UNIVERSIDAD DE SONORA

DIVISIN

DE

CIENCIAS BIOLGICAS

Y DE LA

SALUD

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUMICO-BIOLGICAS

Medios de Cultivo y Pruebas Bioqumicas

Microbiologa General
Grupo 01
2015-1

Microbiologa General

Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

CONTENIDO
MEDIOS DE CULTIVO
Agar Nutritivo
Agar Sangre / Agar Chocolate
Agar Salmonella Shigella
Agar Mueller Hinton
Agar EMB
Agar ENDO
Agar Lowenstein Jensen

1
5
9
13
17
21
25

PRUEBAS BIOQUMICAS
CAMP
Urea
Rojo de Metilo
Descarboxlacin de Aminocidos
Kliger
DNAsa
Catalasa
Peroxidasa
Motilidad

29
33
37
41
48
52
56
60
64

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Agar Nutritivo
Pablo Espriu Martnez, Ana Lucia Gonzlez Soto, Ivanna Rovira Celayo
Antecedentes
El caldo de cultivo consiste en agua, extracto de carne y peptona. Peptona es una mezcla de nitrgeno de
fuentes animales y vegetales. Luego se le agrega agar para convertir la mezcla en slido, y en ese estado se
denomina agar nutritivo.
Es un medio muy generalista, as es muy empleado para el crecimiento de microorganismos exigentes y
no exigentes. Asimismo, anotamos como los Clostridium y anaerobios adquieren crecimiento igualmente en
el momento que se incuban bajo condiciones de anaerobiosis.
El agar nutritivo es considerado un medio de cultivo comn ya que son aquellos que poseen los
componentes mnimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten
requerimientos especiales. El medio ms conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar comn, que
resulta de la adicin de agar al caldo nutritivo.

Fundamento
Por las caractersticas de sus componentes es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco
exigentes en sus requerimientos nutricionales. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La peptona
es la fuente de carbono y nitrgeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite
el enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos
exigentes.
Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales
de importancia sanitaria. Es muy til porque permanece slido incluso a relativas altas temperaturas.
Adems, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las
colonias pequeas.

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Preparacin
Primeramente se mesclan los reactivos utilizados despus los disolvemos con agua destilada, para as vaciar
a un matraz y hervirlos agitando para que el medio no se queme, hasta que el agar hierva y este estril.
Posteriormente colocamos los mecheros para tener el campo desinfectado, en las cajas petri despus de
esterilizarlas vaciamos el agar teniendo el agar y las cajas cerca de los mecheros para que estos no se
contaminen, ya vaciados los dejamos enfriar para que el agar se coagule y as poder sembrar la muestra
contaminada.
Para preparar cultivo en superficie, se toma la muestra y se inocula directamente la muestra por estra.
Se Homogeneiza mediante movimientos de vaivn y rotacin, dejar solidificar. En caso de realicemos el
cultivo en profundidad se inocula una alcuota de la muestra directa o de su dilucin. Verter un volumen del
medio de cultivo fundido y enfriado a 40-45C.
La incubacin en tiempo, temperatura, y la atmsfera de incubacin, dependern del microorganismo
que se quiera recuperar. En general se recomienda: Bacterias de fcil crecimiento: en aerobiosis, a 35-37oC
durante 18 a 24 horas.

Interpretacin de Resultados
Es importante hacer una coloracin de Gram sobre las colonias presentes para garantizar la pureza del
cultivo. El producto final tiene un cuidadoso control para asegurar que cada lote llene las especificaciones
del medio: Color, consistencia, tersura, esterilidad, pH.

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Ejemplos de microorganismos

Colonias de Bacillus sp en agar nutritivo da colonias grandes, planas, blanquecinas, forma irregular, bordes
lobulados, dan la apariencia de estar secas, tambin se observa una protuberancia en el centro de las colonias
lo cual les da una apariencia de huevo estrellado.

El crecimiento de E. coli se puede decir fue porque este cultivo no es selectivo por tanto, la mayora de las
bacterias crecen ah.

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Bibliografa
http://www.britanialab.com/productos/234_inserto_es.pdf
http://www.biotaetscientia.wordpress.com
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_Tema_5_Cultivo.pdf
http://biologia.laguia2000.com/hongos/medios-para-crecer-levaduras
http://es.slideshare.net/carolinacartagenad/cultivo-y-aislamiento-de-bacterias

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Agar Sangre/Agar Chocolate

Natalia Castilln Cruz, Laura Mara Garca Flores, Francisco Armando Vargas Olgun
Antecedentes
Algunos microorganismos no son capaces de desarrollarse en medios de cultivo normales, pues requieren
de formula con productos de origen biolgico. Este tipo de medio son enriquecidos y dentro de ellos crecen
los microorganismos exigentes o fastidiosos pues necesitan de composicin compleja para poder llevar a
cabo su desarrollo, este es el caso para el agar sangre/chocolate.
Por ejemplo Streptococcus pyogenes, es una bacteria gram-positiva que crece en cadenas largas, esta
hace hemlisis del tipo beta cuando se cultiva en agar sangre. Este microorganismo constituye a la causa ms
frecuente de faringitis bacteriana.

Fundamento
Para agar sangre: Es adecuada para aislar y cultivar diferentes microorganismos de difcil crecimiento
(Kingella kingae, Cardiobacterium hominis). Al aadir sangre descubrimos la actividad hemoltica y como asla
bacilos tuberculosos. Tambin puede usarse para la preparacin de antgenos. La infusin de msculo de
corazn y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite este permite que se desarrollen
microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el agar es el agente solidificante. El
agregado de 5-10 % sangre ovina desfibrinada estril promueve el crecimiento de bacterias para la
observacin de hemlisis.
Para agar chocolate: Es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo. Tiene la presencia de peptona,
tiptena, extracto de levadura, extracto de corazn y almidn), es una variante del agar sangre. Contiene
glbulos rojos, que han sido lisados a 56 0C. Este agar se usa para el crecimiento exigente de bacterias
respiratorias, como por ejemplo Haemophilus influenzae, Streptococcus spp., Haemophilus influenzae y
Neisserias patgenas.

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Preparacin
Para agar sangre:
Tienes que suspender 40g del medio deshidratado en IL de agua destilada.
Remojar entre 5-10 minutos.
Hervir durante 1 minuto.
Los matraces deben taparse y colocarse directamente en autoclave.
Esterilizar a 121oC (15 lbs de presin) durante 20 min.
Enfriar entre 45-50oC aadir 5-10% de sangre desfibrinada estril, homogeneizar y vaciar en caja
petri estril.
Para agar chocolate:
Colocar los frascos cerrados en bao mara y calentar para fundir el medio de cultivo slido
contenido en los mismos.
Enfriar entre 45-50oC, abrirlos y distribuir aproximadamente 15 ml en placas de Petri estriles.
Agregar 5-10 % de sangre ovina desfibrinada estril.
Calentar a 80oC durante 10 minutos mezclando frecuentemente.
Dejar enfriar a 45-50oC y distribuir en lacas de Petri estriles.

Interpretacin de Resultados
Para agar sangre:
Observar las caractersticas de las colonias y reacciones de hemlisis
-Hemlisis alfa: lisis parcial de los glbulos rojos. Se observa un halo de color verdoso alrededor de la colonia
en estudio. Es debido a la oxidacin de la hemoglobina a metahemoglobina (compuesto de color verdoso)
por el perxido de hidrgeno generado por los microorganismos.
-Hemlisis beta: lisis total de los glbulos rojos. Se observa un halo claro, brillante alrededor de la colonia en
estudio.
-Hemlisis gamma: ausencia de lisis de los glbulos rojos. El medio de cultivo no presenta modificaciones de
color y aspecto alrededor de la colonia en estudio.
Para agar chocolate: Cualquier tipo de crecimiento debe compararse con los dems medios sembrados. En
muestras estriles es importante identificar los microorganismos aislados y muestras que contengan flora
microbiana. Observar el tipo de muestra y la flora patgena posible a encontrar. Nutricionalmente el agar
chocolate, respecto con el agar sangre, depende de la bacteria del microorganismo que vayas a analizar. No
se forma hemlisis.

