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DepartamentodeQumicaAnaltica,NutricinyBromatologa
PUESTAAPUNTODEMETODOLOGASRPIDASPARA
LADETECCINYDETERMINACINDECOMPUESTOS
ORGNICOSENMATRICESAMBIENTALES
DEVELOPMENTOFFASTMETHODOLOGIESFORTHE
DETECTIONANDDETERMINATIONOFORGANIC
COMPOUNDSINENVIRONMENTALMATRICES
SARAHERREROMARTN
2010
FACULTADDECIENCIASQUMICAS
DepartamentodeQumicaAnaltica,NutricinyBromatologa
PUESTAAPUNTODEMETODOLOGASRPIDASPARA
LADETECCINYDETERMINACINDECOMPUESTOS
ORGNICOSENMATRICESAMBIENTALES
DEVELOPMENTOFFASTMETHODOLOGIESFORTHE
DETECTIONANDDETERMINATIONOFORGANIC
COMPOUNDSINENVIRONMENTALMATRICES
MemoriaqueparaoptaralgradodeDoctorporlaUniversidadde
SalamancapresentalalicenciadaSaraHerreroMartn
Salamanca,18deMayode2010
Fdo.:SaraHerreroMartn
D.JosLuisPrezPavn,CatedrticodelaUniversidaddeSalamancayD.
Carmelo Garca Pinto, Profesor Titular de la Universidad de Salamanca,
directores del trabajo Puesta a punto de metodologas rpidas para la
deteccin y determinacin de compuestos orgnicos en matrices
ambientales realizado por la licenciada en Ciencias Ambientales Sara
Herrero Martn para optar al grado de Doctor por la Universidad de
Salamanca, autorizan la presentacin del mismo, al considerar que se han
alcanzadolosobjetivosinicialmenteprevistos.
Salamanca,18deMayode2010
Fdo.:JosLuisPrezPavnFdo.:CarmeloGarcaPinto
INFORMA:
Que la memoria Puesta a punto de metodologas rpidas para la
deteccin y determinacin de compuestos orgnicos en matrices
ambientales, que para optar al grado de Doctor presenta la
licenciadaSaraHerreroMartn,hasidorealizadobajoladireccinde
losDoctoresD.JosLuisPrezPavnyD.CarmeloGarcaPintoenel
Departamento de Qumica Analtica, Nutricin y Bromatologa de la
UniversidaddeSalamanca.
Yparaqueasconste,firmoelpresenteinformeenSalamanca,a18deMayo
de2010.
Fdo.:ConcepcinGarcaMoreno
Mimssinceroyprofundoagradecimiento
a los directores de esta Tesis, Jos Luis Prez Pavn y Carmelo Garca
Pinto, por la idea novedosa y original de este trabajo y por su grado de
implicacin, apoyo y orientacin en el desarrollo del mismo. Tambin me
gustaraagradecerlestodoloquemehantransmitidoalolargodeestosaos,
tantoenelmbitoprofesionalcomoenelpersonal.
alrestodemiembrosdelgrupodeinvestigacinalquepertenezco,porque
me siento afortunada por formar parte de un equipo arriesgado e innovador.
Quiero expresar mi gratitud a Bernardo por estar siempre dispuesto a
ayudarme,porsusmltiplesconsejosyporcuidardem.AEstherleagradezco
especialmente su amabilidad, su colaboracin en la elaboracin de las
traducciones al ingls y su inestimable ayuda durante mi etapa docente.
Tambin quiero expresar un agradecimiento especial a Miguel por su gran
ayuda y orientacin durante mi primera etapa en el Departamento, por su
disposicin en todo momento y por todo lo que me ha enseado. A Ana le
agradezcosucomplicidad,cercanayeltiempocompartidoduranteestosaos.
Atodoselloslesagradezcosinceramentesuamistad.
atodoslosmiembrosdelDepartamentodeQumicaAnaltica,Nutriciny
Bromatologa por haberme hecho sentir como en casa. A Jess Hernndez
Mndezleestoyespecialmenteagradecidaporquees,enparte,responsablede
quehoyestaqu,yaquemeorientymediolaposibilidaddeentraraformar
partedelDepartamento.
atodosloscompaerosconlosquehecompartidolaboratorioporquela
experiencia de conocerlos ha sido muy gratificante. Gracias por todos los
buenos momentos que hemos pasado juntos y por vuestra amistad. Nunca
olvidarestaetapademivida.
GRACIAS
Special thanks should be given to Prof. Dr. MarjaLiisa Riekkola and Dr. Tuulia
Hytylinen for the opportunity to work with them in the Laboratory of Analytical
Chemistry of the University of Helsinki (Finland) and for their invaluable help,
collaborationandsupportduringthedevelopmentoftheresearch.
I would like to thank Totti Laitinen, Jevgeni Parshintsev and Kari Hartonen for
their collaboration and inestimable help at any situation. I am also grateful to Matti
Jussilaforhisgreathelpwithcomputermatters.
I am most grateful to all the personnel of the laboratory for their hospitality and
kindnessduringmyresearchstay.
THANKS
Amifamilia,amigosyaDani,
graciasporvuestracompaa,carioyapoyoincondicional
ABREVIATURAS/ABBREVIATIONS
ANOVA
Anlisisdevarianza
Analysisofvariance
ECD
Microdetectordecapturaelectrnica
Microelectroncapturedetector
12DCB
1,2diclorobenceno
1,2dichlorobenzene
1DGC
Cromatografadegasesenunadimensin
Onedimensionalgaschromatography
AOAC
AsociacindeComunidadesAnalticas
AssociationofAnalyticalCommunities
BDCM
Bromodiclorometano
Bromodichloromethane
BMF
Bromoformo
Bromoform
BTEX
Benceno,tolueno,etilbencenoyxilenos
Benzene,toluene,ethylbenzeneandxylenes
CERCLA
LeydeResponsabilidad,CompensacinyRecuperacin
Ambiental
ComprehensiveEnvironmentalResponse,Compensationand
LiabilityAct
CFM
Cloroformo
Chloroform
CLSA
Anlisisporextraccinenbuclecerrado
Closeloopstrippinganalysis
CMS
Muestreocapilaratravsdemembrana
Capillarymembranesampling
CPC
Contadordepartculasdecondensacin
Condensationparticlecounter
CRM
Materialdereferenciacertificado
Certifiedreferencematerial
DBCM
Dibromoclorometano
Dichloromethane
DLLME
Microextraccinlquidolquidodispersiva
Dispersiveliquidliquidmicroextraction
DMA
Analizadordemovilidaddiferencial
Differentialmobilityanalyzer
dSPE
Extraccinenfaseslidadispersiva
Dispersivesolidphasemicroextraction
EtOAc
Acetatodeetilo
Ethylacetate
FGC
Cromatografadegasesrpida
Fastgaschromatography
FID
Detectordeionizacinenllama
Flameionizationdetector
GC
Cromatografadegases
Gaschromatography
GCXGC
Cromatografadegasesendosdimensionescompleta
Comprehensivetwodimensionalgaschromatography
GCB
Negrodecarbngrafitado
Graphitizedcarbonblack
GCGC
2DGC
Cromatografadegasesendosdimensiones
Twodimensionalgaschromatography
HAAs
cidosHaloacticos
Haloaceticacids
HCB
Hexaclorobenceno
Hexachlorobenzene
IARC
AgenciaInternacionaldeInvestigacindelCncer
InternationalAgencyforResearchonCancer
IS
Estndarinterno
Internalstandard
LC
Lmitedecuantificacin
LD
Lmitededeteccin
LLE
Extraccinlquidolquido
Liquidliquidextraction
LPME
Microextraccinenfaselquida
Liquidphasemicroextraction
LVI
Inyeccindegrandesvolmenesdemuestra
Largevolumeinjection
MACHTM
Mdulodecalentamientodecolumnaacelerado
Modularacceleratedcolumnheater
MAE
Extraccinasistidaconmicroondas
Microwaveassistedextraction
MASE
Extraccincondisolventesoportadoenmembrana
Membraneassistedsolventextraction
MDGC
Cromatografadegasesmultidimensional
Multidimensionalgaschromatography
MeCN
Acetonitrilo
Acetonitrile
MEPS
Microextraccinmedianteadsorbenteempaquetado
Microextractionbypackedsorbent
MIMS
EspectrometradeMasasconintroduccinatravsde
Membrana
Membraneintroductionmassspectrometry
MRM
Mtodomultiresiduo
Multiresiduemethod
NIST
InstitutoNacionaldeEstndaresyTecnologa
NationalInstituteofStandardsandTechnology
P&T
PurgayTrampa
Purgeandtrap
PAM
Purgaymembrana
Purgeandmembrane
PHAs
Hidrocarburospolicclicosaromticos
Polycyclicaromatichydrocarbons
Extraccinlquidaapresin
Pressurizedliquidextraction
PLE
PM
Materiadepartculas
ParticulateMatter
PSA
Aminaprimariasecundaria
Primarysecondaryamine
PTFE
Politetrafluoroetileno
Politetrafluoroethilene
PTV
Inyectordetemperatureprogramada
Programmedtemperaturevaporizer
QMS
Espectrmetrodemasascuadrupolar
Quadrupolemassspectrometer
QuEChERS
Rpido,sencillo,barato,eficaz,robustoyseguro
Quick,easy,cheap,effective,ruggedandsafe
RSD
Desviacinestndarrelativa
Relativestandarddeviation
S/N
Seal/Ruido
Signal/Noise
SBSE
Extraccinporadsorcinenbarraagitadora
Stirbarsorptiveextraction
SDME
Microextraccinenunagota
Singledropmicroextraction
SFE
Extraccinconfluidossupercrticos
Supercriticalfluidextraction
SHS
Generacindeespaciodecabezaesttica
Staticheadspace
SIM
Seguimientodeionesseleccionados
Selectedionmonitoring
SLM
Disolventesoportadoenmembrana
Supportedliquidmembrane
SME
Microextraccincondisolvente
Solventmicroextraction
SPME
Microextraccinenfaseslida
Solidphasemicroextraction
TD
Desorcintrmica
Thermaldesorption
THMs
Trihalometanos
Trihalomethanes
TOFMS
Espectrmetrodemasasdetiempodevuelo
Timeofflightmassspectrometer
TTHMs
Trihalometanostotales
Totaltrihalomethanes
USEPA
AgenciadeProteccinMedioambientaldelosEstados
UnidosdeAmrica
UnitedStatesEnvironmentalProtectionAgency
VOCs
Compuestosorgnicosvoltiles
Volatileorganiccompounds
NDICE
ABREVIATURAS/ABBREBIATIONS
I.OBJETO ....................................................................................................
II.INTRODUCCIN.................................................................................
1.TCNICASDEPRETRATAMIENTODEMUESTRA................. 12
1.1.Generacindeespaciodecabeza.......................................... 12
1.2.QuEChERS ............................................................................... 17
2.ANLISISMEDIANTECROMATOGRAFADEGASES.......... 25
2.1.Inyeccindelasmuestras:inyectordetemperatura
programada(PTV) ......................................................................... 25
2.1.1.Inyeccindemuestraslquidas ................................... 25
2.1.2.AcoplamientoHSPTV ................................................. 30
2.1.2.1.Diferenciasentreinyeccinencalienteyen
fro ...................................................................................... 32
2.1.2.2.ModosdeinyeccinpermitidosporelPTV .... 34
2.1.2.2.1.Inyeccinsplit................................. 34
2.1.2.2.2.Inyeccinsplitless ........................... 36
2.1.2.2.3.Inyeccinsolventvent .................... 37
2.2.Separacincromatogrfica .................................................... 39
2.2.1.Cromatografadegasesrpida ................................... 39
2.2.2.Cromatografadegasesendosdimensiones
completa ................................................................................... 42
III.CONFIGURACIONESINSTRUMENTALESUTILIZADAS ..... 61
1.CROMATGRAFODEGASESCONINYECTORDE
TEMPERATURAPROGRAMADAYESPECTRMETRODE
MASASCUADRUPOLAR .................................................................. 63
1.1.Cromatgrafodegases........................................................... 63
1.2.Inyectordetemperaturaprogramada.................................. 63
1.3.Espectrmetrodemasas ........................................................ 65
1.4.Mdulosdeintroduccindemuestra .................................. 65
1.4.1.Generadordeespaciodecabeza ................................. 65
1.4.2.AutomuestreadoCombiPAL...................................... 69
2.CROMATGRAFODEGASESCONINYECTORDE
TEMPERATURAPROGRAMADAYDETECTORDECAPTURA
ELECTRNICA .................................................................................... 72
2.1.Cromatgrafodegases........................................................... 72
2.2.Inyectordetemperaturaprogramada.................................. 72
2.3.Detectordecapturaelectrnica............................................. 72
2.4.Sistemadeinyeccindemuestraslquidas ......................... 73
3.CROMATGRAFODEGASES(GCXGC)CONINYECTOR
SPLIT/SPLITLESSYESPECTRMETRODEMASASDETIEMPO
DEVUELO............................................................................................. 75
3.1.Cromatgrafodegases........................................................... 75
3.2.Espectrmetrodemasasdetiempodevuelo ..................... 76
3.3.Sistemadeinyeccindemuestraslquidas ......................... 76
IV. Determinacin de trihalometanos en aguas mediante el
acoplamiento de un generador de espacio de cabeza con un
inyectordetemperaturaprogramada...................................................... 79
1.INTRODUCCIN............................................................................. 81
2.OBJETIVOS........................................................................................ 85
3.PARTEEXPERIMENTAL................................................................ 87
3.1.Reactivos .................................................................................. 87
3.2.Disolucionesestndarymuestras ........................................ 87
3.3.InstrumentacinHSPTVGCMS ........................................ 88
3.4.ProcedimientosHSPTVGCMS .......................................... 89
3.4.1.Generadordeespaciodecabeza ................................. 89
3.4.2.Inyectordetemperaturaprogramada ........................ 89
3.4.3.Cromatgrafodegases................................................. 90
3.4.4.Espectrmetrodemasas............................................... 90
3.5.Anlisisdedatos ..................................................................... 90
4.RESULTADOSYDISCUSIN........................................................ 91
4.1.Optimizacindelascondicionesexperimentalesdel
sistemaHSPTVGCMS ............................................................... 91
4.1.1.Optimizacindelaseparacincromatogrfica......... 91
4.1.2.Estudiodelosmodosdeinyeccin............................. 92
4.1.3.Modosdeadquisicindedatos................................... 103
4.2.Calibracin ............................................................................... 106
4.3.Determinacindetrihalometanosendiferentesmatrices
acuosas............................................................................................. 111
5.CONCLUSIONES ............................................................................. 115
6.BIBLIOGRAFA................................................................................. 116
PUBLISHEDARTICLEIV1 ................................................................ 119
PUBLISHEDARTICLEIV2 ................................................................ 129
V. Mtodo basado en el uso de un inyector de temperatura
programadaparaladeterminacindetrihalometanosybenceno,
tolueno,etilbencenoyxilenosensuelos................................................ 149
1.INTRODUCCIN............................................................................. 151
2.OBJETIVOS........................................................................................ 155
3.PARTEEXPERIMENTAL................................................................ 156
3.1.Reactivos .................................................................................. 156
3.2.Disolucionesestndarymuestras ........................................ 156
3.2.1.Muestrasacuosas........................................................... 156
3.2.2.Muestrasdesuelos........................................................ 156
3.2.2.1.Suelosdopados .................................................... 156
3.2.2.2.Materialesdereferenciacertificados ................ 157
3.3.InstrumentacinHSPTVGCMS ........................................ 158
4.2.1.Efectodematriz............................................................. 324
4.2.2.Rendimientodeextraccinparaloscompuestosen
muestrasdesuelos .................................................................. 325
4.2.3.Caractersticasanalticasdelmtodo ......................... 327
4.2.4.DeterminacindeTHMsyBTEXenmaterialesde
referenciacertificados............................................................. 331
5.CONCLUSIONES ............................................................................. 336
6.BIBLIOGRAFA................................................................................. 337
ARTICLESUBMITTEDFORPUBLICATIONVIII...................... 341
IX.Determinacindecompuestosorgnicosennanopartculasde
aerosoles procedentes de la combustin de madera mediante
diferentesmtodosbasadosencromatografadegases...................... 375
1.INTRODUCCIN............................................................................. 379
2.OBJETIVOS........................................................................................ 382
3.PARTEEXPERIMENTAL................................................................ 383
3.1.Reactivosydisolucionesestndar ........................................ 383
3.2.Sistemademuestreo............................................................... 383
3.3.Preparacindelasmuestrasparaelanlisis
cromatogrfico................................................................................ 385
3.4.Instrumentacinymtodos................................................... 386
3.4.1.GCTOFMSyGCXGCTOFMS ................................. 386
3.4.2.GCQMS ......................................................................... 388
4.RESULTADOSYDISCUSIN........................................................ 390
4.1.Caractersticasanalticasdelosmtodos............................. 390
4.1.1.GCXGCTOFMS ......................................................... 391
4.1.2.GCTOFMS..................................................................... 395
4.1.3.GCQMS ......................................................................... 397
4.2.Comparacindelascaractersticasanalticasdelas
tcnicascromatogrficas ............................................................... 398
4.3.Comparacindelastcnicasenladeterminacindelos
compuestosdeintersenmuestrasdeaerosoles ...................... 401
5.CONCLUSIONES ............................................................................. 411
6.BIBLIOGRAFA................................................................................. 412
PUBLISHEDARTICLEIX.................................................................. 415
X.CONCLUSIONESGENERALES ........................................................ 429
XI.VERSINRESUMIDAENINGLS/SUMMARYINENGLISH . 433
ANEXOI:Informessobreeltrabajorealizado/APPENDIXI:Reportson
developedwork
1. Prof.BoKalberg
2. Dr.AncaIuliaStoica
I
OBJETO
IObjeto
3
_________________________________________________________________________
4
IObjeto
_________________________________________________________________________
DesarrollodeunasimplificacindelmtodoQuEChERSparala
extraccindecompuestoscloradosenmuestrasdesuelos.
IObjeto
5
_________________________________________________________________________
DeterminacindeTHMsyBTEXenmuestrasdesuelosmediante
QuEChERS simplificadocromatografa de gases rpida y
deteccinmedianteespectrometrademasas.
II
INTRODUCCIN
IIIntroduccin
9
_________________________________________________________________________
10
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
IIIntroduccin
11
_________________________________________________________________________
Apesardequelaaceptacindeestasnuevastcnicasdepretratamiento
ha sido muy lenta, aportan numerosas ventajas respecto a los
procedimientos clsicos, ya que, adems de consumir menor cantidad de
disolventes, requieren volmenes de muestra ms pequeos, son mucho
msrpidas,msselectivasymsfcilmenteautomatizables.
Los objetivos de esta Tesis Doctoral se enmarcan dentro de esta nueva
tendencia. A lo largo de esta memoria se propondrn diferentes
metodologas,rpidas,sensiblesyconmnimotratamientodemuestra,para
la determinacin de compuestos orgnicos en diferentes matrices
ambientales.
Enesteapartadoseresumirnlosorgenesyevolucinlasdelastcnicas
depretratamientodemuestrautilizadasalolargodelamemoria.Tambin
sedescribirnlosaspectosmsrelevantesdelanlisiscromatogrfico,enlo
que se refiere a los sistemas de inyeccin de muestra utilizados y a las
diferentes modalidades de cromatografa de gases empleadas en el
desarrollodelasdiferentesaplicaciones.
12
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
1.TCNICASDEPRETRATAMIENTODEMUESTRA
1.1.Generacindeespaciodecabeza
Lageneracindeespaciodecabeza(HS)esunatcnicautilizadaparala
separacin de los compuestos voltiles de una muestra. Se denomina
espacio de cabeza a la fase gaseosa en contacto con la muestra (lquida o
slida). Puede acoplarse a diversas tcnicas analticas de separacin y
medida, pero se ha utilizado principalmente acoplada a cromatografa de
gases(GC),debidoaquestaesunatcnicamuyapropiadaparaelanlisis
demuestrasgaseosas[1].
El procedimiento de generacin del espacio de cabeza puede llevarse a
cabodeformaestticaydinmica.
En HS esttico (SHS) la muestra se introduce en un vial dejando un
volumenlibresobreella.Elvialsecierrahermticamenteyseintroduceen
unhorno,demodoquelosvoltilesseseparandelamatrizyalcabodeun
tiempo se establece el equilibrio entre ambas fases. Una vez alcanzado el
equilibrio, una porcin de los voltiles generados se inyecta en el
cromatgrafodegases.
Apartirdeestamodalidad,alaquetambinsehadenominadoHSen
unpaso,sehandesarrolladodiversasmodificaciones,entrelasquepuede
citarselainclusindetrampasdeadsorcinodetrampasquecontienenun
disolvente orgnico, cuyo propsito es separar los analitos voltiles de
intersdelrestodeloscompuestosdelafasegaseosa.
En1989Pawliszynysugrupodeinvestigacinintrodujeronlatcnicade
microextraccin en fase slida (SPME) [2,3]. Una fibra de slice fundida,
cuya superficie externa est recubierta con una fase estacionaria
inmovilizada,seintroduceenelvialquecontienelamuestra.Alcabodeun
tiempo los voltiles quedan adsorbidos en la fibra, sta se introduce en la
cmara de vaporizacin del inyector del cromatgrafo de gases y los
IIIntroduccin
13
_________________________________________________________________________
14
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
IIIntroduccin
15
_________________________________________________________________________
formarpida.Conestemtodoavecesnosealcanzalasensibilidad
necesariaparaelanlisisaniveldetrazas.
EnellibropublicadoporelgrupodeinvestigacindeBrunoKolb[1]se
ponendemanifiestoalgunastcnicasquesehanempleadoparasolucionar
los problemas planteados. Se trata de tcnicas de enriquecimiento por
trampacriognica.Conestastcnicasseconsiguelapreconcentracindelos
analitosysuposteriorintroduccinrpidaenlacolumnacromatogrfica.
Los primeros dispositivos consistan en trampas con forma de U,
fabricadasconmetalovidrio,queseintroducanenunbaodenitrgeno
lquido oargn. Una vez conseguida la condensacin de los analitos en el
interior del tubo, el lquido criognico era retirado manualmente del bao
antes de que la trampa fuera calentada, en la mayora de los casos
elctricamente,paraconseguirlaevaporacindelosanalitoscondensados.
Posteriormente, surgenalgunosavances para evitar la eliminacin manual
dellquidocriognico.Enlugardeunbaoseutilizauntubodeteflnque
rodea la trampa en forma de U y un flujo de agua caliente desplaza al
nitrgenolquidounavezfinalizadalapreconcentracindeloscompuestos.
Ms adelante surgen trampas en las que el enfriamiento se consigue
mediante una corriente de gas y la posterior vaporizacin de los analitos
sustituyendoelflujodegasfroporunodegascaliente.Conelfindeevitar
lacorrientedegascalientenecesariaparaconseguirlavaporizacin,surge
laideadeintroducireldispositivoenelinteriordelcromatgrafodegases,
de modo que, una vez que el flujo de gas fro deja de circular, la trampa
adquiererpidamentelatemperaturadelhornodelGC.
16
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
IIIntroduccin
17
_________________________________________________________________________
utilizanmembranassemipermeablesycondensadoresdereflujo.Cuandose
utilizaHSesttico,elvolumendevapordeaguageneradoesmenorysuele
eliminarse mediante adsorcin qumica selectiva sobre una sal inerte
higroscpica[10].
Elprincipalproblemadelastrampascriognicasutilizadasesquesuelen
ser de fabricacin manual y requieren una alta cualificacin para ser
manejadas de forma adecuada. Esto pone de manifiesto la necesidad de
dispositivos disponibles en el mercado y fcilmente automatizables que
sean capaces de solucionar los problemas del acoplamiento HSGC, para
conseguirnivelesdesensibilidadapropiadosparaelanlisisdetrazas,sin
comprometerlaresolucindelazonainicialdelcromatograma.
Una posible alternativa es la utilizacin de los dispositivos comerciales
denominados inyectores de temperatura programada (Programmed
temperaturevaporizers,PTVs).Estaeslavaquesetratardeponerapunto
enestetrabajo.
1.2.QuEChERS(quick,easy,cheap,effective,ruggedandsafe)
La tcnica de extraccinlquidolquido (LLE) es una de las tcnicas de
preparacin de muestra ms consolidas en los laboratorios de anlisis. La
versinclsicasehautilizadodurantemuchosaos,yanhoysiguesiendo
unodelosmtodosderutinamsempleados.Esunprocedimientosencillo,
que no requiere equipamiento especfico y supone un pequeo coste. Sin
embargo, implica mucha manipulacin de la muestra, tiempos de anlisis
prolongadosyutilizagrandescantidadesdedisolventesorgnicoscuyouso
est cada vez ms restringido. Como se ha citado anteriormente en esta
memoria, la tendencia actual consiste en desarrollar versiones
miniaturizadasdelprocedimientoconvencionalalasquesehadenominado
tcnicasdemicroextraccincondisolventes(SME).
El fundamento de LLE consiste en la separacin de compuestos que
tienensolubilidadesdiferentesendoslquidosinmiscibles.Generalmentese
18
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
haaplicadoparalaextraccindecompuestosorgnicosenaguaomatrices
acuosas (frutas, verduras, fluidos biolgicos). Como disolvente de
extraccinseutilizaundisolventeorgnicoapolar(inmiscibleconelagua)
de manera que los compuestos no polares, con mayor afinidad por la fase
orgnica,seextraenenestafase.Elinconvenientedeutilizardisolventesno
polares es que la eficacia de la tcnica para la extraccin de compuestos
orgnicos altamente polares es muy limitada. Sin embargo, el uso de
disolventes ms polares, parcial o totalmente, miscibles con el agua no es
posibleyaquenoseconsigueunaadecuadaseparacindefases.
Para solucionar este inconveniente y poder ampliar la aplicacin de la
tcnicaLLEalaextraccindecompuestospolares,sehautilizadolaadicin
desales.Elprocedimientoconsisteenaadirunaaltaconcentracindesales
sobrelamezcladeaguaconundisolventeorgnicomiscibleoparcialmente
miscibley,porlasolvatacindelosionesdelassalesconlasmolculasde
agua,seconsiguelaseparacindelasdosfasesmiscibles(acuosa/orgnica)
[14].Estefenmenoseconocecomoseparacindefasesinducidaporsalesy
el procedimiento de extraccin basado en este principio se denomin
extraccin lquidolquido asistida por sales (saltingout assisted liquidliquid
extraction,SALLE)[15].
La principal desventaja de la tcnica SALLE radica en que el extracto
orgnicoobtenidosuelecontenermuchoscompuestospolarescoextrados
de la matriz que, en muchas ocasiones, interfieren en la determinacin de
loscompuestosobjetodeestudio.Estehechohaceque,enlamayoradelos
casos, sea necesario someter al extracto orgnico a diversas etapas de
limpiezaantesdellevaracaboelprocedimientodedeterminacin[15].Otra
posibilidadesladeanalizardirectamenteelextracto,utilizandoundetector
altamenteselectivo.
Las aplicaciones de esta tcnica de extraccin se han centrado
especialmenteenelreadelanlisisdepesticidas.Elprimermtodomulti
IIIntroduccin
19
_________________________________________________________________________
20
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
sales.Leeycolaboradoresutilizaronclorurosdicoparaestepropsito[23]
y desde entonces se han publicado numerosos artculos que utilizan este
mtodo o pequeas variaciones del mismo para la determinacin de
pesticidasendiferentesmatrices[2428].
Otro disolvente que se ha utilizado en el anlisis de pesticidas es el
acetato de etilo (EtOAc) [2933]. ste, tiene la ventaja de ser lo
suficientemente miscible con el agua como para lograr una adecuada
penetracinenlostejidosvegetales[34]yadems,susolubilidadenaguaes
menor que la de los otros disolventes citados, por lo que la separacin de
fases se consigue fcilmente con la adicin de una sal desecante, capaz de
eliminarelaguaquequedaenlafaseorgnica[35,36].
Durante los ltimos 40 aos tambin se han desarrollado, aunque en
muchamenorproporcin,algunosmtodosbasadosenSALLEquesehan
aplicado a la determinacin de compuestos que no son pesticidas.
Matkovich y Christian aplicaron la separacin inducida por sales del
sistemaacetonaaguaenlaextraccindequelatosmetlicos[37].Leggetty
colaboradores realizaron un estudio en el que utilizaban el sistema
acetonitriloaguaconseparacindefasesinducidaporclorurosdicopara
la determinacin de concentraciones traza de explosivos en agua [38].
Adems,laUSEPAhapropuestounmtodo(8330B)paraladeterminacin
decompuestosnitroaromticos,nitroaminasysteresdenitrato,basadoen
laseparacindefasesacetonitriloaguainducidaconclorurosdico[39].
En el ao 2003, Anastassiades y Lehotay [35] modificaron la tcnica
SALLE para adaptarla a las exigencias medioambientales y analticas
vigentes. El nuevo mtodo mantiene la simplicidad y eficacia del
procedimiento convencional pero utiliza la menor cantidad posible de
muestra, as como una pequea cantidad de disolventes orgnicos y
material bsico de laboratorio. La tcnica se dise para la extraccin de
una amplia gama de pesticidas en matrices de frutas y verduras y se le
IIIntroduccin
21
_________________________________________________________________________
22
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
Extraccin
10 g de muestra + agua*
Agitar 1 min con Vortex
10mL de acetonitrilo
Agitar 1 min con Vortex
4 g de MgSO4 y 1 g de NaCl
1. Agitar inmediatamente 1 min
con Vortex
2. Centrifugar 5 min a 5000 rpm
d-SPE
Anlisis cromatogrfico
* Se recomienda la adicin de agua en caso de muestras
secas, hasta alcanzar una humedad en torno al 70%.
Figura1:EtapasdelprocedimientoQuEChERSoriginal
Apartirdelprocedimientooriginal,hansurgidodiversasmodificaciones
comolautilizacindediferentesdisolucionestamponadasparamejorarla
eficaciadelaextraccindecompuestosconpropiedadescidobase[4043].
Otra variacin que ha surgido es la adicin de agua sobre muestras secas,
IIIntroduccin
23
_________________________________________________________________________
conelfindeobtenerlahumedadadecuada[4448].Enlaetapadelimpieza,
mediante dSPE, tambin se han desarrollado algunas modificaciones
relacionadasconelusodediferentesmaterialesadsorbentes.Enelcasode
matrices con alto contenido en grasas, se ha recomendado el uso de C18,
junto con la PSA, ya que proporciona una limpieza adicional de los
compuestoslipdicoscoextrados[41,49].Porotrolado,elusodenegrode
carbn grafitado (GCB) ha demostrado su eficacia en la eliminacin de
clorofilas de los extractos [49]. Tambin se han desarrollado algunas
aplicaciones en las que se utiliza el procedimiento de limpieza mediante
SPEclsica,encartuchos[5052].
El mtodo ha recibido gran aceptacin a nivel mundial y ha sido
validado en estudios interlaboratorios para numerosos pesticidas en
diversas matrices de alimentos [5364]. Recientemente, ha recibido la
distincin de Mtodo Oficial de la AOAC Internacional (Association of
AnalyticalCommunities)[65].
A pesar de que originalmente QuEChERS surgi como un mtodo
particularparaelanlisisdepesticidasenmatricesalimentarias,sueficacia
y flexibilidad lo han convertido en una potente herramienta, que est
empezando a ser utilizada para la determinacin de otro tipo de
compuestos y con otras matrices. Entre otros ejemplos pueden citarse: la
determinacin de compuestos farmacuticos en sangre [66], antibiticos
lactmicos[67,68]ofrmacosenfluidosdeanimales[6872].
ElusodeQuEChERSconmatricesdesueloshasidomuylimitadohasta
la fecha [73,74] y en ambas publicaciones el mtodo se aplica a la
determinacindepesticidas.Sinembargo,laaplicacindeestatcnicaala
extraccin de compuestos orgnicos voltiles (VOCs) en suelos no se ha
propuestohastaelmomento.
24
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
Enlapresentememoriasepondrapuntounamodificacindelmtodo
QuEChERS,adaptadaamuestrasdesuelos,paralaextraccindeVOCsde
dichasmatrices.
IIIntroduccin
25
_________________________________________________________________________
2.ANLISISMEDIANTECROMATOGRAFADEGASES
Enesteapartadosedetallarnlosaspectosrelacionadosconlainyeccin
de la muestra y las diferentes modalidades de cromatografa de gases
empleadas.
Elinyectorutilizadoenlamayorpartedelasmetodologaspropuestases
unPTV.Enlasaplicacionesenlasqueelpretratamientodelamuestraseha
llevado a cabo mediante el mtodo QuEChERS, los extractos orgnicos
obtenidosseinyectarondirectamenteenelPTV.Tambinsehautilizadoel
acoplamiento SHSPTV, muy poco estudiado hasta el momento, cuyas
caractersticasmsimportantessedescribirneneseapartado.
En lo referente al anlisis cromatogrfico, se describirn los principales
aspectos de la cromatografa de gases rpida (modalidad empleada en la
mayor parte de las aplicaciones desarrolladas) y de la cromatografa de
gasesendosdimensionescompleta(utilizadaenelanlisisdeunamezcla
compleja).
26
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
potencialparalaintroduccindemuestrasencromatografadegases,como
puede verse en la revisin bibliogrfica realizada por Engewald y
colaboradoresen1999[80].
Tradicionalmentesehautilizadoparalainyeccindemuestraslquidas,
aplicacin en la que aporta nuevas posibilidades y ventajas respecto a los
inyectoresconvencionales.
Las tcnicas convencionales de inyeccin de muestras lquidas en
cromatografadegasespuedendividirseentcnicasconevaporacinprevia
ytcnicasdeinyeccinencolumna.
En las tcnicas con evaporacin previa, la cmara de vaporizacin del
inyector(liner)semantieneaaltatemperatura(generalmenteenelmargen
de250Ca350C)parafacilitarlaevaporacinrpidadelamuestra.Estos
inyectores permiten dos modos de inyeccin: inyeccin con divisin de
muestra(split)einyeccinsindivisin(splitless).
Latcnicadeinyeccinencolumnaseutilizageneralmenteconmuestras
que se descomponen por encima de su punto de ebullicin [81]. La
disolucinseinyectadirectamenteenlacolumna,sinpasarporuninyector
caliente, con lo que se consigue evitar la degradacin trmica y la
discriminacin de los analitos, que pueden ocurrir en la cmara de
vaporizacin. Desafortunadamente, en el caso de muestras con una
cantidad considerable de analitos no voltiles, o en muestras con alto
contenidodeagua,seproduceunadisminucindelaeficaciayestabilidad
de la separacin cromatogrfica [80,82,83]. Adems, la retencin de
impurezas en la columna cromatogrfica acorta la vida de la misma. Esta
tcnicasehautilizadoparalainyeccindegrandesvolmenesdemuestras
lquidas(>2L)enGCmedianteelusodeprecolumnas.Enestedispositivo
se produce la separacin del disolvente y los analitos, a una temperatura
apropiada, seguida de la transferencia de los analitos a la columna
cromatogrfica. Ademsde posibilitar la inyeccin de grandes volmenes,
IIIntroduccin
27
_________________________________________________________________________
laprecolumnaretienepartedelasimpurezasdelamuestra.Sinembargo,
unaporcindeellassiguepasandoalacolumnacromatogrfica,porloque
este modo de inyeccin no se considera apropiado para el anlisis de
muestrasconconcentracionesaltasdeanalitosnovoltiles[82,84].
ElPTVconstadelosmismoselementosqueuninyectortradicional,pero
estequipadodeunsistemadeenfriamientoycalentamientomuyeficiente
(figura 2), gracias al cual la temperatura del inyector se controla de forma
programadadurantelainyeccindelamuestra.Estacaractersticahaceque
elPTVpermitaunagranvariedaddemodosdeinyeccinentrelosquese
encuentranlosclsicossplit/splitless:
Inyeccinsplitencaliente.
Inyeccinsplitenfro.
Inyeccinsplitlessencaliente.
Inyeccinsplitlessenfro.
Inyeccinconpurgadedisolvente(solventvent).
Vlvula de purga
desecho
Liner
Camisa
calefactora
Columna
cromatogrfica
Figura2:Inyectordetemperaturaprogramada(PTV)
28
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
IIIntroduccin
29
_________________________________________________________________________
30
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
2.1.2.AcoplamientoHSPTV
En la bibliografa consultada apenas se han encontrado trabajos en los
queseutilicelaconfiguracininstrumentalSHSPTVGC.Losdispositivos
quesehanutilizadomsfrecuentemente,conelfindeconseguirelenfoque
criognico del espacio de cabeza, son de fabricacin manual y poco
automatizables (como se detall en el apartado 1.1.). Se han encontrado
algunas notas sobre el acoplamiento de este tipo de dispositivos en los
informes tcnicos de las casas comerciales [96]. Adems, en un artculo
publicado en 1993 por J. Efer y colaboradores, se utilizaba esta
configuracin
para
la
determinacin
de
Ethephon
(cido
IIIntroduccin
31
_________________________________________________________________________
32
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
Lnea de transferencia termostatada
Vlvula de desecho
CO2
Sistema de
enfriamiento
Sistema de calentamiento
Liner
PTV
HS
Columna cromatogrfica
Figura3:EsquemadelacoplamientoHSPTVutilizadoenestetrabajo
IIIntroduccin
33
_________________________________________________________________________
correspondenaunprocesodeintroduccindemuestraencalienteyenfro,
respectivamente. Se han representado los perfiles tpicos de temperaturas
paralalneadetransferencia,ellinerdelPTVylacolumnacromatogrfica.
Tiempo (min)
Transferencia de
muestra PTV- GC
Separacin cromatogrfica
Transferencia de
muestra PTV-GC
Transferencia del
espacio de cabeza
Transferencia del
espacio de cabeza
Tiempo (min)
Separacin cromatogrfica
Figura4:Secuenciadeprocesosenunprocesodeintroduccindemuestra
encaliente(a)yenfro(b)
34
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
temperatura(superiora200C)duranteeltiempodeanlisis,porloque,no
se produce retencin de los analitos en el liner. A medida que stos van
llegando al inyector lo atraviesan, pasando a la columna del cromatgrafo
de gases segn el modo de inyeccin seleccionado. El proceso de
transferenciadelespaciodecabezayeldetransferenciadelamuestradesde
el PTV al cromatgrafo de gases se solapan en el tiempo, por tanto, la
transferencia de la muestra a la columna cromatogrfica es progresiva y
lenta.
Enunprocesodeintroduccindemuestraenfro(figura4b),elinyector
est a baja temperatura durante el tiempo de transferencia de la muestra
desde el generador de espacio de cabeza hasta el PTV, por lo que los
voltiles condensan en el liner. Una vez transcurrido el tiempo de
transferencia del espacio de cabeza, el inyector se calienta rpidamente,
transfiriendo los analitos a la columna, dnde tiene lugar la separacin
cromatogrfica.Portanto,seconsigueunafocalizacindelosanalitosenel
liner y la transferencia de la muestra desde el PTV al GC es mucho ms
rpidaqueenelcasodelainyeccinencaliente.
2.1.2.2.ModosdeinyeccinpermitidosporelPTV
Adems de programar la rampa de temperaturas del liner, el PTV
permiteseleccionardistintosmodosdeinyeccin.Ladiferenciaentreestos
modosdeinyeccinradicaeneltiempoquepermaneceabiertalavlvulade
desecho (tambin denominada vlvula de split) y el flujo de gas portador
quecirculaatravsdeella,factoresambosquedeterminanelvolumende
muestrainyectadoenlacolumnacromatogrfica.
2.1.2.2.1.Inyeccinsplit
Lavlvuladedesechoestabiertadurantetodoelproceso.Unaporcin
de los voltiles que llegan al inyector pasa a la columna cromatogrfica,
mientras que el resto se elimina a travs de la vlvula de desecho. La
fraccindemuestraqueentraencolumnavienedeterminadaporlarelacin
IIIntroduccin
35
_________________________________________________________________________
Inyeccinsplitencaliente
Lavlvuladedesechoestabiertadurantetodoeltiempodeanlisisyel
linerdelPTVsemantieneaaltatemperatura.Losanalitosatraviesanelliner
amedidaquevanllegandoatravsdelalneadetransferencia,pasandoa
la columna cromatogrfica segn la relacin de divisin seleccionada
(figura5a).
Inyeccinsplitenfro
La diferencia respecto al modo de inyeccin anterior es la
preconcentracindelosanalitosenellinerabajatemperaturaantesdeser
transferidosdeformarpidaalacolumnacromatogrfica(figura5b).
36
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
Split abierto
Split abierto
Temperatura del
Temperatura del
Tiempo (min)
Tiempo (min)
Separacin cromatogrfica
Transferencia de
muestra PTV- GC
Transferencia de
muestra PTV-GC
Transferencia del
espacio de cabeza
Transferencia del
espacio de cabeza
Separacin cromatogrfica
Figura5:Inyeccinsplitencaliente(a)ysplitenfro(b)
2.1.2.2.2.Inyeccinsplitless
Lavlvuladedesechoestcerradaduranteeltiempoenquetienenlugar
los procesos de transferencia del espacio de cabeza al PTV y de
transferencia de la muestra desde el PTV al GC, por lo que los analitos
pasan a la columna cromatogrfica sin divisin de muestra. Una vez
transcurrido este tiempo, denominado tiempo de splitless, la vlvula de
desecho se abre y a travs de ella circula un flujo rpido de gas portador,
denominado flujo de limpieza, que prepara el liner para la prxima
inyeccin.
Conestemododeinyeccinseintroduceenlacolumnacromatogrfica
la mayor parte de la muestra procedente del generador de espacio de
cabeza, por lo que se consiguen mejores lmites de deteccin que con el
mododeinyeccinsplit.
Inyeccinsplitlessencaliente
LatransferenciadelamuestradesdeelPTValacolumnacromatogrfica
esmuylenta(figura6a),yaque,lamuestraestransportadaatravsdelliner
IIIntroduccin
37
_________________________________________________________________________
con el mismo flujo que circula en columna (~1 mL/min). Esto hace que el
anchodebandainicialdelcromatogramaseagrande.
Inyeccinsplitlessenfro
Con este modo de inyeccin se evita el principal problema de la
inyeccinsindivisinencaliente.Losanalitossepreconcentranenellinery
latransferenciadelosmismosalacolumnacromatogrficaesrpida,porlo
queseconsiguereducirelanchodebandainicialymejorarlaformadelos
picos, sin los problemas que conlleva realizar este proceso en la propia
columnacromatogrfica(figura6b).
Split cerrado
Split abierto
Split cerrado
Temperatura del
Tiempo (min)
Tiempo (min)
Separacin cromatogrfica
Transferencia de
muestra PTV-GC
Transferencia de
muestra PTV- GC
Temperatura del
Transferencia del
espacio de cabeza
Transferencia del
espacio de cabeza
Split abierto
Separacin cromatogrfica
Figura6:Inyeccinsplitlessencaliente(a)ysplitlessenfro(b)
2.1.2.2.3.Inyeccinsolventvent
Estatcnicacombinalainyeccinenfroconlavaporizacincontrolada
del disolvente. El liner se encuentra a baja temperatura durante el proceso
detransferenciadelamuestradesdeelHSalPTVylavlvuladedesechose
encuentra abierta. De este modo, el disolvente en que van disueltos los
analitos se purga a travs de dicha vlvula mientras que stos quedan
retenidos en el liner. El tiempo durante el cual la vlvula de desecho
permanece abierta se denomina tiempo de purga. Una vez que ha
38
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
Split abierto
Split cerrado
nuevainyeccin(figura7).
Split abierto
Temperatura del
Transferencia de
muestra PTV-GC
Transferencia del
espacio de cabeza
Tiempo (min)
Separacin cromatogrfica
Figura7:Inyeccinsolventvent
IIIntroduccin
39
_________________________________________________________________________
2.2.Separacincromatogrfica
2.2.1Cromatografadegasesrpida
Desdelaprimeradescripcindecromatografagaslquido,realizadapor
JamesyMartinen1952[105],lacromatografadegaseshaexperimentado
un gran desarrollo, tanto desde el punto de vista tcnico como de las
numerosasaplicacionesquesehandesarrollado.
El principal avance que revolucion la cromatografa de gases fue la
introduccindecolumnastubularesabiertasocapilaresen1958[106].stas
ofrecen mayor resolucin, mayor rapidez de anlisis y mayor sensibilidad
que las columnas empaquetadas utilizadas hasta entonces, aunque tienen
menor capacidad de muestra. La cromatografa de gases capilar es el
mtodo ms eficiente para el anlisis de compuestos voltiles y semi
voltiles[107].
40
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
Elprincipalobjetivodelacromatografadegases,desdequesurgi,esel
dealcanzarlaresolucindeseadadeloscompuestosdeunamuestraenel
menor tiempo posible. En cromatografa de gases capilar convencional
(columnascondimetrointernode0.2a0.32mm)eltiempoempleadoenel
anlisis de una muestra se encuentra en el margen de 10 a 60 minutos,
dependiendo del tipo de muestra, del nmero de compuestos a analizar y
delascondicionesexperimentalesseleccionadas.
Dentro de la tendencia de reducir el tiempo de anlisis, surge la
cromatografa de gases rpida (fast gas cromatography, FGC). Los primeros
estudios sobre el potencial de columnas capilares con pequeo dimetro
interno(~0.1mm)paraconseguirseparacionesrpidasdatande1962[108],
perofueenlos90cuandoempezaronautilizarsedeformageneralizadaen
loslaboratoriosdeanlisis.
La reduccin del tiempo de anlisis conseguida con cromatografa de
gases rpida implica un aumento en la capacidad de procesamiento de
muestras. Esto se traduce en un ahorro en tiempo y dinero por muestra
analizadayenunincrementoenlaproductividaddeloslaboratorios.
Dentrodelasaplicacionesmsimportantesdelacromatografadegases
rpidaseencuentranelcontroldeprocesosenlneayelcontroldecalidad
de alimentos, as como su uso en situaciones en las que los resultados del
anlisisserequierenloantesposible.
Otraventajadelacromatografadegasesrpidaesquepermiterealizar
unmayornmeroderplicasdecadamuestraenelmismotiempoquese
realiza el anlisis de una muestra en cromatografa convencional. Esto se
traduceenmayorcantidaddedatosanalticosy,portanto,mayorprecisin
delosresultados[109,110].
El tiempo de anlisis de una separacin mediante FGC depende
fundamentalmente de la complejidad de la mezcla, de la modalidad de
trabajoydeldetectorqueseutilice.Paramuestrasmuycomplejaseltiempo
IIIntroduccin
41
_________________________________________________________________________
42
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
2.2.2.Cromatografaendosdimensionescompleta
Comoyasehamencionadoenapartadosanteriores,lacromatografade
gases ha experimentando un gran avance en la ltimas dcadas. Las
columnas capilares disponibles en el mercado son capaces de separar del
ordende100a150compuestosapartirdeunanicainyeccin.Estetipode
anlisis, en el que se utiliza una sola columna cromatogrfica, se puede
denominarcromatografadegasesenunadimensin(1DGC).
A pesar de la alta capacidad de separacin de la tcnica, que es muy
superioraladeotrastcnicascromatogrficas,enalgunasocasionesnose
alcanzalaresolucinnecesariacomoparaseparartodosloscomponentesde
muestras altamente complejas (aceites, productos petroqumicos, humo de
tabaco, muestras ambientales). Con esta tcnica la resolucin de los
compuestosselimitaalpoderdeseparacindeunasolacolumnaymuchos
analitosaparecensolapadosenelcromatograma,loquegeneradificultades
enlaidentificacinyfaltadeprecisinenlacuantificacin,inclusocuando
seutilizacomodetectorunespectrmetrodemasas[117,118].
Ante este problema se pueden plantear dos posibles soluciones. La va
tradicional consiste en someter la muestra a diferentes procedimientos de
pretratamientoylimpieza,antesderealizarelanlisiscromatogrfico.Con
estaestrategiasepretendeevitarlapresenciadeelementosinterferentesde
lamatriz,quepuedencoeluirconlosanalitosobjetodeestudio.Entrelos
procedimientos de pretratamiento de muestra aplicados en este tipo de
anlisis, son muy comunes procedimientos de extraccin en fase slida
(SPE)yelfraccionamientodelosextractosencolumnasdesliceoalmina.
El principal inconveniente de estos procedimientos es que requieren
tiempos prolongados, mucha manipulacindemuestra y por consiguiente
IIIntroduccin
43
_________________________________________________________________________
aumentanlasposibilidadesdecometererroresdebidoaposiblesprdidas,
contaminacinoalteracinqumicadelamuestra.
Una alternativa mucho ms atractiva es el uso combinado de mnimo
tratamiento de la muestra con un mtodo de separacin altamente eficaz.
Dentro de esta tendencia surgi la denominada cromatografa de gases
multidimensional, abreviada como MDGC, GCGC 2DGC [119]. Esta
tcnica consiste en la combinacin de dos o ms columnas con diferente
selectividad,yhasidoaplicadademanerasatisfactoriaenlaresolucinde
unagranvariedaddeproblemas[120].Enestamodalidaddecromatografa,
una, o unaspocas fracciones del eluyente dela primera columna (primera
dimensin) son sometidas a una nueva separacin en la segunda columna
(segundadimensin),porloqueseaumentadeformasignificativaelpoder
resolutivo de la tcnica con respecto a la separacin lograda mediante el
anlisisenunasoladimensin.Enlafigura8semuestraunesquemabsico
deunsistemadeGCGCconvencional.
Detector 1
Detector 2
Inyector
Vlvula
1 Columna
2 Columna
Horno GC
Figura8:RepresentacinesquemticadeunsistemadeGCGCconvencional
44
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
problemasdeefectomemoria,oproblemasdedispersinyensanchamiento
de los picos. Otra posibilidad es el uso de un sistema que consiste en un
interruptor neumtico, basado en el equilibrio de presiones, que fue
desarrolladoporDeansen1968[121].
En algunas ocasiones, cuando se analizan en la segunda dimensin
varias fracciones del eluyente de la primera columna, han surgido
problemas porque los componentes de las diferentes fracciones se
entremezclanenlasegundacolumna.Parasolucionaresteproblema,seha
utilizadounsistemaenelsecolocanunaseriedetrampasdeadsorcin,en
paralelo, al final de la primera columna, de manera que cada una de las
fraccionesdeeluyenteseleccionadassealmacenaenunatrampahastaque
el anlisis de la fraccin anterior en la segunda columna ha finalizado.
Tambin se ha utilizado la configuracin en la que se coloca una trampa
criognica que retiene y focaliza cada fraccin del eluyente, antes de
introducirlaenlasegundacolumna.Otraposibilidadquesehadesarrollado
paraincrementarelnmerodefraccionesdeeluyenteanalizadasmediante
un segundo mecanismo de separacin consiste en conectar a la primera
columna,enlaquetienelugarlaseparacinprincipal,variascolumnascon
susrespectivosdetectores[120,122,123].
Como consecuencia, GCGC es una tcnica muy til cuando lo que se
requiereesinformacindealgunasfraccionesdelamuestra,quecontienen
todoslosanalitosdeinters.Sinembargo,cuandoserequiereinformacin
completa de la composicin de la muestra, esta tcnica presenta ciertas
limitaciones[122,123,124].
En los ltimos aos ha surgido una nueva alternativa de MDGC en la
que,graciasalusodeunsofisticadosistemacapazdedividireleluyenteen
fracciones muy pequeas y a una columna cromatogrfica muy corta y
estrecha en la segunda dimensin, capaz de analizar estas fracciones en
tiempos muy cortos, es posible someter la muestra completa a una
separacin en dos dimensiones. Esta modalidad se ha denominado
IIIntroduccin
45
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Modulador
1 Columna
2 Columna
Figura9:RepresentacinesquemticadeunequipodeGCXGC
Enmuchoscasoslasdoscolumnasseencuentranenelmismohorno,sin
embargo, en los instrumentos ms modernos la segunda columna suele
estar localizada en un horno particular, situado en el interior del horno
principal,quepermitelograruncontrolmsflexibledelatemperaturaenla
segundadimensin.
De manera general, las muestras se separan primero en una columna
cromatogrficadealtaresolucintpicamente1530mx0.250.32mmi.d.x
0.11mdeespesordefaseestacionariaconteniendounafaseestacionaria
no polar. Tras la modulacin, cada fraccin individual se inyecta en una
columna ms estrecha, con dimensiones tpicas de 0.52 m x 0.1 mm i.d. x
0.1m,quecontieneunafaseestacionariadepolaridadmedia.Conelfinde
mantenerlaseparacinconseguidaenlaprimeradimensin,lasfracciones
46
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
deeluyentenodebensersuperioresauncuartodelaanchuradepico(530
s), es decir se recomiendan al menos tres o cuatro modulaciones por pico.
Esto hace que las rampas de temperaturas que se utilizan en la primera
columna(de1a5C/min)seanmslentasquelashabitualesen1DGC.En
esta primera columna, no polar, los analitos se separan en funcin de su
punto de ebullicin. De esta manera, cada fraccin de eluyente de la
primera columna contiene analitos de volatilidades muy similares. La
separacindelosanalitosenlasegundacolumnaesmuycorta,de1a10s,
por lo que tiene lugar en condiciones esencialmente isotrmicas. Los
analitosdecadafraccin,conpuntosdeebullicinsimilares,seseparanen
lasegundacolumnaenfuncindesusinteraccionesespecficasconlafase
estacionariadepolaridadmedia.Elcortotiempoquerequierelaseparacin
de los compuestos en la segunda columna hace que sea posible someter a
toda la muestra a una separacin de 2D, en el mismo tiempo en que se
desarrollaelanlisisenunadimensin[125127].Esdecir,conGCXGCse
consigueunpoderresolutivosuperioraldecualquierotratcnicaenlaque
se acoplan varios sistemas de separacin y de forma mucho ms rpida y
sencilla.
ElregistroqueseobtienetrasunanlisismedianteGCXGCconsisteen
unaseriedecromatogramas,correspondientesacadaunadelasfracciones
de eluyente analizadas en la segunda dimensin, que aparecen alineados
unodetrsdeotro(figura10,fase1,modulation).Estasfraccionesalineadas,
se transforman en un cromatograma en 2D, en el que una dimensin
representaeltiempoderetencinenlaprimeracolumnaylaotra,eltiempo
de retencin en la segunda columna (figura 10, fase 2, transformation). La
visualizacin (figura 10, fase 3, visualization), normalmente, se realiza
mediantelarepresentacindelcromatogramaenunplano,enelquelneas
decontornoounaescaladecoloresrepresentanlaintensidaddelaseal.En
algunasocasionestambinseutilizanrepresentacionesentresdimensiones,
enlasqueelejezrepresentalasealdeldetector.
IIIntroduccin
47
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Figura10:GeneracinyvisualizacindeuncromatogramaGCXGC(Ref[99])
Lacombinacindecolumnas,quesehadescrito,enlaquelosanalitosse
separanpordosmecanismoscompletamentediferentesencadaunadelas
dimensiones,dalugaraunaseparacinortogonaldeloscompuestos.Una
de las principales ventajas de la ortogonalidad esque en elcromatograma
en 2D se pueden observar estructuras ordenadas formadas por los
diferentes grupos de compuestos presentes en la muestra. Estos
cromatogramassonmuytilescuandolasmuestrascontienencompuestos
estructuralmenterelacionadoscomohomlogosoismeros.Lautilidadde
esta caracterstica se ha puesto de manifiesto en numerosas aplicaciones
[128130]. Tambin se han utilizado otras combinaciones de columnas no
48
IIIntroduccin
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IIIntroduccin
49
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Figura11:Funcionamientoesquematizadodeunmoduladorcriognico
dedoblechorro(adaptadaderef[100]).
S0: esquema de un modulador criognico de doble chorro. S1: El
chorrodeladerechaatrapalosalanitosqueeluyendelaprimera
columna. S2: El chorro de la derecha se apaga y el punto fro se
calienta rpidamente, transfiriendo los analitos a la 2 columna;
simultneamenteelchorrodelaizquierdaseactivaparaevitarque
la siguiente fraccin de muestra pase tambin a la segunda
dimensin.S3:Comienzodelsiguienteciclodemodulacin.
50
IIIntroduccin
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utilizadofueeldeionizacinenllama(flameionizationdetector,FID),aunque
tambinseutilizarondetectoresselectivosdeelementos,comoeldecaptura
electrnica (ECD), el de emisin atmica (atomic emission detector, AED) o
detectores de quimioluminiscencia de azufre o nitrgeno (sulfur
chemiluminiscence detector, SCD; nitrogen chemiluminiscence detector, NCD).
Estos detectores permiten la cuantificacin de los compuestos, pero no
proporcionan informacin estructural de los mismos, imprescindible
cuando lo que se pretende es identificar o confirmar la presencia de
compuestos desconocidos. Debido a esto, el uso de espectrmetros de
masasestmuyrecomendadoenestassituaciones.Eldetectordemasasde
tipo cuadrupolar (quadrupole mass spectrometer, QMS) se ha utilizado en
algunasaplicacionesobteniendoresultadosaceptablescuandoseusaenel
modoSIM,conelquesepuedeconseguirunafrecuenciadeadquisicinde
datos de 30 Hz [137]. Sin embargo, el detector de masas ms utilizado en
este tipo de aplicacin es el de tiempo de vuelo (time of flight mass
spectrometer, TOFMS), que puede adquirir espectros con una frecuencia de
100a500Hz,porloqueescapazdereconstruirdeformaprecisalospicos
procedentesdelasegundacolumna[122,124,135].
