Exercice 2

1/ En prsence de phlorizine ou de sels de mercure, une cintique simple, de type

y = ax est observe.
Elle traduit une entre de glucose selon la loi de Fick, savoir une diffusion simple
au travers de la bicouche phospholipidique de la membrane plasmique.

En absence de phlorizine ou de sels de mercure, et pour des concentrations

leves de glucose, on retrouve une droite de mme pente.
Par contre, la partie initiale de la courbe est diffrente.

L'entre du glucose fait donc intervenir deux mcanismes :

- la diffusion simple voque prcdemment

- et un autre processus mettant en jeu des protines
puisqu'inhibe par la phlorizine (analogue de substrat ) ou
les sels de mercure (agents dnaturants).

2/ La courbe C correspond la cintique d'entre du glucose grce aux seules

permases.
On peut dduire la courbe C en soustrayant la courbe gnrale (A) la composante
diffusion simple traduite par la courbe B. Courbe C = Courbe A Courbe B

La cintique dentre du glucose est de type michaelienne

ce qui suggre une liaison temporaire entre l'lment
transport, le glucose, et le transporteur.

Lasymptote horizontale traduit

transporteurs (permase glucose).

la

saturation

des

La fixation prsente une grande spcificit car seul le Dglucose est transport ainsi.
Son isomre, le L-glucose, ne prsente pas cette cintique

3/ KmA = 1 mM (permase GLUT1) [en ralit autour de 1,5 mM]

KmD = 5 mM (permase GLUT2) [en ralit autour de 20 mM]
GLUT2 a une affinit bien plus faible pour le glucose que GLUT1

Lorsque le glucose sanguin passe de son niveau de base autour de 5 mM 10 mM

environ aprs un repas, la vitesse de linflux de glucose double quasiment dans les
hpatocytes (cellules exprimant GLUT2) alors quelle augmente seulement
lgrement dans les rythrocytes (cellules exprimant GLUT1).
Dans le foie le glucose en excs absorb dans les cellules est stock sous forme
de glycogne.

Exercices 3: Etude exprimentale de la scrtion

dans les acini pancratiques
Transport intracellulaire des protines scrtes
par les cellules acineuses du pancras: mise en
vidence par autoradiographie

-Phase 1:
. Portions de pancras incubes dans une solution contenant la leucine-3H (pulse) (acide
amin radioactif) : dterminer les organites impliqus dans la biosynthse et lexocytose
des protines
. puis places dans un milieu non radioactif pendant un temps de chasse 3, 7, 30 et 2h
(temps de chasse : aprs lincubation, temps durant lequel les cellules sont dans un milieu
physio, autre que la solution contenant la leucine tritie)

-Phase 2
. Echantillions fixs au ttroxyde dosmium et inclus dans une rsine poxy

. Ralisation de coupes fines laide dun ultra-microtome

. Coupes recouvertes dune mulsion photographique
. Rvlation des prparations aprs 3 semaines dexposition en chambre noire
. Observation au MET

Objectif: Montrer les diffrences de localisation des sites

radioactifs en fonction du temps de chasse: 3, 7, 30 et 2h

Autoradiographie

Lmulsion est constitue de cristaux de bromure dargent

Lisotope radioactive se dsintgre en mettant des
rayonnements qui heurtent le cristal
dpt dargent
Les grains dargents (Ag) visibles sur les coupes minces
indiquent les rgions o sont localises les chanes
polypeptidiques contenant de la leucine radioactif, leucine qui a
t incorpore pendant les 3 de pulse

a) Le milieu froid est le milieu non radioactif qui, de mme composition que le milieu
radioactif, sert de rinage pour ce dernier et permet aux cellules en culture de
survivre et poursuivre la mtabolisation du prcurseur.
B) Outre lincubation en milieu radioactif et le temps de latence en milieu froid, les
cellules seront successivement :
-fixes dans un fixateur appropri conservant les ultrastructures
-incluses dans une rsine
-coupes trs finement (60 100 nm dpaisseur) avec un ultramicrotome.
-les coupes seront alors recouvertes dune mulsion photographique
-laisses en chambre noire pour que le rayonnement, trs lent, soit suffisant
-dveloppes avec un rvlateur comme un film
-et enfin observes au MET (Microscopie Eletronique Transmission)