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PROSPECCIN DE INHIBIDORES

DE MECANISMOS DE RESISTENCIA BACTERIANA


Ftima Ramrez Meja1 Yolanda Magdalena Garca Rodrguez2, Francisco J. Espinosa Garca3.

Eje 1. Mesa 5: Ciencias Mdicas, Biomedicina y Salud


Resumen
Los aceites esenciales Artemisia ludoviciana, Lippia graveolens y Mikania
micrantha se extrajeron por arrastre de vapor y se analizaron por cromatografa
de gases-masas. Los aceites esenciales de L. graveolens y A. ludoviciana
mostraron actividad antimicrobiana en bacterias Gram-positivas (Staphylococcus
aureus) y Gram-negativas (E.coli, Salmonella sp.) y en combinacin con
antibiticos comerciales. Mikania micrantha en combinacin con un antibitico
comercial mostr actividad antimicrobiana en bacterias Gram-positivas
(Staphylococcus aureus).
Palabras clave: Actividad antibacteriana, Artemisia ludoviciana, Lippia
graveolens, Mikania micrantha.
Introduccin
Las bacterias resistentes a los antibiticos es un serio problema para la sociedad
y los hospitales que adquieren infecciones por bacterias patgenas resistentes a
mltiples antibiticos como Staphylococcus aureus, Salmonella, Shigella,
Enterococcus sp. y Pseudomonas aeruginosa (Robbins y Cotran 2010).
Los mecanismos de resistencia bacteriana son complejos y variados, incluso
existen bacterias con varios mecanismos de resistencia, como: alteracin de
receptores, alteracin del transporte de antibiticos e inactivacin enzimtica.
Este ltimo es muy importante por la capacidad que tienen las enzimas de anular
el efecto de los antibiticos (Koneman 2006).
A partir de la dcada de los 80 comenz el resurgimiento de la investigacin
qumica de productos naturales derivados de plantas en contra de
microorganismos patgenos, incluso se sabe que actualmente alrededor de la
mitad de los productos farmacuticos ms vendidos son productos derivados de
plantas (Galbis et. al 2004). Las plantas en apariencia ofrecen una residencia
ptima contra insectos, virus y otros agentes infecciosos, porque es una forma de
escapar de sus depredadores. Por esta razn las plantas han desarrollado en su
estructura y composicin qumica, defensas que ha obligado a sus consumidores
a una considerable especializacin para seguir explotando este recurso, todo ello
a travs de un proceso coevolutivo (Montesinos 1996). Ello ha generado una
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Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo; fatima_frfm@yahoo.com.mx


Universidad Nacional Autnoma de Mxico; yolitagr@hotmail.com
Universidad Nacional Autnoma de Mxico; espinosa@cieco.unam.mx

