Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

Instituto Politcnico Nacional.

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas.

Qumico Farmacutico Industrial.

Qumica Orgnica I.

Prctica 8. Hidrlisis de una protena y ensayos

para protenas y aminocidos

2FM1.

Equipo 7.
Integrantes:
Gudio Gonzlez Carlos Alberto.
Paz Cayetano Veronica.
Rosales Tercero Daniel Yocoyani.

Prof. Leonor Reyes Domnguez.

Prof. Enrique Gonzales Rivera.

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

Introduccin
Las protenas se encuentran en gran cantidad en los organismos biolgicos.
Clasificacin por funcin

Protenas fibrosas o estructurales: insolubles en agua de gran resistencia.

Protenas globulares: son protenas pequeas se asocian y forman
unidades compactas, solubles en agua.
Protenas conjugadas: contiene un grupo no peptdico.
Glicoprotenas: uno o varios azucares unidos covalentemente a la cadena
peptdica
Lipoprotenas: fosfolpidos, cidos grasos o lpidos neutros.
Hemoprotenas: compuesto nitrogenado con un tomo de hierro.
Nucleoprotenas: cromosomas, virus.

Niveles de complejidad de la estructura de la protena

Estructura primaria: Secuencia especfica de los aminocidos en la cadena

polipeptdica y estn implicados enlaces peptdicos
Estructura Secundaria: la cadena se acomoda por interacciones de puente
de hidrogeno, dndole una conformacin a las protenas
Estructura terciaria: las cadenas enrolladas se doblan por diversas
interacciones: puentes de hidrogeno, puentes de disulfuro, fuerzas
electrostticas.
Estructura cuaternaria: la agrupacin de dos o ms unidades plegadas

Aminocidos: son como su nombre lo indica compuestos bifuncionles

Ya que contiene un grupo amino y un grupo carboxilo cido as que se pueden
comportar como cidos o bases.
Menor a 50 aminocidos es considerado como pptidos
Mayor a 50 aminocidos es considerado como una protena
Los aminocidos pueden asociarse entre s en cadenas largas formando enlaces
amida entre el NH2 de un aminocido y el CO2H de otro.
Enlace peptdico: entre dos aminocidos se puede formar un enlace entre el
grupo amino de uno y el grupo carboxilo de otro formando enlaces covalentes

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

Enlace disulfuro. Es posible un segundo enlace covalente entre cualquier residuo

de cistena.
La cistena contiene un grupo sulfhdrico (-SH) reactivo unido con otro mediante un
enlace covalente (-SS-)
Estos residuos pueden formar puentes disulfuro, los cuales pueden unir dos
cadenas o bien unir una sola cadena para formar un anillo.
Objetivos.
Efectuar la hidrlisis total de una protena.
Identificar algunos aminocidos presentes en el hidrolizado de una protena.
Identificar por cromatografa en placa fina algunos de los aminocidos presentes
en un hidrolizado.
Diagramas

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

Procedimiento.
Para esta prctica, se realizaron siete experiencias: Reaccin xantoproteica,
Reaccin de precipitacin, Reaccin de Biuret, Reaccin con Ninhidrina, Reaccin
con cido nitroso, Accin reguladora de aminocidos y cromatografa en placa
fina. Pero para esto, primero se realizaron las preparaciones de las soluciones:
Hidrlisis de Grenetina (Solucin A) color verde, Solucin neutralizada de
hidrolizado de grenetina (Solucin B), Solucin de grenetina sin hidrolizar
(Solucin C) y Solucin de Albmina (Solucin D) color transparente opaco.
Para la elaboracin de la solucin A, se colocaron en un matraz baln 5g de
grenetina, 50ml de HCl concentrado, 50ml de agua destilada. Se le adapt un
refrigerante en reflujo y calent por 35 minutos a partir de que empez a hervir.
Finalmente, se agreg algo de carbn activado y se filtr en un matraz. Para la
solucin B, se tom 5ml de la solucin A y se neutraliz agregando NaOH al 10%
hasta neutralizar (30ml). Para la solucin C, se colocaron 2.5g de grenetina en un
vaso de precipitados y se le agregaron 100ml de agua. Para la solucin D, se
coloc en un vaso de precipitado la clara de un huevo. Se agit constantemente
y se le agregaron 100ml de agua. Posteriormente, se filtr en otro vaso quedo
como un lquido resbaloso.
Para la reaccin xantoproteica, se colocaron en un tubo de ensayo 2ml de
solucin A y en otro 2ml de solucin D. A cada uno se le agregaron 5ml de cido
ntrico concentrado. Posteriormente, se calent a bao mara y se dej enfriar.
Finalmente, se le agreg a ambos solucin de NaOH al 10% hasta neutralizar se
observ un color amarillo en cada tubo. Para la reaccin de precipitacin, se
colocaron en un tubo de ensayo 2ml de solucin A (se observ un precipitado
blanco), en otro 2ml de solucin D (un precipitado negro) y en otro 2ml de agua
destilada (precipitado blanco). Posteriormente, se le agregaron a cada uno 5ml de
solucin de NaOH al 10% y 1ml de acetato de plomo al 10%. Se calent los tubos
a ebullicin y con agitacin y se observaron los resultados. Para la reaccin de
Biuret, se colocaron en 6 tubos las siguientes sustancias:
1) 0.5ml de agua destilada y 0.5 ml de solucin de NaOH al 10%
(transparente)
2) 0.5ml de solucin C y 0.5ml de NaOH al 10% (azul-violeta)
3) 0.5ml de solucin D (azul-violeta)
4) 0.5ml de solucin A y 0.5ml de solucin de NaOH (transparente)
5) 0.5ml de solucin D y 0.5ml de NaOH (violeta)
6) 0.5ml de solucin A (transparente)