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Ejemplos de microorganismos
Para agar sangre; donde se pueden observar los distintos tipos de hemlisis.

Cultivo agar chocolate

Microorganismo

Hemlisis Alfa

S. pyogenes

Hemlisis
Gamma

Presenta

S. Viridans

Presenta

S. Thermophilus

Presenta

S. Salivarious

Hemlisis
Beta

Presenta

En cambio el agar chocolate es un medio no selectivo enriquecido en el que crecen bacterias exigentes y no
exigentes, incluida la flora normal. Por consiguiente, se recomienda inocular las muestras tambin en medios
selectivos adecuados. El trmino bacterias exigentes se refiere a las bacterias que no crecen o no crecen
bien en los medios de aislamiento primario utilizados normalmente con sangre de carnero: por ej.,
Haemophilus, Neisseria patgena y muchos otros organismos.

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Bibliografa
*http://www.britanialab.com productos/266_hoja_tecnica_es.pdf
*http://www.biobacter.com/INSERTOS/AGAR%20CHOCOLATEpdfproductos/236_hoja_tecnica_es.pdf
*J. Pelczar., 1982, 2da Edicin, "Microbiologa", McGRAW-HlLL, Mxico.
*Castro G,A., 1967, "Medios de Cultivo y reactivos de diagnstico, tomo 1".
*Consultado en (01/03/15) http://laanunciataikerketa.com/trabajos/microorganismos/celula.pdf

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Agar Salmonella Shigella

Sandra N. Dvila Aranzazu, Elizabeth Gonzlez Ibarra, Melissa E. Gonzlez Rendn
Antecedentes
Medio de cultivo selectivo y diferencial utilizado para el aislamiento de Salmonella spp y de algunas especies
de Shigella spp a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.
Al ser un medio altamente selectivo para Salmonella spp, algunas pocas cepas de Shigella spp pueden no
desarrollarse adecuadamente en el mismo.
Ocasionalmente unos pocos microorganismos no patgenos se pueden desarrollar en el medio pero son
fcilmente diferenciados por su capacidad de fermentar la lactosa, como Escherichia coli que se diferencia
por la coloracin roja o rosada en sus colonias.

Fundamento
En el medio de cultivo la pluripeptona y el extracto de carne aportan los nutrientes para el desarrollo
microbiano.
Las sales biliares y el verde brillante inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayora de
los coliformes y detienen el desarrollo invasor de Proteus spp.
La lactosa es el hidrato de carbono fermentable junto a un indicador muestra cambio de coloracin al ser
producida.
El tiosulfato de sodio permite la formacin de SH2 que se evidencia por la formacin de sulfuro de hierro.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollarse, acidifican el medio
haciendo virar al rojo el indicador de pH, obtenindose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella spp, Shigella spp y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen
adecuadamente en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formacin de
sulfuro de hierro. Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en selenito
caldo.

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Preparacin
1. Para prepara 1 litro de agua destilada suspender 60 g del polvo de agar SS.
2. Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar.
3. Calentar con agitacin frecuente y llevar a ebullicin durante 1 minuto para disolucin total. No
esterilizar en autoclave.
4. Enfriar y distribuir en placas de Petri estriles.
5. Sembrar estriando directamente la superficie del medio de cultivo.

Interpretacin de Resultados
Los microorganismos fermentadores de lactosa dan colonias rosadas o rojizas.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa dan colonias del color del medio, incoloras.
Los microorganismos productores de SH2 dan colonias con centro negro.

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Ejemplos de microorganismos

Microorganismos fermentadores de
glucosa: colonias rosas o rojizas.
Escherichia coli.

Microorganismos no fermentadores
de glucosa: colonias del color del
medio, incoloras.
Shigella spp.

Microorganismos productores de
SH2: colonias obscuras con centro
negro.
Salmonella spp.

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Bibliografa

http://www.bd.com/resource.aspx?idx=8779

http://www.britanialab.com/productos/432_hoja_tecnica_es.pdf

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Agar Mueller Hinton

Alexia Gonzlez Islas, Valeria Miranda Hernndez
Antecedentes
Un medio de cultivo es un material nutritivo preparado para lograr el crecimiento de microorganismos. Los
microorganismos que son colocados en el medio se les llaman inculos. Para llevar a cabo un buen medio o
un buen crecimiento en el medio se deben tomar en cuenta varios aspectos tales como, el contar con los
nutrientes necesarios que el microorganismo a observar necesita, tambin se necesita de un pH ajustado y
una concentracin de oxgeno adecuada.
Existen algunos microorganismos que causan dao a la salud, por lo que se crearon diversos medios para
la determinacin de la sensibilidad a antimicrobianos y as conocer cmo tratar con ellos.
Los agentes antimicrobianos para tratar las infecciones bacterianas, eran conocidos por el mtodo de
macrodilucin en caldo, y era necesario utilizar un mtodo que fuese ms prctico, para as probar con varios
agentes antimicrobianos contra diferentes cepas de bacterias; Dada esta necesidad se cre el mtodo de
difusin con discos realizado por Bauer, kirby, sherris, y turck en el ao de 1966.
En la prueba de sensibilidad por la difusin con discos la resistencia a los antimicrobianos se detecta
exponiendo los aislamientos bacterianos a discos de antibiticos que se colocan en una placa de agar cuya
superficie se ha sembrado con bacterias. Cuando los discos que contienen una concentracin conocida de
agente antimicrobiano se colocan sobre la superficie de una placa recin sembrada el agente comienza a
difundirse de inmediato y establece un gradiente de concentracin alrededor del disco de papel, la
concentracin ms alta es la ms cercana al disco.

Fundamento
El Agar Mueller Hinton es el medio base estndar para probar la mayora de las bacterias con ciertos
suplementos y sustituciones necesarias para probar los microorganismos con requerimientos especiales de
cultivo. Es un mtodo establecido para la determinacin de la sensibilidad a antimicrobianos por medio de
discos de difusin. Es un mtodo cualitativo que permite ser fcilmente estandarizable y que est indicado
para microorganismos no exigentes y de crecimiento rpido, debido a que muestra buena reproducibilidad
de los resultados de sensibilidad entre distintos lotes, contiene baja reproducibilidad de inhibidores tales
como las sulfonamidas, trimetropima y tetraciclinas, adems de permitir un buen crecimiento de la mayora
de los patgenos.
Consiste en depositar en la superficie de la placa con el medio que es previamente inoculada por los
microorganismos, discos de papel de filtro impregnados con los diferentes antibiticos. Una vez que el disco
se pone en contacto con la superficie hmeda del agar, el filtro absorbe agua y el antibitico se difunde por
el agar, formndose un gradiente de concentracin; Al pasar las horas necesarias de incubacin, los discos
pueden o no aparecer rodeados con una zona de inhibicin de crecimiento microbiano, la cual es tomada en
cuenta para saber si los microorganismos son resistentes, intermedios o sensibles.

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Preparacin
El medio se prepara a partir de un del polvo deshidratado, el cual est compuesto por:
-

Infusin de carne300g
Peptona cida de Casena..17.5g
Almidn.1.5g
Agar..15g

La frmula es en gramos por litro.

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Se realizan 37g por litro.

