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Captulo 4:

Cultivo por Lotes, Continuo y


Alimentado
M.Sc. Cristhian Carrasco
2012
1

3.1 Introduccin.
Dentro de los aspectos bsicos de biorreactores
es necesario tener conocimiento de lo siguiente:




La Cintica de Reaccin.
Balance de Materia.
Balance de Energa.

Propiedades de los Biocatalizadores = f(t, # fases,


# componentes)

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3.2 Aspectos Bsicos de los


Biorreactores

M.Sc. Cristhian Carrasco V. 2012

3.2.1 Balance Global de Materia.


Balance de materia
(biorreactor):

Acumulacin

aplicado

Generacin
por
Reaccin
Bioqumica

para

Flujo de
Entrada de
Materia

un

sistema

Flujo de
Salida de
Materia

Se aplica a un biorreactor:
d(Ci V)/dt = V ri + (Qe Cie - Qs Cis)
Donde:
V = Volumen del Biorreactor [L]
ri = Velocidad global de produccin de un componente i [gL-1h-1]
o Tasa Volumtrica
Qie y Qis = Caudal de circulacin [L h-1]
Cie y Cis = Concentracin de un componente i [g L-1]
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3.2.2 Balance Global de Energa.


Balance de energa aplicado para un sistema (biorreactor):

Acumulacin
de Energa

Generacin
de Energa
por
Reaccin
Bioqumica

Diferencia
de Entalpa
de Entrada
y Salida

Caudal del
Calor
(suministra
do o
retirado)

Se aplica a un biorreactor:
d(VCpT)/dt = (-H) V ri + QCp(Te - Ts) + q
Donde:
V = Volumen del Biorreactor [L]
ri = Velocidad global de produccin de un componente i [gL-1h-1]
Q = Caudal de circulacin [L h-1]
Te y Ts = Temperatura de un componente i [C]
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3.3 Reactor Discontinuo de


Tanque Agitado o Cultivo por
Lotes (Reactor Batch)

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3.3 Definicin (Cultivo por Lotes).


Los mas ampliamente aplicados a escala
industrial son los biorreactores de cultivo por
lotes siendo tanques agitados cilndricos donde
se pueden alcanzar y mantener condiciones
aspticas y donde se emplean medios muy ricos
en nutrientes.
Opera
a
bajas
densidades
celulares
(inicialmente) donde el medio de fermentacin
como el inculo se introducen en el sistema al
comienzo de la operacin.

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3.3 Biorreactor.
Esquema

v
v

Operacin:
Reactor
Discontinuo de
Tanque Agitado
(DSTR) o Cultivo
por Lotes.
Reactor
Discontinuo
Alimentado (Fedbatch) o Cultivo
Alimentado
Reactor Continuo
de Tanque Agitado
(CSTR) o Cultivo
Continuo

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3.3.1 Anlisis cuantitativo del comportamiento


del DSTR.
Balance de materia aplicado a la biomasa:

Acumulacin

Generacin
por Reaccin
Bioqumica

Se obtiene:
rx + Q (Xe X)
0
V rx = Vd(VX)/dt
t ==dX/r
x
Donde:V = Volumen del Biorreactor [L]
rx = Velocidad global de produccin de biomasa [gL-1h-1]
X = Concentracin de biomasa [g L-1]
t = tiempo necesario para un incremento de biomasa [h]
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3.3.2 Anlisis cuantitativo del comportamiento


del DSTR.
Balance de materia aplicado al sustrato y producto:

Acumulacin

Generacin
por Reaccin
Bioqumica

Se obtiene:
V rx + Q (Xe X) = 0
t = - dS/(rsx +rsp)
t = - dP/rsp
Donde:V = Volumen del Biorreactor [L]
ri = Velocidad global del componente i [gL-1h-1]
S y P = Concentracin del sustrato y producto [g L-1]
t = tiempo necesario para un incremento/consumo [h]
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3.3.3 Anlisis cuantitativo del comportamiento del


DSTR.
Considerando la definicin de la ecuacin de Monod, la
tasa volumtrica rx = X y el rendimiento de biomasa Ysx
= - dX/dS se obtiene

[Xe+Ysx(Se+Ks)]ln[(Xe+Ysx(Se-S))/Xe]- KsYsxln(S/Se) =
= m(Xe+(YsxSe))t

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3.3.4 Limitaciones del DSRT


Dependiendo de la condiciones de operacin y del M.O.
generalmente se observa:

Fenmeno de Inhibicin (por substrato o por


producto)
Limitaciones cuando se opera a altas
concentraciones de sustrato.
Fermentacin Incompleta (max. conc. de producto
y mnima de sustrato).
Mezclado Homogneo (caso ideal).

