Universidad Nacional

Tecnolgica
del
cono sur de
Lima
Ingeniera Ambiental
Laboratorio de Ecotoxicologa
Tema:

Identificacin de pesticidas por la

Cromatografa por capa fina (CCP)
Profesor:

Jos Alfonso Apestegia Infantes

Integrantes:

o
o
o
o

I.

Centeno Sulluchuco Ivn

Guzman Huaman Emerson
Pariona Vargas Bryam
Rojas Barriga Anthony

INTRODUCCIN

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Ecotoxicologa

Los plaguicidas organofosforados (POF) son steres orgnicos del cido

fosfrico, utilizados para controlar las plagas que atacan los cultivos o para
eliminar insectos que actan como vectores de enfermedades El uso
indiscriminado de plaguicidas ha generado numerosos problemas ambientales,
especialmente a largo plazo, todas las especies diariamente se exponen a dosis
desconocidas de estos agresores potenciales poniendo en riesgo su salud. El
hombre y los animales, no estn exentos de contaminarse con plaguicidas, y
aunque el organismo pueda tolerar algunos niveles de contaminantes no se puede
pasar por alto los efectos crnicos que estos pueden producir, especialmente los
compuestos organofosforados que ejercen una accin sistmica sobre las
especies expuestas (insectos, mamferos y el hombre). El uso continuo de POF
en la agricultura incrementa la posibilidad de que los residuos de estos
compuestos estn presentes en los alimentos comprometiendo as la seguridad
alimentaria. Los estudios realizados muestran que incluso dosis bajas de
plaguicidas organofosforados, afectan el desarrollo del sistema nervioso y el
cerebro de nios en crecimiento.

II.

OBJETIVOS

Prctica N 4: Anlisis Qumico - Toxicolgico

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III.

Ecotoxicologa

Identificacin pesticidas por el mtodo de la cromatografa por cada fina

Identificacin de txicos orgnicos fijos

MARCO TERICO

La cromatografa en capa fina (CCF) es una tcnica cromatogrfica que utiliza una
placa inmersa verticalmente. Esta placa cromatogrfica consiste en una fase estacionaria
polar (comnmente se utiliza slica gel) adherida a una superficie slida. La fase
estacionaria es una capa uniforme de un absorbente mantenido sobre una placa, la cual
puede ser de vidrio, aluminio u otro soporte. Para realizar la CCF, se debe apoyar la
placa cromatogrfica sobre algn recipiente o cmara que contenga la fase lquida de
aproximadamente un centmetro (la distancia entre el principio de la placa y la muestra
que se desea analizar).
El desarrollo de los cromatogramas en capa fina se realiza normalmente por el mtodo
ascendente, esto es, al permitir que un eluyente ascienda por una placa casi en vertical,
por la accin de la capilaridad. La cromatografa se realiza en una cubeta. Para
conseguir la mxima saturacin posible de la atmsfera de la cmara, las paredes se
impregnan del eluyente.
Generalmente el eluyente se introduce en la cmara una hora antes del desarrollo, para
permitir la saturacin de la atmsfera. El tiempo de desarrollo, por lo general, no llega a
los 30 minutos. El tiempo de una cromatografa cualitativa suele ser de un par de
minutos, mientras que el tiempo de una cromatografa preparativa puede llegar a un par
de horas.
Las placas pueden desarrollarse durante un tiempo prefijado, o hasta que se alcance una
lnea dibujada a una distancia fija desde el origen. Esto se hace para estandarizar los
valores de RF. Frecuentemente esta distancia es de 10 cm, ya que parece ser la ms
conveniente para medir valores de RF. Despus del desarrollo, las placas pueden secarse
rpidamente con una corriente de aire caliente.
La mejor posicin de desarrollo para un componente es el punto medio entre el origen y
el frente del eluyente, ya que permite separar las impurezas que se desplazan con mayor
y menor velocidad. El frente del eluyente nunca debe llegar a tocar el borde de la placa.
Si los compuestos separados no son coloreados es necesario revelar la posicin de
dichos compuestos, para ello existen dos tipos de mtodos: mtodos qumicos y los
mtodos fsicos.
Mtodos qumicos Consisten en realizar una reaccin qumica entre un reactivo
revelador y los componentes separados, para ello se pulveriza la placa con los reactivos
reveladores.

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Ecotoxicologa

Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma complejos

coloreados con los componentes orgnicos (con tonos amarillo-marrn), pero las
manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente sealar las manchas
aparecidas.
Otro reactivo revelador bastante utilizado es el cido sulfrico, que reacciona con los
componentes orgnicos produciendo manchas negras luego de ser carbonizadas.
Tambin es utilizado el permanganato potsico, que deja unas manchas de color
amarillo. El tamao de las manchas no est relacionado con la cantidad de componente
separado.
Adems de estos reveladores generales, existen otros especficos:
2,4 - dinitrofenilhidracina (para aldehdos y acetonas). Verde de bromocresol (para
cidos carboxlicos). Paradimetil aminobenzaldehido (para aminas). Ninhidrina (para
aminocidos).
Mtodos fsicos. El ms comn consiste en aadir al absorbente un indicador
fluorescente. De tal forma que al colocar la placa bajo una lmpara ultravioleta, y
dependiendo del indicador y de la longitud de onda, aparecen manchas fluorescentes en
las zonas en las que hay componentes, o en otros casos aparece toda la placa
fluorescente excepto donde hay componentes.
Algunos compuestos poseen cierta fluorescencia (aunque no es normal) con lo que
pueden ser detectados directamente en una lmpara de ultravioleta.