Se deja embeber entre 10 y 15min.
Se calienta con agitacin frecuente y se deja hervir durante 1min.
Se esteriliza a 121C durante 15min.
Se deja enfriar de 45 a 50C durante 15min.
En la zona esterilizada, se comienza a distribuir en cajas Petri.
Se realiza la siembra en la placa, la cual se estra con el hisopo en forma paralela y compacta
abarcando toda la superficie.
8. Se deja secar de 3 a 5 min antes de colocar los discos.
9. Colocar los discos con una pinza estril, al estar en el agar presionar levemente para que queden
adheridos, se deben de distribuir de manera que los halos de inhibicin no tengan superposicin.
10. Luego de colocados los discos las placas deben incubarse a 35C a 37C en grupos no mayores a cinco
placas durante 18 hrs. Las placas deben colocarse en forma invertida para que el agua condensada
no caiga sobre el agar, lo que cambiara las condiciones del medio y por lo tanto no servira para la
lectura de los halos.

Interpretacin de Resultados
Para la interpretacin de resultados se debe medir el dimetro del halo de inhibicin. Los resultados con
organismos especficos pueden clasificarse en resistentes, intermedios o sensibles.

La imagen nos ayuda a entender un poco mejor cmo ser la relacin microorganismo-antimicrobiano.

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Ejemplos de microorganismos
En la siguiente imagen se muestra cuando se puede considerar a la E. coli resistente, intermedia o sensible.

Aqu se muestra cmo reaccionan varios microorganismos a diversos antibiticos:

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Bibliografa

http://www.cdc.gov/ncidod/dbmd/gss/publications/documents/argentinaleveli/manual_procedimientos.pdf

http://www.britanialab.com/productos/335_hoja_tecnica_es.pdf

http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8774

https://books.google.com.mx/books?id=239cauKqSt0C&pg=PA194&dq=agar+mueller+hinton&hl=e
s&sa=X&ei=Z5jnVMDSNcGwyASw9oCoDg&ved=0CBsQ6AEwAA#v=onepage&q=agar%20mueller%2
0hinton&f=false

https://books.google.com.mx/books?id=239cauKqSt0C&pg=PA194&dq=agar+mueller+hinton&hl=e
s&sa=X&ei=Z5jnVMDSNcGwyASw9oCoDg&ved=0CBsQ6AEwAA#v=onepage&q=agar%20mueller%2
0hinton&f=false

http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/BacteCEFA36.pdf

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Agar EMB
Eliselda Castro Ramrez, Matas Flix Mara Guadalupe, Norma Isabel Rubio Macas
Antecedentes
El

agar Eosina-Azul de Metileno (EMB), es un medio selectivo que permite el crecimiento de bacilos
Gram negativos, principalmente de la Familia Enterobacteriaceae, inhibiendo el crecimiento de las
bacterias Gram positivas.

Tambin

es un medio diferencial ya que nos permite saber por la coloracin de las colonias si los
microorganismos que crecen fermentan lactosa o sacarosa.

Si

las bacterias fermentan lactosa o sacarosa, acidifican el medio y la eosina vira dando lugar a la
aparicin de colonias oscuras, de color rosado a verde brillante

Fundamento
Es nutritivo por la presencia de peptona que favorece el desarrollo microbiano.
La diferenciacin entre microorganismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa y aquellos que son
incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul de metileno.
La eosina y azul de metileno ejerce un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram
positivas.
El agar es el agente solidificante.
El fosfato dipotsico acta como regulador de pH del medio de cultivo.

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Preparacin
1. Suspender 36g del medio en 1 litro de agua destilada. (Reposar 5 minutos)
2. Calentar con agitacin frecuentemente y llevar a ebullicin hasta su disolucin total.
3. Esterilizar en autoclave a 121C, 15 Lb de presin durante 15 minutos.
4. Distribuir en placas Petri estriles.

SIEMBRA
5. En la superficie por estriado directo a partir de la muestra.
6. En profundidad para favorecer el desarrollo de clamidosporas.

INCUBACIN
7. En aerobiosis, de 35-37C durante 18-24 horas.

Interpretacin de Resultados
Los microorganismos fermentadores de lactosa y/o sacarosa: Colonias color Negro azulado o
amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metlico.
Microorganismos no fermentadores de lactosa y sacarosa:
Colonias de color medio, incoloras.
*Para la identificacin de gnero y especie microbiana se deben realizar pruebas bioqumicas adicionales.

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Ejemplos de microorganismos
Documentar aqu las reacciones o caractersticas de cultivo de los microorganismos, ms comunes,
incluyendo imgenes.
MICROORGANISMOS
Escherichia coli
Salmonella typhimurium
Shigella flexneri
Klebsiella pneumoniae
Enterococcus faecalis
Proteus mirabilis

TIPO DE COLONIA
Verdosas con brillo metlico y centro azulado
Incoloras y/o transparentes
Incoloras y/o transparentes
Mucosas, rosa prpura
Incoloras, pequeas, puntiformes
Incoloras

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Bibliografa
http://www.britanialab.com/productos/274_hoja_tecnica_es.pdf
http://3lvmdtparasitologicas.blogspot.mx/2009/10/presentacion-de-medios-de-cultivoemb_30.html
Microbiologa Clnica/ Guillem Prats/ Paginas: 30 31
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/embagar.htm
http://www.probiotek.com/producto/agar-con-eosina-y-azul-de-metileno-emb/

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Agar ENDO
Kevin Ricardo Daz Glvez, Vctor Emir Franco Salas, Daniel Flores Ruiz
Antecedentes
En 1904 Endo convencido de haber desarrollado una metodologa ideal para el aislamiento de la Salmonella
typhi, propuso el agar endo, medio que consista en diferenciar entre microorganismos fermentadores y no
fermentadores de lactosa. En un principio, la tcnica fue utilizada para el aislamiento de Salmonella typhi,
sin embargo, actualmente es utilizada mayormente como un medio para coliformes.
Un ao ms tarde, Alfred Theodore MacConkey propuso un nuevo medio de cultivo basndose en el
fundamento de Endo, siendo este especfico para bacterias Gram negativas y cepas que fermentaran la
lactosa.
Debido a la similitud de ambos medios, la implementacin del agar es meramente una eleccin personal
ya que ambos presentan gran eficacia en cuanto a la identificacin de bacterias fermentadoras de lactosa.

Fundamento
La selectividad del agar Endo se debe a la combinacin del sulfito de sodio con fucsina bsica, lo cual ocasiona
la supresin parcial de los microorganismos Gram (+).
La peptona proporciona los nutrientes para el desarrollo de los microorganismos Gram (-); por otra parte,
la lactosa es el carbohidrato fermentable, es decir, es el agente que proporciona el crecimiento bacteriano
junto con la peptona. Por ltimo se encuentra el fosfato dipotasico, el cual acta como regulador de pH del
medio de cultivo. En el agar Endo la proporcin de sulfito de sodio es de (0.5).
Asimismo, el agar Endo se constituye de otros componentes como lo es la fucsina bsica (0.5 g), lactosa
(10 g), agar (15 g), un digerido pptico de tejido animal (10 g); cabe destacar que los componentes
mencionados deben encontrarse disueltos en 1000 ml de agua destilada.

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Preparacin
Suspender 41.5 g del polvo deshidratado en un litro de agua destilada y mezclar vigorosamente hasta
que los componentes se hayan disuelto por completo.
Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para disolver los componentes.
Con ayuda de una autoclave, esterilizar a 121oC con 15 lb de presin durante 15 minutos.
Agregar de 20 ml del medio a las placas de petri y dejar enfriar (realizarse en una zona con ambiente
estril).
Almacenarlas en un lugar oscuro con temperatura de entre 2 y 8oC hasta justo antes de usarlas.
Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede almacenarse a temperatura
ambiente por un periodo mximo de 2 semanas, ya que se corre el riesgo de contaminacin.
La siembra de la muestra de cultivo se puede hacer por estra cruzada, incubando inmediatamente
despus durante 24 hrs a 35oC. La incubacin es un paso importante ya que ofrece el ambiente
idneo para el desarrollo bacteriano.

