MICROBIOLOGIA

Definicin
Es el estudio de los MICROORGANISMOS, el mundo subvisible de los seres vivos.
Entre los microorganismos que infectan o coexisten con el hombre, vamos a
considerar a las bacterias, hongos, virus y protozoos. La microbiologa mdica
incluye tambin el estudio de parsitos multicelulares que causan enfermedad al ser
humano, que en algn momento de su vida exhiben formas microscpicas.
Hay 5 grupos de microorganismos: algas, bacterias, hongos, protozoos y virus.
Excepto por el tamao estos grupos no estn relacionados entre s; solo tienen una
propiedad en comn su pequeo tamao. Si no estn relacionados entre s, entonces
porque se los agrupa, para estudiarlos de forma conjunta? la respuesta es de tipo
prctico,.Las tcnicas para identificar, cultivar, y estudiar los grupos de m.o. son
semejantes. La microbiologa es una

ciencia coherente por su metodologa y

aproximacin a los problemas , no por la relacin entre los organismos q estudia.

Las diferencias fundamentales entre los grupos radican en su estructura .
Las

BACTERIAS son clulas pero son PROCARIOTAS, carecen de estructuras

internas asociadas a membranas, su material nuclear esta compuesto por una nica
molcula de ADN circular, que constituye el NICO cromosoma bacteriano, sin una
membrana nuclear que los separe del citoplasma.
Las ALGAS ,HONGOS Y PROTOZOOS son EUCARIOTAS , al igual que las plantas
y animales, tienen un ncleo rodeado de una membrana , llamada membrana
nuclear, y otras estructuras internas definidas por membranas , llamadas orgnulos.
Los VIRUS son ACELULARES, no son clulas , son partculas de cido nucleico ,
RNA o DNA , pero nunca ambos, gralmente estn incluidos en una cubierta proteica,
son incapaces de realizar las actividades necesarias para su reproduccin , solo
pueden reproducirse dentro de una clula hospedadora. En otras palabras los virus
son parsitos intracelulares obligados. Pueden infectar a animales, plantas y otros
m.o. Otra caracterstica importante es que son extremadamente pequeos , no
pueden

observarse

mediante

microscopio

ordinario

deben

estudiarse

bioqumicamente o con un microscopio electrnico .Los virus mas grandes son

alrededor de una dcima parte del tamao de una clula bacteriana tpica. Los mas
pequeos son alrededor de la milsima parte de ese tamao.

TAXONOMIA
La Taxonoma es la ciencia que estudia la clasificacin , identificacin y
nomenclatura de las bacterias, es una ciencia dinmica , su dinamismo esta
asociado a los avances de la metodologas usadas para su estudio.
La Clasificacin consiste en ordenar las bacterias en grupos.
La Identificacin permite encuadrar un organismo determinado en un grupo
taxonmico especfico, dentro de una clasificacin previamente establecida. Ej. Un
coco gram positivo que se agrupa en racimos , y ademas es catalasa positivo y
produce coagulasa y fermenta la glucosa , se identifica como Staphylococcus
aureus, porque esas propiedades corresponden a una especie previamente definida
con ese nombre.
La Nomenclatura permite definir un organismo sin tener que enumerar sus
propiedades y comunicarnos sin equivocarnos. El nombre de una especie
determinada tiene el mismo significado cualquiera sea la oportunidad en la que se
use y el idioma en que se hable. El sistema binomial de Ligneo , Gnero y especie,
es la forma de nomenclatura que se sigue usando, con el agregado de variedades,
tipos y otras subcaracterizaciones. Siempre el nombre genrico se escribe con
mayscula y el epteto especfico con minscula, la subespecie o variedad se escribe
, con un epteto especfico tambin en Minscula. Estos nombres deben escribirse
siempre con letra cursiva o subrayados. Una publicacin que reune los nombres de
las bacterias de importancia mdica es el BERGEYS MANUAL OF SISTEMATIC
BACTERIOLOGY, las bacterias en este manual estn situadas en el reino
Procaryotae en el que se reconocen 4 divisiones: - con pared celular y gram
negativas, - con pared celular y gram positivas, - sin pared celular,- arquibacterias y
otras. Tener en cuenta que nunca se identificar a un m.o si no se cuenta con
medios de cultivo, aislamiento y

enriquecimiento apropiados

y si no se usan

pruebas de identificacin especificas , ejecutadas exactamente como se describen

en la literatura.

