Cromosomas y replicacin del ADN

Andrs H Cardona Echeverry

Est. Ing. Biomdica
Facultad de Ciencias Exactas Aplicadas

Longitud del ADN

Clula eucariota: 6.4 mil millones pb

46 cromosomas!!
DNA: B - 0.34nm B

2 m de ADN

Problema!!! el ncleo celular mide 10M

2m

1X10-5 m
Solucin: Empaquetar el ADN??
Accesibilidad al ADN

68 m ADN, 65 nm Capside

Cromosomas humanos

Sexuales

> Fragmento ADN > Tamao del Cromosoma

Los cromosomas contienen la informacin gentica del organismo. Cada tipo de organismo
tiene un nmero de cromosomas determinado; en la especie humana, por ejemplo, hay 23
pares de cromosomas organizados en 8 grupos segn el tamao y la forma

Nucleosomas
Cromosoma = ADN + Protenas

Histonas: encargadas del

empaquetamiento
ordenado del ADN

Cromatina

Histonas del timo de ganado bobino

Histona

Residuos

Masa (KDa)

% Arg

& lys

H1

215

23.0

29

H2A

129

14.0

11

H2B

125

13.8

16

H3

135

15.3

13

10

H4

102

11.3

14

11

* Todos los aminocidos de una histona se unen con el esqueleto del ADN

Nucleosoma
Relacin de empaquetamiento 7:1
Partcula nuclear de
nucleosoma

Octmero
de histona
2 x (H2A, H2B, H3, H4)
Histona H1
asociada

ADN (146pb) enrollado

1.8 vueltas

Dmeros (H2A/H2B)
Tetrmeros (H3-H4)

Filamento y fibras de nucleosoma

Filamento de
nucleosoma

Fibras

30 nm

30 nm

ADN de doble helice

Empaquetamiento del ADN

Partcula nuclear de
nucleosoma
Filamento de
nucleosoma
(10 nm)
Fibras de 30 nm
Varios nucleosomas

Dominios en forma
de asa (700 nm)
Cromosoma
(1400 nm)

Modificaciones en las histonas

Cdigo de las
histonas
*Metilacin
*Acetilacin
*Fosforilacin
Genes tejidoespecficos

Partes del cromosoma

Replicacin Semi-Conservadora en eucariotas

Cadena
de ADN

Timidina

Replicacin
en

medio con
BrdU
Cromosoma

BrdU:
bromodesoxi
uridina

Cromtides
Continua la
replicacin en
medio con
BrdU (Rojo)

Colorantes
Fluorescentes y tincin
de Giemsa
Tmidina: tincin oscura
BrdU: tincin clara

Replicacin del ADN

Nucletido
Composicin de las bases
*Levende (1930): composicin de los nucletidos
5 - Unin con el fosfato

1 - Unin con
la base
nitrogenada
(A,T,G,C)

Extremo 3 OH

2 Desoxirribosa

dATP, dTTP, dCTP, dGTP

dAMP, dTMP, dCMP, dGMP

ADN polimerasas
Cadena de ADN plantilla / dNTPs
Cadena iniciadora 3OH (cebador o primer)
5
3
ADN polimerasa en bacterias:
ADN pol I
ADN pol II
ADN pol III
ADN polimerasa en eucariotas:
ADN pol
ADN pol
ADN pol
ADN pol
ADN pol

Polimerizacin del ADN

Los iones de
magnesio
permiten:

Mg2+

1. Unin del
oxigeno del
fosfato al
carbono 3

2. Liberacin del
pirofosfato

Replicacin del ADN en bacterias

E. coli
Horquilla de replicacin

Origen

Horquilla de replicacin

ADN pol III

Replicacin semidiscontinua
ADN Pol III

3
Fragmentos de Okazaki

Origen

5
3

Primer: Sintetizados por la

Enzima Primasa (ARN polimerasa)
Primer de ARN

Plantilla Cadena atrasada

Cadena atrasada
Cadena adelantada
Plantilla Cadena adelantada

Replicacin Bidireccional
Horquilla de
replicacin

5
3
5
3

Origen

ADN Pol III

3
5
3
5

5
3
5
3

Origen

ADN Pol I
3
5
3
5

5
3

5
3
5
3

Origen

5
3

Origen

ADN Ligasa

ADN Polimerasa II (Tambin la pol I) participa en reparacin

3
5
3
5

3
5
3
5

ADN Ligasa

Maquinaria de la horquilla
La replicacin de ADN presupone ms que slo la
incorporacin de nucletidos.
Participacin de protenas

Helicasa

Separacin de las hebras

Desenrrollamiento del ADN

SSB

Helicasa

6 subunidades
anillo
Hidrolisis de ATP
para romper
Puentes de
hidrogeno

Protenas de unin a ADN monocatenario

*Mantener el ADN separados
*Evitar dao

Protenas importantes
DnaA: reconocimiento del origen de la replicacin
DnaB: Helicasa
DnaC. Coloca la helicasa sobre le DNA

Origen

Cmo se colocan los cebadores o

primers?
Primosoma

Unin peridica

Retrasada vs
adelantada?
En realidad las
ADN pol III
trabajan al
mismo tiempo
(estn unidas)

Holoenzima DNA polimerasa III

Holoenzima ADN polimerasa III

ADN polimerasa III

Replisoma:
Holoenzima
Helicasa
SSB
Primasa
Hidrolisis de ATP

ADN
polimerasa
III

Holoenzima

DNA polimerasa

Cmo la polimerasa encuentra los primers

para polimerizar fragmentos de Okazaki?