carrera de armamentos entre las plantas que se defienden con mecanismos


diversos y los consumidores que tratan de superar estas barreras defensivas
(Montesinos 1996). Por esta razn es importante probar nuevos compuestos
derivados de plantas contra bacterias resistentes y as contribuir con conocimiento
para solucionar el problema de salud de la resistencia bacteriana.
En la dcada de 1960 se comenz a explorar el potencial antimicrobiano de los
aceites esenciales comprobando la eficacia de los compuestos voltiles (Laird y
Phillips 2011). Los aceites esenciales, son lquidos aromticos aceitosos obtenidos
a partir materiales vegetales (flores, hierbas, hojas, frutos, ramas, corteza,
semillas, madera y races) que poseen propiedades antibacterianas y han sido
seleccionados como fuentes de nuevos antibiticos. Los estudios in vitro de los
aceites esenciales han demostrado la inhibicin activa del crecimiento bacteriano,
con resultados variables. Los aceites esenciales en combinaciones pueden
producir actividad antimicrobiana y en combinacin con otros antimicrobianos
pueden mejorar la eficacia de los antimicrobianos. Estudios recientes han
demostrado la actividad de los aceites esenciales como potenciadores de la
penetracin para antispticos y como restauradores de la actividad antimicrobiana
contra la resistencia bacteriana (Solrzano y Miranda 2011). Se ha probado la
actividad antimicrobiana de algunos aceites esenciales, por ejemplo; Lantana
achyranthifolia, que inhibe a Vibrio choleare, shigella boydii y Yersinia
enterocolitica que producen enfermedades gastrointestinales. (Hernndez et. al
2004). El aceite esencial de Cordia curassavica que inhibe al Staphylococcus
aureus (Hernndez et. al 2006).
Objetivo
Determinar la actividad antimicrobiana de los aceites esenciales de Artemisia
ludoviciana, Lippia graveolens, Mikania micrantha; en bacterias patgenas de
humanos, comprobando si tienen actividad antimicrobiana o potencian la actividad
antimicrobiana de antibiticos comerciales.
Materiales y Mtodos
Material vegetal: Artemisia ludoviciana Nutt, Lippia graveolens Kunth, Mikania
micrantha Kunth del estado de Michoacn.
Anlisis qumico del aceite esencial: El aceite esencial se obtiene por destilacin
con arrastre de vapor. Esta tcnica permite separar sustancias orgnicas
insolubles en agua, como los aceites esenciales de tejidos vegetales. La
extraccin consiste en colocar 4 kilogramos de planta fresca en una autoclave
modificada a 120 C y 15 lb de presin por dos horas. El vapor de agua arrastra el
aceite esencial hacia un par de refrigerantes que enfran la mezcla hasta llegar a
un embudo de separacin que con 15 ml de hexano, en el cual quedan disueltos
los compuestos no polares. De esta manera se obtienen 20 ml de aceite esencial,

mismos que se filtran con un papel filtro que contiene sulfato de sodio para
eliminar la humedad.
Se inyectan 0.5l del aceite esencial en un cromatgrafo de gases Agilent (6890
Series GC-System) equipado con un detector de masas (5973 Network Mass
Selective Detector). El cromatgrafo se oper usando helio como gas acarreador
con un flujo de 1ml/min, con inyeccin dividida (split 60.3) a una temperatura de
220C, en una columna capilar no polar HP5MS (25m x 25mm x 25m), usando el
siguiente programa de temperatura en el horno: una temperatura inicial de 60C,
seguida de una rampa de 5C/min para llegar a una temperatura de 280C por un
tiempo 1 min, otra rampa de 25C/min para llegar a una temperatura final de
300C, durante 3 min. El espectrmetro de masas se operara a una velocidad de
flujo de 1ml/min, con un voltaje de ionizacin a 70eV, a una temperatura de la
interface de 280C, en modo SCAN y en un rango de masas de 35-500m/z.
Ensayo antibacteriano: Se utilizaron las siguientes cepas bacterianas
multirresistentes: Escherichia coli HIM (Hospital Infantil de Morelia), Escherichia
coli 1249 MR, Escherichia coli 182 MR, Staphylococcus aureus 48 MR,
Staphylococcus aureus 75 MR y Salmonella sp HIM (Hospital Infantil de Morelia),
donadas por el Laboratorio de Fitoqumica, UBIPRO de la Facultad de Estudios
Superiores-Iztacala, UNAM y por el Laboratorio de Microbiologa del Hospital
Infantil de Morelia.
La actividad antibacteriana se midi por el mtodo de difusin en disco (Van der
Berghe y Vlietinck, 1991). Se seleccionaron varias colonias del organismo para
preparar una suspensin del inoculo. Se ajust la turbidez comparada al estndar
de MacFarlan (lo que corresponde a aproximadamente 1-2 x10 8 CFU/ml). Se
inocul la placa y se emplearon discos de papel filtro de 6mm de dimetro
impregnados con 3.5 l de aceite esencial y se colocan en la placa inoculada. La
placa se incub a 37C. Se usaron discos de cloranfenicol (30g) como control
positivo y discos de papel filtro como blanco (sin antibitico ni metabolitos
secundarios). El control negativo es papel filtro impregnado del solvente en que
esta disuelto el aceite esencial. Tambin se us un disco del antibitico al que es
resistente la bacteria y un disco de papel filtro impregnado del aceite esencial de la
planta. Se hace un bioensayo para cada una de la plantas con las que se trabaja:
M. micrantha, L. graveolens y A. ludoviciana. Por ltimo se combin un disco del
antibitico al que es resistente la bacteria con el aceite esencial de la planta a
probar.