Interpretacin de Resultados
En el agar Endo, la lactosa y el rojo de fucsina juegan un papel fundamental en morfologa bacteriana ya que
al tratarse de un carbohidrato neutro y un indicador pH, los cambios en cuanto a la actividad metablica de
los microorganismos se ven reflejados en la tonalidad o viraje del agar. El pH del agar endo se encuentra en
el intervalo de 7.5 caracterizndose por tener una tonalidad rosa; sin embargo, a partir de la actividad de
fermentacin, el agar puede tornarse amarillo (pH 8.0) o bien rojo (pH 6.8).
Las colonias de las bacterias fermentadoras de lactosa presentan una tonalidad rojo, ya sea rojo fucsina o
incoloras con centro rosado lo cual depende de la cantidad de cido producido.
En el caso de las bacterias no fermentadoras, las colonias tienden a ser incoloras mientras que el medio
adquiere un color amarillo, lo cual se debe a que las bacterias utilizan las peptonas y alcalizan el medio de
cultivo.
Metablicamente, las bacterias al degradar la lactosa del agar Endo forman aldehdo y acido. El aldehdo, a
su vez, libera la fucsina de la combinacin fucsina - sulfito, lo cual da lugar a la coloracin roja de las colonias
de bacterias coliformes.
En el caso de la Escherichia coli, esta reaccin es tan intensa que la fucsina llega a cristalizar, lo cual le confiere
a dichas colonias un brillo metlico estable de reflejo verde, tpico de la fucsina cristalizada.

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Ejemplos de microorganismos
Cepas

Resultados del crecimiento

Shigella flexneri ATCC 12022

Colonias incoloras o rosa tenue y

ligeramente ms rosa que las
colonias de Salmonella.

Enterobacter cloacae ATCC 13047

Colonias rojo intenso con o sin

brillo metlico.

Escherichia coli ATCC 25922

Colonias rosa oscuro a rojizo con

un brillo verde metlico. Puede
ocurrir un marcado
enrojecimiento del medio.

Salmonella typhimurium ATCC

14028

Colonias incoloras o rosa tenue.

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Bibliografa
http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8766
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_AgarEndo.pdf
http://www.dibico.com/fichast/1009.pdf
http://www.mikrobiyoloji.org/TR/Genel/BelgeGoster.aspx?F6E10F8892433CFFAAF6AA849816B2EF
4E28CAAAE37831E5
http://mibio.ru/contents.php?id=743
Bacteriologa General: Principios y prcticas de laboratorio, Cultivo de bacterias, Evelyn Rodrguez
Cavallini, Ed. Universidad de Costa Rica, 2005, 1ra. edicin, pgina 134.
http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis203.pdf

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Agar Lowenstein Jensen

Carlos R. Arteaga Dominguez, Elisabeth Bravo Fuentes, Bryan Mizquez Tapia
Antecedentes
Originalmente la frmula de Lowenstein de 1931 contena los indicadores rojo congo y verde de malaquita.
En 1932 Jensen modific el medio eliminando el rojo congo e incrementando la concentracin de verde de
malaquita.
Base utilizada para la preparacin de diferentes medios destinados al aislamiento, cultivo y diferenciacin
de micobacterias, fundamentalmente Mycobacterium tuberculosis.

Fundamento
Los nutrientes de este medio basal, ms los aportados por el agregado de la mezcla de huevos, constituyen
un rico soporte para el crecimiento de una gran variedad de micobacterias excepto Mycobacterium leprae.
El verde de malaquita inhibe el desarrollo de la flora acompaante Gram positiva y de algunas bacterias Gram
negativas. Con el agregado de glicerina se estimula el crecimiento de Mycibacterium tuberculosis, aunque
gran parte de Mycobacterium bovis es inhibido. Si se adiciona cloruro de sodio al 5% se pueden seleccionar
micobacterias tolerantes a la sal, como es el caso de Mycobacterium smegmatis.

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Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

Preparacin
Formula (en gramos por litro)
Fosfato monopotsico..2.5
Sulfato de magnesio...0.24
Citrato de magnesio..0.6
Harina de papa.30.0
Asparragina.3.6
Verde de malaquita0.4
pH final: 4.8 0.2
Suspender 37,3 g del polvo en 600 mL de agua purificada y agregar 12 mL de glicerina.
Calentar agitando continuamente y hervir un minuto para disolucin total.
Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos.
Enfriar a 50C aproximadamente.
Mezclar aspticamente un litro de huevo ntegro, evitando la formacin de burbujas de aire y agregar
al medio base ya esterilizado y a una temperatura aproximada de 50C.
Mezclar el huevo y la base hasta uniformar.
Distribuir en tubos estriles y tapar hermticamente.
Colocar los mismos en posicin inclinada y coagular a 85-90C durante 45 minutos.

Interpretacin de Resultados
Los cultivos positivos generalmente se observan entre los 13 y 28 das de incubacin, dependiendo del
contenido de bacilos en las muestras sembradas, mientras que el 3% de las micobacterias suele crecer a los
40 das de incubacin. La aparicin de colonias color crema, rugosas o cremosas, amarillentas, es indicio de
cultivo positivo.

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Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

Ejemplos de microorganismos
Microorganismos
Crecimientos

Mycobacterium tuberculosis

Mycobacterium avium

Mycobacterium gordonae

Mycobacterium bovis (no crece si se le agrega glicerina).

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Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

Bibliografa
http://www.britanialab.com/productos/576_hoja_tecnica_es.pdf
http://www.hospitallosangeles.cl/system/files/Instructivo%20Trabajo%20N%C2%BA20.pdf

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Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

CAMP
Sarah Ester Huerta Razo, Hiram Rene Murrieta Encinas, Mara Teresa Garca Moroyoqui
Antecedentes
La prueba de CAMP deriva su nombre de los tres investigadores que descubrieron el fenmeno en 1944
(Christie, Atkins y Munich-Petersen).
Esta prueba se usa para identificar estreptococos hemolticos del grupo B (Streptococcus agalactiae).
No obstante este fenmeno se presenta en algunas especies de otros gneros y tambin se usa para
diferenciarlas.

Fundamento
Los estreptococos del grupo B (Streptococcus agalactiae) producen una protena difusible y termoestable
(factor CAMP) que aumenta la hemlisis de Staphylococcus aureus productor de lisina.

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Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

Preparacin
Se utiliza Agar sangre ya que son microorganismos exigentes que requieren enriquecimientos adicionales
para su desarrollo.
Estriar Staphylococcus en una lnea recta que atraviese el centro de una placa. Estriar el microorganismo o
microorganismos de prueba en una lnea recta de 2-3 cm de largo y perpendicular al inocuo estafiloccico
sin tocarlo. Si los inculos no son perpendiculares entre s, no ocurrir la hemlisis en punta de flecha.

Se produce esfingomielinasa C por parte de la estra estafiloccica que puede unirse a las membranas de
los eritrocitos. Cuando son expuestas al factor CAMP del grupo B, las clulas sufren hemlisis.
Incubar en aerobiosis (sin oxgeno) o con atmsfera parcial de CO2 a 35-37C durante 24 horas.

Interpretacin de Resultados
Se considera la prueba positiva, si se observa una hemlisis clara en tringulo o punta de flecha.

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Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

Ejemplos de microorganismos
Esta prueba se utiliza para ayudar en la identificacin de estreptococos del grupo B. Se utiliza sobre todo
para la identificacin dentro del gnero Streptoccocus; sin embargo el fenmeno hemoltico sinrgico
tambin se encuentra entre algunas especies de otros gneros y se utiliza para diferenciar especies:
Pasteurella haemolytica (+) de Pasteurella multocida (-) .