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3.4
Reactor
Alimentado
Alimentado

Discontinuo
o
Cultivo

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3.4 Definicin (Cultivo por Lotes Alimentado).

El
substrato/nutrientes/biocatalizadores
se
alimenta en cargas sucesivas y no se retira
producto alguno variando as el volumen del
medio de reaccin durante el proceso.

Su aplicacin permite solucionar algunos


problemas del cultivo batch teniendo en cuenta
la velocidad de adicin y/o la concentracin de
la alimentacin.

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3.4.1 Anlisis cuantitativo del comportamiento


del Fed-Batch.
Balance de materia aplicado a este proceso resulta:

Acumulacin

Generacin
por Reaccin
Bioqumica

Flujo de
Entrada de
Materia

Se obtiene:
rx + Q
(Xe X)
=0
Qe/V(C
QeCie +Vri V= d(VC
ie-Ci)+ri = dCi/dt
i)/dt
Donde:V = Volumen del Biorreactor [L]
ri = Velocidad global de produccin [gL-1h-1]
Ci = Concentracin de un componente [g L-1]
t = tiempo necesario para un incremento de biomasa [h]
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3.4.2 Anlisis cuantitativo del comportamiento


del Fed-Batch.
Balance de materia aplicado al sustrato y biomasa:

Acumulacin

Generacin
por Reaccin
Bioqumica

Flujo de
Entrada de
Materia

Se obtiene:
V = rdX/dt
x + Q (Xe X) = 0
X - (Qe/V)X
(Qe/V)(Se-S)-(X)/Ysx =dS/dt
Donde:V = Volumen del Biorreactor [L]
S y X = Concentracin del sustrato y biomasa [g L-1]
t = tiempo necesario para un incremento/consumo [h]
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3.4.3 Limitaciones del Fed-Batch


Dependiendo de la condiciones de operacin y del M.O.
generalmente se observa:

Su manipulacin es riesgosa (contaminacin)


Control riguroso de diferentes variables
(concentracin de producto, o substrato, pH, el
oxgeno disuelto, etc.).

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3.5 Reactor continuo de


tanque agitado (CSTR)
Teora del Quimiostato

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3.5 Definicin (Cultivo Continuo).


En la mayora de los casos, los biorreactores de
cultivo continuo son tanques agitados cilndricos
con
un
sistema
de
homogeneizacin,
generalmente mecnico, garantizando la misma
composicin en cualquier punto (evitando los
puntos
muertos
o
zonas
muertas)
denominndose como quimiostatos.
Siendo necesario detallar la clasificacin de los
sistemas de cultivo continuo:

20
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20

3.5 Clasificacin.
3.5.1 Sistemas abiertos continuos (homogneos)

Una sola etapa

Simple (Quimiostato,
Turbidiostato)

Simple con parcial


alimentacin del cultivo

Cultivo Dializado (Ddializador)

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21

Multi-etapas
I.

II.

1. Simple-conectados con una


alimentacin en la primera etapa

III.

II. Simple- conectados con una retroalimentacin parcial del cultivo

IV.

III. Complejo-conectados con una


alimentacin en mas etapas

IV. Complejo-conectado con una


alimentacin en mas etapas (mismo
intercambio de cultivo)
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22

3.5 Clasificacin.

3.5.2 Sistemas abiertos continuos (heterogneos)


a.)

b.)

a.) Simple Tubular (fluidos o sustratos slidos); b.) Tubular con parcial
alimentacin del cultivo

c.)

d.)

c.) Tubular continuamente inoculado desde el quimiostato; d.)


Counter-current system (inculo del quimiostato o con alimentacin parcial del cultivo)
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23

3.5 Clasificacin.

3.5.3 Sistemas cerrados continuos

a.)

b.)

a.) Vaso con paredes permeables; b.) Microorganismos crecen en la superficie


(arriba o dentro); c.) Retro-alimentacin con un separador; d.) Microorganismos
crecen en una interface (gas-liq o sol-liq).
c.)

d.)

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24

3.6 Teora del Quimiostato.


Es un biorreactor de tanque agitado en el
que se asume bsicamente:



El volumen de medio es constante


El caudal de salida es igual al de
entrada.
La concentracin de salida es igual a
la concentracin en el interior del
reactor.
Reduccin de los costos de capital y
operacin.
Mejor control del Proceso.
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25

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3.6.1 Anlisis cuantitativo del comportamiento


del Quimiostato.
Balance de materia aplicado a la biomasa:

Acumulacin

Generacin
por Reaccin
Bioqumica

Flujo de
Entrada/Salida
de Materia

Se obtiene:
V rx + Q (Xe X) = 0

E.E.