Cmo se remueven los primer de

RNA?

ADN pol I
Funcin exonucleasa

Exonucleasa 3

5?

Replicacin del ADN en eucariotas

Procariota: 1 origen

Eucariota: mltiples orgenes

Origen

Origen

Al tener mas orgenes se tiene mas horquillas de replicacin, pero an

as siguen las mismas reglas que en procariotas, solo que
simultneamente. Replicones

Protenas ORC
Las protenas ORC reconocen los orgenes de la
replicacin, como lo hacen las protenas DnaA en
procariotas
Eucariota: mltiples orgenes

Origen

En levaduras (clula eucariota) se

dice que es una secuencia de 11
nucletidos a la cual se unen
especficamente las ORC
(complejo de reconocimiento de
inicio)
* En vertebrados no es claro!!
(pero hay sitios especficos)
- Factores epigenticos
(Modificaciones es las histonas)

Eucariota: mltiples orgenes

Horquilla en clulas eucariotas

ADN polimerasa en eucariotas:
ADN pol : Se relaciona con la primasa e inicia los fragmentos de
Okazaki
ADN pol : Reparacin
ADN pol : Replicacin del ADN mitocondrial
ADN pol : polimerizacin cadena retrasada
ADN pol . Polimerizacin cadena adelantada

3
Primers

Cebador Parte de ADN sintetizado por

Primasa la ADN pol

PCNA
Otras ADN polimerasas
ADN pol
ADN pol
ADN pol

ADN pol

* Participan en la
replicacin de ADN daado
ADN pol
ADN pol
ADN pol
Actividad exonucleasa
3 5

Topoisomerasa

RFC
ADN pol

Horquilla en clulas eucariotas

Horquilla en clulas eucariotas

PCNA

Primasa RFC
ADN Pol

RPA

Pol

Pol

Topoisomerasa

Replicacin
Protena en
E. coli

Protena
eucariota

Funcin

DnaA

Protenas ORC

Reconocimiento del origen de la replicacin

Girasa

Topoisomerasa

Libera supercolas positivas (tensin)

DnaB

Mem

Helicasas (desenrrollar el ADN)

DnaC

Cdc6, Cdt1

Coloca la helicasa sobre el ADN

SSB

RPA

Mantiene el ADN en estado monocatenario

Complejo

RFC

Subunidad de la holoenzima de ADN polimerasa (pinzas)

ADN pol III

ADN pol /

Replicacin en la cadena atrasada y adelantada

Pinza

PCNA

Forma parte del complejo de la holoenzima (estabilidad)

Primasa

Primasa

Sintetiza iniciadores de ARN (Primers)

ADN pol

Sintetiza los fragmento de ADN unidos al iniciador

ADN ligasa

ADN ligasa

Unin de los fragmentos de Okazaki

ADN pol I

FEN-1

Remueve los iniciadores de ARN

Replicacin de la cromatina

Cromatina
La heterocromatina son regiones de la cromatina ms
compactas, condensadas, empaquetadas
* Constitutiva idntica para todas las clulas del organismo.
Incluye los telmeros y centrmeros.)
* Facultativa diferente en los cada tipo celular (Tejido). Contiene
aquellos genes que no se expresan pero que pueden expresarse
en algn momento
Eucromatina: cromatina ligeramente abierta , se ubican una
gran cantidad de genes, y a menudo (no siempre) se encuentra
en transcripcin activa

Genes tejido
especifico??

Reparacin del ADN

*** Condiciones ambientales!!!
DNA susceptible.
Radiacin ionizante Ruptura del esqueleto del
ADN

Reactivos qumicos generados por el

metabolismo de la clula Alteracin en la
estructura del ADN
UV formacin de dmeros entre pirimidinas
Absorcin de energa trmica (metablismo ) -ruptura de la unin entre la BN y la pentosa

Funcin exonucleasa

Mecanismo de reparacin del ADN

Reparacin de la escisin nucleotidica (NER).
Dmeros de pirimidina ()
Conformacin errnea de
nucletidos

NER

Va acoplada a
la transcripcin

Va genmica
global

RNA pol
atorada

Mecanismo
lento

Eficiente

Menos
eficiente

Etapas
1. Reconocimiento de la lesin
Va acoplada la
transcripcin
Va global

1. Apertura de la doble hlice por XPD

y XPB

TFIIH
XPD

XPB

3. Corte de la cadena daada por

endonucleasas

4. Eliminacin de la cadena
defectuosa

5 y 6. polimerizacin y unin (ADN ligasa)

Mecanismo de reparacin del ADN

Reparacin por escisin de bases (BER).
ADN
glucosilasa

Eliminacin del
azucar-fosfatp

Mecanismo de reparacin del ADN

Reparacin de la ruptura de doble cadena

Cmo se distinguen
las cadenas?
Procariotas
Metilacin en las
bases Adenina
Eucariotas
Vas MMR ??

Bibliografa
Karp, Gerald. Biologa Celular y Molecular. Quinta edicin. Edit: Mc Graw Hill.
2009.
Mary K. Campbell, Shawn O. Farrell. Bioqumica. Sexta edicin. 2010
Lodish. Biologa Celular y Molecular. Tercera edicin. Edit: Panamericana.
2003.