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Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

Bibliografa
Bacteriologa General: principios y prcticas de laboratorio, Rodriguez E. ET L, ed. Universidad de
Costa Rica, 2005, p.243-244.
Koneman. Diagnstico Microbiolgico/ Microbiological diagnosis: Texto Y Atlas En Color/ Text and
Color Atlas, Ed. Panamericana, 2008 p.1408-1409.

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Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

Urea
Azaria Franco Gutirrez, Oscar Romero Prado, Ibis Snchez Lamadrid
Antecedentes

El agar urea fue diseado por Christensen para su uso como medio slido para la diferenciacin de bacilos
entricos. Realiza la diferenciacin entre organismos Proteeae rpidos positivos a la ureasa y otros
organismos positivos a la ureasa: Citobacter, Enterobacter, Klebsiella y bacterias diferentes a la
Entrobacteriaceae; es decir algunas especies de Bordetella y Brucella.

El caldo de urea de Stuart, se puede utilizar, para la determinacin de la actividad ureasa de las
Enterobacterias, as como para microorganismos de la familia de Brucella, Bacillus, Micrococcus,
Mycobacteria y Proteus. Se puede utilizar para la identificacin de bacterias en base a la utilizacin de la
urea. Est especialmente recomendado para la diferenciacin de miembros de los gneros Proteus de
otros como Salmonella y Shigella

Fundamento
Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos molculas de amoniaco por la
accin de la enzima ureasa, produciendo un cambio de color rojo en el medio.
La hidrlisis de la urea es catalizada por la ureasa, para dar dos molculas de amoniaco. La ureasa es una
importante enzima microbiana vinculada con la descomposicin de los compuestos orgnicos.

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Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

Preparacin
AGAR UREA DE CHRISTENSEN
FRMULA (en gramos por litro)
TRIPTENA.........................................................................................
GLUCOSA...........................................................................................
CLORURO DE SODIO...........................................................................
FOSFATO MONOPOTSICO.................................................................
ROJO DE FENOL...................................................................................
AGAR....................................................................................................
pH final: 6.8 0.2

1.0
1.0
5.0
2.0
0.012
15.0

INSTRUCCIONES
Suspender 24 g del polvo en 950 ml de agua purificada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar con agitacin
frecuente y llevar a ebullicin para disolucin total. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en
autoclave a 121C durante 15 minutos. Enfriar a 50C y agregar 50 ml de una solucin de urea al 40%
previamente esterilizada por filtracin o cloroformo. Fraccionar en tubos y dejar solidificar el medio en pico
de flauta con fondo profundo.
CARACTERSTICAS DEL PRODUCTO
Medio de cultivo deshidratado: color rosa claro, homogneo, libre deslizamiento. Medio de cultivo
preparado: color amarillo
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35oC. Medio de cultivo preparado a 2-8oC.
PROCEDIMIENTO
Siembra: a partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, estriar la superficie del medio en el pico
de flauta. Se recomienda no punzar la capa profunda para controlar el color.
INCUBACIN
En aerobiosis, a 35-37oC, durante 18-24 horas. Los microorganismos que hidrolizan la urea lentamente
pueden requerir hasta 72 horas de incubacin.

Interpretacin de Resultados

Negativo: Amarillo

Positivo: Rojo rosado

Los microorganismos que hidrolizan la urea rpidamente pueden producir reacciones positivas en 1 o 2
horas; las especies menos activas pueden requerir 3 das o ms.

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Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

Ejemplos de microorganismos
Microorganismo

Resultados

Klebsiella

Escherichia coli

Proteus

Providencia

Shigella flexneri

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Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

Bibliografa
1. Lucia Bailn Lira, Roberto Cruz Gonzlez Melndez, Armando Cervantes Sandoval. (2003). Atlas de
Pruebas Bioqumicas. 2015, de Universidad Nacional Autnoma de Mxico Sitio web:
http://www.academia.edu/4858992/Atlas_de_pruebas_bioquimicas_para_identificar_bacterias
2. Garrido Pertierra, A., & Teijn Rivera, J. M. (2006). Fundamentos de bioqumica metablica (2a ed.).
Madrid: Tbar.
3. Ainsworth R (ed.), 2004: Safe piped water: Managing microbial water quality in piped distribution
systems. IWA Publishing, Londres (Reino Unido), para la Organizacin Mundial de la Salud, Ginebra
(Suiza).

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Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

Rojo de Metilo
Ernesto Ibarra, Alonso Villanes
Antecedentes
La segunda mitad del siglo XIX, fue el inicio de las grandes sntesis orgnicas, y como no poda ser menos, tambin los
indicadores cido base, que haban sido empleados como productos naturales, iban a ser sintetizados a partir de 1868.
El primero indicador en ser sintetizado fue la fenolftalena 1, conseguida por Baeyer condensando el anhdrido del
cido ftlico (ortobencenodicarboxlico), con fenol, en 1871. De la fenolftalena salieron otros muchos indicadores,
potenciando los cambios de absorcin al introducir derivados sulfonados y bromados, estudiados por Lubs y Clark a
partir de 1915. As aparecieron el rojo fenol, el azul de timol, la timolftalena, el azul de bromotimol, azul de bromofenol
y el cresol entre otros.
El rojo de metilo fue el segundo indicador cido-base de este tipo en ser empleado, fue el rojo Congo 3, descubierto
por Bttiger en 1884. Despus se usaran el rojo de metilo (introducido por Rupp y Loose en 1908), amarillo de alizarina
etc.

Fundamento
La prueba bioqumica de rojo de metilo (MR) es una prueba cuantitativa basada en el uso de un indicador de pH, el rojo
de metilo, para determinar la concentracin de ion hidrogeno (pH) cuando un microorganismo fermenta la glucosa. Es
particularmente til para la clasificacin de entero bacterias.

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2015-1

Preparacin
Suspender 17 gr del polvo por litro de agua destilada.
Calentar suavemente hasta disolver y que no haya grumos en el lquido.
Distribuir en tubos de ensayo el caldo, despus de que este a temperatura ambiente.
Esterilizar en una autoclave a 120oC, por 15 min a 15 libras de presin.

Interpretacin de Resultados
No debe intentarse interpretar un resultado con el rojo de metilo antes de 24-48 horas de incubacin.
Positiva: Rojo en la superficie del medio (pH = 4.4) Algunas bacterias pueden producir menores cantidades de
cido a partir del sustrato por ello es posible que aparezca un color naranja. Esto indica una prueba positiva.
Negativo: Amarillo (pH = 6) naranja.

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Ejemplos de microorganismos

Escherichia coli.- Buen crecimiento y da positivo a la prueba rojo de metilo.

Klebsiella pneumoniae.- Buen crecimiento y da negativo a la prueba rojo de metilo.

Proteus mirabilis.- Buen crecimiento y da positivo a la prueba rojo de metilo.

Salmonella typhimurium.- Buen crecimiento y da positivo a la prueba rojo de metilo.

Enterobacter cloacae.- Buen crecimiento y da positivo a la prueba rojo de metilo.

Enterobacter aerogenes.- Buen crecimiento y da positivo a la prueba rojo de metilo.