Comoconsecuenciadelasaltastasasdeadquisicindedatosalcanzadas
con el TOFMS, el anlisis de una muestra genera una gran cantidad de
datos,cuyomanejoeinterpretacinescomplejoytedioso.Sehadedicado
mucho esfuerzo en conseguir simplificar esta etapa. Hoy da, la existencia
depotentesprogramasinformticosfacilitaelprocesodetratamientodelos
datosmediantenumerosasfunciones,comoson:labsquedaautomticade
picos,deconvolucindeespectros,bsquedaautomticadelosespectrosen
la librera, combinacin de picos, o integracin automtica de todos los
picos que corresponden a un mismo compuesto en la segunda dimensin
[125,127,138]. Sin embargo, a pesar de estas funciones automticas, es
necesaria la supervisin de un analista especializado para garantizar la
IIIntroduccin
51
_________________________________________________________________________
correctainterpretacindelosdatosyelusoordenadorespotentes,capaces
dealmacenarlagrancantidaddeinformacinquesegenera.
Las principales aplicaciones de la tcnica GC X GC han consistido en
anlisis de muestras petroqumicas, sin embargo tambin se ha utilizado
paraelanlisisdemuestrasdealimentos,muestrasambientales,biolgicas,
aceitesesencialesymuestrasdecosmticos.Dallgeycolaboradores[125]y
Adahchour y colaboradores han publicado revisiones bibliogrficas en las
que se describen los fundamentos de la tcnica y sus principales
aplicaciones[126,127,138,140,141].
Las ventajas que aporta esta tcnica respecto a la cromatografa
convencional en 1D, se pueden resumir en las siguientes: poder de
resolucinmuchomayor,caractersticaqueesmuyinteresanteenelanlisis
demuestrasreales,enlasqueselograsepararlosanalitosdeloselementos
interferentes de la matriz; mayor sensibilidad, debido a la focalizacin de
losanalitosenelmoduladoryalosestrechospicosobtenidosenlasegunda
dimensin;mayorprecisinenlaidentificacindeloscompuestos,debidoa
la existencia de dos tiempos de retencin y a la presencia de estructuras
ordenadasenloscromatogramas.
52
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
3.BIBLOGRAFA
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54
IIIntroduccin
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IIIntroduccin
55
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IIIntroduccin
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IIIntroduccin
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[111] M.Kirchner,E.Matisov,M.Dmtrov,J.deZeeuw,J.Chromatogr.
A1055(2004)159.
[112] P.Tollbck,J.Bjrklund,C.stman,J.Chromatogr.A991(2003)241.
[113] M.Kirchner,E.Matisov,S.Hrouzkov,J.deZeeuw,J.Chromatogr.
A1090(2005)126.
[114]E.Korenkov,E.Matisov,J.Slobodnik,J.Sep.Sci.26(2003)241.
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1216(2009)6326.
[117]A.C. Lewis, N. Carslaw, P.J. Marriott, R. M. Kinghorn, P.Morrison,
A.L.Lee,K.d.Bartle,M.J.Pilling,LetterstoNature,405(2000)778.
[118] X. Xu, L.L. P. van Stee, J. Williams, J. Beens, M. Adahchour, R.J.J.
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[122]M.Herrero,E. Ibez, A. Cifuentes, J. Bernal, J. Chromatogr.A 1216
(2009)7110.
IIIntroduccin
59
_________________________________________________________________________
[123]P.J.Marriott,R.M.Kinghorn,J.Chromatogr.A866(2000)203.
[124]W.Bertsch,J.HighResolut.Chromatogr.23(2000)167.
[125]J. Dallge, J. Beens, U.A.Th. Brinkman, J. Chromatogr. A 1000 (2003)
69.
[126] M.Adahchour,J.Beens,R.J.J.Vreuls,U.A.Th.Brinkman,TrendsAnal.
Chem.25(2006)438.
[127] M. Adahchour, J. Beens, U.A.Th. Brinkman, J. Chromatogr. A 1186
(2008)67.
[128] H.J. de Geus, I. Aidos, J. de Boer, J.B. Luten, U.A.Th. Brinkman, J.
Chromatogr.A910(2001)306.
[129] P. Korytr, P.E.G. Leonards, J. de Boer, U.A.Th. Brinkman, J.
Chromatogr.A958(2002)203.
[130] M. Adahchour, J. Beens, R.J.J. Vreuls, A.M. Batenburg, U.A.Th.
Brinkman,J.Chromatogr.A1054(2004)47.
[131] T.C.Tran,G.A.Logan,E.Grosjean,J.Harynuk,D.Ryan,P.Marriott,
Org.Geochem.37(2006)1190.
[132] P.Haglund,M.Harju,R.Ong,P.J.Marriot,J.Microcol.Sep.13(2001)
306.
[133] D.Ryan,R.Shellie,P.Tranchida,A.Casilli,L.Mondello,P.Marriot,J.
Chromatogr.A1054(2004)57.
[134] O.Trapp,J.Chem.Inform.Comput.Sci.44(2004)1671.
[135] R.Shellie,P.J.Marriot,Anal.Chem.74(2002)5426.
[136]R.Shellie,P.J.Marriot,C.Cornwell,J.Sep.Sci24(2001)823.
[137] J.Wu,X.Lu,W.Tang,H.Kong,S.Zhou,G.Xu,J.Chromatogr.A1034
(2004)199.
[138] M.Adahchour,J.Beens,R.J.J.Vreuls,U.A.Th.Brinkman,TrendsAnal.
Chem.25(2006)540.
[139] C.Debonneville,A.Chaintreau,J.Chromatogr.A1027(2004)109.
[140] M.Adahchour,J.Beens,R.J.J.Vreuls,U.A.Th.Brinkman,TrendsAnal.
Chem.25(2006)726.
60
IIIntroduccin
_________________________________________________________________________
[141] M.Adahchour,J.Beens,R.J.J.Vreuls,U.A.Th.Brinkman,TrendsAnal.
Chem.25(2006)821.
III
CONFIGURACIONES
INSTRUMENTALES
IIIConfiguracionesinstrumentales
63
_________________________________________________________________________
1.2.Inyectordetemperaturaprogramada
El PTV utilizado en esta configuracin es un modelo de Gerstel (CIS4;
Gerstel, Linthicum, MD, USA). Un esquema del dispositivo utilizado se
muestraenlafigura1.
El cabezal del inyector utilizado no tiene septum, si no que cuenta con
unavlvuladeselladoquesedesplazadurantelainyeccinparapermitirel
pasodelajeringa.
El enfriamiento del liner se realiza mediante una corriente de CO2
lquido,quepermitealcanzarlatemperaturade78C.Elcalentamientose
64
IIIConfiguracionesinstrumentales
_________________________________________________________________________
Muestra
Vlvula de
desecho
CO2
Liner
Camisa
calefactora
Columna
cromatogrfica
Figura1:InyectorPTVCIS4deGerstel
IIIConfiguracionesinstrumentales
65
_________________________________________________________________________
1.3.Espectrmetrodemasas
El espectrmetro de masas cuadrupolar es un HP 5973 N de Agilent
Technologies (Waldbronn, Alemania). La fuente de ionizacin es de
impacto electrnico, con un voltaje de ionizacin de 70 eV. Las
temperaturas recomendadas para la fuente de ionizacin y el cuadrupolo
son230Cy150C,respectivamente.
Esposibleseleccionardosmodosdeadquisicindedatos:scan,enelque
el detector haceunbarrido de un amplio intervalode masas, previamente
especificado;yelmododeseguimientodeionesseleccionados(selectedion
monitoring, SIM), que permite seleccionar los iones caractersticos de las
especies de inters, de modo que para cada intervalo de tiempo slo se
registranunospocosionesseleccionados.
Labasededatosutilizadaparalaidentificacindeloscompuestosesla
NIST98(NIST/EPA/NIHMassspectralLibrary,version1.6).
1.4.Mdulosdeinyeccindelasmuestras
1.4.1.Generadordeespaciodecabeza
El generador de espacio de cabeza es un modelo HP 7694 de Agilent
Technologies (Waldbronn, Alemania) equipado con un muestreador
automticopara44muestrasconsecutivas.
Elhornopuedecalentarsedesde40Chasta195C.Estformadoporun
carrusel circular de aluminio con 6 posiciones para equilibrar viales
simultneamente. Esto permite que el tiempo de generacin de espacio de
cabeza de las muestras se pueda superponer de forma que el intervalo de
anlisisentreellassereduzcaconsiderablemente.
Elsistemademuestreoconstadelossiguienteselementos:unaagujade
acero inoxidable con un dimetro interno de 0.5 mm, una vlvula de seis
vasconunbucledenquelde3mLdecapacidad(modelo316SS)ydos
66
IIIConfiguracionesinstrumentales
_________________________________________________________________________
GENERADOR DE
ESPACIO DE
CABEZA
ESPECTRMETRO
DE MASAS
CROMATGRAFO
DE GASES
INYECTOR DE
TEMPERATURA
PROGRAMADA
Figura2:ConfiguracininstrumentalHSPTVGCMS.
IIIConfiguracionesinstrumentales
67
_________________________________________________________________________
68
IIIConfiguracionesinstrumentales
_________________________________________________________________________
GENERADOR DE
ESPACIO DE CABEZA
INYECTOR DE
TEMPERATURA
PROGRAMADA
MACHTM
ESPECTRMETRO
DE MASAS
CROMATGRAFO
DE GASES
Figura3:ConfiguracininstrumentalHSPTVGCMSconMACHTM
Enlafigura4semuestranlasfotografasdeunacolumnasinlacarcasa
protectora(a)yconlacarcasa(b).
Figura4:Columnaempaquetadasincarcasa(a)yconcarcasa(b)
IIIConfiguracionesinstrumentales
69
_________________________________________________________________________
1.4.2.AutomuestreadorCombiPAL
Otro dispositivo para la introduccin de muestras que se ha acoplado
recientemente a la configuracin PTVGCMS es el automuestreador
CombiPAL (CTC analytics AG, Zwingen, Suiza). Este automuestreador
aporta mayor versatilidad al equipo, ya que permite seleccionar distintas
modalidadesdeintroduccindelamuestra(inyeccindemuestraslquidas,
espacio de cabeza esttico y microextraccin en fase slida). El dispositivo
consiste en un brazo muestreador automtico al que se pueden acoplar
diferentesmdulos,enlosquevamontadalajeringaapropiada,enfuncin
deltipodeintroduccindemuestraquesequierarealizar.Tambinposee
diferentestiposdebandejasparalosvialesdemuestraadecuadosparacada
aplicacin.Ademsconstadeunhornogeneradordeespaciodecabeza,con
capacidadparaseisviales.
La programacin del CombiPAL se hace desde un controlador
independientepropio,enelqueseleccionaeltipodeinyeccinquesevaa
realizar y se programa un mtodo en el que se especifican las condiciones
de las diferentes variables implicadas en la inyeccin. A continuacin se
programalasecuenciademuestras.
En la figura 5 se muestra la imagen de la configuracin instrumental
CombiPALGCPTVMS.
70
IIIConfiguracionesinstrumentales
_________________________________________________________________________
BRAZO AUTO-MUESTREADOR
HORNO GENERADOR DE
ESPACIO DE CABEZA
BANDEJAS VIALES
CONTROLADOR
CombiPAL
INYECTOR DE
TEMPERATURA
PROGRAMADA
ESPECTRMETRO
DE MASAS
CROMATGRAFO DE GASES
Figura5:ConfiguracininstrumentalCombiPALPTVGCMS
IIIConfiguracionesinstrumentales
71
_________________________________________________________________________
Figura6:BrazoautomuestreadordelCombiPALconmdulodeinyeccindelquidos
72
IIIConfiguracionesinstrumentales
_________________________________________________________________________
PROGRAMADA
DETECTOR
DE
CAPTURAELECTRNICA
2.1.Cromatgrafodegases
El modelo de cromatgrafo de gases es un Agilent 7890 equipado con
una columna capilar DBVRX (20 m x 0.18 mm x 1 m) de Agilent
Technologies (J&W Scientific Columns, USA). El horno del cromatgrafo
permite programar hasta cinco rampas de temperatura. Las rampas
mximaspermitidasporelequiposon120C/minhasta70C,95C/minde
70a115C,65C/minde115a175C,45Cde175a300Cy35C/minde
300a400C/min.ElgasportadorutilizadoeshelioN50(99.999%puro;Air
Liquid).
2.2.Inyectordetemperaturaprogramada
El modelo utilizado es un PTV 6890 de Agilent Technologies. Tiene las
mismas especificaciones tcnicas que el PTV de Gerstel, definido en el
apartadoanterior,ypuedeutilizarlosmismosliners.Lanicadiferenciaes
queenestemodeloelcabezaldelinyectortieneseptum,porloqueesms
similaralosinyectoressplit/splitlessconvencionales.
2.3.Detectordecapturaelectrnica
Elmodeloutilizadoesunmicrodetectordecapturaelectrnica(ECD)
de Agilent Technologies (Waldbronn, Alemania), con una fuente de
radiacin de Ni63. La temperatura mxima permitida por la fuente de
radiacin es de 400 C. El volumen de la zona de deteccin es 10 veces
menor que la de cualquier otro ECD. Para facilitar el transporte de la
muestraatravsdelaclulaseutilizaunacorrientedegasauxiliarquese
une al eluyente de la columna. El flujo de este gas afecta a la sensibilidad
deldetectoryalaresolucindelcromatograma.Losvaloreshabitualesde
flujo de gas auxiliar oscilan entre 2060 mL/min. El gas utilizado es
IIIConfiguracionesinstrumentales
73
_________________________________________________________________________
2.4.Sistemadeinyeccindemuestraslquidas
El modelo utilizado es un Agilent 7683. La torre del inyector contiene
una jeringa, que puede ser de 5 10 L. Es posible seleccionar dos
velocidadesparaelmbolodelajeringa:baja(5L/s)yalta(100L/s).
El control de todos los mdulos que componen la configuracin
instrumentalserealizamediantesoftwareespecficodesdeelordenador.La
adquisicinymanipulacindelosdatostambinserealizaenelordenador.
En la figura 7 se muestra una fotografa de esta configuracin
instrumental.Sehautilizadoeneldesarrollodelasaplicacionesdescritasen
loscaptulosVIyVIIdeestamemoria.
74
IIIConfiguracionesinstrumentales
_________________________________________________________________________
INYECTOR
AUTOMTICO
DE LQUIDOS
-DETECTOR
DE CAPTURA
ELECTRNICA
INYECTOR DE
TEMPERATURA
PROGRAMADA
CROMATGRAFO DE GASES
Figura7:ConfiguracininstrumentalPTVGCECD
IIIConfiguracionesinstrumentales
75
_________________________________________________________________________
3.CROMATGRAFODEGASES(GCXGC)CONINYECTOR
SPLIT/SPLITLESS Y ESPECTRMETRO DE MASAS DE
TIEMPODEVUELO
3.1.Cromatgrafodegases
ElmodelodecromatgrafodegasesesunAgilent7890,equipadocon
un inyector split/splitless convencional. El cromatgrafo se ha modificado
conlainstalacindeunhormosecundarioydeunmoduladorcriognicoen
dos etapas con cuatro chorros. La columna cromatogrfica empleada en la
primeradimensinesunaHP5(29mx0.25mmi.d.,0.25mdeespesorde
faseestacionaria)deAgilentTecnologies(Waldbronn,Alemania)yladela
segunda dimensin es una RTX17 (79 cm x 0.1 mm x 0.1 m) de Restek
(Bellefonte,PA,USA).Lasdoscolumnasseconectanmedianteunconector
universalSilketTreatedUniversalPressThight(Restek).Enlafigura8se
muestra una fotografa del horno del cromatgrafo de gases con el horno
secundarioyelmoduladorinstalados.
Horno secundario
Modulador
Columna
1 dimensin
Figura8:Hornosecundarioymoduladorinstaladosenelhornoconvencionaldel
cromatgrafodegases
76
IIIConfiguracionesinstrumentales
_________________________________________________________________________
LasrampasdetemperaturasempleadasenGCXGCsuelenserde1a5
C/min durante todo el anlisis. La rampa de temperaturas en los dos
hornosdebeserlamisma,conladiferenciadequeelhornosecundarioest
siempre unos cuantos grados (generalmente 20 C) por encima de la
temperaturadelhornoprimario.
Enelmodulador,elenfriamientoseconsigueconflujosdenitrgenogas
presurizado que se enfra con nitrgeno lquido, el cual es dispensado
medianteuncontenedorporttilEuroCyl120/4.
ElgasportadorutilizadoeshelioN50(99.999%puro;AirLiquid).
3.2.Espectrmetrodemasasdetiempodevuelo
ElmodeloutilizadoesunLECOPegasus4DdeLECO(St.Joseph,MI,
USA). La lnea de transferencia entre el horno secundario y el detector se
mantiene a la misma temperatura, o a una temperatura ligeramente
superior,alatemperaturafinaldelacolumnadelasegundadimensin.La
temperatura recomendada para la fuente de ionizacin es de 200 C. Se
utiliz ionizacin de impacto electrnico, con un voltaje de 70 eV. El
detectorpermiteseleccionarelintervalodemasasquesevaaregistraryla
frecuenciadeadquisicindedatos,quepuedeserdehasta500Hz.
3.3.Sistemadeinyeccindemuestraslquidas
El modelo utilizado es un Agilent 7683, cuyas caractersticas han sido
descritasenlaseccin2.3deesteapartado.
En la figura 9 se muestra una imagen de la configuracin instrumental
completa.Todoslosmdulossecontrolandesdeelordenadormedianteel
softwarePegasus4D(versin3.34.).Sehautilizadoeneldesarrollodela
aplicacindescritaenelapartadoIX.
IIIConfiguracionesinstrumentales
77
_________________________________________________________________________
INYECTOR
AUTOMTICO DE LQUIDOS
CROMATGRAFO
DE GASES
ESPECTRMETRO
DE MASAS
Figura9:ConfiguracininstrumentalGCXGCTOFMS
Laadqusicinytratamientodelosdatossehicieronmedianteelsofware
LECO ChromaTOF, optimizado para Pegasus 4D (versin 3.34.). Esta
versin del sofware de anlisis de datos incluye muchas funciones que
facilitan y simplifican enormemente el tratamiento de los mismos. Entre
estas funciones se pueden citar: bsqueda automtica de picos,
deconvolucin de espectros, bsqueda automtica de espectros en la
librera, combinacin de picos e integracin automtica de todos los picos
delasegundadimensinquecorrespondenaunmismocompuesto.Labase
dedatosdeespectrosutilizadaeslaNIST98(NIST/EPA/NIHMassspectral
Library,version1.6).
IV
DETERMINACINDETHMSENAGUAS
MEDIANTEELACOPLAMIENTODE
UNGENERADORDEESPACIODECABEZA
CONUNINYECTORDETEMPERATURA
PROGRAMADA
IVDeterminacindeTHMsenaguas
81
_________________________________________________________________________
1.INTRODUCCIN
La prctica de cloracin de los suministros de agua de consumo por
motivos de salud pblica comenz en 1908 en los Estados Unidos de
Amrica y desde entonces contina siendo el mtodo de desinfeccin ms
utilizado y el ms efectivo y econmico [1]. Desafortunadamente, la
cloracin del agua da lugar a la formacin de subproductos no deseados,
tales como trihalometanos (trihalomethanes, THMs) y cidos haloacticos
(haloaceticacids,HAAs)[2,3].
LosTHMsfueronidentificadosporprimeravez,comosubproductosde
la desinfeccin de agua, por J.J. Rook en 1974 [4]. Los compuestos que se
forman ms frecuentemente son cloroformo (CFM), bromodiclorometano
(BDCM), dibromoclorometano (DBCM) y bromoformo (BMF) [5,6]. El
cloroformo es el THM ms comn y tambin el principal subproducto de
desinfeccinenelaguaclorada.Enpresenciadeionesbromuroseforman
preferentemente los THMs bromados y la concentracin de cloroformo
disminuyeproporcionalmente[7].
La presencia de THMs en el agua potable supone una preocupacin
debido a sus posibles efectos adversos para la salud. La Agencia
Internacional de Investigacin sobre el Cncer (International Agency for
Research on Cancer, IARC) ha clasificado el cloroformo y el
bromodiclorometanocomoposiblescarcingenosenhumanos(Grupo2B),
basndose en pruebas insuficientes de su carcinogenicidad en humanos
pero evidencias suficientes de su carcinogenicidad en animales de
laboratorio.EldibromoclorometanoyelbromoformopertenecenalGrupo3
(noclasificablescomocarcingenosenhumanos),debidoaquelaspruebas
de su carcinogenicidad son insuficientes en humanos y limitadas o
insuficientesenanimalesdelaboratorio[8].
La Agencia de Proteccin Medioambiental de los Estados Unidos de
Amrica(EnvironmentalProtectionAgency,EPA)establecien1998unnivel
82
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
IVDeterminacindeTHMsenaguas
83
_________________________________________________________________________
84
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
IVDeterminacindeTHMsenaguas
85
_________________________________________________________________________
2.OBJETIVOS
Elobjetivogeneraldeestetrabajoeseldeestudiarlasposibilidadesde
un inyector de temperatura programada como sistema de introduccin de
muestras gaseosas, procedentes del generador de espacio de cabeza, en
cromatografadegases.
Deestemodosepretendensolucionarlosinconvenientesasociadosalos
inyectores convencionales split/splitless. Para este fin, la utilizacin de un
dispositivo automtico y comercialmente disponible evita el uso de los
dispositivos de enfoque criognico fabricados manualmente, y difciles de
manipularyreproducir,quesehanvenidoutilizandoenlosltimosaos.
Seseleccionaelgeneradordeespaciodecabezaestticocomotcnicade
generacindevoltilesconelobjetivodeproponerunmtodorpido,que
reducealmnimolaetapadepretratamientodelamuestra.Selograasuna
reduccin en el tiempo y precio del anlisis y, adems, una disminucin
considerabledeloserroresasociadosaestaetapa.
Dentro de la tendencia de reducir al mnimo el tiempo de anlisis se
estudiarn las posibilidades de la cromatografa de gases rpida. Para ello
se utilizar una columna de pequeo dimetro interno, altos flujos de gas
portadorylasrampasdetemperaturasmximaspermitidasporelequipo.
Se explorarn las posibilidades de la configuracin instrumental HS
PTVFGCMSenelanlisisaniveldetrazas,medianteladeterminacinde
trihalometanosenmuestrasdeagua.
Elobjetivofinaldeltrabajoesponerapuntounmtodorpido,precisoy
exactoparaladeterminacindetrihalometanosenaguas.
Paraellosecompararnlosdistintosmodosdeinyeccinpermitidospor
el PTV, seleccionando el ms apropiado para el problema en cuestin. Se
realizarunestudiodeoptimizacindelasdistintasvariablesqueinfluyen
86
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
IVDeterminacindeTHMsenaguas
87
_________________________________________________________________________
3.PARTEEXPERIMENTAL
3.1.Reactivos
Los
trihalometanos
(cloroformo,
bromodiclorometano,
3.2.Disolucionesestndarymuestras
Se prepar una disolucin de 200 mg/L por dilucin de la mezcla de
calibracinenmetanol.Apartirdeestadisolucinmadreseprepararon,en
aguamineral,lasdistintasdisolucionesempleadasparaobtenerlascurvas
decalibracinyloslmitesdedeteccinycuantificacin.
Se utiliz agua mineral, ya que en anlisis previos realizados con agua
destilada y agua ultrapura se detectaron concentraciones traza de estos
compuestos. Otros autores han descrito la presencia de THMs, sobre todo
cloroformo,entodaslasmatricesacuosaseinclusoenelaire[26].
Losmodelosobtenidosconlasdisolucionespreparadasenaguamineral
se utilizaron para predecir las concentraciones de estos compuestos en
diferentesmuestrasdeagua.
88
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
3.3.InstrumentacinHSPTVGCMS
Laconfiguracininstrumentalutilizadaesladescritaenelapartado1de
la seccin III Configuraciones instrumentales utilizadas. Consta de cuatro
partesfundamentales,quesehanrepresentadoeneldiagramaesquemtico
de la figura 1. Se han alterado los tamaos relativos de los diferentes
mdulospararesaltarlaspartesquesehanconsideradomssignificativas.
MS
Desecho
Abundancia
Cromatograma
4
3
2
1
+
-
HS
GC
3 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo
Cuadrupolo
Abundancia
PTV
83
4
3
2
1
85
35
47
87
20 40 60 80 100
Helio
CO2
m/z
Espectro de masas
Figura1:Diagramaesquemticodelaconfiguracininstrumentalutilizada
IVDeterminacindeTHMsenaguas
89
_________________________________________________________________________
3.4.ProcedimientosHSPTVGCMS
3.4.1.Generadordeespaciodecabeza
Alcuotasde5mLdelasmuestrasdeaguasedepositaronenvialesde10
mL, que se cerraron con tapones que poseen septum de silicona. Cada
muestra se analiz por triplicado. Una vez cerrados, los viales fueron
sometidos al procedimiento de generacin de espacio de cabeza a 90 C,
durante 30 min. Despus de este tiempo, y una vez completados los
procesos de presurizacin y llenado del bucle, la muestra se inyect en el
sistemadurante1min.
3.4.2.Inyectordetemperaturaprogramada
Seutilizelmododeinyeccinsolventvent.Elenfriamientodellinerse
consiguiconCO2lquido.Ademsseestudiaronotrosmodosdeinyeccin
permitidos por el PTV utilizado, con el fin de comparar los resultados
obtenidos.
Elespaciodecabezaseintrodujoenelinyectora5C.Elflujodepurga
seajusta50.0mL/minylapresindeventeosefijen5.00psi.Tras1.70
minlavlvuladepurgaodivisinsecerryellinersecalentrpidamente
a12C/shastaalcanzar250C,demaneraquelosanalitossontransferidos,
pordesorcintrmica,alacolumnacapilar(0.60min).Unaveztranscurrido
este tiempo,la vlvula de divisin se abride nuevo y la temperatura del
linersemantuvoa250Cdurante5.60min.
90
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
3.4.3.Cromatgrafodegases
La temperatura inicial del horno se fij en 45 C (durante 3 min), esta
temperaturaseincrementhasta175Caunavelocidadde70C/min,que
se increment de nuevo hasta 240 C a una velocidad de 45 C/min y la
columna se mantuvo a esta temperatura durante 1 min. Bajo estas
condiciones los compuestos eluyeron en menos de 5 min y el tiempo
cromatogrficototalfuede7.30min.
3.4.4.Espectrmetrodemasas
Enelmododeadquisicindedatosscanseregistraronlasrelacionesm/z
(masa/carga) entre 25 y 270 uma, y se seleccion un valor umbral de
abundancia de 0. La identificacin de los diferentes compuestos se realiz
porcomparacindelosespectrosexperimentalesconloscorrespondientesa
la base de datos NIST98 (NIST/EPA/NIH Mass Spectral Library, versin
1.6).
Lainformacinobtenidaapartirdeestosregistrossirviparaestablecer
tres grupos SIM. El primero (3.004.50 min) contena los tres iones ms
abundantes del cloroformo y el bromodiclorometano (83, 85 y 47); el
segundo(4.504.83min)estabaformadoporlostresionescaractersticosdel
bromodiclorometano (127, 129 y 131), y el tercer grupo (4.83 7.30 min)
contena las relaciones m/z 171, 173 y 175, caractersticas del bromoformo.
La adquisicin de seales para cada ion se realiz con un tiempo de
permanenciade30ms.
3.5.Anlisisdedatos
La recogida de los datos cromatogrficos se realiz con el software
Enhanced ChemStation [41], G1701CA Ver. C 00.00 de Agilent
Technologies.
IVDeterminacindeTHMsenaguas
91
_________________________________________________________________________
4.RESULTADOSYDISCUSIN
4.1.Optimizacindelascondicionesexperimentalesdelsistema
HSPTVGCMS
4.1.1.Optimizacindelaseparacincromatogrfica
Con el fin de conseguir la separacin de los cuatro THMs mediante
cromatografa de gases rpida, se utilizaron las rampas de temperaturas
mximas permitidas por el horno del cromatgrafo y la columna capilar
utilizados (vase apartado 3.4.3 de la parte experimental). De tal manera
quelanicavariableaoptimizarfuelatemperaturainicialdelacolumna.
Se estudiaron valores que oscilaban entre 35 C y 55 C. Los resultados
mostraronqueamedidaquelatemperaturainicialaumentaba,tenalugar
unensanchamientodelospicoscromatogrficos(Figura2).Porotrolado,el
tiempo necesario para recuperar las condiciones instrumentales iniciales
aumentaba considerablemente a medida que la temperatura inicial de la
columna disminua (10 min para 35 C y 5 min para 45 C). Como
consecuencia, se seleccion una temperatura inicial de 45 C, que permita
unaseparacinadecuadadelosanalitossinprolongardemasiadoeltiempo
deanlisis.
92
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
5
3
55C
45C
35C
In extrado m/z 83
Bromodiclorometano
Abundancia/10 3
Abundancia/10 3
In extrado m/z 83
Cloroformo
5
35C
45C
55C
1
3.40 3.50 3.60 3.70
45C
1.5
1
35C
55C
Abundancia/10 3
Abundancia/10 3
1.5
0.5
0.5
4.30 4.40 4.50 4.60 4.70 4.80 4.90
Tiempo (min)
Figura2:Cromatogramasdeunadisolucinde10ppbdeTHMscuandoseutilizan
distintastemperaturasinicialesenelhornodelcromatgrafo
4.1.2.Estudiodelosmodosdeinyeccin
Enelmododeinyeccinsplitencaliente,larelacindedivisinera
1:10ylatemperaturadelinyectorsemantuvoa250Cdurantetodoel
anlisis. Esta misma temperatura se mantuvo en el modo de inyeccin
splitlessencaliente,conuntiempodesplitlessde2.25min(Figura3).
IVDeterminacindeTHMsenaguas
93
_________________________________________________________________________
Split abierto
Split cerrado
Splitless
Temperatura C
Split
100
Temperatura de la lnea
de transferencia del HS
250
Temperatura del
liner del PTV
240 C
250
45 C/min
200
150
70 C/min
100
Temperatura de la
columna cromatogrfica
45 C
50
0
0
Tiempo (min)
Transferencia del
espacio de cabeza
Separacin cromatogrfica
Transferencia de
muestra PTV- GC
Figura3:Condicionesdelosmodosdeinyeccinencaliente
Enlosmodosdeinyeccinsplitysplitlessenfro,larelacindesplityel
tiempo de splitless se mantuvieron, respectivamente, en los valores citados
anteriormente, mientrasque la temperatura inicial del inyector se fij en5
Cdurante1.70min.Despusdeestetiempoelinyectorsecalenta12C/s
hasta250C(Figura4).
La secuencia de etapas involucradas cuando se utiliza el modo de
inyeccin solvent vent se ha descrito en la parte experimental (3.4.2) y una
representacinesquemticapuedeobservarseenlafigura4.
Split abierto
Solvent vent
Split cerrado
94
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
Split abierto
Split abierto
Split cerrado
Splitless
Temperatura C
Split
100
Temperatura de la lnea
de transferencia del HS
250
Temperatura del
liner del PTV
12 C/s
5
240 C
250
45 C/min
200
150
70 C/min
100
Temperatura de la
columna cromatogrfica
45 C
50
0
0
Transferencia de
muestra PTV-GC
Transferencia del
espacio de cabeza
Tiempo (min)
Separacin cromatogrfica
Figura4:Condicionesdelosmodosdeinyeccinenfro
IVDeterminacindeTHMsenaguas
95
_________________________________________________________________________
segnelprogramadetemperaturastambinesquematizadoenlasfiguras3
y4.
Los cromatogramas obtenidos (modo de adquisicin de datos scan) al
analizar una muestra con los modos de inyeccin en fro mostraban un
retrasoenlostiemposderetencindelosanalitos,respectoalosobtenidos
alanalizarlamismamuestraconloscorrespondientesmodosdeinyeccin
encaliente.Almismotiempo,seobservunestrechamiento,incrementode
alturaymejoradelaformadelospicos,cuandoseutilizaronlosmodosde
inyeccinenfro(Figuras5y6).
Split en fro
Split en caliente
In extrado m/z 83
Bromodiclorometano
Abundancia/10 3
Abundancia/10 3
In extrado m/z 83
Cloroformo
Split en fro
Split en caliente
3
1
3.60
3.66
3.72
3.78
3.84
Tiempo (min)
4.10
4.16
Split en fro
Split en caliente
Split en caliente
Split en fro
1.2
0.4
4.52
4.28
4.34
Tiempo (min)
Abundancia/10 3
4.22
4.58
4.64
4.70
4.76
Tiempo (min)
4.86
4.92
4.98
5.04
5.10
Tiempo (min)
Figura5:Comparacindelassealesobtenidasmedianteinyeccinsplitencalientey
enfrodeunadisolucinde10ppbdeTHMs
96
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
Splitless en fro
14
10
In extrado m/z 83
Bromodiclorometano
Abundancia/10 3
Abundancia/10 3
In extrado m/z 83
Cloroformo
Splitless en caliente
14
10
Splitless en fro
Splitless en caliente
6
2
2
3.65
3.75
3.85
3.95
Tiempo (min)
4.10
Splitless en fro
Splitless en caliente
Splitless en fro
4
2
2
4.50
4.40
Tiempo (min)
Abundancia/10 3
Splitless en caliente
4.30
4.20
4.60
4.70
4.80
Tiempo (min)
4.85
4.95
5.05
5.15
Tiempo (min)
Figura6:Comparacindelassealesobtenidasmedianteinyeccinsplitlessencaliente
yenfrodeunadisolucinde10ppbdeTHMs
IVDeterminacindeTHMsenaguas
97
_________________________________________________________________________
SIM
Split en
Split en
Splitless en
Splitless
en fro
Solvent
vent
Solvent
vent
CFM
1.00
0.79
2.98
3.22
5.55
7.77
BDCM
1.00
0.97
3.81
4.07
7.06
9.88
DBCM
1.00
1.05
4.01
4.40
7.16
11.5
BMF
1.00
1.17
4.55
4.64
8.09
14.6
caliente
fro
caliente
rea
1.00
0.21
1.05
0.34
0.32
0.38
BDCM
1.00
0.31
1.38
0.53
0.47
0.56
DBCM
1.00
0.45
0.94
0.55
0.50
0.60
BMF
1.00
0.69
0.94
0.77
0.77
0.92
CFM
1.00
2.13
1.39
4.22
8.50
96.9
BDCM
1.00
2.20
1.76
3.41
8.34
111
DBCM
1.00
2.36
4.18
6.99
13.4
149
BMF
1.00
1.47
3.44
3.76
11.5
144
S/N
Elmododeinyeccinsolventventpermitelaeliminacindeldisolvente,
que contiene los analitos, mientras que stos permanecen retenidos en el
linerdelinyector.Generalmente,estemododeinyeccinseutilizacuandoel
disolventetieneunpuntodeebullicininferioralosdelosanalitos.Eneste
caso, cloroformo y bromodiclorometano tienen puntos de ebullicin
inferioresaldelagua(61Cy90Crespectivamente),mientrasquelosdel
dibromoclorometanoyelbromoformosonligeramentesuperiores(117Cy
149Crespectivamente).Esteinconvenienteseminimizautilizandounliner
empaquetado con el material de relleno adecuado. En este estudio se
98
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
para
los
compuestos
ms
voltiles,
cloroformo
In extrado m/z 83
Cloroformo
5 C
5
15 C
25 C
35 C
In extrado m/z 83
Bromodiclorometano
Abundancia/10 3
Abundancia/10 3
temperaturainicialdelinyectorde5C.
5 C
15 C
3
25 C
35 C
1
3.76
3.80
3.84
3.88
3.92
Tiempo (min)
4.18
4.22
5 C
3
2
35 C
1
4.60
4.64
4.68
4.72
Tiempo (min)
4.34
Tiempo (min)
5 C
3
15 C
25 C
35 C
1
4.56
4.30
Abundancia/10 3
4.26
4.92
4.96
5.00
5.04
5.08
Tiempo (min)
Figura7:Comparacindelassealesobtenidascondistintastemperaturasinicialesen
ellinerdelPTV(disolucindeTHMsde10ppb)
IVDeterminacindeTHMsenaguas
99
_________________________________________________________________________
In extrado m/z 83
Bromodiclorometano
1.75 min 2 min
1.65 min
1.75 min
1.55 min
2 min
5
3
Abundancia/10 3
Abundancia/10 3
1.65 min
1
3.82
3.86
3.90
3.94
Abundancia/10 3
3.98 4.02
Tiempo (min)
1.55 min
2
1
4.58
4.62
4.66
4.70
4.74
4.88 4.82
Tiempo (min)
4.20
4.24
4.28
4.32
4.36
Abundancia/10 3
3.78
3
1
1.65 min
2 min
1.55 min
2
1
4.88
4.40 4.44
Tiempo (min)
4.92
4.96
5.00
5.04
5.08 5.12
Tiempo (min)
Figura8:Comparacindelassealesobtenidascondistintostiemposdepurgaenuna
disolucindeTHMsde10ppb
Elflujodepurganoafectabademanerasignificativaalasealanaltica,
porloqueseseleccionunflujode50mL/min,quepermitalaeliminacin
adecuadadeldisolvente(Figura9).
100
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
50 mL/min
75 mL/min
100 mL/min
200 mL/min
In extrado m/z 83
Bromodiclorometano
Abundancia/10 3
Abundancia/10 3
In extrado m/z 83
Cloroformo
50 mL/min
75 mL/min
100 mL/min
200 mL/min
3
1
3.82
3.84
3.86
3.88
3.90
Tiempo (min)
4.25
4.27
2
1
4.62
4.64
4.66
4.68
4.70
Tiempo (min)
4.33
Tiempo (min)
Abundancia/10 3
50 mL/min
75 mL/min
100 mL/min
200 mL/min
4.31
4.29
50 mL/min
75 mL/min
100 mL/min
200 mL/min
2
1
4.95
4.97
4.99
5.01
5.03
Tiempo (min)
Figura9:Comparacindelassealesobtenidascondistintosflujosdepurgaenuna
disolucindeTHMsde10ppb
IVDeterminacindeTHMsenaguas
101
_________________________________________________________________________
0.6 min
1.0 min
1.5 min
0.1 min
In extrado m/z 83
Bromodiclorometano
Abundancia/10 3
Abundancia/10 3
In extrado m/z 83
Cloroformo
1.0 min
0.6 min
5
3
0.1 min
1
1
3.20
3.50
3.80
4.10
4.40
Tiempo (min)
3.50
3.80
4.10
1.5 min
0.1 min
4.50
4.80
5.10
5.40
Tiempo (min)
4.70
5.00
Tiempo (min)
Abundancia/10 3
4.20
1.0 min
0.6 min
4.40
1.5 min
0.6 min
1.5 min
2
1 0.1 min
4.50
1.0 min
4.80
5.10
5.40
5.70
Tiempo (min)
Figura10:Comparacindelassealesobtenidascondistintostiemposdeinyeccinen
unadisolucindeTHMsde10ppb
102
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
26
Solvent vent
18
10
Splitless en fro
Split en fro
In extrado m/z 83
Bromodiclorometano
Abundancia/10 3
Abundancia/10 3
In extrado m/z 83
Cloroformo
26
Solvent vent
18
Splitless en fro
Split en fro
10
2
3.79
3.82
3.85
3.88
3.91
Tiempo (min)
4.21
4.24
Solvent vent
10
6
Split en fro
Splitless en fro
14
4.59
4.62
4.65
4.68
4.71
4.74
Tiempo (min)
Solvent vent
10
6
2
4.33
4.36
Tiempo (min)
Abundancia/10 3
14
4.30
4.27
Split en fro
4.92
4.95
4.98
Splitless en fro
5.01
5.04
5.07
Tiempo (min)
Figura11:Comparacindelostresmodosdeinyeccinenfroenunadisolucinde
THMsde10ppb
Paraconcluirelestudiodelosmodosdeinyeccin,lafigura12muestra
los cromatogramas obtenidos con el modo de inyeccin split en caliente
convencional en cromatografa de gases y el modo de inyeccin solvent
vent,optimizadoenestetrabajo.Encadacasosehaextradolarelacinm/z
ms abundante para cada compuesto. Se observa un incremento
significativo de la seal analtica cuando se utiliza el modo solvent vent, lo
que permite proponer un mtodo analtico altamente sensible para la
determinacindeTHMsenaguas.
IVDeterminacindeTHMsenaguas
103
_________________________________________________________________________
30
25
Solvent vent
20
15
10
In extrado m/z 83
Bromodiclorometano
Abundancia/103
Abundancia/103
In extrado m/z 83
Cloroformo
Split en caliente
5
3.60
3.66
3.72
30
25
Solvent vent
20
15
10
Split en caliente
5
3.78
3.84
3.90
Tiempo (min)
4.10
4.16
4.22
14
Solvent vent
10
6
Split en caliente
2
4.48
4.54
4.60
14
4.72
4.78
Tiempo (min)
Solvent vent
10
6
2
4.66
4.34
4.40
Tiempo (min)
Abundancia/103
4.28
Split en caliente
4.84
4.90
4.96
5.02
5.08
5.14
Tiempo (min)
Figura12:Comparacindesplitencalienteconsolventventenunadisolucinde
THMsde10ppb
4.1.3.Modosdeadquisicindedatos
Los resultados descritos hasta ahora se han obtenido con el modo de
adquisicindedatosscanparaunintervaloderelacionesm/zentre25y270
uma. Con la informacin obtenida a partir de estos cromatogramas se
establecieron tres grupos SIM que contenan las tres relaciones m/z ms
abundantesparacadacompuesto(vaseparteexperimental3.4.4).
La figura 13 muestra las ventanas de los cromatogramas obtenidos
cuando,enlascondicionesptimasparaelmododeinyeccinsolventvent,
seanalizalamismamuestraconlosmodosdeadquisicindedatosscany
SIM. Para cada compuesto se ha extrado la relacin m/z ms abundante:
m/z 83 para cloroformo y bromodiclorometano (Figuras 13a y 13b
respectivamente); m/z 127 para dibromoclorometano, y m/z 173 para
bromoformo.EnelmododeadquisicindedatosSIMseobservunligero
incrementodereadepicoparatodosloscompuestos,queoscilaentre1.4
104
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
vecesparaelcloroformoy1.8paraelbromoformo(Tabla1).Sinembargo,
ms importante que este incremento en el rea de los picos es la
disminucindelruidoregistradoconelmodoSIMparacadaionextrado,
como se puede comprobar en las ventanas ampliadas, representadas en la
partesuperiorderechadecadacromatogramaparcialmostradoenlafigura
13. Esta disminucin del ruido se traduce en un incremento de la relacin
S/Nqueoscilaentre11.1y13.3veces(vasetabla1).
In extrado m/z 83
Bromodiclorometano
Abundancia/10 3
Abundancia/10 3
In extrado m/z 83
Cloroformo
SIM
Scan
3
1
3.84
3.88
3.92
Tiempo (min)
Scan
5
3
Scan
4.27
4.31
4.35
Tiempo (min)
5.01
5.05
Tiempo (min)
SIM
4.23
Abundancia/10 3
Abundancia/10 3
SIM
3.80
5
4
SIM
3
2
Scan
1
4.60
4.64
4.68
4.72
Tiempo (min)
4.93
4.97
Figura13:ComparacindelosmodosdeadquisicindedatosscanySIMenuna
disolucinTHMsde10ppb
IVDeterminacindeTHMsenaguas
105
_________________________________________________________________________
4
2
1
3.90
4.10
4.30
4.50
4.70
Bromoformo
Bromodiclorometano
5
3
Dibromoclorometano
Cloroformo
Abundancia/103
4.90
Tiempo (min)
Figura14:Cromatogramadeunadisolucinde2ppbdeTHMs
106
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
Tabla2:Condicionesexperimentalesoptimizadas
GENERADOR DE ESPACIO DE CABEZA
Temperaturas
Horno
90 C
Bucle
95 C
Lnea de Transferencia
100 C
30 min
Tiempos
12.30 min
0.30 min
0.15 min
0.02 min
Inyeccin
1.00 min
50.0 ml/min
Tiempo de purga
1.65 min
Tiempo de inyeccin
0.6 min
Flujo de limpieza
20.0 mL/min
T inicial
Inyeccin en fro
Rampa
5 C (1.70 min)
12 C/s hasta 250 C (5.60 min)
CROMATGRAFO DE GASES
Horno
T inicial
45 C (3 min)
Rampa 1
Rampa 2
ESPECTRMETRO DE MASAS
Tiempo de permanencia: 30ms
4.2.Calibracin
Paracadaunodelosanalitosexaminadosseestudiarontrecenivelesde
concentracin en el intervalo de 0.05 a 76 ppb, por lo que, para cada
compuesto se cubren 3.5 rdenes de magnitud. Cada nivel se analiz por
triplicado y se evalu la linealidad del mtodo. Este amplio intervalo de
IVDeterminacindeTHMsenaguas
107
_________________________________________________________________________
rea/10 6
rea/10 6
3.5
2.5
3
1.5
2
1
0
0.5
20
-1
40
60
80
-0.5
20
80
60
Concentracin (g/L)
Concentracin (g/L)
1.4
40
1
0.6
0.6
0.2
0.2
-0.2
20
40
60
80
Concentracin (g/L)
-0.2
20
40
60
80
Concentracin (g/L)
Figura15:Rectasdecalibracinenelintervalo0.0576ppb
108
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
Enlatabla3seresumenlascaractersticasanalticasdelmtodo.Todas
las calibraciones mostraron un comportamiento lineal, con valores de
coeficientededeterminacin(R2)superioresa0.99.Laordenadaenelorigen
incluaelceroentodosloscasos.Paraestudiarlavalidezdelosmodelosse
llev a cabo un anlisis de varianza, comprobando que ninguno de los
modelosgeneradospresentabafallodeajuste.Lareproducibilidad,paraun
nivel de concentracin de 1.0 ppb era satisfactoria, con valores de
desviacin estndar relativa (relative standar deviation, RSD) iguales o
inferioresal4.3%.
Tabla3:Caractersticasanalticasdelmtodo
Compuesto
CFM
Pendiente
Ordenada en
el origen
R2
RSD
(%)*
LD
(ng/L)
LQ
(ng/L)
(6.260.06) x 104
(12) x 104
0.9990
4.3
2.6
8.0
BDCM
(3.910.06) x 10
(0.51.6) x 10
0.9977
0.7
0.4
1.0
DBCM
(2.010.06) x 104
(-27) x 104
0.9983
0.8
0.5
1.0
0.9974
1.3
0.6
2.0
BMF
(1.510.06) x 10
(-67) x 10
*Calculadoparaunamuestrade1g/Ldecadacompuestoyn=3
Loslmitesdedeteccinseestimaronapartirdelasiguienteecuacin:
LD =
3.3
dondeesladesviacinestndar(nmeroderplicas,n=10)delaseal
deunpicocorrespondienteaunarelacinseal/ruidodeaproximadamente
3;Seslapendientedelacurvadecalibradoy3.3eselvalordelparmetrot
deStudent(paran1,0.99).
Loslmitesdecuantificacinseestimaronutilizandolaecuacin:
LQ =
10
IVDeterminacindeTHMsenaguas
109
_________________________________________________________________________
dondeySsignificanlomismoqueenlaecuacinprevia.Loslmitesde
cuantificacinparaloscuatrocompuestosestnespecificadosenlatabla3.
En la tabla 4 se resumen las principales caractersticas analticas de
algunos de los mtodos empleados para la determinacin de THMs en
aguas durante los ltimos diez aos. Una revisin ms exhaustiva de los
mtodosanalticosempleadosenestetipodeanlisiseslacorrespondiente
a la cita [11], cuya versin original se ha incluido al final de este captulo
(publishedarticleIV2).
110
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
Reprod.
LD
RSD % (g/L)a
(ng/L)
1-75
>0.991
<7 (15)
230-450
16
2004
1-100
>0.9982
<11.3 (10)
150-400
17
SLM-GC-ECD
2006
0.2-100
>0.9973
<6 (1)
10-200
18
DLLME-GC-ECD
2008
10-500
>0.9990
<8.6 (5)
5-40
19
HS-GC-MS
2001
0.5-10
ne
<39 (0.5)
100
12
HS-GC-MS
2002
0.5-10
ne
<39.1 (0.59
50-200
13
HS-GC-ECD
2002
ne
ne
ne
60-500
20
HS-GC-MS
2006
20-300
>0.970
31.9 (40)
100
22
HS-PTV-GC-MS
2008
0.05-76
>0.9945
<4.3 (1)
0.4-2.6
HS-SPME-GC-ECD
2006
5-500
<0.9968
<2.6 (ne)
0.3-1.4
23
HS-SPME-GC-ECD
2003
0.05-80
>0.9976
<6.2 (5)
5-10
24
HS-SPME-GC-MS
2007
0.05-150
>0.990
<4 (9.6)
0.43-6
25
HS-SPME-GC-MS
2005
0.1-100
>0.9991
<4.5 (0.1)
10-20
26
P&T-GC-MS
2001
ne
ne
<64.9 (10)
50-250
12
P&T-GC-ECD
2001
ne
ne
<19.3 (2)
25-50
12
P&T-GC-MS
2002
0.1-40
ne
<13.2 (1)
10-50
13
P&T-GC-MS
2006
20-80
>0.849
<30.35 (20)
100
22
P&T-GC-MS
2005
0.001-1
ne
<10 (ne)
27
P&T-GC-MS
2001
0.2-25
>0.994
<10.5 (4)
20-120
28
P&T-GC-ECD
2000
1-50
>0.997
<12 (0.1)
20-70
29
CMS-GC-ECD
2006
0.9-35
>0.987
<8.6 (1.8)
100-400
31
SCMS-GC-ECD
2004
1.2-32.0
>0.993
<5.3 (ns)
300-900
32
CMS-FIA-FL
2005
10-100
>0.976
<8.8 (25)
1700-9400
33
MIMS-PTV-FGC-MS
2000
0.025-20
>0.993
<9.5 (b)
2-8
38
HS-MS
2007
4-50
ne
<4.5 (10)
100-120
39,40
Configuracin
instrumental
Ao
Margen
conc.
(g/L)
SDME-GC-ECD
2006
HS-SDME-GC-ECD
ne:noespecificado
aConcentracinalaquesehacalculadolaRSD
bMediade3rplicasparacadaniveldeconcentracinestudiado
cMtodopropuestoenestetrabajo
Ref.
IVDeterminacindeTHMsenaguas
111
_________________________________________________________________________
112
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
estemodo,seobtieneelvalordeconcentracinconlamenorincertidumbre
posible.
Paraconfirmarlaposiblepresenciadeestoscompuestosenlasmuestras
analizadas, se comprobaron los espectros de masas de los picos que
aparecanalostiemposderetencinquesehabandeterminadoalanalizar
las disoluciones patrn. Inicialmente, las muestras se analizaron con el
modo de adquisicin de datos scan (Figura 16a). La identificacin de los
THMs se realiz por comparacin de los espectros experimentales con los
correspondientesalabasededatosNIST98,admitiendounadiferenciaen
las abundancias relativas de los tres iones ms intensos para cada
compuestoinferioresal20%,queeslohabitualenestetipodeestudios.La
cuantificacin se realiz en modo SIM (Figura 16b), utilizando las mismas
condicionesempleadasparaobtenerloscalibrados.
(a)
7
6
5
Bromodiclorometano
Abundancia/104
IVDeterminacindeTHMsenaguas
113
_________________________________________________________________________
Cloroformo
4
3
2
1
3.70
3.90
4.10
4.30
4.50
4.70
4.90
Tiempo (min)
Grupo 2
Grupo 3
m/z:(127, 129, 131) m/z:(171, 173, 175)
Cloroformo
3
2
1
3.70
3.90
Dibromoclorometano
5
Bromodiclorometano
Abundancia/104
(b)
7
4.10
4.30
4.50
4.70
4.90
Tiempo (min)
Figura16:Cromatogramadeunamuestradeaguadegrifo(grifo1)analizadaenmodo
scan(a)ymodoSIM(b)
Latabla5muestralasconcentracionesencontradasparacadaunodelos
THMs en las diferentes muestras de agua analizadas. El intervalo de
confianza se ha expresado para el valor de tres rplicas con un nivel de
confianza del 95 %. Entre parntesis se muestra el intervalo de
concentracionesutilizadoparalaprediccindelaconcentracin.
114
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
Tabla5:Concentracionesencontradasenlasmuestrasanalizadas
Muestra
CFM (g/L)
BDCM (g/L)
DBCM (g/L)
BFM (g/L)
Agua uhq
0.820.03 (0-1)
<LC
<LD
<LD
Grifo 1
36.80.9 (0-76)
2.50.2 (0-6)
0.110.01 (0-0.5)
<LD
Grifo 2
37.00.9 (0-76)
2.40.2 (0-6)
0.100.01 (0-0.2)
<LD
Grifo 3
36.00.9 (0-76)
2.50.2 (0-6)
0.110.01 (0-0.2)
<LD
Grifo 4
23.80.7 (0-50)
1.80.2 (0-6)
0.080.01 (0-0.2)
<LD
Grifo 5
1051 (0-76)
6.10.2 (0-10)
0.460.02 (0-1)
<LD
Sondeo 1
2.000.02 (0-6)
0.260.02 (0-0.5)
0.0380.006 (0-0.1)
0.0160.007 (0-0.05)
Sondeo 2
<LC
<LD
<LD
<LD
0.0150.007 (0-0.1)
<LC
<LC
<LC
0.0420.007 (0-0.1)
<LC
0.0080.006 (0-0.05)
<LC
Agua
mineral 1
Agua
mineral 2
IVDeterminacindeTHMsenaguas
115
_________________________________________________________________________
5.CONCLUSIONES
SehaimplementadounnuevomtodoparaladeterminacindeTHMs
en agua, basado en el acoplamiento de generacin de espacio de cabeza,
inyeccin de muestra con el modo solvent vent, separacin mediante
cromatografa de gases rpida y deteccin mediante espectrometra de
masas.Lasprincipalesventajasdelmtodosonlassiguientes:
La utilizacin de espacio de cabeza permite la introduccin de las
muestrasenelmontajeinstrumentalsinningntipodetratamientoprevio
delasmismas.Deestaformaseeliminalamanipulacindelasmuestras,se
simplifica el procedimiento y se minimizan los errores asociados a esta
etapadelprocesoanaltico.
Elacoplamientodeungeneradordeespaciodecabezaconuninyector
detemperaturaprogramadadaresultadosaltamentesatisfactorios.Elmodo
deinyeccinsolventventpermitelainyeccinrpidadelamuestraenmodo
splitless, dando lugar a lmites de deteccin muy buenos sin el crtico
problemadeensanchamientodebandainicial.
Lacolumnacapilarutilizadapermiteobtenerseparacionesrpidasdelos
compuestos con anchuras de pico a media altura que van de 1.68 s
(cloroformo) a 0.66 s (bromoformo). El tiempo cromatogrfico total era de
7.3min.
La utilizacin de espectrometra de masas permite la identificacin
inequvoca de los analitos y su cuantificacin a niveles tan bajos como las
ppt.LarelacinS/Neraalmenosdiezvecessuperiorcuandoseutilizabael
mododeadquisicindedatosSIM,respectoalmodoscan.
Elmtodopropuestoesextremadamentesensible,conlmitesde
deteccinquevande0.4a6ng/L.
116
IVDeterminacindeTHMsenaguas
________________________________________________________________________
6.BIBLIOGRAFA
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IVDeterminacindeTHMsenaguas
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PUBLISHEDARTICLE
IV1
121
Journal of Chromatography A
journal homepage: www.elsevier.com/locate/chroma
a r t i c l e
i n f o
Article history:
Received 11 February 2008
Received in revised form 7 April 2008
Accepted 17 April 2008
Available online 22 April 2008
Keywords:
Headspace analysis
Programmed temperature vaporizers
Water analysis
Trihalomethanes
a b s t r a c t
A new method based on the use of a headspace autosampler in combination with a GC equipped with
a programmable temperature vaporizer (PTV) and an MS detector has been developed for the screening and quantitative determination of trihalomethanes (THMs) in different aqueous matrices. The use
of headspace generation to introduce the sample has the advantage that no prior sample treatment is
required, thus minimizing the creation of analytical artifacts and the errors associated with this step of
the analytical process. The PTV inlet used was packed with Tenax-TA. The injection mode was solvent
vent, in which the analytes are retained in the hydrophobic insert packing by cold trapping, while the
water vapour is eliminated through the split line. This allows rapid injection of the sample in splitless
mode, very low detection limits being achieved without the critical problem of initial sample bandwidth.
The capillary column used allowed rapid separations with half-height widths ranging from 1.68 s (chloroform) to 0.66 s (bromoform). The GC run time was 7.3 min. The use of mass spectrometry allows the
identication and quantication of the analytes at the low ppt level. The S/N ratio was at least 10-fold
higher when the SIM mode was used in data acquisition as compared to the scan mode. The proposed
method is extremely sensitive, with detection limits ranging from 0.4 to 2.6 ppt.
