UNIVERSIDAD SAN CARLOS DE

GUATEMALA
Facultad de Odontologa
Bioqumica
Lic. Julio Turcios
Segundo A

CROMATOGRAFIA

INTEGRANTES:
JUAN PABLO LEN HERRERA
201213715
KARLA NOEMI AJA VELASQUEZ
201213729
DULCE GUADALUPE UMAA REYES
201213770
ALAN DAVID GIRON MATAS

Da de laboratorio: 29 de Abril 2014

R E Fecha
P O RT
E D de
E Reporte:
L A B 2OdeRmayo
AT O
de entrega
de R I O 2014
BIOQUIMICA

INTRODUCCIN
La cromatografa es una tcnica que permite separar, aislar e identificar
los componentes de una mezcla de compuestos qumicos. La muestra es
distribuida entre dos fases, una estacionaria y otra mvil, de tal forma
que cada uno de los componentes de la mezcla es selectivamente
retenido por la fase estacionaria. La separacin se lleva a efecto en una
columna tubular rellena de un slido poroso finalmente dividido, el cual
puede actuar como fase estacionaria propiamente dicha o como soporte
de una fase estacionaria lquida. Tambin se puede efectuar utilizando
como fase estacionaria papel de filtro o un slido finalmente dividido
colocado en forma de capa fina sobre una placa de vidrio.
De la combinacin de los distintos tipos de fases estacionarias y mviles,
se pueden obtener varios tipos de Cromatografa. Estos tipos de
cromatografa se basan en los mismos principios fundamentales, y se
conocen respectivamente como cromatografa en columna, en papel y
de capa fina.
La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los
laboratorios para realizar unos anlisis cualitativos ya que pese a no ser
una tcnica muy potente no requiere de ningn tipo de equipamiento. La
fase estacionaria est constituida simplemente por una tira de papel
filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas
de la solucin y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado
como fase mvil se hace ascender por polaridad. En la cromatografa en
columna, la fase mvil puede ser un lquido o un gas, y segn el caso se
denomina respectivamente Cromatografa lquida y Cromatografa de
gases, en este caso la cromatografa empleada fue la lquida.
La Fase mvil fluye a travs del relleno de la columna, arrastrando los
componentes de la mezcla, que son selectivamente retenidos por la fase
estacionaria. El flujo de la fase mvil se mantiene constante a travs de
todo el proceso y de esta manera se logra que cada componente de la
mezcla sea eluido de la columna como un compuesto puro, disuelto en
la fase mvil, a esta tcnica se le llama Cromatografa de elucin.

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

Objetivos

Comprender que la cromatografa es un mtodo fsico que separa una

mezcla de solutos basadas en desplazamientos.
Observar, comprender y poder interpretar, cmo se da la separacin
de diferentes colores por medio de las tcnicas de cromatografa.
Conocer y aplicar la tcnica de cromatografa en capa fina, sus
caractersticas y los factores que en ella intervienen.
Aprender a calcular valores de Rf de las sustancias. (aminocidos).
Identificar aminocidos con Cromatografa en papel y determinar los
tipos y cantidades de colores en colorantes con la Cromatografa
lquida. Basndose en los resultados se determina que estas dos
tcnicas son eficientes para estos procedimientos.

Hiptesis
La cromatografa en papel revela los componentes ms afines tanto a
compuestos polares como apolares, quedando las ms polares cerca de
donde se puso la muestra y las no polares lejos de donde se puso la
muestra. Los colores en la cromatografa en columna, aparecern de
acuerdo al peso de cada color, los colores clidos tendrn una reaccin
ms pronta debido a su bajo peso y al volumen que stos tenan en la mezcla
del colorante.

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

RESUMEN
La cromatografa es una tcnica de separacin de sustancias que se
basa en las diferentes velocidades con que son arrastradas cada una de
ellas a travs de un medio poroso por un disolvente en movimiento;
clasificndose en cromatografa de papel y columna, siendo esta una
tcnica que se utiliza para el mtodo analtico en el cual se puede
cualificar si estn presentes o no los colorantes y as mismo ver la
capacidad de separacin de cada uno. Mediante la cromatografa en
papel se realiz la preparacin de una fase mvil (mezcla de n-butanol,
cido actico y agua) y una fase estacionaria donde se realiz la siembra
de la muestra de distintos aminocidos con una diferencia de sus Rf.

