Carotenoides

Los carotenoides son compuestos polinicos formados por 8 10 unidades de isopreno

(C5) con lo que se obtienen compuestos de 40 o 50 carbonos respectivamente. Una serie de
dobles enlaces conjugados constituye el grupo cromforo, cuyo mximo de absorcin vara
entre 400 y 500 nm y proporciona los caractersticos colores entre el amarillo y el rojo.
Los carotenoides con la cadena hidrocarbonada no sustituida se denominan "carotenos". El
trmino xantofilas cubre un amplio grupo de derivados oxigenados que incluye alcoholes
(luteina y zeaxantina), epxidos (violaxantina), teres ( esferoideno ), cetonas ( equinenona,
cantaxantina, astaxantina, esferoidenona) y cidos (torularodina). La forma natural en la
que se presentan la mayor parte de los carotenoides es la forma trans aunque los ismeros
cis tambin aparecen en una pequea proporcin, formndose fcilmente como artefactos
de los ismeros trans.
Distribucin de los carotenoides en la naturaleza.
Los carotenoides se encuentran ampliamente ditribuidos en bacterias, hongos, algas,
animales tales como los pjaros, peces e invertebrados, as como en plantas superiores. En
estas ltimas, los carotenoides determinan la coloracin de rganos vegetales subterrneos
(Beta caroteno en la raz de zanahoria), frutos (licopeno en el tomate), flores (astaxantna en
Adonis aestivalis, criptoxantina en la calndula), semillas (zeaxantina en e1 maz), etc. Pero
adems se encuentran en todas las hojas verdes, aunque estn ocultos por la clorofila; en
otoo, al desaparecer la clorofila, contribuyen a dar al follaje una tonalidad caracterstica
que va desde el amarillo al rojo.
En animales, y aunque los carotenoides estn presentes en algunos pjaros y peces, se
suelen asociar con los invertebrados marinos (moluscos y crustceos). En los pjaros, los
carotenoides son los responsables .del color amarillo y rojo de las plumas (astaxantina en
flamencos e ibis escarlata), as como del color de la piel y carne en
gallinas, y especialmente de la yema de huevo. En los peces adquieren gran importancia en
la carne de trucha y salmn ( astaxantina y cantaxantina). En invertebrados marinos
(camarn, cangrejo, langosta, etc.) la astaxantina y otros carotenoides relacionados pueden
estar presentes en concentraciones altas, a menudo como complejos carotenoprotenicos de
color verde, prpura o azul, mientras el animal est vivo; al ser cocinados estos complejos
se desnaturalizan dando lugar al color rojo del carotenoide.
En el mundo microbiano, los carotenoides estn presente en algas, hongos y bacterias.
Entre los hongos destacan la cantaxantina en Cantharellus cinnabarinus y el licopeno en
Blakeslea trispora. En las algas verdes cabe mencionar la lutena en Spongiococcum
excentricum y Chlorella pyrenoidosa y la astaxantina en Haematococcus pluvialis. Por otra
parte, en bacterias no fotosintticas destacan el licopeno en Streptomyces chrestomyceticus,
subesp. rubescens, la zeaxantina en Flavobacterium sp., la cantaxantina en Brevibacterum
KY 4313 y la astaxantina en Brevbacterum.

Entre las bacterias fotosintticas se ha descrito la presencia de astaxantina en Rhodococcus

