UNIVERSIDAD DE CONCEPCIN

FACULTAD DE AGRONOMA

PROPAGACIN Y DESCRIPCIN MORFO ANATMICA DE SPHACELE

CHAMAEDRYOIDES

POR

JOS MANUEL RUBILAR OCAMPO

MEMORIA PRESENTADA A LA FACULTAD

DE AGRONOMA DE LA UNIVERSIDAD
DE CONCEPCIN PARA OPTAR AL
TTULO DE INGENIERO AGRNOMO.

CHILLN CHILE
2010

UNIVERSIDAD DE CONCEPCIN
FACULTAD DE AGRONOMA

PROPAGACIN Y DESCRIPCIN MORFO ANATMICA DE SPHACELE

CHAMAEDRYOIDES

POR

JOS MANUEL RUBILAR OCAMPO

MEMORIA PRESENTADA A LA FACULTAD

DE AGRONOMA DE LA UNIVERSIDAD
DE CONCEPCIN PARA OPTAR AL
TTULO DE INGENIERO AGRNOMO.

CHILLN CHILE
2010
Aprobada por:

Profesor Asistente, Anglica Urbina P.

Licenciada en Biologa.

____________________
Gua

Profesor Asociado, Humberto Serri G.

Ing. Agrnomo, Mg, Sc.

____________________
Asesor

Profesor Asociado, Edgar Pastene N.

Qumico Farmacutico, Mg, Sc.

____________________
Asesor

Profesor Asociado, Ral Cerda G.

Ing. Agrnomo, Mg, Ad y Ec de Empresas.

____________________
Decano

TABLA DE CONTENIDOS

Resumen...................................................................................
Summary.......
Introduccin..........
Materiales y Mtodos............................
Resultados y Discusin............................
Conclusiones.....................................
Referencias..........

Pgina
1
1
2
5
9
26
26

INDICE DE FIGURAS Y TABLAS

Pgina
Tabla 1

Tratamientos de ensayo I (A), estratificacin ms

escarificacin con cido sulfrico (H2SO4)..

Tratamientos de ensayo II (B), lixiviacin de inhibidores

ms aplicacin de giberelinas....

Tratamientos de ensayo III (C), escarificacin trmica

con agua ms estratificacin..

Tratamientos de ensayo IV (D), aplicacin de

giberelina..

Propagacin vegetativa (E), aplicacin de cido

indolbutrico (IBA)....................................................

Porcentajes de germinacin en ensayo 1: escarificacin

con cido sulfrico y estratificacin..

10

Porcentajes de germinacin en ensayo 2: lixiviacin de

inhibidores con agua a diferentes temperaturas y
aplicacin de giberelina...

11

Porcentajes de germinacin en ensayo 3: escarificacin

trmica y estratificacin...

12

Porcentajes de germinacin en ensayo 4: aplicacin de

cido giberlico.

13

Imgenes del proceso germinativo de Sphacele

chamaedryoides mediante Microscopa Electrnica de
Barrido

14

Tabla 10 Resultados de propagacin vegetativa. Porcentajes de

enraizamiento

25

Tabla 2
Tabla 3
Tabla 4
Tabla 5
Tabla 6
Tabla 7

Tabla 8
Tabla 9
Figuras

PROPAGACIN Y DESCRIPCIN MORFO ANATMICA DE SPHACELE

CHAMAEDRYOIDES

PROPAGATION AND MORPHO-ANATOMICAL DESCRIPTION OF SPHACELE

CHAMAEDRYOIDES

Palabras ndice
estratificacin.

adicionales:

germinacin,

dormancia,

escarificacin,

RESUMEN
Con el propsito de identificar un mtodo efectivo para obtener un alto porcentaje
de

germinacin

enraizamiento,

en

semillas

estacas

de

Sphacele

chamaedryoides (Balbis) Briq. y observar los cambios morfolgicos que

experimenta la semilla durante el proceso de germinacin, se realiz esta
investigacin durante el ao 2009 y 2010 en la Facultad de Agronoma de la
Universidad de Concepcin. Se efectuaron cuatro ensayos de germinacin: a)
escarificacin con cido sulfrico y estratificacin, b) lixiviacin de inhibidores con
agua a diferentes temperaturas ms concentraciones de cido giberlico, c)
escarificacin trmica ms estratificacin y d) aplicacin de cido giberlico, en
diferentes concentraciones. El mayor porcentaje de germinacin se obtuvo con el
tratamiento de escarificacin trmica y estratificacin. Con respecto a la
propagacin vegetativa, se realizaron ensayos con diferentes concentraciones de
cido indolbutrico (IBA) aplicado a base de las estacas, los mayores porcentajes
de enraizamiento se obtuvieron con aplicacin de 1.000 y 4.000 mg L-1 de IBA. Los
cambios morfolgicos de la semilla durante el proceso de germinacin se
observaron

mediante

Microscopio

Electrnico

de

Barrido

(MEB),

estas

observaciones permiten identificar caractersticas anatmicas y estructurales.

SUMMARY
The aim of this work was to identify an effective method to improve the rate and

percentage of germination and the rooting of seeds and cuttings of Sphacele

chamaedryoides (Balbis) briq. Morphological changes experienced by the seed
during the germination process also were followed by microscopy. This research
was conducted during 2009 and 2010 in the Faculty of Agronomy of the University
of Concepcin. Four germination tests were assayed: a) sulfuric acid scarification
and further stratification, b) leaching of inhibitors with different water temperatures
plus different concentrations of gibberellic acid, c) thermal scarification plus
stratification and d) gibberellic acid application at different concentrations. The
highest percentage of germination was obtained with thermal scarification and
stratification. Vegetative propagation test consisted of different concentrations of
indole butyric acid (IBA) applied to the stem base. So, the highest percentage of
rooting was obtained with the application of 1.000 and 4.000 mg L -1 IBA. The
morphological changes of the seed during the germination process were observed
by scanning electron microscope (SEM). These findings allowed identifying
characteristics of highly lignified pericarp.
INTRODUCCIN
La flora nativa de Chile destaca por su gran riqueza botnica con gneros y
especies muy particulares, los que se desarrollaron durante la evolucin sin
mucho intercambio de material gentico con sus parientes, debido al aislamiento
geogrfico del pas (Vogel, 2000). Esta flora representa un recurso gentico
importante, con un alto porcentaje de endemismo de especies y gneros
(Massardo y Rozzi, 1996).
Sphacele chamaedryoides, conocida vulgarmente como salvia (Hoffmann et
al., 1992), lahuen lahuen (Urbina et al., 1998) o como alhuelahun, pertenece a la
familia de las Labiadas y al gnero Sphacele (Montenegro, 2002; Riedemann y
Aldunate, 2004), es una familia amplia y cosmopolita (Hoffmann et al., 1992),
constituida por hierbas, rara vez por arbustos o rboles (Niembro, 1989). Esta
planta es endmica de Chile (Stark, 2009) crece en cerros asoleados de la zona
costera entre la V y la X Regin, en suelos pedregosos, con buen drenaje pero