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

Resultados
CROMATOGRAFA EN PAPEL
Se observ que la cistena se alej 3.3 del punto de donde se sembr la
muestra y su matiz era ms suave. (Morado claro) .
cido glutmico, tuvo un desplazamiento 3.3 igual al de cistena pero
mayor, su tonalidad era ms oscura. (Morado)
La Glutamina tuvo un desplazamiento de 3.2 menor al de la cistena y al
cido glutmico, presentando su tonalidad ms oscura (morado intenso).
La muestra de orina,tuvo un desplazamiento de 3.8, este fue mayor al
hacer la comparacin con las dems muestras y su tonalidad ms clara.
(Lila)

Cromatografa en Columna
Los colores obtenidos en la primer columna fueron reaccionando
conforme el tiempo; siendo el primero el color rojo, minutos despus el
azul, luego el amarillo y, por ltimo el lila en menor cantidad.

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

En la muestra con el agua carbonatada color azul, los colores

reaccionaron lentamente, obteniendo como nico resultado un color
verde menta.

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

Discusin de
Resultados
CROMATOGRAFA EN PAPEL
Como se observ en los resultados de cromatografa, la cistena y el
cido glutmico se desplazaron la misma longitud 3.3 cm;la glutamina a
una distancia de 3.2cm;la muestra de orina 3.8cm, y una lnea de
eluyente de 4.4cm
Esto datos permiten realizar una comparacin de los aminocidos, y
obtener los siguientes resultados:
La cmara contena una solucin de n-butanol, cido actico y agua;
esta diversidad de compuestos que se encuentran en el eluyente
permite que las muestras se desplacen ms hacia el eluyente con el que
presentan mayor atraccin; el cido glutmico y la cistena presentan
ms afinidad a compuestos polares, por lo que stos tuvieron poco
desplazamiento ya que presentaban una mayor atraccin al compuesto
polar (agua) el cual se encontraba en la base de la cmara, y esto hacia
su desplazamiento ms lento, por esta razn presentaron un Rf: 0.75,
este Rf es mayor en comparacin con el otro aminocido (glutamina) y,
es menor en comparacin con la muestra de orina que presentaban Rf
ms alto.
La glutamina presentaba ms atraccin hacia el compuesto polar (agua)
que los aminocidos anteriores porque ste tiene mayor afinidad hacia
el compuesto polar y por lo tanto su movimiento es ms lento,
obteniendo un Rf: 0.7272, que nos indica que tiene una mayor retencin
hacia el agua, en comparacin con la muestra de orina que presenta
menos atraccin hacia compuestos polares y por lo tanto tienen un
desplazamiento mayor acercndose ms a la lnea final del eluyente.
El cido actico es voltil, yel n butanol es un gas, por lo que lo hace de
igual forma.

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

La muestra de orina obtuvo un

Rf: 0.8636 ya que present una
menor
retencin
hacia
compuestos polares con un
desplazamiento ms rpido.
La ninhidrina es un compuesto que revela aminocidos primarios, a
travs del color morado. Y la prolina, aminocido secundario, de color
amarillo,
Los resultados de los colores de los tres aminocidos y de la orina se
obtuvieron en base a la concentracin de aminocidos y de la ninhidrina.
Por lo tanto se obtuvo los siguientes resultados:

La cistena al estar en una solucin en contacto con agua puede

romper sus enlaces de hidrgeno y unirse a otra cistena por medio de
un enlace de disulfuro, Creando a la cistina, por esta razn la
coloracin en esta muestra fue un poco ms dbil que en la de los
aminocidos (glutamato y glutamina) ya que la ninhidrina slo puede
revelar aminocidos primarios y la cistina no es uno de ellos , por tal
razn hubo menor cantidad de cistena en esta muestra y la coloracin
se torn ms dbil.
En la muestra de orina se obtuvo pocos aminocidos porque hubo poca
cantidad de protenas y baja concentracin de aminocidos y por lo
tanto tuvo una coloracin lila.

Cromatografa en Columna
R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

o
Muestra
No.1
Al
finalizar
de
construir la fase
estacionaria de la
cromatografa
en
columna,
que
consta de una jeringa,
algodn
utilizado
como
tapn
y
bicarbonato
de
sodio humedecido con
hexano se pudo
apreciar que el hexano pasaba libremente a travs de la fase
estacionaria siendo inmiscible con los dems componentes ya que este
es un alcano apolar. Despus de agregar el colorante el cual era un
compuesto polar, los colores comenzaron a reaccionar al pasar cierto
tiempo. Siendo el primero en reaccionar el color rojo, seguido de azul,
amarillo y lila; esto fue debido a la concentracin y volumen alto de los
colores mezclados en el colorante utilizado.
El color acta por
gravitacin y extensin de una superficie cromtica. Los tonos fros
(azul, verde y violeta) parecen ms livianos y menos sustanciales; los
clidos (rojo, amarillo y anaranjado) parecen ms pesados y densos. (5)
El mecanismo de separacin de la cromatografa lquido- slido, o