2008 Elsevier B.V. All rights reserved.
1. Introduction
Water chlorination has been successfully used to disinfect drinking water since 1908 (USA) and it continues to be the most widely
used and cost-effective disinfection process [1]. Unfortunately,
chlorination leads to the formation of undesirable disinfection byproducts, such as trihalomethanes (THMs) and haloacetic acids
(HAAs) [2,3].
THMs were rst identied as disinfection by-products (DBPs)
by Rook [4]. The compounds most frequently formed are
chloroform (CHCl3 ), bromodichloromethane (CHCl2 Br), dibromochloromethane (CHClBr2 ) and bromoform (CHBr3 ) [5,6].
Chloroform is the most common THM and indeed the main
DBP in chlorinated drinking water. In the presence of bromides,
brominated THMs are formed preferentially and chloroform concentrations decrease proportionally [7].
Corresponding author. Tel.: +34 923 294483; fax: +34 923 294483.
122
104
123
105
Fig. 2. Sequence of events for solvent vent injection and GC separation process.
124
106
Fig. 3. Extracted ion chromatograms for m/z 83, 127 and 173 when classical split-hot injection and solvent vent injection were used (10 ppb of each compound).
Fig. 4. Extracted ion chromatograms for m/z 83, 127 and 173 obtained when, under the optimum conditions for the solvent vent injection mode, scan and SIM acquisition
mode were used (2 ppb of each compound).
125
Scan mode
Cold
split
Hot
splitless
Cold
splitless
1.00
1.00
1.00
1.00
0.79
0.97
1.05
1.17
2.98
3.81
4.01
4.55
Widths at half-height
1.00
CHCl3
1.00
CHCl2 Br
1.00
CHClBr2
1.00
CHBr3
0.21
0.31
0.45
0.69
S/N
CHCl3
CHCl2 Br
CHClBr2
CHBr3
2.13
2.20
2.36
1.47
Area
CHCl3
CHCl2 Br
CHClBr2
CHBr3
Table 2
Optimised experimental conditions
Headspace sampler
SIM mode
Hot
split
Solvent
vent
Solvent
vent
3.22
4.07
4.40
4.64
5.55
7.06
7.16
8.09
7.77
9.88
11.5
14.6
1.05
1.38
0.94
0.94
0.34
0.53
0.55
0.77
0.32
0.47
0.50
0.77
0.38
0.56
0.60
0.92
1.39
1.76
4.18
3.44
4.22
3.41
6.99
3.76
8.50
8.34
13.4
11.5
Oven
Injection loop
Transfer line
Headspace generation
Interval between samples
Injection
Temperatures
Times
1.00
1.00
1.00
1.00
96.9
111
149
144
boiling point far below that of the analytes. In this case, chloroform and bromodichloromethane have lower boiling points
(61 and 90 C, respectively) while the boiling points of dibromochloromethane and bromoform are slightly higher than that of
water (117 and 149 C, respectively). This drawback can be minimized by choosing a suitable packing for the liner. In the present
study we chose a hydrophobic polymer Tenax-TA which retains
the analytes of interest but not the water.
A study of the variables involved in the process was made to
undertaken experimental conditions in which the analytical signal
would be maximum.
The initial temperature of the liner was studied for values of
5, 15, 25 and 35 C. Values below 5 C were not studied since the
time necessary for cooling the liner was excessively long. For all
the compounds studied, the analytical signal decreased as the
temperature rose, this effect being more marked in the case of
the more volatile analytes chloroform and bromodichloromethane.
With these results, an initial temperature of 5 C was chosen for the
injector.
The variables affecting the elimination of solvent are the time
during which the solvent is eliminated, called the purge time, and
the ow rate at which such purging is performed. The rst variable
was studied for values between 1.55 and 2.0 min. For all the compounds the analytical signal was almost constant for purge times
between 1.65 and 2.00 min. For lower values, the analytical signal
decreased slightly because it was not possible to achieve complete
elimination of the solvent. Accordingly, we chose a time of 1.65 min
as the optimum value for this variable. The purge ow did not affect
the analytical signal signicantly such that a ow rate of 50 mL/min
was selected; this allowed appropriate elimination of the solvent.
Finally, the injection time was studied. Thermal desorption of
the analytes was accomplished using the temperature ramp shown
in Fig. 1. In this, the liner passed from 5 to 250 C in 0.34 min. We
therefore studied injection times of 0.1, 0.6, 1.0 and 1.5 min. The
maximum signal was obtained for a value of 0.6 min. This time is
107
90 C
95 C
100 C
30 min
10.0 min
1.00 min
50.0 ml/min
1.65 min
0.6 min
20.0 mL/min
5 C (1.70 min)
12 C/s250 C (5.60 min)
45 C (3 min)
70 C/min to 175 C
45 C/min to 240 C (1 min)
Mass spectrometer
Dwell time
Group 1
Data acquisition
mode: SIM
30 ms
m/z (83, 85, 47)
3.004.50 min
m/z (127, 129, 131)
4.504.83 min
m/z (171, 173, 175)
4.837.30 min
Group 2
Group 3
Table 3
Analytical characteristics of the proposed method
Compound
Slope
Intercept
R2
RSD (%) (n = 3)
DL (ng L1 )
QL (ng L1 )
CHCl3
CHCl2 Br
CHClBr2
CHBr3
(1 2) 104
(0.5 1.6) 104
(2 7) 103
(6 7) 103
0.9990
0.9977
0.9983
0.9974
4.3
0.7
0.8
1.3
2.6
0.4
0.5
0.6
8.0
1.0
1.0
2.0
126
108
Fig. 5. Chromatogram in scan mode (a) and in SIM mode (b) of one of the tap water samples analysed in this work.
Table 4
Concentrations found in the water samples analysed
Water sample
CHCl3 (g/L)
CHBrCl2 (g/L)
CHBr2 Cl (g/L)
CHBr3 (g/L)
UHQ
Tap 1
Tap 2
Tap 3
Tap 4
Tap 5
Well 1
Well 2
Mineral 1
Mineral 2
<QL
2.5 0.2 (06)
2.4 0.2 (06)
2.5 0.2 (06)
1.8 0.2 (06)
6.1 0.2 (010)
0.26 0.02 (00.5)
<DL
<QL
<QL
<DL
0.11 0.01 (00.5)
0.10 0.01 (00.2)
0.11 0.01 (00.2)
0.08 0.01 (00.2)
0.46 0.02 (01)
0.038 0.006 (00.1)
<DL
<QL
0.008 0.006 (00.05)
<DL
<DL
<DL
<DL
<DL
<DL
0.016 0.007 (00.05)
<DL
<QL
<QL
127
3.3
S
10
S
where and S are the same as in the previous equation. The quantitation limits for the four compounds are summarized in Table 4.
3.3. Determination of trihalomethanes in different aqueous
matrices
To check the predictive capacity of the models, different aqueous matrices were analysed: ultrapure, mineral, tap, and well
water. The broad range of concentrations studied in the calibrations allows the portion of the calibration most suitable for the
determination of each compound to be selected. In this way, the
condence interval associated with the prediction is as low as
possible.
The possible presence of these compounds in the samples was
checked from the chromatograms corresponding to them and from
the mass spectra of the compounds for which retention times equal
to those of the analytes were obtained. Initially, the chromatogram
was recorded in scan mode (Fig. 5a), and the trihalomethanes
present in the water samples were identied from the three most
abundant m/z ratios for each of them by comparison with the spectra of the pure compounds, admitting a difference in abundances
of 20% as maximum; the usual level for this type of study. Then,
quantication was performed in SIM mode (Fig. 5b) under the same
conditions as those used to obtained the calibrations.
Table 4 shows the concentrations found for each of the trihalomethanes in the samples analysed. The condence interval is
expressed by the value of three replicates, with a condence level
of 95%. The range of concentrations of the overall calibrations used
for the prediction is shown in brackets.
In the ultrapure, mineral, and well water samples, some of the
compounds were quantied at concentrations below 2 ppb.
In the tap water samples, the chloroform concentration was
between 20 and 40 ppb, with the exception of tap sample 5,
with a concentration of 105 ppb (the sample was diluted 1:1
109
Consejera de Educacion
(Project SA057A05) for this research.
References
[1] T. Ivahnenko, J.S. Zogorski, Sources and occurrence of chloroform and other trihalomethanes in drinking-water supply wells in the United States, 19862001,
U.S Geological Survey Scientic Investigations Report, Virginia, 2006, p. 13.
128
110
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[33] A.A. Kampioti, E.G. Stephanou, J. Chromatogr. A 857 (1999) 217.
[34] R.A. Kelota, V.T. Virkki, M. Ojala, V. Komppa, T. Kotiaho, Talanta 44 (1997)
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[35] A. Serrano, M. Gallego, J. Chromatogr. A 1154 (2007) 26.
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[37] C.C. Chang, G.R. Her, J. Chromatogr. A 893 (2000) 169.
PUBLISEDARTICLE
PUBLISHEDARTICLE
IV2
131
a n a l y t i c a c h i m i c a a c t a 6 2 9 ( 2 0 0 8 ) 623
available at www.sciencedirect.com
Review
a r t i c l e
i n f o
a b s t r a c t
Article history:
This article reviews the most recent literature addressing the analytical methods applied for
with gas chromatography (GC) combined with a preconcentration step. The detectors most
11 September 2008
widely used in this type of analyses are mass spectrometers (MS) and electron capture
detectors (ECD).
Here, we review the analytical characteristics, the time required for analysis, and the simplicity of the optimised methods. The main difference between these methods lies in the
Keywords:
sample pretreatment step; therefore, special emphasis is placed on this aspect. The tech-
Review
niques covered are direct aqueous injection (DAI), liquidliquid extraction (LLE), headspace
Trihalomethanes
Gas chromatography
Water analysis
We also review the main chromatographic columns employed and consider novel aspects
of chromatographic analysis, such as the use of fast gas chromatography (FGC). Concerning
the detection step, besides the common techniques, the use of uncommon detectors such
as uorescence detector, pulsed discharge photoionization detector (PDPID), dry electrolytic
conductivity detector (DELCD), atomic emission detector (AED) and inductively coupled
plasma-mass spectrometry (ICP-MS) for this type of analysis is described.
2008 Elsevier B.V. All rights reserved.
Contents
1.
2.
Introduction. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
Sample preparation. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
2.1. Direct aqueous injection . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
2.2. Liquidliquid extraction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
2.3. Headspace techniques . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12
2.3.1. Static headspace . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
2.3.2. Headspace-solid-phase microextraction. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
Corresponding author. Tel.: +34 923 294483; fax: +34 923 294483.
E-mail address: jlpp@usal.es (J.L. Prez Pavn).
0003-2670/$ see front matter 2008 Elsevier B.V. All rights reserved.
doi:10.1016/j.aca.2008.09.042
132
a n a l y t i c a c h i m i c a a c t a 6 2 9 ( 2 0 0 8 ) 623
3.
4.
5.
1.
Introduction
Trihalomethanes (THMs) are a group of volatile organic compounds (VOCs) classied as disinfection by-products (DBPs).
They were rst identied by Rook [1] and are formed during
the chlorination of water, when chlorine reacts with naturally occurring organic matter: mainly humic and fulvic acids.
Their general formula is CHX3 , where X may be any halogen
or a combination of halogens. However, generally speaking
this term is used to refer only to those compounds containing either chlorine or bromide, because these are the
ones most commonly detected in chlorinated water (chloroform, bromodichloromethane, dibromochloromethane and
bromoform). Brominated trihalomethanes are formed when
hypochlorous acid oxidizes bromide ion present in water
to form hypobromous acid, which subsequently reacts with
organic materials to form these compounds. Iodinated THMs
have been identied in chlorinated drinking water; however,
they are not widely measured and are not regulated, even
though iodinated compounds may be more toxic than brominated and chlorinated compounds [2].
The chlorination of water was started in New Jersey (USA)
in 1908 and it continues to be the most widely used and
cost-effective disinfection process [3]. The main purpose of
chlorination is to prevent the spread of waterborne pathogens.
The rate and degree of THMs formation increase as a
function of the chlorine and humic acid concentration,
temperature, pH, and the bromide ion concentration. Chloroform is the most common THM and the main DBP in
chlorinated drinking water. In the presence of bromides,
brominated THMs are formed preferentially and chloroform concentrations decrease proportionally [4,5]. The
pattern of concentrations in chlorinated water is: chloroform > bromodichloromethane > dibromochloromethane >
bromoform.
Although the chlorination of drinking water provides
many advantages, THMs remain a human health concern.
The International Agency for Research on Cancer (IARC)
has classied chloroform and bromodichloromethane as
possible carcinogens for humans (Group 2B) based on limited evidence of carcinogenicity in humans but sufcient
evidence of carcinogenicity in experimental animals. Dibromochloromethane and bromoform belong to Group 3 (not
classiable as regards their carcinogenicity to humans), based
on inadequate carcinogenicity in humans and inadequate or
limited carcinogenicity in experimental animals [4,6,7].
In the case of THMs, approximately equal contributions
to total exposure come from four sources: the ingestion of
drinking water, inhalation of indoor air, inhalation and dermal exposure during showering or bathing, and the ingestion
of foods [4,8].
17
19
20
20
21
21
21
Cchloroform
1
GVchloroform
133
a n a l y t i c a c h i m i c a a c t a 6 2 9 ( 2 0 0 8 ) 623
80
WHO guideline
value (g L1 )
IARC
category
300
60
100
100
Group 2B
Group 2B
Group 3
Group 3
EPA: Environmental Protection Agency; WHO: World Health Organization; IARC: International Agency for Research on Cancer; and TTHMs: total
trihalomethanes.
concentrations in drinking water and for a better understanding of their formation and removal in distribution systems.
With such information it is possible to estimate human
exposure to THMs and optimise current drinking water treatment practices with a view to reducing the pollution by
DBPs in water, minimising health risks as much as possible.
The determination of THMs in water has mainly been
carried out with gas chromatography (GC) followed by electron capture detection (ECD) or mass spectrometry detection
(MSD). The concentrations of these compounds in natural and
drinking waters is in the order of ng L1 to g L1 , such that
as a general rule it is necessary to perform a preconcentration
step of the analytes to achieve a level that can be measured by
the analytical method chosen.
In the present work we report a review of the main analytical methods used in the determination of THMs in water and
evaluate their analytical characteristics. The main difference
between the different optimised methods is in the sample pretreatment step, such that special emphasis is placed on this
aspect.
2.
Sample preparation
Sample preparation is one of the most critical steps in environmental analysis. In this step, the compounds of interest
are separated from the matrix and are preconcentrated to
improve the selectivity, sensitivity, reliability, accuracy, and
reproducibility of the analysis [18]. Sometimes, in the case of
very dirty or highly complex samples this step also includes a
cleaning step to facilitate the analysis and prevent the deterioration of the chromatographic system and detector used.
Sample preparation is the most labour-intensive and timeconsuming step and is also the main source of error of the
analytical method.
In recent years new sample pretreatment techniques have
been developed. They are faster and more selective and at the
same time use lower amounts of solvents and reagents [1921].
The current trend in analytical chemistry is to take green
chemistry ideology into account and in this sense, solvent
minimised or solvent-free sample preparation methods
have been developed, such as microextraction, membrane
extraction and headspace techniques.
In this part of the review we shall examine the main
different sample preparation techniques employed for the
extraction of THMs from aqueous matrices.
2.1.
Direct aqueous injection (DAI) of water samples into a GC system is the most rapid and simplest rst step in the analysis
of an aqueous sample by means of gas chromatography. In
this technique, no isolation or preconcentration of the compounds is performed, such that the loss of volatile analytes
and the possibility of sample pollution during manipulation
are minimised. Moreover, it avoids the problems associated
with using solvents (which are toxic and expensive). The injection of water as solvent into a GC system is not usually desired,
because it commonly degrades the columns coatings. Therefore, in this technique capillary columns are generally covered
with a thick lm of an apolar liquid phase that makes the water
elute before the analytes. Generally, an on-column injector
is employed, such that the sample is introduced into the
chromatographic system with no prior vaporization. The disadvantage of this injection mode is the deterioration of the
initial segment of the column, due to the presence of nonvolatile organic compounds or inorganic salts in the aqueous
samples analysed. To reduce this problem to a minimum,
deactivated capillaries (pre-columns or guard columns) are
placed at the start of the column, such protection being readily
replaceable. Another important pitfall of DAI is that the sensitivity of the technique is limited to the volume of sample that
can be loaded onto the column.
DAI-GC-ECD coupling was described by Grob and Habich
[22], who applied the method for the determination of volatile
halocarbons in water samples [23]. Since then, many papers
have been published in which this method was used for the
determination of this type of compounds in water [2428] (see
Table 2). DAI-GC has also been coupled with an MS detector
[29,30]. In many of these applications, the cold on-column
injection strategy was used [24,26,28,30], in which the aqueous samples are condensed in the pre-column, achieving a
narrowing of the bandwidth and an increase in sensitivity.
The limits of detection (LOD) obtained for THMs in water samples when DAI is used without pre-column cooling range from
3 to 5 g L1 [27,29], and these values improve signicantly
when cold on-column injection is employed, limits of detection down to 0.01 g L1 being achieved.
2.2.
Liquidliquid extraction
2 L
2 m 0.32 mm
i.d.
phenyl-methyl
deactivated
6 m 0.53 mm
i.d.
DAI-GC-ECD
10 m 0.53 mm
i.d. deactivated
guard column
DAI-GCMS
Cold on column,
25 L
On column,
90 C, 0.2 L
Cold on column,
10 L
On column,
60 C, 1 L
<23 (50)
12b
4 (ns) chloroform
ns
nsb
31.3b
<22 (20)
<3 (15)
31b
6b
<3 (ns)
R.S.D. % (g L1 )a
25b
nsb
GC run
time (min)
0.07 chloroform
4.175.39
ns
35
0.30.4
0.04 chloroform
0.01
LOD (g L1 )
DAI-GCMS
DAI-GC-ECD
4 m 0.53 mm
i.d. uncoated
silica
2 m 0.32 mm
i.d. fused silica
DAI-GC-ECD
Cold on column,
4 L
Cold on column,
2 L
2 m 0.32 mm
i.d. fused silica
DAI-GC-ECD
DAI-GC-ECD
Injection
Pre-column
Instrumental
conguration
Table 2 Main publications addressing the determination of THMs in water samples using DAI
Rain waters
Drinking, swimming
pool and distillate
waters
Drinking, surface
and swimming pool
waters
River waters
Water samples
[30]
[29]
[28]
[27]
[26]
[25]
[24]
Ref.
134
IV2 Determination of THMs in water (review)
a n a l y t i c a c h i m i c a a c t a 6 2 9 ( 2 0 0 8 ) 623
2/18
30/21.5
1-Octanol
10/27
ns: non-specied.
LLE-GC-ICP-MS
Direct
SDME-GC-ECD
HS-SDME-GCECD
Direct HF-LPMEGC-ECD
DLLME-GC-ECD
0.5/31
3/4.67
1 L 1-octanol
LLE-GCMS
3/35.3
4/12
10/21
5/34.5
LLE-GCMS
6 g sodium sulfate
anhydrousb
6 g sodium sulfate
anhydrous
0.5 g sodium sulfate
anhydrous
ns/6
Sodium chloride 3 M
LLE-GC-ECD
4 mL n-pentane
2 L n-hexane
2 mL of glass-distilled n
hexane
2 mL methyl tert-butyl ether
LLE-GC-ECD
Salt addition
<8.6 (5)
<7 (50)
<11.3 (10)
<2.9 (3.41)
<7 (15)
<7.3 (15)
<26.4 (40)
<37.9 (1)
<10.1 (0.5)
<5 (1)
R.S.D. % (g L1 )a
0.0050.040
0.010.2
0.150.40
0.0030.006
0.230.45
0.060.07
0.020.2
0.010.03
0.0050.010
0.81.0
LOD (g L1 )
Water samples
[44]
[42]
[40]
[36]
[39]
[26]
[35]
[32]
[3133]
[27]
Ref.
10
LLE-GC-ECD
Volume of organic
solvent
Instrumental
conguration
Table 3 Determination of THMs in water samples using LLE and microextraction related techniques
a n a l y t i c a c h i m i c a a c t a 6 2 9 ( 2 0 0 8 ) 623
136
over the past few years. In contrast with classical LLE techniques, which use large amounts of solvent in order to deplete
the sample out of analytes, in LLE methods for THMs determination, the process is normally done with a much lower
solvent volume (ca. 0.52 mL). The sample volume used varies
between 5 and 100 mL in most cases.
Nikolaou et al. have recently performed several investigations [27,3133] in which this preconcentration technique
was used for the determination of THMs in water. In most
of those studies [3133] the authors used a modication of
EPA method 551.1 [34], which includes liquidliquid-extraction
(LLE) with MTBE, after the addition of anhydrous sodium sulfate. The sodium sulfate was added to increase the ionic
strength of the solution, enhancing the extraction of the
compounds by the salting-out effect. They compared the
LLE-GC-ECD, LLE-GCMS, purge and trap (P&T)-GCMS and
headspace (HS)-GCMS techniques [32]. Their studies revealed
that the LLE-GC-ECD method was the most sensitive one for
the determination of trihalomethanes. This method has been
applied to the determination of trihalomethanes in water
samples from Greece and Italy with a view to determining the
formation potential of DBPs during chlorination [33] and to
determine the presence of THMs in bottled water available on
the Greek market [31].
A similar LLE method was proposed by Culea et al. [35],
who studied the analytical characteristics of the LLE-GCMS
method.
Buszewski and Ligor used the LLE-GCMS instrumental
conguration. One mL of hexane was used to extract the compounds. The mixture was shaken for 30 s and nally a portion
of 2 L of the hexane layer was injected into the GC [26].
Gonzlez Gago et al. have recently developed a method in
which this technique is used for the extraction of compounds.
Four mL of n-pentane are added to 100 mL of water and the
mixture is shaken mechanically for 10 min. Finally, 1 L of the
organic extract is injected into a GC-ICP-MS system. With this
conguration it is possible to achieve detection limits ranging
between 3 and 6 ng L1 [36].
However, despite the advantages of being a simple and
versatile sample preparation technique, it tends to be very
time-consuming, although in the above cited optimised methods it was possible to reduce the extraction time considerably.
Sample manipulation is high, such that a loss of the compounds of interest may occur due to their high volatility.
Additionally, organic solvents which are highly polluting
are required, although their use in laboratories is dwindling
owing to the enactment of new, more stringent environmental
directives.
Recently, modications of the technique have appeared;
these allow the problem of the use of large amounts of organic
solvents to be circumvented. They have been termed solvent
microextraction (SME) or liquid-phase microextraction (LPME)
techniques.
One such technique involves the miniaturization of LLE
into a microdrop, and is known as single-drop microextraction (SDME). The aqueous sample is placed in a vial, which
is sealed hermetically and then perforated with a microsyringe at whose tip the microdrop of organic sample remains
suspended. Once analyte distribution equilibrium has been
attained between the organic solvent and the aqueous sample
11
137
a n a l y t i c a c h i m i c a a c t a 6 2 9 ( 2 0 0 8 ) 623
2.3.
Headspace techniques
Headspace techniques have been widely used in the determination of THMs and other volatiles in water samples. In
the static headspace mode, an aliquot of the gas phase from
the vial, in equilibrium with the sample, is introduced into
the carrier gas stream, which carries it to the column. From
this mode, also known as one-step HS, different modications
have been developed, based on the inclusion of adsorption
traps, whose aim is to separate the volatile analytes of interest from the rest of the compounds of the gas phase. Within
these, the most widely used is HS-SPME (solid-phase microextraction), in which a fused-silica bre covered with a polymeric
coating material is used. The bre is introduced into the
headspace of the vial containing the mixture. After equilibrium has been reached, the bre with the adsorbed volatiles
is introduced into the vaporization chamber of the injector of
the gas chromatograph and the analytes are transferred to the
chromatographic column by thermal desorption. Other modes
of static HS using a miniaturized extraction technique have
also been applied for the determination of THMs in water.
Zhao et al. optimised the HS-SDME technique (described in
Section 2.2) [40]. The HS-HF-LPME conguration was studied
Vora-adisak and Varanusupakul [42]. In that work, the authors
observed that direct immersion of the membrane in the aqueous sample afforded higher extraction.
In dynamic headspace (purge and trap), gas extraction is
carried out by continuously removing the gas phase. Thus,
the total amount of the volatile analytes is removed from the
sample.
The main advantage of headspace techniques is that they
allow the volatiles of the samples to be analysed without interference by the non-volatile matrix. In these systems, sample
138
a n a l y t i c a c h i m i c a a c t a 6 2 9 ( 2 0 0 8 ) 623
Injection mode
Extraction time
(min) + GC run
time (min)
R.S.D. % (g L1 )a
LOD (g L1 )
Water samples
Ref.
45 + 23b
40 + 35.30b
45 + 4.67
15 + ns
34 + 20b
30 + 7.30c
<39.1 (0.5)
<39.1 (0.5)
<31.4 (40)
ns
<19.6 (0.1)
<4.3 (1)
0.1
0.050.2
0.1
0.060.5
0.030.06
0.00040.0026
Tap waters
Tap, uhq, well
and mineral
waters
[27]
[32]
[35]
[45]
[46]
[53]
HS-GCMS
Split (1:25)
Split (1:25)
ns
ns
Splitless
Solvent vent: injector
starting temperature
5 C. Cooling was
accomplished with
liquid CO2
ns
10 + 16b ,c
<4.5 (10)
0.50.7
[54,55]
HS-MS
Split 1:20
10 + 2.5c
<4.2 (10)
11.2
River, swimming
pool and tap
waters
Mineral, lake,
river, swimming
poll, tap and well
waters
HS-GCMS
HS-GCMS
HS-GCMS
HS-GC-ECD
HS-GC-ECD
HS-PTV-FGCMS
[54,55]
manipulation is minimum, such that errors are reduced. Additionally, these techniques do not require the use of organic
solvents and they can be coupled on-line with the chromatographic systems, allowing the complete analysis of a sample
to be performed in a closed system. They are therefore reliable
automatic preparation techniques, with which high extraction
recoveries and high repeatabilities have been achieved.
2.3.1.
Static headspace
139
a n a l y t i c a c h i m i c a a c t a 6 2 9 ( 2 0 0 8 ) 623
R.S.D. %
(g L1 )a
LOD (g L1 )
Fibre
Extraction time
(min) + desorption time
(min) + GC run time (min)
HS-SPME-GC-ECD
HS-SPME-GC-ECD
HS-SPME-GCMS
DI-SPME-GCMS
HS-SPME-MS
85 m CAR/PDMS
85 m CAR/PDMS
PDMS/DVB
50/30 m DVB/CAR/PDMS
75 m CAR/PDMS
30 + 4 + 30
30 + 10 + 42b
20 + 5 + 14
15 + 2 + 14.9b
15 + ns + 22b
<6.2 (5)
<2.6 (ns)
<3.75 (9.6)
<3.9 (25)
<13.06 (1)
0.0050.01
0.00030.0014
0.000430.006
0.020.7
0.130.17
HS-SPME-MS
100 m PDMS
30 + 1 + 32.5b
<4.5 (0.1)
0.010.02
HS-SPME-ECD
HS-SPME-GCMS
100 m PDMS
100 m PDMS
38 + 2 + 25
20 + 2 + 17
<12 (0.5)
<4.6 (10)
0.00150.020
12.8
Drinking waters
Drinking waters
Drinking waters
Drinking waters
Drinking, surface
and industrial
efuent waters
River and tap
waters
Drinking waters
Drinking and
swimming pool
waters
[60]
[61]
[62]
[63]
[64]
[65]
[66]
[67]
2.3.2.
Headspace-solid-phase microextraction.
P&T-GCMS
P&T-GC-ECD
P&T-GCMS
P&T-GCMS
P&T-GCMS
P&T-GC-ECD
P&T-GC-AED
P&T-GC-ECD
P&T-GC-ECD
ns
Trap
P&T-GC-DELCD
Instrumental
conguration
Tube with
anhydrous
magnesium
perchlorate
Moisture control
module
Naon
drier
Elimination of
water vapour
<13.2 (1)
<30.35 (20)
<4.7 (25)
11 + 3 + 35.3b
20 + 3 + 4.67
11 + 1 + 14.9b
0.000070.007
<8.5 (1)
<4
(ns)
9 + 4 + 12.6b
4 + ns + 21b
0.050.18
<4.1
(50)
0.001
0.020.07
30 + 6 + 22
11 + 4 + 23.25
<6.36 (2)
0.0250.05
<19.3
(2)
11 + 4 + 51b
0.010.05
1
0.040.2
0.050.25
11 + 4 + 23b
<64.9
(10)
LOD (g L1 )
0.60.9
R.S.D.
%
(g L1 )a
<4 (15)
ns + ns + 28b
Purge time
(min) + desorption time
(min) + GC run time (min)
Sea
water
Tap
waters
Chlorinated sea
water samples
Drinking waters
Drinking, swimming
pool and distillate
waters
Water samples
[75]
[74]
[73]
[72]
[32]
[35]
[63]
[27]
[27]
[26]
Ref.
140
IV2 Determination of THMs in water (review)
a n a l y t i c a c h i m i c a a c t a 6 2 9 ( 2 0 0 8 ) 623
15
P&T-GCMS
Heating the
stainless-steel
tube near the
lter holder
<10.5 (4)
<10 (ns)
ns
10 + ns + 5.50b
120 + c + 39b
<2
(ns)
R.S.D.
%
(g L1 )a
0.5 + 0.6 + ns
15 + ns + 21b
Purge time
(min) + desorption time
(min) + GC run time (min)
0.0005
0.001
0.020.12
0.020.5
LOD (g L1 )
Drinking water
samples
Tap waters
Sea
water
Water samples
[83]
[77]
[76]
[75]
Ref.
CLSA-GC-ECD
Tube with
anhydrous
magnesium
perchlorate
Control of the
sample injection
temperature
Cryo bath with
ethylene glycol at
10 C
Elimination of
water vapour
16
P&T-GCMS
Trap
P&T-GCMS
Instrumental
conguration
Table 6 (Continued)
a n a l y t i c a c h i m i c a a c t a 6 2 9 ( 2 0 0 8 ) 623
142
2.3.3.
17
Programmed
temperature
vaporization
injection
Tenax-GR trap
Tenax-GR trap
Cryofocusing unit
(rst part of a
DB-5MS column)
cooled to 165 C by
a ow of liquid
nitrogen.
Naon tubing
By heating the
transfer lines
Naon tubing
By heating the
transfer lines
Elimination of
water vapour
Preconcentration
step
MIMS-FGCMS
GEC-GC-DELCD
CMS-GC-ECD
CMS-FIA
A silicone capillary
membrane wound
around a 5 in. length
metal body
A silicone capillary
membrane wound
around a 5 in. length
metal body
A silicone capillary
membrane wound
around a 5 in. length
metal body
A 94 cm length of
silicone rubber
membrane tubing
placed inside a
Tefzel tubing
A 120 cm length of
silicone rubber
membrane tubing
placed inside a
Tefzel tubing
A 5 cm length of
silicone capillary
membrane tubing
placed inside a cell
A 8 cm silicon hollow
bre membrane
Membrane
0.6
11
0.10.8
0.30.5
1.1
1.11.6
0.161.3
0.30.9
LOD (g L1 )
Drinking
water
Drinking
water
Water samples
<2.8 (1.7)
<8.6 (1.8)
2.1 (ns)
2030b
<16 (3.0)
<7 (6.7)
<5.3 (ns)
R.S.D. % (g L1 )a
13
8.5
GC run
time (min)
[93]
[88]
[87]
[86]
[85]
[85]
[84]
Ref.
18
SCMS-GCOVPDPID
SCMS-GCPDPID
SCMS-GC-ECD
Instrumental
conguration
a n a l y t i c a c h i m i c a a c t a 6 2 9 ( 2 0 0 8 ) 623
144
2.4.
19
a n a l y t i c a c h i m i c a a c t a 6 2 9 ( 2 0 0 8 ) 623
3.
145
Chromatographic separation
4.
Detectors
146
5.
Conclusions
21
organic solvents and are coupled on-line to the chromatographic system. Such techniques include the different modes
of headspace generation. The best levels of detection are
obtained with HS-SPME (0.31.4 ng L1 ). In the P&T mode,
an important increase in sensitivity is attained when cold
traps and the elimination of water vapour are implemented.
With static HS methods, poorer limits of detection have been
obtained. However, the inclusion of a programmed temperature vaporizer, in which the analytes are preconcentrated
while the water vapour is eliminated, affords limits of detection (0.42.6 ng L1 ) of the same order as those obtained with
HS-SPME, maintaining the simple static HS instrumentation.
Nowadays HS and P&T methodologies are among the preferred choices owing to their easy automation. However, other
techniques such as LLE may offer easy performance with a
much lower investment.
Within the same trend of on-line analysis, membrane
techniques have been used. The devices employed are
laboratory-made and allow the monitoring of THMs concentrations in real or near-real time. Again, the LODs improve
considerably when a cold trap is used before the sample is
introduced into the chromatograph.
Regarding chromatographic separation, of special interest
is fast gas chromatography, with which it is possible to achieve
the separation of the four THMs addressed here in an interval
of 0.65 min. Fast sampling preparation schemes need to be
developed to attain a real throughput gain.
In the detection stage, apart from the usual ECD and MS,
other detectors such as PDPID and DELCD have been used;
despite showing lower levels of sensitivity, they have advantages such as simplicity and portability. Also important is the
use of atomic emission-based detectors, whose application to
the analysis of VOCs is still not very well developed.
Acknowledgments
The authors acknowledge the nancial support of the DGI
(Project CTQ2007-63157/BQU) and the Consejera de Educacin
y Cultura of the Junta de Castilla y Len (Project SA112A08) for
this research.
references
147
a n a l y t i c a c h i m i c a a c t a 6 2 9 ( 2 0 0 8 ) 623
148
23
V
MTODOBASADOENELUSODEUN
INYECTORDETEMPERATURA
PROGRAMADAPARALA
DETERMINACINDETHMsYBTEX
ENSUELOS
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
151
________________________________________________________________________
1.INTRODUCCIN
Los compuestos orgnicos voltiles (Volatile Organic Compounds, VOCs)
estn ampliamente distribuidos en las diferentes matrices ambientales.
Entrelosmediosreceptoresdeestetipodecompuestos,elsueloesunade
las matrices ms sensibles y vulnerables. Adems, la contaminacin del
suelopuedetransferirsefcilmentealaatmsferaylasaguassubterrneas
[1].Demuchosdeestoscompuestosysusproductosdedegradacinsesabe
o se sospecha que son txicos y cancergenos, por lo que suponen un alto
riesgoparalasaludhumanaylosecosistemas.
Estos factores ponen de manifiesto la necesidad de instrumentos
normativosquegaranticenlaproteccindelossuelos,establezcansususos
potencialesyfijenlosnivelesdeconcentracinparacadaunodelosVOCs,
por encimade los cuales se considera queun suelo est contaminado. Por
tanto,esesencialeldesarrollodemtodosanalticoscapacesdedeterminar
concentraciones traza de VOCs en los suelos de forma rpida, sencilla y
fiable.
En general, este tipo de anlisis se ha llevado a cabo mediante la
extraccin de los VOCs del suelo y cuantificacin por cromatografa de
gases (GC) con detectores de espectrometra de masas (MS), ionizacin de
llama(FID)y,enelcasodecompuestoshalogenados,detectoresdecaptura
electrnica (ECD) [2]. La etapa ms crtica del mtodo completo es la que
implica la extraccin de los compuestos. Esto se debe a la diversidad y
complejidaddelasmuestrasyalabajaconcentracinyaltavolatilidadde
loscompuestos.Alolargodelosaossehapropuestounaampliavariedad
deprocesosdeextraccin[35].
Las tcnicas clsicas de extraccin con disolventes como la extraccin
Shoxlet [68] y la extraccin slidolquido [6,9] normalmente requieren
mucho tiempo, incluyen un nmero elevado de etapas y, a menudo,
requieren un manejo manual de los extractos. En los ltimos aos se han
152
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
desarrolladonuevastecnologasqueutilizanmenosdisolventesysonms
rpidas que los procedimientos clsicos. Algunos ejemplos son: extraccin
con fluidos supercrticos (SFE) [10] y extraccin con lquidos presurizados
(PLE) [7], que han sido especialmente aplicadas a la determinacin de
compuestos semivoltiles en suelos [1115], al igual que otras tcnicas
como la extraccin asistida con microondas (MAE) [16,17] o la extraccin
mediante ultrasonidos. La ventaja de estas tcnicas es que son poco
dependientesdelamatriz,yaqueconsiguenunaextraccinprcticamente
completadelosanalitos.Sinembargo,presentanungraninconveniente,ya
quenormalmentenecesitanunaetapaadicionaldelimpiezadelosextractos
obtenidosy,portanto,serealizanendiscontinuo[12].
Recientemente, una tcnica llamada extraccin con barra agitadora
(SBSE) se ha combinado con algunos de los mtodos de extraccin con
disolventes citados anteriormente, para la determinacin de compuestos
semivoltiles en suelos [1821]. Los compuestos se adsorben y
preconcentran en la barra agitadora y se analizan mediante desorcin
trmica acoplada a cromatografa de gases. La tcnica permite eliminar
tediosas etapas de limpieza y preconcentracin, tiene mayor capacidad de
anlisisdemuestrasenelmismotiempoyconsiguemejorarloslmitesde
deteccinalcanzados.
En el anlisis de VOCs en suelos se han utilizado mayoritariamente
tcnicasbasadasenlageneracindeespaciodecabeza.Espaciodecabeza
esttico(SHS)[22]ypurgaytrampa(P&T)[23]son,juntoconladestilacin
a vaco [24], las tcnicas propuestas por la Agencia de Proteccin
MedioambientaldeEstadosUnidos(USEPA)paraestetipodeanlisis[25].
SehanpublicadonumerososartculosutilizandoSHS[2630],P&T[3133]y
HSmicroextraccin en fase slida (SPME) [6,26,8,34]. Estas tcnicas
presentanlasventajasdequenoutilizandisolventes,lamanipulacindela
muestra es mnima y son fciles de automatizar en procesos en lnea. La
principal desventaja es que, generalmente, estn ms influenciadas por la
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
153
________________________________________________________________________
(THMs:
cloroformo,
bromodiclorometano,
(Grupo
1).
Etilbenceno
[41],
cloroformo
[42]
humanos
(Grupo
2B)
mientras
que
tolueno,
xilenos,
154
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
155
________________________________________________________________________
2.OBJETIVOS
Elobjetivoprincipaldeestetrabajoeseldeconfirmarlasposibilidades
delametodologabasadaenelacoplamientodeungeneradordeespaciode
cabeza con un cromatgrafo de gases, equipado con un inyector de
temperatura programada, y un espectrmetro de masas para la
determinacindecompuestosorgnicosenmuestrasdesuelos.
Para ello, se desarrollar un mtodo en el que esta estrategia
metodolgica se aplica, por primera vez, a muestras de suelos y se han
seleccionadolosTHMsylosBTEXcomocompuestosobjetodeestudio.
Basndonosenlasconclusionesobtenidasenelestudiodetalladodelos
modos de inyeccin que permite el PTV, que se realiz en el captulo
anterior,elmododeinyeccinseleccionadoessolventvent.EllinerdelPTV
estempaquetadoconTenaxTAyelhornodelcromatgrafodegasesse
hamodificado,instalandounsistemamodulardecalentamientoacelerado
decolumna(MACHTM)conelqueselogranvelocidadesdecalentamientoy
enfriamientodelacolumnamuyaltas.
En el desarrollo de trabajo se estudiaran las variables que afectan al
proceso de extraccin y la posible existencia de efecto de matriz. En las
condiciones experimentales ptimas se determinarn las caractersticas
analticasdelmtodoyserealizarunavalidacindelmismomediantela
determinacindeestoscompuestosenmaterialesdereferenciacertificados
(certifiedreferencematerials,CRMs).
156
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
3.PARTEEXPERIMENTAL
3.1.Reactivos
El metanol fue suministrado por Merck (Darmstadt, Alemania). Los
trihalometanos (cloroformo, bromodiclorometano, dibromoclorometano y
bromoformo) fueron suministrados por Supelco (Bellefonte, PA, USA).
Tolueno,etilbencenoymxilenoerandeAcrosOrganics(Geel,Blgica)yel
bencenofuesuministradoporSigmaAldrich(Sleinheim,Alemania).
3.2.Disolucionesestndarymuestras
3.2.1.Muestrasacuosas
Las condiciones analticas del mtodo se optimizaron preparando
disoluciones estndar de THMs y BTEX en agua. Para preparar las
disolucionespatrnseutilizunaguamineral(conelmenorcontenidode
algunodeestoscompuestos),yaqueenensayospreviosconaguadestilada
y agua ultrapura se detectaron concentraciones a nivel de traza de alguno
de los compuestos estudiados. Para realizar las medidas, las muestras se
introducen en viales de 10 mL sellados con cierres que poseen septum de
silicona.Losvialessecolocaronenlabandejadelmuestreadordeespaciode
cabezayseanalizaronenlascondicionesespecificadasenelapartado3.4.
3.2.2.Muestrasdesuelos
3.2.2.1.Suelosdopados
Para estudiar las caractersticas analticas del mtodo, determinar la
influenciadelaadicindeaguayNaClenlaeficaciadelaextraccindelos
compuestos y para explorar la presencia de efecto de matriz se utilizaron
matrices de suelos. Se seleccionaron ejemplos extremos de los diferentes
tipos de suelos presentes en la naturaleza: un suelo con un alto contenido
orgnico, recogido de un jardn pblico (Salamanca, Espaa), un suelo
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
157
________________________________________________________________________
3.2.2.2.Materialesdereferenciacertificados
Para validar el mtodo optimizado se analizaron tres materiales de
referencia(CRMs)concontenidoscertificadosdeloscompuestosdeinters.
Estos materiales certificados fueron: un suelo arenoso limoso (RTC
CRM633), un suelo arcilloso (RTCCRM635) y un suelo arcilloso limoso
(RTCCRM631). Todos ellos fueron suministrados por LGC Promochem
(Barcelona,Espaa).
158
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
3.3.InstrumentacinHSPTVGCMS
Laconfiguracininstrumentalutilizadaesladescritaenelapartado1de
la seccin III Configuraciones instrumentales utilizadas. Consta de cuatro
partesfundamentales,quesehanrepresentadoeneldiagramaesquemtico
delafigura1.
El muestreo mediante generacin de espacio de cabeza se llev a cabo
con el modelo A 7694 de Agilent Technologies (Waldbronn, Alemania). El
bucledenquelde3mLsemantuvoaunatemperaturade95Cylalnea
de transferencia, que conecta el generador de espacio de cabeza con el
inyector de temperatura programada, estaba calentada a 100 C. El gas
portadoreraHelioN50(99.995%depureza;AirLiquide).Ellinerutilizado
en el inyector PTV (CIS4; Gerstel, Baltimore, MD, USA) estaba
empaquetadoconTenaxTA.
El equipo de cromatografa de gases utilizado fue un Agilent 6890
equipado con un sistema modular de calentamiento de columna
(MACHTM).LacolumnacromatogrficautilizadafueunaDBVRX(20mx
0.18 mm x 1 m) de Agilent J&W, montada sobre una carcasa protectora.
Este mdulo permite calentar y enfriar muy rpidamente la columna,
acortandosignificativamenteeltiempototaldeanlisis[57].
Ladeteccinserealizmedianteespectrometrademasas,utilizandoun
detectordetipocuadrupolo(HP5973)quedisponedeunafuenteinertede
ionizacinporimpactoelectrnicoa70eV.Latemperaturadelafuentede
ionizacinfuede230Cyseseleccionunatemperaturadelcuadrupolode
150C.LasmedidasserealizarontantoenmodoscancomoenmodoSIM.
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
159
________________________________________________________________________
Helio
Vlvula de purga
CO2
Sistema de
enfriamiento
Sistema de
calentamiento
Columna
cromatogrfica
Carcasa con
ventiladores
liner
Cable de calentamiento
MACHTM
PTV
HS
cuadrupolo
MS
Figura1:Representacinesquemticadelequipoutilizado
3.4.ProcedimientoHSPTVGCMS
3.4.1.Muestreodeespaciodecabeza
Paraelanlisis,lasmuestrasdeagua(alcuotasde5mL)olasmuestras
de suelo (1 g de muestra pesado de forma precisa y 5 mL de agua) se
depositaron en viales de vidrio de 10 mL. Estos viales se sellaron con
taponesconseptumdesiliconaysesometieronalprocesodegeneracinde
espacio de cabeza durante 30 minutos a una temperatura de 90 C.
Transcurrido este tiempo y, despus de la correspondiente presurizacin
delvial,llenadoyequilibradodelbucle,lamuestraseinyectenelsistema
duranteunminuto.
3.4.2.Inyeccinatemperaturaprogramada
El modo de inyeccin utilizado en todos los casos fue solvent vent. La
etapa de enfriamiento se llev a cabo con CO2 lquido. En la figura 2 se
muestran
esquemticamente
las
condiciones
experimentales.
La
temperaturainicialdelinyectorfuede15C.Seseleccionaronunflujoyuna
160
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
presindeventeode50.0mL/miny5.00psi,respectivamente.Despusde
untiempodepurgade1.70min,secierralavlvuladedivisinyellinerse
calientadeformarpidaa12C/shasta300C.Deestaforma,losanalitos
setransfierendesdeellineralacolumnacapilar(tiempodeinyeccin:0.55
min). Posteriormente, la vlvula de divisin se abre para limpiar las
posiblesimpurezasmanteniendolatemperaturadellinera300C.
Temperatura C
Split cerrado
Split abierto
Split abierto
100 C
100
Temperatura de la lnea de
transferencia del HS
300
Temperatura del
liner del PTV
12 C/s
15
300
240 C
250
200
100 C/min
150
Temperatura de la
columna cromatogrfica
100
50
0
Transferencia de
muestra PTV-GC
Transferencia del
espacio de cabeza
Tiempo (min)
Separacin cromatogrfica
Figura2:Representacinesquemticadelascondicionesexperimentales
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
161
________________________________________________________________________
3.4.3.Cromatografadegases
Elprogramadetemperaturasutilizadoenelhornodelcromatgrafoest
esquematizadoenlafigura2.Inicialmenteseprogramaunatemperaturade
50 C que se mantiene durante 3 minutos. El sistema modular de
calentamiento de columna permiti incrementar la temperatura a una
velocidadde100C/minhasta240C,temperaturaquesemantienedurante
1.0 min. Esta rampa de temperaturas no es posible con el horno
convencional del cromatgrafo de gases. En estas condiciones los
compuestos eluyen en menos de 5 min y el tiempo total de desarrollo
cromatogrficoesde6.10min.
3.4.4.Espectrometrademasas
Losanlisisrealizadosparalaoptimizacindelascondicionesanalticas
se llevaron a cabo registrando los cromatogramas de los compuestos en
modo scan. Para la prediccin de la concentracin de los compuestos
estudiados en muestras reales, se registraron los cromatogramas
correspondientesenelmododeseguimientodeionesseleccionados(SIM).
Enelmodoscanseregistraronlasrelacionesm/zentre25y270uma,yse
seleccion un valor umbral de abundancia de 0. La identificacin de los
diferentes compuestos se realiz por comparacin de los espectros
experimentales con los correspondientes a la base de datos NIST98
(NIST/EPA/NIH Mass Spectral Library, versin 1.6). En la figura 3 se
muestranlosespectrosdemasasdecadaunodeloscompuestosobjetode
estudio.
162
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
Abundancia relativa
Cloroformo
83
100
Cl
85
50
H
Cl
Cl
47
35
0
13
10
20
30
87
4145
40
50
58
60
118
70
70
80
90
100
110
122
120 130
m/z
Abundancia relativa
Bromodiclorometano
83
100
85
Cl
Br
H
50
Cl
47
13
10
79
35
20
30
40
50
60
70
80
129
87
91
161166
114
Abundancia relativa
Dibromoclorometano
129
100
127
Br
50
Br
Cl
131
48
0
79 91
13 26 31 44 50
10
30
50
70
90
208
160 173
108116
110
130
150
170
190
210
m/z
Abundancia relativa
Bromoformo
173
100
H
Br
Br
171 175
50
Br
91
252
79
0
160
13
10
30
50
70
90
110
130
150
170
190
210
230
250
270
m/z
Figura3:EspectrosdemasasdelosTHMs(NIST98)
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
163
________________________________________________________________________
Abundancia relativa
Benceno
78
100
50
77
51
10
39
38
40
26 28
15
15
20
25
30
35
40
49
45
50
74 76 79
63
61
53
55
60
65
70
75
80
85
90
m/z
Abundancia relativa
Tolueno
91
100
92
50
27
0
20
25
30
39
38 40
45
40
45
35
65
63
51
52 55 57
50
55
60
65
74 77
70
75
83 86
80
85
89 93
94
90 95
100
m/z
Abundancia relativa
Etilbenceno
91
100
50
106
27
15
0
10
20
30
39
38 41
40
51
65
63
50
60
77
74
70
80
92
86 89
90
100
110
120
m/z
Abundancia relativa
m-xileno
91
100
106
50
39
27
12 15
0
10
20
30
51
38 4144 48
40
50
77
65
92
103
97
84 89
74
56
60
70
80
90
100
110
120
m/z
Figura3cont.:EspectrosdemasasdelosBTEX(NIST98)
164
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
165
________________________________________________________________________
Tabla1:Condicionesexperimentalesoptimizadas
GENERADOR DE ESPACIO DE CABEZA
Temperaturas
Horno
90 C
Bucle
95 C
Lnea de Transferencia
100 C
30 min
Tiempos
9 min
0.30 min
0.15 min
0.02 min
Inyeccin
1.00 min
Modo de inyeccin:
Solvent vent
50.0 ml/min
Tiempo de purga
1.70 min
Tiempo de inyeccin
0.55 min
Flujo de limpieza
20.0 mL/min
T inicial
Inyeccin en fro
15 C (1.70 min)
Rampa
CROMATGRAFO DE GASES
Horno
T inicial
50 C (3 min)
Rampa 1
ESPECTRMETRO DE MASAS
Tiempo de permanencia: 30ms
Grupo 1: m/z (83, 85, 47,78,77,51)
3.5.Anlisisdedatos
La recogida de los datos cromatogrficos se realiz con el software
EnhancedChemStation,G1701CAVer.C00.00deAgilentTechnologies.
166
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
4.RESULTADOSYDISCUSIN
4.1. Optimizacin de las condiciones experimentales con
disolucionesacuosas
Paraoptimizarlascondicionesexperimentalesdelmtodo,seutilizuna
disolucin acuosa de los ocho compuestos con una concentracin de 100
g/Lparacadaunodeellos.
4.1.1.ParmetrosdelacoplamientoHSPTV
Losparmetroscorrespondientesalgeneradordeespaciodecabeza(ver
apartado 3.4.1.) se seleccionaron a partir de las conclusiones obtenidas en
trabajosanterioresrealizadospornuestrogrupodeinvestigacin,enlosque
seanalizanmuestrasdesuelos[28,53].
DelosmodosdeinyeccinpermitidosporelPTV,seseleccionelmodo
de inyeccin solvent vent, que combina la inyeccin en fro con la
vaporizacin controlada del disolvente. Con este modo de inyeccin se
consiguenmejoresnivelesdesensibilidad,conrespectoalosobtenidoscon
losmodosdeinyeccinconvencionales[5456],debidoalestrechamientoy
aumentodelreadelospicos,quedalugaraunincrementoenlarelacin
seal/ruido.
Las condiciones se eligieron de forma que los compuestos de inters se
retuvieran en el liner por atrapamiento fro, mientras el disolvente se
eliminabaatravsdelavlvuladedivisin.Paragarantizarlaretencinde
losanalitosenellinerdurantelaeliminacindeldisolvente,sehautilizado
un liner empaquetado con TenaxTA, un polmero poroso adecuado para
retener compuestos orgnicos pero no retener el agua. El uso de este
polmero permite utilizar satisfactoriamente este sistema de inyeccin
inclusoconanalitoscuyopuntodeebullicinesinferioraldelagua.Estees
el caso de tres de los compuestos objeto de estudio: cloroformo (61 C),
benceno(80C)ybromodiclorometano(90C)(Tabla2).
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
167
________________________________________________________________________
Lasvariablesinvolucradasenelprocesoson:latemperaturadeventeo,
elflujoyeltiempodepurga,eltiempodeinyeccinylatemperaturafinal
delinyector.
Latemperaturainicialdellinerseestudiparalosvaloresde5,10,15,20
y25C.Paralamayoradeloscompuestosseobtienenresultadossimilares
en el margen de temperaturas estudiadas, excepto para el cloroformo y el
benceno, los dos compuestos ms voltiles. Para stos, los mejores
resultados se obtienen con 5 C, sin embargo, se decidi seleccionar un
valorde15C,decompromisoentrelasealanalticaobtenidayeltiempo
necesario para enfriar y equilibrar el liner a dicha temperatura. A esta
temperaturalaprdidadelosanalitosmsvoltilesesinferioral10%.
Lasvariablesqueafectanalaeliminacindeldisolvente(flujoytiempo
depurga)yahansidooptimizadasparaungruposimilardecompuestosen
un trabajo previo [56], por lo que slo se estudiaron otras variables
relacionadas con el sistema de inyeccin; como la temperatura final del
inyectoryeltiempoduranteelqueserealizalainyeccindelamuestra.La
temperaturafinaldelinyectorseestudiparadosvalores:250Cy300C
(queeslatemperaturamximadetrabajorecomendadaparaelTenaxTA).
Las seales analticas se mantenan constantes para todos los compuestos,
excepto para el tolueno, etilbenceno y xileno, cuyas reas de pico
aumentabandelordende67%,21%y24%respectivamente,alutilizar300
C,porloquesedecidiutilizarestatemperatura.Eltiempodeinyeccinse
estudi para valores comprendidos entre 0.40 y 0.60 min. Tiempos
inferioresa0.55minnopermitenladesorcincompletadeloscompuestos
menosvoltiles,mientrasquetiemposmsaltosnosuponenunamejorade
laseal,porloqueseseleccionestevalorcomoptimo.
4.1.2.Parmetrosdecromatografadegasesrpida
Las condiciones experimentales del proceso cromatogrfico se
optimizaron con el criterio de conseguir una adecuada separacin de los
168
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
4.1.3.Condicionesdelespectrmetrodemasas
Losresultadosquesehandescritohastaahoraseobtuvieronapartirde
los cromatogramas de ion extrado, correspondientes a los cromatogramas
registrados en modo scan en un margen de relaciones m/z entre 25 y 270
uma. Para registrar los cromatogramas en modo SIM se establecieron los
tresgruposderelacionesm/zespecificadosenlaseccin3.4.4,deformaque
paracadacompuestoseregistraronsustresrelacionesm/zmsabundantes.
El tiempo de permanencia en el registro de cada ion se estudi para los
valoresde10,30y100ms,seleccionandounvalorde10msporserelque
dabalugarapicosmejordefinidos.
En la figura 4 se muestra el cromatograma obtenido en modo SIM,
cuandoseanalizaunadisolucinacuosaconunaconcentracinde100g/L
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
169
________________________________________________________________________
Tolueno
4
3
3.40
3.60
3.80
4.00
4.20
BMF
DBCM
CFM
BDCM
m-xileno
Etilbenceno
Benceno
Abundancia/106
4.40
Tiempo (min)
Figura4:Cromatogramadeunamuestradeagua(100g/Ldecadacompuesto)
analizadaconelmtodooptimizado
Enlatabla2semuestranlostiemposderetencin,lasanchurasdepicoa
mediaaltura,lospuntosdeebullicinylasrelacionesm/zcaractersticasde
los analitos estudiados. En cromatografa de gases rpida, los valores
habitualesparalasanchurasdepicoamediaaltura(W1/2)sondeentre0.2y
3 s y los tiempos de desarrollo del cromatograma varan entre 1 y 10
minutos [58], por lo quela separacin obtenidacon el mtodo optimizado
corresponde a una cromatografa rpida para todos los compuestos
estudiados.
170
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
Tabla2:Puntosdeebullicin,tiemposderetencin,anchurasdepicoamedia
alturayrelacionesm/zparalosochocompuestosestudiados.
P. de
ebullicin
(C)
tR
(min)
Anchura de
pico a media
altura*(s)
CFM
61
3.47
1.43
83
85, 47
BDCM
90
3.87
1.17
83
85, 47
DBCM
117
4.23
0.76
127
129, 131
BMF
149
4.52
0.53
173
171, 175
Benceno
80
3.73
1.31
78
77, 51
Tolueno
111
4.16
0.89
91
92, 65
Etilbenceno
136
4.46
0.58
91
106, 77
m-xileno
139
4.49
0.56
91
106, 77
Compuesto
m/z
Ion
Iones
cuantitativo
cualitativos
*Medidaparaelpicocorrespondientealiondecuantificacin
4.1.4.Tiempodeanlisis
La metodologa requiere 6.10 min para completar la rampa de
temperaturas. Adems, se necesitan unos 3 minutos ms para enfriar la
columnadesdelatemperaturafinal(240C)hastalascondicionesiniciales
(50 C). Este rpido enfriamiento se consigue gracias al uso del sistema
MACHTM, con el que se consigue una reduccin considerable del tiempo
totalencomparacinconunhornoconvencionaldecromatografadegases.
