BIOSNTESIS

DE CIDOS
NUCLEICOS:
REPLICACIN

FLUJO DE LA
INFORMACIN GENTICA

Figura

1: Mecanismos para la transferencia

de informacin en la clula
DNA
replication

RNA
replication

DNA Transcription RNA

Reverse
transcription

Translation

Protein

REPLICACIN DEL DNA

El DNA existe de manera natural en las formas de

una sola hebra y de doble cadena, y ambas pueden
existir en las formas lineal o circular
Estudiaremos primero la replicacin del DNA
circular de doble hebra y despus al DNA lineal de
doble cadena
La

mayor parte de los detalles han sido discutidos

primero en procariontes, en particular en E. coli

REPLICACIN PROCARIONTE
Problemas

en la replicacin de un DNA circular

de doble cadena
Cmo

lograr el desenrollamiento y separacin

continuos de las dos hebras de DNA
Cmo proteger a las porciones separadas del ataque de
las nucleasas que degradan al DNA de una sola hebra
El molde de DNA tiene una hebra 5 -> 3 y la otra
hebra es 3 -> 5; cmo sintetizar al DNA hijo en la
direccin 5 to 3 a partir de cada hebra original
Cmo protegerse contra los errores en la replicacin

REPLICACIN PROCARIONTE

La replicacin involucra la separacin de las dos hebras

originales y la sntesis de dos hebras hijas nuevas
utilizando las hebras originales como moldes
Replicacin semiconservativa: cada DNA nuevo contiene
una hebra molde original y una hebra recientemente
sintetizada
Esto se estableci al final de la dcada de 1950 mediante
los experimentos de Meselson y Stahl
Una observacin clave es que el 15N-DNA tiene una
densidad mayor que el 14N-DNA, y los dos se pueden
separar mediante ultracentrifugacin en un gradiente de
densidad

REPLICACIN
SEMICONSERVATIVA

Figura 2: Replicacin Semiconservativa

REPLICACIN PROCARIONTE
La

doble hlice del DNA se desenrolla iniciando en un punto

especfico llamado origen de replicacin
Las cadenas de polinucletidos se sintetizan en ambas
direcciones a partir del origen de replicacin; la replicacin
del DNA es bidireccional en la mayor parte de los organismos
En cada origen de replicacin, existen dos horquillas de
replicacin, puntos en los cuales se forman las nuevas
cadenas de polinucletidos
Existe un solo origen de replicacin y dos horquillas de
replicacin en los DNA circulares de los procariontes
En la replicacin de un cromosoma eucarionte, existen varios
orgenes de replicacin y dos horquillas de replicacin en
cada origen

REACCIN DE LA DNA
POLIMERASA
El

DNA se sintetiza en la direccin 5 -> 3 (a

partir de la hebra con direccin 3 -> 5 del molde)
La

hebra lder, cadena principal o primaria o con sentido

o continua se sintetiza continuamente en la direccin 5
-> 3 hacia la horquilla de replicacin
La hebra retrasada, secundaria, antisentido o
discontinua se sintetiza semidiscontinuamente como
una serie de fragmentos de Okazaki, tambin en la
direccin 5 -> 3, pero lejos de la horquilla de replicacin
Los fragmentos de Okazaki de la hebra retrasada se
unen por la accin de la enzima DNA ligasa

REACCIN DE LA DNA
POLIMERASA
Figura 3: Modelo semidiscontinuo
de la replicacin

Reaccin de la DNA Polimerasa

O
P-O-CH2
O Base1
O
H
H
H
H
OH H

New nucleotide to
be added

O O
O
O-P-O-P-O-P-O-CH2 O Base2
O- O- OH
H
H
H
OH H

O 5'
P-O-CH2
O Base1
O
H
H
H
H
O
H

O
O
O-P-O-P-O- + O=P-O-CH2
O Base2
O- OO
H
H
New phosphodiester bond
H
H
OH H

Replicacin Procarionte

Tabla 1: Existen al menos cinco tipos de DNA polimerasa

(Pol) en E coli, tres de los cuales han sido estudiados
muy extensamente
Pol I

Pol II

Pol III

+
+

+
-

+
+

103

90

130

Molecules per cell

400

10-20

Nucleotides/min at 37C

600

30

9000

Functions
Polymerization 5'

3'

Exonuclease 3'

5'

Exonuclease 5'
Molecular weight

3'

Replicacin Procarionte

La reaccin de la DNA polymerasa requiere

Los cuatro deoxiribonuclesido trifosfatos: dTTP,
dATP, dGTP y dCTP
Mg2+
Un RNA iniciador una hebra corta de RNA a la cual la
cadena creciente de polinucletido est
covalentemente unida en las primeras etapas de la
replicacin

dTTP
dATP
dGTP
dCTP

DNA-dependent
DNA polymerase

DNA + PPi

DNA Polimerasa

DNA-Pol I: reparacin y parchado del DNA

DNA-Pol III: responsable de la polimerizacin de la
hebra de DNA recientemente formada
DNA-Pol II, IV y V: enzimas de prueba de lectura y
reparacin

