Mtodos pticos

Espectroscopia
Estudio de la interaccin entre la radiacin electromagntica y la
materia, con la consecuente absorcin o emisin de energa radiante.
Transicin entre distintos
niveles de energa.
La fraccin de luz absorbida est
relacionada con la concentracin
de absorbente.

Estructura, entorno del sistema,

etc. (anlisis cualitativo).

Anlisis cuantitativo.

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Radiacin electromagntica
La radiacin electromagntica est compuesta por FOTONES; que son entidades que
carecen de masa y que en ciertas ocasiones pueden comportarse como ondas y en otras
como partculas.
Dualidad onda-partcula

Difraccin de electrones (onda)

Efecto fotoelctrico (partcula)

Las ondas se desplazan a la velocidad de la luz en el vaci ,c

l= Longitud de onda; distancia entre los picos
n= Frecuencia; Nmero de veces que la onda
pasa por un punto por unidad de tiempo

c =
y la energa de un fotn (o de la onda) es:

E = h

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Clasificacin de espectroscopias

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Clasificacin de espectroscopias
Rotacin y Vibracin
de molculas

XPS, TRXF
Transiciones
electrnicas

Rotacin de
molculas

Cambio de espn electrnico y

nuclear (RMN, EPR)

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Mtodos pticos: Regin UV-Vis

Transiciones electrnicas
Movimiento de electrones entre orbitales
inducido por la absorcin de luz en esta
regin

Regin UV: 200-400 nm

Visible: 400-700 nm

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Medidas espectroqumicas
Qu es lo que vemos durante el proceso de absorcin de la luz?
Solucin absorbente

P0

E2 = h

Estado Excitado

E = E2 E1 = h

E1 = h

Estado Fundamental

Fraccin de la radiacin trasmitida

respecto a la incidente en funcin
de la energa del haz de excitacin
Su apariencia depender de la naturaleza de la
especie en cuestin

-log(P/P0)

Espectro de absorcin

l/nm

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Espectros de bandas
Especies moleculares y
iones compuestos en
solucin

Transiciones
entre
orbitales moleculares

Espectros de lneas
Iones metlicos en
solucin

Transiciones entre
orbitales atmicos

FOTOMETRA DE LLAMA
En su lugar se mide la
emisin

Gran distribucin de
estados electrnicos
y efectos del solvente

Sistemas ms cuantizados. Los niveles estn

ms separados

Son difciles de obtener

experimentalmente

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Cmo se realiza la cuantificacin?
LEY DE LAMBERT-BEER: Proceso de absorcin
Solucin absorbente

P0

Intensidad incidente

Intensidad trasmitida

Una fraccin de la radiacin

incidente es absorbida por la
muestra

b
La Transmitancia (T) es la relacin de luz incidente que se trasmite en la solucin y puede
ser calculada como:
P
T=
P0
o tambin puede encontrarse como porcentaje de Transmitancia (%T)

%T =

P
x100
P0

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La Absorbancia (A) se relaciona con la transmitancia en forma logartmica

log

P
= log T = A
P0

Por lo tanto, es muy claro ver que si la muestra transmite menos es porque absorbe mayor
cantidad de radiacin
Segn la ley de Beer, la absorbancia es proporcional a la concentracin y al camino ptico
que atraviesa la radiacin:

P
A = log = bc
P0
Donde:
C es la concentracin de la especie absorbente.
B es el camino ptico; y depende del tipo de celda utilizado en la medicin
e es el coeficiente de absortividad molar o coeficiente de extincin o simplemente coeficiente de
absorcin
Unidades:
A es adimensional

[b]= cm

[c]= M=moles/L

[e]= M-1cm-1

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A
Zona donde se cumple la ley de Beer
(linealidad entre A y c)

eb

c/M
Desviaciones de la linealidad
1) Reales: Cambios en el ndice de refraccin (pesa a altas concentraciones)
2) Instrumentales:

3) Qumicas:

Baja calidad de monocromaticidad

Presencia de luz parsita
Fenmenos de fluorescencia
Dispersin de luz

Desplazamientos de equilibrios
Formacin de complejos
Reacciones con el solvente

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Importante:

En las medidas de absorbancia siempre es necesario realizar un blanco de la especie

absorbente (todos los reactivos menos el absorbente) y evaluar su valor de absorbancia a
la longitud de onda de trabajo. Luego este valor se resta a los medidos y de esta manera se
eliminan los efectos causados por imperfecciones en la celda o fenmenos dispersivos o
reflexivos.
Cuentas. Consideremos medidas de absorbancia de una especie que presenta un
e=10000M-1cm-1.
b

A1 = bc = 10000M1cm1 .1cm.5x105 M = 0.5

A 2 = bc = 10000M1cm1 .0,5cm.5x10 5 M = 0.25

A 1 = bc = 10000M1cm1 .1cm.7,5x10 5 M = 0.75
1

A 2 = bc = 10000M cm .1cm.3,75x10 M = 0.375

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Cmo se vamos a medir la absorbancia?
El equipo utilizado se denomina espectrofotmetro de absorcin UV-Vis