Resultados
Tabla 1. Actividad antimicrobiana de aceites esenciales puros
Aceite esencial

Compuestos
mayoritarios

Actividad contra
bacterias
Gram-Positivas

Actividad contra
bacterias
Gram-Negativas

Artemisia ludoviciana

Eucaliptol
Alfa-pineno
Camfeno
Beta-felandreno
Carvacrol
Alfa-pineno
Eucaliptol
Linalol
Beta-pineno
Alfa-pineno
Limoneno
Beta-Felandreno

Staphylococcus aureus 48
MR

---------

Lippia graveolens

Mikania micrantha

Staphylococcus aureus 48
MR

----------

Escherichia coli HIM


Escherichia coli 1249 MR
Escherichia coli 182 MR
Salmonella sp

----------

Tabla 2. Resultados del Aceite esencial combinado con el antibitico al que es


resistente
Especies

Compuestos
asilados

Actividad contra
bacterias GramPositivas

Actividad contra
bacterias GramNegativas

Artemisia ludoviciana

Eucaliptol
Alfa-pineno
Camfeno
Beta-felandreno
Carvacrol
Alfa-pineno
Eucaliptol
Linalol
Beta-pineno
Alfa-pineno
Limoneno
Beta-Felandreno

Staphylococcus aureus 48
MR

----------

Lippia graveolens

Mikania micrantha

Staphylococcus aureus 48
MR
Staphyloccoccus aureus
75 MR
Staphylococcus aureus 75
MR

Escherichia
coli
HIM,
Escherichia coli 1249 MR,
Escherichia coli 182 MR,
Salmonella sp

----------

Conclusiones
El aceite esencial de A. ludoviciana tiene actividad antimicrobiana in vitro contra
S. aureus solo. En combinacin con antibiticos comerciales no mostr actividad
antimicrobiana contra Gram-Negativos.

El aceite esencial de L. graveolens tienen actividad antimicrobiana in vitro en


contra S. aureus y E. coli solo. En combinacin con antibiticos comerciales la
actividad antimicrobiana es mayor que la del aceite puro.
El aceite esencial de Mikania micrantha no tiene actividad antimicrobiana in vitro.
En combinacin con cefalosporina de cuarta generacin inhibe el crecimiento de
S.aureus.
Referencias
Koneman E.W. 2006. Diagnostico microbiolgico. Ed.6. Panamericana. pp. 903919
Hernndez, T., Canales, M., vila, J.G., Garca, A.M, Martnez, A., Caballero, J.,
Romo de Vivar, A., Lira, R., 2004 Composition and antibacterial activity of essential
oil of Lantana achyranthifolia. Journal of Ethnopharmacology 96, 551-554.
Hernndez, T., Canales, M., Tern, B., vila, O., Duran, A., Garca, A.M.,
Hernndez, H., ngeles, O., Fernndez, M., vila, G.2006. Antimicrobial activity of
the essential oil and extracts of Cordia curassavica.
Journal of
Ethnopharmacology 111, 137-147.
Laird, K., Phillips, C., 2011. Vapour phase: a potential future use for essential oils
as antimicrobials?. Letters in Applied Microbiology 169.
Montesinos, J.L.1996. Coevolucin de plantas e insectos.Departamento de
biologa. Universidad autnoma de Madrid. pp. 13-19.
Robbins, S., Cotran, R. Patologa estructural y funcional. 2008. Ed. 8. Elsevier,
New York, pp. 337.
Solrzano, F., Miranda, G., 2011. Essential oils from aromatic herbs as
antimicrobial agents. Food biotechnology. 32, 136-141.
Van der Berghe, D.A., Vlietinck, A.J., 1991. Screening methods for antibacterial
agents from higher plants. In: Dey, P.M., Harborne, J.B., Hostettman, K. (Eds.),
Methods in Plant Biochemistry. Assay for Bioactivity, vol. 6. Academic Press,
London, pp. 4769