EltiempodefuncionamientodelPTVseprogramdeformaqueestuviese
preparado a la temperatura inicial seleccionada en el momento de la
siguienteinyeccin.
El horno de posiciones mltiples del HS permite equilibrar 6 viales
simultneamente, por lo que una vez transcurridos los primeros 30 min,
necesarios para la generacin de espacio de cabeza del primer vial, es
posibleanalizarunamuestracada9min,esdecirprcticamente7muestras
porhora.
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
171
________________________________________________________________________
4.2.Anlisisdemuestrasdesuelos
4.2.1.Adicindeaguayclorurosdico
La adicin de modificadores a las muestras de suelos para mejorar la
eficacia de extraccin ha sido utilizada ampliamente con las diferentes
modalidadesdegeneracindeespaciodecabeza.Elagua[26,3335,38,39]
ylaadicindedisolucionesacuosassaturadasdesal(efectosaltingout)[26,
29,31,36,39]hansidolasopcionesmsempleadas.LaUSEPAenelmtodo
5021, en el que se utiliza espacio de cabeza esttico, propone ambas
posibilidades[22]mientrasqueenelmtodo5035,conlatcnicadepurgay
trampa,proponelaadicindeagua[23].
Enestetrabajo,seestudielefectodelaadicindeaguaultrapura,as
como de disoluciones saturadas de NaCl sobre las muestras de suelo. La
disolucindeNaClsepreparsegnespecificalaUSEPA.Sobre500mLde
aguaultrapura,seaadicidofosfricoconcentradohastaalcanzarpH=2.
Posteriormenteseaadieron180gdeNaClyseagitlamezcla,hastalograr
quelamayorpartedesalsedisolviera.
Se utilizaron dos matrices diferentes de suelo un suelo de jardn y un
vertisol dopados con una concentracin de 40 g/kg para los ocho
compuestos. Sobre 1g de suelo dopado se aadieron volmenes crecientes
(1mL,3mL,5mLy6mL)deaguaydisolucindeNaClrespectivamente.
Cadaunodelosnivelesseanalizportriplicado.Lahumedadesunfactor
quepuedeafectarconsiderablementealprocesodeextraccindeVOCsyes
muy variable en las muestras de suelos reales, por ello se seleccion el
mnimo volumen aadido (1 mL) de manera que la muestra de suelo
estuviera completamente impregnada con el agua. De este modo, con la
adicin delmodificadorse consigue,adems de favorecer la extraccin de
los analitos, homogeneizar la humedad de las muestras por exceso. Para
cadauno de los modificadores, y en los dos tipos de suelosanalizados, se
observ que las seales analticas de los compuestos de inters no eran
172
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
significativamentedistintasparaloscuatrovolmenesestudiados.Debidoa
esto, se decidi seleccionar un volumen de 5 mL y as conservar la
proporcin(gdemuestra/mLdemodificador)recomendadaporelmtodo
USEPA5021.
Secompararonlassealesanalticasobtenidasalaadir5mLdeaguay
5 mL de la disolucin saturada de NaCl sobre los dos tipos de suelos
estudiados. En ambos casos se observ que las seales obtenidas para los
BTEXeransignificativamentemayorescuandoseutilizabaagua.Lasfiguras
5y6muestranlosresultadosobtenidos.Sehanrepresentadolasrespuestas
relativas(normalizadasalasealmsaltaparacadacompuesto).
100
80
60
m-xileno
Etilbenceno
Tolueno
Benceno
5 mL de agua
BMF
20
DBCM
5 mL de NaCl
BDCM
40
CFM
Abundancia Relativa %
Suelo de jardn
Figura5:EfectodelaadicindeaguaydeunadisolucindeNaClsobrelaseal
analticaenunamuestradesuelodejardndopadacon40ppbdecadacompuesto
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
173
________________________________________________________________________
100
80
60
m-xyleno
Etilbenceno
Tolueno
Benceno
5 mL de agua
BMF
20
DBCM
5 mL de NaCl
BDCM
40
CFM
Abundancia Relativa %
Vertisol
Figura6:EfectodelaadicindeaguaydeunadisolucindeNaClsobrelaseal
analticaenunamuestradeVertisoldopadacon40ppbdecadacompuesto
174
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
100
80
m-xileno
Etilbenceno
5 mL de agua
Tolueno
20
Benceno
5 mL de NaCl
DBCM
Sin modificador
40
BDCM
60
CFM
Abundancia Relativa %
CRM 633
Figura7:EfectodelaadicindeaguaydeunadisolucindeNaClsobrelaseal
analticaenunmaterialdereferenciacertificado(CRM633)
dopadocon50ppbdecadacompuesto
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
175
________________________________________________________________________
los analitos. Los analitos pasaran del suelo al agua por un proceso de
solvatacin, y despus migraran al espacio de cabeza. La adicin de sal
podrasermenosfavorablequeelagua,paraalgunoscompuestos,debidoa
que la alta concentracin de iones en disolucin puede dar lugar a una
menor solvatacin de las molculas de analito y por tanto menor tasa de
desorcindeloscompuestosdelsuelo.
4.2.2.Efectodematriz
Lasmuestrasdesuelosonmatricesmuycomplejasydiversas,enlasque
esdifcillograrunaextraccincompletadeloscompuestos.Debidoaesto,
es muy frecuente la presencia del efecto de matriz con muchas de las
tcnicas analticas empleadas para la determinacin de VOCs en estas
matrices.
Enestetrabajoseharealizadounestudio,utilizandotrestiposdesuelos
diferentesparaexplorarlaexistenciaonodeunposibleefectodematriz.En
lanaturalezaexisteunagranvariedaddesuelosdiferentes,sinembargo,su
capacidaddeadsorcinestfuertementedeterminadaporsucontenidoen
tresmateriales:arena,arcillaymateriaorgnica.Lostressuelosanalizados
en el trabajo: arena comercial, un Vertisol (suelo con un alto contenido en
arcilla)yunsuelodejardn(caracterizadoporsualtaproporcindemateria
orgnica)sonejemplosrepresentativosdelosposiblestiposdesuelos.
Las tres muestras de suelos diferentes se doparon a cuatro niveles de
concentracin(0,50,100y200g/kg)paralosochocompuestosestudiados.
El procedimiento de contaminacin de los suelos es el descrito en el
apartado 3.2.1.1. Cada nivel se analiz por triplicado y se compararon las
pendientesdelasrectasdecalibracinobtenidas(Tablas3y4).
176
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
Tabla3:PendientesdelasrectasdecalibracindelosTHMs
Arena
CFM
BDCM
DBCM
(531)102
(903)102
(501)102
BMF
(2978)10
2
Suelo de jardn
(451)10
(43.60.5)10
(45.40.5)10
(2745)10
Vertisol
(371)102
(392)102
(42.60.5)102
(2545)10
Tabla4:PendientesdelasrectasdecalibracindelosBTEX
Benceno
Tolueno
Etilbenceno
Xileno
Arena
(2057)102
(431)103
(642)103
(501)103
Suelo de jardn
(1887)102
(36.50.1)103
(43.40.9)103
(33.20.7)103
(24.90.4)103
Vertisol
(1636)10
(291)10
(33.90.5)10
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
177
________________________________________________________________________
4.2.3.Caractersticasanalticasdelmtodo
Unavezoptimizadaslascondicionesexperimentalesdecadaunodelos
mdulos que componen la configuracin instrumental, y seleccionado el
procedimiento preparacin de muestra, se procedi a estudiar las
caractersticasanalticasdelmtodo.
Este estudio se realiz utilizando muestras de arena comercial dopada,
ya que es el suelo que presenta el efecto de matriz menos acusado de los
estudiados (ver apartado 4.2.2 de esta seccin). Esta misma estrategia ha
sido utilizada en algunos de los estudios consultados, como en el mtodo
5021delaUSEPAyeneltrabajopublicadoporA.Serranoycolaboradores
[29].Lascaractersticasanalticasdelmtodoenmuestrasdearenadopada
semuestranenlatabla5.
Tabla5:Caractersticasanalticasdelmtodoenmuestrasdearenadopada
Pendiente
Ordenada en el
origen
R2
RSD
(%)*
LD
(ng/kg)
LQ
(ng/kg)
(531)102
(-12)104
0.9954
13
45.6
135
0.9786
29.7
90
Compuestos
CFM
BDCM
(903)10
(13)10
DBCM
(501)10
(-52)10
0.9955
10
4.7
14
BMF
(2978)10
(-31)104
0.9945
10
4.4
13
Benceno
Tolueno
m-xileno
(2057)10
(-0.71)10
0.9895
13
44.9
136
0.9937
11
120.8
366
0.9964
8.8
27
0.9960
10
38.4
116
(431)10
Etilbenceno
(642)10
(501)10
(-22)10
(-23)10
(-32)10
*Calculadaparaunamuestradearenacon50g/kgdecadacompuestoyn=3
LD=
3.3
178
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
dondeesladesviacinestndar(nmeroderplicas,n=10)deunpico
correspondiente a una relacin seal/ruido de aproximadamente 3; S es la
pendiente de la curva de calibrado y 3.3 es el valor del parmetro t de
Student(paran1,0.99).
La metodologa propuesta permite obtener lmites de deteccin (5121
ng/kg)similareseinclusoinferioresalosobtenidoscuandoseutilizanotras
metodologasdescritasenbibliografa.LaUSEPAhaestimadoloslmitesde
deteccin obtenidos para los analitos de inters con el mtodo 5021, que
utilizalaconfiguracininstrumentalHSGCMS,obteniendovaloresde210
a 470 ng/kg [22]. Otros autores han calculado los lmites de deteccin
alcanzados con diferentes mtodos propuestos para la determinacin de
BTEX (entre otros compuestos) en matrices de suelos. A. Serrano y
colaboradores estimaron lmites de deteccin entre 1200 y 2000 ng/kg,
utilizando la metodologa HSGCMS [29]. Con la configuracin HSSPME
GCMSsehanalcanzadolmitesdedeteccinde50230ng/kg[26]y70180
ng/kg[34].M.RosellycolaboradoreshanpropuestolametodologaP&T
GCMS,obteniendolmitesdedeteccinde3301630ng/kg[33].
Anlogamente, los lmites de cuantificacin (LQ) se calcularon con la
siguienteecuacin:
LQ =
10
dondeesladesviacinestndar(nmeroderplicas,n=10)desealde
unpicocorrespondienteaunarelacinseal/ruidodeaproximadamente3y
Seslapendientedelacurvadecalibrado.Losresultadosparaloslmitesde
cuantificacinseresumenenlatabla5.
Adems, en la tabla 5 se muestra la reproducibilidad del mtodo
optimizado, obtenida al analizar tres muestras de arena dopada con una
concentracinde50g/kg.Entodosloscasoslosvaloresobtenidosfueron
inferioresoigualesal13%.
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
179
________________________________________________________________________
180
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
Abundancia/105
cromatogramaenmodoSIM(Figura8b).
28
(a)
24
20
16
12
8
4
3.20
3.40
3.60
3.80
4.00
4.20
4.40
4.60
4.80
5.00
5.20
5.40
Tiempo (min)
28
(b)
m-xileno
Abundancia/105
24
20
Etilbenceno
16
3.20
3.40
3.60
3.80
4.00
Tolueno
DBCM
CFM
Benceno
BDCM
12
4.20
4.40
4.60
4.80
5.00
5.20
5.40
Tiempo (min)
Figura8:Cromatogramaenmodoscan(8a)yenmodoSIM(8b)delmaterialde
referenciacertificado(CRM633)
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
181
________________________________________________________________________
0-190
0-190
0-260
0-150
0-86
0-260
0-260
0-412
0-125
0-150
0-150
0-125
0-150
0-150
0-248
0-188
0-250
0-250
0-250
0-250
0-65
0-90
0-450
Compuesto
Cloroformo
BDCM
DBCM
Bromoformo
Benceno
Tolueno
Etilbenceno
m+p xileno
Cloroformo
BDCM
DBCM
Bromoformo
Benceno
Tolueno
Etilbenceno
m+p xileno
Cloroformo
BDCM
DBCM
Bromoformo
Benceno
Tolueno
Etilbenceno
(584)104
(385)104
(172)104
(728)104
(575)105
(798)105
(959)105
(525)102
(513)102
(293)102
(262)102
(151)103
(403)103
(506)103
(335)103
(443)104
(222)104
(958)103
(167)104
(311)105
(673)105
(422)105
(463)102
(243)102
(101)102
(2049)102
(402)103
(563)103
(462)103
(726)104
(998)104
(405)104
(222)105
(1147)104
(282)105
(1169)105
(484)102
(705)102
(403)102
(192)103
(372)103
(553)103
(353)103
CRM 633
(238)104
(331)102
CRM 631
(615)104
Pendiente
CRM 635
Ordenada
en el
origen
0.9856
0.9909
0.9936
0.9842
0.9839
0.9852
0.9900
0.9922
0.9939
0.9918
0.9948
0.9568
0.9694
0.9881
0.9869
0.9511
0.9719
0.988
0.988
0.9889
0.9714
0.9884
0.9801
R2
33251
526
313
11720
9718
14119
15023
918
12010
786
806
9317
9320
9611
714
28060
16030
14020
468
7010
13030
11010
12020
Valor predicho
(g/kg)
228
40.6
24.5
96.4
95.0
104
125
94.5
124
77.5
72.0
64.1
84.2
74.9
60.4
206
133
129
42.9
74.5
131
90.6
98.7
Valor de
referencia
(g/kg)*
109-347
20.3-60.8
10.8-38.2
47.2-146
43.2-147
46.2-162
65.2-184
38.4-151
59.3-188
37.1-118
35.6-108
0-131
2.37-166
45.9-135
14.0-136
126-286
76.0-190
66.9-192
24.2-61.7
27.5-122
63.8-198
45.9-135
46.0-151
Intervalo de
prediccin
(g/kg)*
*Valoresdereferenciaeintervalosdeprediccinproporcionadosenloscertificadosdeanlisisdelossueloscertificados
Intervalo de
adicin estndar
(g/kg)
Tabla6:Determinacindeloscompuestosobjetodeestudioentresmaterialesdereferenciacertificados
182
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
________________________________________________________________________
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
183
________________________________________________________________________
5.CONCLUSIONES
Se ha desarrollado un mtodo simple y muy sensible para la
determinacin de compuestos orgnicos voltiles en suelos. La
configuracininstrumentalestbasadaenelacoplamientodeungenerador
de espacio de cabeza, inyeccin en modo solvent vent y cromatografa de
gasesrpidacondeteccinmedianteespectrometrademasas.
Sehademostradoque,paralosBTEX,laadicindeaguasobrelossuelos
consigue mayores rendimientos de extraccin que la adicin de
disolucionessaturadasenNaCl.
La introduccin de la muestra mediante un generador de espacio de
cabezapresentalaventajadequenoserequiereuntratamientopreviodela
misma,reduciendoasloserroresexperimentalesasociadosaestaetapadel
procesoanaltico.Lacromatografadegasesrpidapermiteunaseparacin
de los ocho compuestos en menos de 4.60 min y el MACHTM puede
calentarse y enfriarse de forma muy rpida, consiguiendo un tiempo total
deanlisismuycorto(9min).Elatrapamientocriognicodeloscompuestos
en el PTV (en el modo de inyeccin solvent vent), junto con la deteccin
mediante espectrometra de masas en modo SIM, dan lugar a un mtodo
altamentesensibleconlmitesdedeteccindelordendeng/kgenmuestras
dearena.
El mtodo se ha aplicado en tres suelos de referencia con contenidos
certificados para los compuestos estudiados, obteniendo resultados
satisfactorios. Los suelos seleccionados poseen diferentes porcentajes de
arena, arcilla y materia orgnica, por lo que los resultados obtenidos se
puedenconsiderarextrapolablesalamayorpartedelossuelospresentesen
lanaturaleza.Entodosloscasoslaconcentracinpredichaestabadentrodel
intervalo de prediccin especificado en el material certificado. Por tanto,
puede concluirse que el mtodo optimizado es rpido, fiable, preciso y
altamentesensible.
184
VDeterminacindeTHMsyBTEXensuelosmedianteHSPTVFGCMS
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PUBLISEDARTICLE
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PUBLISHEDARTICLE
191
Journal of Chromatography A
journal homepage: www.elsevier.com/locate/chroma
a r t i c l e
i n f o
Article history:
Received 16 February 2009
Received in revised form 16 June 2009
Accepted 18 June 2009
Available online 23 June 2009
Keywords:
Headspace analysis
Programmed temperature vaporizers
Soil matrices
Trihalomethanes
BTEX
a b s t r a c t
A methodology based on the coupling of a headspace autosampler with a GC and a MS detector operating
in SIM mode has been developed for the determination of volatile organic compounds (THMs and BTEX)
in soils. The GC device used is equipped with a programmable temperature vaporizer (PTV) packed with
Tenax-TA to introduce the samples (the injection mode used was solvent vent), and a modular accelerated column heater (MACHTM ) to control column temperature. The proposed measurement procedure
reduces the sample pretreatment step to a minimum. Combined use of solvent vent injection mode and
mass spectrometry detection allows a highly sensitive method to be proposed, with limits of detection
of the order of ng/kg for all the target compounds. Furthermore, the capillary column used allows rapid
separations of compounds in less than 4.60 min, affording a very short total analysis cycle time of 9 min.
2009 Elsevier B.V. All rights reserved.
1. Introduction
Volatile organic compounds (VOCs) are widespread in the different environmental matrices. The soil is one of the more sensitive
and vulnerable receptors for this type of compounds. Additionally,
pollution agents in the soil can be readily transferred to the atmosphere and underground waters [1]. Many such compounds and
their degradation products are either known or suspected of being
toxic and carcinogenic, such that they pose a severe risk to human
health and ecosystems.
These factors underscore the need for normative instruments
that will ensure the protection of soils, establish their use, and x
the concentration levels for each of the VOCs above which a soil
should be considered polluted. Accordingly, the development of
analytical methods able to determine trace concentrations of VOCs
in soils in a rapid, simple and reliable way is paramount.
This type of analysis has usually been performed by extraction
of VOCs from soil and quantication by gas chromatography (GC),
followed by mass spectrometry (MS), ame ionization detection
(FID) and, in the case of halogenated compounds, electron capture
detection (ECD) [2]. The most critical step in the method is compound extraction. This is due to the diversity and complexity of
the samples and to the low concentrations and high volatility of
192
6064
2. Experimental
2.1. Chemicals
The solvents used were purchased from the following sources:
methanol was from Merck (Darmstadt, Germany); trihalomethanes
193
6065
Table 1
Optimized experimental conditions.
Headspace sampler
90 C
95 C
100 C
Temperatures
Oven
Injection loop
Transfer line
Times
Headspace generation
30 min
Interval between samples 9 min
Injection
1.00 min
Oven
50.0 mL/min
5.00 psi
1.70 min
0.55 min
20.0 mL/min
15 C (1.70 min)
12 C/s to 300 C (3 min)
50 C (3 min)
100 C/min to 240 C (1 min)
GC run time: 6.10 min
Dwell time
Group 1
10 ms
m/z (83, 85, 47, 78, 77, 51)
2.504.00 min
m/z (91, 92, 65, 127, 129, 131)
4.004.30 min
m/z (91, 106, 77, 171, 173, 175)
4.306.10 min
Mass spectrometer
Data acquisition
mode: SIM
Group 2
Group 3
194
6066
Table 2
Formula, boiling points, retention times, widths at half height and m/z ratios selected for the 8 compounds studied.
Compounds
Formula
Boiling point ( C)
tR (min)
wh a (s)
Chloroform (CFM)
Bromodichloromethane (BDCM)
Dibromochloromethane (DBCM)
Bromoform (BMF)
Benzene
Toluene
Ethylbenzene
m-Xylene
CHCl3
CHCl2 Br
CHClBr2
CHBr3
C6 H6
C7 H8
C8 H10
C8 H10
61
90
117
149
80
111
136
139
3.47
3.87
4.23
4.52
3.73
4.16
4.46
4.49
1.43
1.17
0.76
0.53
1.31
0.89
0.58
0.56
m/z
Quantitation ion
Qualier ions
83
83
127
173
78
91
91
91
85, 47
85, 47
129, 131
171, 175
77, 51
92, 65
106, 77
106, 77
The optimized sequence of steps involved when solvent injection was used has been described in Section 2.4.2.
3.1.2.1. Fast GC parameters. The experimental conditions for the GC
column were selected to achieve baseline separation in the lowest possible time. The initial temperature of the chromatographic
column was studied for values ranging between 40 and 60 C.
As temperature increased the retention times of the compounds
decreased, although an overlapping of the chromatographic peaks
also occurred. In view of the results, an initial temperature of 50 C
was chosen and this was maintained along the rst 3 min of the
chromatographic analysis in order to achieve suitable resolution of
the compounds studied.
To accomplish compound separation by fast chromatography, a
temperature ramp from 50 to 240 C (at 100 C/min) was chosen.
This heating ramp allowed compound separation without compromising the chromatographic resolution. The nal temperature
selected 240 C (which was maintained for 1 min to prevent
possible problems due to the memory effect) was sufcient to
guarantee the elution of the compounds of interest and appropriate for the technical specications of the chromatographic column.
The ow of helium through the column was set at 1.5 mL/min.
3.1.2.2. MS conditions. The previous results were obtained from the
extracted ions corresponding to the chromatograms recorded in
scan mode for an m/z range between 25 and 270 amu. To record
the chromatograms in SIM mode, the three groups of m/z ratios
specied in Section 2.4.4 were established, each of which had the
three most abundant m/z ratios of each of the compounds. The dwell
time was studied for values of 10, 30 and 100 ms, nally choosing a
value of 10 ms because it afforded the best dened peaks.
Fig. 2 shows the chromatogram obtained on analyzing a water
sample with a concentration of 100 g/L of each of the compounds.
For each compound, the most abundant m/z ratio was extracted.
195
6067
The time necessary for the eight compounds to elute was 4.55 min.
The retention times, widths at half-height (wh ), boiling points, and
the characteristic and most abundant m/z ratios of the analytes
studied are shown in Table 2. In fast GC the usual value for peak
widths at half height is 0.23 s and the typical run times range
from 1 to 10 min [58], such that the separation achieved with the
optimized method corresponded to fast chromatography for all the
compounds.
Fig. 3. Effect on the analytical signal after the addition of water and NaCl solution
to the soil CRM-633.
Table 3
Slopes of the calibration curves for each compound in each type of soil.
Sand
Garden soil
Vertisol
Chloroform
Bromodichloromethane
Dibromochloromethane
Bromoform
Benzene
Toluene
Ethylbenzene
m-Xylene
(53 1)102
(45 1)102
(37 1)102
(90 3)102
(43.6 0.5)102
(39 2)102
(50 1)102
(45.4 0.5)102
(42.6 0.5)102
(297 8)10
(274 5)10
(254 5)10
(205 7)102
(188 7)102
(163 6)102
(43 1)103
(36.5 0.1)103
(29 1)103
(64 2)103
(43.4 0.9)103
(33.9 0.5)103
(50 1)103
(33.2 0.7)103
(24.9 0.4)103
196
6068
Table 4
Analytical characteristics of the method in fortied sand samples.
Compounds
Slope
Intercept
R2
RSD (%)a
DL (ng/kg)
QL (ng/kg)
Chloroform (CFM)
Bromodichloromethane (BDCM)
Dibromochloromethane (DBCM)
Bromoform (BMF)
Benzene
Toluene
Ethylbenzene
m-Xylene
(53 1)102
(90 3)102
(50 1)102
(297 8)10
(205 7)102
(43 1)103
(64 2)103
(50 1)103
(1 2)104
(1 3)104
(5 2)104
(3 1)104
(0.7 1)105
(2 2)105
(2 3)105
(3 2)105
0.9954
0.9786
0.9955
0.9945
0.9895
0.9937
0.9964
0.9960
13
9
10
10
13
11
9
10
46
30
5
5
45
121
9
39
135
90
14
13
136
366
27
116
matter. The three soils analyzed here a commercial sand, a Vertisol (soil with a high clay content) and a garden soil (characterized
by its high proportion of organic matter) are extreme examples
of the soil types.
The three types of soil chosen were spiked at different concentration levels (0, 50, 100 and 200 g/kg) for the eight compounds
studied. The procedure used to spike the soil was that reported in
Section 2.2.2.1. Each level was analyzed in triplicate and the slopes
of the regression curves obtained were compared. Table 3 shows
that for most of the compounds there were signicant differences
in the slopes for all three matrices, such that it may be concluded
that in the optimized method a matrix effect occurs in the determination of THMs and BETX in different types of soil. It may be
seen that the inuence of the matrix is different for the different
compounds analyzed, which hinders the use of a single internal
standard (IS). In this sense, the USEPA recommends that the use of
an internal standard can provide some indication of the degree of
the matrix effect. However, this effect can be difcult if not impossible to overcome. It would therefore be necessary to use isotopic
standards of each of the compounds.
Additionally, owing to the different characteristics of the soils
studied the results of this study could be extrapolated to the analysis of VOCs in most types of soil present in nature.
3.3
S
Table 5
Determination of the target compounds in the three certied reference materials.
Standard addition
interval (g/kg)
Slope
Intercept
R2
Predicted
value (g/kg)
CRM 635
Chloroform
BDCM
DBCM
Bromoform
Benzene
Toluene
Ethyllbenzene
m + p Xylene
0190
0190
0260
0150
086
0260
0260
0412
(52 5)102
(51 3)102
(29 3)102
(26 2)102
(15 1)103
(40 3)103
(50 6)103
(33 5)103
(61 5)104
(58 4)104
(38 5)104
(17 2)104
(72 8)104
(57 5)105
(79 8)105
(95 9)105
0.9801
0.9884
0.9714
0.9889
0.988
0.988
0.9719
0.9511
120
110
130
70
46
140
160
280
20
10
30
10
8
20
30
60
98.7
90.6
131
74.5
42.9
129
133
206
46.0151
45.9135
63.8198
27.5122
24.261.7
66.9192
76.0190
126286
CRM 631
Chloroform
BDCM
DBCM
Bromoform
Benzene
Toluene
Ethyllbenzene
m + p Xylene
0125
0150
0150
0125
0150
0150
0248
0188
(33 1)102
(46 3)102
(24 3)102
(10 1)102
(204 9)102
(40 2)103
(56 3)103
(46 2)103
(23 8)104
(44 3)104
(22 2)104
(95 8)103
(16 7)104
(31 1)105
(67 3)105
(42 2)105
0.9869
0.9881
0.9694
0.9568
0.9948
0.9918
0.9939
0.9922
71
96
93
93
80
78
120
91
4
11
20
17
6
6
10
8
60.4
74.9
84.2
64.1
72.0
77.5
124
94.5
14.0136
45.9135
2.37166
0131
35.6108
37.1118
59.3188
38.4151
CRM 633
Chloroform
BDCM
DBCM
Benzene
Toluene
Ethyllbenzene
m + p Xylene
0250
0250
0250
0250
065
090
0450
(48 4)102
(70 5)102
(40 3)102
(19 2)103
(37 2)103
(55 3)103
(35 3)103
(72 6)104
(99 8)104
(40 5)104
(22 2)105
(114 7)104
(28 2)105
(116 9)105
0.9900
0.9852
0.9839
0.9842
0.9936
0.9909
0.9856
150
141
97
117
31
52
332
23
19
18
20
3
6
51
125
104
95.0
96.4
24.5
40.6
228
65.2184
46.2162
43.2147
47.2146
10.838.2
20.360.8
109347
Compound
Reference values and prediction intervals provided in the Certicates of Analysis of the CRM soils.
Reference
value
(g/kg)a
Prediction
interval (g/kg)a
detection limits for the 5021 method that uses the instrumental
conguration HS-GCMS, obtaining values of 210470 ng/kg for the
analytes of interest [22]. Other authors have reported the detection
limits provided by different methods proposed for the determination of BTEX (among other compounds) in soil matrixes. A. Serrano
et al. estimated detection limits between 1200 and 2000 ng/kg,
by using the HS-GCMS methodology [29]. HSSPME-GCMS has
afforded detection limits of 50230 ng/kg [26] and 70180 ng/kg
[34]. Rosell et al. have proposed the P&T-GCMS methodology,
obtaining detection limit values of 3301630 ng/kg [33].
The quantitation limits (QLs) were estimated using the following
equation:
QL =
10
S
197
6069
Fig. 4. Chromatogram in scan mode (a) and SIM mode (b) of the CRM-633 soil.
198
6070
VI
PROPUESTADEUNAVERSIN
SIMPLIFICADADELAMETODOLOGA
QuEChERSPARALADETERMINACINDE
COMPUESTOSCLORADOSENSUELOS
VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
201
_______________________________________________________________________
1.INTRODUCCIN
Ladeterminacindecompuestosorgnicosvoltilesysemivoltilesen
matrices ambientales, como el aire, el agua, el suelo, o los sedimentos,
habitualmente requiere de una etapa de pretratamiento de la muestra,
previaalprocedimientodedeterminacinfinal,elcualgeneralmenteseha
llevadoacabomediantecromatografadegases.Laetapadepretratamiento
implicalaseparacindeloscompuestosdeintersdelamatrizenlaquese
encuentranysutransferenciaaotromedio.Enesteproceso,idealmente,se
consigue la eliminacin simultnea de sustancias interferentes y el
enriquecimientoselectivodelosanalitosdeintershastaunaconcentracin
superiorallmitededeteccindelprocedimientodemedida[1].
La seleccin del mtodo de pretratamiento empleado depende
fuertemente de la complejidad de la matriz. El agua, generalmente,
representa una matriz menos complicada que el aire, o las muestras de
sedimentos y suelos. Otro factor a tener en cuenta es el mtodo de
determinacin al que se va a someter la muestra. Cuanto ms selectivo y
especfico es el mtodo de deteccin empleado, menos etapas sern
necesarias en el procedimiento de tratamiento de la muestra [2]. Las
estrategias analticas ms modernas tienden, en la medida de lo posible,
hacialaautomatizacineintegracindelprocedimientodepretratamiento
delamuestraenelpropiosistemacromatogrfico[3].
Eldesarrollodetcnicasdepretratamientodelamuestraquenoutilizan
disolventesorgnicos,oqueminimizanelusodelosmismos,constituyeel
pilar de la qumica analtica verde [4], que ha experimentado un rpido
desarrollodurantelosltimosaos.Lasprincipalesventajasdeestetipode
tcnicassedebenaaspectostoxicolgicos,medioambientalesyeconmicos.
Se han desarrollado un gran nmero de tcnicas que cumplen estas
caractersticas [5,6], tales como: microextracin en una gota (SDME),
microextraccinenfaseslida(SPME)oextraccinporadsorcinenbarra
202 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
________________________________________________________________________
VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
203
_______________________________________________________________________
204 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
________________________________________________________________________
2.OBJETIVOS
Elobjetivoprincipaldeestetrabajoeseldeestudiarlasposibilidadesde
la aplicacin del mtodo QuEChERS para la extraccin de VOCs de
muestras de suelos. Para este fin, se desarrollar una nueva versin
simplificada del mtodo QuEChERS para la extraccin de compuestos
cloradosenmuestrasdesuelos.
Parasolucionarlaprincipaldesventajacomnmenteasociadaalmtodo
QuEChERS,debajapreconcentracindeloscompuestosenlosextractos,se
propone el anlisis de los extractos mediante cromatografa de gases,
utilizando un microdetector de captura electrnica (ECD), que
proporciona mayor selectividad y sensibilidad que los detectores
convencionales.
La principal ventaja de la versin de QuEChERS propuesta en este
trabajo se debe a la eliminacin de la etapa de limpieza (dSPE) de los
extractosdespusdelaextraccin.Estaetapahademostradoseraltamente
eficazenlareduccindelcontenidodecompuestoslipdicoscoextradosde
lamatrizyesmsrpida,msbarataymssencillaqueelprocedimiento
de extraccin en fase slida (SPE) convencional. Sin embargo, debido a la
naturaleza no grasa de los suelos y al alto grado de selectividad y
sensibilidad del sistema GCECD, se decidi analizar directamente los
extractos obtenidos tras la etapa de centrifugacin sin someterlos a
procedimientos de limpieza. Como consecuencia, la nueva versin de
QuEChERS incluye menos etapas de pretratamiento de la muestra, lo que
hace que el procedimiento sea ms rpido, ms econmico y minimiza la
probabilidaddecometererroresexperimentales.
Con el fin de demostrar la validez del mtodo propuesto, se
seleccionaron tres compuestos clorados (cloroformo, 1,2diclorobenceno y
hexaclorobenceno)condiferentescaractersticasencuantoasuvolatilidady
polaridad. Estos compuestos son importantes contaminantes orgnicos,
VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
205
_______________________________________________________________________
206 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
________________________________________________________________________
3.PARTEEXPERIMENTAL
3.1.Reactivos
Elcloroformo(pureza:99.9%)fuesuministradoporSupelco(Bellefonte,
PA, USA) y el 1,2diclorobenceno (pureza: 99 %) y el hexaclorobenceno
(pureza: 99 %) por SigmaAldrich (Steinheim, Alemania). El acetonitrilo
(MeCN)fuesuministradoporMerck(Darmstadt,Alemania)yelacetatode
etilo(EtOAc)fuesuministradoporSigmaAldrich(Steinheim,Alemania).El
sulfato de magnesio deshidratado y el cloruro sdico fueron de Scharlau
(Barcelona, Espaa). El agua ultrapura se obtuvo mediante un sistema de
purificacindeaguaElgastat.
3.2.Disolucionesestndarymuestras
3.2.1.Disolucionesestndar
Seprepararondisolucionesestndardecadaunodeloscompuestos(500
mg/L)enEtOAcyenMeCN,ylasdisolucionessealmacenaronrefrigeradas
a4C.Apartirdestasserealizarondiferentesdiluciones,queseutilizaron
enlosestudiosdeseleccindelmododeinyeccin,ascomoparadoparlos
suelosalosnivelesdeconcentracinrequeridos.
3.2.2.Muestrasdesuelos
Se utilizaron tres tipos de suelos diferentes para evaluar el mtodo
QuEChERSpropuesto.Dossuelosnaturales:unsuelodejardn,conunalto
contenido de materia orgnica (Salamanca, Espaa) y un Vertisol, que se
caracterizaporsualtocontenidoenarcilla(Tabasco,Mjico).Yunmaterial
de referencia (RTCCRM631), que es un suelo arcillolimoso con
concentracionescertificadasdeloscompuestosdeinters.
Aunqueexisteunagrandiversidaddetiposdesuelosenlanaturaleza,
su capacidad de adsorcin est fuertemente relacionada con su contenido
enarena,arcillaymateriaorgnica,porloquelostressuelosconsiderados
VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
207
_______________________________________________________________________
3.3.InstrumentacinGCECD
Laconfiguracininstrumentalutilizadaesladescritaenelapartado2de
laseccinIIIConfiguracionesinstrumentalesutilizadas.
ElcromatgrafodegaseseraunAgilent7890A,equipadoconunmicro
detectordecapturaelectrnica(ECD).Deacuerdoconlasespecificaciones
del detector, la zona de deteccin es diez veces menor a la de un ECD
convencional, lo que se traduce en mayor sensibilidad y disminuye la
probabilidad de contaminacin de la celda. Seutilizuna columna capilar
DBVRX (20 m x 0.18 mm x 1 m) para cromatografa de gases rpida de
208 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
________________________________________________________________________
3.4.ProcedimientoAnaltico
La etapa de pretratamiento de la muestra mediante el mtodo
QuEChERS simplificado consta de una serie de pasos que se describen a
continuacin.Sepesan2.5gdesueloenuntubodecentrfugade15mLcon
tapn roscado. El tapn mantiene el tubo cerrado durante la mayor parte
delprocedimientodepretratamientodelamuestra,conloqueseevitan,en
lamedidadeloposible,lasprdidasdecompuestosvoltilesduranteesta
etapa.Acontinuacin,seaadensobreelsuelo1.5mLdeaguaultrapura,
conelfindehacerlosporosdelamuestramsaccesiblesaldisolventede
extraccin y al mismo tiempo homogeneizar el contenido de agua en las
diferentesmuestrasdesuelo.EstamezclaseagitaconunVortexdurante1
min.Enlasiguienteetapaseaaden2.5mLdeacetatodeetilo(disolvente
deextraccin)ylamezclaseagitadenuevodurante1minconunVortex.A
continuacin, se aade 1 g de MgSO4 deshidratado y se agita el tubo
durante1min.Laagitacindeberealizarseinmediatamentedespusdela
adicin de MgSO4 para evitar la formacin de conglomerados durante el
proceso de hidratacin de la sal. Finalmente, el tubo se centrifuga a 5000
rpm durante 5 min. En la figura 1 se muestra una comparacin entre el
procedimiento QuEChERS original y la versin simplificada propuesta en
estetrabajo.
VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
209
_______________________________________________________________________
QuEChERS original
10 g de muestra + agua*
Agitar 1 min con vortex
10mL de acetonitrilo
Agitar 1 min con vortex
4 g de MgSO4 y 1 g de NaCl
QuEChERS simplificado
2.5 g de suelo + 1.5 mL de agua
Agitar 1 min con vortex
2.5 mL de acetato de etilo
Agitar 1 min con vortex
1 g de MgSO4
Anlisis cromatogrfico
Anlisis cromatogrfico
* Adaptacin del mtodo a
muestras sin humedad.
Figura1:ComparacindelprocedimientopropuestorespectoalmtodoQuEChERS
original,adaptadoamuestrassinhumedad.
210 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
________________________________________________________________________
secierrayellinersecalientadeformarpidaa12C/shasta300C.Deesta
formaseproducelatransferenciadelosanalitosdesdeellineralacolumna
cromatogrfica(tiempodeinyeccin1.5min).Acontinuacin,lavlvulade
purga se abre de nuevo para garantizar la correcta limpieza del liner,
evitando la posibilidad de efecto de memoria. En ambos modos de
inyeccinelflujodepurgadelseptumsefijen4.0mL/min.
La temperatura inicial de la columna cromatogrfica era de 60 C
durante 2 min, sta se increment con una velocidad de 65 C/s hasta 175
C, y entonces se increment de nuevo a 45 C/min hasta 240 C y se
mantuvo durante 3.05 min. Las rampas de temperatura utilizadas son las
mximas permitidas por la configuracin instrumental utilizada. El gas
portador era He y el flujo era de 1.4 mL/min. El tiempo total del anlisis
cromatogrficoera8.26min.
Los parmetros del ECD eran los siguientes: una temperatura de
deteccinde300Cyunflujodegasauxiliar(N2)de20mL/min.
VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
211
_______________________________________________________________________
4.RESULTADOSYDISCUSIN
4.1.Optimizacindelasvariablesinvolucradasenelprocesode
extraccin
Parallevaracaboestosestudiosseseleccionungrupodecompuestos
clorados con propiedades diferentes en lo que respecta a su volatilidad,
polaridad y grado de interaccin con las matrices de suelos. El grupo de
compuestos seleccionado incluye: un compuesto voltil, el cloroformo
(CFM) y dos compuestos semivoltiles, 1,2diclorobenceno (12DCB) y
hexaclorobenceno (HCB). La volatilidad (expresada como punto de
ebullicin), la polaridad (expresada como el valor de los respectivos log
Kow) y el grado de interaccin con el suelo (expresado como el valor de la
constante de particin de carbono orgnico, Koc) para los compuestos de
interssemuestranenlatabla1.
Tabla1:Caractersticasdeloscompuestosobjetodeestudio
Compuestos
Log Kow
Koc (L/kg)
62
1.97
40
12DCB
180-183
3.38
617
HCB
323-326
6.2
54954
CFM
4.1.1.Seleccindeldisolventedeextraccin
LatcnicadepretratamientodemuestraQuEChERSpuedeconsiderarse
una adaptacin de la tcnica convencional de extraccin lquidolquido
asistida por sales (saltingout assisted liquidliquid extraction, SALLE) a la
nuevatendenciaenqumicaanalticademinimizacindeltratamientodela
muestra,ascomodelvolumendedisolventesutilizados.
Lostresdisolventesmscomnmenteutilizadosenelanlisismediante
SALLE han sido MeCN, acetona y EtOAc, debido a que con ellos se ha
212 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
________________________________________________________________________
conseguidounabuenaseparacindefases(acuosa/orgnica).Elmtodose
ha aplicado especialmente en la extraccin de pesticidas en diferentes
matrices alimentarias y con los tres disolventes citados se han conseguido
altas recuperaciones. Sin embargo, se pueden citar una serie de ventajas y
desventajasdelusodecadaunodestosdisolventes[8,13,30]:
Laacetonaescompletamentemiscibleconelagua,porloqueparalograr
unaadecuada separacin de fases esnecesaria laadicin de un disolvente
nopolar,quedalugaraladilucindelextractoorgnicoyprobablementea
menoresrecuperacionesdelosanalitosmspolares.Adems,elbajopunto
de ebullicin de este disolvente (56 C frente a 77 C y 82 C del EtOAc y
MeCN, respectivamente) constituye una desventaja durante el proceso de
extraccin, ya que pueden producirse variaciones en el volumen del
extracto,ylaexposicindelanalistaaldisolventeesmayor.
El EtOAc tiene una bajasolubilidad en el agua, por lo que basta con la
adicin de un agente desecante para lograr una adecuada separacin de
fases.Laprincipaldesventajadelusodeacetatodeetiloenlaextraccinde
pesticidas de matrices vegetales es que los extractos obtenidos contienen
altascantidadesdecompuestosnopolarescoextradosdelamatriz,como
grasasymaterialeslipoflicos.Lehotayycolaboradoreshanrealizadovarios
estudiosenlosqueconcluyenquelacoextraccindecompuestoslipdicos
de las matrices alimentarias decrece en el orden EtOAc>acetona>MeCN
[8,31].
ElMeCN,aligualquelaacetona,esaltamentemiscibleconelagua,sin
embargo,sepuedeconseguirunabuenaseparacindefasesconlaadicin
deunadeterminadacantidaddesales.Lasprincipalesdesventajasdeluso
de este disolvente son su precio, que es superior al de los otros dos
disolventes,ysumayortoxicidad.
Respecto a la adecuacin de los disolventes para el anlisis mediante
cromatografadegases,MastovskyLehotay[30]evaluaronycompararon
VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
213
_______________________________________________________________________
214 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
________________________________________________________________________
Hz/103
obtenidosenestaexperiencia.
3.1
3.3
3.5
3.7
Hz/103
Tiempo (min)
Hz/103
3.2
3.4
3.6
3.8
4
Tiempo (min)
3.9
4.1
4.3
4.5
Tiempo (min)
Acetato de etilo
Acetonitrilo
Figura2:Diferentesmodosdeinyeccinparaelcloroformo
enacetatodeetiloyacetonitrilo.
VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
215
_______________________________________________________________________
216 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
________________________________________________________________________
VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
217
_______________________________________________________________________
12DCB
7
Hz/103
Acetato de etilo
12DCB
14
10
2
4.58
4.62
Tiempo (min)
Hz/103
4.54
HCB
20
4.57
Hz/103
Hz/103
Acetonitrilo
4.61
4.65
Tiempo (min)
HCB
50
40
15
30
10
20
10
7.60
7.70
0.2 L
7.80
7.90
Tiempo (min)
1 L
7.75
7.80
3 L
7.85
7.90
7.95
Tiempo (min)
5
L
Figura3:Cromatogramasobtenidosalinyectardiferentesvolmenesdelas
disolucionesdeloscompuestossemivoltilesenlosdosdisolventes,conelmodode
inyeccinsolventvent.
218 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
________________________________________________________________________
VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
219
_______________________________________________________________________
4.1.1.2.Estudiodelosdosdisolventesenrelacinasueficaciaenla
extraccindecompuestosdematricesdesuelos
Una vez que los disolventes han sido comparados en relacin a su
comportamiento cromatogrfico, se realiz un estudio para determinar los
diferentesparmetrosrelacionadosconlaeficaciadeextraccindelmtodo
enmuestrasdesuelo.
El mtodo de extraccin utilizado para esta experiencia sigue las
principalesetapasyproporcionesdelmtodoQuEChERSoriginal(excepto
la etapa de limpieza de los extractos): 2.5 g de suelo dopado se
homogeneizaron con 1.5 mL de agua, utilizando un Vortex, entonces se
aadieron 2.5 mL de disolvente y la muestra se agit de nuevo. A
continuacin, se aadi una combinacin de MgSO4:NaCl (1g:0.25g),
agitando la mezcla con Vortex y por ltimo, la muestra se someti a un
proceso de centrifugacin. Tras la centrifugacin el extracto orgnico se
inyectdirectamenteenelsistemacromatogrfico.
Los extractos orgnicos se inyectaron utilizando el modo de inyeccin
adecuado para cada grupo de los compuestos con cada uno de los
disolventes considerados. Las recuperaciones de los compuestos se
calcularon por comparacin de las seales obtenidas al inyectar los
extractos procedentes de los suelos, con las seales que se obtuvieron al
inyectardisolucionesdelosanalitosencadaunodelosdisolventesconlas
mismas concentraciones que en los suelos dopados. Cada muestra se
analizportriplicadoyseconsiderelvalormediodelastresinyecciones.
Los resultados obtenidos en estos experimentos se muestran en la
figura4.
Recuperaciones (%)
220 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
________________________________________________________________________
100
80
60
40
MeCN
20
CFM
12DCB
Vertisol
S.Jardn
Vertisol
S.Jardn
Vertisol
S.Jardn
EtOAC
0
HCB
Figura4:Recuperacionesmediasparaloscompuestosseleccionadosensuelodejardny
Vertisol,utilizandocomodisolventesdeextraccinacetonitriloyacetatodeetilo.
VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
221
_______________________________________________________________________
hexaclorobencenoparecenoserunparmetroimportante,yaqueparaeste
compuesto se consiguen las ms altas recuperaciones. Otros autores
observaron un comportamiento similar al utilizar el procedimiento de
extraccin QuEChERS con compuestos que presentaban una fuerte
retencinenelsuelo[25].
Enloquerespectaalasdosmatricesdesueloconsideradas,seobserva
queelpoderdeextraccindelatcnicaesmuysimilarparaambasmatrices,
yaquenoexistandiferenciassignificativasenlasrecuperacionesobtenidas
paralosdostiposdesuelos.Estecomportamientorefuerzalaideadequeel
poderderetencindelossuelosnoesunfactordeterminanteenelproceso
de extraccin, ya que el contenido de materia orgnica de los dos suelos
contaminadosesmuydiferenteysinembargolasrecuperacionesobtenidas
sonmuysimilares.
Por tanto, en lo que se refiere a la extraccin de los compuestos en
muestras de suelos, los dos disolventes presentaban un comportamiento
similar.Sinembargo,yaqueelEtOAcmostrabaunmejorcomportamiento
cromatogrfico,seseleccionstecomodisolventedeextraccin.
4.1.2.Adicindeaguasobrelasmuestras
En la aplicacin del mtodo a matrices secas es muy comn aadir un
volumendeaguasobrelasmuestras,antesdesometerlasalprocedimiento
deextraccin,conelfindehidratarlasydehacerlosporosmsaccesiblesal
disolventedeextraccin[3234].Elefectodelahumedaddelasmuestrasse
estudi mediante la adicin de diferentes volmenes de agua sobre las
muestras de suelo y evaluando su influencia en las recuperaciones de los
compuestos de inters. Se estudi la adicin de 1.5 mL y 2.5 mL de agua
ultrapurasobrealcuotasde2.5gdesuelodejardndopado,ylasmezclas
se agitaron con el Vortex durante 1 min. A continuacin se aplic el
procedimiento de extraccin, utilizando las cantidades y proporciones
recomendadas en el mtodo QuEChERS original. Las recuperaciones
222 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
________________________________________________________________________
4.1.3.Seleccindelarelacingdemuestra:mLdedisolvente
Eltamaodelamuestraesotradelasvariablescomnmenteestudiadas.
Idealmentelosmtodosanalticostratandereducirelvolumendemuestra,
empleando la mnima cantidad capaz de proporcionar resultados
estadsticamentefiables.Losmtodosquerequierencantidadesdemuestra
elevadas utilizan grandes volmenes de disolvente, lo que conlleva un
mayor gasto, mayores requerimientos de seguridad, necesidad de ms
espaciodealmacenamiento,mstrabajoymstiempo.
Enesteestudioseseleccionarondosposiblestamaosdemuestra:2.5y
5.0g.Elvolumendeaguaylasproporcionesdesalesaadidasseescalaron
de forma adecuada. Las muestras se sometieron al procedimiento de
extraccinenlasmismascondicionesquesehandescritopreviamenteyen
amboscasosseempleunvolumendedisolventedeextraccinde2.5mL.
Deestamanera,lasrelacionesmuestra:disolventeconsideradasfueron1:1y
2:1. El uso de mayores tamaos de muestra o mayores volmenes de
disolventenoeraposible,yaqueeltamaodeltubodecentrfugautilizado
(15 mL) evitaba la correcta homogeneizacin de la muestra y la adecuada
extraccindeloscompuestosdurantelasetapasdeagitacin.
Losresultadosobtenidosmuestranquelassealescorrespondientesalos
compuestos de inters cuando se utiliz la relacin muestra:disolvente 2:1
erande1.87a1.98vecessuperioresalasobtenidasconlarelacin1:1.Por
VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
223
_______________________________________________________________________
tanto,enloscasosenlosqueserequierenlmitesdedeteccinmuybajosy
la cantidad de muestra no es un factor limitante, es posible estudiar
diferentesrelacionesmuestra:disolventeparaobtenerunapreconcentracin
deloscompuestos.
4.1.4.Adicindediferentescombinacionesdesales
En la publicacin inicial de QuEChERS, tras la separacin de fases con
MeCN,seaadansales(MgSO4yNaClenproporcin4:1)parainducirla
separacin de fases. El MgSO4 se aadi en una cantidad que exceda su
saturacin en el volumen de agua utilizado. De esta manera, se consigue
reducir significativamente la fase acuosa y promover la particin de los
analitos en la fase orgnica. La adicin de NaCl ayuda a reducir el
porcentaje de agua presente en la fase orgnica, lo que hace que esta fase
sea menos polar. Esto afecta de forma negativa a la recuperacin de los
analitos ms polares pero disminuye la coextraccin de otros compuestos
polaresdelamatriz,quepuedeninterferirenladeterminacin.
En este trabajo hemos estudiado el efecto de la adicin de sales en la
versin simplificada de QuEChERs propuesta. El primer experimento que
serealizsellevacabosinaadirsales.Sinembargo,elextractoorgnico
obtenido no era totalmente transparente, debido a la solubilidad del agua
en EtOAc (7.24 % a 20 C) [35]. Por tanto, en el estudio final se ensay la
adicin de diferentes cantidades de MgSO4 con y sin NaCl. Para llevar a
cabolosexperimentosseutilizaron:unmaterialdereferenciaconcontenido
certificadodecloroformo(RTCCRM631)yunsuelodejardncontaminado
con 1,2diclorobenceno y hexaclorobenceno. La tabla 2 muestra los
resultados obtenidos en las diferentes experiencias. Se ha considerado el
valormediodetresdeterminaciones.Losvaloresentreparntesismuestran
la desviacin estndar relativa para las tres rplicas. Se ha asignado un
valorde1.00(ennegritaenlatabla)alosvaloresdereadepicoobtenidos
cuandoseutilizalacombinacindesalesrecomendadaenelprocedimiento
QuEChERSoriginal(1gdeMgSO4y0.25gdeNaClpara2.5gdemuestra).
224 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
________________________________________________________________________
MgSO4 (g)
1*
CFM
12DCB
HCB
1.00 (0.5)
0.95 (0.57)
0.94 (0.38)
0.25*
1.00 (0.5)
1.00 (0.41)
1.00 (1.08)
0.5
1.04 (4.9)
0.99 (0.63)
0.99 (0.25)
0.93 (1.4)
0.97 (0.57)
0.97 (1.02)
0.25
0.99 (1.1)
0.97 (1.00)
0.98 (1.21)
0.5
1.08 (1.0)
0.97 (0.41)
1.0 (0.83)
*ProporcindesalesutilizadaenelprocedimientoQuEChERsoriginal
Comopuedeobservarse,noexistendiferenciassignificativasenlasreas
de pico obtenidas con las diferentes combinaciones de sales estudiadas.
Adems,nohaydiferenciasenlosresultadosobtenidosparaelmaterialde
referenciacertificadoyelsuelodejardndopadoenellaboratorio.Porotro
lado,laadicindeNaClnotieneunefectosignificativoenlaseparacinde
fases ni en la extraccin de los compuestos cuando se aplica el
procedimiento a muestras de suelo (los cromatogramas obtenidos son
limpiosynoseobservanotroscompuestosinterferentes,adiferenciadelos
resultadosquesehandescritoparalaextraccindepesticidasenmuestras
dealimentos).Deacuerdoconestosresultados,yconelfindesimplificarel
procedimiento de extraccin lo mximo posible, se decidi aadir
solamente1.0gofMgSO4enelprocedimientofinal.
4.2.Recuperacionesyreproducibilidadobtenidasconelmtodo
deextraccinoptimizado
Con el procedimiento final optimizado, se realizaron estudios de
recuperacin y reproducibilidad para los analitos objeto de estudio, a dos
VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
225
_______________________________________________________________________
CFM
12DCB
HCB
Vertisol
Concentracin
(g/kg)
Recuperacin
RSD
Recuperacin
RSD
(%)
(%)
(%)
(%)
50
62
2.0
62
1.2
200
68
1.8
64
0.5
625
82
1.0
83
3.4
1562
78
1.0
79
1.5
15
93
1.9
86
1.6
125
92
0.1
90
0.3
Lasrecuperacionesobtenidasparacadacompuestoeransimilaresenlas
dosmatricesestudiadas,alosdosnivelesdeconcentracinconsiderados,y
oscilabande62%a93%,conunaRSDenlaetapadeinyeccininferioral
3.5 %. De nuevo, las recuperaciones ms bajas se obtuvieron para el
226 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
________________________________________________________________________
compuestomsvoltil(CFM),mientrasquelasmsaltassealcanzaronpara
elcompuestomenosvoltil(HCB).
Con el fin de calcular la reproducibilidad del procedimiento completo
(extraccin + anlisis), 10 alcuotas de una muestra de suelo dopado se
sometieron al procedimiento de extraccin y los extractos obtenidos se
analizaronconelmtodooptimizado.Lareproducibilidad,alosnivelesde
concentracinespecificadosenlatabla4,eramuybuenaentodosloscasos,
con valores de RSD entre 3.3 y 7.6 %. Los valores de RSD ms elevados
correspondan al compuesto ms voltil, lo que pone de manifiesto la
dificultadenlaextraccinydeterminacindeestetipodeanalitos.
Tabla4:Reproducibilidaddelprocedimientoglobalpropuesto(n=10)
Compuesto
Concentracin
(g/kg)
RSD (%)
CFM
50
7.6
12DCB
19.5
3.5
HCB
0.46
3.3
VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
227
_______________________________________________________________________
5.CONCLUSIONES
Se ha evaluado una versin modificada y simplificada del mtodo
QuEChERS para la determinacin de compuestos clorados en matrices de
suelos.
TantoelMeCNcomoelEtOAcsepuedenutilizarparalaextraccinde
losanalitos,sinembargoseseleccionelEtOAcporquemostrabaventajas
en el anlisis cromatogrfico. Se han evaluado diferentes modos de
inyeccin, seleccionando el ms adecuado en funcin de las caractersticas
delosanalitos.
Elmtodopropuestonorequierelimpiezadelosextractosyseconsigue
una separacin de fases adecuada, aadiendo nicamente MgSO4 a la
mezclamuestra:disolvente.
Es necesario realizar nuevas investigaciones con el fin de realizar una
validacin ms exhaustiva del mtodo y probar su posible aplicacin a
diferentescompuestosorgnicosenmatricesdesuelos.
228 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
________________________________________________________________________
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230 VIQuEChERSsimplificadoparalaextraccindecompuestoscloradosdesuelos
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VI
233
Talanta
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a r t i c l e
i n f o
Article history:
Received 9 September 2009
Received in revised form 3 December 2009
Accepted 10 December 2009
Available online 16 December 2009
Keywords:
Simplied QuEChERS approach
Chlorinated compounds
Soil samples
a b s t r a c t
A simplied version of the QuEChERS method for the extraction of chlorinated pollutant compounds from
soil samples is proposed. The procedure involves simple liquid extraction of the soil sample with ethyl
acetate, followed by the addition of anhydrous MgSO4 . Gas chromatography/electron capture detection
(ECD) is then used to analyse the extracts without any other sample pretreatment. This new QuEChERS
version includes, therefore, fewer treatment stages of the sample, which makes the nal procedure simpler, faster, and cheaper and minimizes the creation of errors associated with this step. Three chlorinated
compounds (chloroform, 1,2-dichlorobenzene, and hexachlorobenzene) of different volatility and polarity have been selected as target compounds and two different solvents (acetonitrile and ethyl acetate)
have been evaluated in order to prove the suitability of the proposed approach for the extraction of these
compounds from different soil samples. The suitability of the acetonitrile and ethyl acetate for PTV-GC
analysis has also been evaluated. Recoveries between 62 and 93% and reproducibilities between 3.5 and
7.6% have been achieved.
