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A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
Empresa: //////
No. De identificacin de laboratorio: 5333
No. De control: 158
PRESENTE:
Identificacin: identificacin de salmonella
Informacin de la muestra: Muestra tomada por personal del
laboratorio de un quesillo artesanal
Fecha de muestreo: 01 de julio del 2014
Hora de muestreo:
01:00 Hrs.
Fecha de obtencin resultados: 04 de julio 2014
Hora de
muestreo: 15:00Hrs.
Temperatura de muestreo: Ambiente
Mx
Determinacin
Quesill De Salmonella
o
spp.
artesan
al
Tcnica
Aislamiento de
Salmonella spp. a
partir de alimentos
(extensin en
superficie).
RX
Negativo
Responsables:
A.C.C.A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
Mayra Mora
Salmonella
Los miembros del gnero Salmonella han sido muy estudiados como patgenos cuando
se encuentran presentes en los alimentos. El control de este microorganismo, tanto por
parte de las autoridades sanitarias, como en las plantas procesadoras de alimentos,
depende en cierta medida del mtodo analtico utilizado para su deteccin.
Este microorganismo fue inicialmente identificado en muestras clnicas y los mtodos
empleados para estos casos se adaptaron posteriormente para su deteccin en
alimentos. Las modificaciones a los mtodos consideraron dos aspectos principales, el
primero es el debilitamiento o dao a las clulas bacterianas presentes en un alimento,
debido al proceso a que est sujeto (por ejemplo: tratamiento trmico, secado, etc.) y
segundo, la variabilidad inherente a la naturaleza del producto bajo estudio.
Para diversos alimentos existen diferentes protocolos para el aislamiento de Salmonella,
todos ellos son esencialmente similares en principio y emplean las etapas de
preenriquecimiento, enriquecimiento selectivo, aislamiento en medios de cultivo selectivo
y diferencial, identificacin bioqumica y confirmacin serolgica de los microorganismos.
Fundamento
Caldo lactosado (medio de preenriquecimiento)
Es un medio rico en nutrientes, y no contiene inhibidores del crecimiento bacteriano. El
extracto de carne y la peptona, son la fuente de carbono y nitrgeno, mientras que la
lactosa es el hidrato de carbono. Por la fermentacin de la lactosa, se produce cido y
gas, y ste ltimo se demuestra al usar las campanas Durham.
Se lo usa tambin como medio de preenriquecimiento, porque permite recuperar clulas
injuriadas, diluye sustancias txicas o inhibitorias y favorece el desarrollo de Salmonella
con respecto a otras bacterias.
A.C.C.A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
Extracto de carne
Instrucciones
3.0
Peptona
5.0
Lactosa
5.0
A.C.C.A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
Peptona
5.0
Sales biliares
1.0
Carbonato de calcio
10.0
Tiosulfato de sodio
30.0
Iodo
6.0
Ioduro de potasio
5.0
Agua
Instrucciones
20.0
A.C.C.A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
Extracto de carne
Pluripeptona
Cloruro de sodio
3.0
20.0
5.0
Lactosa
10.0
Sacarosa
10.0
Glucosa
1.0
0.2
Tiosulfato de sodio
0.2
Rojo de fenol
Instrucciones
0.025
A.C.C.A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
Agar
13.0
Pluripeptona
10.0
Extracto de levadura
3.0
Cloruro de sodio
5.0
Lactosa
10.0
Sacarosa
10.0
Rojo fenol
0.08
Verde brillante
0.0125
Instrucciones
A.C.C.A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
Agar
20.0
Agar LIA
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el
desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el
sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa.
El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin
de cido sulfhdrico. Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que
alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La
decarboxilacin de la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es necesario que la
glucosa sea previamente fermentada.
Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan
la lisina, esto produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual, con la sal de hierro y bajo la
influencia del oxgeno forma un color rojizo en la superficie del medio.
LIA
Frmula (en gramos por litro)
Peptona de gelatina
5.0
Extracto de levadura
3.0
Glucosa
1.0
Lisina
10.0
Instrucciones
A.C.C.A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
0.5
Tiosulfato de sodio
0.04
Prpura de bromocresol
0.02
Agar
15.0
MEDIO MIO
Por su composicin, es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad,
presencia de ornitina dexcarbocilasa e indol. La movilidad se demuestra por un
enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas all de la lnea de
inoculacin.
La reaccin positiva a la ornitina est dada por un color prpura del medio. Debido a la
fermentacin de la glucosa se reduce el pH produciendo una condicin cida y originando
que el indicador de pH prpura de bromocresol vire al amarillo. La presencia de acidez,
otorga condiciones ptimas para la actividad de la enzima ornitina decarboxilasa, la cual
decarboxila la ornitina presente. Por decarboxilacin, se alcaliniza el medio, con el
consecuente viraje del indicador hacia el color prpura.
El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la
enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de
reactivo de Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo .
Dextrosa
1.0
Extracto de levadura
3.0
Instrucciones
A.C.C.A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
Peptona
10.0
Triptena
10.0
Clorhidrato de L-ornitina
5.0
Agar
2.0
Prpura de bromocresol
0.02
A.C.C.A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
Diagrama de proceso:
Inicio
sdSDadsadasdasdsadassaasfa
20g. de Quesillo
180ml. Caldo Lactosado (previamente preparado)
Incubar a 35C/24hrs.
Incubar a 43C/24hrs.
S
Realizar las pruebas bioqumicas TSI, LIA y MIO
No
Incubar a 35C/24hrs.
