Cpia no autorizada

MAIO/1992

ABNT-Associao
Brasileira de
Normas Tcnicas

NBR 12614

guas - Determinao da demanda

bioqumica de oxignio (DBO) - Mtodo
de incubao (20C, cinco dias)

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Mtodo de ensaio

Copyright 1992,
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NormasTcnicas
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Origem: Projeto 01:602.04-003/87

CEET - Comisso de Estudo Especial Temporria de Meio Ambiente
CE-01:602..04 - Comisso de Estudo de Anlises Orgnicas
NBR 12614 - Biochemical oxygen demand determination incubation method
(20C, five days) - Method of test
Descriptors: Water. Biochemical. Oxygen demand
Palavras-chave: gua. Oxignio. DBO

SUMRIO
1 Objetivo
2 Documentos complementares
3 Definio
4 Aparelhagem
5 Execuo do ensaio
6 Resultados

5 pginas

NBR 11958 - guas - Determinao de oxignio dissolvido - Mtodo do eletrodo de membrana - Mtodo
de ensaio

3 Definio
Para os efeitos desta Norma adotada a definio de 3.1.

1 Objetivo

3.1 Demanda bioqumica de oxignio (DBO)

Esta Norma prescreve o mtodo de determinao da demanda bioqumica de oxignio (DBO) em amostras de colees lquidas em geral, efluentes domsticos e industriais, lodos e gua de mar.

Quantidade de oxignio necessria para a oxidao biolgica e qumica das substncias oxidveis contidas na
amostra, nas condies do ensaio.

2 Documentos complementares
Na aplicao desta Norma necessrio consultar:
NBR 9898 - Preservao e tcnicas de amostragem
de efluentes lquidos e corpos receptores - Procedimento
NBR 10357 - guas - Determinao da demanda
qumica e oxignio (DQO) - Mtodos de refluxo aberto, refluxo fechado-titulomtrico e refluxo fechadocolorimtrico - Mtodo de ensaio
NBR 10559 - guas - Determinao de oxignio dissolvido - Mtodo iodomtrico de Winkler e suas modificaes - Mtodo de ensaio

4 Aparelhagem
Na aplicao deste mtodo utilizada a seguinte aparelhagem:
a) incubadora a ar ou um banho de gua termostatizada (20 1)C, sem luz;
b) frascos de DBO de vidro de borossilicato, boca estreita, volume 250 mL - 300 mL, tampa esmerilhada, com selo dgua;
c) provetas de 1000 mL, com tampa;
d) bquer de 500 mL, 1000 mL e 2000 mL;
e) pipetas volumtricas, capacidades diversas;

NBR 10664 - guas - Determinao de resduos (slidos) - Mtodo gravimtrico - Mtodo de ensaio

f) bales volumtricos, capacidades diversas.

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5 Execuo do ensaio

5.1.10 Inibidor de nitrificao 2-cloro-6 (triclorometil) piridina

5.1 Reagentes e solues

5.1.11 gua de diluio sem semente

5.1.1 gua destilada

Estocar a gua destilada a 20C no escuro, em recipiente

de vidro com tampa de algodo, por 24 h, para satur-la
de oxignio; no momento do uso, adicionar 1 mL de cada
uma das solues-tampo de fosfatos (5.1.2), sulfato de
magnsio (5.1.3), cloreto de clcio (5.1.4) e cloreto frrico
(5.1.5) por litro de gua destilada. Estocar a (20 1)C. A
gua de diluio sem semente no deve consumir mais
que 0,2 mg O2/L num perodo de incubao de cinco dias.

Contendo menos que 0,01 mg/L de cobre, isenta de cloro, cloraminas, alcalinidade de hidrxidos, matria orgnica e cidos.
Nota: Alternativamente, usar gua deionizada.
5.1.2 Soluo-tampo de fosfatos

Dissolver 8,5 g de fosfato monobsico de potssio p.a.

(KH2PO4); 21,75 g de fosfato dibsico de potssio p.a.
(K2HPO4); 33,4 de fosfato dibsico de sdio heptaidratado p.a. (Na2HPO4.7H2O); e 1,7 g de cloreto de amnio p.a.
(NH4Cl) em 500 mL de gua destilada. Diluir a 1000 mL. O
pH da soluo deve ser 7,2 sem ajuste.
5.1.3 Soluo de sulfato de magnsio

Dissolver 22,5 g de sulfato de magnsio heptaidratado p.a.

