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Despus de realizar la lectura del artculo sobre Neisseria, responda el siguiente cuestionario:

1.

2.

3.

Con que tipo de escobilln se debe realizar la toma de la muestra clnica para
recuperar N. gonorrhoeae. Porque no se deben usar escobillones de algodn o de
alginato de calcio.
La eleccin de muestras y mtodo de recogida depende de la tcnica de prueba
utilizado en un laboratorio y de la edad, el sexo y la orientacin sexual de la
paciente (4). muestrasLos hisopos se recogern con dacrn o rayn porque el
calcio alginato puede ser txico para los gonococos. Los cidos grasos inhiben la
el crecimiento de los gonococos; por lo tanto, hisopos de algodn que no hacer la
listalas especificaciones del fabricante aceptables no deben utilizarse (5).
Para minimizar los efectos inhibitorios de sustancias desconocidas en la muestra,
los hisopos se inocularon directamente sobre medio de crecimiento o colocado en
medio de transporte hisopo inmediatamente despus del muestreo
Explique el procedimiento de toma de muestra uretral y cervical/vaginal.
Cervicales y vaginales muestras: muestras cervicales debe tomarse de las
mujeres jvenes y adultas. Las infecciones gonoccicas en las nias prepberes
implicar la vagina y el cuello del tero no; Por lo tanto, las muestras vaginales se
recogen en esta edad grupo. Cuando el paciente presenta una secrecin uretral,
especmenes de uretra o meato adicionales deben tomarse debido a que la
sensibilidad de la deteccin de los gonococos cervical muestras es menor que la
de la uretra o meato especmenes. Hisopos similares a hisopos uretrales,
cervicales y vaginales pueden
usarse para preparar frotis, para inocular medios de cultivo directamente,para las
pruebas basadas en cidos nucleicos o para su presentacin en el transporte
medios de comunicacin para laboratorios distantes.En los casos de sospecha de
coinfecciones de N gonorrhoeae y Chlamydia trachomatis, la muestra cervical
para N gonorrhoeae deteccin debe tomarse antes de la muestra para C.
trachomatis, N gonorrhoeae porque est presente en el moco de la endocrvix
y C trachomatis est presente en el epitelio cervical las clulas.
Uretral Exprese exudados uretrales cuando los pacientes tienen el alta.
Si no hay descarga, comprimir el meato verticalmente para abrir la uretra distal e
inserte un hisopo humedecido con agua (alginato de calcio delgada
o dacrn) con alambre flexible lentamente (3 cm a 4 cm en hombres o 1 cm a 2
cm en las mujeres), gire lentamente y retire suavemente.
Orina Pregunta pacientes para recoger slo los primeros 10 ml a 15 ml de orina.
Los pacientes no deberan haber anulado durante al menos 2 horas antes de la
recogida de muestras para aumentar la posibilidad de detectar el organismo.
Cervical introduce un espculo en la vagina para ver el cuello uterino.
Inserte un hisopo de 1 cm a 3 cm en el conducto cervical y rotar durante 10 s a
30 s para permitir la absorcin de exudados.
Vaginal Recoger agruparon las secreciones vaginales, si est presente.
Muestras de lavado vaginales son ms preferido y aceptable para las nias
prepberes. Si no es posible, frotar un hisopo de algodn estril contra la
la pared posterior de la vagina y permitir que el hisopo absorba la muestra
En que condiciones se debe hacer el transporte de la muestra.
Mtodos de transporte varan con la muestra y el tipo de
de prueba que se realiza, pero en todos los casos cuando est disponible
comercialmente
se utilizan los sistemas de transporte, las instrucciones proporcionadas por el
fabricante deben ser seguidas.
Idealmente, las muestras deben ser inoculadas en la cultura
medio inmediatamente despus de la recoleccin para preservar la viabilidad
de gonococos para el aislamiento. Si los medios inoculados se estn
transportados a un laboratorio local, las placas deben mantenerse a
temperatura ambiente durante no ms de 5 horas en una enriquecida CO2ambiente usando un frasco o una vela CO2 comercial
Generando sistema. Si se requiere el envo de larga distancia, los especmenes
debe ser inoculada en medios contenidos en una generacin de CO2
sistema, se incubaron durante 18 h a 24 h y tener un crecimiento visible en
la placa antes de enviar. Sistemas de generacin de CO2 como JEMBEC (Becton,
Dickinson and Company, EE.UU.) (5) y Intray GC (BioMed
Diagnstico, EE.UU.) mantenimiento de la viabilidad de los organismos de
perodos ms largos de tiempo que los sistemas no nutritivos.
Las muestras deben ser empacados adecuadamente para evitar la exposicin
a temperaturas extremas y para cumplir los criterios especificados