2009 Elsevier B.V. All rights reserved.
1. Introduction
Determination of organic volatile/semivolatile compounds in
environmental samples, such as air, water, soil or sediments usually requires special pretreatment prior to the nal determination,
most often performed by gas chromatography. This pretreatment
involves the isolation from the matrix of the compounds of interest
and their transfer to other medium, ideally with the simultaneous removal of interfering substances and selective enrichment in
the receiving medium to a concentration higher than the detection
limit of the proposed procedure [1].
The choice of sample treatment applied depends heavily on the
complexity of the matrix. Water, in general, represents a less complicated matrix than air, sediment or soil samples. This choice is
also related to the detection method. The more sensitive and specic detection method is used, the less stages of sample treatment
will be required [2]. Modern analytical strategies tend towards
automatization and integration of sample pretreatment in the chromatographic systems as far as possible [3].
Development of solventless (or at least with low solvent consumption) sample preparation techniques constitutes a pillar of
green analytical chemistry [4] and has taken a rapid development
during last years. The great interest in this approach is due to toxicological, environmental and economical aspects. A number of
techniques with those characteristics have been developed [5,6]
such as single drop microextraction (SDME), liquid phase microextraction (LPME), solid phase microextraction (SPME) and stir-bar
sorptive extraction (SBSE). Among techniques based in gas extraction, static headspace (SHS), purge and trap (P&T) and closed loop
stripping analysis (CLSA) could be mentioned. Membrane extraction approaches such as membrane assisted solvent extraction
(MASE), membrane extraction with sorbent interface (MESI) or
membrane inlet mass spectrometry (MIMS) have also been applied
to environmental samples [7].
QuEChERS (quick, easy, cheap, effective, rugged and safe) procedure was introduced by Anastassiades in 2003 as a new approach to
extract a wide range of pesticides from different food matrices with
high water content [8]. This basic procedure is based on a liquid partitioning with acetonitrile followed by a dispersive SPE clean-up
with primary secondary amine (PSA). Modications to the original
method to ensure efcient extraction of pH dependent compounds
(by using different buffers solutions) [912] or addition of water
to dry samples in order to obtain the necessary moisture [1315]
have been introduced.
To remove matrix components in the clean-up step, modications of the original dispersive SPE step by using graphitized
carbon black (GCB) and C18 sorbent [10], SPE in cartridge [16] or
Florisil cartridges [17,18] have been used. The QuEChERS method
234
386
2. Experimental
2.1. Chemicals
Chloroform (99.9% purity) was supplied by Supelco (Bellefonte, PA, USA) and 1,2-dichlorobenzene (99% purity), and
hexachlorobenzene (99% purity) were from SigmaAldrich (Steinheim, Germany). Acetonitrile (MeCN) was from Merck (Darmstadt,
Germany) and ethyl acetate (EtOAc) from SigmaAldrich. Magnesium sulfate anhydrous and sodium chloride were from Scharlau
(Barcelona, Spain). Ultrapure quality water obtained with an Elgastat UHQ water purication system was used.
2.2. Standard solutions
Stock solutions (500 mg/L in ethyl acetate or acetonitrile) of each
compound were prepared and stored in a refrigerator at 4 C. From
235
387
Fig. 1. Comparison of the proposed method with the original QuEChERS adapted to dry samples.
236
388
Table 1
Characteristics of the compounds under study.
Compounds
Boiling point ( C)
Log Kow
Koc (L/kg)
CFM
1,2-DCB
HCB
62
180183
323326
1.97
3.38
6.2
40
617
54954
Fig. 2. Different injection modes for chloroform in acetonitrile and ethyl acetate.
237
389
Fig. 3. GC/ECD chromatograms obtained by injecting (solvent vent injection mode) different volumes of semivolatile compound solutions in acetonitrile and ethyl acetate.
Fig. 4. Average recoveries of selected compounds from garden soil (G) and Vertisol
(V).
238
390
carbon partition constant (Koc ) are very different for different compounds and could affect to the nal recovery.
The high volatility of chloroform and its low value of Kow could
explain the low recoveries (between 66 and 70%) of this compound. For the semivolatile compounds the extraction recoveries
are higher and should be mainly related to their polarity and interaction with soil. In this case, recoveries are between 83 and 92%
and appear directly related to the polarity of the analytes. The
strong binding to soil of hexachlorobenzene does not seem to be
an important parameter as it presents the highest recovery. A similar behaviour with QuEChERS approach has been observed by other
authors for compounds that present strong binding to soils [35].
Regarding the two different matrices, it can be observed that the
extraction power of the technique in different complex soil samples
is very similar. The recoveries found in the two soils showed no
signicant differences. This behaviour reinforces the idea that the
binding of compounds to the soil is not a determining parameter
in the extraction process given that the organic matter content in
both soils is very different, but the recoveries obtained are similar.
Therefore, regarding the extraction from soil samples, the two
studied solvents behave in a similar way. The better chromatographic behaviour observed for ethyl acetate led us to choose this
solvent as the optimum.
In the application of the method to dry matrices, it is very common to add a volume of water to the samples, prior to the extraction
step, to hydrate them and make the pores in the sample more
accessible to the extraction solvent [1315]. The effect of the moisture of the sample was studied by adding different volumes of
water to the soil sample on the recoveries of the target compounds.
Volumes of 1.5 and 2.5 mL of ultrapure water were added to the
2.5 g aliquots of the spiked garden soil sample, and the mixtures
were vortex mixed for 1 min. Following this, the extraction procedure, using the amounts and proportions recommended in the
original QuEChERS, was applied to the homogenized samples. The
recoveries obtained were 65 and 67% for chloroform, 81 and 79%
for 1,2-dichlorobenzene, and 91 and 93% for hexachlorobenzene,
respectively. Comparison of these values by using a paired t-test
showed that there were not signicant differences in the recoveries
of the compounds for the volumes of water studied. Therefore, we
decided to choose a volume of 1.5 mL, which was enough to completely saturate the sample and appropriate to provide a proper
homogenization of the sample during the vortex-mixing step.
Sample size is another of the commonly studied variables.
Ideally, analytical methods try to reduce sample size to a minimum amount that provides statistically reliable results. Methods
in which excessive sample size are used require larger solvent volumes, thus leading to more waste, greater safety concerns, greater
storage, more labour and time, and more expense than necessary.
In this study two different sample sizes were selected: 2.5
and 5.0 g of soil. Water volume and salt proportions were scaled
accordingly. The samples were extracted under the same conditions as previously with 2.5 mL of extracting solvent. Thus the
sample:solvent ratios studied were 1:1 and 2:1. Larger sample sizes
or larger solvent volumes were not possible because the glass centrifuge tube volume (15 mL) prevented proper homogenization of
the sample and adequate extraction of the analytes during shaking
process.
The results obtained show that signals obtained for a 2:1 sample:solvent ratio were 1.871.98 times higher compared to the
signals for a 1:1 ratio. These results show that, if lower detection
limits are needed and sample availability is not the limiting factor,
different sample:solvent ratios could be designed to obtain concentration of the analytes ensuring at all times the right conditions for
the extraction.
In the initial QuEChERS publication, after the initial singlephase extraction with MeCN, salts (MgSO4 and NaCl) were added
Table 2
Inuence of different combinations of salts on the recoveries of the target compounds (2.5 g soil sample).
Normalized peak area (RSD, %)a
Salts
MgSO4 (g)
NaCl (g)
CFM
1,2-DCB
HCB
1b
0
0.25b
0.5
1.00 (0.5)
1.00 (0.5)
1.04 (4.9)
0.95 (0.57)
1.00 (0.41)
0.99 (0.63)
0.94 (0.38)
1.00 (1.08)
0.99 (0.25)
0
0.25
0.5
0.93 (1.4)
0.99 (1.1)
1.08 (1.0)
0.97 (0.57)
0.97 (1.00)
0.97 (0.41)
0.97 (1.02)
0.98 (1.21)
1.0 (0.83)
a
b
n = 3.
Combination of salts used in QuEChERS original.
391
Acknowledgments
Recovery
(%)
RSD
(%)
Recovery
(%)
RSD
(%)
50
200
62
68
2.0
1.8
62
64
1.2
0.5
References
625
1562
82
78
1.0
1.0
83
79
3.4
1.5
15
125
93
92
1.9
0.1
86
90
1.6
0.3
Concentration
level (g/kg)
CFM
1,2-DCB
239
HCB
Garden soil
Vertisol
Table 4
Reproducibility of the global procedure proposed (n = 10).
Compound
RSD (%)
CFM
1,2-DCB
HCB
50
19.5
0.46
7.6
3.5
3.3
two different matrices at the two fortied levels and satisfying the
6293% recovery range with a relative standard deviation lower
than 3.5% in the injection step. Again, the lowest recoveries corresponded to the most volatile compound (CFM). On the contrary the
highest were obtained for the less volatile one (HCB).
In order to calculate the reproducibility of the overall approach
10 aliquots of a soil sample were submitted to the extraction procedure and the extracts were injected using the optimized method.
The reproducibility, at concentrations specied in Table 4, was very
good in all cases, with standard deviation values between 3.3 and
7.6%. Even so, the highest values correspond to the volatile compound, reecting the difculty in the extraction and determination
of this kind of analytes.
4. Conclusions
A modied and simplied QuEChERS approach has been evaluated for the determination of chlorinated compounds in soil
matrices.
Both MeCN and EtOAc can be used for analyte extraction,
although EtOAc is preferred because it shows chromatographic
advantages. Different injection techniques have been evaluated
with good results in all cases.
The proposed method does not require a clean-up step and single liquidliquid partitioning is achieved with the addition of just
MgSO4 to the sample:solvent mixture.
Future work must be developed to address more extensive validation of this method in order to extend it to different organic
compounds in soil matrices.
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VII
DETERMINACINDETRIHALOMETANOS
ENSUELOSMEDIANTEQuEChERS
SIMPLIFICADOCROMATOGRAFADE
GASESRPIDADETECCINDECAPTURA
ELECTRNICA
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
243
________________________________________________________________________
1.INTRODUCCIN
Laextraccindecompuestosorgnicosvoltiles(VOCs)demuestrasde
suelo es un proceso crtico debido a la diversidad y complejidad de las
matricesyalasbajasconcentracionesyaltavolatilidaddeloscompuestos.
Este procedimiento se ha llevado a cabo principalmente mediante tcnicas
degeneracindeespaciodecabeza[1].
La Agencia de Proteccin Medioambiental de los Estados Unidos
(USEPA)propone:generacindeespaciodecabezaesttico(SHS)[2],purga
ytrampa(P&T)[3]ydestilacinavaco[4]comotcnicasdeextraccinpara
la determinacin, mediante cromatografa de gases, de VOCs en suelos y
otrasmatricesslidas[5,6].
Muchos artculos basados en cromatografa de gases utilizan como
tcnicasdeextraccin:HS[711],P&T[1214]yHSmicroextraccinenfase
slida (SPME) [7,15,16]. Las tcnicas de generacin de espacio de cabeza
tienen las ventajas de que no utilizan disolventes, la manipulacin de la
muestraesmnimaysonfcilesdeautomatizarenprocedimientosenlnea.
El principalinconveniente es que son tcnicas bastante dependientes de la
matrizcuandosetrabajaconmuestrastancomplejascomolossuelos,enlos
quetienenlugarfuertesinteraccionesentrelosanalitosyotroscomponentes
de la matriz. Debido a este hecho, enalgunas ocasiones, no seconsigue la
eficaciadeextraccindeseada.
Enlosltimosaos,sehanpropuestoalgunasestrategiasparamejorarla
eficaciadelaextraccin.Algunosartculosdescribenelusodeunaetapade
extraccin con metanol, previa al anlisis mediante P&T [17,18]. Otros
autoresproponenelusodeundispositivodeSPMEenfriadointernamente
[19],olatcnicadegeneracindeespaciodecabezamltipleSPME[20].
Cuandoseutilizalamodalidaddegeneracindeespaciodecabezams
sencilla(SHS),elinconvenientedebajapreconcentracindeloscompuestos
enlafasegaseosasesumaalosmencionadosanteriormente.Nuestrogrupo
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
244
________________________________________________________________________
deinvestigacinhapropuestounaalternativapararesolverestadesventaja
que consiste en el acoplamiento de SHS con un inyector de temperatura
programada(PTV)parapreconcentrarloscompuestosantesdeinyectarlos
enelsistemacromatogrfico[21].
Tambin se han propuesto mtodos no separativos para este tipo de
anlisis,comoHSMS[9,11,22]ypurgaymembrana(PAM)MS[23].
En el ao 2003, Anastassiades y colaboradores [24] introdujeron un
nuevomtodoparaextraerunaampliavariedadderesiduosdepesticidas
enmatricesdefrutasyverduras.ElmtodosedenominQuEChERSyha
recibidogranaceptacinanivelmundial.
Elmtodooriginalestbasadoenextraccinlquidolquidoasistidapor
sales,utilizandoundisolventemiscibleoparcialmentemiscibleconelagua.
Traslaextraccin,losextractossesometanaunprocedimientodelimpieza
que se denomin extraccin en fase slida dispersiva (dSPE), en el que
comoadsorbentesehautilizadoprincipalmenteaminaprimariasecundaria
(PSA). Recientemente este mtodo ha recibido la distincin de Mtodo
OficialdelaAOACInternacional[25].
ElusodeQuEChERSconmatricesdesueloshasidomuylimitadohasta
lafecha[26,27].Enambosartculosseaplicelmtodoaladeterminacin
depesticidasenestetipodematrices,yseutilizunaetapadelimpieza(d
SPE)traslaextraccin.
Recientemente, se ha propuesto una nueva simplificacin del mtodo
QuEChERS para la extraccin de compuestos clorados, voltiles y semi
voltiles, de muestras de suelos [28]. La nueva versin incluye algunas
simplificaciones respecto al mtodo original. La principal ventaja del
mtodosimplificadoeslaeliminacindelaetapadelimpieza(dSPE)tras
la extraccin, lo que hace que el procedimiento final sea ms sencillo,
rpido, econmico y se minimiza la probabilidad de cometer errores
experimentales.
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
245
________________________________________________________________________
2.OBJETIVOS
En este trabajo se propone el uso del mtodo de extraccin QuEChERS
simplificado para la determinacin de trihalometanos en muestras de
suelos, mediante cromatografa de gases con deteccin de captura
electrnica. Debido a la alta selectividad y sensibilidad del detector de
captura electrnica para los compuestos halogenados, se pretende poner a
puntounametodologaconbuenoslmitesdedeteccin,apesardelosbajos
factoresdepreconcentracinobtenidosconQuEChERS.
Se optimizarn las variables relacionadas con la determinacin
cromatogrfica de los compuestos, se estudiar la posible existencia de
efecto de matriz (habitual en este tipo de muestras) y se determinarn las
caractersticas analticas del mtodo en muestras de suelo de jardn
dopadas.Paravalidarlametodologapropuestaseutilizarndosmateriales
dereferenciacertificados(CRMs).
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
246
________________________________________________________________________
3.PARTEEXPERIMENTAL
3.1.Reactivos
Elacetatodeetilo(EtOAc),degradoHPLC(CHROMASOLV Plus),fue
suministrado por SigmaAldrich (Steinheim, Alemania). El cloroformo
(pureza:
99.9
%),
bromodiclorometano
(pureza:
99.9%),
tR (min)
Cloroformo (CFM)
61
2.44
Bromodiclorometano (BDCM)
90
Dibromoclorometano (DBCM)
Bromoformo (BFM)
Compuestos
wh
Log Kow
Koc
(L/kg)
0.41
1.97
40
2.76
0.83
2.0
87
117
3.25
0.81
2.16
107
149
3.72
0.82
2.35
126
(s)
3.2.Disolucionesestndarymuestras
3.2.1.Disolucionesestndar
Se prepar una disolucin de trihalometanos en acetato de etilo (5.00
mg/L),quesealmacenenelfrigorficoa4C.Apartirdeestadisolucinse
prepararon diferentes diluciones, que se utilizaron para optimizar las
condicionesexperimentalesdelmtodoyparadoparlasmuestrasdesuelo
yagua.
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
247
________________________________________________________________________
3.2.2.Muestras
3.2.2.1.Suelosdopados
Las matrices de suelo dopado se utilizaron para la optimizacin de la
etapadepretratamientodelamuestra,paracomprobarlaposibleexistencia
de efecto de matriz y para determinar las caractersticas analticas del
mtodo. Se utilizaron dos tipos de suelos diferentes: un suelo con un alto
contenidoorgnico,recogidodeunjardnpblico(Salamanca,Espaa)yun
Vertisol,quetieneunaltoporcentajedearcilla(Tabasco,Mjico).
Lossuelosrecolectadossedesecaronalairesobreunaplacacalefactoraa
90 C, durante 48 horas, removiendo frecuentemente. Con este
procedimientoseconseguaeliminardelsuelolahumedadyprcticamente
cualquierconcentracinde losanalitos de inters. Los suelosdesecados se
analizaron antes de doparlos para comprobar que estaban libres de los
VOCsestudiados.Enloscromatogramasobtenidosseobservalapresencia
de un pico correspondiente al cloroformo en una concentracin a nivel
traza. Sin embargo, este mismo pico se obtiene cuando se analiza EtOAc
puro.Endiferentesartculospublicadossehadescritolaubicuidaddeeste
compuesto en el ambiente y la presencia de niveles traza en los blancos
analizados[2931].Comoconsecuencia,entodaslasmuestrasanalizadas,se
restalreadepicodelcloroformolacorrespondientealasealdelblanco.
Elprocedimientoutilizadoparadoparlossueloseselsiguiente:20gde
suelosedepositanenunvialde100mLysobrelseaaden2mLdeuna
disolucindelosanalitosenEtOAc(enconcentracionesadecuadas).Elvial
sesellahermticamenteyseagitavigorosamentedurante15minutospara
conseguir la perfecta homogenizacin de los compuestos en la matriz.
Finalmente, las muestras se almacenan en el frigorfico (4 C) durante 15
das para lograr que tenga lugar la interaccin entre los compuestos y la
matriz.
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
248
________________________________________________________________________
3.2.2.2.Materialesdereferenciacertificados(CRMs)
Con el fin de validar el mtodo optimizado se analizaron dos suelos
comerciales con contenidos certificados de los compuestos a estudiar. Los
CRMsutilizadosfueron:unsueloarcillolimoso(RTCCRM631)yunsuelo
arcilloso (RTCCRM635), ambos suministrados por LGC Promochem
(Barcelona,Espaa).
3.2.2.3.Muestrasdeagua
Las muestras de agua dopada se utilizaron en el estudio del efecto de
matriz.Seprepararondisolucionesdeloscompuestosenaguaultrapuray
las muestras se sometieron a los mismos procesos de extraccin y anlisis
cromatogrfico a los que se someten las muestras de suelo. El agua
ultrapura utilizada para preparar las disoluciones no contena
concentraciones detectables de ninguno de los THMs, excepto para el
cloroformo,queestabapresenteentodoslosblancosanalizados,comoseha
mencionadoanteriormente.
3.3.Instrumentacin
Laconfiguracininstrumentalutilizadaesladescritaenelapartado2de
laseccinIIIConfiguracionesinstrumentalesutilizadas.
El anlisis mediante cromatografa de gases se realiz con un Agilent
7890A.LacolumnacapilarutilizadaeraunaDBVRXparacromatografade
gases rpida (20 m x 0.18 mm x 1 m) de Agilent Technologies (J&W
Scientific Columns, USA). El gas portador era Helio N50 (99.995% de
pureza; Air Liquid). El detector utilizado era un 63Ni microdetector de
capturaelectrnica(ECD).Elgasauxiliarutilizadofuenitrgeno(99.999
%;AirLiquide).
El cromatgrafo de gases estaba equipado con un inyector de
temperaturaprogramadadeAgilent(6890).Seutilizunlinervacoconun
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
249
________________________________________________________________________
3.4.Procedimientosanalticos
3.4.1.Pretratamientodelamuestra(QuEChERS)
Sepesaron5gdemuestraenuntubodecentrfugade15mLcontapn
roscado. El tapn mantiene el tubo cerrado durante la mayor parte del
procesodepreparacindelamuestra,locualminimizalasprdidasdelos
compuestosmsvoltilesduranteestaetapa.Acontinuacinseaadieron3
mLdeaguaultrapurasobreelsuelo,conloqueseconsiguehomogeneizar
lahumedaddelasdiferentesmuestrasdesueloyfacilitarlaextraccinde
los compuestos (el agua, que es ms polar que los compuestos de inters,
desplazaastosdesuslugaresdeadsorcinenelsuelo).Lamezclaseagit
durante1minconunVortex.Enelsiguientepasoseaadieron2.5mLde
acetato de etilo (disolvente de extraccin) y la muestra se agit
vigorosamente durante 1 min, utilizando un Vortex. A continuacin se
aadieron 2 g de sulfato de magnesio deshidratado y la mezcla se agit
inmediatamente durante 1 min (esta accin debe llevarse a cabo de forma
inmediataparaevitarlaformacindeaglomeradosquetienelugarcuando
el MgSO4 se hidrata con el agua). Por ltimo, el tubo se centrifug a 5000
rpmdurante5minyelextractoorgnicoobtenidosetransfiriaunvialy
se someti al procedimiento de medida mediante cromatografa de gases.
En la figura 1 se ha representado un diagrama esquemtico del proceso
completo.
Suelo
Agua
EtOAc
2.5 mL de
EtOAc
Vortex 1min
2 g de
MgSO4
2- Centrifugacin 5 min
a 5000 rpm
1- Vortex 1min
Vortex 1min
5 g se suelo + 3 mL de
agua ultrapura
Vial para
anlisis con GC
Transferencia del
extracto orgnico
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
250
________________________________________________________________________
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
251
________________________________________________________________________
3.4.2.AnlisismedianteGCECD
Paralainyeccinelsistemacromatogrficoseseleccionelmodosplitless
encaliente.Seinyectunvolumendemuestrade0.2Lenellinera250C.
La temperatura del liner se mantuvo a 250 C durante todo el anlisis. El
tiempodesplitlesssefijen1minyelflujodepurgadelseptumerade4.0
mL/min.
La temperatura inicial de la columna era de 60 C (1.5 min); sta se
incrementa65C/minhasta175Cyentoncesseincrementdenuevoa
45C/minhasta250C,temperaturaquesemantuvodurante1.00min.Las
rampas de temperaturas utilizadas eran las mximas permitidas por el
equipo. El flujo de helio era de 1.5 mL/min. Bajo estas condiciones los
compuestoseluanenmenosde4minyeltiempocromatogrficototalera
de5.94min.
Los parmetros del ECD fueron: temperatura de deteccin 300 C y
flujodegasauxiliar(N2)20mL/min.
La adquisicin de los datos se realiz con software de Agilent
Technologies(ChemstationG2075BAVer.B.03.01).
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
252
________________________________________________________________________
4.RESULTADOSYDISCUSIN
4.1.Variablesinvolucradasenelprocesodeextraccin
En el captulo VI de estamemoria se ha realizado un estudiodetallado
de las diferentes etapas implicadas en el mtodo QuEChERS para la
extraccin de compuestos halogenados voltiles y semivoltiles de
muestrasdesuelos.Enelcitadocaptulotambinserealizunestudiopara
seleccionar el modo de inyeccin ms adecuado para cada grupo de
compuestos.
En el estudio de seleccin del disolvente de extraccin se probaron
acetonitriloyacetatodeetilo.Aunqueseobtenanrecuperacionessimilares
deloscompuestosconambosdisolventes,elacetatodeetilotenaunmejor
comportamientocromatogrficoypermitainyectarmayoresvolmenesde
muestra, lo que da lugar a mayor sensibilidad del mtodo. Respecto al
modo de inyeccin, para los compuestos voltiles (como los analitos de
inters de este trabajo), el modo splitless en caliente es el que proporcion
mejoresresultados.
La adicin de agua sobre muestras secas es un procedimiento muy
comn en QuEChERS; se seleccionun volumen de 1.5 mL sobre 2.5 g de
suelo. Este volumen era suficiente para impregnar completamente la
muestra de suelo y adecuado para proporcionar una adecuada
homogeneizacindelamezcladurantelaetapadeagitacinconelVortex.
OtroparmetroquepodraafectaralaextraccindeTHMsenmuestras
de suelos y al proceso de separacin de fases es la combinacin de sales
aadida. En el presente trabajo se ha ensayado la adicin de diferentes
combinacionesdeMgSO4conysinNaClenlaextraccindeloscompuestos
deintersen2.5gdelmaterialdereferenciaCRM631.Tambinseprobla
posibilidad de aplicar el procedimiento de extraccin sin aadir sales, sin
embargonoseconseguaunaadecuadaseparacindefases.
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
253
________________________________________________________________________
NaCl (g)
CFM
BDCM
DBCM
BMF
1.00 (0.5)
0.95 (0.4)
0.95 (1.3)
0.98 (1.1)
0.25*
1.00 (0.5)
1.00 (1.8)
1.00 (3.2)
1.00 (5.6)
0.5
1.04 (4.9)
1.03 (2.6)
1.03 (4.3)
0.99 (4.3)
0.93 (1.4)
0.95 (3.1)
0.94 (4.4)
0.91 (4.3)
0.25
0.99 (1.1)
1.01 (0.7)
1.02 (0.7)
0.98 (1.1)
0.5
1.08 (1.0)
1.02 (0.1)
1.03 (0.8)
0.98 (1.1)
*ProporcindesalesutilizadaenelprocedimientoQuEChERsoriginal
Adems,noseobservarondiferenciasenlacantidaddecomponentesco
extrados de la matriz (grado de limpieza de los extractos) cuando se
variaba la cantidad de NaCl aadida, como se puede observar en los
cromatogramasdelafigura2.
DBCM
CFM
BMF
DBCM
150
125
BMF
CFM
175
DBCM
BDCM
200
75
BMF
100
CFM
Hz/102
BDCM
BDCM
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254
________________________________________________________________________
50
1g MgSO4
25
0
1
5
6
Tiempo (min)
Figura2:Cromatogramasdelosextractosprocedentesdelaextraccinde2.5gdel
materialCRM631,utilizando1gdeMgSO4condiferentescantidadesdeNaCl.
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________________________________________________________________________
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256
________________________________________________________________________
Nivel de concentracin: 50 g/kg
a
rea de pico/103
10000
10
9000
8000
8
7000
6000
6
5000
4000
4
3000
2000
2
1000
0
1:1
2:1
S. Jardn
Vertisol
Cloroformo
S. Jardn
Vertisol
S. Jardn
Vertisol
Bromodiclorometano Dibromoclorometano
S. Jardn
Vertisol
Bromoformo
b
rea de pico/103
45000
40000
40
35000
30000
30
25000
20000
20
15000
10000
10
1:1
5000
2:1
0
S. Jardn
Vertisol
Cloroformo
S. Jardn
Vertisol
Bromodiclorometano
S. Jardn
Vertisol
Dibromoclorometano
S. Jardn
Vertisol
Bromoformo
Figura3:Comparacindelasreasdepicoobtenidasparaloscompuestosdeinters
cuandoseutilizanlasrelacionesmuestra:disolvente1:1y2:1paramuestrasdesuelos
dopadasa50g/kg(a)y200g/kg(b).
Cuandoseutilizlarelacin2:1,elreadelospicosaumentabade1.79a
1.96 veces, respecto a las seales obtenidas con la relacin 1:1. No se
observarondiferenciassignificativasenlosincrementosdesealobtenidos
paracadacompuesto,niconlasdosconcentracionesniconlasdosmatrices
desuelosconlasqueserealizlaexperiencia.
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
257
________________________________________________________________________
4.2.Variablesdelanlisiscromatogrfico
4.2.1.Parmetroscromatogrficos
Con el fin de conseguir la separacin rpida de los cuatro THMs se
utilizaronlasrampasdetemperaturasmximaspermitidasporelhornodel
cromatgrafo(verapartado3.4.2.).Parallevaracaboestosexperimentosse
utilizunadisolucinde500g/Lparacadaunodeloscompuestos.
Latemperaturafinalseleccionadafue250C,quesemantuvodurante1
min para prevenir los posibles problemas debidos al efecto de memoria.
Estatemperaturaerasuficienteparagarantizarlaelucindeloscompuestos
y adecuada a las especificaciones tcnicas de la columna cromatogrfica
utilizada.
La temperatura inicial de la columna cromatogrfica se estudi para
valores entre 45 y 60 C. A medida que la temperatura inicial aumentaba,
los tiempos de retencin de los compuestos disminuan sin producirse
variacionesenlaformaoelreadelospicos.Adems,eltiemponecesario
para recuperar las condiciones cromatogrficas iniciales tras un anlisis
aumentaba considerablemente a medida que disminuye la temperatura
inicial.Alavistadeestosresultadossedecidiseleccionarunatemperatura
inicial de 60 C, que era adecuada para conseguir una buena resolucin
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
258
________________________________________________________________________
cromatogrficadeloscompuestos,contiemposderetencinmscortosyel
tiemponecesariopararecuperarlascondicionesparalasiguienteinyeccin
eradetansolo4min.Estatemperaturainicialsemantuvodurante1.5min,
porqueparatiemposmenoresseobservaronproblemasdereproducibilidad
eneltiempoderetencinyelreadepicodelcloroformo,debidoalaco
elucindeestecompuestoconelfrentedeldisolvente.
Con
las
condiciones
cromatogrficas
optimizadas
el
tiempo
4.2.2.ParmetrosdelECD
Latemperaturadeldetector,300C,seseleccionteniendoencuentala
temperatura final alcanzada en el horno del cromatgrafo y las
recomendacionesdelfabricante.
El flujo de gas auxiliar se estudi para los valores de 10, 20, 30 y 40
mL/min. El valor de este flujo est inversamente relacionado con la
sensibilidaddelmtodo.Amedidaqueaumentaelflujodegasauxiliar,la
muestra que eluye de la columna pasa por el detector ms diluida y por
tanto la altura de los picos es menor. Cuando se utiliz un flujo de 10
mL/minseobservabaquelospicostenancola.Paraunflujode20mL/min
laformadelospicoseraadecuada,convaloresdesimetraqueoscilande
0.89a1.02.Losvaloresdeflujode30y40mL/minnoproporcionabanuna
mejora en la simetra de los picos, pero sin embargo tena lugar un una
disminucin progresiva de la sensibilidad. A la vista de los resultados se
seleccionunflujodegasauxiliarde20mL/min.
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
259
________________________________________________________________________
4.2.3.Condicionesexperimentalesoptimizadas
Enlafigura4semuestranloscromatogramasdeunblancodeEtOAcy
de una disolucin de 500 g/L de THMs en EtOAc, analizadas con las
condicionesoptimizadas.Loscompuestosdeinterseluyenenmenosde3.8
min y las anchuras de pico a media altura (wh) estn entre 0.41 y 0.82 s
(Tabla 1). Por tanto, ambos parmetros se ajustan a las especificaciones
consideradasparalacromatografadegasesrpida(tiempodeanlisisde1
DBCM
Disolucin de
500 g/L de
THMs en EtOAc
10
8
6
CFM
4
2
BMF
Hz/102
Hz/104
BDCM
a10minywhde0.3a3s)[33].
2.3
2.4
2.5
4
2
2.25
2.5
2.75
3.25
3.5
3.75
EtOAc blanco
0
2
2.25
2.5
2.75
3.25
3.5
3.75
Tiempo (min)
Figura4:Cromatogramadeunadisolucinde500g/LdeTHMsenEtOAcenlas
condicionesexperimentalesptimas.
4.3.Estudiodelefectodematriz
LapresenciadeefectodematrizenladeterminacindeVOCsensuelos
esmuycomnenmuchasdelastcnicasanalticasempleadasparaestetipo
de anlisis. Esto es debido a la alta complejidad y heterogeneidad de las
muestras y a las fuertes interacciones que experimentan algunos
compuestosconlosconstituyentesdesuelo.
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
260
________________________________________________________________________
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
261
________________________________________________________________________
Conelfindesolucionarelefectodematrizsehapropuestounprotocolo
de adiciones estndar, que ha demostrado funcionar adecuadamente con
matricesdesuelo[21].
rea/102
rea/103
150
50
50
100
100
150
BROMOFORMO
150
200
250
Agua
Vertisol
Jardn
250
Concentracin (g/kg)
200
Jardn
Vertisol
Agua
Concentracin (g/kg)
BROMODICLOROMETANO
Figura5: Pendientesobtenidasparacadacompuestoenlastresmatricesconsideradas
Concentracin (g/kg)
250
0
200
Jardn
Vertisol
Agua
10
12
0
150
250
Concentracin (g/kg)
200
100
DIBROMOCLOROMETANO
100
50
50
10
15
20
Agua
Vertisol
Jardn
25
30
10
15
20
25
30
10
15
20
25
CHLOROFORMO
rea/103
rea/103
30
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
262
________________________________________________________________________
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
263
________________________________________________________________________
4.4.Recuperacionesendiferentesmatrices
Con el fin de determinar la eficacia de extraccin de la versin
simplificadadeQuEChERSparaloscompuestosseleccionadosenmuestras
desuelos,secompararonlaspendientesdelasrectasdecalibracinensuelo
de jardn, Vertisol y agua con la recta obtenida al inyectar en el sistema
cromatogrfico disoluciones de los compuestos en EtOAc a los mismos
niveles de concentracin (50, 100, 150 y 200 g/L). Para realizar estos
experimentosseutilizunarelacingdemuestra:mLdedisolventede1:1,
con el fin de evitar cualquier factor de preconcentracin en el proceso de
extraccin. Al comparar las pendientes se tiene en consideracin la
recuperacin media obtenida en cada matriz a lo largo del intervalo de
concentraciones considerado (50200 g/L). Los valores obtenidos estaban
comprendidosentre6594%(Tabla3).
Tabla3:Recuperacionesdeloscompuestosdeintersenlastresmatricesconsideradas
Matriz
Recuperaciones (%)
CFM
BDCM
DBCM
BFM
Agua
69
78
86
94
Suelo de jardn
70
73
74
76
Vertisol
65
67
69
68
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
264
________________________________________________________________________
orgnica(Koc)esrelativamentebajaparalosTHMs(de40a126L/kg)ypor
tanto,cabraesperaraltasrecuperaciones.Sinembargo,elfactorcrticopara
estos compuestos es su alta volatilidad, que hace que las prdidas de los
mismosduranteelprocesodepretratamientodelamuestraseanaltamente
probables. Este factor explica el orden de los porcentajes de recuperacin
obtenidos. Adems, los buenos resultados de recuperacin alcanzados
demuestranlasposibilidadesdeestatcnicadeextraccinconmuestrasde
suelos,inclusocuandosetrabajaconcompuestosmuyvoltiles.
En lo que respecta a las diferentes matrices de suelo, se obtuvieron
mayores recuperaciones en suelo de jardn que en Vertisol. La
interpretacindeestosresultadosseharealizadodemaneradetalladaenel
apartado4.3.
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
265
________________________________________________________________________
Tabla4:Caractersticasanalticasdelmtodoensuelodejardndopado
Comp.
Repetitividad (%)
R2
Pendiente
instrumental
mtodo
Reproducibilidad
(%)
LD
(ng/kg)
LQ
(ng/kg)
27.20.5
0.9966
3.7
6.7
8.3
659
1998
BDCM
2384
0.9973
2.8
4.4
4.2
17
DBCM
2063
0.9977
2.3
3.3
3.3
14
44
BMF
741
0.9975
2.0
2.5
2.8
159
483
CFM
Todosloscalibradosmostrabanuncomportamientolinealconvaloresde
coeficiente de determinacin (R2) superiores a 0.9966. La validez de los
modelos generados se comprob utilizando ANOVA y ninguno de ellos
presentabafallodeajuste.
La repetitividad del mtodo cromatogrfico se calcul inyectando diez
veceselextractoprocedentedeunamuestradesuelodejardndopadocon
una concentracin de 100 g/kg. La repetitividad y reproducibilidad del
procedimiento completo se calcularon inyectando diez extractos
procedentes de someter al procedimiento de extraccin y anlisis
cromatogrfico a diez alcuotas de suelo de jardn dopado a la misma
concentracin.Losextractosseinyectaronenunmismoda,enelcasodela
repetitividad, y a lo largo de un periodo de dos semanas en el caso de la
reproducibilidad. Los valores obtenidos (expresados como RSD) se
muestranenlatabla4ypuedenconsiderarsealtamentesatisfactorios.
Los lmites de deteccin y cuantificacin se estimaron utilizando las
siguientesecuaciones:
L D =
10
3.3
LQ =
S
S
dondeesladesviacinestndar(nmeroderplicas,n=10)desealde
unpicocorrespondienteaunarelacinseal/ruidodeaproximadamente3;
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
266
________________________________________________________________________
Seslapendientedelarectadecalibradoy3.3eselvalordelparmetrotde
Student(paran1,0.99).
Conlametodologapropuestasealcanzaronlmitesdedeteccinde6a
659 ng/kg. Estos lmites son del mismo orden a los que publica la USEPA
para el mtodo 5021 (HSGCMS), que se calculan en muestras de arena y
losvaloresobtenidosparalosTHMsvande210a300ng/kg[2].
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
267
________________________________________________________________________
Tabla5:Determinacindeloscompuestosobjetodeestudioendosmaterialesde
referenciacertificados
CRM 631
Valor predicho
(g/kg)
Valor de
referencia
(g/kg)*
Intervalo de
prediccin
(g/kg)*
Cloroformo
645
60.4
14.0-136
BDCM
977
74.9
45.9-135
DBCM
1466
84.2
2.37-166
Bromoformo
1227
64.1
0-131
Cloroformo
765
98.7
46.0-151
BDCM
728
90.6
45.9-135
DBCM
13010
131
63.8-198
817
74.5
27.5-122
Compuesto
CRM 635
Bromoformo
*Valoresproporcionaosenelmaterialdereferenciacertificado
Latabla5muestralasconcentracionespredichas,losvalorescertificados
y el intervalo de prediccin para cada compuesto. En todos los casos el
intervalo de confianza de la prediccin era inferior al 8 %. Las
concentraciones predichas estaban, en la mayora de los casos, muy
prximas a los valores de referencia y en todos los casos estos valores
estaban dentro del intervalo de prediccin especificado en el material de
referencia. Estos resultados ponen de manifiesto la validez de la
metodologa propuesta para la determinacin de estos compuestos en
matricesdesuelos.
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
268
________________________________________________________________________
5.CONCLUSIONES
Se ha implementado un mtodo basado en extraccin QuEChERS
seguida de cromatografa de gases rpida y deteccin mediante captura
electrnicaparaladeterminacindeTHMsensuelos.
ElmtodoQuEChERSsimplificadocumpleconlosrequerimientosdela
qumica verde y proporciona resultados altamente satisfactorios con un
procedimiento rpido, sencillo y econmico, que utiliza instrumental
comnmentedisponibleenloslaboratoriosdeanlisis.
Sehanoptimizadolascondicionesexperimentalescromatogrficas.Con
elmtodofinaloptimizadoloscompuestosdeinterseluyenenmenosde
3.8 min, y tienen anchuras de pico a media altura (wh) de 0.41 a 0.82 s
(cromatografa de gases rpida). El tiempo necesario para recuperar las
condiciones iniciales es de 4 min, por lo que es posible analizar 1 extracto
cada10min.
Sehademostradolaexistenciadeefectodematriz,porcomparacinde
laspendientesdelasrectasdecalibracinendiferentesmatrices.
Las recuperaciones obtenidas para los compuestos de inters en
diferentestiposdematricesseencontrabanenelintervalode65a94%.
Sehandeterminadolascaractersticasanalticasdelmtodoenmuestras
desuelodejardndopado.Loslmitesdedeteccinobtenidos(6659ng/kg)
sondelmismoordenalosdescritosenliteraturaconotrasmetodologasde
anlisis.Larepetitividad(2.56.7%)ylareproducibilidaddelprocedimiento
completo(2.88.3%)puedenconsiderarseexcelentes.
Para validar el mtodo optimizado se analizaron dos materiales de
referencia certificados: un suelo arcillolimoso (RTCCRM631) y un suelo
arcilloso(RTCCRM635).Seutilizelprotocolodeadicionesestndarcomo
estrategia de calibracin y los resultados obtenidos fueron altamente
satisfactorios.
VIIQuEChERSsimplificadoGCECDparaladeterminacindeTHMsensuelos
269
________________________________________________________________________
6.BIBLIOGRAFA
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http://www.epa.gov/osw/hazard/testmethods/sw846/pdfs/5021.pdf
[3] USEPA Method 5035, Closed System Purge and Trap Extraction for
Volatile Organics in Soil and Waste Samples, Test Methods for
Evaluating Solid Waste, Physical/Chemical Methods, SW846, 5000
series,USEPA,Washington,USA,1996.
http://www.epa.gov/osw/hazard/testmethods/sw846/pdfs/5035.pdf
[4] USEPA Method 5032, Volatile Organic Compounds by Vacuum
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Methods
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for
Evaluating
SW846,
5000
Solid
series,
Waste,
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Washington,USA,1996.
http://www.epa.gov/osw/hazard/testmethods/sw846/pdfs/5032.pdf
[5] USEPA Method 5000, Sample Preparation for Volatile Organic
Compounds,
Test
Physical/Chemical
Methods
Methods,
for
Evaluating
SW846,
5000
Solid
series,
Waste,
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[6] USEPA Method 8260B, Volatile Organic Compounds by Gas
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Evaluating Solid Waste, Physical/Chemical Methods, SW846, 8000
series,USEPA,Washington,USA,1996.
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270
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VII
275
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
DETERMINATIONOFTRIHALOMETHANESINSOILMATRICES
BYSIMPLIFIEDQUICK,EASY,CHEAP,EFFECTIVE,RUGGED
ANDSAFEEXTRACTIONANDFASTGASCHROMATOGRAPHY
WITHELECTRONCAPTUREDETECTION
SaraHerreroMartn,CarmeloGarcaPinto,JosLuisPrezPavn*,and
BernardoMorenoCordero
DepartamentodeQumicaAnaltica,NutricinyBromatologa.Facultadde
CienciasQumicas,UniversidaddeSalamanca.PlazadelosCadoss/n,
37008Salamanca,SPAIN
*Correspondingauthor:Tel.:+34923294483;Fax:+34923294483;
(email)jlpp@usal.es
276
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
Abstract
A method based on QuEChERS extraction is proposed for the
determination of trihalomethanes (chloroform, bromodichloromethane,
dibromocloromethaneandbromoform)insoilsamples.Thenewversionof
QuEChERSadaptedtosoilsamplesconsistsofliquidextractionwithethyl
acetate, the addition of water to moisten the samples, saltingout
partitioningofthewaterwithanhydrousMgSO4, anddirectinjectionofthe
organic extract, obtained after the centrifugation step, into the gas
chromatograph. This simplified extraction procedure maintains the
advantagesoftheoriginalmethodandavoidssomesteps,makingthefinal
procedure simpler, faster, and cheaper, with the consequent reduction in
errorsassociatedwithsamplemanipulation.
Theexperimentalconditionsoftheanalyticalmethod,basedonfastgas
chromatography(FGC)andmicroelectroncapturedetection(ECD),were
optimised.Thecolumnandovenprogramusedallowedfastseparationof
thecompoundsinlessthan4minandthetotalanalysiscycletimewasas
short as 10 min. The existence of a matrix effect was checked and the
analytical conditions of the method were studied in a fortified garden soil
sample. The highly sensitive and selective detector used afforded to
detectionlimitsintheorderofng/kgforthetargetcompounds.Tovalidate
the proposed method two certified reference materials (CRMs) were
analysed.
277
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
1.Introduction
Theextractionofvolatileorganiccompounds(VOCs)fromsoilsamples
isacriticalstepowingtothediversityandcomplexityofsuchsamplesand
to the low concentrations and high volatility of the compounds present in
them. Extraction has mainly been performed by means of headspace
techniques [1]. The Unites States Environmental Protection Agency
(USEPA) proposes static headspace (SHS) [2], purge and trap (P&T) [3],
and vacuum distillation [4] as sample preparation techniques for GC
determination of VOCs from soils and other solid matrices [5,6]. Many
publicationsbasedonGCmethodshavereportedtheuseofHS[711],P&T
[1214] and HSsolidphase microextraction (HSSPME) [7,15,16] as
extractiontechniques.Headspacetechniqueshavetheadvantagesofbeing
solventfree; sample manipulation is minimum, and they are easy to
automate in online procedures. The main drawback is that they are
somewhat matrixdependent when matrices as complex as soils are
addressed, in which strong interactions between the analytes and other
sample components occur. Because of this, the desired efficiency of
extraction is sometimes impossible to achieve. In recent years, some
strategies aimed at improving extraction efficiency have been proposed.
Somereportshavedescribedtheuseofamethanolextractionsteppriorto
analysis by P&T [17,18]. Other authors have proposed the use of an
internally cooled SPME device [19] or the multiple headspaceSPME
technique [20]. When the simplest headspace mode (static headspace) is
used,thedrawbackoflowcompoundpreconcentrationinthegasphaseis
added to those mentioned above. To counter this disadvantage, our
research group proposes analternative, consisting of thecoupling of SHS
with a programmable temperature vaporizer (PTV) to preconcentrate the
compounds before they are injected into the GC system [21]. Non
278
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
279
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
Trihalomethanes
(chloroform,
bromodichloromethane,
280
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
2.2.Standardsolutionsandsamples.
2.2.1.Standardsolutions
Astocksolutionoftrihalomethanes(5.00mg/L)inethylacetate(EtOAc)
was prepared and stored in a refrigerator at 4C. Dilutions of this stock
solutioninEtOAcwereusedtooptimizetheexperimentalconditions,and
tospikethesoilandwatersamples.
2.2.2.Soilsamples
2.2.2.1.Spikedsoils
Soilmatriceswereusedfortheoptimizationofthesamplepretreatment
step,tochecktheexistenceofamatrixeffectandtodeterminetheanalytical
characteristicsofthemethod.Twodifferentsoiltypeswereused:asoilwith
a high organic content, from a public garden (Salamanca, Spain) and a
Vertisol,whichhasahighpercentageofclay(Tabasco,Mexico).
Thesoilsamplescollectedwereairdriedonaheatingplateat90Cfor
48hwithfrequentturninginordertoremoveanytracesofthecompounds
of interest and humidity. The blank matrices obtained were ascertained to
befreeofthetargetVOCsbeforespiking.Inthechromatogramsobtainedit
ispossibletonotethepresenceofchloroformatatracelevelconcentration.
However, the same peak was obtained when pure EtOAc was analyzed.
Thissignalofchloroformwassubtractedtoalltheanalyzedsamples.Many
authors have reported the ubiquity of this compound in the environment
andthepresenceoftracelevelsinthetargetsanalyzed[3638].
Theprocedureusedtospikethesampleswasasfollows:20gofsoilwas
placedina100mLflaskand2mLofaTHMssolutioninethylacetatewas
added (at a suitable concentration for each case). The vial was sealed
hermetically and shaken vigorously for 15 minutes to achieve perfect
homogenizationofthecompoundsinthematrix.Thesampleswerestored
in a refrigerator (4 C) for 15 days to allow the interaction between the
281
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
compoundsandthematrixtotakeplace,withaviewtoobtainingsamples
thatwouldresemblenaturalsoilsasmuchaspossible.
2.2.2.2.CRMsoils
Tovalidatetheoptimisedmethod,twocommercialsoilswithacertified
content of the target compounds were analysed. The certified reference
materials(CRMs)employedwere:asiltyclaysoil(RTCCRM631)andaclay
soil (RTCCRM635), both of them purchased from LGC Promochem
(Barcelona,Spain).
2.2.3.Watersamples
Spiked water samples were used in the study of the matrix effect.
Solutions of the target compounds were prepared in ultrapure water and
the samples were subjected to the same procedures of extraction and
chromatographicanalysisappliedtothesoilsamples.Theultrapurewater
used to prepare the solutions did not contain detectable concentrations of
anyofthetrihalomethanes,exceptforchloroform,whichwaspresentinall
theblanksanalyzed,asmentionedabove.
2.3.Apparatus
Gas chromatographic analysis was performed with an Agilent
7890A.The capillary column used was a DBVRX for fast gas
chromatography (20 m x 0.18 mm x 1 m) from Agilent J&W. The carrier
gas(1.5mL/min)washeliumN50(99.995%pure;AirLiquide).Thedetector
used was a 63Ni microelectroncapture detector ( ECD). The makeup gas
usedwasnitrogen(99.999%;AirLiquide).
The gas chromatograph was equipped with an Agilent 6890
Programmable Temperature Vaporizer (PTV) inlet. The liner used was an
empty, deactivated multi baffle, with an internal volume of 150 L. To
introduce the samples into the PTV, an automatic liquid sample injection
system(Agilent7683)wasused.
282
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
2.4.Analyticalprocedures
2.4.1.Samplepretreatment(QuEChERS)
5gofsoilsamplewasweighedina15mLglasscentrifugetubewitha
screwcap,whichkeptthetubeclosedduringthegreaterpartofthesample
preparation process, thus avoiding losses of more volatile compounds
duringthisstageasmuchaspossible.3mLofultrapurewaterwasaddedto
the soil sample, such that water, which is more polar than the target
analytes, displaces them from their adsorption sites in soil. This mixture
was shaken for 1 min with a vortex device. Then, 2.5 mL of ethyl acetate
wasadded(extractionsolvent)andthemixturewasshakenvigorouslyfor1
min, using a vortex mixer at maximum speed. Following this, 2 g of
anhydrousmagnesiumsulfate(preparedinadvancedinaclosedvial)was
added, and the tube was immediately vortexmixed for 1 min (this was
performed immediately to prevent the formation of agglomerates that
occurredwhentheanhydrousMgSO4washydratedwithwater).Then,the
tubewascentrifugedat5000rpmfor5min.Finally,theorganiclayerwas
transferred into an autosampler vial for GC analysis and subjected to
subsequentmeasurement.Aschematicdiagramoftheprocedureisshown
infigure1.
2.4.2.GCECDanalysis
The injection mode used was hot splitless. A volume of 0.2 L of the
organic extract was injected into the liner at 250 C. The liner temperature
was kept at 250 C throughout the analysis time. The splitless time was
fixedat1minandtheseptumpurgeflowwas4.0mL/min.
The temperature of the column was programmed from 60C (1.5 min);
thiswasincreasedat65C/minto175C,andthenfurtherincreasedat45
C/minto250Candheldfor1.00min.Thetemperaturerampsusedarethe
maximum one permitted by the oven. The helium flow was 1.5 mL/min.
283
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
Under these conditions the compounds eluted in less than 4 min and the
totalchromatographicruntimewas5.94min.
TheECDparameterswere:detectiontemperature300Candmakeup
flowgas(N2)20mL/min.
DataacquisitionwasperformedwithChemstationG2075BAVer.B.03.01
softwarefromAgilentTechnologies.
3.Resultsanddiscussion
3.1. Variables involved in the pretreatment step for the extraction of
trihalomethanesfromsoilsamples.
In a previous publication [35] a detailed study of the different steps
involvedintheQuEChERSmethodfortheextractionofvolatileandsemi
volatile halogenated compounds from soil samples and the most
appropriate mode of injection of the extracts was done. Although similar
recoverieswereobtainedwithacetonitrile(MeCN)anethylacetate(EtOAc)
solvents,thelattershowedbetterchromatographicbehaviourandallowed
higher injection volumes, which gives rise to higher sensitivity of the
chromatographic methodology. Hot splitless injection mode provided the
bestresultsforvolatilecompoundssuchasthosestudiedinthiswork.
Additionofwatertodrysamplesisverycommon,soavolumeof1.5mL
wasaddedto2.5gofsoil.Thisvolumewasenoughtocompletelysaturate
the sample and appropriate to provide a proper homogenisation of the
sample during the vortexmixing step. Addition of salts may affect the
extraction of the THMs from soils and the phase separation process.
Different combinations of MgSO4 with and without NaCl were studied in
theextractionof2.5goftheCRM631certifiedmaterial.
Table2showstheresultsofexperimentsperformed.Applicationofthe
extractionprocedurewithouttheadditionofsaltswasalsochecked,butthe
phaseseparationobtainedwasinadequate.ThepresenceofNaCldoesnot
284
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
affect the recoveries of THMs from soil sample. Moreover, there were no
differences in the amount of matrix coextracted components (degree of
cleanupoftheextract)whentheamountofNaCladdedwasvaried,ascan
be seen in the chromatograms shown in figure 2. Moreover, the detector
used in this work (ECD) is highly selective for halogenated compounds,
preventing the presence of many possible interfering matrix constituents
andhenceaffordingverycleanchromatograms.Waterispartiallymiscible
withEtOAc,andthereforeafterextractionasmallamountofwaterremains
intheorganicextract(only7.94%ofwaterissolubleinEtOAcat20C[39],
whichcaneasilyberemovedwiththeadditionof1gofMgSO4.Inorderto
simplifythesamplepretreatmentasmuchaspossible,noadditionofNaCl
wasperformedinthefinalprocedure.
The sensitivity of the method depends on the sample:solvent ratio. We
performed a study in which sample:solvent ratios of 1:1 and 2:1 were
investigated.Thesamplesizesstudiedwere2.5gand5g;bothsizeswere
extractedwith2.5mLofsolvent(theamountofwaterandsaltusedforthe
sample size of 5 g were scaled proportionally). For this experiment, two
different soil matrices (a garden soil and a Vertisol) spiked at two
concentration levels (50 g/kg and 200 g/kg) were subjected to the
extraction procedure using the two sample:solvent ratios described above
and the extracts were injected in triplicate. Figure 3 shows the results
obtained. When the ratio used was 2:1, the peak area was improved by a
factorrangingfrom1.79to1.96.Nosignificantdifferenceswereobservedin
the increases in signal either with the two concentrations or with the two
soilmatriceswithwhichtheexperimentwasperformed.
The use of 5 g of sample did not complicate or prolong the extraction
procedure,andthereforeitwasdecidedtousea2:1sample:solventratiofor
maximum sensitivity; the amounts of water and salts used were scaled
proportionally (see section 2.4.1). Thus, the simplified QuEChERS method
wasverysimpleandfast,asingleanalystcanprepareabatchofatleast6
285
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
extractsinanhour,usingfewmaterialsandconsuminglessthan20mLof
EtOAc.
3.2.Experimentalchromatographicvariables
3.2.1.Chromatographicparameters
In order to perform the separation of the four THMs by fast
chromatographyasolutionof500g/LofthetargetcompoundsinEtOAc
was injected. The maximum temperature ramps permitted by the oven of
the chromatograph used were chosen (see section 2.4.2). The final
temperature selected (250 C) which was maintained for 1min to prevent
possibleproblemsduetothememoryeffectwassufficienttoguaranteethe
elution of the compounds and was appropriate for the technical
specificationsofthechromatographiccolumn.Theinitialtemperatureofthe
columnwasstudiedforvaluesrangingbetween45and60C.Astheinitial
temperaturewasincreasedtheretentiontimesofthecompoundsdecreased,
and no differences in peak areas and shapes were observed. An initial
temparture of 60 C was chosen which was appropriate to accomplish a
suitableresolutionofthecompoundswiththeshortestretentiontimes.This
value was maintained for 1.5 min, because shorter times affected to the
repeatabilityontheretentiontimeandpeakareaofchloroformowingtothe
coelution of this compound with the solvent peak. With the optimized
conditions,theGCruntimewas5.94min.Thusconsideringthetimeneeded
to achieve the initial conditions (4 min) it was possible to analyze an
extractedsampleevery10min:i.e.,approximately6analysesperhour.
3.2.2.ECDparameters
Thetemperatureofthedetector,300C,waschosentakingintoaccount
thefinaltemperatureachievedintheovenandtherecommendationsofthe
manufacturer.
286
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
The makeup flow was studied for values of 10, 20, 30 and 40 mL/min.
With a flow of 10 mL/min, an important peak tailing was found in the
chromatogram. When a makeup flow of 20 mL/min was used, good peak
shapes where obtained, with symmetry values ranging from 0.89 to 1.02.
With makeup flows of 30 and 40 mL/min, no improvement in peak
symmetry was obtained, whereas a progressive decrease in sensitivity
occurred. Accordingly, we chose a makeup flow of 20 mL/min as the
optimumvalueforthisvariable.
3.2.3.Optimizedexperimentalconditions
Figure4showsthechromatogramsofablankanda500g/Lsolutionof
THMs in EtOAc analyzed under the optimized conditions. The target
compoundseluted in less than 3.8 min, and thewidths at half height (wh)
rose from 0.41 to 0.82 s (Table 1). Therefore, both parameters match the
specificationsoffastgaschromatography(runtimesfrom1to10minand
whfrom0.3to3s)[40].