Serologa
Fin
A.C.C.A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
Fin
A.C.C.A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
Aislamiento de Salmonella
Examinar las placas para investigar la presencia de colonias tpicas de Salmonella, de
acuerdo con las siguientes caractersticas:
Agar XLD: colonias rosas o rojas que pueden ser transparentes con o sin centro negro. En
algunos casos las colonias pueden aparecer completamente negras.
Agar VB: colonias rojas o rosas que pueden ser transparentes rodeadas por medio
enrojecido; las bacterias fermentadoras de la lactosa dan colonias amarillas.
Agar entrico Hektoen: colonias verdes o azulverdes con o sin centro negro. En algunos
casos las colonias pueden aparecer completamente negras.
Agar Sulfito de Bismuto: las colonias tpicas de Salmonella pueden ser cafs, grises o
negras; con o sin brillo metlico. Generalmente el medio circundante (halo) es caf,
tornndose posteriormente negro. Algunas cepas producen colonias verdes sin la
formacin del halo oscuro. Si las placas no muestran colonias tpicas o no se observa
crecimiento, incubar 24 h adicionales.
Agar SS: colonias translcidas, ocasionalmente opacas. Algunas colonias dan centro
negro. Las colonias fermentadoras de la lactosa son rojas.
A.C.C.A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
Identificacin bioqumica
Observar el crecimiento en los tubos y considerar presuntivamente positivas para
Salmonella las colonias que den las siguientes reacciones:
Agar TSI, en el fondo del tubo se observa vire del indicador debido a la
fermentacin de la glucosa; en la superficie del medio se observa un color rojo ms
intenso que el medio original debido a la no fermentacin de la lactosa ni de la
sacarosa. En la mayora de los casos se observa coloracin negra a lo largo de la
puncin debido a la produccin de cido sulfihdrico.
Agar LIA, se observa intensificacin del color prpura en todo el tubo por la
descarboxilacin de la lisina. Considerar negativos aquellos cultivos que produzcan
claramente color amarillo en el fondo del agar. La mayora de las cepas de
Salmonella producen cido sulfihdrico en este medio con ennegrecimiento a lo
largo de la puncin.
Retener todos los cultivos que muestren las reacciones caractersticas de Salmonella en
los medios TSI y LIA para las pruebas adicionales.
Los cultivos con TSI que no parecen de Salmonella pero que presentan reacciones en LIA
tpicos, deben trabajarse como cultivos presuntivos positivos, ya que en estos casos, el
medio LIA permitir detectar S. arizonae y cepas atpicas de Salmonella que utilicen
lactosa o sacarosa. Descartar solamente los cultivos que muestren reacciones atpicas en
ambos medios.
Continuar el anlisis a partir de los tubos de TSI con reacciones tpicas. Si el cultivo
presenta reacciones atpicas en este medio, tomar colonias adicionales de las placas de
donde se obtuvo el cultivo atpico anterior y sembrar las pruebas bioqumicas
nuevamente.
Continuar la identificacin bioqumica y serolgica a partir de los cultivos recuperados de
TSI. Se recomienda trabajar seis cultivos por cada 25 g de unidad analtica seleccionando
colonias procedentes de ambos medios de enriquecimiento.
Prueba de ureasa
Prueba de ureasa (convencional). Con una asa estril, tomar crecimiento del cultivo
presumiblemente positivo de cada tubo de medio TSI e inocular tubos de caldo urea.
A.C.C.A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
Utilizar un control de medio para comparar el vire prpura de las reacciones positivas con
el color del medio original. Incubar 24 ± 2 h a 35ºC.
Prueba de ureasa (rpida). Tomar dos asadas de crecimiento del cultivo
presumiblemente positivo de cada tubo de medio TSI e inocular tubos de caldo urea
(rpida). Incubar 2 h a 37 ± 0,5ºC en bao de agua.
Descartar todos los cultivos que den ureasa positiva. Retener los cultivos que den la
prueba negativa (sin cambio de color del medio).
Identificacin serolgica
La prueba positiva resulta cuando se presenta aglutinacin en la gota con el cultivo y el
antisuero y no aglutinacin en la gota que contiene el cultivo y la solucin salina.
Si se observa aglutinacin en ambas gotas, la prueba no es definitiva y se debe continuar
con las pruebas bioqumicas complementarias.
A.C.C.A
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Resultados:
Quesillo artesal
Con el analisis obtenido se concluye:
Conclusiones
Con esta prctica pudimos verificar si hubo presencia de salmonella en el quesillo por lo
cual no la hubo (Prueba NEGATIVA) eso nos indica que el quesillo est libre de esta
A.C.C.A
B
(Anlisis, control de calidad alimentaria) A.M.J
BIBLIOGRAFIA
Yabar Villanueva Emilio Fredy. 2005. Microbiologa de alimentos. Criterios microbiolgicos
de calidad sanitaria e inocuidad para los alimentos y bebidas de consumo humano.
Facultad de Ingeniera en Industrias Alimentarias. Universidad Nacional del Centro del
Per
Viana Cmara Snia Aparecida. S.f. Curso de Farmcia. Microbiologia de alimentos.
Microorganismos indicadores.
INAL (Instituto Nacional de Alimentos).2004. Gua de Interpretacin de Resultados
Microbiolgicos de Alimentos ANMAT. Administracin Nacional de Medicamentos,
Alimentos y Tecnologa Mdica. Disponible en www.analizacalidad.com/ arm2004-4.pdf