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

A cada tubo, se le agregaron 2ml de solucin de sulfato de cobre al 2% y se

agitaron.
Para la reaccin de Ninhidrina, se colocaron en 5 tubos de ensayo las siguientes
soluciones:
1) 0.5ml de agua destilada (Transparente)
2) 0.5ml de solucin B (violeta)
3) 0.5ml de solucin C (Transparente)
4) 0.5ml de solucin D (Morada)
5) 0.5ml de solucin al 1% de aminocido patrn (Morado-azul oscuro)

Se agregaron a cada tubo 0.5ml de solucin de ninhidrina al 3% y se calentaron a

bao mara por 5 minutos.
Para la reaccin de cido nitroso, se colocaron en cuatro tubos de ensayo 3ml de
HCl y despus se les adicion lo siguiente: tubo 1, 2ml de solucin A. Tubo 2, 2ml
de solucin C, Tubo 3, 2ml de solucin D. Al tubo 4 no se le agreg nada adicional.
Se les dej enfriar y se les agreg a todos 1ml de solucin acuosa de nitrito de
sodio al 5%.
Para la accin reguladora de aminocidos, en un tubo de ensayo se colocaron 2ml
de solucin B y en otro 2ml de agua destilada. A cada tubo se le agreg 6 gotas de
solucin rojo Congo. Posteriormente, se le agreg a cada tubo, gota a gota, HCl
0.1N hasta cambio de coloracin. Posteriormente, se realiz el mismo proceso
antes descrito, pero usando fenolftalena al 0.1% en lugar de rojo Congo como
indicador. En todas se obtuvo un color final rosa.
Para la cromatografa en placa fina, se coloc en una cromatoplaca una pequea
muestra de solucin B. Luego se aplic valina y alanina. Se dej secar y se
introdujo la cromatoplaca en una cmara para cromatografa con alcohol
terbutlico y agua 3:1. Se dej eluir y se revel la placa.
Anlisis de resultados
Hidrolisis de grenetina (sol. A)
Hidrlisis de las protenas: es la ruptura de la estructura primaria, es decir la
ruptura de la secuencia de una protena, que termina por fragmentar las protenas
en los aminocidos que lo constituyen
Reacciones de identificacin

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

10

Experimento 1: Reaccin Xantoproteica

Sustrato
Solucin A
Solucin D

Observaciones
Amarillo claro
Amarillo blanco

Mtodo utilizado para determinar aminocidos portadores de grupo aromticos.

(Fenilalanina, la tirosina y el triptfano)
La reaccin es especfica para los grupos fenilos sustituidos. En ella ocurre la
nitracin del grupo fenilo, que contiene una molcula orientadora hacia la posicin
orto del anillo, cuando se ponga en contacto con el cido ntrico. La nitracin del
anillo determinar que el producto de reaccin tenga un color amarillo.
Experimento 2: Reaccin de Precipitacin
Sustrato
Solucin A
Solucin D
Agua

Observaciones
Se torn a un color blanco caseoso
Se torn de un color muy obscuro
No pas nada

Puente de disulfuro: Se forman entre residuos de cistena, pueden estar muy

separados o pertenecer a otra cadena peptdica diferente pero que gracias al
plegamiento de la misma se encuentran prximos, formndose as los puentes de
disulfuro y dando estabilidad al plegamiento.
Esta reaccin se basa en la separacin mediante un lcali, del azufre de los
aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el
sulfuro de plomo
Experimento 3: Reaccin de Biuret
Tubo 1 Agua + hidrxido de sodio negativo, Se mantuvo un color transparente
Tubo 2 Sol. C + hidrxido de sodio Positivo +++ Se observ una coloracin azulvioleta
Tubo 3 Sol. A + hidrxido de sodio Negativo Se mantuvo un color transparente
Tubo 4 Sol D Positivo + Se observ una coloracin azul-violeta
Tubo 5 Sol D+ hidrxido de sodio Positivo +++++ Se observ una coloracin
violeta