3.3.Matrixeffect
Theexistenceofamatrixeffectisverycommoninmanyoftheanalytical
techniques used for the determination of VOCs in soils. To evaluate the
possible existence of a matrix effect when the simplified QuEChERS
procedure was applied, two different soil samples (a garden soil and a
Vertisol) spiked at different concentration levels for each compound (50,
100, 150 and 200 g/kg) were extracted. Additionally, a water sample
spikedatthesameconcentrationlevelswassubjectedtothesameextraction
procedure applied to the soil samples. The organic extracts obtained from
thesoilsandwatersampleswereanalyzedwiththeoptimizedGCmethod
(threeinjectionsforeachlevel),andtheslopesofthecalibrationcurveswere
compared.Theresultsshowthatamatrixeffectwaspresent.
For most of the compounds there were significant differences in the
slopes for the three matrices considered. Moreover, the influence of the
287
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
matrix was different for each of the compounds. Thus, the values of the
slopesobtainedforthegardenandVertisolsoilswithrespecttotheslopes
in water were lower by 1 and 16% for the CFM, respectively, while these
decreaseshadvaluesof6and14%fortheBDCM;of13and20%forDBCM,
andof19and27%forBFM.Thesedifferencescouldbeexplainedinterms
of the different interactions of the compounds in the two types of soils,
whichhaveacomplexporousstructureandcontaindifferentproportionsof
minerals and natural organic components. The differences in the recovery
percentages were more evident as the Koc of the compounds increased, as
expected.Toovercomethismatrixeffect,astandardadditionsprotocolhas
beenproposed,whichhasshowntoworkproperlyforsoilmatrices[21].
3.4.Analyterecoveriesindifferentmatrices.
In order to determine the extraction efficiency of the simplified version
ofQuEChERSforthetargetcompounds,theslopesofthecalibrationcurves
in the garden soil, the Vertisol and water were compared with the curves
obtainedwhenEtOAcsolutionsofthecompoundswereinjecteddirectlyat
the same concentration levels (50, 100, 150 and 200 g/L) into the GC
system. To perform these experiments, a sample:solvent ratio of 1:1 was
used in order to avoid any preconcentration factor. Upon comparing the
slopes,themeanrecoveriesalongtheconcentrationrangewereconsidered.
The values obtained were satisfactory, lying within the 6594 % recovery
range(Table3).Thehighestrecoveriesforallthecompoundswereachieved
inthewatersample.Nevertheless,theextractionpowerofthetechniquein
complex soil matrices was not as different as would be expected from the
extraction efficiency in water samples. As can be seen in table 1, all the
compounds have similar octanolwater coefficients (Kow), and hence this
parameter does not influence the different recoveries achieved for the
compounds. The organic partition constant (Koc), which provides
informationabout the strength of binding of the compounds to the soil, is
288
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
relatively low for the THMs (from 40 to 126 L/kg) and therefore high
extractionrecoveriesmaybeexpected.However,thecriticalfactorforthese
compoundsistheirhighvolatility,whichincreasesthelikelihoodoflosses
during the different steps of the sample pretreatment procedure.
Nevertheless, the good recovery results obtained validate the applicability
of the extraction technique to soil samples, even for highly volatile
compounds.
3.5.Analyticalcharacteristicofthemethodinfortifiedgardensoilsamples
A garden soil sample, spiked at different concentration levels (50, 100,
250,350and500g/kg),wasselectedtostudytheanalyticalcharacteristics
of the method (Table 4). Three aliquots of 5 g of each concentration level
weresubjectedtotheextractionprocedure(Section2.4.1.),andeachofthe
extracts obtained was analyzed in triplicate. All the calibrations showed
linearbehaviour,withvaluesofthecoefficientofdetermination(R2)above
0.9966. The validity of the models generated was checked using ANOVA,
andnoneofthemodelsgeneratedwasfoundtobesubjectoflackoffit.
The instrumental repeatability was evaluated by injecting ten times an
extractobtainedfromagardensoilspikedataconcentrationof100 g/kg.
The repeatability of the method and the reproducibility of the whole
procedurewerecalculatedbyinjectingtendifferentextractsobtainedfrom
a garden soil sample spiked at the same concentration. The extracts were
injectedinasingledayinthecaseofrepeatabilityandoveraperiodoftwo
weeks in the case of reproducibility. The values (expressed as RSD) are
showninTable4andwerehighlysatisfactory.
Thedetectionlimits(DLs)andquantitationlimits(QLs)wereestimated
usingthefollowingequations[41]:
DL =
3.3
S
QL =
10
S
289
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
whereisthestandarddeviationofpeakresponsefortenreplicates(n=
10)corresponding to anS/N ratioofapproximately 3;S is the slopeof the
calibration curve, and 3.3 is Students t factor (n1, 0.99). The sample that
providedthedesiredpeakresponsewasagardensoilsamplespikedat12.5
ng/kg for DBCM and BDCM and 50.0 ng/kg for BFM. Chloroform was
presentinthepuresolvent,andhence10injectionsofEtOAcwereusedto
estimateitslimitofdetection.
The proposed methodology afforded detection limits from 6 to 659
ng/kg.Thedetectionlimitsobtainedareinthesameorderasthosereported
byUSEPAforthe5021method(HSGCMSconfiguration)[2].
3.6.DeterminationofTHMsintwodifferentCRMsoils
To validate the optimized method, two certified reference materials a
silty clay soil (RTCCRM631) and a clay soil (RTCCRM635) with certified
contentsofthefourTHMswereanalyzed.
A standard additions protocol was proposed for the accurate
determination of trihalomethanes. A sixlevel calibration study was
performed, analyzing three replicates from each level. Table 5 shows the
calculatedconcentrations,thecertifiedvalue,andthepredictionintervalfor
each compound. The confidence intervals of prediction were, in all cases,
lessthan8%.Thecalculatedconcentrationswere,inmostcases,closetothe
reference values and, in all cases, those values were within the prediction
interval specified in the certified material. This reveals the validity of the
methodology proposed for the determination of these compounds in soil
matrices.
4.Conclusions
ForthefirsttimeamethodbasedonQuEChERSextractionfollowedby
fast gas chromatography and microelectron capture detection has been
implemented for the determination of THMs in soil samples. The method
290
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
meetstherequirementsofgreenchemistryanditusesinstrumentswhich
are commonly affordable for any analytical laboratory and therefore it
could be an interesting alternative to other existing methods which need
specificandexpensiveinstrumentationtoperformthemeasurements.
Withtheoptimizedexperimentalconditionsthetargetcompoundselute
in less than 3.8 min, with widths at half height (wh) ranging from 0.41 to
0.82s.Thetimeneededtoachieveinitialconditionswas4min,andhenceit
waspossibletoanalyzeanextractevery10min.
Therecoveriesofthetargetcompoundsobtainedfromdifferenttypesof
matricesliewithinthe6594%recoveryrange.Theanalyticalcharacteristics
of the method were calculated in a fortified garden soil sample. The
detection limits achieved (6659 ng/kg) are in the same order as those
obtained using other methodologies reported in the literature. The
repeatabilityofthemethod(2.56.7%)andthereproducibilityoftheoverall
approach(2.88.3%)canbeconsideredexcellent.
To validate the optimized method, two certified reference materials a
silty clay soil (RTCCRM631) and a clay soil (RTCCRM635) were
analyzed. The calibration strategy used was the standard additions
protocol,andtheresultsobtainedwerehighlysatisfactory.
Acknowledgments
The authors acknowledge the financial support of the DGI (CTQ2007
63157/BQU) and the Consejera de Educacin y Cultura of the Junta de
Castilla y Len (Projects SA112A08 and GR87) for this research. S.H.M. is
alsogratefultoSpainsMECforanawarddoctoralfellowship.
291
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
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VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
294
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
295
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
Figurelegends
Figure1:SchematicrepresentationofthesimplifiedQuEChERSprocedure.
Figure3:Comparisonofthepeakareasobtainedforthetargetcompounds
whenusingthesample:solventratiosof1:1and2:1forsoilsamplesspiked
at50g/kg(a)and200g/kg(b).
Soil
Water
2.5 mL of
EtOAc
Vortex mixing
EtOAc
1min
5 g of soil + 3 mL of
uhq water
Vortex mixing
1min
2- Centrifugation 5 min
at 5000 rpm
2 g of
anhydrous MgSO4
Autosampler vial
for GC analysis
Transference of the
organic layer
296
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
Figure1:
297
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
BMF
100
50
1g MgSO4
25
0
1
DBCM
125
75
BMF
CFM
DBCM
CFM
150
BMF
175
DBCM
BDCM
200
CFM
Hz/102
BDCM
BDCM
Figure2:
6
Time (min)
298
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
Figure3:
Peak area/103
12
10
8
1:1
2:1
4
2
0
Garden
Vertisol
Chloroform
Peak area/103
Garden
Vertisol
Garden
Vertisol
Bromodichloromethane Dibromochloromethane
Garden
Vertisol
Bromoform
40
30
1:1
20
2:1
10
0
Garden
Vertisol
Chloroform
Garden
Vertisol
Garden
Vertisol
Bromodichloromethane Dibromochloromethane
Garden
Vertisol
Bromoform
299
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
DBCM
10
Hz/102
BMF
CFM
Hz/104
BDCM
Figure4:
2
2.4
2.3
2.5
EtOAc solution
500 g/L of THMs
4
2
2.25
2.5
2.75
3.25
3.5
2
EtOAc blank
0
2
2.25
2.5
2.75
3.25
3.5
3.75
Time (min)
3.75
300
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
Table1:Boilingpoints,retentiontimes,widthsathalfheight(wh),octanol
waterpartitioncoefficients(Kow)andorganiccarbonpartitionconstant(Koc).
Compounds
Boiling point
(C)
tR
(min)
wh
(s)
Log Kow
Koc
(L/kg)
Chloroform (CFM)
61
2.44
0.41
1.97
40
Bromodichloromethane (BDCM)
90
2.76
0.83
2.0
87
Dibromochloromethane (DBCM)
117
3.25
0.81
2.16
107
Bromoform (BFM)
149
3.72
0.82
2.35
126
Table2:Influenceofdifferentsaltscombinationsontherecoveriesofthe
targetcompoundsfrom2.5gofthecertifiedsoilCRM635.
Salts
MgSO4 (g)
Compounds
NaCl (g)
0
1*
0.25*
BDCM
DBCM
BMF
1.00 (0.5)
0.95 (0.4)
0.95 (1.3)
0.98 (1.1)
1.00 (5.6)
0.5
1.04 (4.9)
1.03 (2.6)
1.03 (4.3)
0.99 (4.3)
0.93 (1.4)
0.95 (3.1)
0.94 (4.4)
0.91 (4.3)
0.25
0.99 (1.1)
1.01 (0.7)
1.02 (0.7)
0.98 (1.1)
0.5
1.08 (1.0)
1.02 (0.1)
1.03 (0.8)
0.98 (1.1)
Value1assignedtothecombinationofsaltsproposedintheoriginalQuEChERS;bn=3
*OriginalQuEChERS:0.5gofsaltspergramofsampleinproportion4:1(MgSO4:NaCl)
301
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
Table3:AveragerecoveriesofTHMsfromdifferentmatrixes
Matrix
Water
Garden soil
Vertisol
CFM
69
70
65
Recoveries (%)
BDCM
DBCM
78
86
73
74
67
69
BFM
94
76
68
2384
2063
741
BDCM
DBCM
BFM
100g/kg;n=10
27.20.5
Slope
CFM
Compound
0.9975
0.9977
0.9973
0.9966
R2
2.0
2.3
2.8
3.7
Instrumental
Repeatability (%)a
2.5
3.3
4.4
6.7
Method
DL
(ng/kg)
659
6
14
159
Reproducibility
(%)a
8.3
4.2
3.3
2.8
Table4: Analyticalcharacteristicsofthemethodinfortifiedgardensoilsamples
483
44
17
1998
QL
(ng/kg)
302
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
303
VIISimplifiedQuEChERSGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
Table5:Determinationofthetargetcompoundsinthecertifiedreference
materials
CRM 631
Calculated Value
(g/kg)
Reference Value
(g/kg)*
Prediction Interval
(g/kg)*
CFM
645
60.4
14.0-136
BDCM
977
74.9
45.9-135
DBCM
1466
84.2
2.37-166
BMF
1227
64.1
0-131
Compound
CRM 635
CFM
765
98.7
46.0-151
BDCM
728
90.6
45.9-135
DBCM
13010
131
63.8-198
817
74.5
27.5-122
BMF
*ValuesprovidedintheCertificatesofAnalysisoftheCRMsoils
VIII
APLICACINDELMTODOQuEChERS
SIMPLIFICADOCROMATOGRAFADE
GASESRPIDAESPECTROMETRADE
MASASPARALADETERMINACIN
DETHMsYBTEXENSUELOS
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
307
________________________________________________________________________
1.INTRODUCCIN
El suelo es una matriz compleja y heterognea, con una estructura
porosa que contiene tanto componentes orgnicos como inorgnicos.
Actualmente, el suelo est sujeto a una fuerte contaminacin por
compuestos qumicos y juega un papel muy importante en el medio
ambiente, mediante la prevencin de la contaminacin de los ecosistemas
adyacentes.
Cuando los agentes contaminantes llegan al suelo, experimentan
diversas interacciones fisicoqumicas con sus componentes orgnicos y
minerales. Dentro de los diferentes agentes contaminantes del suelo y los
sedimentos, los compuestos orgnicos voltiles (VOCs) son los ms
prevalentes, mviles y, comparativamente, los menos estudiados [1]. De
muchosdelosVOCsysusproductosdedegradacinsesabeosesospecha
quesontxicosycarcingenos.Sonespecialmentepeligrososcomofuentes
potenciales de contaminacin a largo plazo de las aguas subterrneas, la
atmsferaoloscultivosagrcolas.LaUSEPAhadeterminado,enlaguade
monitorizacindelossuelos(soilscreeningguidance),lasvasmsprobables
deexposicinaestoscompuestosparaloshumanos,entrelasqueestn:la
ingestin de agua o alimentos contaminados, la inhalacin y la exposicin
drmica a estos compuestos [2]. Su impacto no se limita a los efectos
adversosdirectossobrelasaludhumanaydelosanimales,sinoqueestos
compuestos tambin deterioran las propiedades del suelo y los
procedimientos para eliminarlos son complicados, muy laboriosos e
implicanunaltocoste.
Dentro de los VOCs considerados como contaminantes habituales del
suelo en diferentes protocolos y normativas [3,4] estn los trihalometanos
(THMs:
cloroformo,
bromodiclorometano,
dibromoclorometano
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
308
________________________________________________________________________
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
309
________________________________________________________________________
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
310
________________________________________________________________________
2.OBJETIVOS
El objetivo de este trabajo consiste en estudiar las posibilidades de la
utilizacindeunespectrmetrodemasasparaladeterminacin,mediante
cromatografadegasesrpida,deTHMsyBTEXenmuestrasdesuelosque
han sido sometidas a un proceso de extraccin con el mtodo QuEChERs
simplificado.
ElprincipalinconvenientecomnmenteasociadoalmtodoQuEChERS,
de baja preconcentracin de los compuestos en los extractos, se solucion
utilizandolainyeccindegrandesvolmenesdemuestra(LVI),medianteel
uso de un PTV. Adems, se utilizar el modo de adquisicin de datos de
seguimientodeionesseleccionados(SIM),queproporcionamejoreslmites
decuantificacinenelanlisisdecompuestosespecficos.
Se optimizarn las condiciones experimentales de anlisis; se realizar
unestudioparaconfirmarlaexistenciadeefectodematrizyseestudiarn
lascaractersticasanalticasdelmtodoenunamuestradesuelodejardn.
Finalmente,elmtodosevalidarmedianteelanlisisdedosmaterialesde
referenciacertificados(CRMs).
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
311
________________________________________________________________________
3.PARTEEXPERIMENTAL
3.1.Reactivos
El acetato de etilo de grado HPLC (CHROMASOLV Plus) fue
suministradoporSigmaAldrich(Steinheim,Alemania).Lostrihalometanos
(cloroformo, bromodiclorometano, dibromoclorometano y bromoformo) se
obtuvieron de Supelco (Bellefonte, PA, USA); tolueno, etilbenceno y m
xilenofueronsuministradosporAcrosOrganics(Geel,Blgica)yelbenceno
se obtuvo de Sigma Aldrich (Sleinheim, Alemania). Las sales: sulfato de
magnesio anhidro (extra puro) y cloruro sdico (grado reactivo) eran de
Scharlau (Barcelona, Espaa). En todo el estudio se utiliz agua ultrapura
obtenidaconunsistemadepurificacindeaguaElgastatUHQ.Latabla1
muestralasprincipalescaractersticasdeloscompuestosobjetodeestudio.
CHCl2Br
CHClBr2
CHBr3
C6H6
C7H8
C8H10
C8H10
Bromodiclorometano (BDCM)
Dibromoclorometano (DBCM)
Bromoformo (BMF)
Benceno (BZN)
Tolueno (TLN)
Etilbenceno (ETB)
m-xileno (m-XLN)
139
136
111
80
149
117
90
61
Punto de
ebullicin
(C)
40
87
107
126
66
145
207
204
2.0
2.16
2.35
2.13
2.75
3.14
3.20
(L/kg)
Koc
1.97
Log Kow
5.43
5.38
4.92
4.41
5.45
4.99
4.55
4.26
tR
(min)
0.62
0.55
0.60
0.54
0.66
0.62
0.61
0.36
Anchura de
pico a media
alturaa(s)
91
91
91
78
173
127
83
83
Ion de
cuantificacin
m/z
106, 77
106, 77
92, 65
77, 51
171, 175
129, 131
85, 47
85, 47
Iones de
identificacin
Para el in de cuantificacin en una disolucin de con 800 g/L de CFM, 200 g/L de BDCM y DBCM, 400 g/L de BFM y BZN y 40 g/L de ETB y m-XLN.
CHCl3
Cloroformo (CFM)
Formula
Compuestos
Tabla1: Frmula,puntosdeebullicin,tiemposderetencin,anchurasdepicoamediaalturay
relacionesm/zseleccionadasparalosochocompuestosestudiados.
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
312
________________________________________________________________________
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
313
________________________________________________________________________
3.2.Disolucionesestndarymuestras
3.2.1.Disolucionesestndar
Se prepar una disolucin madre de THMs y BTEX (20.00 mg/L) en
metanol que se almacen en fro a 4 C. A partir de ella, se prepararon
disoluciones en EtOAc que se utilizaron para optimizar las condiciones
experimentalesyparadoparlasmuestrasdesuelo.
3.2.2.Muestrasdesuelos
3.2.2.1.Suelosdopados
Se utilizaron dos tipos diferentes de suelos naturales: un suelo con un
altocontenidoorgnico,recogidoenunjardnpblico(Salamanca,Espaa)
y un Vertisol, caracterizado por su alto contenido en arcilla (Tabasco,
Mjico). Estos suelos se doparon y se utilizaron para estudiar la posible
existenciadeefectodematriz.Adems,elsuelodejardndopadoseutiliz
paraevaluarlascaractersticasanalticasdelmtodopropuesto.
Elprocedimientoparadoparlossuelosfueelsiguiente:lasmuestrasde
suelo se desecaron al aire mediante calentamiento en una placa a 90 C
durante 48 horas, removiendo frecuentemente. Con este procedimiento se
consigueeliminarlahumedaddelsueloy,prcticamente,cualquiertrazade
compuestoorgnicovoltilpresenteenl.Posteriormente,unaalcuotade
20 gdel suelo secoloca en un frascode 100 mL y se aaden 2 mL deuna
disolucindeTHMsyBTEXenEtOACconlaconcentracinadecuadapara
cada estudio. El frasco se cierra hermticamente y se agita vigorosamente
durante 15 minutos hasta conseguir la perfecta homogeneizacin de los
compuestos en la matriz. Para obtener muestras que se asemejen lo ms
posible a muestras de suelo reales, los suelos dopados se almacenaron en
fro(4C)durante15das,tiempoduranteelcualseproducelainteraccin
entrelosanalitosylamatriz.
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
314
________________________________________________________________________
3.2.2.2.Materialesdereferenciacertificados(CRMs)
Para la validacin del mtodo propuesto se analizaron dos suelos
comerciales con contenidos certificados de los compuestos de inters. En
concreto, un suelo arcillosolimoso (RTCCRM631) y un suelo arcilloso
(RTCCRM635), ambos suministrados por LGC Promochem (Barcelona,
Espaa).
3.3.InstrumentacinPTVGCMS
Laconfiguracininstrumentalutilizadaesladescritaenelapartado1de
laseccinIIIConfiguracionesinstrumentalesutilizadas.
Se utiliz un cromatgrafo de gases Agilent 6890 con una columna
capilarDBVRX,adecuadaparacromatografarpidadegases(20mx0.18
mm x 1 m), de Agilent J&W. El gas portador fue helio N50 (99.995 % de
pureza; Air Liquide). El cromatgrafo est equipado con un inyector de
temperatura programada (PTV) (CIS4; Gerstel, Baltimore, MD, USA) con
un liner empaquetado con TenaxTA, de un volumen interno de 180 L.
Para introducir las muestras en el PTV se utiliz un automuestreador
CombiPAL(CTCanalyticsAG,Zwingen,Suiza)equipadoconunabandeja
para 42 muestras. Se seleccion el modo de operacin de inyeccin de
lquidos y se utiliz una microjeringa de 10 L. Las medidas con el
espectrmetro de masas de tipo cuadropolar (HP 5873) de realizaron en
modoscanySIM.
3.4.Procedimientosanalticos
3.4.1.Pretratamientodelamuestra(QuEChERSsimplificado)
Las diferentes variables implicadas en el procedimiento de extraccin
mediantelaversinsimplificadadeQuEChERSadaptadaparalaextraccin
de VOCs en suelos se estudiaron de forma detallada en un trabajo previo
[32].Comoconsecuencia,enelpresentetrabajoseutilizaronlascondiciones
experimentales
optimizadas
anteriormente.
De
esta
manera,
el
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
315
________________________________________________________________________
3.4.2.Inyeccinatemperaturaprogramada
Los mejores resultados para la inyeccin de estos compuestos se
obtuvieronconelmodosolventvent,utilizandoCO2lquidoparaconseguir
el enfriamiento. Con el procedimiento optimizado se inyectaron 7 L del
extractoenunlinerempaquetadoconTenaxTA,aunatemperaturainicial
de5C.Elflujodepurgafuede50.0mL/minylapresindepurgade5.00
psi.Despusde1minuto(tiempodepurga)secerrlavlvuladesplityel
liner se calent hasta 300 C con unavelocidad de 12 C/s. Despus de un
tiempodeinyeccinde1.50minutosseabredenuevolavlvuladesplityla
temperaturadelinersemantienea300Cdurante7minutosparalimpiary
evitar posibles efectos de memoria. Con fines comparativos se estudiaron
losmodosconvencionalesdeinyeccinsplitysplitless.
3.4.3.Cromatografadegases
Se seleccion una temperatura inicial para la columna de 45 C que se
mantuvo durante 3.00 minutos; se increment hasta 250 C con una
velocidad de 50 C/min y se mantuvo en este valor durante 1 minuto. El
flujodeheliofuede1.5mL/min.Conestascondicionesexperimentaleslos
compuestoseluanenmenosde5.50minutosyeltiempototaldedesarrollo
delcromatogramafuede8.10minutos.
3.4.4.Espectrometrademasas
Lasexperienciasrealizadasparaoptimizarlascondicionesanalticasdel
mtodoseregistraronenmodoscan.Elintervaloderelacionesmasa/carga
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
316
________________________________________________________________________
(m/z)registradasfue25270umayelvalordelumbraldeabundanciafue0.
Los diferentes compuestos se identificaron por comparacin de los
espectros experimentales con los correspondientes de la base de datos
NIST98(NIST/EPA/NIHMassSpectralLibrary,versin1.6).
El estudio del efecto de matriz, la determinacin de las caractersticas
analticasdelmtodoylaprediccindelaconcentracindeloscompuestos
en muestrasde referencia con contenido certificado se realizaron en modo
SIM. La informacin obtenida en el modo scan permiti establecer tres
gruposSIMconseisionescadauno.Elprimero(4.104.60min)contenalos
tres iones ms abundantes del cloroformo y bromodiclorometano (83, 85,
47)ylostresdelbenceno(78,77,51);elsegundo(4.605.20min)contenalas
relacionesm/zcaractersticasdeltolueno(91,92,65)ydibromoclorometano
(127, 129 y 131) y el tercer grupo (4.306.10 min) estaba formado por los
ionescaractersticosdeletilbencenoyxileno(91,106,77)yloscaractersticos
delbromoformo(171,173,175).Sefijuntiempodepermanenciaparacada
unodelosionesde5ms.
3.4.5.Anlisisdedatos
La recogida de los datos cromatogrficos se realiz con el software
EnhancedChemStation,G1701CAVer.C00.00deAgilentTechnologies.
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
317
________________________________________________________________________
4.RESULTADOSYDISCUSIN
4.1. Optimizacin de las condiciones experimentales (PTVGC
MS)
Las condiciones experimentales de cada uno de los diferentes mdulos
queconstituyenlaconfiguracininstrumentalseseleccionaronconelfinde
optimizar la separacin cromatogrfica y obtener los mejores lmites de
cuantificacin para los compuestos estudiados. Para estas experiencias se
utilizunadisolucindelosanalitosenEtOAc.
4.1.1.VariablesexperimentalesdelPTV
Conobjetodeelegirelmododeinyeccinmsapropiadoparaelgrupo
de compuestos estudiados, se investigaron dos de los modos de inyeccin
permitidos por el PTV: el modo de inyeccin convencional, splitless en
caliente,yelmododeinyeccinconeliminacindedisolvente(solventvent).
Seutilizunadisolucinde200ppbdeTHMsyBTEXenacetatodeetiloy
los anlisis se realizaron por triplicado. Se optimizaron las variables que
afectan a cada uno de los modos de inyeccin y, en las condiciones
experimentalesptimas,secompararonlosresultadosobtenidosporambos
mtodos.
En el modo de inyeccin splitless las variables consideradas fueron:
temperaturadelinyector,volumendemuestraytiempodeinyeccin.Para
laprimeradeellasseseleccionunvalorde300C.Estatemperaturaesla
mximarecomendadaparaTenaxTAyadecuadaparaevitarlaretencin
de los analitos en el material empaquetado en el liner. El volumen de
inyeccin se estudi para valores de 0.5, 1, 2 y 3 L. La resolucin
cromatogrficaylaformadelospicoserabuenaparatodoslosvolmenes
estudiados; sin embargo, la repetitividad de las seales disminua
significativamente para valores superiores a 1 L. Este efecto puede
explicarseporelvolumendeexpansindeldisolvente,quepuedeexceder
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
318
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VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
319
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Abundancia/103
Abundancia/103
10
4.25
CFM
4.35
5.00
5.20
BDCM
5.30
4.45
BDCM
Tiempo (min)
4.55
Tiempo (min)
5.40
4.24
4.16
4.75
10
30
50
70
90
110
4.95
5.15
4.32
4.40
BZN
BZN
4.48
Tiempo (min)
5.50
Tiempo (min)
7 L solvent vent
1 L splitless en caliente
5.35
4.90
5.10
4.15
CFM
DBCM
10
BMF
13
DBCM
Abundancia/103
Abundancia/103
16
BMF
TLN
TLN
ETB
BTEX
ETB
m-XLN
m-XLN
THMs
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320
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VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
321
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Paracloroformoybenceno,losdoscompuestosmsvoltiles,seobserv
unaligeradisminucindelreadepicoconelmodosolventventdebidoala
prdida de los compuestos durante el proceso de eliminacin del
disolvente. Para los compuestos menos voltiles menos influenciados por
losefectosdeldisolventeelmododeinyeccinsolventvent(inyeccinde7
L)presentabaclarasventajas,obtenindoseincrementosenlasreasdelos
picosentre4y6vecesconrespectoalainyeccinenmodosplitless(1L).
Basndonosenestosresultados,seseleccionelmododeinyeccinsolvent
ventdebidoalaimportantemejoraenlasensibilidadqueseproducapara
los compuestos menos voltiles y a que en el caso de los ms voltiles la
sensibilidadsemantenaaproximadamenteigual.
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
322
________________________________________________________________________
4.1.3.Variablesexperimentalesdelespectrmetrodemasas
Apartirdelloscromatogramasregistradosenmodoscan(25270uma)se
identificaronloscompuestosestudiadosysedeterminaronsustiemposde
retencin.Conestainformacinseestablecieronlostresgruposadecuados
paraladeteccinenmodoSIM(Seccin3.4.3).Eliondecuantificacinylos
deidentificacin,paracadacompuesto,serecogenenlatabla1.Eltiempo
depermanenciaparacadaionseestudiparavaloresde1,5y10ms.Con
dichosvaloresdetiempodepermanencia,lasvelocidadesdeadquisicinde
datos del cuadrupolo para los tres grupos SIM (seis iones en cada grupo)
eran de 32, 18 y 12 espectros por segundo, respectivamente. Se obtuvo la
mejordefinicindepicoparauntiempodepermanenciade5ms,raznpor
lacualfueestevalorelqueseseleccionparaelrestodelosestudios.
La figura 2 muestra el cromatograma de una disolucin de los analitos
enEtAOc,analizadaenlascondicionesexperimentalesseleccionadas.Para
obtener reas de pico similares para todos los compuestos se prepar la
disolucinconlassiguientesconcentraciones:800ppbparacloroformo,200
ppb para bromodiclorometano y dibromoclorometano, 400 ppb para
bromoformoybencenoy40ppbparatolueno,etilbencenoymxileno.
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323
________________________________________________________________________
16
m-XLN
BMF
ETB
DBCM
22
TLN
BDCM
BZN
28
CFM
Abundancia/103
Cromatograma en modo SIM: Iones extrados ( m/z 83, m/z 78, m/z 127, m/z 91, m/z 173)
10
4
4.30
4.50
4.70
4.90
5.10
5.30
5.50
Tiempo (min)
Figura2:CromatogramadeunamuestradeloscompuestosenEtOAc,enlas
condicionesexperimentalesptimas.
Eltiemponecesarioparalaelucindelosochocompuestosfuede5.50
minutos.Lostiemposderetencin,lasanchurasdepicoamediaaltura(wh),
los puntos de ebullicin y las relaciones m/z seleccionadas para cada
compuesto se muestranen la tabla 1. Las anchuras de picoamedia altura
estn comprendidas entre 0.36 y 0.66 minutos por lo que, considerando la
clasificacin basada en este parmetro [38], la separacin obtenida
correspondeaunacromatografadegasesrpida.
4.1.4.Tiempodeanlisis
LaversinsimplificadadelmtodoQuEChERSessencillayrpida.Un
nico analista puede preparar un conjunto de 7 extractos por hora,
utilizandomaterialsencilloyconsumiendomenosde20mLdeEtOAc.
Una vez que se han extrado los compuestos del suelo con EtAOc, los
extractos
obtenidos
se
inyectaron
directamente
en
el
sistema
cromatogrfico.Enlascondicionesexperimentalesptimas,eltiempototal
deanlisisfue8.10minutos.
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
324
________________________________________________________________________
4.2.Anlisisdemuestrasdesuelo
Seanalizaronmuestrasdesueloparadeterminarlaposibleexistenciade
efecto de matriz en la determinacin de los compuestos de inters. Se
obtuvieron los rendimientos de extraccin en dos matrices de suelo
diferentesysedeterminaronlascaractersticasanalticasdelmtodoenuna
matriz de suelo de jardn dopado. Finalmente, para validar el mtodo
propuestoseanalizarondosmaterialesdereferencia(CRMs)concontenido
certificadoparalosanalitosestudiados.
4.2.1.Efectodematriz
La existencia de efecto de matriz en la determinacin de compuestos
orgnicosvoltilesesmuycomncuandoseestudianenmatricesdesuelo.
Estosedebealaaltacomplejidadyheterogeneidaddelasmuestrayalas
fuertesinteraccionesdeloscompuestosconlosconstituyentesdelsuelo.En
estetrabajo,serealizunestudioparacomprobarlaexistenciadeefectode
matrizcuandoseaplicaelmtodoanalticooptimizadoaladeterminacin
delosanalitosestudiadosenmuestrasdesuelos.
Se utilizaron dos tipos de suelos de diferentes caractersticas (suelo de
jardn y Vertisol). Las muestras de suelos se secaron al aire (apartado
3.2.2.1.)yseanalizaronparadetectarlaposiblepresenciadeloscompuestos
deintersenestasmatrices(blancos)antesdedoparlas.Secomprobqueel
cloroformo y los BTEX estaban presentes en las muestras a muy baja
concentracin; tambin se detect la presencia de los mismos cuando se
inyectabadirectamenteacetatodeetiloenelsistema.Estoscompuestosson
ubicuosenelambienteanivelesdetrazaysehandetectadohabitualmente
endiferentestiposdemuestras[20].Porlotanto,encadamatriz,alasreas
de pico correspondientes a estos compuestos se le restaron las seales del
blanco.
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
325
________________________________________________________________________
Lasmuestrasdesuelosedoparonadiferentesnivelesdeconcentracin
(50, 100, 150 and 200 g/L) y se sometieron al proceso de extraccin y al
posterior anlisis cromatogrfico. En la tabla 2 se muestran las pendientes
delasrectasdecalibradoobtenidas.Puedeobservarseque,paralamayora
de los compuestos, existe un efecto de matriz ya que se observan ligeras
diferencias en las pendientes correspondientes a las dos matrices
estudiadas.Lamagnituddeesteefectoesmsacusada,paracadagrupode
compuestos, a medida que aumenta la constante de particin de carbono
orgnico(Koc)delcompuesto.
Tabla2:Pendientesdelasrectasdecalibradoenlasdosmatricesdesuelo
Compuesto
Matrz
Suelo de jardn
Vertisol
(11.40.3)10
(11.30.7)10
Bromodiclorometano
(841)10
(802)10
Dibromoclorometano
(702)10
(661)10
Bromoformo
(48.80.6)10
(441)10
Benceno
(13.80.1)10
(13.00.1)10
Tolueno
(2785)10
(2588)10
Etilbenceno
(62010)10
(5767)10
m-xileno
(5068)10
(4722)10
Cloroformo
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
326
________________________________________________________________________
concentracin(50,100,150y200g/L).Adems,dosmuestrasdesuelo:un
Vertisol y un suelo de jardn, dopados a los mismos niveles de
concentracin, se sometieron al proceso de extraccin y los extractos se
inyectaron en el cromatgrafo de gases. Para evitar un efecto de
preconcentracinenelprocesodeextraccin,larelacinmuestra:disolvente
utilizadafue1:1,esdecir,2.5gdemuestrasesometieronalprocedimiento
deextraccincon2.5mLdeacetatodeetilo;elvolumendeagua(1.5mL)y
lacantidaddeMgSO4(1g)seescalaronproporcionalmenteparamantener
lasproporcionesutilizadasenelmtodooptimizado.
La comparacin de las pendientes de las rectas de calibrado
correspondientes a las disoluciones de los compuestos en EtOAc con las
pendientesobtenidasparalasmuestrasdesuelospermiteobtenerunvalor
medio (a lo largo del intervalo de concentraciones estudiado) de los
rendimientosdeextraccinparacadaunodelosanalitosobjetodeestudio
conlametodologapropuesta.
Los valores obtenidos pueden considerarse satisfactorios, y estaban
comprendidos entre el 65 y 76 % (tabla 3). Puede observarse que estos
rendimientos de extraccin aumentan a medida que lo hace el punto de
ebullicindeloscompuestos.Estecomportamientopuedeserdebidoalas
prdidas de los compuestos durante el proceso se preparacin de la
muestra,quesonmsacusadasenelcasodeloscompuestosmsvoltiles.
Adems, el valor del coeficiente octanolagua (Kow) no parece ser
determinante, probablemente debido a que todas las especies presentan
valoresdelmismoorden.
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
327
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Tabla3:Recuperacionesdeloscompuestosdeintersendosmuestrasdesuelo
Compuesto
Recuperaciones (%)
Suelo de jardn
Vertisol
Cloroformo
68
68
Bromodiclorometano
70
67
Dibromoclorometano
70
66
Bromoformo
76
69
Benceno
69
66
Tolueno
70
65
Etilbenceno
75
70
m-xileno
75
70
4.2.3.Caractersticasanalticasdelmtodo
Para determinar las caractersticas analticas del mtodo propuesto, se
dop una muestra de suelo de jardn a distintos niveles de concentracin
(50,100,200,300y500g/kg).Lasmuestras(5g)sesometieronalproceso
de extraccin descrito en la seccin 3.4.1. Los extractos obtenidos se
analizaron por triplicado en las condiciones experimentales seleccionadas.
Se determinaron las caractersticas de: linealidad, repetitividad y del
mtodo cromatogrfico, reproducibilidad del procedimiento global y
sensibilidad(lmitesdedeteccinycuantificacin)(Tabla4).
Como variable para la cuantificacin se utiliz el rea de pico
correspondiente al cromatograma obtenido en modo SIM, para el ion de
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
328
________________________________________________________________________
(10.90.2)10
(90.60.7)10
(811)10
(51.90.8)10
(11.70.3)10
(2842)10
(6299)10
(5167)10
BDCM
DBCM
BFM
Benceno
Tolueno
Etilbenceno
m-xileno
Pendiente
CFM
Compuesto
0.9980
0.9977
0.9994
0.9932
0.9970
0.9978
0.9993
0.9955
R2
0.7
0.4
1.3
2.8
1.7
1.4
0.9
2.0
Repetitividad (%)
1.5
1.9
2.7
6.1
2.1
2.9
3.4
7.3
Reproducibilidad(%)
0.3
0.2
0.4
15
1.6
0.4
0.3
8.4
LD
(g/kg)
0.9
0.5
1.2
45
4.9
1.2
0.9
25.4
LQ
(g/kg)
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329
________________________________________________________________________
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
330
________________________________________________________________________
Elestudiodelaprecisin(expresadacomodesviacinestndarrelativa,
RSD)serealizevaluandotantolarepetitividadcomolareproducibilidad.
La repetitividad, es decir, la precisin inherente al proceso de medida, se
determin analizando las seales correspondientes a la inyeccin repetida
(n=10)delextractoprocedentedeunsuelodejardndopadoaunnivelde
concentracin de 100 g/kg. Los resultados obtenidos se muestran en la
tabla 4 y los valores varan entre 0.4 y 2.8 %. Los valores ms altos
corresponden a los dos compuestos ms voltiles, cloroformo y benceno,
que son los que se ven ms fuertemente influenciados por la etapa de
eliminacin del disolvente durante la inyeccin. No obstante, los buenos
valoresdeRSDobtenidosdemuestranlaaplicabilidaddelmtodoanaltico
propuesto incluso para los compuestos muy voltiles, para los que las
condicionesdeinyeccinsondesfavorables.
La reproducibilidad del procedimiento global (extraccin y anlisis
cromatogrfico) se calcul inyectando diez extractos procedentes de diez
alcuotas de una muestra de suelo de jardn dopada a un nivel de
concentracinde100g/kg.Losextractosseanalizaronendasdiferentes,a
lolargodeunperiododedossemanas.Cadaunodelosextractosseinyect
portriplicado.Losresultadosobtenidossemuestranenlatabla4yestnen
elintervaloentre1.5y7.3%.Denuevo,losvaloresmsaltoscorresponden
a los compuestos ms voltiles poniendo de manifiesto la dificultad de la
determinacin de los mismos debido a las prdidas, difcilmente
controlables,durantelosprocesosdepreparacindemuestraeinyeccin.
Loslmitesdedeteccin(LD)ycuantificacin(LQ)seestimaronapartir
delassiguientesecuaciones:
LD =
10
3.3
LQ =
S
S
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
331
________________________________________________________________________
eslapendientedelacurvadecalibradoy3.3eselvalordelparmetrotde
Student(paran1,099).
Los lmites de deteccin y cuantificacin calculados se muestran en la
tabla 4. Como caba espera, debido a su alta volatilidad, los lmites de
deteccin ms altos corresponden a los compuestos ms voltiles
cloroformoybenceno(8.4y15g/kg,respectivamente).Paraelrestodelos
compuestos los lmites de deteccin estn comprendidos entre 0.2 y 1.6
g/kg.ComparandoloslmitesdedeteccinobtenidosparalosTHMscon
esta configuracin instrumental, con los obtenidos para estos mismos
compuestos en suelos mediante un proceso de extraccin QuEChERS y
anlisis de los extractos mediante GCECD (0.010.66 g/kg) [33], se
observa que los valores obtenidos con espectrometra de masas son ms
altos, debido a la alta sensibilidad que presenta el detector de captura
electrnicaparaloscompuestoshalogenados.Noobstante,lautilizacinde
un detector de masas permite la identificacin inequvoca y la
cuantificacinde,prcticamente,cualquiercompuestovoltilpresenteenla
muestra,loqueresultaenormementeatractivocuandosetratadehacerun
anlisis de criba de los grupos de compuestos presentes en la muestra, o
cuandoloscompuestosnopresentangruposhalgenosy,portanto,noson
adecuadosparasudeteccinmedianteECD,comoeselcasodelosBTEX.
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332
________________________________________________________________________
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
333
________________________________________________________________________
Abundancia/105
55
40
25
10
4.30
4.50
4.70
4.90
5.10
5.30
5.50
Tiempo (min)
85
70
m-XLN
ETB
55
TLN
10
4.30
4.50
DBCM
BZN
CFM
25
BDCM
40
4.70
4.90
BMF
Abundancia/103
5.10
5.30
5.50
Tiempo (min)
Figura3:CromatogramasdelextractoprocedentedelsueloCRM635analizadoen
modoscan(a)yenmodoSIM(b).
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334
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Valor predicho
(g/kg)
Valor de
referencia
(g/kg)*
Intervalo de
prediccin
(g/kg)*
Cloroformo
BDCM
DBCM
Bromoformo
Benceno
Tolueno
Etillbenceno
m+p xileno
xileno, total
749
9010
9510
8010
9020
784
13020
10010
17020
60.4
74.9
84.2
64.1
72.0
77.5
124
94.5
173
14.0-136
45.9-135
2.37-166
0-131
35.6-108
37.1-118
59.3-188
38.4-151
49.2-297
98.7
90.6
131
74.5
42.9
129
133
206
263
46.0-151
45.9-135
63.8-198
27.5-122
24.2-61.7
66.9-192
76.0-190
126-286
152-375
CRM 635
Cloroformo
BDCM
DBCM
Bromoformo
Benceno
Tolueno
Etillbenceno
m+p xileno
xileno, total
11010
968
12020
798
6020
1247
12010
22020
28020
*Valoresproporcionadosenelmaterialdereferenciacertificado
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
335
________________________________________________________________________
anlisiscromatogrfico.Paraestoscompuestosesposibleinyectargrandes
volmenes de muestra (eliminando el disolvente mientras los analitos se
focalizanenelmaterialempaquetadodelliner)loquesetraduceenmejores
resultadosylmitesdedeteccinmsbajos.
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
336
________________________________________________________________________
5.CONCLUSIONES
Se ha desarrollado un mtodo sencillo, rpido y sensible para la
determinacindeTHMsyBTEXenmuestrasdesuelo.Elmtodosebasaen
la extraccin de los compuestos mediante una versin simplificada del
mtodoQuEChERSyanlisisdirectodelosextractosmedianteinyeccinde
grandes volmenes cromatografa de gases rpida y deteccin mediante
espectrometrademasas.
La utilizacin de un PTV con un liner relleno con TenaxTA y
programado en el modo de inyeccin solvent vent permita la inyeccin de
un gran volumen de muestra (7 L), lo cual dio lugar a un aumento
significativo de la sensibilidad para muchos de los compuestos objeto de
estudio.
Lasrampasdetemperaturasrpidasutilizadasenelhornopermitanla
separacindelosochocompuestosenmenosde6min.Elusodelmodode
deteccinSIMenelespectrmetrodemasasdalugaraunincrementoenla
selectividadyselectividaddelmtodo.
La eficacia de extraccin del mtodo en diferentes muestras de suelo
oscilaba entre el 65 y el 76 %. El mtodo analtico proporciona valores de
reproducibilidadyrepetitividadexcelentes,ylmitesdedeteccinentre0.3
y15g/kg.
La metodologa propuesta se ha validado mediante el anlisis de dos
materiales de referencia certificados (CRMs). Los resultados ms
satisfactorios se obtuvieron para los compuestos menos voltiles debido a
que sus propiedades son ms adecuadas para la tcnica de inyeccin de
grandesvolmenesdemuestra.
VIIIQuEChERSGCMSparaladeterminacindeTHMsyBTEXensuelos
337
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6.BIBLIOGRAFA
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________________________________________________________________________
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INPRESSARTICLE
ARTICLESUBMITTED
FORPUBLICATION
VIII
343
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
ASIMPLIFIEDQuEChERSAPPROACHFORTHE
DETERMINATIONOFTRIHALOMETHANESANDBENZENE,
TOLUENE,ETHYLBENZENEANDXYLENESINSOILMATRICES
BYFASTGASCHROMATOGRAPHYWITHMASS
SPECTROMETRYDETECTION
CarmeloGarcaPinto,SaraHerreroMartn,JosLuisPrezPavn*,and
BernardoMorenoCordero
DepartamentodeQumicaAnaltica,NutricinyBromatologa.Facultadde
CienciasQumicas,UniversidaddeSalamanca.37008Salamanca,SPAIN
*Correspondingauthor:(fax)+34923294483;(email)jlpp@usal.es
344
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
Abstract
AmethodbasedonsimplifiedQuEChERSextractionfollowedbylarge
volumeinjectionfastgaschromatographyandmassspectrometrydetection
has been developed for the determination of THMs (chloroform,
bromodichloromethane,dibromochloromethaneandbromoform)andBTEX
(benzene,toluene,ethylbenzeneandxylenes)insoilsamples.
ThesimplifiedversionofQuEChERSusedmeetstherequirementsofthe
green chemistry and provides reliable results with high sample
throughput,lowsolventconsumption,littlelabourandtheuseofmaterials
commonlyemployedinlaboratories.TheGCdeviceusedisequippedwith
a programmable temperature vaporizer (PTV), with a liner packed with
TenaxTA.Usingthesolventventmode,thisinjectorallowstheinjection
oflargevolumesofsample,affordinganimprovementinthesensitivityof
the method. The chromatographic conditions used here allowed the
separation of the compounds in less than 5.50 min. Good linearity was
obtainedforallthetargetcompounds,withhighlysatisfactoryrepeatability
and reproducibility values. The limits of detection were in the 0.2 to 15
g/kg range. The method was validated by the analysis of two certified
referencematerials(CRMs).
345
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
1.Introduction
Soilisacomplexandheterogeneousmatrixwithaporousstructurethat
contains both inorganic and natural organic components. Currently, soils
are subject to intensive pollution with chemical compoundsand they play
an important role in the environment by preventing the contamination of
adjacent ecosystems. When contaminating agents reach the soil, they
become involved in several types of physicochemical interactions with
mineralandorganiccomponents.VolatileOrganicCompounds(VOCs)are
themostprevalent,butcomparativelypoorlystudied,mobilecontaminants
of soil and sediments [1]. Many such compounds and their degradation
products are either known to be or suspected of being toxic and
carcinogenic,andtheyareespeciallyhazardousaspotentialsourcesoflong
term contamination of groundwater, the atmosphere, and crops. In soil
screening guidance, the USEPA has determined some potential routes of
humanexposuretosoilcontaminants.Thus,theinhalationofvolatiles,the
ingestion of contaminated groundwater and food, and dermal absorption
are the most probable routes [2]. The impact of such compounds is not
limited to direct adverse effects on human health and animals; they also
deteriorate the properties of the soilto a significant extent and cleanup is
complicated,expensive,andtimeconsuming.
WithintheVOCsconsideredindifferentprotocolsandlegislativenorms
[3,4],
trihalomethanes
(THMs:
chloroform,
bromodichloromethane,
346
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
[1420],
purgeandtrap
(P&T)
[2125]
and
HSsolidphase
microextraction(HSSPME)[2629].
Despite the advantages of these methods, all of them require special
instruments,whichoftenarerelativelyexpensiveandrequiretechnicalskill
and expertise if satisfactory results are to be obtained. Moreover, some of
347
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
theseproceduresemployextractiontimesoftheorderof30min,especially
whentwostepprocedures,suchasP&TandHSSPME,areused.
Withaviewtofindinganalternativemethodabletoprovidesatisfactory
results without the need for complex and expensive instruments, and
maintaining the requirements of minimum sample pretreatment and low
solvent consumption, our research group has explored the possibilities of
the QuEChERS (quick, easy, cheap, effective, rugged and safe) extraction
procedurefortheanalysisofVOCsinsoilsamples.
The method omits or replaces many complicated analytical steps
commonly employed in traditional methods, and provides highquality
resultswithahighsamplethroughput(approx.10minextractiontime),low
solventandglasswareconsumption,littleworkandlowcostofanalysisper
sample. Moreover, the use of equipment commonly affordable for most
analytical laboratories together with the fact that no technical expertise is
required to perform the extraction make this method a powerful tool that
couldbeusedinroutineanalyses.
To the best of our knowledge, current use of QuEChERS with soil
matrixes is very limited [30,31], and in those studies the technique was
applied to the determination of pesticides. However, application of the
technique for the extraction of VOCs from soil samples has only been
proposedrecently[32,33].
Hereweproposetheuseofamassspectrometerdetectorafteranalysis
withQuEChERSextractionandfastgaschromatographyseparationforthe
determination of THMs and BTEX in soil samples. The main drawback
commonly associated with the QuEChERS method that of the low
preconcentration of the compounds in the extracts was solved by using a
largevolume injection technique, as recommended in many previous
publications[3436].Moreover,theselectedionmonitoring(SIM)modewas
employedtoprovidelowerLOQintheanalysisofthetargetcompounds.
348
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
bromodichloromethane,
dibromochloromethane
and
349
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
350
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
J&W was used. The carrier gas was helium N50 (99.995 % pure, from Air
Liquide).
The injector used was a Programmable Temperature Vaporizer (PTV)
(CIS4; Gerstel, Baltimore, MD, USA). The liner was a deactivated single
bafflewithaninternaldiameterof2mm,packedwithTenaxTA,withan
internal volume of 180 L. To introduce the samples into the PTV, a
CombiPAL autosampler (CTC analytics AG, Zwingen, Switzerland)
operatinginliquidinjectionmodewasused.Thissamplerisequippedwith
atrayfor42vialsanda10Lmicrosyringewasused.
Thedetectorwasaquadrupolemassspectrometer(HP5973),equipped
with an inert ion sourceoperating in electronimpact mode,using a 70 eV
ionizationvoltage.Thetemperatureoftheionsourcewassetat230Cand
the temperature of the quadrupole was 150 C. The analyses were
performedinthescanandSIMmodes.
2.4.Analyticalprocedures
2.4.1.Samplepretreatment(simplifiedQuEChERS)
The experimental extraction variables were optimized in a previous
work [33]. Consequently, the procedure applied to 5 g of soil sample
included the addition of water to moisten the sample (3 mL), liquid
extraction with ethyl acetate (2.5 mL), saltout partitioning of water with
anhydrousMgSO4 (2g),anddirectinjectionoftheorganicextract,obtained
afterthecentrifugationstep,intothegaschromatograph.
2.4.2.Programmedtemperaturevaporization
Theinjectionmodeusedintheoptimizedmethodwassolventvent,and
coolingwasaccomplishedwithliquidCO2.Toselecttheoptimuminjection
technique,conventionalsplitandsplitlessmodeswerealsotested.
The liner used was packed with TenaxTA. The injection volume was
adjustedto7Landtheinitialtemperaturewas5C.Ventflowwassetat
351
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
50.0 mL/min and vent pressure at 5.00 psi. After 1 min (purge time), the
split valve was closed and the liner was flashheated at 12 C/s to 300 C.
The injection time was 1.50 min, after which the split valve was opened
again and the liner temperature was held at 300 C for 7 min in order to
avoidapossiblememoryeffect.
2.4.3.Gaschromatography
Thecolumnoventemperaturewassettoaninitialtemperatureof45C
for3.00min;thiswasincreasedatarateof50C/minto250Candheldfor
1.0 min. The helium flow was 1.5 mL/min. Under these conditions, the
compoundselutedinlessthan5.50min,andthetotalchromatographicrun
timewas8.10min.
2.4.3.Massspectrometry
The analyses carried out to optimize the analytical conditions were
performedinscanmode.Them/zrangewas25270amuandtheabundance
threshold value was set at 0. The different compounds were identified by
comparisonoftheexperimentalspectrawiththoseoftheNIST98database
(NIST/EPA/NIHMassSpectralLibrary,version1.6).
Studyofthematrixeffect,determinationoftheanalyticalcharacteristics
ofthemethod,andpredictionoftheconcentrationofthetargetcompounds
in the certified samples were performed in SIM mode. The information
obtained in scan mode allowed us to establish three SIM groups with six
ions each. The first one (4.104.60 min) contained the three most abundant
ionsofchloroformandbromodichloromethane(83,85,47)andthethreeof
benzene(78,77,51);thesecond(4.605.20min)containedthem/zvariables
characteristic of toluene (91, 92, 65) and dibromochloromethane (127, 129,
and 131), and the third group (4.306.10 min) comprised the characteristic
ions of ethylbenzene and xylene (91, 106, 77) and those characteristic of
352
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
bromoform (171, 173, 175). The ions were acquired with a dwelltime of 5
ms.
2.5.Dataanalysis
Data collection was performed with Enhanced ChemStation, G1701CA
Ver.C00.00softwarefromAgilentTechnologies.
3.Resultsanddiscussion
3.1.Optimizationoftheexperimentalconditions(PTVGCMS)
The experimental conditions of the different modules comprising the
instrumental configuration were studied in order to optimize the
chromatographic separation. For these experiments, solutions of the target
compoundsinEtOAcwereused.
3.1.1.PTVconditions
Twodifferentinjectionmodes(hotsplitlessandsolventvent)allowed
by the PTV were investigated to evaluate the most appropriate injection
mode for the group of compounds studied. For these experiments, a
solution of 200 ppb of THMs and BTEX in EtOAc was used, and the
analyseswereperformedintriplicate.Thevariablesaffectingeachofthese
injection modes were optimized in order to compare the results obtained
whentheoptimumconditionsforbothmethodswereused.
Forthesplitlessinjectionmode,atemperatureofinjectionof300C(the
maximumrecommendedforTenaxTAandadequatetopreventretention
of the analytes in the packing material) and a splitless time of 1.5 min
(sufficient to inject the entire sample into the column) were selected. The
injection volume was studied for values of 0.5, 1, 2 and 3 L. The
chromatographic resolution and the shape of the peaks were good for all
volumesstudied,buttherepeatabilityofthesignalsdecreasedsignificantly
for volumes higher than1 L. Thiseffect can beexplained in terms of the
solvent expansion volume, which may exceed the liner volume and cause
353
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356
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_________________________________________________________________________
3.2.Analysisofsoilsamples
Astudyaimedataddressingthepossibleexistenceofamatrixeffectwas
carried out. Moreover, the recoveries of the target compounds from two
differentsoilsamplesweredeterminedandtheanalyticalcharacteristicsof
the method were studied in the fortified garden soil sample. Finally, to
validate the optimised method two certified reference materials (CRMs)
wereanalysed.
3.2.1.Matrixeffect
Owingtotheconsiderablecomplexityandheterogeneityofthesamples
andtothestronginteractionsofthecompoundswiththesoilconstituents,
the existence of a matrix effect is very common in this kind of sample. In
thisstudytwodifferenttypesofsoilswereused(gardensoilandaVertisol).
The blank soils were spiked at different concentration levels for each
compound(50,100,150and200g/L)andweresubjectedtotheextraction
procedure and chromatographic analysis. Table 2 shows the slopes of the
calibration curves obtained. A matrix effect was observed for most of the
analytesstudied,sincetherewereslightdifferencesintheslopesforthetwo
soil matrixes. The degree of the matrix effect for each group of target
compoundswasmoreevidentastheorganiccarbonpartitionconstant(Koc)
ofthecompoundsincreased.
The different degree of the matrix effect for the target compounds
preventstheuseofasingleinternalstandardtoovercomethematrixeffect.
Thus,inthepresentstudywedecidedtouseastandardadditionsprotocol
toovercomethematrixeffect,whichhasbeenshowntoworkwellforsoil
matrixes[20].
3.2.2.Analyterecoveriesfromsoilmatrixes
To determine the extraction efficiency of the QuEChERS method
proposed here, EtOAc solutions of the target compounds at different
357
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
concentration levels (50,100, 150 and 200 g/L) were injected directly into
the GC system. Moreover, two soil samples a Vertisol and a garden soil
spiked at the same concentration levels as the EtOAc solutions were
extracted and analyzed. To extract the soil samples, a sample:solvent ratio
of1:1wasusedinordertoavoidtheeffectofanypreconcentrationfactor;
thus,2.5gofsoilwereextractedwith2.5mLofEtOAc(watervolume(1.5
mL)andMgSO4amount(1g)werescaledproportionally).
Comparison of the slopes of the calibration curves obtained with
standard solutions of the compounds in EtOAc with the slopes obtained
from the soil samples afforded a mean value (along the range of
concentrations considered) of the extraction efficiency of the proposed
methodologyforeachtargetcompound.