con algo de humedad. Es un arbusto ramoso, perenne y redondeado, de

crecimiento muy rpido, a partir de semillas, de hasta 2 m de alto por 1.80 m de
dimetro. El follaje es bastante denso, las hojas tienen un tono verde-ceniciento
(Riedemann y Aldunate, 2004) de 1.5 - 4 cm de largo por 0.5 - 1 cm de ancho
(Pea et al., 2000), de forma oblongo-elpticas, pice redondeado y base
atenuada, opuestas y decusadas, rugosas y pubescentes. Bordes suavemente
crenados, nervadura reticulada y muy notoria (Stark, 2009). Las flores, de unos 2
cm de largo se disponen en verticilos como en todas las especies de la familia
Labiadas, cada uno de los cuales presenta de 4 a 6 flores, stas aparecen durante
la primavera y comienzos del verano y presentan un color celeste-grisceo
(Montenegro, 2002; Riedemann y Aldunate, 2004). El cliz es tubular de 5 spalos
y la corola es bilabiada (Montenegro, 2002) compuesta por 5 ptalos fusionados.
El fruto es una ncula, madura a fines del verano y contiene una pequea semilla
negra (Riedemann y Aldunate, 2004).
La planta, evidencia la presencia de tricomas glandulares, tanto en superficie
superior como inferior, adems, en la superficie abaxial existen tricomas
dendroides, los que contribuiran a evitar la prdida de agua y otros elementos en
la especie (Urbina et al., 1998).
Esta planta chilena, es usada en la medicina popular para tratar enfermedades
infecciosas, desrdenes menstruales, y enfermedades inflamatorias (Pastene et
al., 2005). Tambin destaca, segn Hoffmann et al. (1992) y Seplveda et al.
(1998) su uso como cicatrizantes, y en fricciones en caso de parlisis.
Qumicamente, la planta contiene 0.2 % de aceites esenciales en el cual se
han caracterizado 65 substancias voltiles. Entre los compuestos no voltiles
presentes, han sido identificados los triterpenos cido urslico y cido betulnico.
Tambin se ha aislado la horminona, una diterpenquinona que se encuentra en
varias especies de la familia Lamiaceae, su actividad citotxica y antibacteriana ha
sido descrita en otros trabajos (Pastene et al., 2005). Segn Montes y Wilkomirsky

(1985) los constituyentes basados en las hojas de la planta seran aceite esencial:
7.35 g/kg, con un 3 % de alfa pineno, 3.2 % de beta pineno, 15.2 % de falandreno,
32.4 % de limoneno-eucaliptol, 9.3 % de timol y en menos proporcin linalol,
alcanfor, terpineol y borneol.
La germinacin de esta especie, comienza con la imbibicin de agua por parte
de la semilla y culmina con la emergencia de la plntula a travs de las cubiertas
(Azcon-Bieto y Taln, 1993; Bewley y Black, 1994), pero esto slo ocurre cuando
las semillas han madurado y las condiciones ambientales son adecuadas, algunas
no germinan hasta pasado un tiempo, incluso si disponen de condiciones
ambientales favorables, ya que experimentan un perodo de dormancia (Meyer et
al., 1960; Baldini, 1992). La dormancia en las semillas se puede deber a varios
factores. Hartmann y Kester (1987), Hess (1980) y Meyer et al. (1960), sealan
factores como: impermeabilidad de la cubierta seminal a los gases y agua,
cubiertas de semillas duras y presencia de inhibidores de la germinacin.
Hartmann y Kester (1987) sealan diversos tratamientos para superar el letargo de
las semillas, como escarificacin mecnica con agua caliente y con cido,
estratificacin de la semilla a bajas temperaturas, lixiviacin de inhibidores, o
combinacin de los anteriores. Tambin sealan tratamientos para facilitar la
germinacin, como lo son el uso de hormonas y otros estimulantes qumicos como
giberelinas. Cualquiera de los tratamientos anteriores sirve para superar letargos
mecnicos, por presencia de pericarpios lignificados.
S. chamaedryoides, tambin se puede propagar, mediante reproduccin
asexual o vegetativa. Segn Baldini (1992) y Felipe (1999), a partir de porciones
de plantas, se obtienen descendencia homognea desde el punto de vista
gentico e idnticas a la planta de la que se ha tomado el material de propagacin.
La regeneracin por estacas es el medio ms utilizado e importante de
propagacin de muchas especies agrcolas y ornamentales (Hartmann et al.,
1990; Azcn-Bieto y Taln, 2008).