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

11

Tubo 6 Sol A Negativo Se mantuvo un color transparente

Se utiliza para poder determinar el enlace peptdico de una protena.
Ntese que el reactivo de Biuret est formado por una disolucin de sulfato de
cobre en medio alcalino, este reconoce el enlace peptdico de las protenas
mediante la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los
pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces
peptdicos, lo que produce una coloracin violeta.
Experimento 4: Reaccin con Ninhidrina
Colores que arrojaron los tubos despus de agregar la solucin de ninhidrina y
calentar

1) Tubo 1 (Agua destilada): Transparente

2) Tubo 2 (Solucin B o grenetina hidrolizada neutra): violeta
3) Tubo 3 (Solucin C o Grenetina sin hidrolizar): Transparente
4) Tubo 4 (Solucin D o albmina) Morada
5) Tubo 5 (Aminocido patrn): Morado-azul oscuro
A pesar de que la grenetina es una protena ms compleja que la albmina, la
grenetina hidrolizada arroj el color violeta debido a tener ms grupos aminos
libres que la albmina por el hecho de estar ya hidrolizada.
La prueba de ninhidrina es positiva para aminocidos y protenas que tengan un
grupo -NH2 libre. Cuando el grupo -NH2 reacciona con ninhidrina, se forma un
complejo purpura
Experimento 5: Reaccin con Acido Nitroso
Sol. A + + + + + Gran desprendimiento de burbujas
Testigo - - - Se mantiene igual
Sol. C + + Hay desprendimiento de burbujas en menor proporcin
Sol. D + Casi no hay desprendimiento de burbujas.

Accin reguladora de aminocidos

Solucin
Agua
destilada
Solucin B
Agua

Indicador
Rojo congo

Color inicial
Amarillo

ml HCl 0.1 N
5ml

Rojo congo
Fenolftalena

Naranja
1% incoloro

8 ml
1 ml

Color final
Rosa

Rosa
NaOH Rosa

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

destilada
Solucin B

Fenolftalena

12

0.1% incoloro

0.1 N
4ml NaOH

Rosa

Observaciones Rojo Congo= Se observa una coloracin inicial amarillo en la

solucin B y naranja en el agua destilada.
Fenolftalena= Se observa una coloracin inicial caf en la solucin B y lechosa en
el agua destilada.
En la solucin un ion dipolo de un aminocido es una base que acepta un protn
proveniente del cido clorhdrico para formar un catin.
En la solucin que se volvi bsica al adicionarle hidrxido de sodio, es un cido
que pierde un protn y da lugar a un anin.
Experimento 6: Cromatografa en placa fina
Colocamos la solucin del hidrolizado de grenetina neutra sol. B (1), valina (2) y
alanina (3).
Calculo de Rf

Reacciones.
Hidrolisis alcalina

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

Hidrolisis acida

Reaccin de Xantoproteicas

13

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

Reaccin de Biuret

Reaccin de Ninhidra

14

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

Reaccin de cido nitroso

15

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

16

Conclusiones.
La hidrolisis es la ruptura de la estructura primaria, es decir la ruptura de la
secuencia de una protena. Esta hidrlisis de las protenas termina por fragmentar
las protenas en aminocidos.
La reaccin xantoproteica es especfica para los grupos fenilos sustituidos. En ella
ocurre la nitracin del grupo fenilo, que contiene una molcula orientadora hacia la
posicin orto del anillo, cuando se ponga en contacto con el cido ntrico. La
nitracin del anillo dar un color amarillo a la muestra.
En la reaccin de precipitacin se identifica un aminocido que contenga enlaces
disulfuro(R-S-S-R), se identific gracias a que en el tubo de ensaye se precipita
sulfuro de plomo y la solucin D que contiene albuminase torno negra pues
contiene cistena.

Instituto Politcnico Nacional

La Tcnica al Servicio de la
Patria

17

Con el experimento numero 3 reaccin de biuret demostramos enlaces peptdicos,

estos enlaces solo los encontramos en las protenas en su estado normal o sin
hidrolizar. Una vez hidrolizada en su totalidad la protena estos enlaces no estn
presentes en la muestra. Con este experimento se forma un complejo de cobre
que da una coloracin a la muestra, si no hay coloracin quiere decir que no hubo
reaccin y por tanto no estn presentes enlaces peptdicos.
Reaccin con cido nitroso, nos ayuda a identificar grupos amino libre en una
protena, esto se puede verificar cuando aadimos el cido nitroso, ya que se
desprende un gas, que es el nitrgeno.
Referencias.
Mc MURRY, J.: Qumica Orgnica 8 edicin. Mxico 2012. Pginas: 1044-1075
captulo 26: biomolecular: aminocidos pptidos y protenas
L.G. Wade, Qumica Orgnica Vol 2, Sptima edicin, editorial Pearson,
paginas: 1154- 1193 capitulo 24: aminocidos pptidos y protenas
Francis A. Carey, Qumica Orgnica, Sexta Edicin, editorial Mc Graw Hill.
Pginas 1124- 1174 capitulo 27: aminocidos pptidos y protenas