en la Ley de Transporte de Mercancas Peligrosas y


Reglamento (6)
Transporte de las culturas
Varios sistemas de transporte son adecuados para el transporte de las culturas
a los laboratorios para pruebas de sensibilidad.
Cultivos congelados para el transporte: Las clulas de una placa de agar 24 h son
suspendidas en caldo de infusin de cerebro corazn con 20% de glicerol y
colocado en un criovial tapn de rosca. La suspensin se puede congelar en
un bao de hielo seco, un congelador a -70C o nitrgeno lquido. El congelado
culturas deben ser enviadas en hielo seco de acuerdo con la
instrucciones para la Ley de Transporte de Mercancas Peligrosas y Reglamentos.
Sin medios de transporte congelado:
Los sistemas de transporte de la torunda con o sin carbn (por ejemplo,
StarSwab, Starplex Cientfico, Ontario; PROBACT
Transporte Sistema Swab, Med-Ox Diagnostics Inc,
Ontario; Copan Transporte Swab, Oxoid, Ontario) son
adecuado para el mantenimiento de los gonococos viables durante 6 horas a 12 h
a temperatura ambiente. Se requiere un inculo pesado para transporte durante
la noche de cultivos puros dentro Canad.
La placa JEMBEC contiene agar Martin-Lewis en un
placa de poliestireno rectangular con un pozo interior que
sostiene una tableta de CO2 de generacin para proporcionar un modificado
ambiente para las culturas.
medio Intray GC con preincubacin.
agar chocolate se inclina con preincubacin
4.

Cuales son los sistemas utilizados para transportar los cultivos de un laboratorio
a otro.
Transporte de las culturas
Varios sistemas de transporte son adecuados para el transporte de las culturas
a los laboratorios para pruebas de sensibilidad.
Cultivos congelados para el transporte: Las clulas de una placa de agar 24 h son
suspendidas en caldo de infusin de cerebro corazn con 20% de glicerol y
colocado en un criovial tapn de rosca. La suspensin se puede congelar en
un bao de hielo seco, un congelador a -70C o nitrgeno lquido. El congelado
culturas deben ser enviadas en hielo seco de acuerdo con la
instrucciones para la Ley de Transporte de Mercancas Peligrosas y Reglamentos.
Sin medios de transporte congelado:
Los sistemas de transporte de la torunda con o sin carbn (por ejemplo,
StarSwab, Starplex Cientfico, Ontario; PROBACT
Transporte Sistema Swab, Med-Ox Diagnostics Inc,
Ontario; Copan Transporte Swab, Oxoid, Ontario) son
adecuado para el mantenimiento de los gonococos viables durante 6 horas a 12 h
a temperatura ambiente. Se requiere un inculo pesado para transporte durante
la noche de cultivos puros dentro Canad.
La placa JEMBEC contiene agar Martin-Lewis en un
placa de poliestireno rectangular con un pozo interior que
sostiene una tableta de CO2 de generacin para proporcionar un modificado
ambiente para las culturas.
medio Intray GC con preincubacin.
agar chocolate se inclina con preincubacin

5.

Cuales son los medios de cultivo y las condiciones de incubacin necesarios para
hacer la bsqueda de N. gonorrhoeae a partir de muestras clnicas.
El mtodo de laboratorio preferido actual para el diagnstico de
N gonorrhoeae infecciones es el aislamiento y la identificacin de
el agente (Figura 1). El cultivo de cepas es importante para los antimicrobianos
las pruebas de sensibilidad, con fines de vigilancia, deteccin
fracaso del tratamiento y brotes caracterizan.
Los medios y las condiciones culturales de aislamiento: La primaria
las muestras deben ser inoculadas en el chocolate no selectivo
agar y agar selectivo que contiene agentes antimicrobianos que
inhibir el crecimiento de bacterias comensales y hongos. El antibacterial
agentes modificado de Thayer-Martin, Martin Lewis y

Medio la ciudad de Nueva York se vancomicina, colistina, trimetoprim


lactato y los agentes antifngicos nistatina y anisomicina
o anfotericina B (5). Algunas cepas exigentes, tales como la
arginina, cepas hipoxantina y que requiere uracilo, son ms
susceptibles a las concentraciones de vancomicina o trimetoprim
utilizado en los medios selectivos (5). Los aislados que son inhibidas
por suplementos en medios selectivos deberan ser cultivadas en medios
con menores concentraciones de antibitico. Los aislados que son atpicos,
tales como cepas susceptibles a la vancomicina, se debera dar traslado
a laboratorios de referencia para confirmar su identificacin.
Por lo tanto, un programa de evaluacin de la calidad que se compara
peridicamente tasas de aislamiento en medios selectivos y no selectivos es
deseable.
6.