maris, mientras que entre las cianobacterias se ha encontrado cantaxantina en Anabaena
variabilis. Finalmente, destaca la presencia de astaxantina en la levadura Phaffia
rhodozyma, como primer ejemplo de estudio de un pigmento que ha conducido a la
explotacin industrial.
Propiedades de los carotenoides.
Los principales problemas asociados al trabajo con carotenoides derivan de la inestabilidad
inherente de estos pigmentos en presencia de agentes fsicos (luz, oxgeno, calor) y
qumicos (cidos, y en algunos casos lcalis). La exposicin a la luz, y especialmente a la
luz solar, y luz ultravioleta induce una fotoisomerizacin cis-trans llevando a la destruccin
de los carotenoides. La temperatura tiene tambin importancia en la manipulacin de estos
pigmentos, ya que son termolbiles, por ello es necesaria la eleccin de aquellos solventes
que presenten menor punto de ebullicin; as, la fracciones ligeras del petrleo, con un
punto de ebullicin de 30-60 oc son preferibles a las fracciones pesadas. Los carotenoides
pueden ser oxidados por oxgeno o por perxidos.
Los carotenoides cristalizan en multitud de y el color puede variar desde el naranja-rojo al
violeta o casi negro dependiendo de la forma. Su punto de fusin es alto, entre 130 y 220
oc. Incluso los cristales son sensibles a la oxidacin cuando estn expuestos al aire y deben
ser mantenidos en atmsfera inerte o a vaco . En general los carotenoides se caracterizan
por su insolubilidad en agua y su alta solubilidad en disolventes orgnicos e incluso en
aceites vegetales.
Propiedades biolgicas.
La presencia del grupo cromforo en la estructura de los carotenoides tiene una funcin
biolgica en microorganismos como agente fotoprotector y antioxidante. En algas y
bacterias fotosintticas, los carotenoides participan en la captura de compuestos luminosos
en el proceso fotosinttico y ejercen adems un efecto fotoprotector. Como antioxidantes,
los carotenoides protegen los tejidos vulnerables contra los efectos de los singletes de
oxgeno y los radicales libres. Se han descrito efectos fotoprotectores similares en las
bacterias no fotosintticas. Los carotenoides actan en las plantas superiores como
transportadores de oxgeno en la clula vegetal y, adems, pueden absorber y transmitir a la
clorofila la energa procedente de determinadas radiaciones luminosas. En animales,
adems de una funcin antioxidante, tambin parecen ejercer influencia sobre la
reproduccin.
Generalidades de la Axtansantina
La astaxantina (3,3-dihidroxi-,-caroteno-4,4-diona) es un oxicarotenoide y pertenece al
grupo de las xantofilas. Al igual que otros carotenoides, este pigmento est formado por
ocho unidades de isopreno que por condensacin dan estructuras carbonadas de cuarenta
tomos, llamados tetraterpenos. La frmula molecular de este carotenoide es C40H52O4 y
posee un peso molecular aproximado de 596.86. Este pigmento fu identificado
qumicamente por Khn y Sorenson (1983) y presenta forma de cristales de color violeta

oscuro, su punto de fusin es de aproximadamente 224oC. Es insoluble en soluciones

acuosas, pero soluble en diclorometano (30 g/L), en cloroformo (10 g/L), acetona (0.2 g/L),
dimetilsulfxido (0.5 g/L) y otros solventes polares. Es sensible a la luz, a la temperatura, a
los cidos, al oxgeno y a la presencia de lcalis. En condiciones de saponificacin sufre
una conversin a astaceno. La astaxantina es un pigmento carotenoide presente en animales
marinos tales como los salmones y los crustceos, ya que estos animales no pueden
sintetizar astaxantina por s solos la toman en sus alimentos naturales la cual es adicionada
a la alimentacin de los salmones, trucha y camarones cultivados para intensificar su color.
La astaxantina posee una actividad antioxidante ms alta que el -caroteno. La funcin
principal de este colorante es realizar una fotoproteccin pasiva (como filtro), reduciendo la
cantidad de luz disponible al complejo colector de luz del fotosistema II, minimizando el
riesgo de fotoinhibicin en cloroplastos.
Levadura Paffia Rhodozyma productora de Astaxantina
La levadura P. rhodozyma, que produce astaxantina, fue aislada al inicio de la dcada de los
70 a partir de los exudados de rboles de las regiones montaosas de Japn ( 9 cepas) y
Alaska (una cepa) y se design originalmente como Rhodozyma montanae. Ms tarde se le
dio el gnero de Phaffia en honor de Herman Jean Phaff quin la describi primero. Phaff
en 1988 reconoci varias caractersticas inusuales en la levadura y estableci que las
propiedades ms remarcadas de este microorganismo es que las colonias son rojas o
naranjas debido a la presencia de los pigmentos carotenoides.
El color se debe a que sintetiza la astaxantina como su carotenoide principal. Fermenta
glucosa y otros azcares y puede ser aerobia o anaerobia. P. rhodozyma es el estado asexual
del microorganismo Xanthophyllomyces Dendrorhous.
P. rhodozyma est clasificada como un basidiomiceto (esporas formadas en el extremo de
una hifa) por poseer ciertas propiedades metablicas tales como la capacidad de utilizar
urea, la cual es menos comn en las levaduras ascomicetas y al modo de formacin de la
estructura de su pared celular as como de sus brotes. Phaffia est relacionada
filogenticamente con otras levaduras imperfectas formadoras de carotenoides, incluyendo
a Rhodotorula, Cryptococcus y otras levaduras heterobasidiomicetas. Se puede distinguir a
Phaffia del gnero Rhodotorula por su produccin de compuestos amiloides asociados a las
paredes superficiales, la presencia de un sistema de coenzima Q-10 , por su capacidad para
asimilar compuestos de carbono, incluyendo a la D-glucosa, la maltosa, la sacarosa, la
celobiosa, la trealosa, la rafinosa, el almidn soluble (latente o negativo), el etanol (latente
o negativo), la alfa-metilglucosida (latente o negativo), el D-manitol, la salicina (dbil), el
2-cetogluconato, el DL-lactato (latente), el succinato y el glicerol (dbil). La levadura no
crece en lactosa, galactosa, glucosamida, D-ribosa o D-arabinosa y no utiliza nitrato. Crece
de 0 a 27 C.
Las cepas silvestres de P. rhodozyma aisladas a la fecha, contienen hasta 500 g/g lev
( 0.05%) o menos en peso seco de carotenoides totales, de los cuales del 40 al 95% es
astaxantina. Por lo que para hacer econmicamente factible la produccin comercial fue
necesario obtener mutantes con un contenido mayor de astaxantina. Por ello, se ha dedicado