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATOIO
En el laboratorio debemos tener en cuenta algunos peligros , que tenemos que
considerar para disminuir los riesgos de accidentes , adems de recordar la
presencia de otros elementos nocivos

o potencialmente peligrosos como los

productos biolgicos y reactivos qumicos. ( cidos, productos custicos, productos

voltiles , txicos o cancergenos). Para disminuir los riesgos es importante mantener
buenos hbitos de trabajo, respetar las normas de seguridad y conocer los peligros
potenciales dentro del laboratorio.
Conductas a seguir para evitar accidentes:
- Conocer los elementos de riesgo
- Conocer la forma de manejarlos
- Contar con los elementos necesarios para aplicar las tcnicas que disminuyan los
riesgos
- Aceptar consejos de aspectos tcnicos de personas con experiencia en el trabajo
de laboratorio
- Transmitir dichos aspectos a quienes recin ingresan al laboratorio
- Exigir de los superiores la implementacin de medidas de proteccin
- Restringir el acceso de visitantes.

Habitos de higiene enel laboratorio

Manos: tocan la suciedad , las fuentes de infeccin y sin que tengamos una nocin
clara de sus movimientos , las llevamos a la boca o a los ojos que son , a su vez , la
puerta de entrada de muchas infecciones. Son susceptibles de recibir pinchazos ,
heridas y abrasiones, deben lavarse con jabn todas las veces que sea necesario.
Para realizar algunas actividades se debe utilizar guantes, ya que los mismos
disminuyen la posibilidad de contaminarse o lastimarse. Hay que tener en cuenta que
si con las manos enguantadas se manipularon elementos nocivos , luego no debe,
por ej. Levantar el tubo del telefono. Por lo tanto es importante sacrselos.
Cabello: Es conveniente usarlo corto o recogido durante el trabajo.
En el laboratorio se debe evitar llevar lpices a la boca, fumar, etc. As mismo no se
deben consumir alimentos ( lquidos o slidos)
Regla de ORO DE LA BIOSEGURIDAD ( regla de los 4 NO)
En el laboratorio
-

No fumar

No beber

No comer

No maquillarse

Para estas acciones deben existir espacios destinados para tal fin.
Ropa protectora : Se debe trabajar CON GUARDAPOLVO , ya que proteger nuestra
ropa de salpicaduras . Debe llevarse peridicamente y quedar siempre dentro del
rea del laboratorio.

Otras protecciones
- Cuando se trabaja con sustancias corrosivas, es conveniente usar anteojos
protectores para disminuir el riesgo de salpicaduras o de exposicin a vapores que
pueden lesionar la crnea. Es importante TRABAJAR BAJO CAMPANA , cuando se
manipulan solventes. Se debe tener a mano una solucin para enjuague de ojos.
- Debe evitarse el pipeteo directo con la boca . Es conveniente usar

pipetas

automticas, propipetas , peras de goma y dispensadores.

Otra REGLA IMPORTANTE DE LA BIOSEGURIDAD
CONSIDERAR QUE TODA MUESTRA ES POTENCIALMENTE PELIGROSA Y
TRATARLA COMO TAL

Otras recomendaciones
- Proteger de sobrecargas los circuitos elctricos, usando disyuntores y polos a
tierra
- Utilizar una toma a tierra en la instalacin elctrica interior
- Usar tomacorrientes simples en lugar de tomas multiples
- Colocar los interruptores y disyuntores en lugares accesibles
- Usar calefactores con vlvula de seguridad
- Almacenar los gases comprimidos inflamables , lejos de fuentes de ignicin
- Revisar peridicamente los matafuegos
- Mantener los corredores y pasillos libres de obstculos que puedan entorpecer las
salidas