Que pruebas bioqumicas le permiten diferenciar las siguientes bacterias:


N. gonorrhoeae, N. meningitidis, Kingella denitrificans, N. cinerea, N. subflava
biovar subflava, N. subflava biovar flava, N. subflava biovar perflava, N. sicca, N.
mucosa, N. flavescens (Realizar una tabla).
Prueba de oxidasa positiva,
La catalasa dan positivo,
La colistina prueba positiva
Sustrato enzimtico cromognico
Prueba de anticuerpos fluorescentes
prueba colorimtrica

7.

En que consiste el sistema Accu-Probe. Cual es su utilidad y sus limitantes, en


comparacin con las tcnicas de amplificacin gentica.
Un sistema de sonda de ADN (AccuProbe, Gen-Probe, EE.UU.) tiene
ha desarrollado para la confirmacin cultura (5). el AccuProbe
sistema utiliza una cadena sencilla quimioluminiscente marcado
Sonda de ADN que es complementaria al ARN ribosomal
(rRNA) de N gonorrhoeae. El hbrido de ADN / ARN a partir de un positivo
cultura se detecta usando un luminmetro. en comparacin
con pruebas de produccin de cido y coaglutinacin rpidos, un ADN
prueba de la sonda es ms especfica y sensible (5,19).
Primers especficos para la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) mtodos de deteccin basados tambin se han descrito en la literatura
(8,24). Estos mtodos son los ms sensibles, aunque
especificidad depende de la eleccin de los cebadores. El uso de
cebadores para orientar el plsmido crptico, no se recomienda
las zonas donde hay una alta prevalencia de prolina, la citrulina y
cepas que requiere uracilo, que son tpicamente menos de plsmido.
Kits comerciales estn disponibles, pero son ms caros cuando
utilizado como pruebas de confirmacin.

8.

Cual es el blanco de los sistemas de amplificacin gentica SDA y Nasba. Son


sistemas de amplificacin isotrmicos?. Explique. Cual es la ventaja de estos
sistemas sobre las sondas Accu-Probe.
Strand sistema de amplificacin de desplazamiento: The Strand
Amplificacin por desplazamiento del sistema (SDA) es una isotrmica
sistema de amplificacin. Un sistema semiautomtico mediante el
Sistema SDA est comercialmente disponible (sistema BD ProbeTec ET,
Becton, Dickinson and Company, EE.UU.) para la simultnea
deteccin de C. trachomatis y N. gonorrhoeae. los Las
Sistema ProbeTec ET se encuentra a 1 h de ensayo que puede procesar un mayor
nmero de ejemplares que el sistema COBAS AMPLICOR
dentro de un da 8 h (31). Por lo tanto, los laboratorios de alto rendimiento
puede ver el sistema SDA como ms eficiente que los sistemas de PCR
(31).
El cido nucleico basada en la secuencia de amplificacin: El cido nucleico
amplificacin basada en la secuencia (NASBA) es un isotrmica
sistema de amplificacin de cido nucleico que no requiere una
termociclador. El kit NucliSens bsica (Organon Teknika,

Boxtel, Pases Bajos) proporciona una amplificacin del ARN y


plataforma de deteccin. El kit contiene reactivos para la extraccin de RNA
y la amplificacin, y una sonda marcado con rutenio para
la deteccin de los amplicones de electroquimioluminiscencia. este sistema de
ha sido evaluado para la deteccin de 16S rRNA de N gonorrhoeae
en muestras del tracto genital (32). En comparacin con
los mtodos de cultivo de 216 muestras de frotis, la NASBA
utilizando el kit NucliSens bsico fue del 97,9% de sensibilidad y 98,7%
especfico (32).
9.

En que consiste el sistema LCR de Abbott Laboratorios. Explique el fundamento


de esta tcnica de amplificacin gentica.
Reaccin en cadena de la ligasa: La reaccin en cadena de la ligasa (LCR) (LCx
Uriprobe, Abbott Laboratories, EE.UU.) utiliza sondas que se dirigen
los genes opa y pil para la deteccin de N. gonorrhoeae en
endocervical, orina y muestras vaginales. la amplificacin
pasos incluyen un ciclo de temperatura elevada para la desnaturalizacin
de ADN diana de una sola hebra, una temperatura ms baja
ciclo de hibridacin de sondas adyacentes a los objetivos, para llenar lagunas
con ADN polimerasa en presencia de desoxiguanosina
trifosfato, y la ligadura con ligasa de sondas. el ligado
amplicones son capturados y detectados por una fluorescencia
inmunoensayo. La sensibilidad y la especificidad de LCR para
la deteccin de N gonorrhoeae en diferentes muestras han sido
demostrado ser 97,3% a 100% y 97,8% a 100%, respectivamente
(8). A partir de 2003, el Abbott LCx Uriprobe fue retirado del mercado
en Canad.