un considerable esfuerzo de investigacin a la obtencin de cepas hiperproductoras. El

contenido de astaxantina vara considerablemente dependiendo de la cepa y del mtodo de
cultivo.
En la produccin de astaxantina por fermentacin con P. rhodozyma los parmetros ms
importantes son la temperatura, el pH, el nivel de oxgeno y la composicin del medio de
cultivo. Atraves de diferentes estudios se ha observado que a un a pH de 4.5, la velocidad
de crecimiento de P. rhodozyma aumenta, al igual que la produccin de biomasa, siendo la
astaxantina el principal pigmento sintetizado. La temperatura ptima para la produccin de
astaxantina por P. rhodozyma, independientemente del medio de cultivo, es de 20-22C.
Produccion de Astaxantina por Levadura Paffia Rhodozyma
En los experimentos para la produccin de carotenoides con P. rhodozyma se utilizaron dos
cepas, una silvestre denominada (BMH-103) y una mutante denominada R1, los
experimentos se llevaron a cabo en matraces Erlenmeyer con mamparas de 250 mL de
capacidad total con 50 mL de medio de cultivo y 10% de inculo v/v en fase exponencial.
Los cultivos se incubaron en agitacin a 150 r.p.m, temperatura constante (22oC) y pH=4.5
durante 120 h. Se estudi el efecto de tres medios de cultivo YM (10 gL-1 de glucosa ),
YPG(20 gL-1 de glucosa ) y agua de coco(16 gL-1 de carbohidratos totales), en la
produccin de astaxantina. Los resultados obtenidos mostraron que P. rhodozyma alcanz
un mayor crecimiento y una mayor produccin de astaxantina en el medio de agua de coco
ya que se obtuvo 1.9 veces ms concentracin de astaxantina, 850 g /g lev con respecto al
medio YM (450 g/glev) y 2.7 veces ms que en el YPG (310 g/glev). Los resultados
reflejaron indudablemente que el agua de coco residual es un excelente medio de cultivo
para la produccin de astaxantina a partir de P. rhodozyma ya que se alcanz mayor sntesis
de astaxantina que en otros estudios.
Durante la produccin de astaxantina a partir de P. rhodozyma en los distintos medios de
cultivo se observ que en el agua de coco se alcanz una mayor produccin de pigmentos,
obteniendo una mayor sntesis de astaxantina (850 g/glev) con un rendimiento (Yp/x) de
0.346. Lo que significa aproximadamente el doble de concentracin que el obtenido en el
medio YM donde se obtuvo nicamente 450 g/g lev. con un rendimiento de 0.21 y en
YPG se obtuvo 310 g/g lev con un rendimiento de 0.146. Los resultados indican que la
sntesis de astaxantina est parcialmente asociada al crecimiento y que se contina
produciendo despus de que el crecimiento ha cesado. Esto es debido probablemente a que
P. rhodozyma excreta algunos intermediarios extracelulares de carbono durante el
crecimiento, los cuales son aprovechados ms tarde, estimulando la carotenognesis
La concentracin de 20 gL-1 de azcares presente en el medio YPG, present un efecto
negativo tanto en la produccin de astaxantina como en el crecimiento, mientras que con
una cantidad menor (10 gL-1) de glucosa como en el medio YM aument el crecimiento y
la sntesis de astaxantina. Por otro lado, en el agua de coco se obtuvo mayor crecimiento y
mayor sntesis de astaxantina, a pesar de tener una mayor cantidad de azcares que el
medio YM. De acuerdo a estos resultados se podra decir que la fuente de carbono
(azcares) presente en el agua de coco (16 gL-1) no es de fcil asimilacin sometiendo a las