Thevaluesobtainedweresatisfactory,lyingwithinthe6576%recovery
range (Table 3). Regarding the different compounds, it may be observed
thattherecoveriesroseastheboilingpointoftheanalytesincreased.Thisis
duetolossesofthecompoundsduringthesamplepreparationstep,which
are more likely for the more volatile compounds. Nevertheless, the values
oftheoctanolwatercoefficients(Kow)maynothaveastrongeffect,sinceall
of them are of the same order. The different composition of the two soil
matrices, determined higher extraction efficiencies from the garden soil
thanfromtheVertisolforallthecompoundsstudied.
3.2.3.Analyticalcharacteristicsofthemethod
In order to determine the analytical characteristics of the method, a
gardensoilsamplewasspikedatdifferentconcentrationlevels(50,100,200,
300 and 500 g/kg). Three aliquots of 5 g at each concentration level were
subjectedtotheextractionproceduredescribedinSection2.4.1.Theextracts
obtained were analyzed in triplicate with the optimized conditions. The
characteristics studied were linearity, repeatability of the chromatographic
358
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DL =
10
3.3
QL =
S
S
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whereisthestandarddeviationofthepeakresponsefortenreplicates
(n=10)correspondingtoanS/Nratioofapproximately3;Sistheslopeof
thecalibrationcurve,and3.3isStudentstfactor(n1,0.99).
ThevaluesobtainedareshowninTable4.Owingtotheirhighvolatility,
the highest limits of detection were obtained for benzene and chloroform
(15and8.4g/kgrespectively).Theothercompoundshaddetectionlimits
inthe0.2to1.6g/kgrange.Uponcomparingthedetectionlimitsobtained
fortheTHMswiththisanalyticalconfigurationwiththoseobservedwhen
the same QuEChERS procedure was used to extract the compounds from
the soil samples and the extracts were analysed by means of GCECD
(0.010.66g/kg)[33],itwasobservedthatthevaluesobtainedwhenaMS
detectorwasusedwerehigher,owingtothehighselectivityoftheECD.
Nevertheless,theuseofaMSdetectorallowstheunequivocalidentification
and quantification of essentially any volatile or semivolatile compound
present in the sample, which may be very useful when the analysis is
focusedonthescreeningofthegroupofcompoundspresentinthesample,
orwhenthetargetcompoundsarenothalogenated,asinthecaseofBTEX.
3.2.4.DeterminationofTHMsandBTEXintwodifferentCRMsoils
In order to validate the proposed methodology, a standard additions
protocol with the two certified reference materials a silty clay soil (RTC
CRM631)andaclaysoil(RTCCRM635)wasused.
Ineachsoil,asixlevelcalibrationstudywasperformed,analyzingthree
replicates from each level. The concentrations of each compound added
wereselectedinordertoachievetheminimumuncertaintyassociatedwith
prediction.Aliquotsof5.0goftheCRMsoilwereweighedaccuratelyand
50 L of a solution of the compounds in EtOAc was added at the
appropriateconcentrationforeachcase.Then,thesamplewassubjectedto
theextractionprocedure.
360
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
The samples were first analyzed in the scan detection mode, and the
compounds were identified according to their retention times and from
comparisonsofthespectraobtainedwiththespectraofthepurecompound
stored in the database (The maximum admitted difference in abundances
was20%).Followingthis,quantitationwasperformedinSIMmode.Figure
3showsthechromatogramsobtainedinthescanandSIMmodesforCRM
635; the results obtained (Table 5) were highly satisfactory. The calculated
concentrations were, in most cases, close to the reference value. For all
compounds (except for benzene), the predicted values lay within the
predictionintervalsspecifiedinthecertifiedmaterial.Thepredictedvalues
for benzenewere slightly above theprediction interval, but this result can
beaccountedforbythelowconcentrationsofthiscompoundinthecertified
reference materials (72.0 and 42.9 g/kg, respectively), which are close to
the quantification limit estimated for benzene with the optimized method
(45g/kg).
Thus, it seems that the proposed method can be applied to the
determination of the target compounds from soil samples. Additionally, it
may be seen that the most satisfactory results were obtained for the least
volatilecompounds.Thisisduetothelesslikelylossesofthesecompounds
duringthesamplepreparationstepand,especially,totheirbetterproperties
forsampleinjection.Forsparinglyvolatilecompoundsitispossibletoinject
large volumes of sample (eliminating the solvent through the split line,
whilethecompoundsareconcentratedinthepackingmaterialoftheliner);
thistranslatestolowerlimitsofdetectionandbetterresults.
4.Conclusions
A simple, fast and sensitive method has been developed for the
determinationofTHMsandBTEXinsoilsamples.Themethodisbasedon
theextractionofthecompoundsbyasimplifiedversionofQuEChERSand
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366
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Figurelegends
Figure1:Comparisonofthesignalsobtainedforthetargetcompoundswith
theinjectionmodeshotsplitlessandsolventventinoptimumconditions.
Figure 3: Chromatograms, in scan (a) and SIM (b) modes, of the soil
CRM635.
Abundance/103
Abundance/103
10
4.25
CFM
4.35
5.00
5.20
BDCM
5.30
4.45
BDCM
Time (min)
4.55
5.40
4.24
4.16
4.75
10
30
50
70
90
110
4.95
5.15
4.32
4.40
BZN
BZN
5.35
4.48
Time (min)
5.50
4.90 a
5.10
4.15
CFM
DBCM
BMF
10
DBCM
Abundance/103
Abundance/103
13
TLN
16
BMF
TLN
ETB
ETB
m-XLN
BTEX
m-XLN
THMs
367
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
Figure1:
368
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
Figure2:
16
m-XLN
BMF
ETB
DBCM
22
TLN
BDCM
BZN
28
CFM
Abundance/103
SIM Chromatogram: extracted ions ( m/z 83, m/z 78, m/z 127, m/z 91, m/z 173)
10
4
4.30
4.50
4.70
4.90
5.10
5.30
5.50
Time (min)
EtOAcsolutionwith800ppbforchloroform,200ppbfor
bromodichloromethaneanddibromochloromethane,400ppbforbromoform
andbenzeneand40ppbfortoluene,ethylbenzeneandmxylene.
10
25
40
55
4.30
4.50
4.70
4.90
5.10
5.30
5.50
Time (min)
10
25
40
55
70
85
CFM
4.30
4.50
4.70
TLN
4.90
DBCM
Abundance/105
Abundance/10
BDCM
BZN
Abundance/103
SIM Chromatogram
5.10
5.30
5.50
Time (min)
ETB
m-XLN
BMF
369
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
Figure3:
149
80
111
136
139
CHClBr2
C6H6
C7H8
C8H10
C8H10
Benzene
Toluene
Ethylbenzene
m-xylene
117
90
CHBr3
CHCl2Br
Bromodichloromethane (BDCM)
61
Bromoform (BMF)
CHCl3
Chloroform (CFM)
Boiling
point (C)
Dibromochloromethane (DBCM)
Formula
Compounds
40
87
107
126
66
145
207
204
2.0
2.16
2.35
2.13
2.75
3.14
3.20
(L/kg)
Koc
1.97
Log Kow
5.43
5.38
4.92
4.41
5.45
4.99
4.55
4.26
tR
(min)
0.62
0.55
0.60
0.54
0.66
0.62
0.61
0.36
width at half
heighta(s)
m/z
91
91
91
78
173
127
83
83
Quantitation ion
Table 1: Formula, boiling points, retention times, widths at half height and m/z
ratios selected for the eight compounds studied.
106, 77
106, 77
92, 65
77, 51
171, 175
129, 131
85, 47
85, 47
Qualifier ions
370
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
371
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
Table2:Slopesofthecalibrationcurves
Matrix
Compound
Chloroform
Garden soil
Vertisol
(11.40.3)10
(11.30.7)10
Bromodichloromethane
(841)10
(802)10
Dibromochloromethane
(702)10
(661)10
Bromoform
(48.80.6)10
(441)10
Benzene
(13.80.1)10
(120.1)10
Toluene
(2785)10
(2588)10
Ethylbenzene
(62010)10
(5767)10
m-xylene
(5068)10
(4722)10
Table3:Recoveriesofthetargetcompoundsintwosoilmatrices
Compound
Recoveries (%)
Garden soil
Vertisol
CFM
68
68
BDCM
70
67
DBCM
70
66
BMF
76
69
Benzene
69
60
Toluene
70
65
Ethylbenzene
75
70
m-xylene
75
70
Slope
(10.90.2)10
(90.60.7)10
(811)10
(51.90.8)10
(11.70.3)10
(2842)10
(6299)10
(5167)10
R2
0.9955
0.9993
0.9978
0.9970
0.9932
0.9994
0.9977
0.9980
Repeatability (%)a
2.0
0.9
1.4
1.7
2.8
1.3
0.4
0.7
Reproducibility (%)b
7.3
3.4
2.9
2.1
6.1
2.7
1.9
1.5
Intra-day analysis of an extract obtained from a garden soil spiked at 100 g/k
n=10.
b
Analysis of ten extracts of a garden soil spiked at 100 g/kg and analyzed over
of two weeks.
Compound
CFM
BDCM
DBCM
BFM
Benzene
Toluene
Ethylbenzene
m-xylene
DL (g/kg)
8.4
0.3
0.4
1.6
15
0.4
0.2
0.3
372
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
373
VIIIQuEChERSGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
_________________________________________________________________________
Table5:Determinationofthetargetcompoundsinthecertifiedreference
materials
Compound
CRM 631
Predicted Value
Reference Value
(g/kg)
(g/kg)*
Chloroform
BDCM
DBCM
Bromoform
Benzene
Toluene
Ethyllbenzene
m+p xylene
xylene, total
749
9010
9510
8010
9020
784
13020
10010
17020
Chloroform
BDCM
DBCM
Bromoform
Benzene
Toluene
Ethyllbenzene
m+p xylene
xylene, total
11010
968
12020
798
6020
1247
12010
22020
28020
Prediction Interval
(g/kg)*
60.4
74.9
84.2
64.1
72.0
77.5
124
94.5
173
14.0-136
45.9-135
2.37-166
0-131
35.6-108
37.1-118
59.3-188
38.4-151
49.2-297
98.7
90.6
131
74.5
42.9
129
133
206
263
46.0-151
45.9-135
63.8-198
27.5-122
24.2-61.7
66.9-192
76.0-190
126-286
152-375
CRM 635
*ValuesprovidedintheCertificatesofAnalysisoftheCRMsoils.
IX
DETERMINACINDECOMPUESTOSORGNICOS
ENNANOPARTCULASDEAEROSOLES
PROCEDENTESDELACOMBUSTINDEMADERA
MEDIANTEDIFERENTESMTODOSBASADOS
ENCROMATOGRAFADEGASES
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
377
_______________________________________________________________________
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
379
_______________________________________________________________________
1.INTRODUCCIN
Las partculas que constituyen los aerosoles atmosfricos comprenden
una compleja mezcla de compuestos voltiles y semivoltiles, tanto
orgnicoscomoinorgnicos.Ladeterminacindecompuestosorgnicosen
partculas de aerosoles es de gran inters en la actualidad debido a los
potenciales efectos adversos de estos compuestos para la salud humana y
los ecosistemas. Aunque hoy da existen tcnicas analticas muy
sofisticadas, la determinacin de la composicin orgnica de los aerosoles
sigue siendo un reto complicado debido a la heterogeneidad de las
partculasdeaerosol,ladificultadinvolucradaenelprocesodemuestreoy
lasconcentracionesdeloscompuestosanivelesdetrazas.
Tradicionalmente,laspartculasdeaerosolserecogenhaciendopasarel
aire a travs de un filtro y los compuestos de inters se extraen del filtro
mediante un disolvente o por desorcin trmica (thermal desorption, TD).
Conestesistemadetomademuestra,serecolectaunamezcladepartculas
dediferentestamaos(porencimadeundeterminadotamaodeporo).Los
filtros ms utilizados son los de tamao de poro de 2.5 y 10 m, y las
muestras recolectadas con dichos filtros se denominan respectivamente
PM2.5yPM10(paticulatematter,PM).
Unadelastcnicasanalticasmsempleadasenestetipodeanlisisesla
cromatografa de gases seguida de deteccin por espectrometra de masas
(GCMS)[15].Debidoalaampliavariedaddecompuestospresentesenlas
muestras,unasolaetapacromatogrficapodranosersuficienteparalograr
una separacin adecuada de sus componentes y los cromatogramas
obtenidos con 1D GC suelen tener zonas en las que los compuestos
aparecen solapados. Por tanto, es muy comn incluir una etapa de
fraccionamiento de los extractos procedentes de los filtros antes de
someterlos al anlisiscromatogrfico. En esta etapa los componentes de la
muestraseseparanendosomsfracciones,utilizandocolumnasdesliceo
380
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
almina, y cada una de las fracciones se analiza por separado [611]. Otra
opcin para solucionar la baja eficacia de separacin de una sola columna
cromatogrficaeselusodeunatcnicamultidimensional.Lacromatografa
de gases en dos dimensiones completa ha demostrado ser una poderosa
tcnica en el anlisis de aerosoles [12,13]. La combinacin de desorcin
trmica con GC X GC y espectrometra de masas de tiempo de vuelo
(TOFMS) [1517] se ha utilizado de manera satisfactoria. Se han
desarrolladomtodosdeanlisisinsitu,utilizandounsistemademuestreo
fabricado en el laboratorio, seguido de desorcin trmica y GC X GC [17
19]. Tambin se han utilizado mtodos en los que la extraccin de los
compuestosdelfiltroseconsigueconundisolventeorgnico.Estemtodo
de extraccin seguido de GC X GC con TOFMS o FID se ha aplicado a la
determinacin de especies orgnicas en aerosoles urbanos [20] y rurales
[21].
Lasfraccionesmspequeasdelaspartculasdeaerosoles(dimetrode
partcula por debajo de 100 nm) estn recibiendo una especial atencin
actualmente, debido a su riesgo potencial para la salud humana. Estas
partculas se transportan rpidamente a lo largo de grandes distancias y
pueden penetrar fcilmente en los tejidos vivos [8,22]. En consecuencia, la
caracterizacin qumica de las partculas de aerosoles ms pequeas es
crtica para evaluar su impacto en la salud humana y los ecosistemas.
Desafortunadamente, el anlisis de la fraccin orgnica de estas partculas
tanpequeasesmuycomplicadodebidoalapocamasaquesuponenyal
cortotiempodevidadelaspartculas.
Como se ha descrito anteriormente, en muchos de los estudios
destinados a determinar la composicin de las partculas de aerosol, el
procedimiento de toma de muestra consiste en recolectar una mezcla de
partculasdediferentestamaosenunsolofiltro.Sinembargo,existenunos
pocos estudios en los que se han recolectado nanopartculas de tamaos
especficosysehandeterminadoloscompuestosorgnicospresentesenlas
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
381
_______________________________________________________________________
382
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
2.OBJETIVOS
Elobjetivodeestetrabajoeseldeestudiarlasposibilidadesanalticasde
tres mtodos cromatogrficos (GCQMS, GCTOFMS y GC X GCTOFMS)
para la determinacin de compuestos orgnicos en nanopartculas de
aerosoles. Como compuestos objeto de estudio se han seleccionado los
alcanos y los PAHs, que se encuentran frecuentemente en los aerosoles
ambientalesymuchosdeellossoncarcingenosparaelserhumano.
Se compararn las caractersticas analticas de los tres mtodos en
relacin a su sensibilidad, linealidad, reproducibilidad, tiempo de anlisis,
tiempodemuestreoytrabajorequerido.
Conlosmtodospropuestos,seanalizarnnanopartculasdeaerosoles,
separadas por tamaos, procedentes de la combustin de una pieza de
madera de pino. Dentro de la tendencia de minimizar la etapa de
pretratamiento,lasmuestras(retenidasenfiltros)sesometernaunsencillo
procedimiento de extraccin y los extractos obtenidos se analizarn
directamente mediante los diferentes mtodos cromatogrficos. De esta
maneraseevaluarnlasventajasdelamayoreficaciaenlaseparacindela
tcnicaGCXGCfrentea1DGCenelanlisisdemuestrascomplejas.
Como objetivo final, se determinarn las concentraciones de los
compuestos objeto de estudio en las muestras de nanopartculas de
diferentestamaos.
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
383
_______________________________________________________________________
3.PARTEEXPERIMENTAL
3.1.Reactivosydisolucionesestndar
Laacetonayelhexano(gradoHPLC)fueronsuministradosporLbScan
AnalyticalSciences(Dubln,Irlanda).Ladisolucinestndarde100g/Lde
nalcanos (desde C10 hasta C40, CERTRAN) fue suministrada por LGC
Pomochem GMBH (Wesel, Alemania). La mezcla de PAHs (naftaleno (1),
acenaftileno (2) acenafteno (3), fluoreno (4), fenantreno (5), antraceno (6),
carbazol(7),fluoranteno(8),pireno(9),benzo(a)antraceno(10),criseno(11),
benzo(b)fluoranteno, benzo(k)fluoranteno (13), benzo(a)pireno (14),
indeno[1,2,3cd]pireno (15), benzo[ghi]perileno (16), dibenzo[ah]antraceno
(17)) que contena 2.0 mg/mL de cada compuesto (Z014GR) era de
AccuStandard(NewHaven,USA).Seutilizarondosestndaresinternosen
el anlisis cromatogrfico: 4,4dibromooctaflorobifenilo (estndar de
cuantificacin, 99%, Sigma Aldrich, Gllingham, UK) y 11binaftilo (98%,
Acrossorganics,NewJersey,USA).
Sepreparunadisolucinestndarde5.0mg/LdePAHsyalcanospor
dilucin de las mezclas comerciales en hexano. A partir de sta, se
prepararon las diluciones necesarias en hexano, que se utilizaron para
obtener las rectas de calibracin y para calcular los lmites de deteccin y
cuantificacin.
3.2.Sistemademuestreo
Elsistemademuestro(Figura1)utilizadosedesarrollenlaDivisnde
Ciencias de la Atmsfera y Geofsica del Departamento de Fsica de La
Universidad de Helsinki y se mont en una campana extractora del
laboratorio.Laspartculasdeaerosolsegeneraronmediantelacombustin
deunaporcindemaderadepinoconunallamadebutano/propano.Las
partculasgeneradassecargaronalpasaratravsdelcargadorbipolaryse
separaron por tamaos con un analizador de movilidad diferencial
384
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
(differentialmobilityanalyzer,DMA).Seutilizunarelacinentreelflujode
aerosolyelflujodeairelimpioquecirculaenelinteriordelseparadorde
2:5.
Una vez que se ha conseguido un flujo de partculas de un tamao
determinado, parte de este flujo (0.3 mL/min) se lleva a un contador de
partculasdecondensacin(condensationparticlecounter,CPC)(3022A,TSI,
MN, USA) que contabiliza el nmero de partculas/cm3 que llega en cada
instante.
Laotrapartedelflujodepartculasdeaerosol(0.7mL/min)sehacepasar
a travs de un filtro, en el que las partculas quedan retenidas, para su
posterioranlisismediantecromatografadegases.Elfiltroutilizadoerade
un tamao de poro de 0.45 m, de celulosa regenerada, i.d. 15 mm,
Phenomenex,CA,USA).
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
385
_______________________________________________________________________
Bomba de vaco
Filtro CPC
1.7 L/min
Aerosol
MS
Filtro
0.3 L/min
CPC
2 L/min
Aire ambiente
5 L/min
Introduccin
de muestra
Cargador bipolar
2 L/min
Bomba
DMA
Desecador
Filtro
Figura1:Diagramaesquemticodelsistemademuestreoutilizado
3.3.Preparacindelasmuestrasparaelanlisiscromatogrfico
Los compuestos orgnicos retenidos en el filtro fueron extrados con 1
mL de la mezcla de disolventes hexano/acetona (50/50, v/v%). Sobre el
extractoobtenidoseaadieron10Ldeunadisolucinde50mg/Lde1,1
binaftiloyelvolumendemuestraseredujoa100Lbajounflujosuavede
nitrgeno.Finalmente,seaadieron10Ldeunadisolucinde50mg/Ldel
estndardecuantificacin(4,4dibromooctaflorobifenilo).Cadamuestrase
analiz por triplicado. Antes de someter las muestras al procedimiento de
anlisiscromatogrficoseanalizunblanco,queseobtuvoextrayendoun
filtro limpio con 1 mL de la mezcla hexano/acetona (50/50, v/v%), y el
386
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
extractosesometialasmismasetapasdepretratamientoqueunamuestra
real.
3.4.Instrumentacinymtodos
3.4.1.GCTOFMSyGCXGCTOFMS
Los anlisis desarrollados mediante GCTOFMS y GC X GCTOFMS se
llevaronacaboenunAgilent7890(SantaClara,USA),quehasidodescrito
en el apartado 3 de la seccin III de esta memoria. El cromatgrafo est
equipado con un inyector convencional split/splitless y acoplado a un
detector LECO Pegasus 4D TOFMS (LECO, St. Joseph, MI, USA). El
cromatgrafosehamodificadoconlainstalacindeunhormosecundarioy
deunmoduladorcriognicoendosetapasconcuatrochorros.Lacolumna
cromatogrficaempleadaenlaprimeradimensinesunaHP5(29mx0.25
mm i.d., 0.25 m de espesor de fase estacionaria) de Agilent Technologies
(Waldbronn,Alemania)yladelasegundadimensinesunaRTX17(79cm
x 0.1 mm x 0.1 m) de Restek (Bellefonte, PA, USA). Las dos columnas se
conectan mediante un conector universal Silket Treated Universal Press
Thight(Restek).Seutilizunaprecolumnadeslicedesactivadade2mx
0.53 mm i.d. conectada a la columna de la primera dimensin para
protegerladelposibledeterioro.
LascondicionesanalticasempleadasenlosmtodosGCTOFMSyGCX
GCTOFMS eran idnticas, salvo por el modulador, que se mantuvo
desactivado para el anlisis en una sola dimensin, en el que la segunda
columna se comporta como una lnea de transferencia entre la primera
columnayeldetector.
En ambos casos, se inyect 1 L de muestra en modo splitless
(temperaturadelinyector250C)yseutilizheliocomogasportador,enel
mododeflujoconstante(1.00mL/min).Latemperaturadelacolumnadela
primeradimensinseprogramdesde50C(5min)hasta260C(15min)
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
387
_______________________________________________________________________
388
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
3.4.2.GCQMS
El equipo utilizado era un Agilent 6890, equipado con un inyector on
column.LacolumnacromatogrficautilizadaeraunaDB5HT(30mx0.25
mmx0.1m)acopladaaunaprecolumnadeslicedesactivada(3mx0.53
mm i.d., Agilent, USA, mediante un conector universal del tipo Silket
TreatedUniversalPressThight(20480)deRestek(Bellefonte,PA,USA).El
horno del cromatgrafo se program de la siguiente manera: temperatura
inicialdesde50C(2min)ygradientedetemperaturasde10C/minhasta
380 C (1 min). La muestra (1 L) se introdujo en la columna mediante
inyeccin en columna. El tiempo cromatogrfico total era de 36 min y el
tiemponecesariopararegresaralascondicionesinicialesdeanlisiserade
11 min. Se utiliz helio como gas portador, con un flujo constante de 0.8
mL/min.Elespectrmetrodemasaserauncuadrupolo,modeloHP5973de
Agilent Technologies, equipado con una fuente de ionizacin inerte, que
operaba en el modo de ionizacin por impacto electrnico (70 eV). La
temperaturadelafuentedeionizacinerade150Cylainterfaseentrela
columnacromatogrficayelespectrmetrodemasassefijen380C.
Paralaoptimizacindelascondicionesanalticasdelmtodoseutilizel
mododeadquisicindedatosscan.Elintervalodemasasregistradofuede
50a500uma,elvalorumbraldeabundanciasefijencero.Loscompuestos
se identificaron por comparacin de los espectros obtenidos con los de la
basededatosNIS98(NIST/EPA/NIHMassSpectralLibrary,versin1.6)y
sedeterminaronsustiemposderetencin.
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
389
_______________________________________________________________________
Intervalo
de tiempo
(min)
Compuestos
m/z
0-8
decano
57,43
8-10
dodecano, naftaleno
(57,43) (128,129)
10-12
tetradecano
57,43
12-13.5
acenaftileno, acenafteno
152,153
13.5-14.40
hexadecano, fluoreno
(57,43) (166,167)
14.40-15.50
4,4-dibromo-octafluorobifenilo
296,456
15.50-16.30
(57,43) (178,176)
16.30-17.50
carbazol
167,166
17.50-18.30
eicosano
57,43
10
18.30-19.60
fluoranteno, pireno
202,203
11
19.60, 20.60
docosano
57,43
12
20.60-21.30
1,1-binaftilo
254,253
13
21.30-21.80
tetracosano
57,43
14
21.80-22.40
criseno
228,226
15
22.40-24
hexacosano
57,43
16
24-25.50
octacosano, benzo(b)fluoranteno
252,253
17
25.50-36
Triacontano
57,43
390
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
4.RESULTADOSYDISCUSIN
Enesteestudiosehanpuestoapuntotresmtodoscromatogrficospara
ladeterminacindenalcanosyPAHsenpartculasdeaerosoles.Enprimer
lugarsecompararnlascaractersticasanalticasdelosmtodosenrelacin
a su sensibilidad, linealidad y reproducibilidad. A continuacin se
utilizarn los mtodos optimizados en el anlisis de muestras de
nanopartculas de aerosoles (30100 nm) generadas en la combustin de
madera.
4.1.Caractersticasanalticasdelosmtodos
Lostresmtodosbasadosencromatografadegasesseoptimizaroncon
el fin de conseguir la mejor resolucin cromatogrfica en el menor tiempo
posible. Para obtener los calibrados, las reas consideradas fueron las que
resultaban de dividir el rea de pico, para el ion ms abundante de cada
compuesto (Tabla 7), entre el rea de pico para el ion ms abundante del
estndarinternodecuantificacin(4,4dibromooctaflorobifenilo,m/z296).
Seestudiaronsietenivelesdeconcentracindesde50g/Lhasta2000g/L.
Entodoslosnivelesdecalibracinseaadieronlosdosestndaresinternos
conunaconcentracinde5mg/Lparaambos.Cadanivelfueanalizadopor
triplicado.
Se estimaron los parmetros de validacin para cada uno de los
mtodos (linealidad, reproducibilidad y lmites de deteccin y
cuantificacin). Los lmites de deteccin se calcularon como 3.3 veces la
desviacin estndar de una seal (n=10), que corresponde a una relacin
S/Naproximadamenteiguala3.Loslmitesdecuantificacinsecalcularon
multiplicandoporunfactorde10ladesviacinestndardelaseal.
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
391
_______________________________________________________________________
4.1.1.GCXGCTOFMS
En el desarrollo del mtodo basado en GC X GC se optimiz la
frecuenciademodulacinylaprogramacindetemperaturasconelfinde
obtener una buena separacin de los compuestos. La combinacin de
columnasutilizadaseseleccionenbaseaestudiosanteriores[20].
En la figura 2 se puede observar la separacin optimizada de los
compuestos objeto de estudio. Se muestran dos posibles visualizaciones
permitidas por el equipo; la representacin en dos dimensiones con lneas
de contorno (superior) y la representacin en tres dimensiones (inferior).
Las designaciones de pico utilizadas se basan en el nmero de tomos de
carbono para los hidrocarburos (C10C28), mientras que los PAHs se
nombraronsegnlosnmerosasignadosenlaseccin3.1.Debidoasualto
puntodeebullicin,losPAHsdel15al17fueronexcluidosdelestudio.En
lafigurasehaextradoelionmsabundanteparacadacompuesto,quees
elqueseutilizparalacuantificacin.
5401
80000
1.26
12
2 3
0.76
56
IS 1 10
11
89
13
IS 2
C 30
C 28
0.26
392
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
C 10
C 22
C 20
C 18
C 16
C 14
C 12
27.91
11.25
11.25
C 24
C 26
44.58
IS2
IS1
C12
C10
5
6
4
14
7
111.6
.677
10
IS1
IS2
C18
C18
C20
C20 C24
C22
C22 C26
28
.33
1Tsiem
t d po
im 1
45
en di
.00
sio me
n ti ns
mein
(m (mi
in) n)
12
13
11
C28
C30
61
.67
0.4
C14
2 Tiem
nd po 0.9
dim 2
en di
sio me
n ns
1.4
tim i
e ( n (s
s) )
C16
Figura2:cromatogramasen2D(superior)y3D(inferior)obtenidosalanalizaruna
disolucinestndarde500ppbdePAHsynalcanosy5ppmdelosestndaresinternos
1,1binaftilo(IS1)y4,4dibromooctafluorobifenilo(IS2)conelmtodo
GCXGCTOFMS
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
393
_______________________________________________________________________
394
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
Compuesto
Tiempo de
retencin
LD
R2
Pendiente
RSD
%b
(g/L)
LQ
(g/L)
1
(min)
2
(s)
Dodecano (C12)a
19.4
0.52
0.9974
(16.40.4)*104
4.03
0.21
0.63
Hexadecano (C16)
29.6
0.54
0.9980
(7.80.2)*104
4.88
1.44
4.36
Alcanos
Eicosano(C20)
37.7
0.56
0.9978
(6.10.1)*10
5.00
1.43
4.33
TetracosanoC24)
44.6
0.58
0.9962
(4.50.1)*104
4.28
3.73
11.32
Octacosano(C28)
51.5
0.70
0.9943
(3.50.1)*104
2.29
7.91
23.97
26.9
0.80
0.9989
(14.00.2)*104
1.57
1.08
3.28
PAHs
Acenafteno (3)
Fenantreno (5)
Pireno (9)
Criseno (11)
Benzo(a)pireno (14)
33.7
0.86
0.9956
(14.40.4)*10
5.42
0.60
1.82
40
0.96
0.9949
(11.10.4)*104
4.74
0.51
1.55
8.5
1.30
3.96
7.78
3.04
9.22
57.7
52.8
1.00
1.58
0.9928
0.9929
(2.70.1)*10
(1.730.06)*10
Designacionesutilizadasparaloscompuestosenlafigura1
Calculadaparaunaconcentracinde500g/Lyn=10
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
395
_______________________________________________________________________
4.1.2.GCTOFMS
En este mtodo se utilizaron las mismas condiciones de inyeccin y
separacin cromatogrfica que las utilizadas en el mtodo de GC X GC
TOFMS, con la diferencia de que en este caso el modulador criognico
estabadesactivado.
En la figura 3 se muestra el cromatograma obtenido al analizar una
disolucin de 500 ppb de los compuestos en hexano (3ase ha extrado la
m/z 57, caracterstica de los alcanos;3bse ha extrado la relacin m/z ms
abundante para cada uno de los PAHs). Se puede observar que la eficacia
delaseparacindelosPAHsesmenorquecuandoseutilizalatcnicaGC
XGCTOFMS.
Los cromatogramas de ion extrado no solucionan el problema, porque
muchos de los compuestos con mayores tiempos de retencin tienen los
mismos iones moleculares. Este efecto se observa de forma discreta al
tratarse de una disolucin estndar de los compuestos, pero en el caso de
muestrasdeaerosoleslosproblemasdesolapamientopodransercrticos.
396
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
a
Abundancia
C12
C14
C16
C18
C20
C22
C10
C24
C26
C28
C30
Tiempo (s)
b
Abundancia
1
IS1
2
5
6
8 9
4
7
IS2
10
11
12 13
14
Tiempo (s)
Figura3:Cromatogramaobtenidoalanalizarunadisolucinestndarde500ppbde
PAHsynalcanosy5ppmdelosestndaresinternos1,1binaftilo(IS1)y4,4
dibromooctafluorobifenilo(IS2)conelmtodo
GCTOFMS
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
397
_______________________________________________________________________
Tabla3:CaractersticasanalticasdelmtodoGCTOFMS
Compuesto
Tiempo de
retencin
(min)
R2
Pendiente
19.28
0.9963
(15.00.5)*104
RSD
%b
LD
(g/L)
LQ
(g/L)
Alcanos
Dodecano (C12)a
Hexadecano (C16)
29.47
0.9979
2.97
2.69
8.15
5.03
14.7
44.58
(7.20.2)*10
Eicosano(C20)
37.68
0.9971
(6.10.2)*10
5.64
13.22
40.06
TetracosanoC24)
44.54
0.9990
(4.900.09)*104
4.91
14.03
42.53
51.47
0.9982
(2.990.07)*10
4.01
21.24
64.35
26.85
0.9957
(13.0.0.4)*104
4.50
4.8
14.7
Octacosano(C28)
PAHs
Acenafteno (3)
Fenantreno (5)
33.54
0.9969
(13.10.4)*10
5.96
3.29
9.98
Pireno (9)
39.92
0.9956
(11.60.4)*104
6.18
4.73
14.33
Criseno (11)
45.63
0.9966
(4.10.1)*104
6.88
6.24
18.92
5.54
13.55
41.07
Benzo(a)pireno (14)
52.72
0.9966
(1.890.06)*10
Designacionesutilizadasparaloscompuestosenlafigura1
Calculadaparaunaconcentracinde500g/Lyn=10
4.1.3.GCQMS
Las condiciones experimentales optimizadas para el mtodo GCQMS
eranmuysimilaresalasdelmtodoGCTOFMS.Laprincipaldiferenciaera
larampadetemperaturasdelhorno,queeramsrpidaenelmtodoGC
QMS. La eficacia de la separacin no mejoraba al utilizar rampas de
temperaturas ms lentas, sin embargo, el tiempo de anlisis aumentaba
significativamente, por lo que se decidi seleccionar una rampa de
temperaturasmsrpida.
En la tabla 4 se muestran las caractersticas analticas de la tcnica GC
QMS. Se utiliz una disolucin de 30 g/L para estimar los lmites de
deteccin de PAHs y alcanos. Los valores de R2 eran como mnimo de
0.9952 para todos los compuestos. La reproducibilidad, para un nivel de
concentracin de 500 g/L y n=10, era satisfactoria con valores de RSD
398
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
inferioresa8.9%.Loslmitesdedeteccinoscilabande9g/La49g/Ly
losdecuantificacinentre26g/Ly150g/L.
Tabla4:CaractersticasanalticasdelmtodoGCQMS
Tiempo de
retencin
(min)
R2
Pendiente
RSD
%b
LD
(g/L)
LQ
(g/L)
Dodecano (C12)a
9.16
0.9996
(7.130.08)*104
1.6
17
52
Hexadecano (C16)
14.03
0.9991
(5.40.1)*104
6.6
32
99
Compuesto
Alcanos
Eicosano(C20)
18.07
0.9978
(5.30.1)*10
7.2
14
42
TetracosanoC24)
21.50
0.9977
(4.10.1)*104
7.1
32
99
24.50
0.9952
(3.50.1)*10
8.9
49
150
12.70
0.9982
(19.6.0.1)*104
4.9
24
72
Octacosano(C28)
PAHs
Acenafteno (3)
Fenantreno (5)
15.93
0.9964
(18.40.5)*10
6.1
14
42
Pireno (9)
19.07
0.9998
(22.10.2)*104
5.6
26
0.9957
6.2
23
68
7.7
17
51
Criseno (11)
Benzo(a)pireno (14)
21.98
24.92
0.9987
(20.60.7)*10
(23.80.4)*10
Designacionesutilizadasparaloscompuestosenlafigura1
Calculadaparaunaconcentracinde500g/Lyn=10
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
399
_______________________________________________________________________
msbajosquelosobtenidosconGCTOFMSyentre6y80vecesinferioresa
losobtenidosconGCQMS.
Las tcnicas GC X GCTOFMS y GCTOFMS difieren nicamente en el
uso del modulador entre las dos columnas cromatogrficas, con lo que se
ponedemanifiestoqueelincrementodesensibilidadobtenidosedebeala
crofocalizacindeloscompuestosqueeluyendelaprimeracolumna.En
un cromatograma de ionextradoobtenido mediante GCX GC, elreade
pico que resulta de sumar los diferentes picos que corresponden a un
mismo compuesto coincida con el rea de pico obtenida al analizar la
misma muestra con GCTOFMS. Sinembargo, laanchura depico a media
altura era unas 58 veces mayor en los picos obtenidos con 1D GC. Esto se
traduceenunincrementodelarelacinseal/ruidodelordende14veces
conlatcnicaGCXGCrespectoa1DGC.Comoconsecuencia,loslmites
de deteccin eran significativamente inferiores con la tcnica GC X GC, lo
cualcoincideconlasconclusionesobtenidasporotrosautores,comohasido
recopiladorecientemente[31].Leeysuscolaboradores[33]encontraronun
incrementoenlasensibilidadde4a5vecesconGCXGCFIDyDallgey
sugrupodeinvestigacin[29]calcularonunincrementode2a5vecescon
GCXGCTOFMS.SehandescritoresultadossimilaresconelmtodoGCX
GCECD, con lmites de deteccin de 3 a 5 veces inferiores que los
obtenidoscon1DGC[34].
El aumento de sensibilidad conseguido con 1D GCTOFMS respecto a
GCQMSesdelordende1a6veces.Estosedebeprobablementealdetector
empleado, ya que en ambos casos se inyect 1 L de muestra y las
columnascromatogrficasutilizadaseranmuysimilares(elhechodequese
aadaunasegundacolumnaalfinaldelacolumnaprincipalenelmtodo
1D GCTOFMS no tiene ningn efecto en la separacin). El TOFMS se
programconunafrecuenciadeadquisicindedatosde50espectros/s,por
loquelareconstruccindepicoesmuchomsprecisaqueconeldetector
de tipo cuadrupolar en el modo de adquisicin de datos SIM, donde se
400
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
registraronunos24espectros/senlosgruposSIMquecontenandosionesy
16espectros/senlosgruposSIMconcuatroiones.
Parapoderdetectarloscompuestospresentesanivelesdetrazasenuna
muestra de nanopartculas de aerosol, el tiempo de muestreo necesario (y
por tanto la cantidad de muestra recolectada en el filtro) ser distinto en
funcindelmtododeanlisisquesevayaaemplear.Esdecir,eltiempode
muestreonecesarioparalograrconcentracionesdetectablesconlosmtodos
basados en 1D GC ser superior al que se requiere cuando se utiliza el
mtodoGCXGCTOFMS.
UninconvenientedeGCXGCrespectoa1DGCesqueserequiereun
mayortiempodeanlisiscromatogrfico.Estoesdebidoaqueparaobtener
resultados ptimos es necesario realizar al menos tres o cuatro
modulaciones por cada pico de la primera dimensin, lo cual limita las
rampas de temperaturas que se pueden utilizar en el horno principal
(normalmente en el margen de 0.55 C/min) [12]. En este trabajo se ha
utilizado una rampa de 5 C/min en el mtodo de GC X GCTOFMS y el
tiempocromatogrficototalerade62min;larampautilizadaenelmtodo
GCQMS era de 10 C/min, dando lugar a un tiempo cromatogrfico total
de36min;esdecir,prcticamentelamitad.Adems,elequipoGCQMSes
menoscostosoymscomnenloslaboratoriosdeanlisis.
OtroinconvenienteasociadoalusodeGCXGCesqueelprocesamiento
delagrancantidaddedatosquesegeneranescomplejoyrequiereemplear
mucho tiempo. Afortunadamente, la nueva versin de software Pegasus
4D(versin3.34)simplificasubstancialmentelaetapadetratamientodelos
datos. Sin embargo, sigue siendo necesaria la supervisin detallada de los
resultados por un analista con experiencia, lo que hace que el tratamiento
delosdatosseamscomplejoqueconelanlisisconvencionalen1D.
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
401
_______________________________________________________________________
402
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
pretratamientodelamuestrasuelesuponerlaprincipalfuentedeerrordel
1.26
UCM
UCM
0.76
646
3
Abundancia/10
Abundance
Extracted
Ion extrado
ionm/z
m/z57
57
80000
s
kane
os
n-alalcan
0.26
mtodoanaltico.
11.6
20
28.3
36.7
Tiempo de retencin en la 1 dimensin (min)
45
45
35
UCM
25
15
5
16.7
25
33.3
41.7
50
Tiempo (min)
Figura5:Comparacindeloscromatogramasdeionextradoobtenidosalanalizaruna
muestradepartculasdeaerosolde100nmmediante
GCXGCTOFMS(superior)yGCTOFMS(inferior)
Enelcromatogramaendosdimensiones,obtenidomedianteGCXGC
TOFMS,seobservaunamayorresolucindeloscompuestospresentesenla
muestra. En este caso, los nalcanos estn perfectamente separados de los
elementos interferentes de la matriz, por lo que es posible identificarlos y
cuantificarlossinnecesidaddeincluiretapasadicionales.Comoejemplo,la
figura 6 muestra el cromatograma en 3D del tetradecano, junto con el
cromatograma obtenido mediante el anlisis en 1D. Como se puede
observar, la separacin alcanzada con GC X GC da lugar a una capacidad
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
403
_______________________________________________________________________
m/z 57
UCM
Tetradecane
Tetradecano
Abundancia/103
Abundance
2en
nd
dlai .5
m2
e n
dsi
mio
enn
tsimi 1
en
((s
)
tR1
estn
dliam 24.
1en 3
sdiom
ne
tnim
sie
25
n(m
.7
(mi
ni)n
)
tR
23
.
Ion
Extracted
extrado
ionm/z
m/z5757
Tetradecane
Tetradecano
14
10
Muestra100
de aerosol
nm aerosol
de 100
sample
nm
6
Disolucin patrn de
Standard solution
tetradecane
500 500
ppb ppb
de tetradecano
2
23.7
24
24.2
24.6
25
Tiempo (min)
Figura6:Comparacindeloscromatogramasdeionextradodetetradecanoenuna
muestrade100nmmediante
GCXGCTOFMS(superior)yGCTOFMS(inferior)
404
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
405
_______________________________________________________________________
Tabla5:Concentracionesdeloscompuestosobjetodeestudioenunamuestrade
partculasdeaerosolde100nmanalizadamediantelosmtodos
GCXGCTOFMSyGCTOFMS
Compuestos
Concentracin (pg/g)
GC X GC-TOFMS
GC-TOFMS
Decano
(1.80.3)102
(1.00.5)102
Dodecano
(2.50.1)102
(3.10.4)102
Tetradecano
(81)102
(81)102
Hexadecano
(7.90.5)102
(7.00.5)102
Octadecano
(151)102
n-alcanos
Eicosano
Docosano
Tetracosano
(141)10
(171)10
(161)10
Hexacosano
(211)10
Octacosano
(92)10
(81)102
Triacontano
(102)102
(91)102
Naftaleno
(0.90.3)102
(0.90.3)102
Acenaftileno
(0.90.2)102
(0.60.3)102
Acenaftaleno
(3.70.2)102
<LQ
<LQ
Fenantreno
(6.30.5)10
(5.30.5)102
Antraceno
(1.40.2)102
(1.70.5)102
(0.50.4)10
(0.40.1)102
Fluoranteno
(181)102
(16.20.5)102
Pireno
(191)102
(15.91)102
Benz(a) antraceno
(51)102
(52)102
(3.20.5)102
(52)102
Benzo(b)fluoranteno
(41)102
(42)102
Benzo(k)fluoranteno
(2.70.3)102
(2.60.5)102
Benzo(a)pireno
(3.70.5)102
(2.10.4)102
PAHs
Fluoreno
Carbazol
Criseno
(5.80.3)10
Nofueposibledeterminarlaconcentracindeestecompuesto,
puestoqueestabasolapadoconcomponentesinterferentesdelamatriz.
LQ:lmitedecuantificacin
406
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
Acontinuacinserealizunestudioenelqueseanalizaron,medianteel
mtodo GC X GCTOFMS, varias muestras de aerosoles de diferentes
tamaosdepartcula.Seestudiaronlostamaosde30,50,70y100nm.En
el proceso de generacin de la muestra se quem, en todos los casos, una
porcin de la misma pieza de madera y, en cada caso, se seleccion el
voltaje adecuado en el separador para recolectar el tamao de partcula
determinado. El contador de partculas monitoriza el nmero de
partculas/cm3 que llega al filtro. Esta concentracin era similar para los
distintostamaosdepartculaestudiadosyoscilentrevaloresde104a106
a lo largo de los diferentes tiempos de muestreo. En concreto, los valores
medios de concentracin de partculas, a lo largo del tiempo de muestreo,
fuerondelorden106partculas/cm3paralaspartculasde50a100nmyde
105 partculas/cm3paralasde30nm.Portanto,cuantomayoreseltamao
de partcula el tiempo de muestreo necesario para recolectar una masa de
partculas apropiada es menor. Como consecuencia, se seleccionaron
diferentestiemposdemuestreoparacadatamaodepartcula,conelfinde
obtenerunamasadepartculassuficienteparaquelaconcentracindelos
compuestos fuese detectable, pero utilizando tiempos de muestreo
razonables. Los tiempos de muestreo seleccionados fueron: 15 min para
muestrasde100nm,30minpara70nm,45minpara50nmy150minpara
30 nm. Utilizando estos tiempos de muestreo, se obtuvieron las siguientes
masas de partculas en los filtros: 30 nm ~1.7 g/muestra, 50 nm ~8
g/muestra,70nm~14g/muestra,100nm~19g/muestra.
Si el sistema de muestreo se utilizara para tomar muestras de aire
ambiente donde las concentraciones de partculas son mucho ms bajas
queenlosaerosolesprocedentesdelacombustindemadera(de102a103
partculas/cm3frentea104106partculas/cm3,respectivamente)lostiempos
de recoleccin necesarios para obtener concentraciones detectables con los
mtodos cromatogrficos estudiados en este trabajo seran del orden de
das.
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
407
_______________________________________________________________________
408
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
Tabla6:Concentracionesdeloscompuestosobjetodeestudioenmuestradepartculas
deaerosoldediferentestamaosanalizadasmedianteGCXGCTOFMS
Compuestos
30 nm
50 nm
70 nm
100 nm
Decano
(143)102
(3.30.6)102
(2.90.3)102
(1.80.3)102
Dodecano
(181)102
(5.00.2)102
(3.50.1)102
(2.50.1)102
Tetradecano
(466)102
(151)102
(13.40.7)102
(81)102
Hexadecano
(236)102
(61)102
(11.30.7)102
(7.90.5)102
Octadecano
(6010)102
(102)102
(212)102
(151)102
n-alcanos
Eicosano
(416)10
(151)10
(251)10
(141)102
Docosano
(766)102
(232)102
(331)102
(171)102
Tetracosano
(876)102
(251)102
(421)102
(161)102
Hexacosano
(1166)102
(292)102
(636)102
(211)102
Octacosano
(8020)102
(152)102
(393)102
(92)102
Triacontano
(9020)102
(184)102
(343)102
(102)102
Naftaleno
(63)102
(1.93)102
(1.40.4)102
(0.90.3)102
Acenaftileno
(62)102
(9.90.5)102
(1.30.3)102
(0.90.2)102
Acenaftaleno
< LQ
(2.10.5)102
(0.80.3)102
(3.70.2)102
Fluoreno
(63)102
(4.10.5)102
(1.30.3)102
(5.80.3)102
Fenantreno
(213)102
(401)102
(3.70.4)102
(6.30.5)102
Antraceno
(62)102
(7.90.4)102
(1.50.3)102
(1.40.2)102
<LQ
<LQ
(1.30.5)102
(0.50.4)102
Fluoranteno
(85)102
(1106)102
(3.80.5)102
(181)102
Pireno
(73)102
(1097)102
(4.70.5)102
(191)102
<LQ
(416)102
(1.50.3)102
(51)102
Criseno
<LQ
(341)10
(1.00.4)10
(3.20.5)102
Benzo(b)fluoranteno
ND
(415)102
<LQ
(41)102
Benzo(k)fluoranteno
ND
(252)102
(1.10.4)102
(2.70.3)102
Benzo(a)pireno
ND
(344)102
<LQ
PAHs
Carbazol
Benz(a) antraceno
LQ:lmitedecuantificacin
ND:Nodetectado
(3.70.5)102
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
409
_______________________________________________________________________
410
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
Tabla7:Concentracionesdeloscompuestosobjetodeestudioentresmuestrasde
partculasdeaerosolde70nmanalizadasmedianteGCXGCTOFMS
Concentracin (pg/kg)
Compuestos
70 nm
(muestra 1)
70 nm
(muestra 2)
70 nm
(muestra 3)
Decano
(2.90.3)102
(2.10.4)102
(2.3 0.4)102
Dodecano
(3.50.1)102
(3.30.1)102
(3.20.1)102
Tetradecano
(13.40.7)102
(10.60.7)102
(10.80.7)102
Hexadecano
(11.30.7)102
(2.40.7)102
(2.70.7)102
Octadecano
(212)102
(4.60.6)102
(6.20.6)102
Eicosano
(251)102
(4.80.6)102
(4.80.6)102
Docosano
(331)102
(9.20.7)102
(9.90.7)102
Tetracosano
(421)102
(8.50.7)102
(9.20.7)102
Hexacosano
(636)102
(101)102
(131)102
Octacosano
(393)102
(3.90.4)102
(61)102
Triacontano
(343)102
(4.00.2)102
(5.10.2)102
Naftaleno
(1.40.4)102
(0.80.4)102
(0.80.4)102
Acenaftileno
(1.30.3)102
(0.70.3)102
(0.80.3)102
Acenaftaleno
(0.80.3)102
<LQ
<LQ
n-alcanos
PAHs
Fluoreno
(1.30.3)10
(0.60.4)10
(0.50.3)102
Fenantreno
(3.70.4)102
(2.50.4)102
(0.80.4)102
Antraceno
(1.50.3)102
(53)102
<LQ
Carbazol
(1.30.5)10
<LQ
<LQ
Fluoranteno
(3.80.5)102
(3.80.5)102
(1.30.6)102
Pireno
(4.70.5)102
(3.70.5)102
(1.40.3)102
Benz(a) antraceno
(1.50.3)102
<LQ
<LQ
(1.00.4)10
<LQ
<LQ
<LQ
<LQ
<LQ
(1.10.4)10
ND
<LQ
<LQ
ND
<LQ
Criseno
Benzo(b)fluoranteno
Benzo(k)fluoranteno
Benzo(a)pireno
LQ:lmitedecuantificacin
ND:Nodetectado
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
411
_______________________________________________________________________
4.CONCLUSIONES
Se han evaluado las caractersticas analticas de tres mtodos
cromatogrficos(GCXGCTOFMS,GCTOFMSyGCQMS)paraelanlisis
denalcanosyPAHsanivelesdetrazasycontodosellossehanobtenido
buenosresultados.
Respectoalaaplicacindeestosmtodosalanlisisdeloscompuestos
deintersennanopartculasdeaerosolesprocedentesdelacombustinde
madera, se puede concluir que la eficacia de la separacin obtenida con el
mtodoGCXGCessuperioraladelosmtodosde1DGC.Estehechohace
que la tcnica GC X GC sea muy ventajosa para el anlisis de muestras
complejas, ya que permite obtener resultados altamente satisfactorios
aplicandounprocesodepreparacindelamuestramuysencillo,quenoes
suficiente cuando las muestras se analizan mediante 1D GC. Adems, con
GC X GC se obtienen cromatogramas estructurados que facilitan el
reconocimientodeloscompuestosylaidentificacindelosmismosesms
fiable.Porotrolado,latcnicaen2Desmssensible,porloqueesposible
utilizar tiempos de muestreo ms bajos para lograr cantidades de muestra
conconcentracionesdeloscompuestosanivelesdetectables.
Lasconcentracionesdeloscompuestosenlastresmuestrasdeunmismo
tamaodepartcula(70nm)diferanentressignificativamente,debidoala
irregularidadenelprocesodecombustindelamadera.Apesardeesto,se
puedeconcluirquedentrodelconjuntodemuestrasanalizadas(30nm,50
nm,70nmy100nm)lasconcentracionesdealcanoseransignificativamente
superioresenlamuestradepartculasmspequeas(30nm),mientrasque
loshidrocarburospolicclicosaromticosseencontrabanenconcentraciones
superioresenlasmuestrasconmayorestamaosdepartcula.
412
IXDeterminacindecompuestosorgnicosenaerosolesmedianteGC
_________________________________________________________________________
5.BIBLIOGRAFA
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PUBLISEDARTICLE
PUBLISEDARTICLE
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INPRESSARTICLE
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PUBLISHEDARTICLE
IX
417
Journal of Chromatography A
journal homepage: www.elsevier.com/locate/chroma
University of Helsinki, Department of Chemistry, Laboratory of Analytical Chemistry, P.O. Box 55, FIN-00014 Helsinki, Finland
University of Salamanca, Department of Analytical Chemistry, 37008 Salamanca, Spain
University of Helsinki, Department of Physics, Division of Atmospheric Sciences and Geophysics, P.O. Box 64, FIN-00014 Helsinki, Finland
a r t i c l e
i n f o
Article history:
Received 16 August 2009
Received in revised form 28 October 2009
Accepted 10 November 2009
Available online 14 November 2009
Keywords:
Aerosols
Nanoparticles
Wood pyrolysis
GC GCMS
GCMS
Aerosol MS
a b s t r a c t
Organic compounds in atmospheric nanoparticles have an effect on human health and the climate. The
determination of these particles is challenged by the difculty of sampling, the complexity of sample
composition, and the trace-level concentrations of the compounds. Meeting the challenge requires the
development of sophisticated sampling systems for size-resolved particles and the optimization of sensitive, accurate and simple analytical techniques and methods. A new sampling system is proposed
where particles are charged with a bipolar charger and size-segregated with a differential mobility
analyzer. This system was successfully used to sample particles from wood pyrolysis with particle
sizes 30100 nm. Particles were analyzed by four techniques: comprehensive two-dimensional gas
chromatographytime-of-ight mass spectrometry, gas chromatographytime-of-ight mass spectrometry, gas chromatographyquadrupole mass spectrometry, and aerosol mass spectrometry (aerosol MS).
In the chromatographic techniques, particles were collected on a lter and analyzed off-line after sample
preparation, whereas in the aerosol MS, particle analysis was performed directly from the particle source.
Target compounds of the samples were polyaromatic hydrocarbons and n-alkanes. The analytical techniques were compared and their advantages and disadvantages were evaluated. The sampling system
operated well and target compounds were identied in low concentrations.
2009 Elsevier B.V. All rights reserved.
1. Introduction
Atmospheric aerosol particles comprise a complex mixture of
volatile and semivolatile inorganic and organic compounds. The
determination of organic compounds in aerosol particles is of great
current interest owing to the potential effects of these compounds
on human health and the climate. Although sophisticated analytical
techniques are now available, the determination of aerosol composition remains a challenging task owing to the complexity of
atmospheric aerosol particles, the difculty involved in sampling,
and the trace-level concentrations of the compounds. Traditionally, aerosol particles have been collected onto lters and the
compounds of interest removed by solvent extraction or thermal
desorption. Usually, a mixture of particles below a given lter pore
size (e.g., PM2.5 , PM10 ) has been collected and analyzed. One of the
main analytical techniques for this kind of analysis has been gas
Corresponding author. Tel.: +358 9 191 50 268; fax: +358 9 191 50 253.
E-mail address: marja-liisa.riekkola@helsinki. (M.-L. Riekkola).
0021-9673/$ see front matter 2009 Elsevier B.V. All rights reserved.
doi:10.1016/j.chroma.2009.11.028
418
152
Fig. 1. Aerosol particle sampling system used in the study of particle emission from
wood pyrolysis.
and sampling times between 5 min and 30 min. A condensation particle counter (CPC) (3022 A, TSI, MN, USA) was used to count the
particles entering the sample syringe lter (0.45 m, regenerated
cellulose, i.d. 15 mm, Phenomenex, CA, USA) or directly passing to
the aerosol MS.
2.3. Sample preparation for chromatographic techniques
Aerosol samples were extracted from the lters with 1 ml of hexane/acetone (50/50, v/v%) mixture. Then, 10 l of 1,1-binaphthyl
stock solution (500 mg/L) was added, and sample volume was
reduced to 100 l under a gentle stream of nitrogen. Finally, 10 l
of the quantication standard solution (50 mg/L 4,4 -dibromooctauorobiphenyl) was added to the samples. Each sample was
analyzed three times. A blank sample, obtained by extracting a
clean lter with 1 mL of the hexane/acetone (50/50%) mixture and
pre-treated as a real sample, was analyzed before each sample.
2.4. Analytical instrumentation and methods
2.4.1. GCTOFMS and GC GCTOFMS
GCTOFMS and GC GCTOFMS experiments were carried
out on an Agilent 7890A gas chromatograph (Santa Clara, USA)
equipped with a split/splitless injector and interfaced with a
LECO Pegasus 4D TOFMS system (LECO, St. Joseph, MI, USA).
The Agilent GC was equipped with a secondary oven and a dualstage thermal modulator. An HP-5 column (29 m 0.25 mm i.d.,
0.25 m lm thickness) was used as the rst-dimension column
and an RTX-17 column (79 cm 0.1 mm i.d., 0.1 m lm thickness) as the second-dimension column (housed in the secondary
oven). The two columns were connected by a Silket Treated
Universal Press-Tight connector (20480) (Restek, Bellefonte, PA,
USA). A 2 m 0.53 mm i.d. DPTMDS deactivated retention gap was
connected to the rst-dimension column to protect it from deterioration.
The analytical conditions for the GCTOFMS and
GC GCTOFMS were identical except for the modulator, which
419
153
recorded. Each ion was acquired with a dwell time of 10 ms. Data
analysis was performed with Enhanced ChemStation, G1701A Ver.