Existen distintos tratamientos a que se pueden someter las estacas de tallo,

con el fin de aumentar la capacidad rizgena. Uno de los ms recomendados es el
uso de reguladores de crecimiento para estimular la diferenciacin de races
adventicias. Sin embargo, este tratamiento puede slo aumentar la capacidad
rizgena, pero no puede crearla. Entre los reguladores de crecimiento el ms
utilizado es el cido indolbutrico (IBA), ya que no es txico en un amplio rango de
concentraciones para un gran nmero de especies (Baldini, 1992). Segn seala
Muoz y Solanes (1983) las concentraciones ptimas de cido indolbutrico (IBA)
para promover enraizamiento, varan entre 1.000 y 2.000 mg L -1.
Los objetivos de esta investigacin, fueron determinar el tratamiento ms
efectivo para promover la germinacin de semillas de S. chamaedryoides, evaluar
el efecto de la aplicacin de cido indolbutrico en el enraizamiento de estacas y
formacin de callos, y describir los cambios morfolgicos de la semilla en el
transcurso del proceso de germinacin.
MATERIALES Y MTODOS
El presente estudio se realiz en la Facultad de Agronoma de la Universidad de
Concepcin, Campus Chilln, durante el ao 2009 - 2010.
Las nculas de Sphacele chamaedryoides se colectaron en la comuna de
Hualqui, Provincia de Concepcin, Regin del Bo - Bo, la primera semana de
abril del ao 2009, y la recoleccin del material vegetativo se realiz en el mismo
sector, los primeros das de octubre del mismo ao.
Germinacin
Las nculas recolectadas se guardaron en bolsas de papel para la posterior
realizacin de los ensayos. Previo a esto, pasaron por un proceso de limpieza y
desinfeccin con fungicida (Benlate 0.7 g + Captan 1.5 g en 1 litro de agua). Los
tratamientos a los cuales fueron sometidas las nculas, para romper la dormancia
de las semillas, se describen a continuacin:

Ensayo I: Se tomaron 1.200 nculas y fueron sometidas a distintos tratamientos

de escarificacin y estratificacin (Tabla 1).
Tabla 1: Tratamientos de ensayo I (A), estratificacin ms escarificacin con cido
sulfrico (H2SO4).
Estratificacin (4oC)
0 das
15 das

0 min
A1
A5

30 das

A9

Escarificacin con H2SO4 (mg L -1)

10 min
20 min
A2
A3
A6
A7
A 10

A 11

30 min
A4
A8
A 12

La escarificacin fue de tipo qumica y se realiz utilizando cido sulfrico al 24.2

% por perodos de 0, 10, 20 y 30 minutos. Para esto, se depositaron en un vaso de
precipitado agregndoles el cido sulfrico a la concentracin antes mencionada,
hasta cubrirlas totalmente. Luego de exponer las nculas al tiempo antes indicado,
fueron lavadas con agua destilada durante un perodo de 24 horas para eliminar
los posibles residuos.
Despus del lavado, fueron puestas a estratificar por un perodo de 0, 15 y 30
das en placas petri, cubiertas en su interior por papel absorbente hmedo y
dentro de una cmara refrigerada a una temperatura de 4 oC en condiciones de
oscuridad.
Ensayo II: Se tomaron 1.200 nculas y fueron sometidas a tratamientos de
lixiviacin de inhibidores con agua a diferentes temperaturas y luego se trataron
con diferentes concentraciones de cido giberlico (Tabla 2). Las nculas fueron
lavadas con agua a 25 oC y 50 oC, durante 5 minutos, ms un tratamiento sin
lavado, para posteriormente ser sumergidas en tres diferentes concentraciones de
giberelina. Para esto, las nculas fueron depositadas en tubos de ensayo con 2 ml
de solucin de giberelina GA 3 (Sigma), a concentraciones de 250, 500 y 1.000 mg
L-1, por un perodo de tiempo aproximado de 24 horas, adems de un tratamiento
testigo sin aplicacin de giberelinas.
Tabla 2: Tratamientos de ensayo II (B), lixiviacin de inhibidores ms aplicacin de
giberelinas.

Giberelinas (GA3 Sigma)

Lixiviacin de
inhibidores (agua)

0 mg L

250 mg L-1

500 mg L-1

1.000 mg L-1

B1

B2

B3

B4

25 oC
50 oC

B5
B9

B6
B 10

B7
B 11

B8
B 12

-1

Ensayo III: Se tomaron 1.200 nculas y fueron sometidas a diferentes

tratamientos de escarificacin trmica con agua caliente y estratificacin a 0, 15 y
30 das (Tabla 3). Para la escarificacin, las semillas fueron inmersas en agua,
dentro de un vaso de precipitado a 15, 30, 70 y 100 oC respectivamente. De
inmediato, se retiraron de la fuente de calor y se dejaron durante un tiempo de 24
horas en el agua, que se fue enfriando gradualmente.
Transcurridas las 24 horas, fueron puestas a estratificar por un perodo de 0,
15 y 30 das en placas petri, cubiertas en su interior por papel absorbente hmedo
y dentro de una cmara refrigerada a una temperatura de 4 oC en condiciones de
oscuridad.
Tabla 3: Tratamientos de ensayo III (C), escarificacin trmica con agua ms
estratificacin.
Estratificacin (4 oC)

Escarificacin Trmica (agua)

o

0 das
15 das
30 das

15 C
C1
C5
C9

30 oC
C2
C6
C 10

70 oC
C3
C7
C 11

100 oC
C4
C8
C 12

Ensayo IV: Se tomaron 1.200 nculas y fueron tratadas con cido giberlico, en
concentraciones de 1.000, 2.500 y 5.000 mg L -1, ms un tratamiento testigo sin
giberelinas (Tabla 4). Se mantuvo el mismo procedimiento que el ensayo II.
Tabla 4: Tratamientos de ensayo IV (D), aplicacin de giberelinas.
-1

0 mg L

Giberelinas (GA3 Sigma)

1.000 mg L-1
2.500 mg L-1

5.000 mg L-1

D1

D2

D3

D4

Para los 4 ensayos, una vez listos los tratamientos, las nculas fueron colocadas
en placas petri de 10 cm de dimetro, con una lmina de papel filtro y en una
cmara de germinacin a 24 oC, a humedad constante y 12 horas alternadas de
luz y oscuridad para evaluar la germinacin de las semillas.
Se consider la semilla germinada cuando la radcula emergida alcanz 1 mm
de longitud.
Descripcin morfolgica de nculas, y cambios observados durante la
germinacin de la semilla
Las observaciones morfolgicas de la semilla en el trascurso del proceso de
germinacin, se realizaron con nculas maduras, fijadas en glutaraldehido y buffer
cacodilato de sodio, por un mnimo de 24 horas, postfijadas en tetrxido de osmio
y sometidas a secado de punto crtico. Este material, se mont en portas y se
metaliz con oro-paladio y posteriormente se examin con Microscopio Electrnico
de Barrido (MEB), en el Laboratorio de Microscopa Electrnica de la Universidad
de Concepcin.
Las evaluaciones y los registros se realizaron diariamente desde el da 0.
Propagacin vegetativa
Se utilizaron estacas de tallo leoso de S. chamaedrioydes recolectadas de
plantas en ambiente natural. Se emple una cmara de proteccin de 2,4 m 1,6
m y 4 bandejas speedling. El agua fue suministrada de forma manual mediante un
pulverizador, dependiendo de las condiciones observadas.
El sustrato utilizado consisti en 2/3 de arena, ms 1/3 de tierra de hoja,
material proveniente de la Universidad de Concepcin, Campus Chilln. El
sustrato fue esterilizado mediante autoclave a 121 oC por 1 hora, para eliminar
semillas de malezas y patgenos.
Tabla 5: Tratamientos propagacin vegetativa (E), aplicacin de cido indolbutrico
(IBA).

