UNIVERSIDAD

NACIONAL
FACULTAD DE
CIENCIAS
NATURALES Y
MATEMTICA
ESCUELA DE
BIOLOGIA

ESTUDIO DE LAS BACTERIAS

Alumnos:
Aranguren Daz Lizandro
Prncipe Morillo Fabiola
Vega Chozo Karolyn

Docente: Erik Mercado

2015

I.

INTRODUCCION

La morfologa de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver con
el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la
rodea. El modo ms simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes.

II.

MARCO TEORICO

Las clulas procariticas se caracterizan por su estructura muy sencilla, no presentan envoltura nuclear
y ningn tipo de endomembranas, pertenecen a este grupo las bacterias y las algas azul-verdosas.
Algunas bacterias son dainas al organismo, otras son benficas y son usadas en la industria, tal es el
caso de aquellas que acidifican la leche y permiten la produccin del yogurt.
Las bacterias son seres procariticos, unicelulares que carecen de envoltura nuclear, en algunas
circunstancias forman esporas para protegerse del medio. Presentan formas esfricas, alargadas o
espiraladas. Pueden presentarse aisladas o agrupadas y tienen como medio de locomocin los flagelos
en nmero variable.
Hay bacterias que son patgenas para el hombre, animales y plantas, otras son saprfitas, que se las
encuentran en materias en descomposicin y otras son inocuas y benficas, tales como las bacterias
nitrificantes, que se las encuentra en diversos medios como el agua, aire, tierra y en otros.
Qu es la tincin Gram?
La tincin de Gram es una tcnica de coloracin de contraste; fue descubierta por Hans Christian Gram
en (1884). El fundamento de la tcnica se hace con base a las paredes celulares de las bacterias. Gram
positivas y Gram negativas.
La coloracin Gram es de amplia utilidad para clasificar a las bacterias en Gram positivas y Gram
negativas. Las bacterias Gram positivas son aquellas que se tien de azul oscuro o violeta, esta
caracterstica qumica est ntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular. Las bacterias
Gram negativas son aquellas que se tien de un color rosado tenue o rojo.

Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipdicas entre las que se localiza una fina
pared celular de peptidoglucanos, mientras que las bacterias Gram-positivas presentan slo una
membrana lipdica y la pared de peptidoglucanos es mucho ms gruesa. Al ser la pared fina, no retiene
el colorante durante la tincin de Gram. (Figura1)

Figura 1
Pared Gram +
capa densa y uniforme de 200 a 800 A)
cidos teicoicos
polisacridos
protenas (pocas veces)
glicopptido (50% del peso seco)
Pared Gram capa interna delgada de 20 a 30 A cubierta por capas
externas de densidad menor)
lipopolisacridos
lipoprotenas
protenas

glicopptido (10% del peso seco)

III.

MATERIALES
LABORATORIO

IV.

Microscopios
Mecheros de alcohol o de Bunsen
Aceite de inmersin
Palitos de dientes
Cristal de Violeta
Safranina
Lminas porta y cubreobjetos
Lugol
Agua destilada
Alcohol cloroformo
Azul de metileno

BIOLOGICO
-

Muestra de sarro dentario

Yogurt

METODOS
a) Coloracin de Gram de Bacterias del sarro dentario y yogurt:

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Hacer una extensin de la muestra en estudio sobre una lmina portaobjeto.

Fijar el preparado a la llama de un mechero.
Cubrir con la solucin Cristal de violeta por 1 minuto.
Lavar con agua corriente.
Cubrir la preparacin con Lugol durante 30 segundos o 1 minuto.
Lavar con alcohol hasta que este no arrastre colorante.
Lavar con agua corriente.

8.
9.
10.
11.

Agregar Safranina por 30 segundos o 1 minuto.

Secar al ambiente o con un mechero.
Colocar una gota de aceite de inmersin y observar al microscopio con la lente de inmersin.
Esquematizar.

b) Coloracin Gram de bacterias de cultivo

V.

RESULTADOS

Productos que se
utilizan

Reaccin y coloracin de las bacterias

GRAM +

1) Cristal violeta Clulas color violeta

2) Lugol solucin Se forma el complejo CV-I. Las clulas
iodada
continan teidas de color violeta.

GRAM Clulas color violeta

Se forma el complejo CV-I. Las clulas
continan teidas de color violeta.

3) Alcohol

Se deshidratan las paredes celulares. Se Eliminacin por extraccin de grasas de

contraen los poros. Disminuye la
las paredes celulares. Aumenta la
permeabilidad. El complejo CV-I no sale de porosidad. El complejo CV-I se separa de
las clulas que continan teidas de color la clula.
violeta.

4) Safranina

Clulas no decoloradas; quedan teidas de Clulas decoloradas; se tien de color

color violeta.
rosado.

Muestra: Sarro
dental
Coloracin:
Cristal de violeta
Aumento: 100X
Descripcin:
Se observan
estreptococos
gram +

Muestra: yogurt
Coloracin:
Cristal de violeta
Aumento: 100X
Descripcin:
Se observan
Streptococos
gram + que son
como cadenas
y cocos.

