Insulina

Cdigo:9001401

Ensayo inmunoenzimtico por Quimioluminiscencia para la medicin cuantitativa

de Insulina (INS) en suero humano.
96 PRUEBAS

USO
El equipo de Insulina CLIA se destina para la determinacin
cuantitativa de concentracin de Insulina (INS) en suero humano.

INTRODUCCIN
La insulina es un miembro estructuralmente relacionado con
protenas reguladoras; otras protenas de este grupo incluyen
factores de crecimiento similares a la insulina y relaxina. La
insulina es producida por las clulas -de los islotes pancreticos y
es sintetizada inicialmente como una preprohormona de 12kDa, la
cual se transforma mediante un proceso intracelular a una
prohormona de 9kDa, 86-aminocidos y posteriormente envasado
en grnulos de almacenamiento. Dentro de estos grnulos, se
forman bonos de disulfuro entre las cadenas A y B de la molcula
de insulina y la regin pptido C es exfoliado, resultando en 51aminocidos, 6 kDa molcula de insulina madura. Tras la
estimulacin, las clulas islote liberan de forma equimolar
cantidades de insulina y pptido-C, y pequeas cantidades de pro
insulina y otras intermedias (<5% del total normal la secrecin de
insulina).
La concentracin de insulina circulatoria estimulada por basales
y glucosa son relativamente estables durante la infancia y la
niez, y aumentan durante la pubertad debido a la disminucin de
la sensibilidad a la insulina. Las concentraciones de insulina
tienden a ser mayores en personas obesas, en particular los que
tienen una mayor proporcin de grasa visceral (abdominal).
Hormonas contraregulatorias de la glucosa como glucagonos,
glucocorticoides, la hormona del crecimiento y epinefrina, al
disminuyen la sensibilidad a la insulina y su actuar; los niveles de
insulina pueden aumentar durante la administracin exgena de
estas sustancias. La medicin de las concentraciones circulantes
de insulina puede ser til en la evaluacin diagnstica de varias
condiciones. Elevados niveles sricos de insulina en presencia de
bajas concentraciones de glucosa puede ser indicativo de
hiperinsulinismo patolgico, por ejemplo, nesidioblastosis y clulas
tumorales de los islotes. Las concentraciones Sricos elevadas de
insulina en ayunas con niveles normales o concentraciones
elevadas de glucosa e insulina y la respuesta exagerada de la
glucosa e insulina a administracin exgenos de glucosa son
caractersticos de los insulino-resistentes; formas de intolerancia a
la glucosa y la diabetes melitus y otras condiciones resistentes a la
insulina. Altas concentraciones circulantes de insulina pueden
estar involucradas en la patognesis de la hipertensin y las
enfermedades cardiovasculares. Anticuerpos endgenos Anticinsulina pueden ser observados en las fases sintomticas y
prediabeticas de diabetes mellitus dependiente de insulina,
presumiblemente debido a un desorden auto inmune. Los
anticuerpos anti-insulina son comnmente observados en
pacientes tratados con insulina, estos anticuerpos pueden interferir
con inmunoensayos para insulina, las tcnicas de este describen la
remocin de los anticuerpos previos al ensayo para lograr un
ambiente libre de insulina. La presencia de proinsulina excedente y
variables genticas de insulina pueden tambin interferir en la
estimacin de insulina.

la formacin de la cubierta del anticuerpo-antgeno-anticuerpoenzima compleja, la enzima-anticuerpo sin consolidar se eliminan

por lavado. La actividad de peroxidasa de rbano unido en
los pozos de entonces se analizada con
las reacciones de
quimioluminiscencia. La Unidad de Luz relacionados (URL) de la
reaccin es proporcional a la concentracin del INS de la muestra.

MATERIALES SUMINISTRADOS
1.

2.

3.
4.
5.
6.

Placa de microtitulacin recubiertas con anticuerpos

monoclonales a la insulina (anti INS MAb) pozos cubiertos (1
plato,96 pozos)
Reactivo conjugado enzima: peroxidasa de rbano picante
(HRP) anticuerpo anti-INS (ACM) en la estabilizacin de Buffer
(1 vial, 6.0ml)
Estndares de Referencia: 5, 20, 50, 100, 200IU/ml (5 viales,
liofilizado)
Sustrato A: (1 vial, 6.0ml)
Sustrato B: (1 vial, 6.0ml)
PBS-T Buffer (2 frascos, 5 grs.)

MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO

Pipetas de precisin y puntas, 0,1 ml, 0.05ml, 1.0ml,

Agua destilada.
Vrtex mezclador
Papel absorbente o una toalla de papel
Papel para grafica logartmica
Un luminmetro.

RECOLECCIN Y PREPARACION DE LA MUESTRA

1.

2.

3.

La sangre debe extraerse usando tcnicas estndar de

venopuncin y el suero debe ser separado tan pronto como sea
posible. Evite totalmente hemlisis, lipemia o turbidez en las
muestras.
Muestras recogidas en los tubos que contiene EDTA, heparina,
oxalato pueden interferir con los procedimientos de ensayo y
debe evitarse.
Las muestras se puede almacenar hasta 48 horas a 2-8 ,
antes de ensayo. Los especimenes retenidos para un tiempo
ms largo pueden ser congelados a -20 . Las muestras deben
ser mezcladas antes de la prueba.

ALMACENAMIENTO DE EQUIPO E INSTRUMENTACIN

1.