cido indolbutrico(mg L-1)

0

125

250

500

750

1.000

2.000

4.000

E1

E2

E3

E4

E5

E6

E7

E8

Se confeccionaron 128 estacas de aproximadamente 8 centmetros de largo y 0,4

centmetros de dimetro, y se formaron 8 grupos de 16 estacas, elegidas al azar,
estos grupos fueron desinfectados con una solucin acuosa al 0.75 % (v/v) de
hipoclorito de sodio por 5 segundos. Una vez secas, fueron depositadas en
frascos de vidrio, con cido indolbutrico en diferentes concentraciones,
sumergiendo slo la base del material. De los 8 grupos, los tratamientos del 1 al 5
permanecieron en IBA durante las 12 siguientes horas, los otros grupos slo
estuvieron en agua. El da del establecimiento, la base del material de los
tratamientos 6 a 8, fue inmersa en las concentraciones de cido indolbutrico por 5
segundos para ser transferido en seguida al sustrato de enraizamiento (Tabla 5).
Con el propsito de mantener un control preventivo de enfermedades se
realizaron pulverizaciones peridicas con una solucin acuosa de Benlate 0.7 g +
Captan 1.5 g en 1 litro de agua. Los parmetros evaluados fueron: porcentaje de
enraizamiento y formacin de callo.
Diseo experimental y anlisis estadstico
Todos los ensayos de germinacin se realizaron con diseo completamente
aleatorio. Los ensayos I, II y III con 12 tratamientos y 4 repeticiones. La unidad
experimental fue de 25 semillas por repeticin.
En el ensayo de propagacin vegetativa, el diseo experimental fue de
bloques completos al azar, con 8 tratamientos y 4 repeticiones, la unidad
experimental fue de 4 estacas.
Para determinar diferencias entre tratamientos, se realiz un anlisis de
varianza no paramtrico propuesto por Kruskal Wallis (1952), y el procedimiento
Conover (1999) (Balzarini et al., 2008).
RESULTADOS Y DISCUSIN

Germinacin
Ensayo I: No se observ diferencias significativas en el porcentaje de germinacin
entre los tratamientos, mediante el anlisis de varianza. El mayor porcentaje de
germinacin obtenido (2 %), fue en el tratamiento con 15 das de estratificacin y
sin escarificacin qumica con cido sulfrico (Tabla 6).
El efecto abrasivo del H2SO4 sobre la cubierta seminal de diferentes especies,
mejora la aireacin e hidratacin de la semilla, lo que se traduce en una mayor
eficiencia del proceso germinativo (Prez y Martnez-Laborde, 1994). Segn
Hartman y Kester (1987) la duracin del tratamiento con cido sulfrico depende
del tipo de semilla, pudiendo variar desde 10 minutos en algunas especies, hasta
6 horas o ms en otras, y al tratarse de semillas con tegumentos gruesos, los
perodos de tratamientos en estos casos son largos. Para esta especie, los
tratamientos son destinados a escarificar el pericarpio de las nculas. De acuerdo
a los resultados podemos deducir que los tiempos destinados a la escarificacin,
posiblemente no fueron los correctos, debido a que el pericarpio de los frutos de
S. chamaedryoides est formado por una capa de clulas esclereidas dispuestas
en empalizada, constituyendo un factor de latencia importante, dejando en
evidencia la impermeabilidad de la semilla. Esto se concluye, ya que las semillas
que fueron tratadas con acido sulfrico y el control, no presentaron diferencias de
volumen, lo que indica que no embebieron agua. La imbibicin de agua es un
fenmeno fsico y puede efectuarse an en semillas muertas (Hartmann y Kester,
1987; Sivori et al., 1980). Tambin es importante destacar, que la accin
escarificante del cido sulfrico sobre nculas de la familia Labiatae, vara
dependiendo de la especie, esto se fundamenta en estudios realizados por
Cabello et al. (1998), en nculas de Lavandula stoechas, en donde obtuvo 83 %
de germinacin utilizando cido sulfrico.

Tabla 6. Porcentajes de germinacin en ensayo 1: escarificacin con cido

sulfrico y estratificacin.
Estratificacin (4 oC)
0 das
15 das
30 das

Escarificacin con H2SO4 (mg L-1)

0 min
10 min
20 min
0
0
0
2
0
1
0
0
0

30 min
0
1
0

No se presentan diferencias significativas mediante anlisis de varianza (P < 0,05).

Ensayo II: Al analizar los resultados, se determin que no existen diferencias

significativas

en

el

porcentaje

de

germinacin,

segn

las

diferentes

concentraciones de giberelina utilizada para estimular el proceso germinativo, y las

distintas temperaturas del agua utilizadas para provocar un lavado de posibles
inhibidores presentes en la semilla o en la superficie de la ncula. Los mayores
porcentajes de germinacin (3 %) se obtuvieron para los tratamientos con agua a
15 oC ms 250, 500 y 1.000 mg L -1 de giberelina, sumado a estos, el tratamiento 7,
en el cual se utiliz agua a 25 oC ms 500 mg L-1 de giberelina (Tabla 7).
En algunos casos, las semillas no germinan, aunque se den las condiciones
adecuadas (Jensen-Salisbury, 1988; Prez y Martnez-Laborde, 1994). Segn
seala Jensen-Salisbury (1988), una de las principales causas fisiolgicas que
pueden determinar la dormancia de las semillas, es la presencia de sustancias
inhibidoras en diferentes tejidos de la semilla. Los resultados de este ensayo,
permiten deducir la ausencia de estos inhibidores en la semilla y pericarpio, ya que
no hubo respuesta al tratamiento de lavado con agua a diferentes temperaturas.