Lmparas:
UV: Deuterio
Vis: Tugsteno

Descompone y selecciona la
luz transmitiendo cada l a la
muestra

Esquema de un espectrofotmetro de doble haz

Transforma los fotones que llegan en

electrones y estos a su vez generan ms
electrones que amplifican la seal

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Tambin existen otro tipo de equipos
Espectrofotmetro con arreglo de diodos. En este caso, el equipo no tiene
monocromador sino que todas las l llegan juntas a la muestra y al detector donde
son analizadas todas a la vez.
Al no contar con un dispositivo mecnico de seleccin de l los espectros se registran en
mucho menos tiempo que en el caso anterior. Adems al no tener elementos dispersantes
de la radiacin (tales como el monocromador) esta tecnologa mejora
considerablemente la relacin seal/ruido aumentando la calidad de los espectros.
En algunos trabajos prcticos utilizaremos equipos de mesada que permiten medir
slo en el rango visible y a longitud de onda fija, por lo cual no pueden obtenerse
espectros con ellos.
Celdas contenedoras: Material transparente a la radiacin
Regin UV: Cuarzo.. MUY CARAS!!!
Regin Visible: vidrio o plstico.

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En el caso de una muestra problema. Cmo procedemos a su cuantificacin?
Supongamos que tenemos una muestra necesitamos determinar la concentracin de una
determinada especie
I) METODO DE LA CURVA DE CALIBRACIN
1) Tengo que seleccionar la longitud de onda de trabajo a partir de la evaluacin del
espectro de absorcin de la especie a determinar

A
Se elige trabajar a la l de un mximo
de absorcin ya que en esta zona
existe menos variabilidad de la
absorbancia y mayor sensibilidad

lMAX
l/nm

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2) Determinamos la absorbancia a la lMAX para una serie de patrones preparados igual que la
muestra y que cumplan con la ley de Beer en el intervalo de concentraciones.

Concentracin

AMax

c1

A1

c2

A2

c3

A3

c4

A4

A = ac b
eb=a

c/M

3) Luego medimos la absorbancia de la muestra y calculamos la concentracin de la especie

de inters con la ecuacin de la recta.

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II) METODO DE ADICION ESTANDAR (MAE)
Buen mtodo para muestras complejas mantiene los efectos de la matriz y controla los
efectos de los interferentes.
A
Agregado de concentraciones conocidas
del analito a cuantificar y evaluacin de la
respuesta del sistema. La concentracin se
obtiene por extrapolacin

cx

c/M

Todo esto es muy lindo, pero estos dos mtodos pueden aplicarse directamente sobre la
muestra si solo siel analito absorbe luz en el regin UV-Visible

Tenemos que transformar nuestro analito

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Derivatizacin de analitos
Es una operacin que implica la transformacin de los analitos en otras especies
compatibles con la tcnica de cuantificacin .
Por ejemplo, sea A un analito que no absorbe luz UV-Vis o absorbe muy poco.

A B C
2) A B AB
1)

Presentan una fuerte absorcin en el UV-Vis

El derivado obtenido debe reunir propiedades tales como estabilidad en el tiempo, como para permitir
su determinacin con precisin, color intenso, libre de efectos por cambios en el pH, temperatura u
otros factores, alta solubilidad del compuesto coloreado y obedecer la ley de Beer.
Aqu B se denomina agente cromognico y de cumplir con ciertas condiciones para poder ser
utilizado, como por ejemplo:
1.Estabilidad en solucin.
2. Rpido desarrollo del color.
3. Reaccin estequiomtrica con el constituyente deseado.
4. Transparencia en la regin de medida, etc.

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TRABAJO PRCTICO N 5: DETERMINACIN DE NO3 - Y NO2 - EN MUESTRAS DE AGUA POR
ESPECTROFOTOMETRA UV Y VISIBLE
a) Determinacin de NO3No hay que derivatizar. Los nitratos absorben en el UV. Sin embargo, en esta regin
tambin lo hace la materia orgnica (m.o.)

A 220 nm absorben NO3 y m.o.

A 275 nm solo la m.o.

Areal = A220nm 2A275nm

La absorbancia a 275 nm se toma de la medida del patrn que no contiene NO3Experimental

Todas las soluciones stocks, standars y patrones deben prepararse utilizando material
aforado. Matraces y ball pipetas!!!
No probetas, no pipetas graduadas!!! No son exactas

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Solucin Stock 500 g NO3 / ml
Las diluciones deben
hacerse con agua
bidestilada

Dilucin 1:10

Solucin Standar 50 g NO3 / ml

Patrn 1

Patrn3

Patrn 2

Patrn 4

1) Construimos la curva
2) Medimos la absorbancia a 220 nm de la muestra de agua y obtenemos la concentracin
de NO3
b) Determinacin de NO2O

O
HO S

NH2 + NaNO + 2 HCl

2

HO

N2 Cl- + H2O + NaCl

Derivatizacin
O
HO

S
O

O
+

N2 Cl-

HCl +
NH2

HO

S
O

N=N

NH2

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1) Preparacin de los patrones
Solucin Standar 10 g NO2 / ml

Patrn 1

Patrn 2

Patrn3

Las diluciones deben

hacerse con agua
bidestilada

Patrn 4

2) Derivatizacin de los patrones y de la muestra

CANCERGENO!!!
50 ml de patrn
o muestra

1 ml de ac.
Sulfanlico

Luego de 2-8 min

Bajo campana

1 ml de naftilamina

Esperar 10 minutos y medir la absorbancia a 540 mm

3) Construir la curva de calibracin y obtener la concentracin de nitritos en la muestra.
Tener cuidado con la dilucin realizada al momento de hacer las cuentas.