(MgSO4.7H2O) em gua destilada e diluir a 1000 mL.
5.1.4 Soluo de cloreto de clcio

Dissolver 27,5 g de cloreto de clcio p.a. (CaCl2), em gua

destilada, e diluir a 1000 mL.
5.1.5 Soluo de cloreto frrico

Nota: Alternativamente, saturar de oxignio a gua destilada

por aerao com ar comprimido limpo (pode-se usar bomba de ar do tipo da usada para aqurio). Aguardar aproximadamente 30 min para evitar o uso de gua supersaturada de oxignio.
5.1.12 gua de diluio com semente

Preparar a gua de diluio conforme 5.1.11. No momento do uso, adicionar uma quantidade adequada de semente (5.1.13) gua de diluio, de modo que a DBO da
gua de diluio com semente seja da ordem de 0,6 mg
O2/L a 1,0 mg O2/L.
Nota: A quantidade de semente a ser adicionada gua de diluio pode ser determinada atravs de:
P=

60
; V = 10 P
A

Onde:

Dissolver 0,25 g de cloreto frrico hexaidratado p.a.

(FeCl3.6H2O), em gua destilada, e diluir a 1000 mL.

A = demanda qumica de oxignio (DQO) da semente,

mg O2/L, conforme NBR 10357

Nota: Desprezar as solues anteriormente mencionadas, assim que for observada qualquer alterao, especialmente
sinais de desenvolvimento biolgico.

P = % de semente na gua de diluio

V = volume da semente (mL) a acrescentar a 1 L de gua
de diluio

5.1.6 Soluo de hidrxido de sdio 1 N

5.1.13 Semente

Dissolver 40 g de hidrxido de sdio p.a. (NaOH), em gua

destilada isenta de gs carbnico (CO2), e diluir a 1000 mL.
Guardar em frasco de polietileno ou em frasco de vidro
borossilicato com rolha de borracha.
5.1.7 Soluo de cido sulfrico 1 N

Diluir 28 mL de cido sulfrico concentrado p.a. (H2SO4) a

1000 mL, com gua destilada.
5.1.8 Soluo de sulfito de sdio 0,025 N

Dissolver 1,575 g de sulfito de sdio p.a. (Na2SO3) em

1000 mL de gua destilada. Preparar diariamente. (1 mL
desta soluo elimina 0,5 mg de cloro residual.)
5.1.9 Soluo de cido glutmico-glicose

Secar aproximadamente 200 mg de glicose p.a. e 200 mg

de cido glutmico p.a. em estufa a 103C por 1 h. Pesar
150 mg de glicose e 150 mg de cido glutmico, dissolver
em gua destilada e diluir a 1000 mL. Preparar imediatamente antes do uso.
Nota: Esta soluo apresenta uma DBO terica de aproximadamente 200 mg O2/L.

A finalidade da semente introduzir uma populao biolgica capaz de oxidar a matria orgnica biodegradvel
da amostra. Na presena de microorganismos na amostra, como no caso de esgotos, gua de superfcie e alguns
efluentes no-clorados, no preciso empregar semente. Na ausncia ou presena de pequenas quantidades de
microorganismos na amostra, em virtude da temperatura
elevada, altas diluies, condies extremas de pH e
efluentes industriais no-tratados, preciso empregar semente.
Nota: A sememte deve ser testada quanto sua atividade
com uma diluio a 2% da soluo de cido glutmicoglicose (5.1.9). Caso a DBO do teste no esteja entre
(200 37)mg O2/L, rejeitar qualquer resultado analtico obtido com esta semente e gua de diluio. Verificar as
causas.
5.1.13.1 O material de preferncia empregado como semente o efluente do sistema de tratamento biolgico da
amostra a analisar, sem desinfeco. A semente deve ser
aclimatada a 20C.
Nota: Alternativamente, poder se obter semente da gua receptora, preferencialmente 3 km a 8 km a jusante do lanamento.

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5.1.13.2 Na impossibilidade de se utilizar o recomendado

em 5.1.13.1, usar esgoto domstico, decantado no mnimo por 1 h e no mximo por 36 h a 20C. A semente deve ser livre de partculas em suspenso. Se necessrio, filtrar em algodo.
Nota: Alternativamente, usar como semente uma suspenso de
solo rico em material orgnico ou lodo ativado.
5.1.13.3 Quando o material orgnico presente na amostra
no facilmente oxidvel pelos microorganismos do esgoto domstico, utilizar semente adaptvel em laboratrio, procedendo da seguinte forma:

a) colocar aproximadamente 10L de esgoto sanitrio

bruto em cuba de vidro e fazer aerao com sistema de agitao mecnica durante cinco dias, mudando a cada dia 50% do volume do esgoto aerado, aps decantao de 1h. O lodo resultante desta operao encontra-se ativado. O pH do lquido
equalizado situa-se entre 7,6 e 8,6;
b) completados os cinco dias de aerao, deixar o lquido decantar e retirar todo o sobrenadante, permanecendo o lodo no fundo da cuba de aerao;

deve ser feito a -20C no perodo mximo de 30 min,

e a amostra dever ser acondicionada em vrios
frascos, com volumes prximos daqueles que sero utilizados na anlise da DBO, pois descongelamentos sucessivos ocasionam queda no ttulo da
semente. A semente conservada pelo processo de
congelamento poder necessitar de reaclimatao
atravs de aerao, podendo ser utilizada por um
perodo mximo de seis meses.
5.2 Princpio do mtodo
A demanda bioqumica de oxignio um teste emprico
que corresponde diferena entre as concentraes de
oxignio no incio e no fim do perodo de incubao, em
condies especficas do ensaio. A temperatura de incubao padronizada em 20C e o tempo de incubao em
cinco dias. Admite-se que nestas condies 80% da matria orgnica carbonada j estejam mineralizados e comeando a nitrificao. Uma oxidao total, em geral, leva cerca de 20 dias.
5.3 Interferentes
5.3.1 Substncias inorgnicas redutoras, como sulfeto e

ferro ferroso, ocasionam erros positivos.

c) completar o volume original com uma mistura de
70% de esgoto sanitrio bruto e 30% da amostra a
analisar, a qual teve o seu pH ajustado para 7,0.
Fazer aerao durante trs dias;

5.3.2 O pH da amostra interfere no comportamento dos

microorganismos, devendo permanecer entre 6,5 e 7,5.

5.3.3 Elevadas quantidades de algas ocasionam erros

d) aps este perodo, um tero do lquido equalizado

esgotado e o restante deixado decantar por 1h.
Retirar o lquido sobrenadante, permanecendo o
lodo ativado no fundo da cuba. A unidade reintegrada ao volume original pela adio de uma
mistura de 50% de esgoto sanitrio e 50% da
amostra a analisar. Fazer aerao durante trs
dias;
e) esgotar novamente um tero do lquido equalizado e o restante decantar por 1h. Retirar o lquido
sobrenadante, permanecendo o lodo ativado no
fundo da cuba de aerao. Reintegrar ao volume
original adicionando uma mistura de 30% de esgoto sanitrio bruto e 70% da amostra a analisar.
Fazer aerao durante cinco dias;
f) ao final deste perodo, a semente esta pronta para uso (lquido equalizado), normalmente possuindo
as seguintes caractersticas:
DQO - 60 mg O2/L a 150 mg O2/L
DBO - 30 mg O2/L a 100 mg O2/L

positivos.
5.3.4 O cloro que interfere no desenvolvimento dos microorganismos da amostra deve ser eliminado atravs da
adio de soluo de sulfito de sdio (5.1.8).
5.3.5 Amostras supersaturadas de oxignio contendo mais

de 9 mg O2/L a 20C podem apresentar perda de oxignio

durante a incubao. Reduzir o teor de oxignio saturao pela agitao da amostra.
5.3.6 A presena de microorganismos capazes de oxidar a

matria nitrogenada, no perodo de cinco dias, aumenta o

resultado final. Para evitar esta interferncia, adicionar
3,333mg do inibidor de nitrificao (5.1.10) a cada frasco
de incubao.
Nota: Alternativamente, adicionar 10mg do inibidor de nitrificao (5.1.10) por litro de gua de diluio.
5.3.7 Interferem ainda outros fatores dificilmente contro-

lveis, tais como:

a) durao da fase de crescimento dos micro-organismos;

g) o exame biolgico deve indicar a presena de nmero considervel de protozorios (ciliados fixos);

b) velocidade de utilizao do oxignio pelos interferentes;

h) para conservar a semente, retirar de cinco em

cinco dias um tero da semente aerada equalizada e recolocar na cuba um volume igual ao retirado de uma mistura de 70% da amostra a ser analisada (com ph ajustado para 7,0) e 30% de esgoto sanitrio bruto. A aerao dever ser contnua;

c) atividade e concentrao desconhecida dos microorganismos;

5.4 Procedimento

i) outro processo de conservao da semente consiste no congelamento desta. Este congelamento

Existem variaes do mtodo, podendo-se adapt-lo aos

diversos tipos de amostras, a saber:

d) presena de txicos.