Tabla 7. Porcentajes de germinacin en ensayo 2: lixiviacin de inhibidores con

agua a diferentes temperaturas y aplicacin de giberelina.
Lixiviacin de
inhibidores (agua)
25 oC
50 oC

Giberelinas (GA3 Sigma)

0 mg L
0
0
1

-1

250 mg L-1
3
2
1

500 mg L-1
3
3
1

1.000 mg L-1
3
0
1

No se presentan diferencias significativas mediante anlisis de varianza. (P < 0,05).

Barcel et al. (2001), seala que los tejidos reproductores contienen mayores
cantidades de giberelina, sin embargo, el contenido de la hormona vara en
relacin con el crecimiento, edad de la planta, floracin, desarrollo del fruto,
dormancia y germinacin. Aparentemente las giberelinas se producen cuando se
necesitan, ya que en semillas en germinacin hay un aumento brusco al aumentar
estas de tamao. Jensen-Salisbury (1988), indica que las concentraciones de
giberelina aumentan durante la primavera en semillas latentes, y es posible que
participen en condiciones normales para romper el estado de latencia. Barcel et
al. (2001) y Sivori et al. (1980), seala que la aplicacin de giberelinas puede
romper el perodo de dormancia en semillas, ya que puede sustituir tratamientos
de estratificacin, que es donde aumenta el contenido de giberelinas.
Basndose en los resultados anteriores, se puede determinar que la giberelina
no pudo penetrar en la semilla, debido a la dureza e impermeabilidad del
pericarpio, an cuando se esperaba tener un efecto de escarificacin trmica
sobre ste, al realizar lixiviacin de inhibidores con agua a 50 oC.
Ensayo III: El anlisis de varianza detect diferencias (P 0,05) entre los
tratamientos de este ensayo. El mayor porcentaje de germinacin (65 %), se
obtuvo con escarificacin trmica a 100 oC y estratificacin por 30 das (Tabla 8).
El efecto abrasivo de la escarificacin trmica, tiene como objetivo, al igual que el
cido sulfrico, mejorar la permeabilidad de la semilla y de la ncula, en este caso
por medio de lesiones fsicas provocadas por la temperatura del agua, y facilitar
por medio de stas segn Prez y Martnez-Laborde (1994), el ingreso de agua y
el intercambio gaseoso de la semilla, de modo que el embrin pueda iniciar su
actividad metablica.
Tabla 8. Porcentajes de germinacin en ensayo 3: escarificacin trmica y
estratificacin.

Estratificacin (4 oC)
o

0 das
15 das
30 das

15 C
0a
0a
5 ab

Escarificacin Trmica (agua)

30 oC
70 oC
0a
0a
0a
0a
10 b
61 b

100 oC
0a
0a
65 b

Tratamientos con letras distintas indican diferencias significativas. Test de Conover (P < 0,05).

Los tratamientos 10, 11 y 12 que fueron sometidos a escarificacin trmica con

temperaturas de 30, 70 y 100 oC y 30 das de estratificacin a 4 oC, en completa
oscuridad, presentaron diferencias en el porcentaje de germinacin con respecto
al resto de los tratamientos. Estos resultados fueron obtenidos al final del perodo
de estratificacin, sin incidir las condiciones de la cmara de germinacin.
Los resultados anteriormente mencionados, concuerdan con los obtenidos por
Berti et al. (2006), quien logr germinar semillas de Luma apiculata estratificando
durante 30 das sobre arena estril hmeda a 2 oC, la germinacin comenz a los
28 das, durante el perodo de estratificacin, y al cabo de 30 das alcanz un 80
% de germinacin.
Estos resultados son coherentes con el hecho de que la testa seminal est
cubierta por el pericarpio del fruto, fuertemente lignificado, lo que implica una
mayor necesidad de que se favorezca la eliminacin de esta estructura para
facilitar la germinacin.
La luz promueve o inhibe la germinacin de semillas en algunas especies. La
inhibicin de la germinacin por la luz se presenta, principalmente, en semillas de
especies no domesticadas y de malezas. De este modo, de forma natural, las
especies cuentan con un banco permanente de semillas en el suelo que tiende a
garantizar su persistencia en condiciones adversas (Salisbury y Ross, 2000).
Lo anterior concuerda con los resultados obtenidos, confirmando una posible
fotoblastia negativa en semillas de S. chamaedrypiodes. Resultados similares
obtuvo Cabello et al. (1998), en nculas de Lavandula stoechas, familia Labiatae,
las cuales no presentaron germinacin en condiciones de luminosidad.

La estratificacin tambin juega un papel importante en la germinacin,

provocando un aumento transitorio del contenido de giberelinas y citocinina, con la
consecuente disminucin del cido abscsico, estimulando la germinacin.
Todos estos factores en conjunto lograron anticipar el inicio del proceso
germinativo.
Ensayo IV: Los resultados obtenidos, no mostraron diferencias significativas entre
los tratamientos con 0, 1.000, 2.500 y 5.000 mg L-1 de cido giberlico (Tabla 9).
Tabla 9. Porcentajes de germinacin en ensayo 4: aplicacin de cido giberlico.
0 mg L

-1

Giberelinas (GA3 Sigma)