NORMAS PARA EL MANEJO Y ALMACENAMIENTO DE PRODUCTOS QUIMICOS

a-

Condiciones grales.
#Todos los reactivos deben estar debidamente rotulados y es importante
acostumbrarse a leer los rtulos. En ellos debe figurar: - Nombre del reactivo
- Si el producto necesita condiciones de almacenamiento especiales

- Si es txico
- Si es voltil
- Si durante el almacenamiento puede aumentar su presin , pudiendo producir la
explosin del recipiente
- Fecha de envase y/o vencimiento
- Temperatura de almacenamiento en determinados casos
# Si el producto es voltil, como x ej el ter, cloroformo o acetona, debe manejarse
bajo la campana , para evitar la aspiracin de vapores. Asimismo no deben
almacenarse en Heladera.
# Toda salpicadura debe ser neutralizada rpidamente y absorbida.
# Al terminar la tarea deben limpiarse las mesadas y ventilar el rea

b-

Productos inflamables
# Destinar reas especiales para el almacenamiento de este tipo de materiales
# Deben manejarse en reas ventiladas, usando la minima cantidad indispensable
para realizar el trabajo, lejos de los mecheros u otra fuente de calor.

c-

Productos txicos

Evitar inhalaciones y contacto con piel y mucosas

Trabajar bajo campana

Dispensar con bureta o dispensador automtico

Cuando no se sabe si el producto es o no txico , conviene tratarse como tal, y en
caso de accidente , lavar el rea con agua fra

d-

Productos corrosivos

Agregar siempre el cido o la base ( lcali)

sobre el agua (NUNCA a la

inversa), en pequeas cantidades y refrigerando

-

Evitar la inhalacin de vapores

e-

Productos cancergenos
Usar siempre ropa protectora , mascara y guantes descartables
El riesgo depende de - tiempo de exposicin

Frecuencia de exposicin

Concentracin del producto

Las vas de contaminacin son: -inhalacin de vapores

Ingestin ( x ej x manos contaminadas)

Contacto directo

f-

Productos explosivos
Son sensibles a golpes o impactos , x ej el cido pcrico y perxidos . No
almacenarlos en heladera comn o cerca de fuentes de calor.
Algunos comparten mas de una categora Ej.

Tetracloruro de Carbono es txico y cancergeno

cidos y bases fuertes son corrosivos y txicos

Precauciones en el manejo de material biolgico

- Tratar de realizar las operaciones dentro de una cabina de seguridad biolgica
- Reducir al mnimo la produccin de aerosoles
- Utilizar dispositivos mecnicos para el pipeteo : propipetas, peras de goma
- Tener en el laboratorio desinfectantes para piel y mesadas
- Colocar el material contaminado en recipientes con tapa , para esterilizarlos antes
del lavado
- Esterilizar o incinerar el material contaminado antes de su eliminacin.
Se han convenido internacionalmente , 4 niveles de peligrosidad para los organismos

Nivel 1 : Agentes No patgenos para el hombre

Se debe trabajar en condiciones mnimas de asepsia y esterilidad

Nivel 2: Microorganismos y procedimientos de riesgo moderado

-

El rea de riesgo debe restringirse al personal ,no permitindose el acceso a

personas q tengan aumentado por alguna causa el riesgo de infeccin ( Ej.
Inmunosuprimidos)

En el acceso al laboratorio figurarn seales de riesgo biolgico , condiciones

de ingreso y responsables del mismo ( nombre, telfono , domicilio )

El personal debe estar vacunado ( si correspondiera) y entrenado para prevenir

accidentes y actuar correctamente en el caso de q los hubiera

Control permanente de roedores e insectos

Uso de guardapolvo en el rea de trabajo exclusivamente ( considerar que el

guardapolvo es potencialmente un elemento contaminante)

