LA DETERMINACIN DE LA ABSORBANCIA

1. MARCO TERICO:
Para la prctica de La determinacin de la absorbancia, se tiene que tener criterio
de:
Un espectrofotmetro: es un instrumento para medir la transmitancia o absorbancia
de una muestra, en funcin de la longitud de onda de la radiacin electromagntica.
La absorbancia de la muestra se determina midiendo la intensidad de luz que
alcanza el detector cuando no hay muestra (el blanco de reactivo, que contiene todos
los reactivos menos la sustancia a determinar) y se compara con la intensidad de la
luz que alcanza el detector despus de atravesar la muestra.
La curva de calibracin: Es un mtodo de qumica analtica empleado para medir la
concentracin de una sustancia en una muestra por comparacin con una serie de
elementos de concentracin conocida. Se basa en la existencia de una relacin en
principio lineal entre un carcter medible (por ejemplo la absorbancia en los
enfoques de espectrofotometra) y la variable a determinar (concentracin).
Para ello, se efectan diluciones de unas muestras de contenido conocido y se
produce su lectura y el consiguiente establecimiento de una funcin matemtica que
relacione ambas; despus, se lee el mismo carcter en la muestra problema y,
mediante la sustitucin de la variable independiente de esa funcin, se obtiene la
concentracin de esta.
Se dice pues que la respuesta de la muestra puede cuantificarse y, empleando la curva
de calibracin, se puede interpolar el dato de la muestra problema hasta encontrar la
concentracin del analito. Las curvas de calibracin suelen poseer al menos una fase
de respuesta lineal sobre la que se realiza un test estadstico de regresin para evaluar
su fiabilidad.
Las curvas de calibracin pueden ser lineales o no lineales. En la mayora de casos,
cuando la curva es lineal se aplica la Ley de Beer. Para definir
calibracin que mejor representa

la relacin entre la absorbancia

la curva de
(A) y la

concentracin (C) se pueden usar clculos de regresin lineal de la siguiente manera:

Dado que A = mC + b donde:

A = absorbancia
C = concentracin
m = pendiente de la curva de calibracin (tambin denominada "factor de
calibracin").
2. DESARROLLO PRACTICO:
Inicialmente tenemos las pastillas que:
100g de pastilla 760 mg de clorofila
5g de pastilla X mg de cloroflila
Entonces:
X= 38 mg de clorofila.
Para determinar la concentracin los dividimos entre la cantidad de disolvente
utilizado que es de 250ml de acetona:
(38mg/250ml)=0,152 mg/ml es la concentracin de la disolucin.
Por la formula tenemos que:
N 1V 1=N 2V 2
Donde:

N1 = 0,152 mg/ml
V1 = volumen de extracto de clorofila utilizado en cada tubo.
V2 = 10ml volumen final que alcanzamos en cada tubo de solucin.
N2 = ? concentracin final que se alcanza en la solucin.

a. Determinacin de la concentracin del tubo n 1 (1ml de extracto de clorofila):

N 2=

N 1V 1
V2

N 2=

( 0,152mg / ml )( 1 ml )
10 ml

N 2=0.0152 mg/ml

b. Determinacin de la concentracin del tubo n 2 (3ml de extracto de clorofila):

N 2=

N 1V 1
V2

N 2=

( 0,152mg / ml )( 3 ml )
10 ml

N 2=0.0456 mg/ml

c. Determinacin de la concentracin del tubo n 3 (5ml de extracto de clorofila):

N 2=

N 1V 1
V2

N 2=

( 0,152mg /ml )( 5 ml )
10 ml

N 2=0.076 mg/ml

d. Determinacin de la concentracin del tubo n 4 (7ml de extracto de clorofila):

N 2=

N 1V 1
V2

N 2=

( 0,152mg /ml )( 7 ml )
10 ml

N 2=0.1064 mg/ml

e. Determinacin de la concentracin del tubo n 5 (9ml de extracto de clorofila):

N 2=

N 1V 1
V2

N 2=

( 0,152mg/ml )( 9 ml )
10 ml

N 2=0.1368 mg/ml

3. RESULTADOS:
TABLA N 1: Resultados de las disoluciones
Tubos
N 1
N 2
N 3
N 4
Extracto de clorofila
1
3
5
7
(ml)
Acetona (ml)
9
7
5
3
Absorbancia
0,572
1,832
2,843
3,305
Concentracin
(mg/ml):
0,0152
0,0456
0,076
0,1064

N 5
9
1
>3305
0,1368

GRFICO N 1: CONCETRACIN VS ABSORBANCIA

3.5

f(x) = 30.3x + 0.3

R = 0.96 2.843

3.305

2.5
1.832

2
ABSORBANNCIA

curva de calibracin
Linear (curva de
calibracin)

1.5
1
0.572
0.5
0
0

0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12

CONCENTRACIN (mg/ml)

Donde que y = 30,296x + 0,296 donde:

Y = absorbancia
X = concentracin
0,296 = pendiente de la curva de calibracin (tambin denominada
factor de calibracin").

4. DISCUSIN:
Cuando se usa una curva de calibracin "permanente" o factor se requiere verificar
su exactitud con cada lote de anlisis, mediante el anlisis de un patrn o estndar de
verificacin, antes de analizar las muestras. Asimismo, se recomienda analizar un
blanco antes de la muestra, no para verificar la curva de calibracin, sino para
observar la pureza y estabilidad de los reactivos. Estos valores del blanco tambin
pueden ser trazados en una carta de control que tiene 0 como valor central y sirve
para controlar los cambios en la pureza de los reactivos. En conclusin, una vez que
se ha establecido la curva de calibracin, un lote tpico de anlisis conlleva lo
siguiente:
1) Se coloca la absorbancia en 0 (100% de transmisin) con agua destilada.
2) Se determina la absorbancia del blanco de reactivos.
3) Se analiza el estndar o patrn de verificacin para validar la exactitud de la
curva de calibracin.
4) Se analizan las muestras.
5) Se repiten los anlisis del blanco o testigo de reactivos.
Se recomienda que si se van a analizar ms de 10 muestras en un lote, se deben
repetir los pasos del 3 al 5 tantas veces como sea necesario, hasta que se completen
los anlisis.
5. CONCLUSIN:
Si la absorbancia de la muestra est dentro del rango de medida del mtodo
seleccionado, mediante la ecuacin de la recta de calibrado se puede calcular la
concentracin de la clorofila en la disolucin problema.
Si la absorbancia es mayor al lmite superior del rango de medida, siempre se puede
realizar la dilucin correspondiente para introducirla en el rango del mtodo. Pero
si es inferior al lmite de cuantificacin del mtodo seleccionado, hay que emplear un
mtodo ms sensible.