1.000 mg L-1
2.500 mg L-1

5.000 mg L-1
2

No se presentan diferencias significativas mediante anlisis de varianza. (P< 0,

Las giberelinas son los reguladores de crecimiento ms utilizados para romper la
dormicin de semillas de numerosas especies vegetales (Prez y MartnezLaborde, 1994). Segn Azcon-Bieto y Talon, (2008), cuando los niveles de
giberelina (Gas) endgena son insuficientes, con el tratamiento de giberelina se
puede romper la dormancia y promover la germinacin, ya que las Gas suplen los
requerimientos de luz y fro que precisan muchas semillas para germinar. En el
caso de aadir una giberelina especfica, sta a lo ms coincidir con una de las
naturales que tiene la planta. Por tanto, si un proceso no responde a la adicin de
giberelina exgena, no puede decirse que no es regulado por giberelinas, pues
puede que no se haya aplicado la giberelina especfica que regula el proceso
(Barcel et al., 2001).
Los bajos porcentajes de germinacin, se deben a la no penetracin de la
giberelina a la semilla, debido a la dureza del pericarpio.
Descripcin morfolgica de nculas, y cambios observados durante la
germinacin de la semilla
Da 0: Las nculas de S. chamaedryoides de forma oval redondeada, presentan
tamaos variables, entre 2.5 mm de longitud y 1.2 mm de dimetro, (Figura 1 a), y

la semilla de igual forma presenta 2.3 mm de longitud y 1.1 mm de dimetro

aproximadamente (Figura 1 b), estos datos se basan en muestreo de 160 frutos.
Figura 1. Sphacele chamaedryoides. a. Ncula (B: 500 m). b. Semilla (B: 500
m). c. Excrecencias (B: 100 m). d. Hilo (B: 100 m).
c: cubierta del fruto, d: dimetro, ex: excrecencias, h: hilo, l: longitud.

Las nculas poseen una superficie lisa y muricada, provista de excrecencias ms

o menos cilndricas, cortas y endurecidas, las cuales se disponen en forma
perpendicular a la superficie de la semilla, sin presentar un patrn de distribucin
definido, estas varan entre 10.4 m a 37.9 m de longitud y 8.35 m a 11.4 m de
dimetro (Figura 1 c). En la superficie del pericarpio, ms especficamente en la
zona polar basal, se observa la zona hilar (Figura 1 d) la cual posee una superficie
lisa desprovista de excrecencias, y el hilo, el cual presenta forma lineal, con 270
m de largo y 40 m de ancho, que corresponde a la cicatriz dejada por el
desprendimiento del funculo del vulo, al secarse la semilla (Figura 1 d) (Besnier,
1989).

Figura 1. Sphacele chamaedryoides. e. (B: 50 m) y f. (B: 100 m). Corte

transversal.
cs: cubierta seminal, em: embrin, pe: pericarpio.

En un corte transversal de la ncula, perpendicular al plano de los cotiledones, se

distinguen claramente tres estructuras: pericarpio, correspondiente a la pared del
fruto, cubierta seminal y embrin (Figura 1, e y f).
El pericarpio presenta 57.1 m de grosor, y est formado por esclereidas de
42.8 m de longitud, las cuales se disponen perpendicular a la superficie de la
semilla (Figura 2 a). Dimitri y Orfila (1985), sealan que la testa de semillas que
son liberadas por el fruto, y que deben afrontar las exigencias del medio, son
gruesas y resistentes, entre las modificaciones que le otorgan dureza e
impermeabilidad

se

encuentra

la

esclerificacin.

En

esta

especie,

las

modificaciones antes mencionadas las adquiere el pericarpio, dando proteccin a

la semilla. Lo anterior es sealado por Martn et al. (2005) en estudios en nculas
de Lycopus L. (Lamiaceae), indicando que la capa en empalizada adquiere gran
importancia, ya que confiere cierta dureza a la ncula constituyendo a la
proteccin del embrin.
Figura 2. Sphacele chamaedryoides. a. Esclereidas (B: 10 m). b. Embrin (B: 500
m). c. Detalle del embrin (B: 200 m). d. Grnulos de almidn (B: 100 m).
co: cotiledn, cs: cubierta seminal, es: esclereidas, em: embrin, g: grnulos de
almidn, pe: pericarpio, r: radcula.

El epicarpio evidencia la presencia de mucilago, lo cual es frecuente en

numerosas especies de la familia Lamiaceae (Martn et al., 2006), este carcter
mucilaginoso queda en evidencia tras la hidratacin del fruto. Martin et al. (2004) y
Martn et al. (2006) por su parte, indica que la excrecin de mucilago confiere a
nculas de la familia Lamiaceae ventajas de dispersin, fijacin al suelo y
germinacin.
La cubierta seminal presenta un grosor aproximado de 58 m, fusionndose
con el pericarpio, esto ocurre generalmente con semillas del gnero Lamiaceae.
En un corte longitudinal de la semilla, se observa el embrin, el cual segn la
clasificacin propuesta por Besnier (1989), corresponde al tipo folioso espatulado.
ste alcanza un tamao de 1.911 m de longitud, donde la radcula mide
aproximadamente 665 m y los cotiledones, ambos de igual tamao, rectos
ovados, con el borde entero y el pice redondeado, presentan 1.622 m de
longitud, mientras que de ancho se observan medidas de 622 m y 933 m de
radcula y cotiledones respectivamente (Figura 2, b y c).
El grosor de cada uno de los cotiledones es de 460 m, y estn formados por
tejidos parenquimaticos, esponjoso y en empalizada respectivamente. En la Figura

2 d, se distinguen los grnulos de almidn de forma esfrica y superficie regular,

con dimetros promedios de 4.2 m. Besnier (1989), indica que los hidratos de
carbono constituyen la reserva ms comn en las semillas y, de ellos, el almidn
es la forma en que aparece con ms frecuencia, acumulndose en los cotiledones
en forma de granos cuyo tamao y forma son bastante tpicos para cada especie.
Figura 2. Sphacele chamaedryoides. e. Detalle de radcula y micrpilo (B: 200
m). f. Corte longitudinal mostrando funculo y arilo (B: 50 m).
a: arilo, co: cotiledn, cs: cubierta seminal, f: funculo, mi: micrpilo, pe: pericarpio.

En la Figura 2 e, se puede apreciar la superficie lisa del dermatgeno y el

micrpilo, sobre el pice de la radcula, mostrndose como una abertura que
interrumpe la capa de esclereidas y los respectivos tejidos hacia el interior de la
semilla.
En otro corte longitudinal se puede observar al funculo y el arilo. El primero de
196 m de longitud y 153 m de dimetro, y el arilo, que corresponde a una
excrecencia del funculo, o del tegumento exterior, presenta 166 m de dimetro y
130 m de ancho aproximadamente (Figura 2 f).
Da 1 10: La semilla incrementa su volumen, el embrin aumenta de tamao a
2.590 m, correspondiendo 2.295 m a la longitud de los cotiledones y 763 m a
la longitud de la radcula, en el undcimo da. El ancho, tanto de los cotiledones
como del eje hipoctilo radcula, aument a 1.113 m y 818 m respectivamente
(Figura 3, a y b).