Evitar el uso de jeringas o cualquier otra prctica q genere aerosoles

Las muestras deben tratarse siempre como potencialmente infectadas y tenerse en
cuenta las precauciones citadas

Nivel 3 : Microorg. Que pueden causar la muerte o aquellos de riesgo moderado en

cuya manipulacin se aplican procedimientos de trabajo que implican alto riesgo de
infeccin ( como la generacin de aerosoles)
- Acceso restringido al personal del laboratorio y deber llevarse un registro de las
- visitas, del personal de servicio y de accidentes
- Se tomarn muestras de suero peridicamente a todo el personal
- A las condiciones mnimas de asepsia y esterilidad se agrega el uso de cabinas de
seguridad, batas, mascaras, respiradores, guantes , etc.

Nivel 4: Microorg . exticos y/o altamente peligrosos y procedimientos de alto riesgo

-

Debe trabajarse en laboratorios especiales de mxima seguridad , en los que

es necesario ducharse y cambiarse de ropa tanto a la entrada como a la salida del
mismo y en donde existen barreras de aire con el exterior.

El manejo del material limpio y contaminado se realiza por canales altamente

controlado.

UNIDAD N2 Estructura de la clula procariota

Tamao y forma: Las bacterias son los microorg con vida libre de menor tamao que
existen en la naturaleza. La mayora de las esfricas tienen un tamao entre 0.2 y 2
m y la mayora de las bacterias alargadas tienen un ancho de 0,2 a 2 m y 1 a 10
m de largo.
Formas de bacterias: - las redondas se llaman cocos
-

las con forma de bastn se llaman bacilos

alg . bacilos cortos y redondeados se llaman cocobacilos

alg bacilos tienen extremos afinados se llaman bacilos fusiformes

los bacilos cortos curvos reciben el nombre de vibrio

Las bacterias espiralazas se llaman comnmente espirilos cuando son rgidas

y espiroquetas si son mas flexibles y ondulantes

Membrana celular
La

membrana

citoplasmtica

de

las

bacterias

es

una

bicapa

lipdica,

excepcionalmente rica en protenas , un 70% del peso seco son protenas y no

contiene esteroles a excep cin de los micoplasmas q si contienen, la membrana
citoplasmtica presenta repliegues hacia el interior del citosol , conocidos como
mesosomas, es el lugar donde se sintetizan el DNA , los polmeros que componen la
pared celular y los lpidos de membrana, contiene todo el sistema de transporte de
electrones de la clula, semejante a lo q ocurre en la mitocondria de la clula
eucariota, contiene las protenas receptoras q paraticipan en la quimiotaxis de la
bacteria hacia nutrientes solubles, adems cumple funciones de barrera permeable ,
selectiva y participa en la secrecin hacia el exterior de protenas , como las
exotoxinas , capaces de producir enfermedad.

Pared Celular
Por fuera de la membrana citoplasmtica se encuentra la pared celular, rgida de
pptidoglicano, presente en todas las bacterias , excepto , en los micoplasmas.
La presencia de la pared protege a la bacteria de la diferencia de presin osmtica ,
entre el medio interno de la bacteria y el exterior, de no existir la pared , la bacteria
estallara, la rigidez de la pared es la q da forma a la bacteria.
Existen dos tipos de pared bacteriana , que se pueden diferenciar por sus
caractersticas tintoriales . Hans Christian Gram us un mtodo de tincin que
permiti dividir a las bacterias en dos grupos : I - aquellas capaces de retener el
colorante cristal violeta luego de la decoloracin con alcohol acetona,

GRAM

POSITIVAS, y las que pierden el colorante por decoloracin , GRAM NEGATIVAS.

