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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1.- Separacin por cromatografa en columna de una mezcla de cristal violeta y naranja
de metilo
Se sujeta la columna, en posicin vertical, a un soporte utilizando dos pinzas: una cerca de la
llave y otra en la parte superior y se introduce un pequeo copo de algodn en su extremo
inferior. Se coloca un erlenmeyer debajo de la columna y un embudo en la parte superior
(Figura 1). En un vaso de precipitados se prepara una suspensin con 5 g. de gel de slice
(adsorbente) y 50 mL. de etanol (eluyente). Se aade un poco de etanol a la columna y luego
se vierte la suspensin previamente preparada en su interior. Se abre la llave, se golpean
suavemente las paredes de la columna mientras dura la sedimentacin del adsorbente para
que este se compacte adecuadamente procurando que no se formen burbujas y evitando que
se seque la gel de slice.
El etanol que se va recogiendo de la columna se incorpora al vaso donde se prepar la
suspensin adsorbente-eluyente para as recuperar la gel de slice que hubiera podido quedar y
se trasvasa todo de nuevo a la columna. Se deja que el eluyente baje hasta una altura sobre el
adsorbente de 1-2 mm, se cierra la llave de la columna se quita el embudo y con una pipeta se
aade cuidadosamente 1 mL de una solucin preparada de cristal violeta y naranja de metilo.
Se abre la llave de la columna para que esta disolucin quede inmersa en la gel de slice y se
vuelve a cerrar cuando la disolucin de colorantes alcanza una altura de 1 mm sobre el
adsorbente. Se aaden con una pipeta 5mL de etanol con mucho cuidado y muy lentamente
para no distorsionar el frente de la columna. A continuacin, se abre la llave y se contina
aadiendo etanol para desarrollar la columna hasta que se recoja el primer colorante. Despus
se utiliza una mezcla de disolventes: etanol/trietilamina en proporcin 9:1 como eluyente para el
segundo colorante ( Figura 2).
Observacin: Durante todo el proceso nunca debe secarse la columna!
PREGUNTAS
1. El valor del Rf depende del adsorbente utilizado? y del eluyente?
2. Sugerir un ensayo para determinar la pureza de un compuesto por CCF