Figura 3. Sphacele chamaedryoides. a. Embrin (B: 500 m). b. Detalle de

radcula (B: 100 m). c. Ruptura de la cubierta seminal (B: 200 m). d. Detalle
cotiledones (B: 200 m).
co: cotiledn, cs: cubierta seminal, de: dermatgeno, em: embrin, gl: glndulas,
pe: pericarpio, ps: parnquima esponjoso, pp: parnquima en empalizada, pg:
pelos glandulares, r: radcula.

Hartmann y Kester (1987) y Dimitri y Orfila (1985), indican que el embrin y el

tejido de reserva se hinchan por la imbibicin de agua, se diluye el protoplasma
celular activndose las funciones que se traducen en el crecimiento de la plntula.
Estos acontecimientos indican que la germinacin ha comenzado. Al duodcimo
da la cubierta seminal y el pericarpio comienzan a romperse en el extremo polar
basal de la semilla, y en forma paralela al plano de los cotiledones.
Da 11 20: La ruptura de la cubierta seminal y el pericarpio contina
extendindose, debido al aumento de tamao del embrin, identificndose
epicarpio, mesocarpio y endocarpio. De igual manera, se aprecia parte de la
cubierta seminal (Figura 3 c).
Figura 3. Sphacele chamaedryoides. e. Cotiledones (B: 200 m). f. Radcula
emergiendo de la semilla (B: 500 m).

ps: parnquima esponjoso, pp: parnquima en empalizada, pg: pelos glandulares,

r: radcula.

En un corte transversal, realizado el da 11 se observan los cotiledones, en stos

se aprecia el parnquima en empalizada con tres capas de clulas alargadas
perpendiculares a la superficie adaxial, y el parnquima esponjoso, situado hacia
la superficie abaxial del cotiledn, este ltimo est conformado por clulas
polidricas irregulares, las cuales no presenta disminucin en el material de
reserva (Figura 3 d), en un mismo tipo de corte, realizado el da 19, se puede
apreciar claramente la disminucin del material de reserva en clulas del
parnquima esponjoso permitiendo medir dimetros de 13.7 m aproximadamente
para este tipo de clulas (Figura 3 e). Es posible observar la superficie lisa con
presencia de glndulas y pelos glandulares en la superficie abaxial y adaxial del
cotiledn (Figuras 3, d y e).
A partir del da 19, la cubierta seminal y el pericarpio se rompe completamente
generando una fractura que se extiende desde el polo basal hacia el opuesto de
ste, dejando visible la primera parte del embrin, el extremo de la radcula, la cual
presenta un dimetro de 584.4 m. Es de forma redondeada sin presencia de
excrecencias ni glndulas (Figura 3 f), la cual inicia su crecimiento para convertirse
en la raz primaria y pone fin al proceso de germinacin (Bewley y Black, 1994 y
Dimitri y Orfila, 1985).

Figura 4. Sphacele chamaedryoides. a. Raz primaria (B: 1 mm). b. Hipoctilo (B:

200 m). c. Pelos radicales (B: 500 m). d. Embrin (B: 1 mm).
pg: pelos glandulares, pr: pelos radicales, rp: raz primaria, hp: hipoctilo.

Da 21 30: A partir del da 22, el embrin aumenta rpidamente de tamao, con

una notoria diferencia entre la raz primaria y el hipoctilo, los cuales presentan 3.6
mm y 2.2 mm de longitud respectivamente (Figura 4 a). El hipoctilo contina
aumentando su longitud y dimetro, provocando un aumento de la ruptura del
pericarpio y cubierta seminal, por donde saldrn los cotiledones (Figura 4, b y c).
Tambin es posible apreciar la superficie lisa con clulas alargadas y la presencia
de pelos glandulares en el hipoctilo, y una gran cantidad de pelos radicales en la
zona pilfera.
A partir del da 24, el embrin alcanza 9.8 mm, acentuando la diferencia entre
la raz primaria y el hipoctilo, los cuales presentan 4.5 mm y 3.3 mm de longitud

respectivamente (Figura 4 d). Los cotiledones y el eje hipoctilo radcula presentan

un dimetro de 2 mm aproximadamente.
Figura 4. Sphacele chamaedryoides. e. Zona pilfera y caliptra (B: 1 mm), f. Corte
transversal de la raz (B: 100 m).
ca: caliptra, ci: cilindro vascular, cx: crtex, er: epidermis, hp: hipoctilo, pr: pelos
radicales, zp: zona pilfera.

En la radcula alargada que conforma la raz primaria, perfectamente diferenciada,

se distingue la zona pilfera con abundantes pelos radicales y la caliptra (Figura 4
e). En un corte transversal de la raz, especficamente en la zona pilfera se
distingue el cilindro vascular, el crtex y la epidermis, con detalle de los pelos
radicales (Figura 4 f).
Los cotiledones presentan una superficie lisa, con clulas de forma regular y
una notoria diferencia entre una y otra, presentando gran cantidad de glndulas en
la superficie abaxial (Figura 5 a).
A los 29 das aproximadamente, el embrin se desprende de la cubierta
seminal (Figura 5 b), permitiendo distinguir claramente entre sta y el pericarpio
(Figura 5 c). La fractura slo ocurre en el sector polar basal de la semilla,
permitiendo salir cotiledones y dejando intacta el resto de la cubierta seminal,
aprecindose la forma polidrica regular de sus clulas, comenzando de esta
forma la etapa de plntula.

Figura 5. Sphacele chamaedryoides. a. Cotiledones (B: 500 m). b. Cavidad

dejada por la salida del embrin (B: 500 m). c. Detalle cubierta seminal y
pericarpio (B: 100 m). d. Primordios foliares (B: 1 mm).
co: cotiledn, cs: cubierta seminal, cv: cavidad, gl: glndulas, pr: pelos radicales,
pg: pelos glandulares, pe: pericarpio, tr: tricomas, pf: primordio foliar, ei: epictilo,
hp: hipoctilo.