D 00.01.27 software from Agilent Technologies.
2.4.3. Aerosol mass spectrometry
The aerosol mass spectrometer set-up has been presented elsewhere [28]. Some improvements of the system have since been
made, and the operation of the modied system is briey described
here. The charged and size-separated particle ow was directed to
an oppositely charged stainless steel collection surface, which is
part of the specially designed sampling valve. The collected sample
was introduced to the high vacuum of the mass spectrometer (MS)
by rotating the sampling valve and, after the vacuum recovered
(about 60 s), the sample was desorbed from the collection surface
with an IR-laser, operating at 1064 nm wavelength. The sample desorption produces a gaseous plume of mostly neutral molecules in
the vacuum, which expanded rapidly. Immediately after the desorption pulse, the sample molecules in the plume were ionized with
one laser shot from an ArF excimer laser operating at wavelength
193 nm. The ions were then diverted to the TOFMS, separated, and
detected according to their m/z ratios. In our previous aerosol MS
set-up [28] we used a self-made TOFMS as analyzer and an oscilloscope for data acquisition, but here the system was upgraded by
using a commercial TOFMS (C-TOF, Tofwerk, Thun, Switzerland)
and a data acquisition card (Agilent Acqiris DP211, Switzerland).
The sampling surface was changed from platinum to stainless steel.
The aerosol MS system required little parameter optimization
and no pre-treatment of samples. The only variables affecting the
system were collection efciency, aerosol ow rate, and mass window in the TOFMS. The mass window is the range on the m/z axis
where the ions are most efciently detected and it depends on the
ion analysis frequency and timing scheme of the mass spectrometer. The range was between about 50 amu and 200 amu and for
one data acquisition, depending on the m/z ratio. Thus, during at
the one data acquisition the system can detect only a limited number of masses. However, the signal can be divided into different
parts so that the whole mass range can be analyzed if required.
One can measure a sample with several ranges along the m/z axis,
for example, the rst 050 amu, second 50150 amu, and so on.
The system was used here only for compound identication
while the quantitative manner of the instrument was only tested
and used for comparison with results obtained by other techniques. The same standard mixture (1 mg/L) containing PAHs and
n-alkanes, as used for calibration in chromatographic techniques,
was used with the aerosol MS. All aerosol samples were collected
on the sampling valve collection surface by using +2.5 kV collection
voltage. The aerosol ow rate was 2 LPM and the mass window was
adjusted and switched between 100 amu and 350 amu.
3. Results and discussion
In this study, three gas chromatographic techniques were developed for the determination of n-alkanes and PAHs in aerosol
particles. The techniques were compared with each other and with
aerosol MS in terms of sensitivity, sampling time, amount of work
required, and repeatability. Analyzes of nanoparticles (30100 nm)
from wood pyrolysis collected via the sampling system were used
for the comparison. Particle concentrations in the different particle
sizes during the sampling periods varied between about 104 and
106 particles/cm3 .
3.1. Analytical characteristics of the techniques
The GC and GC GC techniques were optimized to achieve the
best peak resolution in the shortest possible time. The validation
420
154
Fig. 2. GC GCTOFMS plot of a standard solution of 500 g/L of PAHs and n-alkanes and 5 mg/L of internal standards 1,1 -binaphthyl and 4,4 -dibromo-octauorobiphenyl.
parameters, including linearity, repeatability, and limits of detection and quantication, were then determined for each technique.
The detection limits (LODs) were calculated as 3.3 times the standard deviation of the peak response for ten replicates (n = 10),
corresponding to an S/N ratio of about three. The quantitation limits (LOQs) were calculated as LODs using a factor of ten for the
deviation [29].
3.1.1. GC GCTOFMS
In developing the GC GC technique, we optimized the modulation frequency and temperature programming to obtain good
separation of target analytes. The column combination was chosen on the basis of earlier studies [20]. Fig. 2 shows the optimized
separation of the target compounds. As can be seen, all compounds
are well separated because of the second column. The peak designations for n-alkanes used in Fig. 2 are based on the number of
carbon atoms in hydrocarbon molecule (C10C28), while the PAHs
were numbered according to the numbering in Section 2.1. Because
of their high boiling point and thus long analysis time, PAHs 1618
were excluded from the chromatographic study. The most abundant ion (57 Da) was used for the quantitation of hydrocarbons,
while molecular ions were used for PAHs. The separation in the
second column was much faster than that in the rst (0.84 s vs.
57.66 min for triacontane, the target compound with the longest
retention time) and was therefore performed under essentially
isothermal conditions. Since all the components of an individual fraction are of virtually the same volatility, the separation on
the second column depends only on the specic interactions of
Table 1
Analytical characteristics of different chromatographic techniques for ten selected analytes (n = 10).
Compound
Method
GC GCTOFMS
GCTOFMS
GCQMS
RSD%a
LODb (g L1 )
LOQb (g L1 )
RSD%a
LODb (g L1 )
LOQb (g L1 )
RSD%a
LODb (g L1 )
n-Alkanes
Dodecane (C10)c
Hexadecane (C16)
Eicosane (C20)
Tetracosane (C24)
Octacosane (C28)
4.03
4.88
5.00
4.28
2.29
0.2
1.4
1.4
3.7
7.9
0.6
4.3
4.3
11.3
23.9
2.97
5.03
5.64
4.91
4.01
2.7
14.7
13.2
14.0
21.2
8.2
44.6
40.0
42.5
64.4
1.6
6.6
7.2
7.1
8.9
17
32
14
32
49
52
99
42
99
150
PAHs
Acenaphthene (3)
Phenanthrene (5)
Pyrene (9)
Chrysene (11)
Benzo[a]pyrene (14)
1.57
5.42
4.74
8.5
7.78
1.1
0.6
0.5
1.3
3.0
3.2
1.8
1.5
3.9
9.2
4.50
5.96
6.18
6.88
5.54
4.8
3.3
4.7
6.2
13.6
14.7
9.9
14.3
18.9
41.1
4.9
6.1
5.6
6.2
7.7
24
14
9
23
17
72
42
26
68
51
a
b
c
LOQb (g L1 )
421
155
Fig. 3. Aerosol MS spectra of different particle sizes in samples from wood combustion and standard liquid sample. (A) 30 nm particles collected for 15 min, (B) 50 nm
particles collected for 15 min, (C) 70 nm particles collected for 15 min, (D) 70 nm particles collected for 30 min and (E) 1 l of 10 g/L standard solution containing PAHs and
n-alkanes. The marked ions represent uoranthene (202), pyrene (202), benz(a)anthracene (228), chrysene (228), benzo(b)uoranthene (252), benzo(k)uoranthene (252),
benzo(a)pyrene (252), indeno[1,2,3-cd]pyrene (276), benzo [ghi]perylene (276), dibenzo[ah]anthracene (278). Other marked ions were tentatively identied as fragments
of high molecular mass alkanes.
ane, the peak areas found in the blanks were subtracted from the
peak areas of the standard solutions and the samples.
3.1.2. GCTOFMS
The column settings and temperature program for the
GCTOFMS separation, were the same as those used in
GC GCTOFMS. It is clear that the separation of PAHs is not
sufcient when compared with the two-dimensional separation.
Extracting ion chromatograms will not solve the problem because
the molecular ions for the last eluting compounds are the same. We
used a relatively simple standard mixture in this research, but in
ambient aerosol samples overlapping could be critical.
Table 1 shows the main analytical characteristics of the
optimized GCTOFMS technique. The calibration curves were constructed as described in the GC GCTOFMS section. The peak areas
from the extracted ion chromatograms were used for quantitation. For the determination of LODs, a 10-g/L solution was used
for all compounds selected except chrysene and benzo(a)pyrene;
for these a 50-g/L solution was used. The R2 was always
above 0.9956; the RSD for a 500-g/L sample and n = 10 was
equal to 6.9% or less; the limits of detection ranged between
2.7 g/L and 21.2 g/L and the quantitation limits from 8.1 g/L
to 64.3 g/L.
3.1.3. GCQMS
The optimized conditions for GCQMS analysis were similar
to those for GCTOFMS, the main difference was being the faster
temperature program. The separation efciency was not better
with slower temperature programming, but the analysis time was
increased substantially and so the faster program was used. Five
levels ranging from 200 g/L to 2000 g/L were used to construct
the calibration curves. Each standard solution was analyzed in triplicate. The peak areas for the quantitation ions in the extracted ion
chromatograms were used as calibration variables.
The analytical characteristics of the GCQMS technique are
shown in Table 1. A 30-g/L solution was used for the determination of LODs of the PAHs and n-alkanes. The R2 values were at
least 0.9952 for all compounds. Repeatability, for a concentration
level of 500 g/L and n = 10, was satisfactory, with an RSD of 8.9%
or less. The limits of detection ranged from 9 g/L to 49 g/L and
the quantitation limits between 26 g/L and 150 g/L.
3.1.4. Aerosol MS
The aerosol MS system showed good sensitivity for the standard PAH and n-alkane solutions. 1 l of the 10 g/L standard
solution was sufcient to give detectable signals of PAHs 817.
Higher concentrations (1 mg/L solution) were needed to see the
422
156
Fig. 4. Comparison of GC GCTOFMS (top) and GCTOFMS (bottom) extracted ion chromatograms of a 100-nm sample collected for 15 min.
alkanes because fragmentation of the n-alkanes makes the individual identications difcult. When mass window was adjusted to
50100 amu the alkane pattern (chain loss of 14 amu corresponds
to loss of CH2 ) could be identied. Unfortunately there was too
much variation between the standard samples at every concentration level to allow quantitative analysis. This variation is probably
due to the varying cleanliness of the sample collection surface and
artifact formation during the laser desorption process. The data
acquisition card also had its limitations: signals of greater than
50 mV intensity were recorded as of 50 mV intensity. Many signals at standard samples should have been stronger signals. It is
also relevant that aerosol MS produces many different spectra from
the same sample. Normally a single sample will produce about
2030 spectra, which are subsequently added together manually.
The sample compounds and desorption laser intensity determine
how long the sample is viable. This feature of the aerosol MS will
also generate some uncertainties for the instruments quantitative
nature.
The standard aerosol MS spectrum was compared with the average spectrum of the total ion chromatogram (TIC) from GCMS,
and many of the same peaks were seen in the two spectra. These
peaks include PAH molecular ions (all those for standard solution
except naphthalene) and some alkane peaks (e.g., m/z 43, 57, 71 and
up to 295). These ionization methods (EI in the chromatographic
techniques and photo ionization in aerosol MS) are comparable at
least in some degree since the photo ionization produced a similar spectrum with less fragments in the area of small m/z values.
Occasionally the M+ ion was seen more easily with photo ionization.
The aerosol MS was sensitive and able to detect target compounds in wood smoke aerosol particles. Particle collection times
were generally shorter than in lter collections but signals were
still detected, especially for PAH compounds. An example of an
aerosol MS spectra is presented in Fig. 3. From this gure, some
PAHs and alkanes were identied by comparison with the spectrum of the standard solution. Further, there was some variation
423
157
424
158
Table 2
Concentrations of the target compounds found in a 100-nm aerosol sample analyzed
by GC GCTOFMS and GCTOFMS.
Compounds
Concentration (g/L)
GC GCTOFMS
n-Alkanes
Decane
Dodecane
Tetradecane
Hexadecane
Octadecane
Eicosane
Docosane
Tetracosane
Hexacosane
Octacosane
Triacontane
35
48
160
150
280
260
320
310
400
180
200
5
2
20
10
20
20
20
20
20
30
30
PAHs
Naphthalene
Acenaphthylene
Acenaphthene
Fluorene
Phenanthrene
Anthracene
Carbazole
Fluoranthene
Pyrene
Benz(a)anthracene
Chrysene
Benzo(b)uoranthene
Benzo(k)uoranthene
Benzo(a)pyrene
18
17
7
11
120
26
9
350
360
100
60
70
52
70
6
4
4
5
10
4
4
20
20
20
10
20
6
10
Table 3
Concentration of the target compounds in samples of different particle sizes analyzed by GC GCTOFMS.
Compounds
GCTOFMS
50 nm
70 nm
100 nm
20 10
60 8
150 2
130 10
150 20
170 30
n-Alkanes
Decane
Dodecane
Tetradecane
Hexadecane
Octadecane
Eicosane
Docosane
Tetracosane
Hexacosane
Octacosane
Triacontane
24 5
31 2
80 10
40 10
100 20
70 10
130 10
150 10
200 10
140 30
150 30
26 5
40 2
120 10
50 10
82 20
120 10
180 20
200 10
230 20
120 20
140 30
41 5
49 2
190 10
160 10
300 30
350 20
460 20
600 20
890 90
550 40
480 50
35
48
160
150
280
260
320
310
400
180
200
5
2
20
10
20
20
20
20
20
30
30
18 6
11 5
<LOQ
<LOQ
100 10
33 9
73
300 10
300 10
90 20
90 30
80 30
50 10
40 7
PAHs
Naphthalene
Acenaphthylene
Acenaphthene
Fluorene
Phenanthrene
Anthracene
Carbazole
Fluoranthene
Pyrene
Benz(a)anthracene
Chrysene
Benzo(b)uoranthene
Benzo(k)uoranthene
Benzo(a)pyrene
11 6
10 4
<LOQ
11 5
37 6
11 4
<LOQ
14 8
12 5
<LOQ
<LOQ
ND
ND
ND
15 6
79 4
17 4
33 4
320 10
63 3
<LOQ
880 50
870 60
330 50
270 10
330 40
200 20
270 30
20 6
19 4
11 4
19 4
52 6
22 4
19 7
54 7
67 7
22 7
15 6
<LOQ
16 6
<LOQ
18
17
7
11
120
26
9
350
360
100
60
70
52
70
6
4
4
5
10
4
7
20
20
20
10
20
6
10
ND = not determined.
LOQ = limit of quantitation.
extract showed that the difference was not due to the analytical
performance. The main cause of the variability may have been
the burning system; sampling conditions were never identical.
Also, the sampling time may have inuenced the results. Some
Table 4
Concentration of the target compounds in three different 70 nm size samples analyzed by GC GCTOFMS.
Compounds
Concentration (g/L)
70 nm (Sample 1)
70 nm (Sample 2)
70 nm (Sample 3)
n-Alkanes
Decane
Dodecane
Tetradecane
Hexadecane
Octadecane
Eicosane
Docosane
Tetracosane
Hexacosane
Octacosane
Triacontane
41 5
49 2
190 10
160 10
300 30
350 20
460 20
600 20
890 90
550 40
480 50
30 5
47 2
150 10
34 10
65 8
68 8
130 10
120 10
140 20
55 6
57 3
33 5
46 2
153 10
38 10
88 9
68 8
140 10
130 10
190 20
90 20
73 3
PAHs
Naphthalene
Acenaphthylene
Acenaphthene
Fluorene
Phenanthrene
Anthracene
Carbazole
Fluoranthene
Pyrene
Benz(a) anthracene
Chrysene
Benzo(b)uoranthene
Benzo(k)uoranthene
Benzo (a) pyrene
20 6
19 4
11 4
19 4
52 6
22 4
19 7
54 7
67 7
22 7
15 6
<LOQ
16 6
<LOQ
11 6
10 4
<LOQ
95
35 6
74
<LOQ
54 7
53 7
<LOQ
<LOQ
<LOQ
ND
ND
12 6
12 4
<LOQ
75
12 6
<LOQ
<LOQ
19 8
20 4
<LOQ
<LOQ
<LOQ
<LOQ
<LOQ
ND = not determined.
LOQ = limit of quantitation.
4. Conclusions
A new sampling technique with particle charging and size segregation was successfully applied in the analysis of wood combustion
particles of selected sizes. All four analytical techniques employed
(GC GCTOFMS, 1D GCTOFMS, 1D GCQMS, and aerosol MS) performed successfully. In the chromatographic techniques, particles
were collected on a lter and analyzed off-line after sample preparation, whereas in aerosol MS the analysis was performed directly
from the particle source. Although the individual samples varied
widely due to irregular burning of the wood during the sampling,
the results show that the developed sampling system is useful for
this kind of analysis. The GC GCTOFMS provided the best separation efciency and most reliable identication and quantitation of
compounds. Collection and analysis times were shortest for aerosol
MS, because the particle mass needed for the analysis was least. We
conclude that all these techniques are useful for this type of analysis, and compound identication is more reliable when the results
from different techniques can be combined.
425
159
Acknowledgments
This research was supported by the Academy of Finland Center of Excellence program (project number 1118615). Sara Herrero
Martn and Jos Luis Prez Pavn acknowledge the nancial support
of the DGI (CTQ2007-63157/BQU) and the Consejera de Educacin
y Cultura of the Junta de Castilla y Len (Project SA112A08). Sara
Herrero Martn acknowledges an FPU grant from the Spanish Ministerio de Ciencia e Innovacin. The authors thank Kati Vainikka,
Pekka Tarkiainen, Mikael Ehn, Heikki Junninen, Matti Jussila, Minna
Kallio, Doug Worsnop and Tofwerk Co. for technical help and assistance.
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[35] P. Koriyr, P.E.G. Leonards, J. de Boer, U.A.Th. Brinkman, J. Chromatogr. A 958
(2002) 203.
X
CONCLUSIONES
GENERALES
XConclusionesgenerales
429
________________________________________________________________________
Eneltrabajorealizadosehanpropuestonuevasmetodologasanalticas
para la determinacin de compuestos orgnicos a niveles de trazas en
diferentesmatricesambientales.
Con el fin de estudiar las posibilidades de las nuevas metodologas
propuestas,sehanpuestoapuntodiferentesmtodosanalticosdestinados
alaresolucindeproblemasambientalesconcretos.
Acontinuacinseexponenlasprincipalesconclusionesobtenidas,unas
de carcter general, referidas a las metodologas utilizadas, y otras
particularesdelasdiferentesaplicacionesquesehandesarrollado.
430
XConclusionesgenerales
________________________________________________________________________
Elusocombinadodecromatografadegasesrpidaconinyeccin
solventvent:
Alolargodeestetrabajosehandemostradolasposibilidadesdeeste
acoplamiento, tanto en la inyeccin de muestras lquidas como
gaseosas.
Elmododeinyeccinsolventvent,graciasalaeliminacincontrolada
del disolvente, permite introducir grandes volmenes de muestra en
columnas capilares estrechas. De esta manera se soluciona la principal
limitacindeestetipodecolumnas(bajacapacidad,yportantomenor
sensibilidaddelmtodo).
XConclusionesgenerales
431
________________________________________________________________________
432
XConclusionesgenerales
________________________________________________________________________
XI
VERSINRESUMIDAENINGLS/
SUMMARYINENGLISH
IPreface
435
_________________________________________________________________________
Thefollowingchapterisasummaryofthedevelopedwork.Itincludes:a
tableofcontentsinwhichthedifferentchaptersandsectionstranslatedinto
English have been marked, general aims of this work, a brief introduction
about the new trend in analytical chemistry, instrumental configurations
used, aim and conclusions for each studied application and finally, the
generalconclusionsofthewholework.
Thefivepublishedarticlesandthetwoarticlessubmittedforpublication
havebeenincludedineachchapteroftheThesis,aftertheSpanishversion.
Thesearticlescovertheexperimentalandtheresultsanddiscussionsections
ofeachoneoftheapplicationsdeveloped.
CONTENTS
1.4.Modulesforsamplinginjection(InEnglish)....................... 455
1.4.1.Staticheadspace(InEnglish) ....................................... 455
1.4.2.CombiPALautosampler(InEnglish)........................ 457
2.GASCHROMATOGRAPHWITHPROGRAMMED
TEMPERATUREVAPORIZERANDELECTRONCAPTURE
DETECTOR............................................................................................ 458
2.1.Gaschromatograph(InEnglish)........................................... 458
2.2.Programmedtemperaturevaporizer(InEnglish).............. 458
2.3.Electroncapturedetector(InEnglish) ................................. 458
2.4.Liquidsamplesinjector(InEnglish)..................................... 459
3.GASCHROMATOGRAPH(GCXGC)WITHSPLIT/SPLITLESS
INJECTORANDTIMEOFFLIGHTMASSSPECTROMETER
DETECTOR............................................................................................ 460
3.1.Gaschromatograph(InEnglish)........................................... 460
3.2.Timeofflightmassspectrometerdetector(InEnglish)..... 461
3.3.Liquidsamplesinjector(InEnglish)..................................... 461
IV. Headspaceprogrammed temperature vaporizerfast gas
chromatographymass
spectrometry
coupling
for
the
determinationoftrihalomethanesinwater(InEnglish). ................... 463
1.INTRODUCTION
2.AIM(InEnglish) ............................................................................... 463
3.EXPERIMENTAL
3.1.Chemicals
3.2.Standardsolutionsandsamples
3.3.HSPTVGCMSinstrumentation
3.4.HSPTVGCMSprocedures
3.4.1.Headspacesampling
3.4.2.Programmedtemperaturevaporization
3.4.3.Gaschromatography
3.4.4.Massspectrometry
3.5.Dataanalysis
4.RESULTSANDDISCUSSION
4.1.HSPTVFastGCMSdata
4.1.1.Optimizationofchromatographicseparation
4.1.2.Studyofinjectionmodes
4.1.3.Dataacquisitionmodes
4.2.Calibrationcurves
4.3.Determinationoftrihalomethanesindifferentaqueous
matrices
5.CONCLUSIONS(InEnglish) .......................................................... 464
6.REFERENCES
PUBLISHEDARTICLEIV1(InEnglish).......................................... 119
PUBLISHEDARTICLEIV2(InEnglish).......................................... 129
V. Programmed temperature vaporizer based method for the
sensitivedeterminationoftrihalomethanesandbenzene,toluene,
ethylbenzeneandxylenesinsoils(InEnglish) .................................... 465
1.INTRODUCCTION
2.AIM(InEnglish) ............................................................................... 465
3.EXPERIMENTAL
3.1.Chemicals
3.2.Standardsolutionsandsamples
3.2.1.Watersamples
3.2.2.Soilsamples
3.2.2.1.Spikedsoils
3.2.2.2.CRMsoils
3.3.HSPTVGCMSinstrumentation
3.4.HSPTVGCMSprocedure
3.4.1.Headspacesampling
3.4.2.Programmedtemperaturevaporizer
3.4.3.Gaschromatography
3.4.4.Massspectrometry
3.5.Dataanalysis
4.RESULTSANDDISCUSSION
4.1.Optimizationoftheexperimentalconditionsinwater
matrices
4.1.1.HSPTVfastGCMSparameters
4.1.2.FastGCparameters
4.1.3.MSconditions
4.1.4.Timeofanalysis
4.2.Analysisofsoilsamples
4.2.1.AdditionofwaterandNaCl
4.2.2.Matrixeffect
4.2.3.Analyticalcharacteristicsofthemethod
4.2.4.Determinationofthetargetcompoundsinthreedifferent
CRMsoils
5.CONCLUSIONS(InEnglish) ......................................................... 466
6.REFERENCES
PUBLISHEDARTICLEV(InEnglish) ............................................. 189
VI. Simplified QuEChERS approach for the extraction of
chlorinatedcompoundsfromsoilsamples(InEnglish) ..................... 467
1.INTRODUCTION
2.AIM(InEnglish) ............................................................................... 467
3.EXPERIMENTAL
3.1.Chemicals
3.2.Standardsolutionsandsamples
3.2.1.Standardsolutions
3.2.2.Soilsamples
3.3.Apparatus
3.4.Analyticalprocedure
4.RESULTSANDDISCUSSION
4.1.Optimizationofthevariablesinvolvedintheextraction
method
4.1.1.SelectionofsolventforPTVGCanalysis
4.1.1.1.Studyofsolventsregardingtheirsuitability
forchromatographicanalysis
4.1.1.2.Studyofsolventsregardingtheirextraction
efficiencyforthetargetcompounds
4.1.2.Wateraddition
4.1.3.Selectionofsample:solventratio
4.1.4.Additionofdifferentsaltcombinations
4.2.Analyterecoveriesandreproducibility
5.CONCLUSIONS(InEnglish) .......................................................... 468
6.REFERENCES
PUBLISHEDARTICLEVI(InEnglish)............................................ 231
VII. Determination of trihalomethanes in soil matrices by
simplified QuEChERS extraction and fast gas chromatography
withelectroncapturedetection(InEnglish) ........................................ 469
1.INTRODUCTION
2.AIMS(InEnglish) ............................................................................. 469
3.EXPERIMENTAL
3.1.Chemicals
3.2.Standardsolutionsandsamples
3.2.1.Standardsolutions
3.2.2.Soilsamples
3.2.2.1.Spikedsoils
3.2.2.2.CRMsoils
3.2.2.Watersamples
3.3.Apparatus
3.4.Analyticalprocedures
3.4.1.Samplepretreatment(QuEChERS)
3.4.2.GCECDanalysis
4.RESULTSANDDISCUSSION
4.1.Variablesinvolvedinthepretreatmentstepforthe
extractionoftrihalomethanesfromsoilsamples
4.2.Experimentalchromatographicvariables
4.2.1.Chromatographicparameters
4.2.2.ECDparameters
4.2.3.Optimizedexperimentalconditions
4.3.Matrixeffect
4.4.Analyterecoveriesindifferentmatrices
4.5.Analyticalcharacteristicofthemethodinfortified
gardensamples
4.6.DeterminationofTHMsindifferentCRMsoils
5.CONCLUSIONS(InEnglish) ......................................................... 470
6.REFERENCES
ARTICLESUBMITTEDFORPUBLICATIONVII(InEnglish).. 273
VIII. Simplified QuEChERS extraction for the determination of
trihalomethanesandbenzene,toluene,ethylbenzeneandxylenes
in soil matrices by fast gas chromatography with mass
spectrometrydetection(InEnglish) ....................................................... 471
1.INTRODUCTION
2.AIM(InEnglish) ............................................................................... 471
3.EXPERIMENTAL
3.1.Chemicals
3.2.Standardsolutionsandsamples
3.2.1.Standardsolutions
3.2.2.Soilsamples
3.2.2.1.Spikedsoils
3.2.2.2.CRMsoils
3.3.PTVGCMSinstrumentation
3.4.Analyticalprocedures
3.4.1.Samplepretreatment(simplifiedQuEChERS)
3.4.2.Programmedtemperaturevaporization
3.4.3.Gaschromatography
3.4.4.Massspectrometry
3.4.5.Dataanalysis
4.RESULTSANDDISCUSION
4.1.Optimizationoftheexperimentalconditions(PTVGCMS)
4.1.1.PTVconditions
4.1.2.FastGCparameters
4.1.3.MSparameters
4.1.4.Timeofanalysis
4.2.Analysisofsoilsamples
4.2.1.Matrixeffect
4.2.2.Analytesrecoveriesinsoilmatrices
4.2.3.Analyticalcharacteristicsofthemethod
4.2.4.DeterminationofTHMsandBTEXintwodifferentCRM
soils
5.CONCLUSIONS(InEnglish) .......................................................... 472
6.REFERENCES
IGeneralaims
445
_________________________________________________________________________
I
GENERALAIMS
ThemainaimofthisPhDThesisistoproposeanddevelopnew,fastand
sensitive methodologies based on gas chromatography, with minimal
sample treatment, for the determination of organic compounds at trace
levelsindifferentenvironmentalmatrices.
Thepresenceofcontaminantsinenvironmentalsampleshasbecomean
issueofgreatrelevanceandglobalconcerninrecentyears.Thisfactisdue
tothehigherknowledgethatwehavenowadaysaboutthepersistence,bio
accumulative character and toxic and carcinogenic effects of many
substancesthatarepresentinenvironmentalmatrices.Asconsequence,new
environmental regulations have emerged, which establish maximum
permitted levels of these substances, which tend to be increasingly
restrictive. In this context, there is an indisputable need to develop new
analyticalmethodsabletodeterminethepollutantsatthelevelsestablished
bylawand,atthesametime,followingtherequirementsofthenewtrend
inanalyticalchemistryofminimizationofthesolventuseandsimplification
and automatization of the methods. The methodologies proposed in this
workareincludedwithinthistrend.
Regarding the samples studied, different environmental matrices have
been considered (water, soils and air) in order to cover a representative
sampleoftheactualenvironmentalproblems.
Regarding the analytes determined, common pollutants of each matrix
have been considered. Moreover, the selected analytes are considered
prioritypollutantsbythemainofficialorganisms.
446
IGeneralaims
________________________________________________________________________
Headspaceprogrammed
chromatographymass
temperature
spectrometry
vaporizerfast
coupling
for
gas
the
determinationoftrihalomethanes(THMs)inwater.
SimplifiedQuEChERSapproachfortheextractionofchlorinated
compoundsfromsoilsamples.
IGeneralaims
447
_________________________________________________________________________
DeterminationofTrihalomethanesinsoilmatricesbysimplified
QuEChERS extraction and fast gas chromatography with
electroncapturedetection.
IIIntroduction
449
________________________________________________________________________
II
INTRODUCTION
Determination
of
organic
volatile/semivolatile
compounds
in
450
IIIntroduction
_________________________________________________________________________
IIIntroduction
451
________________________________________________________________________
1.REFERENCES
[1] N.Jakubowska,B.Zygmunt,Z.Polkowska,B.Zabiegaa,J.Namisnik,
J.Chromatogr.A1216(2009)422.
[2] B. GilbertLpez, J.F. GarcaReyes, A. MolinaDaz, Talanta 79 (2009)
109.
[3] T.Hytylinen,J.Chromatogr.A1186(2008)39.
[4] W.Wardencki,J.Curyo,J.Namisnik,J.Biochem.Biophys.Methods
70(2007)275.
[5] K. Demeestere, J. Dewulf , B. De Witte, H. Van Langenhove, J.
Chromatogr.A1153(2007)130.
[6] T.Hytylinen,M.L.Riekkola,Anal.Chim.Acta614(2008)27.
IIIInstrumentalconfigurations
453
_________________________________________________________________________
III
INSTRUMENTALCONFIGURATIONS
1.
GAS
CHROMATOGRAPH
WITH
PROGRAMMED
1.2.Programmedtemperaturevaporizer
ThePTVusedwasfromGerstel(CIS4;Gerstel,Baltimore,MD,USA).A
schematic representation of the device used is shown in figure 1. It has a
septumlesssamplinghead.CoolingwasaccomplishedwithliquidCO2,and
the heating was achieved by means of a heating coil, which provides a
homogenousheatingoftheinjectorbody.
454
IIIInstrumentalconfigurations
_________________________________________________________________________
Septumless
sampling head
Sample
CO2
Split valve
Liner
Heating coil
Chromatographic
column
Figure1:PTVinjectorCIS4fromGerstel
1.3.Quadrupolemassspectrometerdetector
ThequadrupolemassspectrometerusedwasanHP5973,equippedwith
an inert ion source operated in the electron impact mode using a 70 eV
ionizationvoltage.Therecommendedtemperaturesfortheionsourceand
the quadrupole were 230 C and 150 C, respectively. Scan and SIM
acquisitionmodeswereallowed.
IIIInstrumentalconfigurations
455
_________________________________________________________________________
1.4.Modulesforsamplinginjection
1.4.1.Staticheadspace
The static headspace sampler was a 7694 from Agilent Technologies
(Waldbronn, Germany) equipped with a tray for 44 consecutive samples
andanovenwithpositionsfor6samplevials.Theovencanbeheatedfrom
40Cto195C.Thesamplingsystemconsistedofastainlesssteelneedle,a
316SSsixportvalvewitha3mLnickelloopandtwosolenoidvalves(for
pressurizationandventing).Allthesystemisconnectedbynickeltubesand
canbeheatedto200C.
The headspace sampler is coupled to the PTV injector through an inert
transfer line of 80 cm length, which can be heated to a maximum
temperature of 220 C. Figure 2 shows the instrumental configuration
described.
HEADSPACE
SAMPLER
MASS
SPECTROMETER
GAS CHROMATOGRAPH
PROGRAMMABLE
TEMPERATURE
VAPORIZER
Figure2:HSPTVGCMS.
456
IIIInstrumentalconfigurations
_________________________________________________________________________
Thisinstrumentalconfigurationhasbeenusedinthedevelopmentofthe
applicationdescribedinchapterIV.
A modification of this instrumental configuration in which the Agilent
6890 GC was equipped with a Modular Accelerated Column Heater
(MACHTM) has also been used. This module is mounted outside the
conventionalGCoven.Thecapillarycolumn,aDBVRX(20mx0.18mmx
1m)fromAgilentJ&W,ismountedinaprotectivecase.Itiscoiledwith
an insulated heating wire and a temperature sensor wire along its entire
length.Temperaturesbetweenambientand400Ccanbeprogrammedata
maximumtemperaturerampof1800C/min.Fastcoolingisperformedbya
set of ventilators mounted underneath each column module. This module
can be heated and cooled very rapidly, making total analysis cycle times
very short. This instrumental configuration was used in chapter V and an
imageofitisshowninfigure3.
HEADSPACE
SAMPLER
PROGRAMMABLE
TEMPERATURE
VAPORIZER
MACH TM
MASS
SPECTROMETER
GAS
CHROMATOGRAPH
Figure3:HSPTVGCMSwithMACHTM
IIIInstrumentalconfigurations
457
_________________________________________________________________________
1.4.2.CombiPALautosampler
Anotherdeviceforsampleintroductionthathasbeenrecentlycoupledto
the PTVGCMS configuration is the CombiPAL (CTC analytics AG,
Zwingen,Switzerland).Thisautosampleraddsversatilitytotheequipment
due to the possibility to choose different modalities of sample injection
(liquid injection, static headspace and solid phase microextraction). This
autosamplerhasbeenused,inliquidmode,intheapplicationdescribedin
chapterVIII.Animageoftheinstrumentalconfigurationisshowninfigure
4.
AUTO-SAMPLER
HEADSPACE
SAMPLER
TRAYS OF VIALS
CombiPAL
CONTROLLER
PROGRAMMABLE
TEMPERATURE
VAPORIZER
MASS
SPECTROMETER
GAS CHROMATOGRAPH
Figure4:CombiPALHSPTVGCMS
458
IIIInstrumentalconfigurations
_________________________________________________________________________
2.
GAS
CHROMATOGRAPH
WITH
PROGRAMMED
2.2.Programmedtemperaturevaporizer
ThePTVwasa6890fromAgilentTechnologies.Ithasthesametechnical
specifications as the PTV from Gerstel, described in the previous section,
andcanusethesameliners.Theonlydifferenceisthatthesamplinghead
has a septum, and therefore is more similar to conventional split/splitless
injectors.
2.3.Microelectroncapturedetector
The detector was a 63Ni microelectroncapture detector (ECD) from
Agilent Technologies (Waldbronn, Germany). According to the
specifications,thedetectionzonevolumeofthisdetectoris10timessmaller
thananyotherECD,whichtranslatesintogreatersensitivityanddecreases
thechanceofcellcontamination.
2.3.Liquidsamplesinjector
The automatic liquid sample injection system was an Agilent 7683
equippedwitha10Lmicrosyringe.
IIIInstrumentalconfigurations
459
_________________________________________________________________________
AUTOMATIC
LIQUID SAMPLER
INJECTION
-ELECTRON-CAPTURE
DETECTOR
PROGRAMMABLE
TEMPERATURE
VAPORIZER
GAS CHROMATOGRAPH
Figure5:PTVGCECD
460
IIIInstrumentalconfigurations
_________________________________________________________________________
3.
GAS
CHROMATOGRAPH
(GC
GC)
WITH
Secondary oven
Modulator
1st dimension
column
Figure6:Chromatographicovenwiththemodulatorandsecondaryoveninstalled.
IIIInstrumentalconfigurations
461
_________________________________________________________________________
3.2.Timeofflightmassspectrometerdetector
The TOFMS system was a LECO Pegasus 4D (LECO, St. Joseph, MI,
USA). The recommended temperature for the ion source was 200 C and
operatedintheelectronimpactmodeusinga70eVionizationvoltage.The
detector allows choosing the registered mass range and the frequency of
dataacquisition,whichcanbe500Hz.
ThePTVwasa6890fromAgilentTechnologies.Ithasthesametechnical
specificationsthanPTVfromGerstel.
3.3.Liquidsamplesinjector
The automatic liquid sample injection system was an Agilent 7683
equippedwitha10Lmicrosyringe.
Figure 7 shows an image of the instrumental configuration, which has
beenusedinthedevelopmentoftheapplicationdescribedinchapterIX.
Data
acquisition
and
processing
were
accomplished
with
462
IIIInstrumentalconfigurations
_________________________________________________________________________
LIQUID SAMPLES INJECTOR
GAS
CHROMATOGRAPH
MASS
SPECTROMETER
Figure7:GCXGCTOFM
IVDeterminationofTHMsinwater
463
_________________________________________________________________________
IV
HEADSPACEPROGRAMMEDTEMPERATURE
VAPORIZERFASTGASCHROMATOGRAPHY
MASSSPECTROMETRYCOUPLING
FORTHEDETERMINATION
OFTRIHALOMETHANESINWATER
1.AIM
Theaimofthisworkistoproposeanewmethodologyforthescreening
and rapid quantitative determination of THMs in water. The instrumental
configuration used consists of a headspace autosampler in combination
withaGCequippedwithaprogrammedtemperaturevaporizer(PTV)and
aMSdetector.ThePTVinjectorallowstheanalytespresentinthegasphase
oftheheadspacetobeconcentratedbymeansofacryogeniceffect,enabling
large amounts of sample to be injected into the chromatographic column
withoutthedrawbackofinitialbandbroadening.Inthiswayitispossible
toimprovesensitivity,maintainingthesimpleheadspaceinstrumentation.
464
IVDeterminationofTHMsinwater
_________________________________________________________________________
2.CONCLUSIONS
A new method for the determination of THMs in water has been
implemented based on the coupling of headspace sampling, solvent vent
injection and fast gas chromatographic separation with mass spectrometry
detection.Themainadvantagesobtainedareasfollows:
The use of headspace generation for introducing the sample has the
advantage that no prior treatment of the sample is required, thus
minimizingthecreationofanalyticalartifactsandtheerrorsassociatedwith
thisstepoftheanalyticalprocess.
Thesolventventinjectionmodeallowsrapidsampleinjectioninsplitless
mode,verylowdetectionlimitsbeingattainedwithoutthecriticalproblem
ofinitialsamplebandwidth.
The capillary column used allows rapid separations with halfheight
widthsrangingfrom1.68s(chloroform)to0.66s(bromoform).TheGCrun
timewas7.3min.
The use of mass spectrometry allows the identification and
quantificationoftheanalytesatthelowpptlevel.TheS/Nratiowasatleast
10fold higher when the SIM mode was used in data acquisition as
comparedwiththescanmode.
Theproposedmethodisextremelysensitive,withdetectionlimitsfrom
0.4to6ppt.
VDeterminationofTHMsandBTEXinsoilsbyHSPTVFGCMS
465
_________________________________________________________________________
V
PROGRAMMEDTEMPERATUREVAPORIZER
BASEDMETHODFORTHESENSITIVE
DETERMINATIONOFTRIHALOMETHANESAND
BENZENE,TOLUENE,ETHYLBENZENEAND
XYLENESINSOILS
1.AIM
Theaimofthisworkistoproposeamethodologybasedontheuseofa
headspace autosampler followed by fast gas chromatography and mass
spectrometry, using a programmable temperature vaporizer (PTV) for the
determination of THMs and BTEX in soils. With this configuration it is
possibletoretaintheadvantagesofthesimpleheadspaceinstrumentation,
achievinghighsensitivitythankstothepreconcentrationoftheanalytesin
the PTV and rapid separation of the compounds via fast gas
chromatography.
466
VDeterminationofTHMsandBTEXinsoilsbyHSPTVFGCMS
_________________________________________________________________________
2.CONCLUSIONS
A simple and very sensitive method has been implemented for the
determination of volatile organic compounds in soils. The instrumental
configurationisbasedonthecouplingofheadspacesampling,solventvent
injection, and fastgas chromatography separation with massspectrometry
detection.
ItisdemonstratedthatforBTEXtheadditionofwatertothesoilsaffords
higher extraction yields than NaCl. Owing to the presence of the matrix
effectastandardadditionsprotocolisproposedforthedeterminationofthe
targetcompoundsinsoilsamples.
The use of headspace generation for introducing the sample has the
advantagethatnopriortreatmentofthesampleisrequired,thusreducing
the experimental errors associated with this step of the analytical process.
Fast gas chromatography allows the separationof theeightcompoundsin
lessthan4.60minandtheMACHcanbeheatedandcooledveryrapidly,
makingthetotalanalysiscycletimeveryshort(9min).Thecryotrappingof
thecompoundsinthePTV(solventventinjectionmode)togetherwithmass
spectrometrydetectioninSIMmodegivesrisetoahighlysensitivemethod
withlimitsofdetectionintheorderofng/kginsandsamples.
The optimized method was successfully applied in three different
certified reference materials. The soils chosen had different percentages of
sand, clay and organic matter, such that the results obtained can be
extrapolatedtomostnaturalsoils.Inallcases,thepredictedconcentrations
by the calibrations are within the prediction interval specified in the
certifiedmaterial.Inviewoftheresultsobtainedthemethodproposedhere
isfast,reliable,accurateandhighlysensitive.
VISimplifiedQuEChERSfortheextractionofchlorinatedcompoundsfromsoils
467
________________________________________________________________________
VI
SIMPLIFIEDQuEChERSAPPROACHFORTHE
EXTRACTIONOFCHLORINATEDCOMPOUNDS
FROMSOILSAMPLES
1.AIM
Inthiswork,anewandsimplifiedversionoftheQuEChERSmethodis
proposed for the extraction of chlorinated pollutant compounds from soil
samples. To solve the main disadvantage associated to the QuEChERS
methodology (low preconcentration of the compounds in the extracts),
analysisbygaschromatographywithamicroelectroncapturedetector(
ECD), which improves the selectivity and sensitivity with respect to
conventionaldetectors,isproposed.
Themainadvantageoftheproposedversionisrelatedtotheelimination
of the dispersive SPE step after the extraction. In consequence, the new
QuEChERS version includes fewer treatment stages of the sample, which
makes the final procedure simpler, faster, and cheaper and minimizes the
errorsassociatedwiththisstep.
In order to prove the suitability of the proposed approach, chlorinated
compoundsofdifferentcharacteristicsrelatedtotheirvolatilityandpolarity
have been chosen. Two solvents (acetonitrile and ethyl acetate) have been
evaluated in terms of their suitability for chromatographic analysis and of
theirextractionefficiencyfromdifferentsoilmatrices.
468
VISimplifiedQuEChERSfortheextractionofchlorinatedcompoundsfromsoils
________________________________________________________________________
2.CONCLUSIONS
AmodifiedandsimplifiedQuEChERSapproachhasbeenevaluatedfor
thedeterminationofchlorinatedcompoundsinsoilmatrices.
Both MeCN and EtOAc can be used for analyte extraction, although
EtOAcispreferredbecauseitshowschromatographicadvantages.Different
injectiontechniqueshavebeenevaluatedwithgoodresultsinallcases.
Theproposedmethoddoesnotrequireacleanupstepandsingleliquid
liquid partitioning is achieved with the addition of just MgSO4 to the
sample:solventmixture.
Futureworkmustbedevelopedtoaddressmoreextensivevalidationof
this method in order to extend it to different organic compounds in soil
matrices.
VIIQuEChERSFGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
469
________________________________________________________________________
VII
DETERMINATIONOFTRIHALOMETHANES
INSOILMATRICESBY
SIMPLIFIEDQuEChERSEXTRACTION
ANDFASTGASCHROMATOGRAPHY
WITHELECTRONCAPTUREDETECTION
1.AIM
TheaimofthisworkistoproposetheuseofthesimplifiedQuEChERS
extraction method for the determination of trihalomethanes (chloroform,
bromodichloromethane, dibromochloromethane and bromoform) in soil
samplesbyfastGCwithelectroncapturedetection.Thehighselectivityand
sensitivityofthedetectorusedforhalogenatedcompoundswouldachieve
gooddetectionlimits,inspiteofthelowpreconcentrationfactorsobtained
withtheQuEChERSextractiontechnique.
The chromatographic determination of the target compounds will be
optimized,theexistenceofamatrixeffectwillbecheckedandtheanalytical
characteristics of the method will be determined in a fortified garden soil
sample. Two certified reference materials (CRMs) will be used to validate
theproposedmethodology.
470
VIIQuEChERSFGCECDforthedeterminationofTHMsinsoils
_________________________________________________________________________
2.CONCLUSIONS
A method based on QuEChERS extraction followed by fast gas
chromatography and microelectron capture detection has been
implementedforthedeterminationofTHMsinsoilsamples.Thesimplified
QuEChERS method, optimized for the extraction of THMs from soil
samples, meets the characteristics of the original QuEChERS method and
includes more advantages, since it is simpler, faster and cheaper, with the
consequentreductioninerrorsassociatedwithsamplemanipulation.
Theexperimentalconditionsofthefastchromatographicseparationhave
beenoptimized.Withthefinalmethod,thetargetcompoundseluteinless
than3.8min.Thetimeneededtoachieveinitialconditionswas4min,and
henceitwaspossibletoanalyzeanextractevery10min.
Upon comparing the slopes of the calibration curves in different
matrices,theexistenceofamatrixeffecthasbeendemonstrated.
Therecoveriesofthetargetcompoundsobtainedfromdifferenttypesof
matricesliewithinthe6594%recoveryrange.
The analytical characteristics of the method have been calculated in a
fortifiedgardensoilsample.Thedetectionlimitsachieved(6659ng/kg)are
ofthesameorderasthoseobtainedusingothermethodologiesreportedin
the literature. The repeatability of the method (2.56.7 %) and the
reproducibility of the overall approach (2.88.3 %) can be considered
excellent.
To validate the optimized method, two certified reference materials a
silty clay soil (RTCCRM631) and a clay soil (RTCCRM635) have been
analyzed. The calibration strategy used was the standard additions
protocol,andtheresultsobtainedwerehighlysatisfactory.
VIIIQuEChERSFGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
471
________________________________________________________________________
VIII
SIMPLIFIEDQuEChERSAPPROACHFORTHE
DETERMINATIONOFTRIHALOMETHANESAND
BENZENE,TOLUENE,ETHYLBENZENEAND
XYLENESINSOILMATRICESBYFASTGAS
CHROMATOGRAPHYWITHMASS
SPECTROMETRYDETECTION
1.AIM
Inthisworkweproposetheuseofamassspectrometerdetectorafterthe
analysisperformedbyQuEChERSextractionandfastgaschromatography
separationforthedeterminationofTHMsandBTEXfromsoilsamples.The
maindrawbackcommonlyassociatedwiththeQuEChERSmethod,oflow
preconcentration of the compounds in the extracts, was solved by using a
large volume injection technique. Moreover, the selected ion monitoring
(SIM)willbeemployedtoprovidelowerLOQintheanalysisofthetarget
compounds.
Theexperimentalconditionsoftheapparatuswillbechosen;astudyto
explore the existence of matrix effect will be performed; the analytical
characteristics of the method will be studied in a fortified garden soil
sample;andfinallythemethodwillbevalidatedbymeansoftheanalysisof
twocertifiedreferencematerials(CRMs).
472
VIIIQuEChERSFGCMSforthedeterminationofTHMsandBTEXinsoils
________________________________________________________________________
2.CONCLUSIONS
A simple, fast and sensitive method has been developed for the
determinationofTHMsandBTEXfromsoilsamples.Themethodisbased
on the extraction of the compounds by a simplified version of QuEChERS
and direct analysis of the extracts by large volume injectionfast gas
chromatographyandmassspectrometrydetection.
TheuseofaPTVwithalinerpackedwithTenaxTAandprogrammed
inthesolventventmodeallowedtheinjectionofahighvolumeofsample
(7 L), which gives rise to a great improvement of sensitivity for many of
the target compounds. The fast ramp of temperatures used in the oven
allowedtheseparationoftheeightcompoundsinlessthan6min.Theuse
ofmassspectrometrydetectioninSIMmoderesultsinanimprovementof
theselectivityandsensitivityofthemethod.
Theextractionefficiencyofthemethodfordifferenttypesofspikedsoils
liedwithinthe65to76%recoveryrange.Theanalyticalmethodprovides
excellent values of repeatability and reproducibility with detection limits
rangedbetween0.215g/kg.
The proposed methodology was validated by the analysis of two
certified reference materials (CRMs). The most satisfactory results were
obtained for the less volatile compounds due to their best properties for
largevolumeinjection.
IXDeterminationoforganiccompoundsinaerosolnanoparticlesbyGCmethods
473
_______________________________________________________________________
IX
DETERMINATIONOFORGANICCOMPOUNDS
FROMWOODCOMBUSTIONINAEROSOL
NANOPARTICLESBYDIFFERENTGAS
CHROMATOGRAPHICSYSTEMS
474
IXDeterminationoforganiccompoundsinaerosolnanoparticlesbyGCmethods
_________________________________________________________________________
1.AIM
The aim of this work is to study the analytical possibilities of three
chromatographic methods (GCQMS, GCTOFMS y GC X GCTOFMS) for
thedeterminationoforganiccompoundsinaerosolnanoparticles.Astarget
compounds alkanes and PAHs have been selected, they are commonly
present in environmental aerosols and many of them are carcinogenic to
humans.
The analytical characteristics of the three methods will be compared in
terms of sensitivity, sampling time, amount of work required, and
repeatability.
Aerosolnanoparticles(30100nm),sizeseparated,fromwoodpyrolysis
will be analyzed. Samples will be submitted to a simple pretreatment
method and the extracts obtained will be directly analyzed by the
chromatographic methods. The advantages of the higher separation
efficiencyofGCXGCintheanalysisofcomplexsampleswillbeevaluated.
As a final aim the concentrations of the target compounds in different
sizeaerosolnanoparticlessampleswillbedetermined.
IXDeterminationoforganiccompoundsinaerosolnanoparticlesbyGCmethods
475
_______________________________________________________________________
2.CONCLUSIONS
The analytical characteristics of three chromatographic methods (GC X
GCTOFMS, GCTOFMS y GCQMS) have been evaluated for the analysis
ofalkanesandPAHsattracelevelsandwithallofthemgoodresultshave
beenachieved.
Regarding the application of these methods to the determination of the
targetcompoundsinaerosolnanoparticlesfromwoodcombustion,itcanbe
concluded that the separation efficiency is higher in GC x GC than in
conventionalanalyseswith1DGC.Withasimplesamplepretreatmentthe
GC x GC system provides a comprehensive picture of the sample.
Moreover, the structured chromatograms that are obtained facilitate the
recognition of unknowns and improve the reliability of the identification.
Additionally,the2Dtechniqueismoresensitiveandthereforeitispossible
touselowersamplingtimestoachieveamountsofsamplewithdetectable
concentrationsofthecompounds.
The concentrations of compounds found in three samples of the same
size(70nm)weresignificantlydifferent,duetothevariabilityintheprocess
of wood burning. Despite this, it can be concluded that within the set of
samplesanalyzed(30nm,50nm,70nmy100nm)nalkanesconcentrations
were significant higher in smaller particle sizes (30 nm); however, higher
concentrationsofPAHswerefoundinhigherparticlesizes.
XGeneralconclusions
477
_______________________________________________________________________
II
GENERALCONCLUSIONS
InthisPhDThesisnewanalyticalmethodologiesforthedeterminationof
organiccompoundsattracelevelsindifferentenvironmentalmatriceshave
beenproposed.
In order to prove the possibilities of the new methodologies, different
analytical methods for the resolution of specific environmental problems
havebeendeveloped.
Themainconclusionsaresetoutbelow.Somearegeneralconclusionsof
the methodologies used and others are particular conclusions of the
differentapplicationsdeveloped.
478
XGeneralconclusions
_________________________________________________________________________
and in both cases results have been highly satisfactory. The main
advantagesoftheinstrumentalconfigurationHSPTVFGCMSarethat
itissimple, fast,automatic,withminimalsample handlingandhighly
sensitive. The detection limits achieved in both applications where
among the lowest in comparison with those obtained with other
methodologies described in literature, which require several stages of
preconcentrationandlongeranalysistimes.Therefore,theinstrumental
configuration proposed here has a great potential in the analysis of
VOCsattracelevels.
Combinationoffastgaschromatographywithsampleintroduction
bymeansofsolventventmode:
Thepossibilitiesofthiscoupling,fortheinjectionofbothliquidand
gaseous samples, have been proved in the different applications
developedinthiswork.
Solventventinjectionmodeallowstheintroductionoflargeamounts
of sample in narrow capillary columns, thanks to the solvent
elimination. This will solve the main limitation of these columns (low
capacityand,thereforelesssensitivityofthemethod).
XGeneralconclusions
479
_______________________________________________________________________
Gaschromatographywithelectroncapturedetection(forchlorinated
compounds)orwithmassspectrometrydetection(fornonhalogenated
compoundssuchasBTEX)hasbeenusedtoanalyzetheextracts.
Withtheelectroncapturedetector,thankstoitshighselectivity,very
satisfactorydetectionlimitshavebeenachieved.Thelimitsofdetection
obtained with the mass spectrometry detector were higher;
nevertheless, this detector allows the unequivocal identification and
quantification of essentially any volatile or semivolatile compound
presentinthesample.
The good results obtained for the volatile compounds and for 1,2
dichlorobenzene and hexachlorobenzene, show the great potential of
this technique in the extraction of semivolatile organic compounds,
whose extraction by means of HS would be less effective and even in
somecasesnotpossible.
Combinationofminimumsamplepretreatmentandseparationby
GCXGCintheanalysisofcomplexsamples:
With the instrumental configuration proposed it is possible to
simplify the conventional analytical procedures applied to complex
samples, which generally require several pretreatment steps and
cleaningoftheextracts.
This instrumental configuration has been applied to the
determination of organic compounds from wood combustion aerosol
nanoparticles.
The results obtained highlight the advantages of GC X GC over 1D
GCintheanalysisofcomplexsamples.Thehighseparationefficiencyof
thetechniqueGCXGCallowsdetectingandquantifyingallthetarget
compounds with a simple sample pretreatment. Moreover better
sensitivity levels are achieved, thanks to the focalization of the
compoundsinthemodulator.Asaresultthesamplingtimeneededto
480
XGeneralconclusions
_________________________________________________________________________
ANEXOI:
Informessobreeltrabajo
realizado
APPENDIXI:
Reportsondevelopedwork
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA
INFORME DOCTORES EUROPEOS
TESIS DOCTORAL
REFEREE REPORT ON THE PhD TESIS PRESENTED
IN THE UNIVERSITY OF SALAMANCA (SPAIN) BY
REFEREE:
Prof.:
Bo Karlberg
Position:
Professor
Department:
Institution:
Stockholm University
Address:
Phone:
+46705141186
Fax
+468156391
E-mail:
bo.karlberg@anchem.su.se
NO
YES
This thesis meets the requirements for
presentation as an oral dissertation
Rating
Outstanding
Excellent
Very Good
Good
Sound
Defficient
DATE:
2010-05-06
SIGNATURE:
Planning
/methodology
Scientific
/technical merit
Originality
Report
In the last years the quality control of environment became a very
important task. This imposed the developing of new analytical methods
having in mind the pollutants level, the requirements of the new trend in
analytical chemistry, the minimization of the solvent used and the
simplification and automatisation of the methods.
The aim of this PhD Thesis it was to propose and develop new, fast and
sensitive methodologies based on gas chromatography, with minimal
sample treatment, for the determination of organic compounds at trace
levels in different environmental matrices, such as water, soil and air.
Thus, a new method for the determination of THMs in water has been
implemented based on the coupling of headspace sampling, solvent vent
injection and fast gas chromatographic separation with mass
spectrometry detection.
Also, a simple and very sensitive method has been implemented for the
determination of volatile organic compounds in soils. The instrumental
configuration is based on the coupling of headspace sampling, solvent
vent injection, and fast gas chromatography separation with massspectrometry detection.
A modified and simplified QuEChERS approach has been evaluated for
the determination of chlorinated compounds in soil matrices. A method
based on QuEChERS extraction followed by fast gas chromatography
and micro-electron capture detection has been implemented for the
determination of THMs in soil samples. The simplified QuEChERS
method, optimized for the extraction of THMs from soil samples, meets
the characteristics of the original QuEChERS method and includes more
advantages, since it is simpler, faster and cheaper, with the consequent
reduction in errors associated with sample manipulation.
A simple, fast and sensitive method has been developed for the
determination of THMs and BTEX from soil samples. The method is
based on the extraction of the compounds by a simplified version of
QuEChERS and direct analysis of the extracts by large volume injectionfast gas chromatography and mass spectrometry detection.
The analytical characteristics of three chromatographic methods
(GCXGC-TOFMS, GC-TOFMS y GC-QMS) have been evaluated for the
analysis of alkanes and PAHs at trace levels and with all of them good
results have been achieved.
The results obtained during the Ph.D. stage were published in prestigious
analytical journals, with a high impact factor, as Journal of
Chromatography A (3 papers), Analytica Chimica Acta (a review),
Talanta ( 1 paper) and two were sent for publication.
The thesis it is well presented and structured, the subject it is very
important and the material of thesis can be used also by the students and
specialists in the field of chromatography.
In conlusion, I should like to congratulate the supervisors and also the
Ph.D. Student, for their work and very good results obtained.