Todas las bacterias pueden asignarse a un grupo o a otro de acuerdo a como se
vean despus de la tincin , con 2 excepciones :1) las MICOBACTERIAS tienen una
estructura q responde a la de los gram + pero no se tie xq su pared tiene un alto
contenido de lpidos

2) los TREPONEMAS tienen estructura de pared Gram - , pero no pueden

observarse , xq son tan finos , que caen debajo del lmite de resolucin del
microscopio ptico y los MICOPLASMAS que no tienen pared celular.
La pared celular de los gram positivos es mas gruesa q la de los gram negativos,
posee los dos componentes fundamentales, peptidoglicano y acidos teicoicos y otros
carbohidratos y protenas que varan de acuerdo con la especie. El componente que
se encuentra en mayor cantidad es la murena, peptidoglicano que solo se encuentra
en los procariotas. La murena consiste en una cadena lineal de dos azcares
alternados , N- acetilglucosamina y cido N- acetil murmico, a cada residuo de
cido N acetil murmico se halla ligado un tetrapptido compuesto de D- y Laminocidos alternados..
La pared celular es estable y resiste el ataque de las enzimas de los mamiferos ,
excepto de la lisozima , que la degrada. El segundo componente de importancia de la
pared de los Gram

positivos, son los cidos teicoicos, se encuentran solo en

bacterias Gram + y constituyen los mayores determinantes antignicos q definen la

individualidad inmunolgica de esas bacterias. Hay otras molculas q pueden formar
parte de la pared de los gram + , algunos son polisacridos, como los de
Streptococcus q dan especificidad de grupo, otros son protenas como la protena M
del Streptococcus del grupo A , o la protena A del Staphylococcus aureus.

Gram negativos
La pared celular de los gram negativos: el espesor de la pared de una bacteria
gram - , es considerablemente menor q el de una bacteria gram + , la cantidad de
murena es mucho menor, pero igualmente protege y da forma a la bacteria,
CARECE de cidos teicoicos, tiene periplasma que contiene protenas en solucin,
estas protenas son enzimas con distintas funciones.

Membrana externa
Por fuera del periplasma, se encuentra una estructura exclusiva de las bacterias
gram - , denominada membrana externa, es una estructura asimtrica , esa asimetra
se debe a que la semicapa interior esta compuesta por lipopolisacaridos y la
semicapa exterior esta compuesta por Lipopolisacarido ( LPS) , que tiene actividad
de endotoxina y es altamente txico para el ser humano y otros mamferos.

El LPS est formado por el lpido A , un fosfolpidos que contiene glucosamina en

vez de glicerol un polisacrido no especfico el antgeno somtico O , el mas
abundante sobre la sup de toda bacteria gram - .

Cpsulas
Por fuera de la membrana de las bact . Gram y la gruesa pared de los Gram + alg
bacterias presentan una cpsula, que es

continua formada x un gel hidroflico,

cuando la estructura es firme con bordes definidos , se habla de cpsula, mientras q

cuando la estructra es amorfa y de bordes poco definidos e irregulares, se habla de
glicocalix o pseudocpsula. Las cpsulas son antignicas y durante la infeccin se
producen anticuerpos contra antgenos presentes en ellas.

Esporas

Las esporas , mejor llamadas endosporas, son formaciones con bajo contenido de
agua, que algunas bacterias producen en condiciones nutritivas desfavorables o bajo
condiciones de estrs, pocas especies de bacilos gram + producen esporas
mediante el proceso de esporulacin , las esporas son rganos de resistencia. La
resistencia de la espora al calor esta dada x su bajo contenido de agua y por la
presencia de dipicolinato de calcio, sustancia solo presente en esporas, la resistencia
a la accin de los agentes qumicos y en alguna medida a las radiaciones esta dada
x las envolturas q rodean a la espora, que desde adentro hacia fuera son : membrana interna
-

gruesa corteza de peptidoglucano modificado

protena insoluble semejante a queratina

capa de lipoprotena e hidrato de carbono .llamada exosporium.