Da 31 40: A los 33 das aproximadamente, el epictilo tiene una longitud de

0.73 mm y 0.3 mm de dimetro, en el brote se observan primordios foliares de 0.9
mm de longitud, los cuales presentan borde crenado, y nervadura reticulada,
acompaados de tricomas y clulas glandulares bien desarrolladas, presentes
slo en stos. Tricomas de longitud 0.03 mm se encuentran presentes tanto en los
primordios como en el epictilo. En tanto el hipoctilo presenta pelos y tricomas
glandulares en toda su superficie (Figura 5 d).
Los cotiledones presentan pelos glandulares en la cara abaxial y adaxial
(Figura 6 a), estomas slo en la superficie abaxial, estos poseen 29 m de largo

por 25.5 m de ancho aproximadamente con clulas oclusivas muy notorias,

presentando un complejo estomtico anomoctico (Figura 6 b).
Figura 6. Sphacele chamaedryoides. a. Estomas y pelos glandulares (B: 50 m).
b. Detalle de estomas (B: 10 m). c. Primordios foliares (B: 500 m). d. Tricomas
dendroides y glandulares (B: 100 m).
et: estoma, pg: pelo glandular, tr: tricoma, tg: tricoma glandular, td: tricoma
dendroide.

A los 34 das aproximadamente, el primer par de hojas se extiende alcanzando

1.4 mm de longitud (Figura 6 c). Estas observaciones indican que la planta es
fotosintticamente activa, y que ha iniciado su fase juvenil (Hartmann y Kester,
1987).
Segn Riedemann y Aldunate (2004), S. chamaedryoides alcanza 50 cm de
crecimiento a partir de semillas el primer ao. En este estado, podramos observar
la presencia de tricomas glandulares y dendroides. En las siguientes fotografas se
pueden apreciar estas estructuras sobre el nervio central de la hoja (Figura 6, d, e
y f).

Figura 6. Sphacele chamaedryoides. e. Detalle de tricomas (B: 20 m) f. Ubicacin

de estomas en la hoja (B: 10 m).
et: estoma, tg: tricoma glandular, td: tricoma dendroide.

Propagacin vegetativa
Al analizar la Tabla 10, se puede apreciar que no hubo efecto del cido
indolbutrico aplicado, sobre el enraizamiento de estacas de S. chamaedryoides,
ya que no se presentaron diferencias significativas entre los tratamientos, segn
anlisis de varianza. Los mejores resultados de enraizamiento (25 %) se
obtuvieron con 1.000 y 4.000 mg L-1 de cido indolbutrico (IBA).
Se puede apreciar que existi una capacidad natural de enraizamiento de un
6,25 % en las estacas, sin aplicacin de hormona. Esto indica que el nivel
endgeno de promotores de enraizamiento no sera un factor limitante en la
rizognesis. Resultados similares apreci Cornejo (1997), en propagacin
vegetativa en olivo, donde obtuvo un 5 % de capacidad natural de enraizamiento,
sin la aplicacin de IBA.
Estos resultados son similares a los informados por Palma (2001), quien
realiz ensayos, para inducir enraizamiento de estacas de plantas femeninas de
maqui, empleando cuatro concentraciones de AIB (0, 1.000, 2.000 y 4.000 mg L -1).
Al analizar los resultados, concluy que el mayor porcentaje de enraizamiento
(36.6 %) se obtuvo con aplicacin de 1.000 mg L -1 de IBA. De igual manera,
Cornejo (1997) en propagacin vegetativa de olivo, obtuvo sus mejores resultados

(70 % de germinacin) al someter las estacas a una concentracin de 4.000 mgL -1

de cido indolbutrico.
Tabla 10. Resultados de propagacin vegetativa. Porcentajes de enraizamiento
(%).
0

125

cido indolbutrico (mg L-1)

250
500
750
1.000

2.000

4.000

6,25
6,25
12,5
0
0
25
18,7
25
No se presentan diferencias significativas mediante anlisis de varianza. (P<
Segn Hartmann y Kester (1987), los factores que afectan el enraizamiento de
estacas son muy numerosos, ya que influyen caractersticas fisiolgicas,
morfolgicas y genticas, junto a condiciones ambientales. El estado nutricional
del material pudo haber influido directamente en el porcentaje de enraizamiento,
ya que las estacas no fueron uniformes, variando los dimetros de estas entre 0.2
y 0.7 cm y por tanto obtenindose estacas con diferentes suministros de
carbohidratos. Otro factor mencionado por Baldini (1992), corresponde a la poca
de recoleccin del material, indicando que estacas colectadas en otoo enrazan
mejor que aquellas recolectadas en invierno. Las estacas utilizadas en este
trabajo, se recolectaron en primavera, siendo esta una posible razn de la
obtencin de resultados insatisfactorios de enraizamiento, por lo cual se
recomendara otra fecha de recoleccin.
No fue posible evaluar la formacin de callos en las estacas, debido a que no
hubo resultados. Con frecuencia, el proceso de rizognesis puede venir
acompaado de la formacin de callo, pero la presencia de este, no tiene
influencia sobre el proceso mencionado (Baldini, 1992; Hartmann y Kester, 1987).
Muoz y Solanes (1983), sealan que las estacas tienen la capacidad de formar
callo, siempre y cuando sean recolectadas en la poca oportuna. Por lo tanto la
ausencia de callo podra deberse a la fecha no adecuada de recoleccin del
material, reafirmando lo indicado por Baldini anteriormente.
CONCLUSIONES

Los resultados de la presente investigacin permiten concluir que:

1. Los tratamientos donde se utiliz escarificacin trmica entre 70 y 100 oC, y
estratificacin a 4 oC, sin luz, por 30 das, fueron los ms efectivos para
interrumpir la dormancia de semillas de S. chamaedryoides, ya que se logr un
porcentaje de germinacin entre 61 y 65 %.
2. Los bajos porcentajes de germinacin en la mayora de los tratamientos son
producto de un letargo mecnico, producto del pericarpio lignificado que
presentan las nculas.
3. Mediante las observaciones realizadas en Microscopia Electrnica de Barrido,
se pudo identificar caractersticas de clulas esclereidas, las que conforman el
pericarpio lignificado.
4. En los tratamientos de propagacin vegetativa, la aplicacin de IBA no tuvo
efecto en el enraizamiento de estacas, ni en la formacin de callos en S.
chamaedryoides.

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