de adsorcin, se basa en la competencia que existe entre las

molculas de la muestra y las de la fase mvil o disolvente por
ocupar los sitios activos en la superficie de un slido. Algunos de
los slidos utilizados con ms frecuencia son: almina, gel de slice
y bicarbonato de sodio. (6)
El material empleado para esta tcnica fue el Bicarbonato de
sodio, que acta como un adsorbente para la separacin de
mezclas (colorante). (7)
El hexano es un lquido incoloro, insoluble en agua, que se emple
como eluyente para la fase mvil; debido a que es apolar
mantiene as hmedo el adsorbente y un flujo continuo de
colorantes a travs de la columna.

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

Muestra No. 2

Se utiliz el mismo procedimiento que en la muestra nmero

uno, la diferencia en este caso fue que se evalu una agua
carbonatada color azul.
Los colores observados en la columna fueron el color azul del
agua carbonatada y por consiguiente un color verde menta. El
color azul por ser un color primario no reaccionaron ms
colores, solo el verde ligeramente por estar cerca del azul en
la gama de colores.

Conclusiones
La cromatografa en columna, permite usar una gran cantidad de
la sustancias permitiendo la separacin de colores; y la
cromatografa en papel permite realizar separaciones mltiples, al
mismo tiempo, y someterlas al mismo procedimiento separativo.
El hexano es un compuesto
polar que al utilizarlo en la
cromatografa en columna, su funcin es eluir las sustancias no
polares, mientras que las polares quedan adheridas a la matriz de
la columna, es decir al bicarbonato;

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

 Los colores fros reaccionan con ms facilidad que los clidos

segn la teoria, no siendo as en nuestro laboratorio, ya que se
obtuvo lo contrario debido al peso y volumen utilizado.
La cromatografa en papel se emplea para verificar si en una
solucin se encuentran aminocidos, por medio de la ninhidrina la
cual identifica a los aminocidos estndares primarios, que son
todos los que forman protenas con excepcin de la prolina.
Los aminocidos cistena y el cido glutmico en una
cromatografa en papel tienden a quedarse ms cerca del origen
de su siembra porque tienen afinidad ms hacia el agua, y stos
poseen carga, por lo cual tienden a estar ms cerca de los
compuestos polares.
En la Cromatografa en columna se pudo determinar que la
aparicin ordenada de cada uno de los colores al agregar los
colorantes aparecieron primero los que estn en menor
concentracin y despus los de mayor peso, siendo estos los que
se encontraban en mayor concentracin en el colorante inicial.
El Bicarbonato de Sodio permiti adsorber los colorantes, por lo
que es un buen medio de adsorcin en la tcnica de la
Cromatografa en columna. El bicarbonato mantiene el color en la
capa externa, ya que solo adsorbe y no se disuelve.
El color verde menta que reaccion en la muestra dos de
cromatografa en columna, fue porque el color azul del agua usada
como muestra es un color primario y no puede descomponerse en
ms colores.

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

Recomendaciones
Todos los grupos deberan contar con sus propias soluciones y
reactivos, evitando as un desorden en el laboratorio.
Mantener los reactivos que son muy voltiles ms alejados del
laboratorio, porque algunos compaeros presentaron molestias.
Un laboratorio de cromatografa de gases ampliar ms el
conocimiento de las tcnicas de cromatografa.
Utilizar muestras de aminocidos para identificarlos con la tcnica
de
cromatografa
en
columna
para
poder
determinar
comparaciones con cromatografa en papel.

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

Referencias
Miguel Angel Toledo. (2005). McGraw-Hill Biologa Celular y Molecular. pp 810-814
Thornton, R. (1998). Qumica orgnica. 5ta ed. Mxico. Editorial Pearson .pp 13351338

Varcarcel M. (1988) Tcnicas Analticas de Separacin. Editorial

Reverte Espaa. Pp 677-698
Pickering W. F. (1980) Qumica Analtica Moderna. Editorial
Reverte Espaa pp 567-569

(5) Color. Teora del Color, Qu es el color? (En lnea). Consultado el 30 de abril
de 2014. Disponible en :
http://sapp.uv.mx/univirtual/cursos/AFEL/Intersemestral/IDG/docs/IDG10_1.pdf
(6) McNair, H; y Esquivel B. Cromatografa Lquida de Alta Presin.
Cromatografa Lquido-Slido. Washington, DC. pp. 7
(7) Parker, S. Diccionario McGraw-Hill de Qumica. Trad.McGraw-Hill.pp.21, 107.

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

ANEXOS
v

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA

R E P O RT E D E L A B O R AT O R I O BIOQUIMICA