Replicacin Procarionte

Replicacin del DNA circular superenrollado

DNA girasa introduce una mella en el DNA
superenrollado
Se crea un punto giratorio en el sitio de la mella
La girasa abre y resella el punto giratorio en el sentido
del avance de la horquilla de replicacin
El DNA recin sintetizado automticamente asume la
forma superenrollada porque no tiene la mella en el
punto giratorio
helicasa, protena desestabilizadora de la hlice,
promueve el desenrollamiento al enlazarse a la
horquilla de replicacin
Protenas de enlace a una sola hebra (SSB): protegen
las regiones de una sola hebra al unirse firmemente a
ellas

Replicacin Procarionte

Figura 4: Caractersticas generales de una horquilla de

replicacin

Replicacin Procarionte

Reaccin de la iniciasa
RNA sirve como un iniciador en la replicacin del DNA
La enzima iniciasa cataliza la copia de un fragmento
corto de la hebra molde de DNA para producir la
secuencia del iniciador de RNA
Sntesis y unin de las hebras nuevas de DNA

Iniciada por la DNA polimerasa III (DNA pol III)

El DNA recin formado se enlaza al extremo 3-OH del
iniciador de RNA
Conforme va avanzando la horquilla de replicacin, el
iniciador de RNA es eliminado por la DNA pol I

Resumen - Procariontes

1. La sntesis de DNA es bidireccional

2. La sntesis de DNA se lleva a cabo en la

direccin 5 -> 3

La hebra lder se sintetiza continuamente

La hebra retrasada se forma como una serie de
fragmentos de Okasaki los cuales se unen despus

3. Existen al menos cinco tipos de DNA

polimerasas en E. coli

Pol III es la principal responsable de la nueva sntesis

Pol I est involucrada en la sntesis y reparacin
Pol II, IV y V son para reparacin bajo condiciones
especficas

Procariontes - Resumen

4. Desenrollamiento y proteccin
DNA girasa introduce un punto giratorio en el sentido
del avance de la horquilla de replicacin
La helicasa se enlaza en la horquilla de replicacin y
promueve el desenrollamiento
Las protenas de enlace a una sola hebra (SSB)
protegen las regiones expuestas del DNA de una sola
cadena
5. La iniciasa cataliza la sntesis del iniciador de

RNA
6. Sntesis

Catalizada por la Pol III

Iniciador eliminado por la Pol I
DNA ligasa sella las mellas remanentes

Prueba de lectura y
Reparacin

Prueba de lectura y reparacin

En promedio, la replicacin del DNA solo tiene lugar
una vez cada generacin en cada clula
Los errores en la replicacin ocurren
espontneamente solo una vez en cada 109 a 1010 pares
de bases
La prueba de lectura se refiere a la eliminacin de los
nucletidos incorrectos inmediatemente despus de
que han sido adicionados al DNA en crecimiento
durante la replicacin
Los errores en los enlaces de hidrgeno conducen a
errores en una cadena de DNA en crecimiento una vez
en cada 104 a 105 pares de bases

Prueba de lectura y Reparacin

Corte y parchado o empalme: catalizado por Pol I: el

corte es la eliminacin del RNA iniciador y el parchado
es la incorporacin de los desoxirribonucletidos
requeridos
relleno de la mella: Pol I elimina el RNA iniciador o los
errores en el DNA conforme se mueve a lo largo de
ste y despus llena los huecos con su actividad de
polimerasa
Reparacin de mal emparejamiento: las enzimas
reconocen que dos bases estn mal apareadas, el
error se elimina y el rea se replica nuevamente
Reparacin por escisin: una base daada es
eliminada por una DNA glicosilasa dejando un sitio AP;
se eliminan el azcar y el fosfato junto con varias
bases y luego la Pol I llena los huecos

Replicacin Eucarionte
Figura 5: Inicio del ciclo de replicacin del DNA

Replicacin Eucarionte
Figura 6: Fundamentos de una horquilla de replicacin eucarionte

Replicacin Eucarionte

Tabla 2: Diferencias en la replicacin del DNA en

procariontes y eucariontes
Prokaryotes

Eukaryotes

Three polymerases
I - repair enzyme
II - unknown
III- main polymerizing enzyme

Five polymerases
- makes primers , begins synthesis
- repair enzyme
- mitochondrial DNA synthesis
- main polymerizing enzyme
- polymerizing enzyme,
primer removal
Not all polymerases are exonucleases
Several origins of replication
Okazaki fragments of 150-200
residues long
Histones complexed with DNA

Polymerases are also exonucleases

One origin of replication
Okazaki fragments of 1000-2000
residues long
No proteins complexed with DNA

Telomerasa y Cncer