Donde:V = Volumen del Biorreactor [L]


rx = Velocidad global de produccin de biomasa [gL-1h-1]
Q = Caudal de circulacin [L h-1]
Xe y X = Concentracin de biomasa [g L-1]
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3.6.2 Anlisis cuantitativo del comportamiento del


Quimiostato.
Considerando la definicin de la velocidad de crecimiento,
la velocidad especfica de crecimiento () y la tasa de
dilucin como D = Q/V y tiempo medio de residencia =
1/D, se obtiene:

D Xe = (D -) X
dado que Xe = 0 (esterilizacin)

=D
Anlogamente para un producto (P) y un sustrato (S) se
tiene.
rp = D P = Yxp X

-rs = - [rx/Ysx+rp/Ysp] = D (S Se)


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3.6.3 Modelo de Monod para el Quimiostato.


Obedeciendo la cintica de Monod en E.E.:

Biomasa (X):
D Xe + {[(max S)/(KS + S)]- D} X = 0

Sustrato (S):
D (Se S)+ {[(max S X)/Yxs (KS + S)]} (X rp/Ysp)= 0

Producto (P):
D (Pe P)+ {Yxp {[(max S)/(KS + S)]} X = 0
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3.6.3 Modelo de Monod para el Quimiostato


En este modelo se tiene:

Variables = X, S y P
Variables manipulables = D, , Se, Pe, Xe (donde
Pe, Xe = 0)
Parmetros cinticos y estequiomtricos = m,
Ks, Ysx, Ysp, etc.

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3.6.3 Modelo de Monod para el Quimiostato.


En condiciones estriles se tiene:

Sustrato (S):

Ks D
S =
max D

Biomasa (X):

Ks D

X = Ysx So

D
max

Producto (P):
Yxp X
P = Pe +

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S =

Ks D

max D

Ks D

X = Ysx So

D
max

Dependencia de X, S y DX frente a D para un RCTA (Quimiostato)


empleando la ecuacin de Monod con m = 1 h-1, Ks = 0.2 g L-1, Ysx = 0.5 y
Se = 10 g L-1
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Constantes de saturacin (KS) para diferentes


sustratos y M.O.

Organismo
Gnero

Sustrato

Escherichia
Escherichia
Escherichia
Candida
Candida
Candida
Saccharomyces
Aspergillus
Klebsiella
Klebsiella

Glucosa
Glucosa
Manitol
Glicerol
Oxgeno
Oxgeno
Glucosa
Glucosa
Iones magnesio
Iones potasio

KS
mg/L
6.8 x 10- 2
4
2
4.5
4.5 x 10- 1
4.2 x 10- 2
25
5
5.6 x 10- 1
3.9 x 10- 1

10- 5 M
3.8 x 10- 2
2.2
1.1
4.9
1.4
1.3 x 10- 1
14
2.8
2.3
1.0

33
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33

34
34

Constantes de saturacin (KS) para Bacterias

35
35

36
36

Tasas especfica de crecimiento (m)

37
37

3.6.3 Modelo de Monod para el Quimiostato.


Obedeciendo la cintica de Monod en rgimen no
estacionario:

Biomasa (X):
D Xe + {[(max S)/(KS + S)]- D} X = dX/dt

Sustrato (S):
D (Se S)+ {[(max S X)/Yxs (KS + S)]} (X rp/Ysp)= dS/dt

Producto (P):
D (Pe P)+ {Yxp {[(max S)/(KS + S)]} X = dP/dt
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3.6.3 Modelo de Monod para el Quimiostato.


Otras consideraciones importantes son:
Tasa de dilucin mxima o de dilucin crtica (wash-out)
La dilucin mxima puede obtenerse cuando S = So e
insertando este valor en la Ecuacin de Monod:

MX

MX

Ks

Ks + So

teniendo tambin la mxima productividad del producto, en el


caso de metabolitos primarios, que se obtiene en esta zona.

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3.6.3 Modelo de Monod para el Quimiostato.


Otras consideraciones importantes son:
Productividad
En un quimiostato la produccin de biomasa por unidad de
volumen por unidad de tiempo de cultivo se denomina
productividad, P:
P=DX
Lo importante es encontrar el valor mximo de este
producto, por lo tanto:

dP
=0
dD

x MX = Y sx So + Ks

Ks (Ks + So

))

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3.6.4 Limitaciones de la teora del Quimiostato


Suposiciones mencionadas:

Y = constante
= (ecuacin de Monod), Independencia
qumica del sustrato.

En casos reales las desviaciones son tan pequeas que se


pueden considerar a estas suposiciones como si se
cumplieran.

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3.6.5 Modelo de Monod para varias etapas.