10.

Nombre los mtodos utilizados para tipificar N. gonorrhoeae. Cual es el fin de la


tipificacin.

Los mtodos de caracterizacin desarrolladas para


la diferenciacin de cepas incluyen auxotyping (A), serotipificacin (S),
Anlisis del perfil de plsmido (P), la secuenciacin porB, mecanografa opa,
electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE), ribotipificacin, amplificado Los mtodos de
caracterizacin desarrolladas para
la diferenciacin de cepas incluyen auxotyping (A), serotipificacin (S),
Anlisis del perfil de plsmido (P), la secuenciacin porB, mecanografa opa,
electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE), anlisis de restriccin de ADN ribosomal
ribotipificacin, amplificado, PCR arbitrariamente cebada
y fluorescentes amplificacin de fragmentos polimrficos
anlisis (5,37-39). Mtodos de tipificacin molecular junto con
recopilacin de datos epidemiolgicos pueden utilizarse para estudiar las enfermedades
los patrones de transmisin dentro de una poblacin y construccin
redes sexuales precisas (18). Actualmente, A, S y P son el
la mayora de los mtodos de caracterizacin comunes que se utilizan para este tipo de
estudios. Una se basa
en los requisitos de crecimiento de nutrientes de las cepas, y S requiere
el uso de anticuerpos monoclonales dirigidos a eptopos de protenas I.
Ambos procedimientos son fciles de realizar y no lo hacen
requieren equipo especial. P diferenciar tipos de lactamasa beta
plsmidos y resistencia a la tetraciclina mediada por plsmidos
(40). Plsmidos de conjugacin y otros plsmidos aadir
poder discriminatorio (37).
El poder discriminatorio de la A, S y P escribiendo para diferenciar
cepas para la vigilancia de los antimicrobianos resistentes
N gonorrhoeae se ha demostrado (37). El anlisis de plsmidos
ha limitado valor, se utiliza principalmente para identificar cepas portadoras
mediada por plsmidos resistencia. Una combinacin con S ofrece
mayores niveles de discriminacin. Combinados, estos
tres mtodos producen ndices discriminatorios adecuados para
vigilancia nacional. Una de las deficiencias de S es que
Algunas cepas son no tipificable. Otro problema es que, desde
1996, producidos comercialmente reactivos monoclonales S no tienen
estado disponible. Los reactivos S restantes de referencia nacional

laboratorios en diferentes partes del mundo se estn utilizando para


las investigaciones de brotes y casos mdico-legales.
Para resolver estos problemas del serotipo, secuenciacin del ADN de
el gen que codifica el antgeno porB serotipificacin, protena I o la
porina, se puede utilizar como un mtodo alternativo (41,42). ADN
secuenciacin tiene la ventaja sobre la serotipificacin convencional
porque todas las cepas son tipificable.
Opa-tipificacin basada en la restriccin de fragmentos polimrficos
de PCR amplificados del locus opa se ha demostrado
ser un mtodo de subtipos altamente discriminatoria para la
investigacin de brotes y la cartografa de las redes sexuales
(41). Una de las desventajas de este mtodo es la falta de
normalizacin entre laboratorios de patrones de bandas (y la
dando como resultado dificultades para la comparacin entre laboratorios de los datos).
Al igual que el sistema de opa-mecanografa, PFGE, ribotipificacin y
anlisis de restriccin de ADN ribosmico amplificado son difciles de
estandarizar para la comparacin entre laboratorios. PFGE tiene alta discriminatoria
de potencia para diferenciar las cepas N gonorrhoeae, pero
los otros mtodos moleculares no son tan discriminatorio (38).
Una de las desventajas de PFGE es que algunas bandas de PFGE
patrones tienen grandes fragmentos de tamao molecular que no se resuelven
tambin. Polimorfismo de longitud de fragmentos amplificados fluorescente
anlisis tiene poder discriminatorio prxima a la de opatyping
(39). Este mtodo produce fragmentos que pueden dimensionarse
utilizando con precisin las normas internas (39).