La germinacin de una espora comienza una activacin disparada por una elevacin
de temperatura, acidez, o potencial reductor

Divisin celular
Las bacterias se multiplican por fisin binaria, en este proceso el crecimiento
contina hasta que la clula se divide en dos nuevas clulas.
Ejemplo: Escherichia coli

En este proceso se observa q las clulas se alargan a aproximadamente el doble de

la longitud , luego se da una particin que finalmente separa la clula en dos clulas
hijas.
A esta particin se la llama SEPTO , y es el resultado del crecimiento hacia adentro
de la membrana plasmtica y la pared celular a partir de direcciones opuestas , hasta
que las dos clulas hijas se separan, durante el crecimiento , todos los componentes
de la clula aumentan en cantidad, de modo que cada una de las clulas hijas recibe
un cromosoma completo y suficientes copias de todas las otras macromolculas,
iones etc. Para existir como una clula independiente. El tiempo necesario para un
ciclo de crecimiento completo es muy variable y depende de distintos factores , tanto
nutricionales como genticos.

COMPARACION ENTRE CELULA PROCARIOTA Y EUCARIOTA

OBSERVACION MICROSCOPICA
La observacin microscpica es el principal apoyo en la investigacin microbiolgica
rutinaria.
Los caracteres morfolgicos de los m.o. son :
-

tamao

Forma

Agrupacin

Coloracin de Gram

Acido resistencia

Cpsula

Espora

Materiales de reserva

Presencia de flagelos

Para poder conocerlos se deben realizar observaciones microscpicas, excepto para

el estudio de la movilidad, x mtodos no microscpicos que permiten deducir , en
forma indirecta la presencia o no de flagelos.

La observacin microscpica puede hacerse

1-

observando los m.o. vivos sin teir

2-

observando los m.o. muertos , teidos con colorantes

Observacin de m.o. sin coloracin
La observacin en fresco de celulas vivas : - preserva la forma natural de los m.o

reduce los efectos de distorsin que pueden ocurrir cuando se realiza el fijado
para colorear

se puede ver la movilidad, es decir si el m.o. es mvil o no

Puede ser de 2 tipos: - Sobre fondo claro

Sobre fondo oscuro

Sobre fondo claro: es de gran utilidad para determinar el tamao , forma, movilidad y
ciertas estructuras , y para observar la movilidad caracterstica de ciertos m.o.
Hay varias tcnicas pero generalmente se usa aquella en la cual la muestra se a
observar se coloca entra PORTAOBJETOS Y CUBREOBJETOS.

Sobre fondo oscuro : puede realizarse de dos maneras

1-

montaje con sustancias negras

2-

microscopa de fondo oscuro

Montaje con sustancias negras : ej . tinta china o nigrosina , este tipo de montaje se
utiliza para aumentar el contraste de los m.o. , sin recurrir a la coloracin, su mxima
utilidad es revelar la presencia de cpsula alrededor de las clulas de levaduras.
Se coloca en un portaobjetos una gota de tinta china o nigrosina, con ansa o pipeta
se agrega una gota de la suspensin microbiana se mezcla bien y se deposita
encima el cubreobjetos.

Microscopia de fondo oscuro: ej para la observacin de espiroquetas , como las

productoras de sfilis.

Colorante
Es toda sustancia coloreada que puede comunicar su color a otros cuerpos. Son
compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por los materiales
celulares
Existen varios tipos de colorantes
a-

los que son sales : que pueden ser - cidos , que se combinan con el
protoplasma bacteriano, si la clula no ha muerto el proceso de tincin la mata.

bsicos que se combinan con cidos nucleicos y polisacaridos cidos

b-

los liposolubles : que se combinan con los materiales lipdicos de la clula

usndose a menudo para revelar la localizacin de los depsitos de grasa. Ej negro
Sudn

Tcnica para realizar una preparacin coloreada

1-

preparacin del extendido : debe usarse un portaobjetos limpio y desengrasado

, - si el cultivo proviene de un medio lquido , se transfiere con ansa una gota del
mismo y se extiende hasta formar una fina pelcula que cubra el centro del
portaobjetos. si el cultivo proviene de un medio slido: con pipeta o ansa se coloca
una gota de agua en el centro del portaobjetos, se quema el ansa y se deja enfriar y
se transfiere con ella una pequea parte del cultivo al agua del portaobjetos , y se
mezcla hasta obtener una pequea turbidez, se quema el ansa nuevamente , se deja
enfriar y luego se extiende hasta formar una fina pelcula sobre el portaobjetos sin
tocar los bordes, se deja secar al aire , o si es posible se seca al aire caliente de la
llama

2-

Fijacin :

se hace para que los m.o. queden adheridos al vidrio y no se

desperendan del portaobj.