(m

2
D1 D2 K s
D1 D2 K s
D2 ) S +
D2 K s S e S 2 +
=0

D
1
m
1
m

2
2

Quimiostato dos etapas (en serie)


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3.6.5 Modelo de Monod para varias etapas.

(m

2
D
D
K
D
D
K

1
2
s
1
2
s
D2 ) S 22 +
D2 K s S e S 2 +
=0
D
D
1
m
1
m

X 2 = Ysx ( S e S 2 )

dX i
= ki X i
dt

Mtodo grafico para el calculo del numero de etapas necesarias para


llevar a cabo un CSTR en serie.

Quimiostato dos etapas (en serie)


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"emulsification bioreactor"

Cultivo continuo de dos etapas para la degradacin de petrleo crudo en


agua de mar (Bertrand et al., 1983).
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3.7.6 Modelo de Monod para otros reactores.

Biostato
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3.7.7 Modelo de Monod para otros reactores.

Turbidiostato-cultivo continuo para bacteria


fotosintticas
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3.7.8 Modelo de Monod para otros reactores.

Biorreactor de tanque Agitado Continuo


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3.8 Ejemplo
A partir de cultivos en discontinuo de un M.O., se han
obtenido los parmetros de Monod que describe su
crecimiento (MAX = 0.2 h-1 y Ks = 0.35 gL-1). Se desea
llevar el mismo proceso en un biorreactor continuo de
tanque agitado a escala industrial.
a.) Si la alimentacin es estril, cul ser el volumen de
fermentador necesario para tratar un caudal de 500
Lh-1 de una corriente de sustrato de 30 gL-1 si se
desea alcanzar una conversin del 90%?Cul ser la
velocidad de dilucin que permite maximizar la
productividad celular? Si se sabe que el rendimiento
de substrato en biomasa es 0.09 g/g, cul ser la
productividad de biomasa?
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3.8 Ejemplo
a.) Dado que la conversin es del 90% (S = 3 gL-1), y
conociendo los parmetros cinticos, se puede calcular,
fcilmente la velocidad de crecimiento (ec. Monod) en las
condiciones de operacin.

MAX S

3
= 0.2
= 0.179[h 1 ]
=
Ks + S
0.35 + 3
Como en condiciones E.E., la tasa de dilucin coincide
con la velocidad especfica ().

Q
500
V=
=
= 2793[ L]
D 0.179
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3.8 Ejemplo
La tasa de dilucin que permite
productividad para este sistema es:

DMX

maximizar

la

0.5

Ks
0.35

1
= 0.21
= MX 1
= 0.178 [h ]
Ks + So

0.35 + 3

Comparando este valor con el obtenido se deduce que el


proceso se estaba llevando a cabo en condiciones
prximas a la zona de inestabilidad.

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3.8 Ejemplo
La productividad de biomasa en esa condiciones sera:

D X = D Ysx (Se S ) = 0.179 0.09 (30 3)

D X = 0.435 [ gL1h1 ]

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3.8 Ejemplo
b.) Se propone modificar el equipo incorporando un
separador de biomasa en la corriente de salida. Se
obtiene as una corriente de recirculacin con una
concentracin celular cuatro veces mayor que la de salida
del biorreactor. Si se desea obtener la misma conversin
global de substrato y se aplica una relacin de
recirculacin (caudal de recirculacin/caudal de
alimentacin) de 0.30. Qu caudal ser factible en estas
condiciones?

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3.8 Ejemplo
Puesto que se desea mantener la conversin, la
concentracin de substrato en el reactor tambin ser la
misma que en el inciso a.); y por tanto la velocidad o tasa
de crecimiento () ser, igualmente 0.179 h-1.
Aplicando un balance de materia en el reactor,
considerando que la alimentacin es estril y que opera
en E.E.
Q, X, S, P

Qo, Xo, So, Po

Qs, Xs, Ss, Ps

Qe, Xe, Se, Pe

Q, X

S, P

Qw, Xw, Sw, Pw

Qr, Xr, Sr, Pr


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3.8 Ejemplo
Biomasa (X):
(QeXe + QrXr) (Qe+ Qr)X + XV = VdX/dt
Por lo general, QeXe QrXr, por lo que sustituyendo
Qr = RQe, en donde R es la denominada razn de
circulacin, y, si el equipo en E.E.
RQeXr Qe(1+R)X + XV = 0
Si se divide esta ecuacin por V donde D = Qe/V
RDX r

D=
X =
D + DR
Xr

1 R
1
X

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3.8 Ejemplo
Reemplazando se obtiene:

0.179
1
D=
= 1.79 h
4
1 0.30 1
1

[ ]

Y por lo tanto el caudal de alimentacin Qe, ser:

[ ]

[ ]

Q = D V = 1.79 h1 2793 [L] = 5000 Lh1

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