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2015-1

Bibliografa

https://books.google.com.mx/books?id=FYWSzy7EjR0C&pg=PA302&dq=medio+de+cultivo+rojo+d
e+metilo+y+voges&hl=es&sa=X&ei=sRrkVLvKEo2lyATW5YDgDg&ved=0CBsQ6AEwAA#v=onepage&
q=medio%20de%20cultivo%20rojo%20de%20metilo%20y%20voges&f=false

http://www.heurema.com/QG/QG8/INDICADORESAB2.pdf

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2015-1

Descarboxilacin de aminocidos
Blanca Estefana Acosta Quiroz, Kimberly Amarillas Snchez, Mara Alejandra Cota Arredondo
Antecedentes
En 1955, Moller introdujo este medio de cultivo, para evaluar la produccin de lisina y ornitina decarboxilasa y de
arginina dehidrolasa. Estas pruebas, junto a otros test bioqumicos, permiten diferenciar a las Enterobacterias y otros
bacilos Gram negativos tales como Aeromonas, Plesiomonas y Vibrio spp. La produccin de ornitina decarboxilasa, es
una prueba clave para diferenciar el grupo Klebsiella-Enterobacter. Klebsiella spp. Es inmvil y no produce ornitina
decarboxilasa, mientras que Enterobacter es mvil, y excepto E. agglomerans, generalmente produce esta enzima.

Fundamento
Una descarboxilacin es el proceso por el cual las bacterias que poseen enzimas descarboxilasas especficas atacan los
aminocidos en su carboxilo terminal (COOH) para formar una amina o una diamina y dixido de carbono. Existen
numerosas enzimas descarboxilasas, cada una especfica para un sustrato dado. En un laboratorio de bacteriologa
clnica, las tres descarboxilasas importantes utilizadas para la identificacin bacteriana son: lisina, ornitina y arginina.
Estas descarboxilasas son enzimas adaptativas o inducidas. Solo se forman cuando un microorganismo es cultivado en
un ambiente cido en presencia de un sustrato especfico, y los productos de descarboxilacin cambian el pH en lmites
alcalinos.
La descarboxilacin est restringida a aminocidos que poseen por lo menos un grupo qumicamente activo, distinto
de una amina (NH2 ) o un grupo carboxilo (COOH) y la degradacin de los aminocidos ocurre en anaerobiosis .La
descarboxilacin es irreversible, no oxidativa y por lo general requiere una coenzima comn, fosfato piridoxal, que
refuerza la actividad de descarboxilasa.

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Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

Preparacin
Descarboxilacin lisina, arginina y ornitina
Ingredientes:

Mtodo de preparacin:
a) Pesar la cantidad con precisin como se indica en el rtulo
b) Rehidratar con agua destilada o desmineralizada
c) Calentar la solucin con suavidad
d) Distribuir alrededor de 4 a 5 mL por tubo con tapa a rosca (16 X 125 mm)
4.-Mtodo de esterilizacin: autoclave, 121 C ,15 lb, 15 min.
5.-Enfriar, ajustar las tapas a rosca y conservar en refrigerador (4-10 C).
6.-Inoculacin
a) Desarrollo a partir de un cultivo puro (KIA) de 18 a 24 h.
b) Inculo liviano
c) Utilice un tubo control que no contenga ningn aminocido con cada microorganismo a investigar para
evaluar la degradacin de la lisina.
d) Se recomienda que todos los tubos, incluso el control, se recubran con 2-3 mL de parafina estril o vaselina
estril.
7.-Incubacin
a) 35C
b) No menos de 24 h; puede ser necesaria la incubacin prolongada de hasta 4 das.

Agar con lisina y hierro (LIA)

Ingredientes:
L-Lisina al 0.1%
Glucosa al 0.1%
Indicadores de H2S
Citrato de Amonio Frrico
Tiosulfato de Sodio
Purpura de Bromocresol

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Medios y pruebas bioqumicas

2015-1

Preparacin
Mtodo de preparacin:
Fraccionar en cantidades de 4 ml (tubos para la prueba 13 X 100 mm), extremo inferior profundo
(para la anaerobiosis)/ pico de flauta corto.
Con una aguja de inoculacin, estriar el pico de flauta y punzar el fondo del medio 2 veces.
Con las tapas flojas; de 18 a 24 horas de incubacin a 35C.
Caldo para lisina descarboxilasa de Falkow
Ingredientes:
pH 6,8 0,2

Indicador de pH: purpura de bromocresol (BCP)

Acido: color amarillo, pH 5,2.
Alcalino: color prpura, pH 6,8.
Medio no inoculado: pH 6,8; color prpura brillante intenso.

Mtodo de preparacin:
Pesar la cantidad con precisin como se indica en el rtulo.
Rehidratar con agua destilada o desmineralizada.
Calentar la solucin con suavidad.
Distribuir alrededor de 4 a 5 mL por tubo con tapa a rosca (16 X 125 mm).
Mtodo de esterilizacin: autoclave, 121C ,15 lb, 15 min.
Enfriar, ajustar las tapas a rosca y conservar en refrigerador (4-10C).
Inoculacin.
Desarrollo a partir de un cultivo puro (KIA) de 18 a 24 h.
Inculo liviano.
Utilice un tubo control que no contenga ningn aminocido con cada microorganismo a investigar
para evaluar la degradacin de la lisina.
Se recomienda que todos los tubos, incluso el control, se recubran con 2-3 mL de parafina estril o
vaselina estril.
Incubacin 35C.
No menos de 24 h; puede ser necesaria la incubacin prolongada de hasta 4 das.

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2015-1

Preparacin
Mtodo de Fay y Barry
Ingredientes:

Peptona 5g.

extracto de levadura 3g.

purpura de bromocresol 0.2% (p/v) en etanol al 50.0% (v/v) 5 ml.

Agua de ionizada llevar a 1,000 ml.

Mtodo de preparacin:

Calentar con suavidad para disolver agregar 10g de clorhidrato de L-Ornitina.

Ajustar el pH a 5.5 con cido clorhdrico o hidrxido de sodio.
Esterilizar en autoclave 121C, 15 Lbs., 15 min.
El da de la prueba fraccionar de manera asptica alcuotas de 1mL en tubos estriles de 12x75
Inoculacin: nica colonia de un cultivo de 18 a 24 horas.
Cubrir los tubos al menos con 0.5mL de vaselina estril.
Incubacin: bloque de calefaccin a 37C de 2 a 4 horas.

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2015-1

Interpretacin de Resultados
En todos los mtodos ya mencionados:

Es positivo cuando el color purpura turbio cambia a amarillo apagado. Es porque el microorganismo produce
cadaverina.
Es negativo cuando el color amarillo brillante cambia a claro. El microorganismo solo fermenta a la glucosa.
En Agar con lisina y Hierro

Positivo (+): pico de flauta purpura/ extremo inferior purpura (alcalino), con SH 2 o sin l.
A) pico de flauta purpura (alcalino) debido a la desaminacin aerbica de la peptona.
B) la reaccin en el extremo inferior puede enmascararse por el color negro del H 2S; el H2S solo se produce en
el medio alcalino (purpura). La reaccin tiene lugar en anaerobiosis en el extremo inferior del tubo.
Negativo (-): pico de flauta purpura / extremo inferior amarillo (cido); solo fermentacin de la glucosa.

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2015-1

Ejemplos de microorganismos

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2015-1

Bibliografa
Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia clnica, tercera edicin, Jean F. MacFaddin MT,
(ASCP), SM (AAM), Editorial panamericana.

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Kligler
Arvayo Fernando, Huerta Daniel, Urrea Zuiga Denisse

Antecedentes
Es un medio de cultivo utilizado para la diferenciacin de entero bacterias en base a la fermentacin de lactosa y
glucosa, adems de la formacin de cido sulfhdrico.
El medio se solidifica en forma inclinada permitiendo tener dos cmaras de crecimiento: una aerbica, el pico de flauta
y la otra anaerbica, el fondo del tubo.
La fermentacin de azcares acidifica el medio lo cual se observa con el vire del rojo fenol a amarillo que es el indicador
cido-base incorporado. En caso de no haber fermentacin, el medio vira a rojo.

Fundamento
Permite un diagnstico rpido orientativo del tipo de entero bacteria aislada. Las entero bacterias ms patgenas no
suelen fermentar (producir cidos de) la lactosa. Se detecta la produccin de cidos (acompaada o no del
desprendimiento de gases) de glucosa o lactosa y produccin de SH 2.

