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PRACTICA N7: MTODOS DE DETERMINACIN DE LA

SENSIBILIDAD BACTERIANA A LOS ANTIBITICOS.


ANTIBIOGRAMA
OBJETIVOS:
-

Realizar la tcnica de siembra por hisopado o plateado para el mtodo de


difusin en agar o antibiograma.
Determinar la sensibilidad o resistencia de una cepa bacteriana frente a
distintos antibiticos.

INTRODUCCION:
Conocer la sensibilidad bacteriana a los antibiticos tiene varias aplicaciones,
como por ejemplo dirigir el tratamiento frente a una infeccin causada por un
agente conocido, generar una base de datos para determinar la presencia de cepas
resistentes y su seguimiento.
Los mtodos para determinar la sensibilidad frente a antimicrobianos pueden ser
cualitativos o cuantitativos.
Los mtodos cualitativos son aquellos que permiten clasificar a los microorganismos
en sensibles, moderadamente sensibles o resistentes frente a los antibiticos en
estudio, para lo cual se sigue la tcnica de difusin en agar, antibiograma o mtodo
de Kirby-Bauer. En la cual un inculo microbiano de concentracin conocida, se
siembra por hisopado en una placa de agar Mueller-Hinton sobre la que se
depositan discos de papel filtro (tambin llamados discos de antibiograma)
impregnados con el antibitico (fig 7.1). El antibitico difunde en el agar y puede o
no formarse a su alrededor un halo de inhibicin de crecimiento. Dependiendo del
dimetro del halo de inhibicin se puede establecer si el microorganismo es
sensible, moderadamente sensible o resistente al antibitico.
Los mtodos cuantitativos son aquellos que permiten calcular la concentracin
inhibitoria mnima (CIM) y la concentracin mnima bactericida (CMB). La CMI es la
mnima concentracin del antibitico capaz de inhibir el crecimiento de un inculo
bacteriano previamente estandarizado. Mientras que la CMB es la mnima
concentracin del antibitico capaz de matar al 99.99% de una poblacin
bacteriana previamente estandarizada. La determinacin de la CMI se realiza por la
tcnica de dilucin en tubo que consiste en exponer a las cepas de
microorganismos a estudiar, a diferentes concentraciones del antimicrobiano, en
diluciones a la mitad y observar el crecimiento o no de los microorganismos en los
tubos.
Tcnica para el mtodo de difusin en agar o antibiograma
1. Se asla el microorganismo del que se quiere investigar su sensibilidad
antimicrobiana.

2. Con el microorganismo aislado se prepara un inculo en 10 ml de Mueller


Hinton caldo o agua destilada estril. El inculo debe tener una turbidez
similar a la del estndar 0.5 en la escala Mc Farland que equivale a 1.5 x 10 8
ufc/ml.
3. Mediante la tcnica de hisopado se siembra el microrganismo en la caja con
agar Muller Hinton y se procede a depositar con una pinza los discos de los
antibiticos de manera que queden homogneamente distribuidos.
4. La caja se deja reposar 5 minutos y luego se coloca con la base hacia arriba
en la incubadora a 37C.
5. Los resultados se leen transcurridas 18 a 24 horas de incubacin. Los discos
pueden o no aparecer rodeados de un halo de inhibicin del crecimiento
microbiano.
6. La lectura se realiza a travs de la medicin en mm del dimetro de los halos
de inhibicin y este valor se compara con datos publicados en tablas en las
que se determinar si el microorganismo es sensible, moderadamente
sensible o resistente al antibitico.
NOTAS: Los discos de antibiticos se conservan en refrigeracin o congelacin y
deben ser sacados una hora antes de su uso. Cada disco tiene inscritas las iniciales
del antibitico y la concentracin. Se DEBE copiar esta informacin para luego
compararla con la de las tablas.

Fig 7.1 Antibiograma.

Cuestionario:
1. Complete la siguiente tabla para el
microorganismo que utiliz:
ANTIBIOTICO

CODIGO
DEL
DISCO

NOMBRE DEL
MICROORGANI
SMO

DIAMETRO
DEL HALO
(mm)

SENSIBLE, MODERADAMENTE
SENSIBLE O RESISTENTE

2
3
4
5

2. Segn los resultados de la tabla que antibitico recomendara para inhibir el


crecimiento del microorganismo ensayado?
3. Explique cmo se prepara la escala Mc Farland? Haga un cuadro indicando el
nmero de la escala y la concentracin bacteriana a la que corresponde.
4. Cmo determinara si la zona de inhibicin es debida a muerte o solo a
inhibicin del crecimiento de la bacteria? (use sus propias palabras y sugiera
algo que podra hacer en el laboratorio).
5. Indique 3 factores que deben ser cuidadosamente controlados en el mtodo
de antibiograma o Kirby-Bauer.
6. En qu fase de su crecimiento las bacterias son ms susceptibles a los
antibiticos y por qu?