clulas a estrs induciendo una mayor produccin de astaxantina en P. rhodozyma por

tratarse de un metabolito secundario.
De acuerdo a los resultados, el agua de coco result ser un excelente medio de cultivo para
la produccin de pigmentos carotenoides y particularmente de astaxantina con P.
rhodozyma, ya que permiti obtener concentraciones superiores a las reportadas por otros
autores que han utilizado fuentes de carbono alternas para disminuir los costos de
produccin, por ejemplo; melaza de caa de azcar, jugo de caa de azcar , subproductos
de maz macerado, jugo de alfalfa, jugo de uva y turba hidrolizada.
Para determinar la produccion de astaxantina con la cepa mutante R1 de P. rhodozyma se
llevaron a cabo los mismos experimentos bajo las mismas condiciones de incubacin que
con la cepa silvestre P. rhodozyma (BMH-103). Se puedo observar que el crecimiento y la
produccin de astaxantina tanto con la cepa silvestre (BMH-103) como con la mutante R1
de P. rhodozyma siguieron un mismo comportamiento durante las primeras 72 h. El
incremento en el peso seco se pudo deber primero al nmero de clulas presentes y a la
acumulacin del pigmento presente en cada clula. Despus de 72 h la mutante R1 de P.
rhodozyma aument su produccin de astaxantina hasta 1.8 mg/g lev a las 120 h, lo que es
significativamente mayor que la alcanzada en el medio YM por la mutante R1, ya que
representa aproximadamente un 200% de aumento en la sntesis de astaxantina en ese
mismo tiempo
La concentracin de astaxantina en P. rhodozyma se incrementa en los estados tempranos
del crecimiento hasta llegar a la fase exponencial, despus de esta etapa an se sigue
incrementando despus de la fase estacionaria por tratarse de un metabolito secundario. La
produccin de astaxantina fue significativamente superior, (200% ms) cuando se trabaj
con la cepa mutante R1 en los diferentes medios, y an mayor cuando se trabaj con la
combinacin agua de coco y la cepa mutante R1 ya que se alcanz casi un 400% ms
astaxantina con respecto al medio YM y la cepa silvestre BMH-103. Los resultados
obtenidos confirmaron que el agua de coco es un buen medio para la produccin de
astaxantina, adems de que abarata los costos de produccin.
En base a los resultados obtenidos se puede inferir que la sntesis de astaxantina en las
cepas silvestre (BMH-103) y mutante R1 estuvo parcialmente asociada al crecimiento, lo
que coincide con otros estudios realizados donde se reporta que la astaxantina contina
sintetizndose an despus de que el crecimiento ha cesado y la glucosa prcticamente ha
sido consumida.
La produccin de astaxantina a partir de P. rhodozyma depende del tipo de cepa (silvestre o
mutante) y de la composicin del medio de cultivo as como de las condiciones de cultivo
establecidas y de las concentraciones utilizadas de fuente de carbono y nitrgeno.