Existen dos tipos de fijacin : a- con calor: pasar

lentamente el preparado por la llama del mechero 3 veces seguidas, con el extendido
hacia arriba, tener cuidado los m.o pueden deformarse si el calentamiento es
excesivo .

b-qumica : es lo ideal , ya que las clulas no resultan deformadas, se inunda el

preparado con alcohol metlico , se deja actuar 3 minutos y se lava con agua.
3 Coloracin : se hacen actuar sobre el preparado ya fijado las soluciones de
colorantes de acuerdo al mtodo de tincin que se realice.
Coloracin de Gram y de Ziehl Neelsen
Ambas son coloraciones diferenciales , es decir , que se utilizan dos colorantes
, con un paso intermedio de decoloracin y ponen de manifiesto diferencias entre las
clulas bacterianas

Coloracin de Gram
Es la mas usada , segn su reaccin a la tincin las bacterias pueden dividirse en
dos grupos : GRAM positivas y GRAM negativas
Procedimiento:
- cubrir el extendido con violeta de genciana y dejar actuar 5 minutos ,
- volcar el colorante , en este momento todas las bacterias estn teidas de violeta,
pues el colorante penetro en ambos tipos de clula, y sin lavar cubrir con solucin
yodo yodurada , que acta como mordiente, el Yodo entra en la clula y forma con
el violeta un complejo insoluble en agua, dejar actuar 1 a 2 minutos
- Lavar con agua y decolorar con alcohol-acetona , durante 20 , las bacterias G +
retienen por mas tiempo el complejo , permaneciendo de color violeta , las G se
decoloran rpidamente , en este caso las bacterias G + son violetas y las G
incoloras
- Lavar con agua para evitar que siga actuando el decolorante
- Cubrir con fucsina fenicada de Ziehl diluida 1/10 o safranina, durante 20 estos
ltimos son colorantes rojos, son colorantes de contraste se utilizan para poner de
manifiesto a las bacterias G - .
- Despus de la coloracin las bacterias G- son ROJAS y las G+ permanecen
VIOLETAS.
El comportamiento diferente de las bacterias G + y G frente al decolorante , se
debe a diferencias en la pared celular de ambos tipos de bacterias. Se sabe que la
pared celular de los m.o. G+ acta como una barrera, frente a la salida del complejo
, violeta de genciana Yodo. Tener en cuenta q las bacterias G + pueden perder la

capacidad de retener el colorante cuando x diversas circunstancias no posean intacta

su pared celular.
El color que adquiere una bacteria con la coloracin de Gram es un carcter
morfolgico porque pone en evidencia dos tipos de pared celular diferente

COLORACION ACIDO ALCOHOL RESISTENTE (AAR) O COLORACION DE

ZIEHL NEELSEN
Es una tincin diferencial que muestra la resistencia de una bacteria teida a ser
decolorada por los cidos . Se utiliza para estudiar micobacterias y nocardias
Las bacterias teidas segn esta tcnica se clasifican en :
Acido resitentes : cuando retienen la fucsina y quedan teidas de rojo
No acido resistentes : si se decoloran con el alcohol cido y toman el color azul del
colorante de contraste ( azul de metileno)
Para la tincin se usan : colorante 1 fucsina fenicada de Ziehl
Decolorante : solucin alcohol acido
Colorante 2 : azul de metileno

La acidorresistencia es un carcter morfolgico porque es especfica para paredes

celulares de bacterias G + con aumentado porcentaje de ceras y lpidos.