Muestra: Colonia
Coloracin: Gram
Aumento: 100X
Descripcin:
Se observan Bacilos
gram -

VI.

DISCUSION

VII.

Al fijar la muestra con calor es esencial para que las clulas se

adyeren al portaobjetos, ya que l calor desnaturaliza las protenas y
suelen matar microorganismos.

El paso critico de este procedimiento Gram es cuando se va decorar

con alcohol ya que se tiene que lograr que la preparacin salga
exenta de colorante por que los Gram + no se decoloran y los Gram
si y esta diferencia es porque las Gram + sufren con el alcohol
una deshidratacin, los poros se contraen y dificultan la salida del
complejo yodo-azul en el interior de la clula, sin embargo en el caso
de los Gram- el alcohol desorganiza la capa lipdica ms externa y
elimina el color violeta de la delgada capa de peptidoglucano.

La diferencia que se observa en la resistencia a la decoracin se

debe a que la membrana externa de las Gram es soluble en
solvente orgnico

Por investigaciones, la muestra que realizamos la tincin Gram del

sarro dental del cual observamos cocos gram +, en un principio del
nacimiento la flora bucal es simple y generalmente son bacteria
aerobias pero cuando aparecen los primeros dientes se pueden
observar que se suma a esta flora los anaerbicos.

CONCLUSION
-

Tincin diferencial que emplea secuencialmente dos colorantes para distinguir 2 tipos de
microorganismos en funcin de sus diferencias en la pared celular

Las bacterias Gram positivas se tien de azul violeta mientras los Gram negativas se tien de
color rojo o rosado.

Los bacilos son alargados y dan consistencia al yogurt.

Los streptococos son cadenas de cocos y acidifican el yogurt.

Mtodo de gran utilidad pero debe ser evaluado con precaucin: Al decorar por un tiempo muy
prolongado se puede correr el riesgo de que todas bacterias Gram + se decoloren y se tien
posteriormente como las Gram -

VIII.

CUESTIONARIO
1. Qu funcin cumple el Lugol en la coloracin de Gram?
Funciona como fijacin (mordiente) de la preparacin, y tambin acta sobre la pared
de las bacterias Gram (+) de tal manera que al agregar el decolorante (alcoholcetona) no se destian las bacterias que ya se tieron, al agregar la Safranina, las
restantes bacterias se teirn, siendo estas ltimas Gram (-).
2. A que deben su color las bacterias Gram negativas?
Esta caracterstica est ntimamente ligada a la estructura didrmica dada por la
envoltura celular, pues presenta doble membrana celular, una externa y la otra
citoplasmtica, lo que refleja un tipo natural de organizacin bacteriana.
3. Qu forma presentan los Streptococcus? Por qu?
Los estreptococos son organismos anaerobios facultativos y Gram Positivos que a
menudo aparecen formando cadenas o por pares.
4. Qu forma presentan los Staphylococcus? Por qu?
Los estafilococos son granos que se presentan en forma de racimo de uvas.
5. Cul es la composicin de la pared bacteriana?
Tanto las bacterias Gram positivas como las Gram negativas poseen una pared
celular de peptidoglucanos que les confieren su forma caracterstica y les provee de
proteccin mecnica.
6. Cul es el fundamento de la coloracin de Gram?
Se fundamenta en la afinidad que poseen ciertas bacterias de retener colorantes y
resistir a la decoloracin. Esto se debe principalmente a la diferencia de las paredes
celulares de bacterias Gram positivas y Gram negativas, ya que las G+ tienen una
pared celular ms gruesa, con mayor contenido de peptidoglucanos y cido teicoico,
en cambio las G- poseen una cantidad menor de peptidoglucanos en su pared y no
tienen cido teicoico
7. Por qu se usa alcohol-cloroformo en la preparacin?
Se usa como decolorante, y al usar el alcohol cetona los organismos Gram positivos
no se decoloran, mientras que los Gram negativos s lo hacen, para poner de
manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin de contraste.
8. Por qu la observacin se hace a 100X?
Es debido a su tamao, y debe usarse el aceite inmersin.

IX.

BIBLIOGRAFIA

Aulton Michael E. 2004. Ciencia y diseo de formas farmacuticas. 2 edicin, Ed. Elsevier
Espaa.

Rant W. D., 1989. Microbiologa Ambiental. Ambientes extremos. Ed. ACRIBIA Capitulo 3.

Atlas, R. M. y Bartha, R. 2002 Ecologa microbiana y ambiental. Person. Educacin. S:A:,

Madrid.

Revista Medicina y Laboratorio (Medelln). Mecanismos de Resistencia bacteriana a los

antibiticos. Vol. 09, No. 07-08, Jul.-Ago. 2000 p. 371-38.

Baumann, L.; M. Baumann; M. Mendel y R. Allen. 1972. Taxonomy of aerobic marine

eubacteria. J. Bacteriol. 110: 402-429.