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a) mtodo A - incubao sem diluio,

Onde:
P1, P2, P3 e P4 = percentagem de amostra da primeira
quarta proveta, respectivamente

- aplica-se a guas superficiais pouco poludas,

que contm microorganismos prprios e oxignio suficiente para que, aps cinco dias de incubao, ainda haja oxignio na amostra;
b) mtodo B - incubao com diluio,
- aplica-se a guas superficiais poludas, efluentes e guas residuais que tm microorganismos
prprios, mas no oxignio suficiente para que,
aps cinco dias de incubao, ainda haja oxignio dissolvido na amostra;
c) mtodo C - incubao com diluio e semeadura,
- aplica-se a guas residuais e efluentes que no
possuem microorganismos prprios, nem oxignio na amostra;
d) mtodo D - suspenso e incubao com diluio e
semeadura,
- aplica-se a lodos.
Nota: Coletar a amostra para determinao da DBO conforme
NBR 9898.
5.4.1 Mtodo A - Incubao sem diluio
5.4.1.1 Ajustar o pH da amostra entre 6,5 e 7,5 e eliminar os

interferentes, se necessrio, conforme 5.3.

5.4.1.2 Transferir por sifonao a amostra homogeneizada para dois frascos de DBO, at transbordar, e tampar
com cuidado sem deixar bolhas de ar no interior deles.

V1, V2, V3 e V4 = volume (mL) de amostra da primeira

quarta proveta respectivamente
5.4.2.3 Transferir, por sifonao, a amostra diluda de ca-

da proveta para dois frascos de DBO, at transbordar.

Tampar com cuidado sem deixar bolhas de ar no interior
deles. Obtm-se ento duas sries iguais de diluies da
amostra.
Nota: Alternativamente, preparar as diluies diretamente em
frascos de DBO aferidos, efetuando a correo de volume
no clculo final.
DBO = (ODi - OD5)d
Onde:
ODi = oxignio dissolvido inicial em mg/L, determinado
antes da incubao
OD5 = oxignio dissolvido em mg/L, determinado aps
cinco dias de incubao a 20C
d=

volume do frasco de DBO, em mL

volume da amostra utilizado, em mL

5.4.2.4 Aps 15 min, determinar a concentrao de oxignio dissolvido, OD1, em uma das sries de frascos.
5.4.2.5 Incubar a outra srie de frasco por (120 2) h a 20C
no escuro. Em seguida, determinar a concentrao de oxignio dissolvido, OD5.

5.4.1.3 Aps 15 min, determinar a concentrao de oxignio dissolvido OD i, em um dos frascos, conforme
NBR 10559 ou NBR 11958.

5.4.2.6 Efetuar um controle da gua de diluio sem semente (5.1.11). Encher frascos de DBO e medir a concentrao de oxignio dissolvido de um deles e a do outro
aps cinco dias de incubao.

5.4.1.4 Incubar o outro frasco por (120 2) h a 20C no

5.4.3 Mtodo C - Incubao com diluio e semeadura

escuro. Em seguida, determinar a concentrao de oxignio dissolvido, OD5.

5.4.3.1 Proceder conforme 5.4.2.1 a 5.4.2.5, empregando

gua de diluio, com semente (5.1.12).

5.4.2 Mtodo B - Incubao com diluio

5.4.3.2 Proceder com a semente conforme 5.4.2.2 a
5.4.2.1 Ajustar o pH da amostra entre 6,5 e 7,5 e eliminar

5.4.2.5.

os interferentes, se necessrio, conforme 5.3.

5.4.2.2 Preparar no mnimo quatro diluies adequadas da

amostra, em provetas de 1000 mL, enchendo-as parcialmente com gua de diluio sem semente (5.1.11). Acrescentar a cada proveta volume de amostra correspondente, para obterem-se as diluies. Completar a 1000 mL
com gua de diluio (5.1.11), homogeneizando sem formao de bolhas de ar.
Nota: Sugesto prtica para determinao das diluies adequadas:
500
P3 =
; V3 = 10 P3
DQO da amostra
P4 = 2 P3 ; V4 = 10 P4
P2 =
P1 =

P3
P2
P3
P4

; V2 = 10 P2
; V1 = 10 P1

5.4.4 Mtodo D - Suspenso e incubao com diluio e

semeadura
5.4.4.1 Preparar uma suspenso de quantidade conhecida de lodo mido, aproximadamente 20 g em 1 L de
gua destilada.
5.4.4.2 Ajustar o pH da suspenso entre 6,5 e 7,5, se necessrio.
5.4.4.3 Proceder com a suspenso conforme 5.4.2.2 a
5.4.2.5, empregando gua de diluio, com semente
(5.1.12).
5.4.4.4 Proceder com a semente conforme 5.4.2.2 a

5.4.2.5.
5.4.4.5 Determinar o teor de resduo total do lodo. Consultar NBR 10664.