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2015-1

Preparacin
1.- Suspender 52g en un litro de agua purificada. Calentar con agitacin suave hasta su completa dilucin y hervir
durante un minuto.
2.- Dispensar en tubos de vidrio, tapar y esterilizar en autoclave a 121C (15 libras de presin) durante 15 minutos.
3.- Dejar reposar en posicin inclinada.

Interpretacin de Resultados
1.- Una superficie alcalina y un fondo cido (rojo/amarillo) indica fermentacin solo de la dextrosa.
2.- Una superficie y fondo cido (amarillo/amarillo) indica la fermentacin de dextrosa y lactosa.
3.- Una superficie y fondo alcalino (rojo/rojo) indica que no hubo fermentacin de ninguno de los carbohidratos.
4.- La presencia de burbujas o fracturas en el medio indica la produccin de gas.
5.- La presencia de un precipitado negro indica la produccin de sulfuro de hidrgeno.

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Ejemplos de microorganismos

Citrobacter freudill ATCC 8090

Escherichia coli ATCC 25922
Proteus vulgaris ATCC 6380
Shigella Flexneri ATCC 12022
Salmonella enteritidis ATCC 12076

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2015-1

Bibliografa

http://es.slideshare.net/zetsubouvic666/agar-hierro-kligler

http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-v/pb-v-3-kligler.htm

http://www.pomif.com/pages/practicas/bacteriologia/pruebas_bioquimicas/kliger

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DNAsa
Luis ngel Val Flix, Vidal Ruiz Mendoza, Jos Patricio Tanaka Andrade
Antecedentes
Mtodo microbiolgico. En 1956, Weckman y Catlin demostraron una correlacin entre la mayor actividad
de la DNasa de Staphylococcus aureus y la actividad de coagulasa positiva. Sugirieron que la actividad de la
DNasa podra utilizarse para identificar los estafilococos potencialmente patgenos. DiSlavo confirm sus
resultados al obtener una correlacin excelente entre la coagulasa y la actividad de la DNasa de los
estafilococos aislados de muestras clnicas. Jeffries, Holtman y Guse incorporaron ADN en un medio de agar
para estudiar la produccin de DNasa de las bacterias y hongo.
Ese medio de cultivo es utilizado para la deteccin de enzimas desoxirribonucleasas. Es especialmente
til para la diferenciacin entre especies de estafilococos, as como para la diferenciacin de Serratia spp. de
especies de Klebsiella y Enterobacter.

Fundamento
En el medio de cultivo, la triptena es la fuente de nitrgeno, aminocidos, y aporta los nutrientes necesarios
para el adecuado desarrollo bacteriano. El cido desoxirribonucleico (ADN), se encuentra en grado altamente
polimerizado, y es el sustrato de la enzima desoxirribonucleasa (DNAsa), la cual lo hidroliza. El cloruro de
sodio mantiene el balance osmtico y el agar es el agente solidificante. Este medio de cultivo, permite
diferenciar bacterias que poseen la enzima desoxirribonucleasa de aquellas que no la poseen. La presencia
de la enzima, se puede detectar mediante el agregado de cido clorhdrico 1N.
El cido desoxirribonucleico hidrolizado presenta transparencia, mientras que el cido
desoxirribonucleico polimerizado, precipita y torna opacidad al medio de cultivo. Enzima que es capaz de
hidrolizar el ADN altamente polimerizado quebrando los enlaces fosfodister, preferencialmente adyacentes
a un nucletido de pirimidina. Cataliza la segmentacin endonucleoltica del ADN dando lugar a los productos
finales 5'-fosfodi- y oligonucletido. La enzima tiene preferencia por el ADN de cadena doble.

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Preparacin
Frmula (en gramos por litro)
Triptena
Acido desoxirribonucleico
Cloruro de sodio
Agar

20.0
2.0
5.0
15.0

pH final: 7.3 0.2

1. Suspender 42 gramos del medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien.
2. Calentar agitando frecuentemente. Hervir durante un minuto o hasta disolucin completa.
3. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos. Enfriar a 45-50C y verter en placas de Petri.
4. Las placas preparadas deben almacenarse entre 8-15C. El color del medio preparado es mbar
ligeramente opalescente.
5. El medio deshidratado debe ser homogneo, libre de floculos y de color beige claro. Si hay algn cambio
fsico no utilizar el medio.

Interpretacin de Resultados
En presencia de cido clorhdrico:
DNasa-positiva: Los organismos que degradan el ADN producen una zona transparente alrededor del rea
de crecimiento.
DNasa-negativa: Ausencia de zona transparente alrededor del rea de crecimiento.

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Ejemplos de microorganismos

Cepa

Resultados de la prueba

Staphylococcus aureus
ATCC 25923

Positiva a DNasa

Staphylococcus epidermidis
ATCC 12228

Negativa a DNasa

Serratia marcescens
ATCC 13880

Klebsiella pneumoniae
ATCC 33495

Sin inocular

Positiva a DNasa

Negativa a DNasa

mbar claro a medio, posiblemente

con una leve opalescencia.

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2015-1

Bibliografa
Prescott, L. M., Harley, J. P., y Klein, D. A. Microbiologa. 4 edicin. McGraw-Hill Interamericana, 1999.
Madigan, M. T., Martinko, J. M., y Parker, J. Brock Biologa de los Microorganismos. 10 edicin. Prentice-Hall. Madrid,
2003.
Daz, R., Gamazo, C, y Lpez-Goi, I. Manual prctico de Microbiologa. 2 edicin. Masson, S.A.. Barcelona, 1999.
P. de Kruiff. Los cazadores de microbios. 2 edicin. Aguilar, Madrid, 19

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Catalasa
Cinthya Lilian Lpez Aguirre, Ivn Alejandro Valenzuela Islas
Antecedentes
La catalasa es una enzima perteneciente a la categora de las oxidorreductasas que cataliza la
descomposicin del perxido de hidrgeno (H202) en oxgeno y agua. Esta enzima utiliza como cofactor al
grupo hemo y al manganeso.
El perxido de hidrgeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos y tiene entre
otras una funcin protectora contra microorganismos patgenos, principalmente anaerobios, pero dada su
toxicidad debe transformarse rpidamente en compuestos menos peligrosos.
Esta funcin la efecta esta enzima que cataliza su descomposicin en agua y oxgeno.

Fundamento
La catalasa es una enzima que descompone al perxido de Hidrogeno (H2O2) en agua y oxgeno. El perxido
de Hidrogeno se forma como uno de los productos finales del metabolismo aerobio de los hidratos de
carbono. Si se permite que se acumule resulta letal para la clula bacteriana.
La prueba de la catalasa se usa con mucha frecuencia para diferenciar miembros de la familia
Micrococcaceae de miembros de la familia Streptococcaceae.
H2O2 + H2O2

O2 + 2 H2O

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Preparacin
Se toman bacterias de un cultivo slido y se esparce con ansa sobre una gota de perxido de
hidrgeno 30%
Reaccin +
Aerobios estrictos o facultativos
- Bacillus
- Staphylococcus
- Enterobacterias

Reaccin Anaerobios estrictos o microaerfilos

-Clostridium
-Streptococcus
-Lactobacillus

Interpretacin de Resultados
La produccin rpida y sostenida de burbujas o efervescencia constituye una reaccin positiva.
Nota: Los eritrocitos poseen catalasa, por lo cual se debe evitar tomar colonias de agar sangre para evitar
falsos positivos.

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Ejemplos de microorganismos
Catalasa (+): Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas sp.
Catalasa (-): Streptococcus spp.

