotdeos
A replicao na clula eucaritica:
Vrias origens de replicao
Maior nmero de DNApolimerases:
DNA-polimerase = Primase
Diferentes polimerases para cada
filamento
Montagem dos nucleossomos
Replicao coordenada com o ciclo
celular

O problema da ponta do
cromossomo
O problema da ponta do
cromossomo

ESTRUTURA DO RNA E
TRANSCRIO

Introduo
Qual a molcula da vida mais
primitiva?
Obs.: - Capacidade de estocar e
transmitir a informao gentica
- Catalisar transformaes
qumicas
DNA ou Protenas???
1981 Tomas Cech
RNAs de Tetrahymena
thermophila

As Ribozimas: RNAs com atividade

cataltica.
Transcrio:
Sntese de uma molcula de RNA,
usando o DNA como molde. Etapa
importante na transmisso da
informao do gentipo para a
expresso no fentipo.

A Estrutura do RNA
RNA ou cido Ribonucleico
Ribonucleotdeos mantidos por
ligaes fosfodiester
Comparao com o DNA

O RNA pode assumir diversas

estruturas secundrias,
possibilitando executar um
nmero maior de funes.
RNA e suas diversas funes:
RNA ribossmico (rRNA)
RNA mensageiro (mRNA)
RNA imaturo ou RNA pr-mensageiro
(pr-mRNA)
RNA transportador (tRNA)
Pequenos RNAs nucleares (snRNA)
RNA de interferncia (RNAi)
microRNA (miRNA)
Pequenos RNAs de interferncia (siRNA)

Todos os RNAs so criados a partir

de uma molcula de DNA por um
processo chamado transcrio.
um processo altamente seletivo.
Requerimentos:
1.DNA

molde (uma das fitas)

2.Matria

prima (ribonucleosdeos trifosfatos ou rNTPs)

3.Aparato

de transcrio (enzimas)

O Molde de DNA
1970 - Oscar Miller Jr., Barbara
Hamkalo, e Charles Thomas.
1963 Julius Marmur, et al..
Normalmente apenas uma das
fitas transcrita.

A unidade de transcrio:
Trecho no DNA que guia a
transcrio e que possui a
sequncia a ser transcrita.
Promotor (Promoter)

Regio codificadora do RNA (RNA-coding

region)
Sequncia de trmino (Terminator)
Acima ou a montante (Upstream) Negativo
Abaixo ou a jusante (Downstream)
Positivo

A matria prima para construir o

RNA:
Nucleosdeos tri-fosfato
Adicionados aos terminal 3 da
molcula em formao

A sntese do RNA no requer um

iniciador (primer)

A cadeia em crescimento
construda no sentido de 5 para 3
O Aparato de Transcrio:
RNA-Polimerase
Outras protenas

- Procariontes
Possuem apenas um tipo de RNApolimerase, com vrias
subunidades.
- Eucariontes
H 3 tipos diferentes. Todas so
formadas por vrias unidades
polipeptdicas.

Transcrio em Bactrias
Pode ser dividida em trs etapas:
1.Iniciao
2.Alongamento
3.Finalizao

Etapa 1 Iniciao
- Reconhecimento do promotor
- Formao da bolha de
transcrio
- Ligao entre os primeiros rNTPs
- Liberao do aparato de
transcrio do promotor
O Promotor (regio promotora)
Apresenta uma sequncia
consenso (comum entre os vrios
organismos)

Essa sequncia est localizada em

-10 upstream (acima).
conhecida como sequncia
consenso -10.
Outra sequncia consenso se
localiza em -35 acima (upstream),
conhecida como sequncia
consenso -35 TTGACA
Etapa 1 Iniciao
No h uma sequncia consenso
no ponto de incio da transcrio
(+1), mas frequente o incio com
CAT, sendo o nucleotdeo A a
posio +1.

O Fator-sigma se desprende do
complexo ao iniciar a sntese do
RNA.
A RNA-polimerase no necessita
de um iniciador (primer) para
iniciar a sntese
O primeiro nucleotdeo
incorporado mantm a estrutura
tri-fosfato.
Etapa 2 Alongamento
A RNA-polimerase move-se para
baixo (downstream)
Em 37oC, aproximadamente 40
nucleotdeos/segundo
incorporados
Provavelmente, Topoisomerases
diminuem a tenso de
enrolamento das hlices
(superhelicoidizao)

Etapa 3 - Finalizao
A RNA-polimerase para de adicionar
nucleotdeos
A fita de RNA liberada da RNApolimerase
O RNA se dissocia do DNA
A RNA-polimerase se desprende do DNA

-Independente
-Dependente

da protena Rho

da protena Rho

Transcrio em Eucariontes

Muito semelhante aos

procariontes, mas...
No h uma nica sequncia consenso de
promotor
Cada RNA-polimerase reconhece um
promotor especfico
H muitas protenas envolvidas na
iniciao do processo
necessrio liberar o DNA dos
nucleossomos (estgio de compactao
do DNA)

Etapa 1 Iniciao
Estimulada pelas regies
promotoras e estimuladoras
O promotor eucarionte possui
vrias sequncias consenso, sendo
a mais importante conhecida como
TATA-box.

 preciso formar um aparato de

transcrio, do qual faz parte a RNApolimerase II e os fatores gerais de
transcrio, conhecidos como TFII (A, B,
D, E, F e H)

Estimuladores so sequncias de DNA

(muitas vezes distantes do gene que
controlam) capazes de aumentar a
frequncia de transcrio de um dado
gene.
O oposto reconhecido como sequencia
silenciadora.

Etapa 2 Alongamento
Etapa 3 Finalizao