2.

El equipo sin abrir debe guardarse a 2-8 a partir de la

recepcin y la placa debe guardarse en una bolsa sellada con
desecantes para minimizar la exposicin a la humedad del aire.
El equipo se puede utilizar en toda la fecha de caducidad del
mismo. Consulte la etiqueta del frasco para la fecha de
caducidad.
El equipo abierto se mantendr estable hasta que expira la
fecha indicada, siempre y cuando se almacena segn lo
estipulado anteriormente.

PREPARACIN DE RACTIVOS

PRINCIPIO DE LA PRUEBA

1.

La prueba de INS CLIA es una fase slida de dos sitios de

inmunoensayo. Un anticuerpo monoclonal se aplica sobre la
superficie de los pocillos de microtitulacin y otro anticuerpo
monoclonal marcado con peroxidasa de rbano picante se usa
como trazador. Las molculas del INS en la solucin estndar o
suero forman un "sandwich" entre los dos anticuerpos. Despus de

2.

Todos los reactivos deben ser sometidos a la temperatura

ambiente (18-25 ) antes de su uso. Todos los reactivos deben
mezclarse suavemente a travs de invertir o agitacin antes de
su uso. No inducir la formacin de espuma.
Para preparar Buffer de Lavado: aadir 1 frasco de Lavado de
concentrado a 500ml de agua destilada y mezclar bien. El Buffer
de lavado se mantiene estable en temperatura ambiente, por lo
menos durante dos semanas.

PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO

1.

2.
3.
4.

5.
6.

Asegure el nmero deseado de revestimiento de pozos

en el receptor. Dispensar 50 l de estndares, muestras,
y los controles en los pocillos apropiados.
Dispensar 50 l del reactivo de enzima conjugada a cada
pocillo. Mezclar suavemente durante 30 segundos.
Incubar a 37 por 60 minutos.
Al final de la incubacin, retire la mezcla de incubacin
vaciando el contenido de la placa en un contenedor de
residuos. Enjuagar y vaciar la placa 5 veces con solucin
de lavado de amortiguacin. Secar la placa sobre un
papel absorbente o toallas de papel para eliminar todas
las gotas de agua residual. El volumen del pozo es de
aproximadamente 300 l.
Dispensar 50 l de sustrato A y 50 l de sustrato B.
Mezcle Suavemente durante 10 segundos.
Incubar a temperatura ambiente en la oscuridad durante
5 minutos sin agitar y leer los valores de RLU con un
Luminolmetro.

VALORES DE REFERENCIA
Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos normales sobre
la base de la poblacin de pacientes. El rango normal es de entre
2.0IU/ml y 20IU/ml, que fueron determinados mediante pruebas de
200 muestras de suero en ayunas.

RENDIMIENTO
A. Sensibilidad
El lmite de deteccin se calcula a partir de la curva estndar
mediante la identificacin de la concentracin correspondiente a la
media de RLU diluyente estndar (basado en 10 anlisis repetidos),
adems de SD 2. Por lo tanto, la sensibilidad de la autobiografa INS
CLIA kit se estima en no ms alto que 2.5IU/ml.
B. Especificidad
No se detect interferencia con el desempeo de autobiografa INS
CLIA con la adicin de grandes cantidades de las siguientes
sustancias a un pool de suero humano.

NOTAS IMPORTANTES

REFERENCIAS

1.

1. Gerich JE: hormonales de control de la homeostasis. EN Galloway JA,

Potvin JH, Shuman CR: Diabetes Mellitus, novena edicin. Eli Lilly Co,
Indianpolis,
1988
pp
46-63
2. Rasmussen H, Zawalick KC. Ganesan S, Calle R, Zawalich fue:
Fisiologa y fisiopatologa de la secrecin de insulina. Diab Care 13:655666,1990
3. Gammeltoft S: los receptores de insulina: vinculante cintica y la
estructura-funcin de la relacin de la insulina. Physiol Rev 64:13211378,1984
4. Rosen OM: Despus de la insulina se une, Ciencia 237:14521458,1987
5. Schwartz MW, Figlewicz D, Baskin DG, Woods SC, Porte D Jr insulina
en el cerebro: Un hormonal regulador del balance energtico. Endocrin
Rev 13:387-414,1992

2.

3.

El procedimiento de lavado es fundamental. La insuficiencia

de lavado se traducir en mala precisin y lecturas de
absorbancia falsamente elevadas.
Se recomienda que no ms de 32 pozos sean utilizados para
cada ensayo, si el pipeteado es manual, ya que las muestras
y los controles deben ser completados dentro de 5 minutos.
Una placa de 96 pocillos pueden utilizarse si el pipeteado es
automtico.
La duplicacin de todos los estndares y muestras, aunque no
es obligatorio, se recomienda.

CALCULO DE RESULTADOS
Construya una curva estndar trazando el RLU obtenida a partir
de cada estndar de referencia en contra de su concentracin en
IU/ml en papel logartmico cuadriculado, con valores RLU en la
vertical o eje Y las concentraciones en la horizontal o eje X. Utilice
el RLU valores para cada muestra para determinar la
concentracin correspondiente de la INS en IU/ml de la curva
estndar. Cualquier espcimen diluido debe ser corregido por el
factor de disolucin apropiado.

Distribuido por:
Grupo Industrial MexLab S.A. de C.V.
01 800 111 4343
www.grupomexlab.com
Rev. 01-2012