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6 Resultados

6.1 Expresso dos resultados

= relao entre os percentuais de semente

presente na amostra e na semente-controle,
ou seja:
% semente na amostra
% semente-controle

f=

6.1.1 Mtodo A: A expresso do resultado da DBO :

Nota: Para obter o resultado final, observar nota de 6.1.2.

mg O2/L = ODi - OD5

6.1.4 Mtodo D: A expresso do resultado da DBO para

Onde:

cada diluio :

ODi = oxignio dissolvido inicial em mg/L, determinado antes da incubao

mg O2/L =

(ODi - OD5) - (ODis - OD5s) f

p.Q.T

Onde:
OD5 = oxignio dissolvido em mg/L, determinado
aps cinco dias de incubao a 20C

ODi = oxignio dissolvido inicial da amostra em

mg/L, determinado antes da incubao

6.1.2 Mtodo B: A expresso do resultado da DBO para

cada diluio :
mg O2/L =

(ODi - OD5) 100

% amostra

Onde:
ODi = oxignio dissolvido inicial em mg/L, determinado antes da incubao
OD5 = oxignio dissolvido em mg/L, determinado
aps cinco dias de incubao a 20C
Nota: Escolher, para clculo do resultado da DBO, aquela diluio ou a mdia das diluies que apresentarem um consumo de 40% a 70% da quantidade inicial de oxignio. As
diluies escolhidas devem apresentar no mnimo 1 mg/L
de oxignio dissolvido aps cinco dias de incubao, e o
consumo mnimo de oxignio deve ser superior a 2 mg/L.
Para determinar a percentagem de OD consumido, empregar a seguinte frmula:
% O2 consumido =

OD5 = oxignio dissolvido da amostra em mg/L, determinado aps cinco dias de incubao a
20C
ODis = oxignio dissolvido inicial da semente em
mg/L, obtido atravs de diluies adequadas
e medido separadamente para controle
OD5s = oxignio dissolvido da semente em m g/L,
aps cinco dias de incubao a 20C, obtido atravs de diluies adequadas e medido separadamente para controle
p

= frao volumtrica da amostra usada para

realizar as diluies

= relao entre os percentuais de semente

presente na amostra e na semente-controle,
ou seja:
f=

(ODi - OD5) 100

ODi

% semente na amostra
% semente-controle

= quantidade de lodo mido com que foi

preparada a suspenso, em g/L

= teor de slidos do lodo, em g/g

6.1.3 Mtodo C: A expresso do resultado da DBO para

cada diluio :
mg O2/L =

(ODi - OD5) - (ODis - OD5s) f

p

Onde:

6.2 Preciso e exatido

ODi = oxignio dissolvido inicial da amostra em

mg/L, determinado antes da incubao
OD5 = oxignio dissolvido da amostra em mg/L, determinado aps cinco dias de incubao a
20C
ODi = oxignio dissolvido inicial da semente em
mg/L, obtido atravs de diluies adequadas
e medido separadamente para controle
OD5s = oxignio dissolvido da semente em mg/L,
aps cinco dias de incubao a 20C, obtido atravs de diluies adequadas e medido separadamente para controle
p

Nota: O resultado expresso na base seca.

= frao volumtrica da amostra usada para

realizar as diluies

6.2.1 No existe, at a presente data, padro para se de-

terminar a exatido do teste de DBO.

6.2.2 Conforme o Standard Methods of the Examination
of Water and Wastewater, 16 edio, num estudo interlaboratorial envolvendo de 86 a 102 laboratrios, foi
analisada DBOs em amostras sintticas preparadas atravs de uma mistura de 1:1 de cido glutmico com glicose (5.1.9), numa concentrao que varia de 5 mg/L a
340 mg/L. A equao da regresso para mdia X e para
o desvio-padro s foi:

X = 0,665 (quantidade de padro acondicionado - 0,149)

s = 0,120 (quantidade de padro adicionado + 1,04)
P ara um a m istura de padro prim rio de 300 m g/L, a m dia
de D B O s foi 199,4 m g/L com desvio-padro de 37,0 m g/L.