La Constante Rf y Rx
La constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera de expresar la posicin de
un compuesto sobre una placa como una fraccin decimal, mide la retencin de un
componente. Se define como: RF= Distancia de la muestra desde el origen/Distancia del
eluyente desde el origen
La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de la
mancha, los clculos se simplifican si el denominador es 10. Para que los RF sean
reproducibles deben ser fijadas una serie de condiciones (Espesor de la placa, fase
mvil, fase estacionaria, cantidad de muestra). El mximo valor de RF que se puede
alcanzar es de 1, lo ideal es un RF entre 0.55 y 0.7.
Para averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la misma placa y
se desarrolla con varios eluyentes. Una vez desarrollados se calculan los RF y si son
distintos, puede deducirse con toda seguridad que no se trataba del mismo compuesto.
Por el contrario si los RF son iguales los compuestos pueden ser iguales o no.

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Ecotoxicologa

Si se sospecha que dos compuestos son muy parecidos se eluyen sobre la misma placa
con el mismo eluyente u otros de menor polaridad, hasta apreciar una separacin
mnima. En este caso no se pueden usar reveladores qumicos, ya que alteraran los
compuestos, sino indicador ultravioleta.
Tambin se puede operar de la manera siguiente: Se selecciona un compuesto (X), que
tenga una posicin de desarrollo conveniente; todos los dems compuestos sobre la
placa se relacionan con ste.
De esta manera se tiene el RX:
Rx= Distancia recorrida por el compuesto de referencia(X)/Distancia recorrida por el
eluyente

IV.

MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales
-

Placas
Cuba cromatografa
Horno

Reactivos para R1
-

V.

MetilParation
Silica Gel
MeOH : acetona 5:5
PdCl2 (revelador)

PROCEDIMIENTO
1. Disolver el silica gel en agua destilada en un matraz, hasta que tenga una
textura cremosa.
2. Luego empezar a verter un poco del contenido del matraz en todas placas hasta
que queden totalmente manchadas. Luego llevar al horno hasta que se sequen
las placas.
3. Luego de retirar las placas del horno, se debe proceder con la colocacin de las
muestras de prueba y standares.

Primera Prueba R1.

-

Aplicar una gota de la muestra de prueba en la parte inferior de la placa, 2 cm por

encima del borde. El dimetro de la gota debe ser de 2mm.
Aplicar una gota de la muestra de prueba en la parte inferior de la placa, 2 cm por
encima del borde. El dimetro de la gota debe ser de 2mm.
Luego poner la placa dentro de la cuba cromatografica, la cual debe contener el
eluyente, MeOH, para que suba por capilaridad.

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El MeOH, debe subir los del tamao de la placa, luego de esto, se retira la placa, y se
realiza una marca hasta donde haya subido el MeOH.
Finalmente, se debe de revelar los puntos del contaminante, con ayuda del PdCl 2.
Luego realizar las mediciones de las distancias recorridas de la muestra y el eluyente
para hallar el valor de Rf.

VI.

Rf =

Rf =

RESULTADOS

El valor de Rf para la muestra standard fue igual a 0.8, valor que se obtuvo
despus utilizando los siguientes datos:
Distancia de lamuestra desdeel origen 9.8 cm
=
=0.8
Distancia del eluyente desde el origen 12.1cm
El valor de Rf para la muestra de prueba fue igual a 0.8, valor que se obtuvo
despus utilizando los siguientes datos:
Distancia de lamuestra desdeel origen 9.9 cm
=
=0.8
Distancia del eluyente desde el origen 12.3 cm

VII.

RECOMENDACIONES

VIII.

IX.
-

Ecotoxicologa

Manipulacin correcta y adecuada del txico.

Tener cuidado con las placas porque son frgiles.
Es mejor tener ms placas con silica gel de las que se vayan a utilizar,
para evitar posibles contratiempos y problemas.
Retirar la placa cuando el eluyente se encuentra en los del tamao
total de la placa.

INVESTIGAR

Cmo cuantificar por Instrumentacin el metilparatin?

CONCLUSIONES
La cromatografa en capa fina es una tcnica analtica rpida y sencilla, muy utilizada
en un laboratorio para comparar dos muestras. Si dos muestras corren igual en placa
podran ser idnticas.
El adsorbentes (fase estacionaria) ms utilizado para separar sustancias polares es la
silica gel (SiO2), como los alcoholes, aminas, cidos carboxlicos.
La mayor parte de las placas de cromatografa llevan un indicador fluorescente que
permite la visualizacin de los compuestos activos a la luz ultravioleta. En el caso de
compuestos que no absorben luz UV, la visualizacin (o revelado) del cromatograma

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X.

Ecotoxicologa

requiere utilizar un agente revelador. Este tiene que reaccionar con los productos
adsorbidos proporcionando compuestos coloreados.
La fase mvil es el efecto de desplazamiento ejercido sobre los componentes de la
mezcla por una fase mvil, que puede ser un lquido o un gas, sobre una fase
estacionaria.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

Citas online:
URIBE. 2013. Cromatografa. Universidad de Antioquia.
URL:
http://www.udea.edu.co/portal/page/portal/bibliotecaSedesDependencias/un
idadesAcademicas/FacultadMedicina/BilbiotecaDiseno/Archivos/Departam
entos/Cromatografia-farmacologia-toxicologia-medicina-udea.pdf
Lezama R. et all. 2013. Identificacin de pesticidas organofosforados en
naranjas de la variedad valencia tarda en cunduacn, tabasco.
URL:
http://www.somas.org.mx/pdf/pdfs_libros/agriculturasostenible6/63/84.pdf
UNICUM. 2011. Cromatografa en Capa Fina (TLC). Una herramienta til
para el Conservador-Restaurador. Revista de la Escuela Superior de
Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales de Catalua.
URL: http://unicum.cat/es/2011/06/cromatografia-en-capa-prima-tlc-unaeina-util-per-al-conservador-restaurador/

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