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TRABAJO PRCTICO N 6: ESPECTROSCOPIA UV-VISIBLE. RESOLUCIN DE UNA MEZCLA
BINARIA MnO4 - / Cr2O7=.
Ambas especies absorben en la regin visible. La experiencia se basa en que la absorbancia
es una propiedad aditiva.

A ( T ) = A i = A 1 A 2 An
a) Mtodo de la curva de calibracin
Para cada l se tiene:
Espectro mezcla

A1 = ( 1 )MnO .b.CMnO ( 1 )Cr O2 .b.CCr O2

4

A 2 = ( 2 )MnO .b.CMnO ( 2 )Cr O2 .b.C Cr O2

4

l1

l2

2 7

2 7

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Para resolver el sistema de ecuaciones tengo que conocer el coeficiente de absorcin de
cada especie a cada longitud de onda
MnO4-

l1

l2

c/M
Cr2O72-

c/M
A

l1

Para la preparacin de los

patrones se debe tener una idea
de los e a cada l

l2

Las diluciones en los patrones

de dicromato deben hacerse
con agua acidulada para evitar:

Cr2O27 H2O 2CrO24 2H

c/M

c/M

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b) Mtodo por Anlisis de Regresin Lineal Multi-longuitud-de-onda (ARLM)
La absorbancia de una mezcla de dos especies no interactuantes que absorben en la misma
zona del espectro, Am est dada por:
Am = e1bc1 + e2bc2

(1)

Sean cs1 y cs2 las concentraciones de soluciones estndar de cada componente, entonces
As1 = e1bcs1

As2 = e2bcs2

Despejando las absortividades molares, reemplazndolas en la ec. (1) y reordenado se llega

a:
Am/As1
c2/cs2
Am/As1 = c1/cs1 + (c2/cs2) (As2/As1)

(2)

c1/cs1

As2/As1

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Los datos para realizar el grfico se obtiene de los espectros de absorcin de soluciones
patrones de permanganato y dicromato y de la mezcla problema.
TRABAJO PRCTICO N 7: PROPIEDADES COLORIMTRICAS DESEABLES E INDESEABLES EN
EL SISTEMA Fe(II)-o-fen

Complejo muy estable

Fuertemente coloreado
Se utiliza en la deteccin del Fe

Para el sistema Fe-o-fen

Estabilidad temporal
Efecto del exceso de reactivo
Efecto del pH
Efecto de interferentes

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TRABAJO PRCTICO N 8: DETERMINACIN DE Fe(II) EN UN MEDICAMENTO
Determinaremos Fe en un medicamento mediante su complejacin con la o-fenentrolina,
aplicando los mtodos con los que venimos trabajando
1) Mtodo de la curva de calibracin
2) Mtodo de adicin estndar

l(trabajo)= 512 nm

Experimental:
Hidroxilamina (reductor): Es para asegurar que todo el Fe est en su estado divalente antes
de la complejacin.

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TRABAJO PRCTICO N 9: ESPECTROSCOPIA DE EMISIN ATMICA EN LLAMA.
Cuando una solucin que contiene iones como el Na+ se vaporiza y es arrastrada al seno de
una llama, la energa de las misma excita los electrones ms externos desde el estado
fundamental a otro de energa superior.
Al regresar al estado fundamental, los
electrones de los tomos emiten una
radiacin de l caracterstica para cada
uno de los metales presentes

Estado Excitado

h
Estado Fundamental

La intensidad emitida a
cada l es proporcional a
la concentracin de la
especie en la muestra

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Esquema de un fotmetro de llama

Tambin pueden ser filtros

Como la llama es de gas natural-aire
solo podemos determinar metales
alcalinos y alcalinotrreos

Na Cl(ac ) Na Cl(evap )
Na Cl(s) Na Cl(g)
Na Cl(g) Na(g) Cl(g )

Na(g )

Na

Procesos que ocurren en la llama

Na Na h

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Experimental
A) Determinacin de Na+ y K+ en agua de red aplicando el mtodo de la curva de
calibracin. Puede que la relacin entre la intensidad emitida sea o no lineal.
B) Efectos de cationes.
En la muestra pueden existir metales que emitan radiaciones con longitudes de onda
prximas a la emitida por la especie a cuantificar. Las desviaciones son importantes si
se una un aparato de filtro
C) Efecto de la interferencia mutua de iones Na+-K+ .
Estudiaremos el efecto de la presencia de K en la emisin del Na y viceversa.