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Bibliografa
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/seimcprocedimientomicrobiologia37.pdf
http://intimicro.blogspot.mx/p/virus.html
http://es.wikipedia.org/wiki/Identificaci%C3%B3n_bacteriana
http://www.pomif.com/pages/practicas/bacteriologia/pruebas_bioquimicas/catalasaoxidasa
http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/enzima-catalasa

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Peroxidasa
Lorenia Bernal Ayala, Gabriela Bustamante Palomares, Martha Torres lvarez
Antecedentes
Las pruebas bioqumicas se utilizan con frecuencia para identificar bacterias y levaduras ya que diferentes
especies producen distintas enzimas que son detectadas por las pruebas.
Un tipo de prueba bioqumica se basa en la deteccin de enzimas catabolizadores de aminocidos
relacionados con los procesos de descarboxilacin y deshidrogenacin.

Fundamento
Las "peroxidasas" son generalmente enzimas de protena de hierro que catalizan la oxidacin de los
substratos por el perxido de hidrgeno.
En otras palabras, la peroxidasa es un enzima que descompone el perxido de hidrgeno en presencia
de un compuesto oxidable al que transfiere un tomo de oxgeno.
La reaccin general en que interviene un sistema "peroxidasa" est representada por la frmula siguiente
Donante + H2O2
Donante oxidado + H2O
Normalmente, en los sistemas peroxidasa empleados en el diagnstico micobacteriano se emplean
como substratos oxidables el catecol (pirocatequina) o la bencidina indistintamente, aunque los
resultados obtenidos con cada uno de estos reactivos no siempre son superponibles.
La oxidacin de estas molculas por el agua oxigenada a travs de la peroxidasa ocasiona un cambio de color
que es normalmente empleado como detector de la actividad peroxidasa.

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Preparacin
Materiales.
Portaobjetos
H2O2 de 10 volmenes
Cultivos en fase exponencial de bacterias
Asas e hilos de siembra
Pipetas Pasteur.
Preparacin.
Colocar una gota de agua oxigenada sobre un portaobjetos o tubo de ensaye con ayuda de una pipeta
Pasteur.
Detectar la formacin de burbujas

Pasos.
Primer paso.
Poner un trozo de papel de filtro sobre una de las tapaderas de una placa de Petri.
Segundo paso.
Aadir una gota del reactivo de peroxidasa.
Tercer paso.
Depositar sobre el reactivo de masa bacteriana actuar de forma rpida y con un asa de platino nueva.

Interpretacin de Resultados
Catecol: La lectura del test se efecta a las 24 horas de contacto. Despus las colonias se tien de pardonegro se dice entonces que son peroxidasas-positivas y aquellas que permanecen incoloras son peroxidasasnegativas.
Bencidina: La lectura se hace entre 2 y 15 minutos. Una prueba positiva se manifiesta por la coloracin azul
fuerte de las colonias, de ser negativa se torna color gris luego de los 15 min.
Mtodo mixto catalasa-peroxidasa: Catalasa positiva. Se forma una corriente continua de burbujas
pequeas que penetran con rapidez la barrera aceite y forman una cabeza o esquema sobre la superficie de
color completamente blanco.
Actividad de la peroxidasa: No forma una corriente continua de burbujas.

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Ejemplos de microorganismos
Mtodo utilizando catecol y bencidina como sustrato oxidable.
Ciertas especies micobacterias, concretamente Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium bovis, existe
un enzima citocrmico intracelular, la "peroxidasa", del cual carecen las otras especies de micobacterias,
esto tiene un cierto valor para orientar inicialmente el diagnstico diferencial de las micobacteria.

Mycobacterium tuberculosis

Mycobacterium bovis

Mtodo mixto catalasa-peroxidasa.

Para catalasa (+) Legionella dumoffii, Legionella jordanis, Legionella longbeachae, Legionella oakkridgensis,
Legionella wadsmorthii, Legionella bozemanii y Legionella micdadel.
Para peroxidasa (+) Legionella pneumophila, Legionella dumoffii y Legionella gormanil.

Legionella dumoffii.

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Bibliografa
I.

I.

Mac Faddin, Jean F. (1990) Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia clnica /
Jean F. Mac Faddin, Irma Lorenzo trad. Editorial: Mxico : Mdica Panamericana,
Prats (2013). Microbiologa Editorial : Panamericana Edicin : 1raIdioma : Espaol

Recursos de internet.
I.
https://ezoraya.files.wordpress.com/2010/06/pruebas-bioquimicas.pdf
http://mazinger.sisib.uchile.cl/repositorio/lb/ciencias_quimicas_y_farmaceuticas/schmidth02/parte08/02.html

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Motilidad
Myrna Ivonne Ayala Lpez, Olga Mara Romo Jimnez
Antecedentes
La motilidad se puede observar por un crecimiento turbio lejos de la picadura realizada en la inoculacin de
los medios semislidos, este mtodo es de confianza variable ya que la picadura se pudo haber hecho chueca
o irregular lo que nos dara falso positivo.
Para evitar este factor se realiza la tcnica de gota suspendida bacteriana.
Medio de cultivo semislido utilizado para detectar movilidad bacteriana y produccin de indol.
Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento
Es un determinante importante para la identificacin final de una especie, la base de esta prueba es
determinar si la bacteria es mvil o inmvil.
Existen dos opciones para determinar la motilidad: gota suspendida y en medio semislido.
En medio semislido: En el medio de cultivo, la triptena constituye la fuente de nitrgeno,
aminocidos y carbono necesarios para favorecer el crecimiento bacteriano. El agar es el agente
solidificante, el cual se encuentra en una concentracin que le da la caractersticas de medio
semislido, til para evidenciar la motilidad bacteriana.
Gota suspendida: Esta consiste en una gota de una suspensin de bateras, colocada en un
cubreobjetos, el cual se coloca invertido sobre un soporte en un porta objetos, o en un portaobjetos
excavado, de manera que la gota quede pendiente. Se procede observar al microscopio la periferia de
la gota, o sea donde la profundidad de la preparacin es menor y por lo tanto ser ms fcil de enfocar.

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Preparacin

Medios semislido
Siembra
A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por puncin profunda con aguja de
inoculacin recta (no usar ansa con anillo). Se debe inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2
tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la siembra se realice en
lnea recta.
Incubacin
Durante 24 horas, a 35-37 C, en aerobiosis. Luego de la incubacin, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovacs
o de Erlich.
Gota suspendida
Agregar sobre un portaobjetos una gota de solucin fisiolgica salina estril.
Ponerle muestra bacteriana previamente tomada de un cultivo, homogeneizar de tal forma que la gota
no se extienda mucho.
Ponerle encima un cubreobjetos al que previamente se le a puesto una base de 4 bolitas pequeas de
plastilina con el objetivo de evitar que aplaste totalmente la gota con bacteria.
Finalmente observar al microscopio con un objetivo de 40X.
Se alcanzan a ver bacterias muy pequeas y casi translcidas moverse a velocidad variable.
Observar al menos de 5-10 bacterias recorrer todo el campo de visin para declarase una motilidad
positiva.
La mayora de las bacterias motiles son de morfologa bacilar o sea Bacilos, Pero no todos los bacilos
son motiles.

Interpretacin de Resultados
Medio solido
Cepas mviles: producen turbidez del medio, que se extiende ms all de la lnea de siembra.
Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra.
Gota suspendida
Positivo: en la movilidad verdadera los microorganismos cambian de posicin unos respectos de otros y a
menudo atraviesan todo el campo microscpico.
Negativo: en el movimiento browniano los microorganismos pueden parecer muy activos pero permanecen
en la misma posicin con respecto a los otros microorganismos.

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Ejemplos de microorganismos

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Bibliografa
Diagnostico Microbiolgico Escrito por Betty A. Forbes
https://microbitos.wordpress.com/2011/09/27/pruebas-bioquimicas-primarias
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/agarmotilidad.htm

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